一种浆果和其它小型水果中708种农药残留gc-q-tof/ms侦测技术的制作方法
一种浆果和其它小型水果中708种农药残留gc-q-tof/ms侦测技术的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及农残检测领域，特别设及一种应用GC-Q-T0F/MS筛查浆果和其他小型 水果中708种农残的侦测方法。
【背景技术】
[0002] 早在1976年世界卫生组织(WHO)、粮农组织(FA0)和联合国环境规划署(UNEP)共同 建立了全球环境检测系统/食品项目（Global Environment Monitoring System,GEMS/ 化od)，旨在掌握会员国食品污染状况，了解食品污染物摄入量，保护人体健康，促进贸易发 展。现在，世界各国都把食品安全提升到国家安全的战略地位。农药残留限量是食品安全标 准之一，也是国际贸易准入口槛。同时，对农药残留的要求呈现出品种越来越多，限量越来 越严格的发展趋势，也就是国际贸易设立的农药残留限量口槛越来越高。现在欧盟已制定 了839种农药的162248项Μ化标准，美国制定了351种农药的39147项Μ化标准，日本制定了 579种农药的51600多项MRL标准，我国2014年发布了381种农药的3650项MRL标准。目前，国 际上普遍采用的一律标准限量为l〇yg/kg。因此，食品安全和国际贸易都呼唤高通量快速农 药残留检测技术，运无疑也给广大农药残留分析工作者提供了机遇和挑战。在目前的众多 农药残留分析技术中，色谱质谱联用技术是实现高通量多残留快速检测的最佳分析手段。
[0003] 浆果(Berry)是由子房或联合其他花器发育而成柔软多汁的肉质果，芳香味美，极 富营养价值和药用价值。据中国统计年鉴数据显示，2011年我国水果总量为22768.18万t， 其中浆果类约占水果总量的19.3%。随着人们生活水平的提高，对优质、健康的浆果和其他 小型水果的需求逐渐旺盛，浆果类食品逐渐展现出
[0004] 目前，农药残留分析多W气相色谱、液相色谱、气相色谱-质谱和液相色谱-质谱联 用技术为主。运些检测技术都首先需要农药标准品对照进行定性。例如，对100种农药的检 测就需要准备相应的100种农药标准品对照，而运100种之外的农药都会被漏检。在农兽药 残留实验室的实际工作中，绝大多数实验室都不会储备数百种农药标准品，其原因是农药 标准品不仅价格昂贵，而且有效期只有2-3年，需要重复投资。一般实验室常备农药标准品 只有几十种，其日常监测的农药品种也就只限于运几十种，由此造成食品安全监测漏桐。
【发明内容】
[000引为了克服上述缺陷，本发明人团队经过多年潜屯、研究，研发了 708种农药的精确质 量数据库W及一种果蔬中708种农药残留的GC-Q-T0F/MS侦测技术，实现了不需标准品对 照、即可对浆果和其他小型水果中708种农药残留进行快速侦测检测，满足了当前农产品中 农药残留高通量快速检测的急需。
[0006] 一方面，本发明提供了一种GC-Q-T0F/MS检测浆果和其他小型水果中708种农药残 留的侦测方法，其特征在于:建立708种农药T0F/MS数据库，同时对浆果和其他小型水果中 708种农药进行定性侦测与确证;该方法包括W下步骤：
[0007] (1)将农药标准品分别配制成l-5mg/L的标准溶液，设定条件下经GC-QTOF/MS-级 模式全谱数据测定每种标准溶液的全谱数据，分别得到每种农药的化学分子式、保留时间、 碎片离子精确质量数、离子丰度比；
[0008] (2)将步骤(1)中获得的一级模式全谱数据，经核实后的碎片离子全扫描质谱图导 入PO)L软件中，并与对应的农药信息相关联，建成T0F/MS精确质量数据库，用于数据检索分 析；
[0009] (3)与步骤（1)相同的设定条件下浆果和其他小型水果的测定待测样品中农药的 全谱数据，得到其含有的农药的化学分子式、保留时间、碎片离子精确质量数、离子丰度比；
[0010] (4)对样品测定结果经精确质量数据库检索，对符合鉴定依据的检出农药进行准 确鉴定，从而获得浆果和其他小型水果中的农残种类。
[0011] 优选的，通过对浆果和其他小型水果进行前处理W获得浆果和其他小型水果的测 定待测样品，所述前处理方法包括W下程序：
[0012] 样品制备:浆果和其他小型水果样品经0.5-5体积％醋酸乙腊匀浆提取，经脱水和 离屯、、浓缩后，再经Carbon/N此柱净化，乙腊+甲苯洗脱残留农药，经再浓缩、过滤后制成待 测样液曰。
[0013] 本发明所具有的有益效果：
[0014] 1、本发明W高分辨碎片离子精确质量数、保留时间、离子丰度比等化合物信息为 识别标准，建立的708种农药侦测和确证技术方法，彻底改变了原有W化合物标准物为参比 的定性模式，是一种不需要标准物对照，快速、高通量、准确可靠的农药残留检测新技术。
[0015] 2、本发明在不需标准物对照的前提下，实现了 708种农药残留的定性侦测和确证， 可W大大节省购买标准物的成本，也更加环保、安全。
[0016] 3、本发明可在1小时内完成708种农药侦测、定性与确证，与传统检ii方法相比较， 可W提高工作效率数百倍。
[0017] 4、本发明能够做到对浆果和其他小型水果样品中708种农药残留一次性提取净 化，一次进样检测，与传统检测方法相比较，可W节省检测成本、提高工作效率数百倍。
[0018] 5、本发明可W测试的浆果和其他小型水果样品中农药包括W下物质中的一类或 几类:有机憐类农药，氨基甲酸醋类农药，苯并咪挫类农药，横酷脈类农药，烟碱类农药，除 虫菊醋类农药及其他类型的农药及代谢物。
[0019] 6、本发明建立的GC-QT0F/MS侦现版术指标巧描范围50-600m/z;现憶的精确质量 可达O.OOOlm/z;质量精度可控制在20ppmW内；扫描速度在50-600m/z范围为每秒5次。
[0020] 7、本发明提供的一种应用气相色谱四级杆飞行时间质谱(GC-Q-T0F/MS)快速筛查 浆果和其他小型水果中708种农药残留的高分辨质谱侦测技术在7个农药残留分析实验室 得到了推广和应用，经过对30多个省市多个市售浆果和其他小型水果样品的侦测验证，取 得了重要的残留侦测数据。
[0021] 8、同时侦测的708种农药中，侦测灵敏度一律低于标准10微克/千克，满足各国农 药残留ML水平筛查的要求。
[0022] 本发明的其它特征和优点将在随后的【具体实施方式】部分予W详细说明。
【附图说明】
[0023] 附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具 体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：
[0024] 图1是沈阳地区雜猴桃样品GC-Q-T0F/MS技术检出频次最高农药(威杀灵）结果示 例。
[0025] 图2是沈阳地区雜猴桃样品GC-Q-T0F/MS技术检出的频次最高农药(威杀灵）的质 谱信息与数据库进行比对的结果。
[0026] 图3是北京地区市售葡萄样品GC-Q-T0F/MS技术检出频次最高农药(戊挫醇）结果 示例。
[0027] 图4是北京地区市售葡萄样品GC-Q-T0F/MS技术检出的频次最高农药(戊挫醇）的 质谱信息与数据库进行比对的结果。
[0028] 图5是天津地区市售雜猴桃样品GC-Q-T0F/MS技术检出频次最高农药(威杀灵）结 果不例。
[0029] 图6是天津地区市售雜猴桃样品GC-Q-T0F/MS技术检出的频次最高农药(威杀灵） 的质谱信息与数据库进行比对的结果。
[0030] 图7是重庆地区市售草替样品GC-Q-T0F/MS技术检出频次最高农药（甲氯菊醋）结 果不例。
[0031] 图8是重庆地区市售草替样品GC-Q-T0F/MS技术检出的频次最高农药（甲氯菊醋） 的质谱信息与数据库进行比对的结果。
【具体实施 方式】
[0032] W下对本发明的【具体实施方式】进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体 实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
[0033] 本发明提供了一种GC-Q-T0F/MS检测浆果和其他小型水果中708种农药残留的侦 测方法，其特征在于:建立708种农药T0F/MS数据库，同时对浆果和其他小型水果中708种农 药进行定性侦测与确证;该方法包括W下步骤：
[0034] (1)将农药标准品分别配制成l-5mg/L的标准溶液，设定条件下经GC-QT0F/MS-级 模式全谱数据测定每种标准溶液的全谱数据，分别得到每种农药的化学分子式、保留时间、 碎片离子精确质量数、离子丰度比；
[0035] (2)将步骤(1)中获得的一级模式全谱数据，经核实后的碎片离子全扫描质谱图导 入PO)L软件中，并与对应的农药信息相关联，建成T0F/MS精确质量数据库，用于数据检索分 析；
[0036] (3)与步骤（1)相同的设定条件下浆果和其他小型水果的测定待测样品中农药的 全谱数据，得到其含有的农药的化学分子式、保留时间、碎片离子精确质量数、离子丰度比；
[0037] (4)对样品测定结果经精确质量数据库检索，对符合鉴定依据的检出农药进行准 确鉴定，从而获得浆果和其他小型水果中的农残种类。
[0038] 具体的，W稻丰散(Phenthoate)为例说明本发明的GC-QT0F/MS数据库通过如下的 方法进行建立：
[0039] 1)在数据采集界面，对稻丰散(Phenthoate)标准物（l-5mg/L)在指定色谱质谱条 件下经GC-QT0F/MS-级模式进行碎片离子全扫描质谱图采集。
[0040] 色谱条件为：色谱柱：VF-1701MS( 30m X 0.25mm X0.25um)(J&W Scientific， Folsom，CA);色谱柱升溫程序:30-50°C保持0.5-5min，然后W再W3-10°C/min升溫至200-280°(3，然后^20-50°(3/111111升溫至110-150°(3，再^3-10°(3/111111升溫至200-280°(3，随后^5-15°C/min 升溫至 250-320°C，保持 3-lOmin，再 W5-20°C/min 降溫至 200-290°C，保持 l-5min; 载气:氮气;纯度^ 99.999% ; 0.5-2mL/min;进样口溫度:230-320°C;进样量进样方式： 无分流进样，溶剂延迟2-lOmin。优选的，色谱条件：色谱柱：VF-1701MS( 30m X 0.25mm X 0.25um)(J&W Scientific,Folsom,CA);色谱柱升溫程序:40°C保持Imin，然后W30°C/min 升溫至130°C，再W5°C/min升溫至250°C，随后WlO°C/min升溫至300°C，保持5min，再WlO °C/min降溫至280°C，保持2min;载气：氮气，纯度> 99.999 % ;流速：1.2mL/min;进样口溫 度:290°C;进样量进样方式:无分流进样，溶剂延迟6min。
[0041] 质谱条件为：离子源:EI (电子轰击电离源）；离子源溫度:230-330°C，电子轰击源 能量:50-100eV;气相-质谱接口溫度:200-320°C;扫描方式：W每秒2-10张谱图的方式进 行T0F模式全扫描，质量数范围50-600amu。优选的，质谱条件：离子源：EI (电子轰击电离 源）；离子源溫度:280°C，电子轰击源能量:70eV;气相-质谱接口溫度:290°C;扫描方式：W 每秒5张谱图的方式进行T0F模式全扫描，质量数范围50~600amu.。
[0042] 所述的碎片离子全扫描质谱图采集为稻丰散(陆enthoate)标准物的质谱图信息， 包括化合物化学分子式、保留时间、碎片离子精确质量数、离子丰度比。
[0043] 2)在Agilent MassHunter定性软件（仪器自带）中调用目标农药(Phenthoate)采 集文件，并确定目标农药色谱峰。
[0044] 3)打开目标农药质谱图扣除背景后，使用NIST11低分辨谱库(仪器自带)进行捜索 W得到化合物的信息，并核查谱库检索到的化合物是否与实际相符。
[004引4)核查质谱图，目标化合物质谱图会显示经NIST11低分辨谱库匹配上的碎片离子 分子式和精确质量数，通过巧dit Peak Annotion"窗口对离子信息进行必要的修改，比如 精确质量数偏差过大的离子，可能意味着软件自动计算的化rmula结构有误，此时可手动在 "Formula" -列中输入正确的信息，或者将"Iron Type"更改为化known。
[0046] 5)经核实后的碎片离子全扫描质谱图导入PCDL软件(仪器自带）中，并与稻丰散信 息相关联，建成T0F/MS数据库。数据库中708种农药的质谱图信息，详见附表1。
[0047] 优选的，所述农药为表1中所示的708种农药。形成运些农药的方法可W按照如上 形成稻丰散(Phenthoate)的T0F/MS数据库的方式进行。
[0048] 根据本发明，将所获得的标准物的质谱图信息通过PO)L软件与相应的农药相互关 联的方法可W按照PCDL软件说明书进行，本发明在此不再寶述。
[0049] 根据本发明，优选的，所述浆果和其他小型水果选自由葡萄、草替、构杞、桑甚、雜 猴桃、黑替、提子、蓝替和西番莲所组成的组中。
[0050] 表 1
[0051]
[0052]
[0080]根据本发明，与建立相同的设定条件下浆果和其他小型水果的测定待测样品中农 药的全谱数据，得到其含有的农药的化学分子式、保留时间、碎片离子精确质量数、离子丰 度比；调用已建立的T0F/MS数据库，依据T0F/MS数据库对目标化合物定性检索，检索参数保 留时间偏差限定为±〇.15min，精确质量偏差限定为±20ppm，软件会依据每种化合物保留 时间、精确质量等要素的实测值与T0F/MS数据库中理论值的偏差自动给出每个检出离子的 检索匹配得分值。检出离子得分平均值即为该化合物综合得分，规定每个化合物得分值> 60且至少Ξ个离子检出，即为阳性检出，依据T0F/MS数据库定性侦测农产品中农药残留的 方法准确度，达到90 % W上。
[0081] 根据本发明，通过对浆果和其他小型水果进行前处理W获得浆果和其他小型水果 的测定待测样品，所述前处理方法优选包括W下程序：
[0082] 将浆果和其他小型水果样品经含有0.5-5体积％醋酸的乙腊溶液（简称0.5-5体 积％醋酸乙腊）匀浆提取，经脱水和离屯、、浓缩后，再经Carbon/N此柱净化，乙腊+甲苯洗脱 残留农药，经再浓缩、过滤后制成待测样液；
[0083] 其中，优选的，所述浆果和其他小型水果样品量为5-20g，所述0.5-5体积％的醋酸 乙腊的用量为30-50mL的用量优选为35-45ml;并将加入醋酸乙腊的果蔬样品置于离屯、管中 进行匀浆处理。所述匀浆提取条件优选为:转速12000-1500化pm，时间0.5-2min。
[0084] 其中，所述经脱水优选通过在醋酸乙腊提取液中加入0.5-5g的氯化钢，2-?的无 水硫酸儀，并振荡4-6min实现。然后将得到的脱水样品在4000-450化pm下离屯、1-lOmin，得 到上清液，并将得到的上清液10-30mL在20 -60°C的水浴中旋转蒸发浓缩至0.5-2mL。
[00化]其中，所述化rbon/NHs柱净化步骤优选如下：在化rbon/NH2柱中加入约l-3cm优选 2cm高无水硫酸钢。先用2-6mL优选4mL乙腊+甲苯(优选2.5-3.5:1，更优选为3:1，v/v)淋洗 SPE柱，并弃去流出液，当液面到达硫酸钢的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至净化柱上，下 接新鸡屯、瓶接收。再每次用2-6血优选2mL乙腊+甲苯(优选2.5-3.5:1，更优选为3:1，v/v)洗 涂样液瓶Ξ次，并将洗涂液移入Sro柱中。再用20-30mL优选25mL乙腊+甲苯(优选2.5-3.5: 1，更优选为3:1，v/v)洗脱农药，合并洗脱液于鸡屯、瓶中。
[0086] 其中，所述待测样液进一步优选通过如下方式进行制备，将如上获得的洗脱液在 30-50°C水浴中旋转浓缩至约0.5-2mL，并将浓缩液置于氮气下吹干，加入l-5mL的乙腊+0-5 %甲酸水(化(7-9 )，优选化8，v/v)混匀，经0.18-0.22皿优选0.2皿滤膜过滤后定容，得到 待测样液。
[0087] W下将详细描述本发明的【具体实施方式】。
[008引 实施例1
[0089] 本实施例用于说明本发明提供的GC-Q-T0F/MS筛查浆果和其他小型水果中708种 农残的侦测方法
[0090] (1)沈阳地区市售雜猴桃样品取可食部分切碎，混匀，密封，标明标记。.
[0091] (2)称取lOg如上的雜猴桃样品（精确至O.Olg)，于80ml离屯、管中，加入40血1 %醋 酸的乙腊溶液，用高速匀浆机1350化/min,匀浆提取Imin，加入Ig氯化钢，4g无水硫酸儀， 振荡5min，在4200;r/min下离屯、5min，取上清液20血，在40°C水浴中旋转蒸发浓缩至约ImL， 待净化。
[0092] (3)在化rbon/NHs柱中加入约2cm高无水硫酸钢。先用4mL乙腊+甲苯（3+1，v/v)淋 洗SPE柱，并弃去流出液，当液面到达硫酸钢的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至SPE柱中， 下接新鸡屯、瓶接收。再每次用2mL乙腊+甲苯(3+1，v/v)洗涂样液瓶Ξ次，并将洗涂液移入 SPE柱中。在柱上连接50mL胆液器，用25mL乙腊+甲苯(3+l，v/v)洗脱农药及相关化学品，合 并于鸡屯、瓶中，并在40°C水浴中旋转浓缩至约0.5mL。
[0093] (4)浓缩液置于氮气下吹干，加入2mL的乙腊+水(2+8，v/v)混匀，经0.2皿滤膜过滤 后定容，得到待测样品溶液。
[0094] (5)GC-Q-T0F/MS操作条件，分离并获得雜猴桃样品中各农药每个碎片离子的学分 子式、保留时间、碎片离子精确质量数、离子丰度比。
[009引 色谱条件：色谱柱：VF-1701MS(30mX0.25mmX0.2加 m)(J&W Scientific Jolsom， CA);色谱柱升溫程序:40°C保持Imin，然后W30°C/min升溫至130°C，再W5°C/min升溫至 250°C，随后 W 10°C/min 升溫至 300°C，保持 5min，再 W 10°C/min 降溫至 280°C，保持 2min;载 气:氮气，纯度^ 99.999 % ;流速：1.2mL/min;进样口溫度:290°C ;进样量进样方式:无 分流进样，溶剂延迟6min。
[0096] 质谱条件:质谱条件:离子源:EI (电子轰击电离源）；离子源溫度:280°C，电子轰击 源能量:70eV;气相-质谱接口溫度:290°C;扫描方式：W每秒5张谱图的方式进行T0F模式全 扫描，质量数范围50~600amu.。
[0097] (6)依据表1的数据库对步骤(4)中获得信息定性检索，检索参数保留时间偏差限 定为±0.5min，精确质量偏差限定为±10化pm，检出至少Ξ个碎片离子，且依据每种化合物 各要素的实测值与表1数据库中理论值的偏差，自动给出检索匹配得分值，检索匹配得分值 > 60的化合物，即确认检出该目标化合物。检测结果见表2。
[0098] 雜猴桃样品13个，检出5种农药残留，共计34频次。W检出频次较高的威杀灵为例： 如图1所示，雜猴桃中检测出7个碎片离子信息，用数据库检索，与威杀灵比对，7个碎片离子 匹配分数均在83分W上，保留时间偏差在0.03minW内（如图2所示），可W确认，雜猴桃中有 威杀灵检出。
[0099] 实施例2
[0100] 本实施例用于说明本发明提供的GC-Q-T0F/MS筛查浆果和其他小型水果中708种 农残的侦测方法
[0101] 按照实施例1中的方法对同批雜猴桃样品中的农残进行侦测，不同的是，前处理步 骤如下：
[0102] (1)雜猴桃样品取可食部分切碎，混匀，密封，标明标记。.
[0103] (2)准确称取10.OOg样品于离屯、管中，加入50mL水，振荡直至样品被水充分浸润。 冷冻lOmin后移取50mL乙腊至离屯、管中，然后将离屯、管置于满縱混合振荡仪上，W2000巧m 速率振荡Imin。将离屯、管置于-10°C条件下保持lOmin，然后向离屯、管中加入20g无水硫酸儀 和5g氯化钢，5g巧樣酸钢和2.5g巧樣酸二氨钢，立即于縱满混合振荡仪上，W2000巧m速率 振荡2min，然后W4000巧m速率离屯、lOmin，得到上清液。
[0104] (3)移取上清液1 .OmL于1.5mL离屯、管中，加入150mg无水硫酸儀及25mg的PSA吸附 剂，于縱满混合振荡仪上W2000巧m速率振荡2min，W6000巧m速率离屯、2min。吸取上清液经 0.22μπι有机相滤膜过滤，移取2(K)yL，加入1(Κ)化乙腊，用超纯水稀释至1.0血，得到待测样品 溶液。
[010引检测结果见表2。
[0106] 表2
[0107]
[0108] 由W上数据可W看出，采用本发明的方法，尤其是优选的方法能够更有效的检测 出农产品中农残的种类，并且还具有更低的检测限。
[0109] 实施例3
[0110] 本实施例用于说明本发明提供的GC-Q-T0F/MS筛查浆果和其他小型水果中708种 农残的侦测方法
[0111] 按照实施例1中的方法对浆果和其他小型水果中的农残进行侦测，不同的是，样品 为北京地区葡萄样品。
[0112] 采集北京地区市售葡萄样品19个，检出16种农药残留，共计49频次，设及样品12 个，具体结果见表3。
[0113] 表3
[0114]
[0116] W检出频次较高的戊挫醇为例，如图3所示，葡萄中检测出7个碎片离子信息，用数 据库检索，与戊挫醇比对，7个碎片离子分子量偏差分数均在96分W上，保留时间偏差在 0.007min W内，丰度最高的碎片离子质量偏差为5.46ppm(如图4所示），可W确认，葡萄中有 戊挫醇检出。
[0117] 实施例4
[0118] 本实施例用于说明本发明提供的GC-Q-TOF/MS筛查浆果和其他小型水果中708种 农残的侦测方法
[0119] 按照实施例1中的方法对浆果和其他小型水果中的农残进行侦测，不同的是，样品 为天津地区雜猴桃样品。
[0120] 采集天津地区市售雜猴桃样品19个，检出8种农药残留，共计11频次，设及样品7 个，具体结果见表4。
[01引]表4
[0122]
[0123] W检出频次较高的威杀灵为例:如图5所示，雜猴桃检测出7个碎片离子信息，用数 据库检索，与威杀灵比对，7个碎片离子匹配分数均在96分W上，保留时间偏差在0.01 min W内，丰度最高的碎片离子质量偏差为5.31ppm(如图6所示），可W确认，雜猴桃中有威杀灵 检出。
[0124] 实施例5
[0125] 本实施例用于说明本发明提供的GC-Q -T0F/MS筛查浆果和其他小型水果中708种 农残的侦测方法
[0126] 按照实施例1中的方法对浆果和其他小型水果中的农残进行侦测，不同的是，样品 为重庆地区草替样品。
[0127] 采集重庆地区市售草替样品5个，检出4种农药残留，共计7频次，设及样品5个，具 体结果见表5。
[012引 表5
[0129]
[0130] W检出频次较高的甲氯菊醋为例:如图7所示，草替中检测出6个碎片离子信息，用 数据库检索，与甲氯菊醋比对，6个碎片离子分子量偏差分数均在79分W上，保留时间偏差 为0.003min，丰度最高的碎片离子质量偏差为-l.OSppm(如图8所示），可W确认，草替中有 甲氯菊醋检出。
[0131] W上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中 的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可W对本发明的技术方案进行多种简单变型，运 些简单变型均属于本发明的保护范围。
[0132] 另外需要说明的是，在上述【具体实施方式】中所描述的各个具体技术特征，在不矛 盾的情况下，可W通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可 能的组合方式不再另行说明。
[0133] 此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可W进行任意组合，只要其不违背本 发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。
【主权项】
1. 一种GC-Q-TOF/MS检测浆果和其他小型水果中708种农药残留的侦测方法，其特征在 于:建立708种农药T0F/MS数据库，同时对浆果和其他小型水果中708种农药进行定性侦测 与确证;该方法包括以下步骤： (1) 将农药标准品分别配制成l-5mg//L的标准溶液，设定条件下经GC-QT0F/MS-级模式 全谱数据测定每种标准溶液的全谱数据，分别得到每种农药的化学分子式、保留时间、碎片 离子精确质量数、离子丰度比； (2) 将步骤（1)中获得的一级模式全谱数据，经核实后的碎片离子全扫描质谱图导入 PCDL软件中，并与对应的农药信息相关联，建成T0F/MS精确质量数据库，用于数据检索分 析； (3) 与步骤（1)相同的设定条件下浆果和其他小型水果的测定待测样品中农药的全谱 数据，得到其含有的农药的化学分子式、保留时间、碎片离子精确质量数、离子丰度比； (4) 对样品测定结果经精确质量数据库检索，对符合鉴定依据的检出农药进行准确鉴 定，从而获得浆果和其他小型水果中的农残种类。2. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述农药为表1中所示的708种农药。3. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述浆果和其他小型水果选自由葡萄、草莓、枸 杞、桑葚、猕猴桃、黑莓、提子、蓝莓和西番莲所组成的组中。4. 根据权利要求1所述的方法，其中，测定每种标准溶液中农药的全谱数据的条件包 括： (1) 色谱条件:色谱柱:VF-1701MS;色谱柱升温程序:30-50°C保持0.5-5min，然后以20-50°C/min升温至 110-150°C，再以 3-10°C/min升温至 200-280°C，随后以 5-15°C/min升温至 250-320°C，保持 3-10min，再以 5-20°C/min降温至 200-290°C，保持l_5min;载气：氦气；流 速:0.5-2mL/min;进样口温度:230-320°C:无分流进样，溶剂延迟2-10min; (2) 质谱条件：离子源:EI;离子源温度：230-330°C，电子轰击源能量:50-lOOeV;气相-质谱接口温度：200-320°C;扫描方式：以每秒2-10张谱图的方式进行T0F模式全扫描，质量 数范围 50_600amu。5. 根据权利要求1所述方法，其中，T0F/MS精确质量数据库能够将从待测样品中测定得 到的碎片离子的保留时间、精确质量数、离子丰度比的实测值，与T0F/MS精确质量数据库中 碎片离子的对应要素理论值检索比对，给出每个碎片离子的得分，进而给出平均分即目标 化合物的匹配度得分值;其中，碎片离子的保留时间偏差设定在±〇.5min，精确质量数偏差 设定为±100ppm。6. 根据权利要求5所述的方法，其中：通过如下方法对符合鉴定依据的检出农药进行准 确鉴定： 通过对特征离子检出情况及符合度，给出的得分值，对农药进行定性识别，其方法程序 为:对于样品中目标化合物的侦测，是将飞行时间质谱测得的化合物的保留时间、丰度最高 的7个碎片离子精确质量数、碎片离子丰度比的结果，与T0F/MS数据库检索比对，结果为检 出至少三个碎片离子，且综合得分大于60的农药被确定为检出农药。7. 根据权利要求1所述的方法，通过对浆果和其他小型水果进行前处理以获得浆果和 其他小型水果的测定待测样品，所述前处理方法包括以下程序： 样品制备：浆果和其他小型水果样品经0.5-5体积％醋酸乙腈匀浆提取，经脱水和离 心、浓缩后，再经Carbon/NH2柱净化，乙腈+甲苯洗脱残留农药，经再浓缩、过滤后制成待测 样液a。8.根据权利要求7所述的方法，其中:所述浆果和其他小型水果样品量为5-20g; 优选的，所述〇. 5-5体积％的醋酸乙腈的用量为30-50mL; 优选的，所述匀浆提取条件为:转速12000_15000r/min，时间为0.5-5min; 优选的，所述经脱水是指在〇. 5-5体积％醋酸乙腈提取液中加入0.5-5g氯化钠，2-8g无 水硫酸镁，振荡l-l〇min; 优选的，所述离心是指在3000-5000r/min下离心l-10min; 优选的，所述浓缩是指取离心上清液10_30mL，在20-60°C水浴中旋转蒸发浓缩至约 0·5_2mL〇 9 ·根据权利要求8所述的方法，其中：所述Carbon/Mfe柱净化步骤如下：在Carbon/Mfe柱 中加入约l-3cm高无水硫酸钠，先用2-6mL-定比例的乙腈和甲苯混合溶液淋洗SPE柱，并弃 去流出液，当液面到达硫酸钠的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至净化柱上，下接容器接 收;再每次用2-6mL乙腈和甲苯混合溶液洗涤样液瓶三次，并将洗涤液移入SPE柱中。再用优 选20-30ml的一定体积乙腈和甲苯混合溶液洗脱农药，合并洗脱液于容器中； 优选的，所述一定比例的乙腈和甲苯混合溶液，乙腈：甲苯体积比为2.5-3.5:1。10.根据权利要求8所述的方法，其中：所述经再浓缩、过滤后制成待测样液a是指权利 要求9所得到的洗脱液，在30-50°C水浴中旋转浓缩至约0.5-2mL，并将浓缩液置于氮气下吹 干，加入l-5mL的一定比例的乙腈和0-5体积％甲酸水混合溶液混匀，经0.18-0.22μπι滤膜过 滤后定容，得到待测样品溶液a。 优选的，所述一定比例的乙腈和0-5体积％甲酸水混合溶液，乙腈:0.1-5体积％甲酸水 2:7-9〇
【专利摘要】本发明涉及农残检测领域，提供了筛查浆果和其他小型水果中708种农残的侦测方法，在GC-Q-TOF/MS一级模式下采集农药标准物指定条件下的碎片离子全扫描质谱图，得到农药的化学分子式、保留时间、碎片离子精确质量数、离子丰度比，并导入PCDL软件，与对应的农药信息关联，形成数据库，在相同的设定条件下测定待测样品的全谱数据，得到全谱数据；对样品测定结果经精确质量数据库检索，对符合鉴定依据的检出农药准确鉴定，获得浆果和其他小型水果中的农残种类。本发明运用GC-Q-TOF/MS高分辨质谱建立的检测方法对浆果和其他小型水果中农药残留进行检测，优选结合特定的前处理，具有快速、高通量、高精度和高可靠性检测的特点。无需标准物作对照，同时对浆果和其他小型水果中708种农药进行定性侦测与确证。
【IPC分类】G01N30/88, G01N30/06
【公开号】CN105486795
【申请号】CN201511018511
【发明人】庞国芳, 范春林, 胡雪艳, 常巧英
【申请人】中国检验检疫科学研究院
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年12月28日
【技术领域】
[0001] 本发明设及农残检测领域，特别设及一种应用GC-Q-T0F/MS筛查浆果和其他小型 水果中708种农残的侦测方法。
【背景技术】
[0002] 早在1976年世界卫生组织(WHO)、粮农组织(FA0)和联合国环境规划署(UNEP)共同 建立了全球环境检测系统/食品项目（Global Environment Monitoring System,GEMS/ 化od)，旨在掌握会员国食品污染状况，了解食品污染物摄入量，保护人体健康，促进贸易发 展。现在，世界各国都把食品安全提升到国家安全的战略地位。农药残留限量是食品安全标 准之一，也是国际贸易准入口槛。同时，对农药残留的要求呈现出品种越来越多，限量越来 越严格的发展趋势，也就是国际贸易设立的农药残留限量口槛越来越高。现在欧盟已制定 了839种农药的162248项Μ化标准，美国制定了351种农药的39147项Μ化标准，日本制定了 579种农药的51600多项MRL标准，我国2014年发布了381种农药的3650项MRL标准。目前，国 际上普遍采用的一律标准限量为l〇yg/kg。因此，食品安全和国际贸易都呼唤高通量快速农 药残留检测技术，运无疑也给广大农药残留分析工作者提供了机遇和挑战。在目前的众多 农药残留分析技术中，色谱质谱联用技术是实现高通量多残留快速检测的最佳分析手段。
[0003] 浆果(Berry)是由子房或联合其他花器发育而成柔软多汁的肉质果，芳香味美，极 富营养价值和药用价值。据中国统计年鉴数据显示，2011年我国水果总量为22768.18万t， 其中浆果类约占水果总量的19.3%。随着人们生活水平的提高，对优质、健康的浆果和其他 小型水果的需求逐渐旺盛，浆果类食品逐渐展现出
[0004] 目前，农药残留分析多W气相色谱、液相色谱、气相色谱-质谱和液相色谱-质谱联 用技术为主。运些检测技术都首先需要农药标准品对照进行定性。例如，对100种农药的检 测就需要准备相应的100种农药标准品对照，而运100种之外的农药都会被漏检。在农兽药 残留实验室的实际工作中，绝大多数实验室都不会储备数百种农药标准品，其原因是农药 标准品不仅价格昂贵，而且有效期只有2-3年，需要重复投资。一般实验室常备农药标准品 只有几十种，其日常监测的农药品种也就只限于运几十种，由此造成食品安全监测漏桐。
【发明内容】
[000引为了克服上述缺陷，本发明人团队经过多年潜屯、研究，研发了 708种农药的精确质 量数据库W及一种果蔬中708种农药残留的GC-Q-T0F/MS侦测技术，实现了不需标准品对 照、即可对浆果和其他小型水果中708种农药残留进行快速侦测检测，满足了当前农产品中 农药残留高通量快速检测的急需。
[0006] 一方面，本发明提供了一种GC-Q-T0F/MS检测浆果和其他小型水果中708种农药残 留的侦测方法，其特征在于:建立708种农药T0F/MS数据库，同时对浆果和其他小型水果中 708种农药进行定性侦测与确证;该方法包括W下步骤：
[0007] (1)将农药标准品分别配制成l-5mg/L的标准溶液，设定条件下经GC-QTOF/MS-级 模式全谱数据测定每种标准溶液的全谱数据，分别得到每种农药的化学分子式、保留时间、 碎片离子精确质量数、离子丰度比；
[0008] (2)将步骤(1)中获得的一级模式全谱数据，经核实后的碎片离子全扫描质谱图导 入PO)L软件中，并与对应的农药信息相关联，建成T0F/MS精确质量数据库，用于数据检索分 析；
[0009] (3)与步骤（1)相同的设定条件下浆果和其他小型水果的测定待测样品中农药的 全谱数据，得到其含有的农药的化学分子式、保留时间、碎片离子精确质量数、离子丰度比；
[0010] (4)对样品测定结果经精确质量数据库检索，对符合鉴定依据的检出农药进行准 确鉴定，从而获得浆果和其他小型水果中的农残种类。
[0011] 优选的，通过对浆果和其他小型水果进行前处理W获得浆果和其他小型水果的测 定待测样品，所述前处理方法包括W下程序：
[0012] 样品制备:浆果和其他小型水果样品经0.5-5体积％醋酸乙腊匀浆提取，经脱水和 离屯、、浓缩后，再经Carbon/N此柱净化，乙腊+甲苯洗脱残留农药，经再浓缩、过滤后制成待 测样液曰。
[0013] 本发明所具有的有益效果：
[0014] 1、本发明W高分辨碎片离子精确质量数、保留时间、离子丰度比等化合物信息为 识别标准，建立的708种农药侦测和确证技术方法，彻底改变了原有W化合物标准物为参比 的定性模式，是一种不需要标准物对照，快速、高通量、准确可靠的农药残留检测新技术。
[0015] 2、本发明在不需标准物对照的前提下，实现了 708种农药残留的定性侦测和确证， 可W大大节省购买标准物的成本，也更加环保、安全。
[0016] 3、本发明可在1小时内完成708种农药侦测、定性与确证，与传统检ii方法相比较， 可W提高工作效率数百倍。
[0017] 4、本发明能够做到对浆果和其他小型水果样品中708种农药残留一次性提取净 化，一次进样检测，与传统检测方法相比较，可W节省检测成本、提高工作效率数百倍。
[0018] 5、本发明可W测试的浆果和其他小型水果样品中农药包括W下物质中的一类或 几类:有机憐类农药，氨基甲酸醋类农药，苯并咪挫类农药，横酷脈类农药，烟碱类农药，除 虫菊醋类农药及其他类型的农药及代谢物。
[0019] 6、本发明建立的GC-QT0F/MS侦现版术指标巧描范围50-600m/z;现憶的精确质量 可达O.OOOlm/z;质量精度可控制在20ppmW内；扫描速度在50-600m/z范围为每秒5次。
[0020] 7、本发明提供的一种应用气相色谱四级杆飞行时间质谱(GC-Q-T0F/MS)快速筛查 浆果和其他小型水果中708种农药残留的高分辨质谱侦测技术在7个农药残留分析实验室 得到了推广和应用，经过对30多个省市多个市售浆果和其他小型水果样品的侦测验证，取 得了重要的残留侦测数据。
[0021] 8、同时侦测的708种农药中，侦测灵敏度一律低于标准10微克/千克，满足各国农 药残留ML水平筛查的要求。
[0022] 本发明的其它特征和优点将在随后的【具体实施方式】部分予W详细说明。
【附图说明】
[0023] 附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具 体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：
[0024] 图1是沈阳地区雜猴桃样品GC-Q-T0F/MS技术检出频次最高农药(威杀灵）结果示 例。
[0025] 图2是沈阳地区雜猴桃样品GC-Q-T0F/MS技术检出的频次最高农药(威杀灵）的质 谱信息与数据库进行比对的结果。
[0026] 图3是北京地区市售葡萄样品GC-Q-T0F/MS技术检出频次最高农药(戊挫醇）结果 示例。
[0027] 图4是北京地区市售葡萄样品GC-Q-T0F/MS技术检出的频次最高农药(戊挫醇）的 质谱信息与数据库进行比对的结果。
[0028] 图5是天津地区市售雜猴桃样品GC-Q-T0F/MS技术检出频次最高农药(威杀灵）结 果不例。
[0029] 图6是天津地区市售雜猴桃样品GC-Q-T0F/MS技术检出的频次最高农药(威杀灵） 的质谱信息与数据库进行比对的结果。
[0030] 图7是重庆地区市售草替样品GC-Q-T0F/MS技术检出频次最高农药（甲氯菊醋）结 果不例。
[0031] 图8是重庆地区市售草替样品GC-Q-T0F/MS技术检出的频次最高农药（甲氯菊醋） 的质谱信息与数据库进行比对的结果。
【具体实施 方式】
[0032] W下对本发明的【具体实施方式】进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体 实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
[0033] 本发明提供了一种GC-Q-T0F/MS检测浆果和其他小型水果中708种农药残留的侦 测方法，其特征在于:建立708种农药T0F/MS数据库，同时对浆果和其他小型水果中708种农 药进行定性侦测与确证;该方法包括W下步骤：
[0034] (1)将农药标准品分别配制成l-5mg/L的标准溶液，设定条件下经GC-QT0F/MS-级 模式全谱数据测定每种标准溶液的全谱数据，分别得到每种农药的化学分子式、保留时间、 碎片离子精确质量数、离子丰度比；
[0035] (2)将步骤(1)中获得的一级模式全谱数据，经核实后的碎片离子全扫描质谱图导 入PO)L软件中，并与对应的农药信息相关联，建成T0F/MS精确质量数据库，用于数据检索分 析；
[0036] (3)与步骤（1)相同的设定条件下浆果和其他小型水果的测定待测样品中农药的 全谱数据，得到其含有的农药的化学分子式、保留时间、碎片离子精确质量数、离子丰度比；
[0037] (4)对样品测定结果经精确质量数据库检索，对符合鉴定依据的检出农药进行准 确鉴定，从而获得浆果和其他小型水果中的农残种类。
[0038] 具体的，W稻丰散(Phenthoate)为例说明本发明的GC-QT0F/MS数据库通过如下的 方法进行建立：
[0039] 1)在数据采集界面，对稻丰散(Phenthoate)标准物（l-5mg/L)在指定色谱质谱条 件下经GC-QT0F/MS-级模式进行碎片离子全扫描质谱图采集。
[0040] 色谱条件为：色谱柱：VF-1701MS( 30m X 0.25mm X0.25um)(J&W Scientific， Folsom，CA);色谱柱升溫程序:30-50°C保持0.5-5min，然后W再W3-10°C/min升溫至200-280°(3，然后^20-50°(3/111111升溫至110-150°(3，再^3-10°(3/111111升溫至200-280°(3，随后^5-15°C/min 升溫至 250-320°C，保持 3-lOmin，再 W5-20°C/min 降溫至 200-290°C，保持 l-5min; 载气:氮气;纯度^ 99.999% ; 0.5-2mL/min;进样口溫度:230-320°C;进样量进样方式： 无分流进样，溶剂延迟2-lOmin。优选的，色谱条件：色谱柱：VF-1701MS( 30m X 0.25mm X 0.25um)(J&W Scientific,Folsom,CA);色谱柱升溫程序:40°C保持Imin，然后W30°C/min 升溫至130°C，再W5°C/min升溫至250°C，随后WlO°C/min升溫至300°C，保持5min，再WlO °C/min降溫至280°C，保持2min;载气：氮气，纯度> 99.999 % ;流速：1.2mL/min;进样口溫 度:290°C;进样量进样方式:无分流进样，溶剂延迟6min。
[0041] 质谱条件为：离子源:EI (电子轰击电离源）；离子源溫度:230-330°C，电子轰击源 能量:50-100eV;气相-质谱接口溫度:200-320°C;扫描方式：W每秒2-10张谱图的方式进 行T0F模式全扫描，质量数范围50-600amu。优选的，质谱条件：离子源：EI (电子轰击电离 源）；离子源溫度:280°C，电子轰击源能量:70eV;气相-质谱接口溫度:290°C;扫描方式：W 每秒5张谱图的方式进行T0F模式全扫描，质量数范围50~600amu.。
[0042] 所述的碎片离子全扫描质谱图采集为稻丰散(陆enthoate)标准物的质谱图信息， 包括化合物化学分子式、保留时间、碎片离子精确质量数、离子丰度比。
[0043] 2)在Agilent MassHunter定性软件（仪器自带）中调用目标农药(Phenthoate)采 集文件，并确定目标农药色谱峰。
[0044] 3)打开目标农药质谱图扣除背景后，使用NIST11低分辨谱库(仪器自带)进行捜索 W得到化合物的信息，并核查谱库检索到的化合物是否与实际相符。
[004引4)核查质谱图，目标化合物质谱图会显示经NIST11低分辨谱库匹配上的碎片离子 分子式和精确质量数，通过巧dit Peak Annotion"窗口对离子信息进行必要的修改，比如 精确质量数偏差过大的离子，可能意味着软件自动计算的化rmula结构有误，此时可手动在 "Formula" -列中输入正确的信息，或者将"Iron Type"更改为化known。
[0046] 5)经核实后的碎片离子全扫描质谱图导入PCDL软件(仪器自带）中，并与稻丰散信 息相关联，建成T0F/MS数据库。数据库中708种农药的质谱图信息，详见附表1。
[0047] 优选的，所述农药为表1中所示的708种农药。形成运些农药的方法可W按照如上 形成稻丰散(Phenthoate)的T0F/MS数据库的方式进行。
[0048] 根据本发明，将所获得的标准物的质谱图信息通过PO)L软件与相应的农药相互关 联的方法可W按照PCDL软件说明书进行，本发明在此不再寶述。
[0049] 根据本发明，优选的，所述浆果和其他小型水果选自由葡萄、草替、构杞、桑甚、雜 猴桃、黑替、提子、蓝替和西番莲所组成的组中。
[0050] 表 1
[0051]
[0052]
[0080]根据本发明，与建立相同的设定条件下浆果和其他小型水果的测定待测样品中农 药的全谱数据，得到其含有的农药的化学分子式、保留时间、碎片离子精确质量数、离子丰 度比；调用已建立的T0F/MS数据库，依据T0F/MS数据库对目标化合物定性检索，检索参数保 留时间偏差限定为±〇.15min，精确质量偏差限定为±20ppm，软件会依据每种化合物保留 时间、精确质量等要素的实测值与T0F/MS数据库中理论值的偏差自动给出每个检出离子的 检索匹配得分值。检出离子得分平均值即为该化合物综合得分，规定每个化合物得分值> 60且至少Ξ个离子检出，即为阳性检出，依据T0F/MS数据库定性侦测农产品中农药残留的 方法准确度，达到90 % W上。
[0081] 根据本发明，通过对浆果和其他小型水果进行前处理W获得浆果和其他小型水果 的测定待测样品，所述前处理方法优选包括W下程序：
[0082] 将浆果和其他小型水果样品经含有0.5-5体积％醋酸的乙腊溶液（简称0.5-5体 积％醋酸乙腊）匀浆提取，经脱水和离屯、、浓缩后，再经Carbon/N此柱净化，乙腊+甲苯洗脱 残留农药，经再浓缩、过滤后制成待测样液；
[0083] 其中，优选的，所述浆果和其他小型水果样品量为5-20g，所述0.5-5体积％的醋酸 乙腊的用量为30-50mL的用量优选为35-45ml;并将加入醋酸乙腊的果蔬样品置于离屯、管中 进行匀浆处理。所述匀浆提取条件优选为:转速12000-1500化pm，时间0.5-2min。
[0084] 其中，所述经脱水优选通过在醋酸乙腊提取液中加入0.5-5g的氯化钢，2-?的无 水硫酸儀，并振荡4-6min实现。然后将得到的脱水样品在4000-450化pm下离屯、1-lOmin，得 到上清液，并将得到的上清液10-30mL在20 -60°C的水浴中旋转蒸发浓缩至0.5-2mL。
[00化]其中，所述化rbon/NHs柱净化步骤优选如下：在化rbon/NH2柱中加入约l-3cm优选 2cm高无水硫酸钢。先用2-6mL优选4mL乙腊+甲苯(优选2.5-3.5:1，更优选为3:1，v/v)淋洗 SPE柱，并弃去流出液，当液面到达硫酸钢的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至净化柱上，下 接新鸡屯、瓶接收。再每次用2-6血优选2mL乙腊+甲苯(优选2.5-3.5:1，更优选为3:1，v/v)洗 涂样液瓶Ξ次，并将洗涂液移入Sro柱中。再用20-30mL优选25mL乙腊+甲苯(优选2.5-3.5: 1，更优选为3:1，v/v)洗脱农药，合并洗脱液于鸡屯、瓶中。
[0086] 其中，所述待测样液进一步优选通过如下方式进行制备，将如上获得的洗脱液在 30-50°C水浴中旋转浓缩至约0.5-2mL，并将浓缩液置于氮气下吹干，加入l-5mL的乙腊+0-5 %甲酸水(化(7-9 )，优选化8，v/v)混匀，经0.18-0.22皿优选0.2皿滤膜过滤后定容，得到 待测样液。
[0087] W下将详细描述本发明的【具体实施方式】。
[008引 实施例1
[0089] 本实施例用于说明本发明提供的GC-Q-T0F/MS筛查浆果和其他小型水果中708种 农残的侦测方法
[0090] (1)沈阳地区市售雜猴桃样品取可食部分切碎，混匀，密封，标明标记。.
[0091] (2)称取lOg如上的雜猴桃样品（精确至O.Olg)，于80ml离屯、管中，加入40血1 %醋 酸的乙腊溶液，用高速匀浆机1350化/min,匀浆提取Imin，加入Ig氯化钢，4g无水硫酸儀， 振荡5min，在4200;r/min下离屯、5min，取上清液20血，在40°C水浴中旋转蒸发浓缩至约ImL， 待净化。
[0092] (3)在化rbon/NHs柱中加入约2cm高无水硫酸钢。先用4mL乙腊+甲苯（3+1，v/v)淋 洗SPE柱，并弃去流出液，当液面到达硫酸钢的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至SPE柱中， 下接新鸡屯、瓶接收。再每次用2mL乙腊+甲苯(3+1，v/v)洗涂样液瓶Ξ次，并将洗涂液移入 SPE柱中。在柱上连接50mL胆液器，用25mL乙腊+甲苯(3+l，v/v)洗脱农药及相关化学品，合 并于鸡屯、瓶中，并在40°C水浴中旋转浓缩至约0.5mL。
[0093] (4)浓缩液置于氮气下吹干，加入2mL的乙腊+水(2+8，v/v)混匀，经0.2皿滤膜过滤 后定容，得到待测样品溶液。
[0094] (5)GC-Q-T0F/MS操作条件，分离并获得雜猴桃样品中各农药每个碎片离子的学分 子式、保留时间、碎片离子精确质量数、离子丰度比。
[009引 色谱条件：色谱柱：VF-1701MS(30mX0.25mmX0.2加 m)(J&W Scientific Jolsom， CA);色谱柱升溫程序:40°C保持Imin，然后W30°C/min升溫至130°C，再W5°C/min升溫至 250°C，随后 W 10°C/min 升溫至 300°C，保持 5min，再 W 10°C/min 降溫至 280°C，保持 2min;载 气:氮气，纯度^ 99.999 % ;流速：1.2mL/min;进样口溫度:290°C ;进样量进样方式:无 分流进样，溶剂延迟6min。
[0096] 质谱条件:质谱条件:离子源:EI (电子轰击电离源）；离子源溫度:280°C，电子轰击 源能量:70eV;气相-质谱接口溫度:290°C;扫描方式：W每秒5张谱图的方式进行T0F模式全 扫描，质量数范围50~600amu.。
[0097] (6)依据表1的数据库对步骤(4)中获得信息定性检索，检索参数保留时间偏差限 定为±0.5min，精确质量偏差限定为±10化pm，检出至少Ξ个碎片离子，且依据每种化合物 各要素的实测值与表1数据库中理论值的偏差，自动给出检索匹配得分值，检索匹配得分值 > 60的化合物，即确认检出该目标化合物。检测结果见表2。
[0098] 雜猴桃样品13个，检出5种农药残留，共计34频次。W检出频次较高的威杀灵为例： 如图1所示，雜猴桃中检测出7个碎片离子信息，用数据库检索，与威杀灵比对，7个碎片离子 匹配分数均在83分W上，保留时间偏差在0.03minW内（如图2所示），可W确认，雜猴桃中有 威杀灵检出。
[0099] 实施例2
[0100] 本实施例用于说明本发明提供的GC-Q-T0F/MS筛查浆果和其他小型水果中708种 农残的侦测方法
[0101] 按照实施例1中的方法对同批雜猴桃样品中的农残进行侦测，不同的是，前处理步 骤如下：
[0102] (1)雜猴桃样品取可食部分切碎，混匀，密封，标明标记。.
[0103] (2)准确称取10.OOg样品于离屯、管中，加入50mL水，振荡直至样品被水充分浸润。 冷冻lOmin后移取50mL乙腊至离屯、管中，然后将离屯、管置于满縱混合振荡仪上，W2000巧m 速率振荡Imin。将离屯、管置于-10°C条件下保持lOmin，然后向离屯、管中加入20g无水硫酸儀 和5g氯化钢，5g巧樣酸钢和2.5g巧樣酸二氨钢，立即于縱满混合振荡仪上，W2000巧m速率 振荡2min，然后W4000巧m速率离屯、lOmin，得到上清液。
[0104] (3)移取上清液1 .OmL于1.5mL离屯、管中，加入150mg无水硫酸儀及25mg的PSA吸附 剂，于縱满混合振荡仪上W2000巧m速率振荡2min，W6000巧m速率离屯、2min。吸取上清液经 0.22μπι有机相滤膜过滤，移取2(K)yL，加入1(Κ)化乙腊，用超纯水稀释至1.0血，得到待测样品 溶液。
[010引检测结果见表2。
[0106] 表2
[0107]
[0108] 由W上数据可W看出，采用本发明的方法，尤其是优选的方法能够更有效的检测 出农产品中农残的种类，并且还具有更低的检测限。
[0109] 实施例3
[0110] 本实施例用于说明本发明提供的GC-Q-T0F/MS筛查浆果和其他小型水果中708种 农残的侦测方法
[0111] 按照实施例1中的方法对浆果和其他小型水果中的农残进行侦测，不同的是，样品 为北京地区葡萄样品。
[0112] 采集北京地区市售葡萄样品19个，检出16种农药残留，共计49频次，设及样品12 个，具体结果见表3。
[0113] 表3
[0114]
[0116] W检出频次较高的戊挫醇为例，如图3所示，葡萄中检测出7个碎片离子信息，用数 据库检索，与戊挫醇比对，7个碎片离子分子量偏差分数均在96分W上，保留时间偏差在 0.007min W内，丰度最高的碎片离子质量偏差为5.46ppm(如图4所示），可W确认，葡萄中有 戊挫醇检出。
[0117] 实施例4
[0118] 本实施例用于说明本发明提供的GC-Q-TOF/MS筛查浆果和其他小型水果中708种 农残的侦测方法
[0119] 按照实施例1中的方法对浆果和其他小型水果中的农残进行侦测，不同的是，样品 为天津地区雜猴桃样品。
[0120] 采集天津地区市售雜猴桃样品19个，检出8种农药残留，共计11频次，设及样品7 个，具体结果见表4。
[01引]表4
[0122]
[0123] W检出频次较高的威杀灵为例:如图5所示，雜猴桃检测出7个碎片离子信息，用数 据库检索，与威杀灵比对，7个碎片离子匹配分数均在96分W上，保留时间偏差在0.01 min W内，丰度最高的碎片离子质量偏差为5.31ppm(如图6所示），可W确认，雜猴桃中有威杀灵 检出。
[0124] 实施例5
[0125] 本实施例用于说明本发明提供的GC-Q -T0F/MS筛查浆果和其他小型水果中708种 农残的侦测方法
[0126] 按照实施例1中的方法对浆果和其他小型水果中的农残进行侦测，不同的是，样品 为重庆地区草替样品。
[0127] 采集重庆地区市售草替样品5个，检出4种农药残留，共计7频次，设及样品5个，具 体结果见表5。
[012引 表5
[0129]
[0130] W检出频次较高的甲氯菊醋为例:如图7所示，草替中检测出6个碎片离子信息，用 数据库检索，与甲氯菊醋比对，6个碎片离子分子量偏差分数均在79分W上，保留时间偏差 为0.003min，丰度最高的碎片离子质量偏差为-l.OSppm(如图8所示），可W确认，草替中有 甲氯菊醋检出。
[0131] W上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中 的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可W对本发明的技术方案进行多种简单变型，运 些简单变型均属于本发明的保护范围。
[0132] 另外需要说明的是，在上述【具体实施方式】中所描述的各个具体技术特征，在不矛 盾的情况下，可W通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可 能的组合方式不再另行说明。
[0133] 此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可W进行任意组合，只要其不违背本 发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。
【主权项】
1. 一种GC-Q-TOF/MS检测浆果和其他小型水果中708种农药残留的侦测方法，其特征在 于:建立708种农药T0F/MS数据库，同时对浆果和其他小型水果中708种农药进行定性侦测 与确证;该方法包括以下步骤： (1) 将农药标准品分别配制成l-5mg//L的标准溶液，设定条件下经GC-QT0F/MS-级模式 全谱数据测定每种标准溶液的全谱数据，分别得到每种农药的化学分子式、保留时间、碎片 离子精确质量数、离子丰度比； (2) 将步骤（1)中获得的一级模式全谱数据，经核实后的碎片离子全扫描质谱图导入 PCDL软件中，并与对应的农药信息相关联，建成T0F/MS精确质量数据库，用于数据检索分 析； (3) 与步骤（1)相同的设定条件下浆果和其他小型水果的测定待测样品中农药的全谱 数据，得到其含有的农药的化学分子式、保留时间、碎片离子精确质量数、离子丰度比； (4) 对样品测定结果经精确质量数据库检索，对符合鉴定依据的检出农药进行准确鉴 定，从而获得浆果和其他小型水果中的农残种类。2. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述农药为表1中所示的708种农药。3. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述浆果和其他小型水果选自由葡萄、草莓、枸 杞、桑葚、猕猴桃、黑莓、提子、蓝莓和西番莲所组成的组中。4. 根据权利要求1所述的方法，其中，测定每种标准溶液中农药的全谱数据的条件包 括： (1) 色谱条件:色谱柱:VF-1701MS;色谱柱升温程序:30-50°C保持0.5-5min，然后以20-50°C/min升温至 110-150°C，再以 3-10°C/min升温至 200-280°C，随后以 5-15°C/min升温至 250-320°C，保持 3-10min，再以 5-20°C/min降温至 200-290°C，保持l_5min;载气：氦气；流 速:0.5-2mL/min;进样口温度:230-320°C:无分流进样，溶剂延迟2-10min; (2) 质谱条件：离子源:EI;离子源温度：230-330°C，电子轰击源能量:50-lOOeV;气相-质谱接口温度：200-320°C;扫描方式：以每秒2-10张谱图的方式进行T0F模式全扫描，质量 数范围 50_600amu。5. 根据权利要求1所述方法，其中，T0F/MS精确质量数据库能够将从待测样品中测定得 到的碎片离子的保留时间、精确质量数、离子丰度比的实测值，与T0F/MS精确质量数据库中 碎片离子的对应要素理论值检索比对，给出每个碎片离子的得分，进而给出平均分即目标 化合物的匹配度得分值;其中，碎片离子的保留时间偏差设定在±〇.5min，精确质量数偏差 设定为±100ppm。6. 根据权利要求5所述的方法，其中：通过如下方法对符合鉴定依据的检出农药进行准 确鉴定： 通过对特征离子检出情况及符合度，给出的得分值，对农药进行定性识别，其方法程序 为:对于样品中目标化合物的侦测，是将飞行时间质谱测得的化合物的保留时间、丰度最高 的7个碎片离子精确质量数、碎片离子丰度比的结果，与T0F/MS数据库检索比对，结果为检 出至少三个碎片离子，且综合得分大于60的农药被确定为检出农药。7. 根据权利要求1所述的方法，通过对浆果和其他小型水果进行前处理以获得浆果和 其他小型水果的测定待测样品，所述前处理方法包括以下程序： 样品制备：浆果和其他小型水果样品经0.5-5体积％醋酸乙腈匀浆提取，经脱水和离 心、浓缩后，再经Carbon/NH2柱净化，乙腈+甲苯洗脱残留农药，经再浓缩、过滤后制成待测 样液a。8.根据权利要求7所述的方法，其中:所述浆果和其他小型水果样品量为5-20g; 优选的，所述〇. 5-5体积％的醋酸乙腈的用量为30-50mL; 优选的，所述匀浆提取条件为:转速12000_15000r/min，时间为0.5-5min; 优选的，所述经脱水是指在〇. 5-5体积％醋酸乙腈提取液中加入0.5-5g氯化钠，2-8g无 水硫酸镁，振荡l-l〇min; 优选的，所述离心是指在3000-5000r/min下离心l-10min; 优选的，所述浓缩是指取离心上清液10_30mL，在20-60°C水浴中旋转蒸发浓缩至约 0·5_2mL〇 9 ·根据权利要求8所述的方法，其中：所述Carbon/Mfe柱净化步骤如下：在Carbon/Mfe柱 中加入约l-3cm高无水硫酸钠，先用2-6mL-定比例的乙腈和甲苯混合溶液淋洗SPE柱，并弃 去流出液，当液面到达硫酸钠的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至净化柱上，下接容器接 收;再每次用2-6mL乙腈和甲苯混合溶液洗涤样液瓶三次，并将洗涤液移入SPE柱中。再用优 选20-30ml的一定体积乙腈和甲苯混合溶液洗脱农药，合并洗脱液于容器中； 优选的，所述一定比例的乙腈和甲苯混合溶液，乙腈：甲苯体积比为2.5-3.5:1。10.根据权利要求8所述的方法，其中：所述经再浓缩、过滤后制成待测样液a是指权利 要求9所得到的洗脱液，在30-50°C水浴中旋转浓缩至约0.5-2mL，并将浓缩液置于氮气下吹 干，加入l-5mL的一定比例的乙腈和0-5体积％甲酸水混合溶液混匀，经0.18-0.22μπι滤膜过 滤后定容，得到待测样品溶液a。 优选的，所述一定比例的乙腈和0-5体积％甲酸水混合溶液，乙腈:0.1-5体积％甲酸水 2:7-9〇
【专利摘要】本发明涉及农残检测领域，提供了筛查浆果和其他小型水果中708种农残的侦测方法，在GC-Q-TOF/MS一级模式下采集农药标准物指定条件下的碎片离子全扫描质谱图，得到农药的化学分子式、保留时间、碎片离子精确质量数、离子丰度比，并导入PCDL软件，与对应的农药信息关联，形成数据库，在相同的设定条件下测定待测样品的全谱数据，得到全谱数据；对样品测定结果经精确质量数据库检索，对符合鉴定依据的检出农药准确鉴定，获得浆果和其他小型水果中的农残种类。本发明运用GC-Q-TOF/MS高分辨质谱建立的检测方法对浆果和其他小型水果中农药残留进行检测，优选结合特定的前处理，具有快速、高通量、高精度和高可靠性检测的特点。无需标准物作对照，同时对浆果和其他小型水果中708种农药进行定性侦测与确证。
【IPC分类】G01N30/88, G01N30/06
【公开号】CN105486795
【申请号】CN201511018511
【发明人】庞国芳, 范春林, 胡雪艳, 常巧英
【申请人】中国检验检疫科学研究院
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年12月28日
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