一种使用uplc-msms检测食品中乌洛托品含量的方法
一种使用uplc-msms检测食品中乌洛托品含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及食品检测技术领域，特别是一种使用UPLC-MS/MS检测食品中违禁添 加剂乌洛巧品的检测方法。
【背景技术】
[0002] 乌洛巧品（HMTA)别名六亚甲基四胺，它可作为缓蚀剂、固化剂、防缩剂和杀菌剂 等。乌洛巧品本身是低毒的，但在弱酸的条件下，乌洛巧品能分解出具有毒性的甲醒，同时 甲醒在体内还可还原为甲醇，故也表现出甲醇的毒理作用。对人体的肾、肝、中枢神经、免疫 功能、消化系统等均有损害。
[0003] 由于近年来，国内多次报道从腐竹、粉丝、米线、水产品等食品中检测出乌洛巧品 而引起一系列的食品安全事件，因此于2010年3月乌洛巧品被全国食品安全整顿工作办公 室被列为《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》中，被明文禁止 添加到食品当中或加工食品过程中使用。
[0004] 在我国食品安全矛盾突出的背景下，国家对于食品安全问题执法力度不断加强的 背景下，对于此项存在的食品安全隐患需要加急应对。
[0005] 然而目前在乌洛巧品的检测主要集中在水和药物制剂两个方面，对于基体相对复 杂的食品中检测方法研究较少。黄国春（气相色谱法测定腐竹中乌洛巧品含量的研究[J] 广西轻工业，2008 (6)，26-27)报道了用Η氯甲焼提取、气相色谱氨火焰离子化检测器检测 腐竹中乌洛巧品，方法检测限为0.7 mg/kg。但其处理方法（气相色谱-质谱GC-M巧所需 检测时间较长，方法检测限界较低，且单独采用气象色谱测定对基体相对复杂的食品结果 不够精准，而现行标准SN/T 2226-2008其方法限界同样存在限界较低问题；对于目前食品 安令执法中遇到的辦歲獻經从龙據討略思不足。对此寻找一种符合当前状况的輸刷方法尤 为必要。
【发明内容】
[000引为解决W上技术问题，本发明建立了一种超高压液相色谱一串联质谱（UPLC-MS/ MS)测定食品中乌洛巧品的分析方法，通过对不同基质样品进行前处理后，在每3 min左右 完成一个样品的分析，检出限可达0. 5 μ g/kg (L0D，S/N=3)，方法回收率为86. 8%~102. 7%， 比SN/T2226-2008提高10倍；精密度RSD为0. 36%~4. 79%，数值可信。能高效、灵敏、准 确的适用于各类食品中乌洛巧品的测定。
[0007] 为实现上述目的，本发明采用W下技术方案： (1)标准溶液的配置；准确称取乌洛巧品标准品0. 001 g，用超纯水溶解并定容至100 1^，摇匀备用，配制成浓度为1.0 mg/mL的标准储备液。
[0008] (2)色谱条件；HILIC色谱柱巧0 mmX2. 1 mm，1.7 μL?)，柱温35 °C，流速0.化血/ min ;进样量5 μ L ;流动相为己腊和10 mmol/L的己酸倭溶液（pH=3. 5)(80/20，V/V)，等度 洗脱。
[0009] (3)质谱条件；电喷雾离子源（ESI),正离子扫描模式；碰撞气（CAD)为8 psi ;气 帘气（CUR)为20 psi ;雾化气（GS1)为45 psi ;辅助加热器（GS2)为60 psi ;喷雾电压（IS) 为5500 V;离子源温度（TEM)为150 °C。
[0010] (4)标准曲线的绘制：取（1)所述的乌洛巧品系列标准溶液，选择流动相为己腊和 己酸倭，通过固相萃取柱W峰面积Y对浓度X ( μ g/L)作标准曲线。
[0011] 含油脂较高的样品在液质检测时就会造成非常大的基质效应，使得回收率极大的 降低，对检测结果产生了严重的干扰，所W必须去除样品中的脂溶性物质。本发明W脂肪含 量> 20%为区分脂肪含量高低限界，选取的样品的脂肪含量如下表1 ; 表1本发明选取的样品脂肪含量表
(5)含油脂较高样品的前处理；将20 g食品样品(脂肪含量> 20%)研磨成均匀的粉末 或匀浆，准确称取2. 00 g于离必管中，加入5血己腊并置于超声萃取10 min, W 3000 r/ min离必5 min,己腊相过无水硫酸钢，转移至浓缩瓶浓缩近干后取己腊层过C18固相萃取 小柱，使用己腊作为洗脱液，浓缩至1.0 mU待测。
[0012] (6)含油脂较低样品的前处理；将20 g食品样品(脂肪含量< 20%)研磨成均匀的 粉末或匀浆，准确称取2.00 g于离必管中，加入5 mL己腊并置于超声萃取10 min, W 3000 r/min离必5 min,己腊相过无水硫酸钢，转移至浓缩瓶浓缩近干后取己腊层直接过0. 22 μ m滤膜，待测。
[0013] (7)样品的测定；取上述（2)含油脂较高样品和（3)含油脂较低样品的洗脱液添加 一系列浓度梯度的乌洛巧品标准溶液，在上述（4) (5)的条件下进行UPLC-MS/MS测定，重 复测定计算变异系数，测出样品中的乌洛巧品的含量。
[0014] 与现有技术相比，本发明的UPLC-MS/MS测定食品中的乌洛巧品的方法，UPLC-MS 除了可W分析气相色谱-质谱（GC-MS)所不能分析的强极性、难挥发、热不稳定性的化合物 之外，还具较多方面的优势；如检测范围广，质谱几乎可W检测所有的化合物，较容易地处 理了分析热不稳定化合物的问题；分离能力强；分析结果准确可靠；检出限低，检测时间短 等，具有很好的实用性。
【附图说明】
[0015] 图1乌洛巧品标准曲线图； 图2乌洛巧品标准溶液的离子流图。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合具体的实施例对本发明做进一步的说明。
[0017] 实验材料：美国Sigma公司的乌洛巧品，其纯度>99. 0% ;美国Merck集团的己腊、 己酸倭，其纯度为色谱纯； 实验器材；如下表2 表2本发明所需实验器材
按照下面步骤测定乌洛巧品的浓度： (1)标准溶液的配置；准确称取乌洛巧品标准品0. 001 g，用超纯水溶解并定容至100 111以摇匀备用，配制成浓度为1.0 mg/mL的标准储备液。
[001引 （2)色谱条件；HILIC色谱柱巧0 mmX2. 1 mm，1.7 μL?)，柱温35 °C,流速0.化血/ min ;进样量5 μ L ;流动相为己腊和10 mmol/L的己酸倭溶液（pH=3. 5)(80/20，V/V)，等度 洗脱。
[0019] (3)质谱条件；电喷雾离子源（ESI),正离子扫描模式；碰撞气（CAD)为8 psi ;气 帘气（CUR)为20 psi ;雾化气（GS1)为45 psi ;辅助加热器（GS2)为60 psi ;喷雾电压（IS) 为5500 V;离子源温度（TEM)为150 °C。
[0020] (4)标准曲线的绘制：取乌洛巧品系列标准工作溶液，此流动相为己腊和己酸倭 进行检测，W峰面积Y对浓度X ( μ g/L)作标准曲线，线性方程为Y = 12576X - 304. 29， R2=0. 9999。曲线如图1所示。
[0021] 标准曲线、线性范围及检出限 对监测子离子峰与质量浓度进行线性拟合，结果表明监测离子的质谱峰面积与质量浓 度在1. 0-50. 0 μ g/L范围内具有很好的线性关系，相关系数均优于0. 999,表明所选定的 特征离子具有很好的稳定性。依据定量离子 色谱峰3倍与10倍信噪比（S/N)所对应的样 品中该物质的浓度分别确定为方法检出限（L0D)和定量下限（L0Q)，得到目标分析物的检 出限为0. 5 μ g/kg，定量下限为1. 5 μ g/kg (见表3)。标准溶液离子流图见图2。
[0022] 表3乌洛巧品的线性方程、相关系数和检出限、定量限
实施例1 腐竹的前处理：将20 g腐竹研磨成均匀的粉末或匀浆，准确称取2.00 g于离必管中， 加入5血己腊并置于超声萃取10 min, W 3000 r/min离必5 min,己腊相过无水硫酸钢， 转移至浓缩瓶浓缩近干后取己腊层过C18固相萃取小柱，使用己腊作为洗脱液，浓缩至1.0 血，待测。
[0023] 腐竹中乌洛巧品含量的测定：取上述腐竹洗脱液中添加5、10、20、50 μκΑ的乌洛 巧品标准溶液，在上述（2) (3)的质谱条件、色谱条件下进行UPLC-MS/MS测定，6次重复测 定计算变异系数，其具体测定结果如表4。
[0024] 表4腐竹的测定结果
实施例2 猪肉丸的前处理：将20 g猪肉丸研磨成均匀的粉末或匀浆，准确称取2.00 g于离必管 中，加入5血己腊并置于超声萃取10 min, W 3000 r/min离必5 min,己腊相过无水硫酸 钢，转移至浓缩瓶浓缩近干后取己腊层过C18固相萃取小柱，使用己腊作为洗脱液，浓缩至 1.0血，待测。
[00巧]猪肉丸中乌洛巧品含量的测定；取上述猪肉丸洗脱液中添加5、10、20、50 μκΑ的 乌洛巧品标准溶液，在上述（2) (3)的质谱条件、色谱条件下进行UPLC-MS/MS测定，6次重 复测定计算变异系数，其具体测定结果如表5。
[0026] 表5猪肉丸的测定结果
实施例3 米线的前处理：将20 g米线研磨成均匀的粉末或匀浆，准确称取2. 00 g于离必管中， 加入5血己腊并置于超声萃取10 min, W 3000 r/min离必5 min,己腊相过无水硫酸钢， 转移至浓缩瓶浓缩近干后取己腊层直接过0.22 μ m滤膜，待测。
[0027] 米线中乌洛巧品含量的测定：取上述米线洗脱液中添加5、10、20、50μg/L的乌洛 巧品标准溶液，在上述（2) (3)的质谱条件、色谱条件下进行UPLC-MS/MS测定，6次重复测 定计算变异系数，其具体测定结果如表6。
[0028] 表6米线的测定结果
实施例4 犹鱼的前处理：将20 g犹鱼研磨成均匀的粉末或匀浆，准确称取2. 00 g于离必管中， 加入5血己腊并置于超声萃取10 min, W 3000 r/min离必5 min,己腊相过无水硫酸钢， 转移至浓缩瓶浓缩近干后取己腊层直接过0.22 μ m滤膜，待测。
[0029] 犹鱼中乌洛巧品含量的测定；取上述犹鱼洗脱液中添加5、10、20、50μg/L的乌洛 巧品标准溶液，在上述（2) (3)的质谱条件、色谱条件下进行UPLC-MS/MS测定，6次重复测 定计算变异系数，其具体测定结果如表7。
[0030] 表7米线的测定结果
通过表：Γ表7数据可知：目标物在色谱柱上实现了有效分离，在3 min左右完成一个 样品的分析，相关系数（r2, n=6)大于0.999,检测结果稳定、灵敏。乌洛巧品的线性范围 1.0~50. 0 μg/^，检出限为0. 5 ug/kg (L0D，S/N=3)，方法回收率为86. 8%~102. 7%，精密度 RSD 为 0. 36% ~4. 79〇/〇。
[0031] 基于上述测验结果，可W看到，本发明检测食品中违禁食品添加乌洛巧品的方法 操作简单，方便快速。其检测精度适用于食品中乌洛巧品的仲裁检测与确证。述实施例仅 用于说明本发明的内容，但送并非是对本发明的限制。
【主权项】
1. 一种使用UPLC-MS/MS检测食品中乌洛托品含量的方法，其特征包括以下步骤： (1) 标准溶液的配置：准确称取乌洛托品标准品0. 001g，用超纯水溶解并定容至100 mL，摇匀备用，配制成浓度为1. 0mg/mL的标准储备液； (2) 色谱条件：HILIC色谱柱（50mmX2.1mm，1.7μπι)，柱温35 °C，流速0.25mL/min; 进样量5μL;流动相为乙腈和10mmol/L的乙酸铵溶液（pH=3. 5) (80/20,V/V)，等度洗 脱； (3) 质谱条件：电喷雾离子源（ESI)，正离子扫描模式；碰撞气（CAD)为8psi;气帘气 (CUR)为20psi;雾化气（GS1)为45psi;辅助加热器（GS2)为60psi;喷雾电压（IS)为 5500V;离子源温度（TEM)为150°C; (4) 标准曲线的绘制：取（1)所述的乌洛托品系列标准溶液，选择流动相为乙腈和乙酸 铵，通过固相萃取柱以峰面积Y对浓度X(μg/L)作标准曲线； (5) 含油脂较高样品的前处理：将20g食品样品研磨成均匀的粉末或匀浆，准确称取 2. 00g于离心管中，加入5mL乙腈并置于超声萃取10min,以3000r/min离心5min,乙 腈相过无水硫酸钠，转移至浓缩瓶浓缩近干后取乙腈层过固相萃取小柱，使用乙腈作为洗 脱液，浓缩至1.0mL，待测； (6) 含油脂较低样品的前处理：将20g食品样品研磨成均匀的粉末或匀浆，准确称取 2. 00g于离心管中，加入5mL乙腈并置于超声萃取10min,以3000r/min离心5min,乙 腈相过无水硫酸钠，转移至浓缩瓶浓缩近干后取乙腈层直接过0.22μm滤膜，待测； (7) 样品的测定：取上述（2)含油脂较高样品和（3)含油脂较低样品的洗脱液添加一系 列浓度梯度的乌洛托品标准溶液，在上述（4) (5)的条件下进行UPLC-MS/MS测定，重复测 定计算变异系数，测出样品中的乌洛托品的含量。2. 如权利要求1所述的一种使用UPLC-MS/MS检测食品中乌洛托品含量的方法，其特征 在于：所述的步骤（1)中标准溶液的配置浓度为5、10、20、50Pg/L。3. 如权利要求1所述的一种使用UPLC-MS/MS检测食品中乌洛托品含量的方法，其特征 在于：所述的步骤（4)中使用的固相萃取柱为C18柱。4. 如权利要求1所述的一种使用UPLC-MS/MS检测食品中乌洛托品含量的方法，其特征 在于：所述的步骤（5)中使用的固相萃取小柱为C18柱。5. 如权利要求1所述的一种使用UPLC-MS/MS检测食品中乌洛托品含量的方法，其特征 在于：所述的步骤（6) (7)中判别含油脂含量的标准为目标样品的脂肪含量百分比限界为 20% 〇
【专利摘要】本发明涉及一种食品检测技术，特别是一种通过使用UPLC-MS/MS检测食品中违禁添加剂乌洛托品，通过对脂肪含量不同的样品进行不同的前处理，再通过设定的质谱色谱条件进行检测，从而得出目标食品中乌洛托品的含量。乌洛托品的线性范围1.0~50.0μg/L，检出限为0.5μg/kg（LOD，S/N=3），方法回收率为86.8%~102.7%，精密度RSD为0.36%～4.79%。该方法快速、灵敏，适用于食品中乌洛托品的仲裁检测与确证。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN105486789
【申请号】CN201410482355
【发明人】林锦浩
【申请人】林锦浩
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年9月19日
【技术领域】
[0001] 本发明涉及食品检测技术领域，特别是一种使用UPLC-MS/MS检测食品中违禁添 加剂乌洛巧品的检测方法。
【背景技术】
[0002] 乌洛巧品（HMTA)别名六亚甲基四胺，它可作为缓蚀剂、固化剂、防缩剂和杀菌剂 等。乌洛巧品本身是低毒的，但在弱酸的条件下，乌洛巧品能分解出具有毒性的甲醒，同时 甲醒在体内还可还原为甲醇，故也表现出甲醇的毒理作用。对人体的肾、肝、中枢神经、免疫 功能、消化系统等均有损害。
[0003] 由于近年来，国内多次报道从腐竹、粉丝、米线、水产品等食品中检测出乌洛巧品 而引起一系列的食品安全事件，因此于2010年3月乌洛巧品被全国食品安全整顿工作办公 室被列为《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》中，被明文禁止 添加到食品当中或加工食品过程中使用。
[0004] 在我国食品安全矛盾突出的背景下，国家对于食品安全问题执法力度不断加强的 背景下，对于此项存在的食品安全隐患需要加急应对。
[0005] 然而目前在乌洛巧品的检测主要集中在水和药物制剂两个方面，对于基体相对复 杂的食品中检测方法研究较少。黄国春（气相色谱法测定腐竹中乌洛巧品含量的研究[J] 广西轻工业，2008 (6)，26-27)报道了用Η氯甲焼提取、气相色谱氨火焰离子化检测器检测 腐竹中乌洛巧品，方法检测限为0.7 mg/kg。但其处理方法（气相色谱-质谱GC-M巧所需 检测时间较长，方法检测限界较低，且单独采用气象色谱测定对基体相对复杂的食品结果 不够精准，而现行标准SN/T 2226-2008其方法限界同样存在限界较低问题；对于目前食品 安令执法中遇到的辦歲獻經从龙據討略思不足。对此寻找一种符合当前状况的輸刷方法尤 为必要。
【发明内容】
[000引为解决W上技术问题，本发明建立了一种超高压液相色谱一串联质谱（UPLC-MS/ MS)测定食品中乌洛巧品的分析方法，通过对不同基质样品进行前处理后，在每3 min左右 完成一个样品的分析，检出限可达0. 5 μ g/kg (L0D，S/N=3)，方法回收率为86. 8%~102. 7%， 比SN/T2226-2008提高10倍；精密度RSD为0. 36%~4. 79%，数值可信。能高效、灵敏、准 确的适用于各类食品中乌洛巧品的测定。
[0007] 为实现上述目的，本发明采用W下技术方案： (1)标准溶液的配置；准确称取乌洛巧品标准品0. 001 g，用超纯水溶解并定容至100 1^，摇匀备用，配制成浓度为1.0 mg/mL的标准储备液。
[0008] (2)色谱条件；HILIC色谱柱巧0 mmX2. 1 mm，1.7 μL?)，柱温35 °C，流速0.化血/ min ;进样量5 μ L ;流动相为己腊和10 mmol/L的己酸倭溶液（pH=3. 5)(80/20，V/V)，等度 洗脱。
[0009] (3)质谱条件；电喷雾离子源（ESI),正离子扫描模式；碰撞气（CAD)为8 psi ;气 帘气（CUR)为20 psi ;雾化气（GS1)为45 psi ;辅助加热器（GS2)为60 psi ;喷雾电压（IS) 为5500 V;离子源温度（TEM)为150 °C。
[0010] (4)标准曲线的绘制：取（1)所述的乌洛巧品系列标准溶液，选择流动相为己腊和 己酸倭，通过固相萃取柱W峰面积Y对浓度X ( μ g/L)作标准曲线。
[0011] 含油脂较高的样品在液质检测时就会造成非常大的基质效应，使得回收率极大的 降低，对检测结果产生了严重的干扰，所W必须去除样品中的脂溶性物质。本发明W脂肪含 量> 20%为区分脂肪含量高低限界，选取的样品的脂肪含量如下表1 ; 表1本发明选取的样品脂肪含量表
(5)含油脂较高样品的前处理；将20 g食品样品(脂肪含量> 20%)研磨成均匀的粉末 或匀浆，准确称取2. 00 g于离必管中，加入5血己腊并置于超声萃取10 min, W 3000 r/ min离必5 min,己腊相过无水硫酸钢，转移至浓缩瓶浓缩近干后取己腊层过C18固相萃取 小柱，使用己腊作为洗脱液，浓缩至1.0 mU待测。
[0012] (6)含油脂较低样品的前处理；将20 g食品样品(脂肪含量< 20%)研磨成均匀的 粉末或匀浆，准确称取2.00 g于离必管中，加入5 mL己腊并置于超声萃取10 min, W 3000 r/min离必5 min,己腊相过无水硫酸钢，转移至浓缩瓶浓缩近干后取己腊层直接过0. 22 μ m滤膜，待测。
[0013] (7)样品的测定；取上述（2)含油脂较高样品和（3)含油脂较低样品的洗脱液添加 一系列浓度梯度的乌洛巧品标准溶液，在上述（4) (5)的条件下进行UPLC-MS/MS测定，重 复测定计算变异系数，测出样品中的乌洛巧品的含量。
[0014] 与现有技术相比，本发明的UPLC-MS/MS测定食品中的乌洛巧品的方法，UPLC-MS 除了可W分析气相色谱-质谱（GC-MS)所不能分析的强极性、难挥发、热不稳定性的化合物 之外，还具较多方面的优势；如检测范围广，质谱几乎可W检测所有的化合物，较容易地处 理了分析热不稳定化合物的问题；分离能力强；分析结果准确可靠；检出限低，检测时间短 等，具有很好的实用性。
【附图说明】
[0015] 图1乌洛巧品标准曲线图； 图2乌洛巧品标准溶液的离子流图。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合具体的实施例对本发明做进一步的说明。
[0017] 实验材料：美国Sigma公司的乌洛巧品，其纯度>99. 0% ;美国Merck集团的己腊、 己酸倭，其纯度为色谱纯； 实验器材；如下表2 表2本发明所需实验器材
按照下面步骤测定乌洛巧品的浓度： (1)标准溶液的配置；准确称取乌洛巧品标准品0. 001 g，用超纯水溶解并定容至100 111以摇匀备用，配制成浓度为1.0 mg/mL的标准储备液。
[001引 （2)色谱条件；HILIC色谱柱巧0 mmX2. 1 mm，1.7 μL?)，柱温35 °C,流速0.化血/ min ;进样量5 μ L ;流动相为己腊和10 mmol/L的己酸倭溶液（pH=3. 5)(80/20，V/V)，等度 洗脱。
[0019] (3)质谱条件；电喷雾离子源（ESI),正离子扫描模式；碰撞气（CAD)为8 psi ;气 帘气（CUR)为20 psi ;雾化气（GS1)为45 psi ;辅助加热器（GS2)为60 psi ;喷雾电压（IS) 为5500 V;离子源温度（TEM)为150 °C。
[0020] (4)标准曲线的绘制：取乌洛巧品系列标准工作溶液，此流动相为己腊和己酸倭 进行检测，W峰面积Y对浓度X ( μ g/L)作标准曲线，线性方程为Y = 12576X - 304. 29， R2=0. 9999。曲线如图1所示。
[0021] 标准曲线、线性范围及检出限 对监测子离子峰与质量浓度进行线性拟合，结果表明监测离子的质谱峰面积与质量浓 度在1. 0-50. 0 μ g/L范围内具有很好的线性关系，相关系数均优于0. 999,表明所选定的 特征离子具有很好的稳定性。依据定量离子 色谱峰3倍与10倍信噪比（S/N)所对应的样 品中该物质的浓度分别确定为方法检出限（L0D)和定量下限（L0Q)，得到目标分析物的检 出限为0. 5 μ g/kg，定量下限为1. 5 μ g/kg (见表3)。标准溶液离子流图见图2。
[0022] 表3乌洛巧品的线性方程、相关系数和检出限、定量限
实施例1 腐竹的前处理：将20 g腐竹研磨成均匀的粉末或匀浆，准确称取2.00 g于离必管中， 加入5血己腊并置于超声萃取10 min, W 3000 r/min离必5 min,己腊相过无水硫酸钢， 转移至浓缩瓶浓缩近干后取己腊层过C18固相萃取小柱，使用己腊作为洗脱液，浓缩至1.0 血，待测。
[0023] 腐竹中乌洛巧品含量的测定：取上述腐竹洗脱液中添加5、10、20、50 μκΑ的乌洛 巧品标准溶液，在上述（2) (3)的质谱条件、色谱条件下进行UPLC-MS/MS测定，6次重复测 定计算变异系数，其具体测定结果如表4。
[0024] 表4腐竹的测定结果
实施例2 猪肉丸的前处理：将20 g猪肉丸研磨成均匀的粉末或匀浆，准确称取2.00 g于离必管 中，加入5血己腊并置于超声萃取10 min, W 3000 r/min离必5 min,己腊相过无水硫酸 钢，转移至浓缩瓶浓缩近干后取己腊层过C18固相萃取小柱，使用己腊作为洗脱液，浓缩至 1.0血，待测。
[00巧]猪肉丸中乌洛巧品含量的测定；取上述猪肉丸洗脱液中添加5、10、20、50 μκΑ的 乌洛巧品标准溶液，在上述（2) (3)的质谱条件、色谱条件下进行UPLC-MS/MS测定，6次重 复测定计算变异系数，其具体测定结果如表5。
[0026] 表5猪肉丸的测定结果
实施例3 米线的前处理：将20 g米线研磨成均匀的粉末或匀浆，准确称取2. 00 g于离必管中， 加入5血己腊并置于超声萃取10 min, W 3000 r/min离必5 min,己腊相过无水硫酸钢， 转移至浓缩瓶浓缩近干后取己腊层直接过0.22 μ m滤膜，待测。
[0027] 米线中乌洛巧品含量的测定：取上述米线洗脱液中添加5、10、20、50μg/L的乌洛 巧品标准溶液，在上述（2) (3)的质谱条件、色谱条件下进行UPLC-MS/MS测定，6次重复测 定计算变异系数，其具体测定结果如表6。
[0028] 表6米线的测定结果
实施例4 犹鱼的前处理：将20 g犹鱼研磨成均匀的粉末或匀浆，准确称取2. 00 g于离必管中， 加入5血己腊并置于超声萃取10 min, W 3000 r/min离必5 min,己腊相过无水硫酸钢， 转移至浓缩瓶浓缩近干后取己腊层直接过0.22 μ m滤膜，待测。
[0029] 犹鱼中乌洛巧品含量的测定；取上述犹鱼洗脱液中添加5、10、20、50μg/L的乌洛 巧品标准溶液，在上述（2) (3)的质谱条件、色谱条件下进行UPLC-MS/MS测定，6次重复测 定计算变异系数，其具体测定结果如表7。
[0030] 表7米线的测定结果
通过表：Γ表7数据可知：目标物在色谱柱上实现了有效分离，在3 min左右完成一个 样品的分析，相关系数（r2, n=6)大于0.999,检测结果稳定、灵敏。乌洛巧品的线性范围 1.0~50. 0 μg/^，检出限为0. 5 ug/kg (L0D，S/N=3)，方法回收率为86. 8%~102. 7%，精密度 RSD 为 0. 36% ~4. 79〇/〇。
[0031] 基于上述测验结果，可W看到，本发明检测食品中违禁食品添加乌洛巧品的方法 操作简单，方便快速。其检测精度适用于食品中乌洛巧品的仲裁检测与确证。述实施例仅 用于说明本发明的内容，但送并非是对本发明的限制。
【主权项】
1. 一种使用UPLC-MS/MS检测食品中乌洛托品含量的方法，其特征包括以下步骤： (1) 标准溶液的配置：准确称取乌洛托品标准品0. 001g，用超纯水溶解并定容至100 mL，摇匀备用，配制成浓度为1. 0mg/mL的标准储备液； (2) 色谱条件：HILIC色谱柱（50mmX2.1mm，1.7μπι)，柱温35 °C，流速0.25mL/min; 进样量5μL;流动相为乙腈和10mmol/L的乙酸铵溶液（pH=3. 5) (80/20,V/V)，等度洗 脱； (3) 质谱条件：电喷雾离子源（ESI)，正离子扫描模式；碰撞气（CAD)为8psi;气帘气 (CUR)为20psi;雾化气（GS1)为45psi;辅助加热器（GS2)为60psi;喷雾电压（IS)为 5500V;离子源温度（TEM)为150°C; (4) 标准曲线的绘制：取（1)所述的乌洛托品系列标准溶液，选择流动相为乙腈和乙酸 铵，通过固相萃取柱以峰面积Y对浓度X(μg/L)作标准曲线； (5) 含油脂较高样品的前处理：将20g食品样品研磨成均匀的粉末或匀浆，准确称取 2. 00g于离心管中，加入5mL乙腈并置于超声萃取10min,以3000r/min离心5min,乙 腈相过无水硫酸钠，转移至浓缩瓶浓缩近干后取乙腈层过固相萃取小柱，使用乙腈作为洗 脱液，浓缩至1.0mL，待测； (6) 含油脂较低样品的前处理：将20g食品样品研磨成均匀的粉末或匀浆，准确称取 2. 00g于离心管中，加入5mL乙腈并置于超声萃取10min,以3000r/min离心5min,乙 腈相过无水硫酸钠，转移至浓缩瓶浓缩近干后取乙腈层直接过0.22μm滤膜，待测； (7) 样品的测定：取上述（2)含油脂较高样品和（3)含油脂较低样品的洗脱液添加一系 列浓度梯度的乌洛托品标准溶液，在上述（4) (5)的条件下进行UPLC-MS/MS测定，重复测 定计算变异系数，测出样品中的乌洛托品的含量。2. 如权利要求1所述的一种使用UPLC-MS/MS检测食品中乌洛托品含量的方法，其特征 在于：所述的步骤（1)中标准溶液的配置浓度为5、10、20、50Pg/L。3. 如权利要求1所述的一种使用UPLC-MS/MS检测食品中乌洛托品含量的方法，其特征 在于：所述的步骤（4)中使用的固相萃取柱为C18柱。4. 如权利要求1所述的一种使用UPLC-MS/MS检测食品中乌洛托品含量的方法，其特征 在于：所述的步骤（5)中使用的固相萃取小柱为C18柱。5. 如权利要求1所述的一种使用UPLC-MS/MS检测食品中乌洛托品含量的方法，其特征 在于：所述的步骤（6) (7)中判别含油脂含量的标准为目标样品的脂肪含量百分比限界为 20% 〇
【专利摘要】本发明涉及一种食品检测技术，特别是一种通过使用UPLC-MS/MS检测食品中违禁添加剂乌洛托品，通过对脂肪含量不同的样品进行不同的前处理，再通过设定的质谱色谱条件进行检测，从而得出目标食品中乌洛托品的含量。乌洛托品的线性范围1.0~50.0μg/L，检出限为0.5μg/kg（LOD，S/N=3），方法回收率为86.8%~102.7%，精密度RSD为0.36%～4.79%。该方法快速、灵敏，适用于食品中乌洛托品的仲裁检测与确证。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN105486789
【申请号】CN201410482355
【发明人】林锦浩
【申请人】林锦浩
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年9月19日
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