一种达格列净及其α-异构体的分离方法
一种达格列净及其α-异构体的分离方法
【技术领域】
[0001 ]本发明属于药物化学领域，设及一种达格列净，具体来说是一种达格列净及其α-异构体的分离方法。
【背景技术】
[0002] 达格列净(Dapagliflozin)化学名称为（2S，3R，4R，5S，6R)-2-[3-(乙氧基苯基)-4-氯苯基]-6-?甲基四氨-2H-化喃-3,4,5-Ξ醇。是由英国阿斯利康制药公司和美国百时 美施贵宝制药公司联合研发的SGLT2抑制剂，于2012年11月14日和2014年1月8日分别获EMA 和FDA批准上市，成为继卡格列净之后第2个获抑A批准的S化T2抑制剂。该药可在肾脏选择 性地抑制SGLT2并清除尿液中多余的糖和热量，辅助降低血糖水平。可作为糖尿病药物治疗 中的重要选择，达格列净的结构式如下所示。
[0003]
[0004] 达格列净的化学结构
[0005] 据达格列净的文献报道，合成达格列净是通过中间体和糖的漠代衍生物得到的 Piv保护的达格列净，经脱保护得到，即中间体5-漠-2-氯-4>-乙氧基二苯甲烧，W及2,3,4， 6-0-四特戊酷基-ALPHA-D-漠代化喃葡萄糖得到的，具体如下所示：
[0008] reaction condition:(a)n-Hex(n-Bu)2MgLi,ZnBr2,LiBr,C讯8
[0009] reaction condition:(b)CH3〇H/CH3〇Na
[0010] 达格列净合成分析：
[00川达格列净中只有β-构型即（25,33,41?，55,610-2-[3-化氧基苯基)-4-氯苯基]-6-径甲基四氨-2Η-化喃-3,4,5-Ξ醇具有药理活性。经合成得到的达格列净中可能存在α-构 型，该手性异构体杂质影响药品质量，它的构型会对最终的产品产生巨大的影响，因此控制 达格列净手性异构体的含量对于提高抗糖尿病类药物的质量，保证广大患者用药的安全性 具有重要的意义。通过大量的文献检索，目前并没有达格列净及其手性异构体分离分析的 相关文献报道。
[0012] 由于在达格列净的合成过程中必须严格控制好其关键产物的α、β-构型的含量，因 此发明一种达格列净及其α-异构体的分离方法显得尤为重要。
【发明内容】
[0013] 针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种达格列净及其α-异构体的分 离方法，所述的运种达格列净及其及其α-异构体的分离方法解决了现有技术中的达格列净 中存在α-构型，手性异构体杂质会影响药品质量的技术问题。
[0014] 本发明提供了一种达格列净及其α-异构体的分离方法，采用高效液相色谱仪，W 十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，W乙腊和水组成的混合液或甲醇和水组成的混合液 为流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[001引流动相流速为0.60-1.20mL/min;色谱柱溫度为20-4(TC;进样量为10化;检现峨长 为205-260皿;所述流动相中，乙腊和水的体积比为32~42:58~68,甲醇和水的体积比为60 ~80:20~40，后出峰的化合物为α-异构体，先出峰的化合物为达格列净。
[0016] 进一步的，所述的色谱柱为十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱化enomenex Luna C(18)，色谱柱的规格为4.6mmX250mm，5皿。
[0017] 进一步的，所述的流动相流速为1. OOmL/min，色谱柱溫度为25°C，检测波长为 210nm〇
[0018] 进一步的，所述的流动相由乙腊和水组成，乙腊和水的体积比为32~42:58~68。
[0019] 进一步的，所述的流动相由甲醇和水组成，甲醇和水的体积比为60~80:20~40。
[0020] 进一步的，所用的高效液相色谱仪为戴安U3000高效液相色谱仪。
[0021] 本发明由于采用了高效液相色谱法对达格列净及其α-异构体进行拆分，能够有效 的将达格列净及其α-异构体在色谱图中彻底分离，并准确的测出了其手性异构体的含量， 解决了其质量控制问题，确保了最终产品达格列净的过程控制。而且本发明的达格列净的 高效液相色谱分析方法用普通的液相色谱仪即可，设备要求不高，流动相选用的两个介质 普通易得，可行性高，操作过程简单方便，适用性好。为工业化大生产带来了巨大的社会意 义，具有很强的实用性。
[0022] 本发明和已有技术相比，其技术进步是显著的。本发明的方法灵敏度高，分离度良 好，结果准确可靠，操作简便，分析方法稳定可靠，适用于达格列净质量控制。
【附图说明】
[0023] 图1为实施例1中达格列净及其手性异构体的色谱分离图；保留时间为13.673min 的是达格列净，保留时间为15.887min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为5.07。
[0024] 图2为实施例2中达格列净及其手性异构体的色谱分离图；保留时间为24.680min 的是达格列净，保留时间为25.027min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为5.00。
[0025] 图3为实施例3中达格列净及其手性异构体的色谱分离图;保留时间为8.640min的 是达格列净，保留时间9.827min是其对映体α-异构体，两者的分离度为4.34。
[0026] 图4为实施例4中达格列净及其手性异构体的色谱分离图；保留时间为13.327min 的为达格列净，保留时间15.OOOmin的为其对映体α-异构体，两者的分离度为5.00。
[0027] 图5为实施例5中达格列净及其手性异构体的色谱分离图；保留时间为13.840min 的是达格列净，保留时间15.820min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为4.88。
[00%]图6为实施例6中达格列净及其手性异构体的色谱分离图；保留时间为22.313min 的是达格列净，保留时间为25.960min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为6.22。
[0029] 图7为实施例7中达格列净及其手性异构体的色谱分离图;保留时间为11.44min的 是达格列净，保留时间为13.30min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为4.51。
[0030] 图8为实施例8中达格列净及其手性异构体的色谱分离图；保留时间为24.747min 的是达格列净，保留时间为25.707min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为3.28。
[0031] 图9为实施例9中达格列净及其手性异构体的色谱分离图;保留时间为8.SOOmin的 是达格列净，保留时间为9.787min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为2.35。
[0032] 图10为实施例10中达格列净标品的色谱分离图；保留时间为13.720min的为达格 列净。
【具体实施方式】
[0033] 下面通过具体实施例子并结合附图对本发明进一步阐述，但并不限制本发明。
[0034] 实施例所用到的仪器与条件:U3000(戴安中国有限公司）；叫化a Sonic Cleaner USK Type超声波清洗器；A604A电子天平（上海科天电子仪器有限公司）；色谱柱： F*henomenex Luna C(18)(250X4.6mm,5皿）（广东菲罗口科技仪器有限公司）。
[0035] 实施例1
[0036] -种达格列净及其α-异构体的分离方法，其步骤如下：
[0037] 分别取7.Omg的达格列净及其α-异构体，置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀 释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，W十八烷基键合硅胶为填 充剂的化enomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm，5皿)为色谱柱，W乙腊和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[003引流动相流速为l.OmL/min;
[0039] 色谱柱溫度为25°C;
[0040] 进样量为10化；
[0041 ] 检测波长为210nm;
[0042] 所述流动相中，按体积百分比计算，乙腊:水为37% :63%。
[0043] 色谱分离结果见图1所示，从图1中可W看出，保留时间为13.673min的是达格列 净，保留时间为15.887min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为5.07。
[0044] 实施例2
[0045] -种达格列净及其α-异构体的分离方法，其步骤如下：
[0046] 分别取10.Omg的达格列净及其α-异构体，置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀 释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，w十八烷基键合硅胶为填 充剂的化enomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm，5皿)为色谱柱，W乙腊和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[0047] 流动相流速为1. OmL/min;
[004引色谱柱溫度为25°C;
[0049] 进样量为10化；
[(K)加]检测波长为210nm;
[0051] 所述流动相中，按体积百分比计算，乙腊:水为32% :68%。
[0052] 色谱分离结果见图2所示，从图2中可W看出，保留时间为24.680min的是达格列 净，保留时间25.027min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为5.00。
[0化3]实施例3
[0054] -种达格列净及其α-异构体的分离方法，其步骤如下：
[00对分别取10.Omg的达格列净及其α-异构体，置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀 释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，W十八烷基键合硅胶为填 充剂的化enomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm，5皿)为色谱柱，W乙腊和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[0化6] 流动相流速为1. OmL/min;
[0化7] 色谱柱溫度为25。0;
[0化引进样量为10化；
[0化9] 检测波长为210nm;
[0060] 所述流动相中，按体积百分比计算，乙腊:水为42% :58%。
[0061] 色谱分离结果见图3所示，从图3中可W看出，保留时间为8.640min的是达格列净， 保留时间9.827min是其对映体α-异构体，两者的分离度为4.34。
[0062] 实施例4
[0063] -种达格列净及其α-异构体的分离方法，其步骤如下：
[0064] 分别取7.Omg的达格列净及其α-异构体，置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀 释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，W十八烷基键合硅胶为填 充剂的化enomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm，5皿)为色谱柱，W乙腊和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[0065] 流动相流速为1. OmL/min;
[0066] 色谱柱溫度为20°C;
[0067] 进样量为10化；
[0068] 检测波长为210nm;
[0069] 所述流动相中，按体积百分比计算，乙腊:水为37% :63%。
[0070] 色谱分离结果见图4所示，从图4中可W看出，保留时间为13.327min的为达格列 净，保留时间15. OOOmin的为其对映体α-异构体，两者的分离度为5.00。
[0071] 实施例5
[0072] -种达格列净及其α-异构体的分离方法，其步骤如下：
[0073] 分别取7.Omg的达格列净及其α-异构体，置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀 释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，w十八烷基键合硅胶为填 充剂的化enomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm，5皿)为色谱柱，W乙腊和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[0074] 流动相流速为1. OmL/min;
[00巧]色谱柱溫度为4(rc;
[0076] 进样量为10化；
[0077] 检测波长为210nm;
[007引所述流动相中，按体积百分比计算，乙腊:水为37% :63%。
[0079] 色谱图分离结果见图5所示，从图5中可W看出，保留时间为13.840min的是达格列 净，保留时间15.820min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为4.88。
[0080] 实施例6
[0081 ] -种达格列净及其α-异构体的分离方法，其步骤如下：
[0082] 分别取7.Omg的达格列净及其α-异构体，置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀 释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，W十八烷基键合硅胶为填 充剂的化enomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm，5皿)为色谱柱，W乙腊和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[0083] 流动相流速为0.6mL/min;
[0084] 色谱柱溫度为25°C;
[0085] 进样量为10化；
[00化]检测波长为210nm;
[0087] 所述流动相中，按体积百分比计算，乙腊:水为37% :63%。
[0088] 色谱分离结果见图6所示，从图6中可W看出，保留时间为22.313min的是达格列 净，保留时间为25.960min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为6.22。
[0089] 实施例7
[0090] -种达格列净及其α-异构体的分离方法，其步骤如下：
[0091] 分别取7.Omg的达格列净及其α-异构体，置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀 释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，W十八烷基键合硅胶为填 充剂的化enomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm，5皿)为色谱柱，W乙腊和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[0092] 流动相流速为1.2mL/min;
[0093] 色谱柱溫度为25°C;
[0094] 进样量为10化；
[00巧]检测波长为210nm;
[0096] 所述流动相中，按体积百分比计算，乙腊:水为37% :63%。
[0097] 色谱分离结果见图7所示，从图7中可W看出，保留时间为11.44min的是达格列净， 保留时间为13.30min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为4.51。
[009引实施例8
[0099] -种达格列净及其α-异构体的分离方法，其步骤如下：
[0100] 分别取7.Omg的达格列净及其α-异构体，置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀 释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，w十八烷基键合硅胶为填 充剂的化enomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm，5皿)为色谱柱，W乙腊和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[0101] 流动相流速为l.OmL/min;
[0102] 色谱柱溫度为25°C;
[0103] 进样量为10化；
[0104] 检测波长为210nm;
[0105] 所述流动相中，按体积百分比计算，甲醇:水为60% : 40%。
[0106] 色谱分离结果见图8所示，从图8中可W看出，保留时间为24.747min的是达格列 净，保留时间为25.707min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为3.28。
[0107] 实施例9
[0108] -种达格列净及其α-异构体的分离方法，其步骤如下：
[0109] 分别取7.Omg的达格列净及其α-异构体，置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀 释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，W十八烷基键合硅胶为填 充剂的化enomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm，5皿)为色谱柱，W乙腊和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[0110] 流动相流速为l.OmL/min;
[0111] 色谱柱溫度为25°C;
[0112] 进样量为10化；
[0113] 检测波长为210nm;
[0114] 所述流动相中，按体积百分比计算，甲醇:水为70% : 30%。
[0115] 色谱图分离结果见图9所示，从图9中可W看出，保留时间为8.SOOmin的是达格列 净，保留时间为9.787min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为2.35。
[0116] 实施例10
[0117] -种达格列净及其α-异构体的分离方法中β-达格列净出峰位置的标定，其步骤如 下：
[0118] 取标准品β-达格列净10.Omg,置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀释定容至刻 度，摇匀，作为供试品溶液；
[0119] 按照色谱条件：色谱柱：Phenomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm, 5μηι)，流动相：乙 腊-水(37% :63%)，流速1.00血/min,柱溫:25°C，紫外检测器波长210皿，进样量1化L，进行 高效液相色谱法分析；
[0120] 色谱图分离结果见图10所示，从图10中可W看出，保留时间为13.720min的为达格 列净，并与实施例1进行比较，由于实施例10与实施例1所用的液相方法相同，说明在实施例 及其他实施例中后出峰的化合物为α-异构体，先出峰的化合物为达格列净。
[0121] 综上所述，本发明的一种达格列净及其α-异构体的分离方法，可W有效的将达格 列净与其α-异构体很好的分离，其分离度可达2.35-6.22。
[0122] W上所述仅是本发明的实施方式的举例，应当指出，对于本技术领域的普通技术 人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可W做出若干改进和变型，运些改进和变 型也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种达格列净及其α-异构体的分离方法，其特征在于:采用高效液相色谱仪，以十八 烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈和水组成的混合液、或甲醇和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离:流动相流速为0.60-1.20mL/min;色谱柱温 度为20-40°C;进样量为10yL;检测波长为205-260nm;所述流动相中，乙腈和水的体积比 为32~42:58~68，甲醇和水的体积比为60~80:20~40，后出峰的化合物为α-异构体，先 出峰的化合物为达格列净。2. 如权利要求1所述的达格列净及其α_异构体的分离方法，其特征在于:所述的色谱柱 为十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱?116110111611611^11^(：(18)，色谱柱的规格为4.6 111111 X250mm，5um〇3. 如权利要求1所述的一种达格列净及其α-异构体的分离方法，其特征在于:所述的流 动相流速为1.00mL/min，色谱柱温度为25°C，检测波长为210nm。4. 如权利要求1所述的一种达格列净及其α-异构体的分离方法，其特征在于:所述的流 动相由乙腈和水组成，乙腈和水的体积比为32~42:58~68。5. 如权利要求1所述的一种达格列净及其α-异构体的分离方法，其特征在于:所述的流 动相由甲醇和水组成，甲醇和水的体积比为60~80:20~40。6. 如权利要求1所述的一种达格列净及其α-异构体的分离方法，其特征在于:所用的高 效液相色谱仪为戴安U3000高效液相色谱仪。
【专利摘要】本发明属于药物分析技术领域，提供了一种达格列净及其α-异构体的分离方法，采用高效液相色谱分析仪，选用十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，规格为4.6mm×250mm，5μm；流动相为乙腈和水、或甲醇和水的混合液组成，乙腈和水的体积比为32～42：58～68，甲醇和水的体积比为60～80：20～40；流速为0.6～1.2mL/min；柱温为20～40℃；紫外检测器波长为205-260nm；进样体积为10μL,后出峰的化合物为α-异构体，先出峰的化合物为达格列净。本发明的方法用普通的液相色谱仪即可，设备要求不高，流动相选用的两个介质普通易得，可行性高，操作过程简单方便。
【IPC分类】G01N30/02, G01N30/06
【公开号】CN105486767
【申请号】CN201510881032
【发明人】潘仙华, 王亚萍, 李勤勤, 张瑞敏, 陈思羽, 张鑫, 陈彦宇
【申请人】上海应用技术学院
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年12月3日
【技术领域】
[0001 ]本发明属于药物化学领域，设及一种达格列净，具体来说是一种达格列净及其α-异构体的分离方法。
【背景技术】
[0002] 达格列净(Dapagliflozin)化学名称为（2S，3R，4R，5S，6R)-2-[3-(乙氧基苯基)-4-氯苯基]-6-?甲基四氨-2H-化喃-3,4,5-Ξ醇。是由英国阿斯利康制药公司和美国百时 美施贵宝制药公司联合研发的SGLT2抑制剂，于2012年11月14日和2014年1月8日分别获EMA 和FDA批准上市，成为继卡格列净之后第2个获抑A批准的S化T2抑制剂。该药可在肾脏选择 性地抑制SGLT2并清除尿液中多余的糖和热量，辅助降低血糖水平。可作为糖尿病药物治疗 中的重要选择，达格列净的结构式如下所示。
[0003]
[0004] 达格列净的化学结构
[0005] 据达格列净的文献报道，合成达格列净是通过中间体和糖的漠代衍生物得到的 Piv保护的达格列净，经脱保护得到，即中间体5-漠-2-氯-4>-乙氧基二苯甲烧，W及2,3,4， 6-0-四特戊酷基-ALPHA-D-漠代化喃葡萄糖得到的，具体如下所示：
[0008] reaction condition:(a)n-Hex(n-Bu)2MgLi,ZnBr2,LiBr,C讯8
[0009] reaction condition:(b)CH3〇H/CH3〇Na
[0010] 达格列净合成分析：
[00川达格列净中只有β-构型即（25,33,41?，55,610-2-[3-化氧基苯基)-4-氯苯基]-6-径甲基四氨-2Η-化喃-3,4,5-Ξ醇具有药理活性。经合成得到的达格列净中可能存在α-构 型，该手性异构体杂质影响药品质量，它的构型会对最终的产品产生巨大的影响，因此控制 达格列净手性异构体的含量对于提高抗糖尿病类药物的质量，保证广大患者用药的安全性 具有重要的意义。通过大量的文献检索，目前并没有达格列净及其手性异构体分离分析的 相关文献报道。
[0012] 由于在达格列净的合成过程中必须严格控制好其关键产物的α、β-构型的含量，因 此发明一种达格列净及其α-异构体的分离方法显得尤为重要。
【发明内容】
[0013] 针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种达格列净及其α-异构体的分 离方法，所述的运种达格列净及其及其α-异构体的分离方法解决了现有技术中的达格列净 中存在α-构型，手性异构体杂质会影响药品质量的技术问题。
[0014] 本发明提供了一种达格列净及其α-异构体的分离方法，采用高效液相色谱仪，W 十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，W乙腊和水组成的混合液或甲醇和水组成的混合液 为流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[001引流动相流速为0.60-1.20mL/min;色谱柱溫度为20-4(TC;进样量为10化;检现峨长 为205-260皿;所述流动相中，乙腊和水的体积比为32~42:58~68,甲醇和水的体积比为60 ~80:20~40，后出峰的化合物为α-异构体，先出峰的化合物为达格列净。
[0016] 进一步的，所述的色谱柱为十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱化enomenex Luna C(18)，色谱柱的规格为4.6mmX250mm，5皿。
[0017] 进一步的，所述的流动相流速为1. OOmL/min，色谱柱溫度为25°C，检测波长为 210nm〇
[0018] 进一步的，所述的流动相由乙腊和水组成，乙腊和水的体积比为32~42:58~68。
[0019] 进一步的，所述的流动相由甲醇和水组成，甲醇和水的体积比为60~80:20~40。
[0020] 进一步的，所用的高效液相色谱仪为戴安U3000高效液相色谱仪。
[0021] 本发明由于采用了高效液相色谱法对达格列净及其α-异构体进行拆分，能够有效 的将达格列净及其α-异构体在色谱图中彻底分离，并准确的测出了其手性异构体的含量， 解决了其质量控制问题，确保了最终产品达格列净的过程控制。而且本发明的达格列净的 高效液相色谱分析方法用普通的液相色谱仪即可，设备要求不高，流动相选用的两个介质 普通易得，可行性高，操作过程简单方便，适用性好。为工业化大生产带来了巨大的社会意 义，具有很强的实用性。
[0022] 本发明和已有技术相比，其技术进步是显著的。本发明的方法灵敏度高，分离度良 好，结果准确可靠，操作简便，分析方法稳定可靠，适用于达格列净质量控制。
【附图说明】
[0023] 图1为实施例1中达格列净及其手性异构体的色谱分离图；保留时间为13.673min 的是达格列净，保留时间为15.887min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为5.07。
[0024] 图2为实施例2中达格列净及其手性异构体的色谱分离图；保留时间为24.680min 的是达格列净，保留时间为25.027min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为5.00。
[0025] 图3为实施例3中达格列净及其手性异构体的色谱分离图;保留时间为8.640min的 是达格列净，保留时间9.827min是其对映体α-异构体，两者的分离度为4.34。
[0026] 图4为实施例4中达格列净及其手性异构体的色谱分离图；保留时间为13.327min 的为达格列净，保留时间15.OOOmin的为其对映体α-异构体，两者的分离度为5.00。
[0027] 图5为实施例5中达格列净及其手性异构体的色谱分离图；保留时间为13.840min 的是达格列净，保留时间15.820min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为4.88。
[00%]图6为实施例6中达格列净及其手性异构体的色谱分离图；保留时间为22.313min 的是达格列净，保留时间为25.960min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为6.22。
[0029] 图7为实施例7中达格列净及其手性异构体的色谱分离图;保留时间为11.44min的 是达格列净，保留时间为13.30min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为4.51。
[0030] 图8为实施例8中达格列净及其手性异构体的色谱分离图；保留时间为24.747min 的是达格列净，保留时间为25.707min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为3.28。
[0031] 图9为实施例9中达格列净及其手性异构体的色谱分离图;保留时间为8.SOOmin的 是达格列净，保留时间为9.787min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为2.35。
[0032] 图10为实施例10中达格列净标品的色谱分离图；保留时间为13.720min的为达格 列净。
【具体实施方式】
[0033] 下面通过具体实施例子并结合附图对本发明进一步阐述，但并不限制本发明。
[0034] 实施例所用到的仪器与条件:U3000(戴安中国有限公司）；叫化a Sonic Cleaner USK Type超声波清洗器；A604A电子天平（上海科天电子仪器有限公司）；色谱柱： F*henomenex Luna C(18)(250X4.6mm,5皿）（广东菲罗口科技仪器有限公司）。
[0035] 实施例1
[0036] -种达格列净及其α-异构体的分离方法，其步骤如下：
[0037] 分别取7.Omg的达格列净及其α-异构体，置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀 释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，W十八烷基键合硅胶为填 充剂的化enomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm，5皿)为色谱柱，W乙腊和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[003引流动相流速为l.OmL/min;
[0039] 色谱柱溫度为25°C;
[0040] 进样量为10化；
[0041 ] 检测波长为210nm;
[0042] 所述流动相中，按体积百分比计算，乙腊:水为37% :63%。
[0043] 色谱分离结果见图1所示，从图1中可W看出，保留时间为13.673min的是达格列 净，保留时间为15.887min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为5.07。
[0044] 实施例2
[0045] -种达格列净及其α-异构体的分离方法，其步骤如下：
[0046] 分别取10.Omg的达格列净及其α-异构体，置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀 释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，w十八烷基键合硅胶为填 充剂的化enomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm，5皿)为色谱柱，W乙腊和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[0047] 流动相流速为1. OmL/min;
[004引色谱柱溫度为25°C;
[0049] 进样量为10化；
[(K)加]检测波长为210nm;
[0051] 所述流动相中，按体积百分比计算，乙腊:水为32% :68%。
[0052] 色谱分离结果见图2所示，从图2中可W看出，保留时间为24.680min的是达格列 净，保留时间25.027min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为5.00。
[0化3]实施例3
[0054] -种达格列净及其α-异构体的分离方法，其步骤如下：
[00对分别取10.Omg的达格列净及其α-异构体，置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀 释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，W十八烷基键合硅胶为填 充剂的化enomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm，5皿)为色谱柱，W乙腊和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[0化6] 流动相流速为1. OmL/min;
[0化7] 色谱柱溫度为25。0;
[0化引进样量为10化；
[0化9] 检测波长为210nm;
[0060] 所述流动相中，按体积百分比计算，乙腊:水为42% :58%。
[0061] 色谱分离结果见图3所示，从图3中可W看出，保留时间为8.640min的是达格列净， 保留时间9.827min是其对映体α-异构体，两者的分离度为4.34。
[0062] 实施例4
[0063] -种达格列净及其α-异构体的分离方法，其步骤如下：
[0064] 分别取7.Omg的达格列净及其α-异构体，置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀 释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，W十八烷基键合硅胶为填 充剂的化enomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm，5皿)为色谱柱，W乙腊和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[0065] 流动相流速为1. OmL/min;
[0066] 色谱柱溫度为20°C;
[0067] 进样量为10化；
[0068] 检测波长为210nm;
[0069] 所述流动相中，按体积百分比计算，乙腊:水为37% :63%。
[0070] 色谱分离结果见图4所示，从图4中可W看出，保留时间为13.327min的为达格列 净，保留时间15. OOOmin的为其对映体α-异构体，两者的分离度为5.00。
[0071] 实施例5
[0072] -种达格列净及其α-异构体的分离方法，其步骤如下：
[0073] 分别取7.Omg的达格列净及其α-异构体，置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀 释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，w十八烷基键合硅胶为填 充剂的化enomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm，5皿)为色谱柱，W乙腊和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[0074] 流动相流速为1. OmL/min;
[00巧]色谱柱溫度为4(rc;
[0076] 进样量为10化；
[0077] 检测波长为210nm;
[007引所述流动相中，按体积百分比计算，乙腊:水为37% :63%。
[0079] 色谱图分离结果见图5所示，从图5中可W看出，保留时间为13.840min的是达格列 净，保留时间15.820min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为4.88。
[0080] 实施例6
[0081 ] -种达格列净及其α-异构体的分离方法，其步骤如下：
[0082] 分别取7.Omg的达格列净及其α-异构体，置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀 释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，W十八烷基键合硅胶为填 充剂的化enomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm，5皿)为色谱柱，W乙腊和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[0083] 流动相流速为0.6mL/min;
[0084] 色谱柱溫度为25°C;
[0085] 进样量为10化；
[00化]检测波长为210nm;
[0087] 所述流动相中，按体积百分比计算，乙腊:水为37% :63%。
[0088] 色谱分离结果见图6所示，从图6中可W看出，保留时间为22.313min的是达格列 净，保留时间为25.960min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为6.22。
[0089] 实施例7
[0090] -种达格列净及其α-异构体的分离方法，其步骤如下：
[0091] 分别取7.Omg的达格列净及其α-异构体，置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀 释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，W十八烷基键合硅胶为填 充剂的化enomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm，5皿)为色谱柱，W乙腊和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[0092] 流动相流速为1.2mL/min;
[0093] 色谱柱溫度为25°C;
[0094] 进样量为10化；
[00巧]检测波长为210nm;
[0096] 所述流动相中，按体积百分比计算，乙腊:水为37% :63%。
[0097] 色谱分离结果见图7所示，从图7中可W看出，保留时间为11.44min的是达格列净， 保留时间为13.30min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为4.51。
[009引实施例8
[0099] -种达格列净及其α-异构体的分离方法，其步骤如下：
[0100] 分别取7.Omg的达格列净及其α-异构体，置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀 释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，w十八烷基键合硅胶为填 充剂的化enomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm，5皿)为色谱柱，W乙腊和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[0101] 流动相流速为l.OmL/min;
[0102] 色谱柱溫度为25°C;
[0103] 进样量为10化；
[0104] 检测波长为210nm;
[0105] 所述流动相中，按体积百分比计算，甲醇:水为60% : 40%。
[0106] 色谱分离结果见图8所示，从图8中可W看出，保留时间为24.747min的是达格列 净，保留时间为25.707min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为3.28。
[0107] 实施例9
[0108] -种达格列净及其α-异构体的分离方法，其步骤如下：
[0109] 分别取7.Omg的达格列净及其α-异构体，置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀 释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；即采用高效液相色谱仪，W十八烷基键合硅胶为填 充剂的化enomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm，5皿)为色谱柱，W乙腊和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：
[0110] 流动相流速为l.OmL/min;
[0111] 色谱柱溫度为25°C;
[0112] 进样量为10化；
[0113] 检测波长为210nm;
[0114] 所述流动相中，按体积百分比计算，甲醇:水为70% : 30%。
[0115] 色谱图分离结果见图9所示，从图9中可W看出，保留时间为8.SOOmin的是达格列 净，保留时间为9.787min的是其对映体α-异构体，两者的分离度为2.35。
[0116] 实施例10
[0117] -种达格列净及其α-异构体的分离方法中β-达格列净出峰位置的标定，其步骤如 下：
[0118] 取标准品β-达格列净10.Omg,置于20mL的容量瓶中，加乙腊-水溶解稀释定容至刻 度，摇匀，作为供试品溶液；
[0119] 按照色谱条件：色谱柱：Phenomenex Luna C( 18) (250 X 4.6mm, 5μηι)，流动相：乙 腊-水(37% :63%)，流速1.00血/min,柱溫:25°C，紫外检测器波长210皿，进样量1化L，进行 高效液相色谱法分析；
[0120] 色谱图分离结果见图10所示，从图10中可W看出，保留时间为13.720min的为达格 列净，并与实施例1进行比较，由于实施例10与实施例1所用的液相方法相同，说明在实施例 及其他实施例中后出峰的化合物为α-异构体，先出峰的化合物为达格列净。
[0121] 综上所述，本发明的一种达格列净及其α-异构体的分离方法，可W有效的将达格 列净与其α-异构体很好的分离，其分离度可达2.35-6.22。
[0122] W上所述仅是本发明的实施方式的举例，应当指出，对于本技术领域的普通技术 人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可W做出若干改进和变型，运些改进和变 型也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种达格列净及其α-异构体的分离方法，其特征在于:采用高效液相色谱仪，以十八 烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈和水组成的混合液、或甲醇和水组成的混合液为 流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离:流动相流速为0.60-1.20mL/min;色谱柱温 度为20-40°C;进样量为10yL;检测波长为205-260nm;所述流动相中，乙腈和水的体积比 为32~42:58~68，甲醇和水的体积比为60~80:20~40，后出峰的化合物为α-异构体，先 出峰的化合物为达格列净。2. 如权利要求1所述的达格列净及其α_异构体的分离方法，其特征在于:所述的色谱柱 为十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱?116110111611611^11^(：(18)，色谱柱的规格为4.6 111111 X250mm，5um〇3. 如权利要求1所述的一种达格列净及其α-异构体的分离方法，其特征在于:所述的流 动相流速为1.00mL/min，色谱柱温度为25°C，检测波长为210nm。4. 如权利要求1所述的一种达格列净及其α-异构体的分离方法，其特征在于:所述的流 动相由乙腈和水组成，乙腈和水的体积比为32~42:58~68。5. 如权利要求1所述的一种达格列净及其α-异构体的分离方法，其特征在于:所述的流 动相由甲醇和水组成，甲醇和水的体积比为60~80:20~40。6. 如权利要求1所述的一种达格列净及其α-异构体的分离方法，其特征在于:所用的高 效液相色谱仪为戴安U3000高效液相色谱仪。
【专利摘要】本发明属于药物分析技术领域，提供了一种达格列净及其α-异构体的分离方法，采用高效液相色谱分析仪，选用十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，规格为4.6mm×250mm，5μm；流动相为乙腈和水、或甲醇和水的混合液组成，乙腈和水的体积比为32～42：58～68，甲醇和水的体积比为60～80：20～40；流速为0.6～1.2mL/min；柱温为20～40℃；紫外检测器波长为205-260nm；进样体积为10μL,后出峰的化合物为α-异构体，先出峰的化合物为达格列净。本发明的方法用普通的液相色谱仪即可，设备要求不高，流动相选用的两个介质普通易得，可行性高，操作过程简单方便。
【IPC分类】G01N30/02, G01N30/06
【公开号】CN105486767
【申请号】CN201510881032
【发明人】潘仙华, 王亚萍, 李勤勤, 张瑞敏, 陈思羽, 张鑫, 陈彦宇
【申请人】上海应用技术学院
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年12月3日
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