脑膜炎奈瑟氏球菌组合物及其方法
脑膜炎奈瑟氏球菌组合物及其方法
【专利说明】脑膜炎奈瑟氏球菌组合物及其方法
[0001] 相关申请的交叉引用 本申请要求提交于2013年9月8日的美国临时专利申请序列号61/875,068、提交于2014 年1月13日的美国临时专利申请序列号61 /926，717和提交于2014年5月6日的美国临时专利 申请序列号61/989,432的权益，所述申请W其整体通过引用并入本文。 发明领域
[0002] 本发明设及脑膜炎奈瑟氏球菌(化isseria meningitidis)组合物及其方法。
[0003] 发明背景 脑膜炎奈瑟氏球菌是可W引起脈毒症、脑膜炎和死亡的革兰氏阴性的有芙膜的细菌。 脑膜炎奈瑟氏球菌基于化学上和抗原性上不同的多糖芙膜可W归类为至少12个血清群(包 括血清群A、B、C、2犯、山1、1(、1^、胖-135心、￥和2)。具有五种血清群(4、8、(：、￥和化35)的菌株导 致大部分疾病。
[0004] 脑膜炎球菌性脑膜炎是破坏性疾病，其可W在尽管使用抗生素的情况下在数小时 内杀死儿童和青年人。存在针对脑膜炎球菌血清群A、B、C、Y和W135和/或X的改进的免疫原 性组合物的需求。
[000引目前，针对广泛的MnB分离株的有效的交叉保护性疫苗或组合物仍未市售。例如， 截至目前关于批准的针对血清群B疾病提供保护的多组分组合物的公开结果，尚未证明针 对表达异源LP2086 (f皿P)变体的多个菌株的直接杀菌免疫应答，至少在青少年中是运 样。至多，截至目前的关于针对血清群B疾病提供保护的多组分组合物的公开结果似乎显示 针对LP2086 (f皿P)变体的免疫原性，所述LP2086 (f皿P)变体与多组分组合物中的LP2086 (f皿P)变体同源。因此，当决定针对一组不同的或异源的脑膜炎球菌菌株(例如，代表不同 的地理区域）的现实疫苗覆盖时，需要针对不同MnB分离株的有效的交叉反应疫苗或组合 物。
[0006] 发明概述 为了实现运些和其他需求，本发明设及脑膜炎奈瑟氏球菌组合物及其方法。
[0007] 在一方面，本发明设及组合物，其包括约120 iig/ml的包括SEQ ID NO: 1中所示的 氨基酸序列的第一脂质化的多肤、120 iig/ml的包括SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的 第二脂质化多肤、与所述第一多肤约2.8摩尔比的聚山梨醋80、与所述第二多肤约2.8摩尔 比的聚山梨醋80、约0.5 mg/ml侣、约10 mM组氨酸、和约150 mM氯化钢。在一个实施方案中， 第一剂量为总体积中约0.5 ml。在一个实施方案中，组合物诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血 清群B的杀菌免疫应答。在一个实施方案中，组合物诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群A、C、 29E、H、I、K、L、W-135、X、Y或Z的杀菌免疫应答。在一个实施方案中，组合物不进一步包括与 SEQ ID NO: 1具有少于100%序列同一性的多肤。在一个实施方案中，组合物不进一步包括 与SEQ ID NO: 2具有少于100%序列同一性的多肤。在一个实施方案中，第一多肤具有总计 258个氨基酸。在一个实施方案中，第二多肤具有总计261个氨基酸。在一个实施方案中，组 合物诱导运样的血清免疫球蛋白的杀菌效价，所述杀菌效价为在接受第一剂量后的人中比 在接受第一剂量前的人中的血清免疫球蛋白的杀菌效价高至少2倍，其中杀菌效价中的所 述增加在相同条件下在血清杀菌测定中使用人补体来测量。在一个实施方案中，第一脂质 化多肤由SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列组成。在一个实施方案中，第二脂质化多肤由SEQ ID N0:2所示的氨基酸序列组成。
[0008] 在另一方面，本发明设及在人中诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫应答的方法。 所述方法包括向人施用第一剂量和第二剂量的有效量的组合物，所述组合物包括120 yg/ ml的包括SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列的第一脂质化的多肤、120 μg/ml的包括SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的第二脂质化多肤、与所述第一多肤2.8摩尔比的聚山梨醋 80、与所述第二多肤2.8摩尔比的聚山梨醋80、0.5 111肖/1111侣、10 11^组氨酸、和150 11^氯化 钢。在一个实施方案中，组合物的剂量具有0.5 ml的总体积。在一个实施方案中，人至多施 用两个剂量的组合物。在一个实施方案中，人不进一步施用加强剂量的组合物。在一个实施 方案中，人施用第=剂量的组合物。在一个实施方案中，第=剂量后人不进一步施用加强剂 量的组合物。在一个实施方案中，人不进一步施用第四剂量的组合物。在一个实施方案中， 第=剂量在第一剂量后约6个月的时期内施用给人。在一个实施方案中，第二剂量在第一剂 量后至少30天施用。在一个实施方案中，方法进一步包括施用第=剂量的组合物，其中所述 第=剂量在第二剂量后至少90天施用。在一个实施方案中，组合物诱导运样的血清免疫球 蛋白的杀菌效价，所述杀菌效价为在接受第一剂量后的人中比在接受第一剂量前的人中的 血清免疫球蛋白的杀菌效价高至少2倍，当在相同条件下在血清杀菌测定中使用人补体来 测量时。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株(其与表 达A05的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株异源)是杀菌的。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎 奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株(其与表达BOl的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株异源)是杀菌的。 在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株(其与脑膜炎奈 瑟氏球菌菌株M98250771异源)是杀菌的。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟氏 球菌血清群B亚家族B菌株(其与脑膜炎奈瑟氏球菌菌株CDC1127异源)是杀菌的。在一个优 选的实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株(其与脑膜炎奈瑟 氏球菌菌株CDC1573异源)是杀菌的。在一个实施方案中，第一多肤具有总计258个氨基酸。 在一个实施方案中，第二多肤具有总计261个氨基酸。在一个实施方案中，第一脂质化多肤 由SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列组成。在一个实施方案中，第二脂质化多肤由SEQ ID NO: 2所示的氨基酸序列组成。
[0009] 在一方面，本发明设及组合物，其包括60 iig的包括SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸 序列的第一脂质化的多肤、60 iig的包括SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的第二脂质化 多肤、与所述第一多肤2.8摩尔比的聚山梨醋80、与所述第二多肤2.8摩尔比的聚山梨醋80、 0.5 mg/ml侣、10 mM组氨酸、和150 mM氯化钢，其中所述组合物具有约0.5 ml的总体积。
[0010] 在一个实施方案中，组合物诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株(其 与表达A05的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株异源）的杀菌免疫应答。在一个实施方案中，组合物诱 导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株(其与表达BOl的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株异 源）的杀菌免疫应答。在一个实施方案中，组合物诱导运样的血清免疫球蛋白的杀菌效价， 所述杀菌效价为在接受第一剂量后的人中比在接受第一剂量前的人中的血清免疫球蛋白 的杀菌效价高至少2倍，当在相同条件下在血清杀菌测定中使用人补体来测量时。在一个实 施方案中，组合物不进一步包括与SEQ ID NO: 2具有少于100%序列同一性的多肤。在一个 实施方案中，组合物不进一步包括与SEQ ID N0:2具有少于100%序列同一性的多肤。在一 个实施方案中，第一多肤具有总计258个氨基酸。在一个实施方案中，第二多肤具有总计261 个氨基酸。在一个实施方案中，第一脂质化多肤由SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列组成。在 一个实施方案中，第二脂质化多肤由SEQ ID N0:2所示的氨基酸序列组成。
[0011] 附图简述 图1 一实现hSBA效价 > 化09的受试者比例。hSBA =使用人补体的血清杀菌测定;LLOQ = 定量下限。
[0012] 图2-用rLP2086免疫后实现hSBA效价中针对普林斯顿大学爆发菌株和个别人个 体的UCSB爆发菌株的4x升高的受试者的百分比（研究B1971012-描述于实施例5、实施例 6)。在临床研究B1971012中用二价rLP2086免疫的9个人受试者的血清样品在探索性hSBA中 使用来自普林斯顿大学和来自UCSB的MnB爆发菌株进行评价。参见实施例9。
[001引序列标识符 SEQ ID NO: 1表示重组脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B，2086变体A05多肤抗原的氨基酸序 列。
[0014] SEQ ID NO: 2表示重组脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B，2086变体BOl多肤抗原的氨基 酸序列。
[001引 SEQ ID NO:3表示在沈Q ID NO: 1和沈Q ID NO: 2的位置1-4处的氨基酸残基。
[0016] 沈Q ID N0:4表示重组奈瑟氏球菌亚家族A LP2086多肤(rLP2086) (A05)多肤抗 原的N末端的氨基酸序列。
[0017] SEQ ID N0:5表示奈瑟氏球菌亚家族A LP2086 M98250771多肤(A05)多肤抗原的N 末端的氨基酸序列。
[0018] SEQ ID NO:6表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体B153的氨基酸序列。
[0019] SEQ ID NO:7表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体A04的氨基酸序列。
[0020] SEQ ID NO:8表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体A05的氨基酸序列。
[0021 ] SEQ ID NO:9表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体A12的氨基酸序列。
[0022] SEQ ID NO: 10表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体A22的氨基酸序列。
[0023] SEQ ID NO: 11表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体B02的氨基酸序列。
[0024] SEQ ID NO: 12表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体B03的氨基酸序列。
[00巧]SEQ ID NO: 13表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体B09的氨基酸序列。
[0026] SEQ ID NO: 14表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体B22的氨基酸序列。
[0027] SEQ ID NO: 15表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体B24的氨基酸序列。
[0028] SEQ ID NO: 16表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体B44的氨基酸序列。
[0029] SEQ ID NO: 17表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体B16的氨基酸序列。
[0030] SEQ ID NO: 18表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体A07的氨基酸序列。
[0031 ] SEQ ID NO: 19表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体A19的氨基酸序列。
[0032] SEQ ID NO:20表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体A06的氨基酸序列。
[0033] SEQ ID NO:21表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体A15的氨基酸序列。
[0034] SEQ ID NO:22表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体A29的氨基酸序列。
[00巧]SEQ ID NO:23表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体B15的氨基酸序列。
[0036] 发明详述 本发明人令人惊奇地发现包括包含SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列的第一脂质化 多肤和包含SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的第二脂质化多肤的组合物。组合物具有在 人中可接受的安全性概况且组合物令人惊奇地在人中引发针对至少超过两种不同的脑膜 炎奈瑟氏球菌菌株的广泛的交叉反应性杀菌免疫应答。
[0037] 本发明人进一步发现用异源LP2086 (因子H结合蛋白（f皿P))亚家族A和B疫苗的2 剂量施用时间表和3剂量施用时间表令人惊奇地在人受试者中W高比例产生针对来自脑膜 炎奈瑟氏球菌血清群B的测试菌株的> 8的hSBA效价。当相比于2剂量施用时间表时，3剂量 施用时间表可W提供在人中针对不同的MnB临床菌株的最广泛的保护。
[0038] 本发明人还令人惊奇地发现在同时施用rLP2086组合物和针对人乳头状瘤病毒 (HPV4)的四价免疫原性组合物后产生针对人乳头状瘤病毒和脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B的 强力的免疫应答。例如，同时施用rLP2086组合物和HPV4组合物产生至少针对表达甜BP(其 与rLP2086组合物中的那些f皿P异源）的脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B测试菌株的免疫应答。 此类异源测试菌株包括表达A22巧BP、A56 f皿P、B24 f皿P或B44 f皿P的野生型脑膜炎奈 瑟氏球菌血清群B菌株，其与rLP2086组合物中的円证P各自异源。参见W0/2012/032489、WO/ 2013/132452、美国专利公开号US20120093852和美国专利公开号US20130243807,其描述了 变体甜BP蛋白，尤其包括A22巧BP、A56 f皿P、B24 f皿P和B44 f皿P。运些参考文献各自W 其整体通过引用并入。同时施用还令人惊奇地产生至少针对HPV 6型、11型、16型和/或18型 的免疫应答。同时施用rLP2086组合物和HPV4组合物后针对HPV型的免疫应答当相比于在不 存在rLP2086组合物的情况下由施用HPV4组合物产生的免疫应答时是不差的 (noninferior)。
[0039] 此外，本发明人令人惊奇地发现在同时施用rLP2086组合物和针对白喉、破伤风、 百日咳和脊髓灰质炎的组合物后产生针对白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎和脑膜炎奈 瑟氏球菌血清群B的强力的免疫应答。例如，同时施用rLP2086组合物和RE阳VAX组合物产生 至少针对表达巧BP(其与rLP2086组合物中的那些甜BP异源）的脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B 测试菌株的免疫应答。同时施用还令人惊奇地产生至少针对REPEVAX中9种抗原的免疫应 答：白喉、破伤风、百日咳类毒素、百日咳丝状血凝素、百日咳百日咳杆菌粘附素、百日咳菌 毛凝集原（fimbrial agglutinogen)2 + 3型、脊髓灰质炎病毒1型、脊髓灰质炎病毒2型、脊 髓灰质炎病毒3型。同时施用rLP2086组合物和RE阳VAX组合物后针对RE阳VAX抗原的免疫应 答当相比于在不存在rLP2086组合物的情况下由施用REPEVAX组合物产生的免疫应答时是 不差的（noninferior)。
[0040] 此外，本发明人令人惊奇地发现rLP2086组合物诱导针对表达巧BP B153变体的 ST409脑膜炎奈瑟氏球菌的杀菌免疫应答。例如，在使用人补体的血清杀菌测定(hSBA)中发 现当接触人二价rLP2086组合物免疫血清时，表达f皿P B153变体的菌株易于被杀灭。
[0041 ] 组合物和疫苗 在一方面，本发明设及针对脑膜炎奈瑟氏球菌的组合物。组合物包括具有SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列的第一脂质化多肤和具有SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的第二 脂质化多肤。
[0042] 本发明人令人惊奇地发现诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B的多个菌株的有效 的广泛保护性免疫应答的单一脑膜炎奈瑟氏球菌多肤组分。因此，在一个实施方案中，组合 物不包括融合蛋白。在一个实施方案中，组合物不包括嵌合蛋白。在一个实施方案中，组合 物不包括杂合蛋白。在一个实施方案中，组合物不进一步包括肤片段。在另一实施方案中， 组合物不进一步包括不是f皿P的奈瑟氏球菌多肤。例如，在一个实施方案中，组合物不包括 PorA蛋白。在另一个实施方案中，组合物不包括化dA蛋白。在另一实施方案中，组合物不进 一步包括奈瑟氏球菌肝素结合抗原(NHBA)。在另一实施方案中，组合物不进一步包括奈瑟 氏球菌外膜囊泡(0MV)。在一个优选的实施方案中，除了第一多肤和第二多肤外，组合物不 进一步包括抗原。
[0043] 在另一方面，本发明人令人惊奇地发现衍生自至少两种脑膜炎奈瑟氏球菌血清群 B菌株的多肤抗原诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B的多个菌株的有效的广泛保护性免 疫应答。因此，在一个实施方案中，组合物不进一步包括不是衍生自脑膜炎奈瑟氏球菌血清 群B亚家族A M98250771菌株和/或脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B CDC1573菌株的多 肤。
[0044] 在一个实施方案中，组合物不进一步包括与SEQ ID NO: 1具有少于100%序列同一 性的多肤。在一个实施方案中，组合物不进一步包括与SEQ ID NO: 2具有少于100%序列同 一性的多肤。在一个实施方案中，组合物不进一步包括与SEQ ID NO: 1和/或SEQ ID NO: 2 的全长具有少于100%序列同一性的多肤。
[004引在一个实施方案中，组合物进一步包括聚山梨醋80、侣、组氨酸和氯化钢。在一方 面，组合物包括约60 iig的包括SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列的第一脂质化的多肤、约 60 iig的包括SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的第二脂质化多肤、与每一多肤2.8摩尔比 的聚山梨醋80、作为憐酸侣的0.5 mg侣/ml、10 mM组氨酸、和150 mM氯化钢，其中所述组合 物优选具有约0.5 ml的总体积。
[0046] 在一方面，组合物包括约120 μg/ml的包括SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列的 第一脂质化的多肤、约120 μg/ml的包括SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的第二脂质化 多肤、与每一多肤2.8摩尔比的聚山梨醋80、作为憐酸侣的0.5 mg侣/ml、10 mM组氨酸、和 150 mM氯化钢。
[0047] 在进一步的方面，组合物包括约a)60 Jig的包括SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序 列的第一脂质化的多肤;b)60 iig的包括SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的第二脂质化 多肤;c)18 yg聚山梨醋80;d)250 yg侣;e)780 yg组氨酸，和;f)4380 yg氯化钢。
[0048] 在一个示例性实施方案中，组合物包括约60 iig的由SEQ ID NO: 1中所示的氨基 酸序列组成的第一脂质化的多肤、约60 yg的由SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列组成的 第二脂质化多肤、与第一脂质化多肤和与第二脂质化多肤2.8摩尔比的聚山梨醋80、0.5 mg/ml憐酸侣、10 mM组氨酸、和150 mM氯化钢，其中所述组合物具有约0.5 ml的总体积。在 示例性的实施方案中，组合物是无菌等渗缓冲的液体悬浮液。在示例性的实施方案中，组合 物具有P册.0。在示例性的实施方案中，第一多肤和第二多肤吸附在侣上。
[0049] 在一个实施方案中，组合物具有约0.5 ml的总体积。在一个实施方案中，组合物的 第一剂量具有约0.5 ml的总体积。"第一剂量"指在第0日施用的组合物的剂量。"第二剂量" 或"第=剂量"指在第一剂量后施用的组合物的剂量，其可W是或可W不是与所述第一剂量 相同的量。
[0050] 在使用第一剂量给人后，组合物是免疫原性的。在一个实施方案中，第一剂量为总 体积中约0.5 ml。
[0051] 组合物诱导运样的血清免疫球蛋白的杀菌效价，所述杀菌效价为在接受第一剂量 后的人中比在接受第一剂量前的人中的血清免疫球蛋白的杀菌效价高至少1倍、优选高至 少2倍，当在相同条件下在使用人补体的血清杀菌测定化SBA)中测量时。
[0052] 杀菌效价或杀菌免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B。在优选的实施方案 中，杀菌效价或杀菌免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株且针对脑膜炎 奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株。最优选的，杀菌效价或杀菌免疫应答至少针对脑膜炎奈 瑟氏球菌血清群B亚家族B，BO1菌株。
[0053] 在一个实施方案中，组合物诱导运样的血清免疫球蛋白的杀菌效价，所述杀菌效 价为在接受第一剂量的组合物后的人中比在接受所述剂量前的人中的血清免疫球蛋白的 杀菌效价高至少1倍、诸如例如，至少1.01倍、1.1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8 倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、或16倍，当在相同条件下在血清杀菌测定中使 用人补体来测量时。
[0054] 在一个实施方案中，组合物是免疫原性组合物。在一个实施方案中，组合物是用于 人的免疫原性组合物。在另一个实施方案中，组合物是疫苗。"疫苗"指包括抗原的组合物， 其含有诱导对于该抗原特异性的免疫应答的至少一种表位。疫苗可W通过皮下、经口、口 鼻、或鼻内施用途径直接施用于受试者。优选地，肌内施用疫苗。在一个实施方案中，组合物 是人疫苗。在一个实施方案中，组合物是针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物。
[0055] 在一个实施方案中，组合物是液体组合物。在一个优选的实施方案中，组合物是液 体悬浮液组合物。在另一个优选的实施方案中，组合物不是冻干的。
[0056] 第一多肤 在一个实施方案中，组合物包括具有SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列的第一多肤。在一 个优选的实施方案中，组合物包括约60 iig的包含SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列的第一多 肤，其中所述组合物优选具有0.5 ml的总体积。在另一个实施方案中，组合物包括约120 y g/ml的包含SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列的第一多肤。多肤是来自脑膜炎奈瑟氏球菌菌 株M98250771的经修饰的因子H结合蛋白（円证P)。円证P的描述公开于W02012032489和美国专 利公开US 2012/0093852,其各自W其整体通过引用并入。多肤是在多肤的S个位置共价连 接的=种主要脂肪酸C16:0、C16:1和C18:l的N末端脂质化的。第一多肤包括总计258个氨基 酸。
[0057] 第一多肤包括在所述多肤的N末端区域引入的两个修饰，当相比于来自脑膜炎奈 瑟氏球菌菌株M98250771的对应野生型序列时。第二位置的甘氨酸作为引入克隆位点的结 果而加入。第二修饰包括缺失四个氨基酸。因此，在一个实施方案中，第一多肤包括在N末端 的C-G-S-S序列（SEQ ID NO: 3)。参见沈Q ID NO: 1，前四个氨基酸残基。
[0058] 第一多肤序列和野生型奈瑟氏球菌序列之间的N末端序列差异如下。因此，在一个 实施方案中，第一多肤包括SEQ ID N0:1所示的氨基酸序列的至少前2、3、4、5、6、7、8、9、10、 11、12、13个或更多个氨基酸残基。优选地，第一多肤包括SEQ ID NO: 1的至少前4个、更优选 至少前6个、且最优选至少前8个氨基酸残基。
[0059] 在一个实施方案中，第一多肤包括SEQ ID NO: I所示的氨基酸序列。在一个实施方 案中，第一多肤具有总计258个氨基酸。在一个实施方案中，第一多肤不包括与SEQ ID NO: 1 具有少于100%序列同一性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，第一多肤由SEQ ID NO: 1 所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，第一多肤包括氨基酸序列KDN。参见例如， SEQ ID NO: 1的氨基酸残基73-75。在另一个实施方案中，第一多肤在多肤的N末端包括SEQ ID N0:3所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，第一多肤在多肤的N末端包括SEQ ID NO: 4所示的氨基酸序列。
[0060] 在优选的实施方案中，第一多肤使用本领域已知的标准技术在重组宿主细胞中容 易地表达。在另一个优选的实施方案中，第一多肤包括SEQ ID NO: 1的N和/或C结构域上的 杀菌表位。在一个实施方案中，第一多肤包括SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列的至少前4、 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、 32、33、34、 35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、 57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、 82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100个氨基酸残基。优选 地，第一多肤包括SEQ ID NO: 1的至少前2个、更优选至少前4个、且最优选至少前8个氨基酸 残基。
[0061] 在一个实施方案中，第一多肤包括SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列的至少最后 4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、 56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、 81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99 或 100 个氨基酸残基。
[0062] 第二多肤 在一个实施方案中，组合物包括具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的第二多肤。在一 个优选的实施方案中，组合物包括约60 iig的包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的第二多 肤，其中所述组合物优选具有0.5 ml的总体积。在另一个实施方案中，组合物包括120 yg/ ml的包含SEQ ID N0:2所示的氨基酸序列的第二多肤。多肤是来自脑膜炎奈瑟氏球菌菌株 CDC1573的因子H结合蛋白WHBP)。巧BP的描述公开于W02012032489和美国专利公开US 2012/0093852,其各自W其整体通过引用并入。多肤是在多肤的=个位置共价连接的=种 主要脂肪酸C16:0、C16:1和C18:1的N末端脂质化的。第二多肤包括总计261个氨基酸。在一 个实施方案中，第二多肤包括在N末端的C-G-S-S序列（SEQ ID NO: 3)。参见SEQ ID N0:2的 前四个氨基酸残基。
[0063] 在一个实施方案中，第二多肤包括SEQ ID N0:2所示的氨基酸序列。在一个实施方 案中，第二多肤具有总计261个氨基酸。在一个实施方案中，第二多肤由SEQ ID NO:2所示的 氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，第二多肤不进一步包括与SEQ ID N0:2具有少于 100%序列同一性的多肤。在优选的实施方案中，第一多肤和第二多肤包括在各个多肤的N 末端的C-G-S-S (沈Q ID NO: 3)序列。
[0064] 在优选的实施方案中，第二多肤使用本领域已知的标准技术在重组宿主细胞中容 易地表达。在另一个优选的实施方案中，第二多肤包括SEQ ID NO: 2的N和/或C结构域上的 杀菌表位。在一个实施方案中，第二多肤包括SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的至少前4、 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、 32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、 57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、 82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100个氨基酸残基。优选 地，第二多肤包括SEQ ID N0:2的至少前2个、更优选至少前4个、且最优选至少前8个氨基酸 残基。
[0065] 在一个实施方案中，第一多肤包括SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的至少最后 4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、 56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、 81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99 或 100 个氨基酸残基。
[0066] 聚山梨醋80 聚山梨醋SO(PS-SO)是非离子表面活性剂。使用体外基于单克隆抗体的效价测定的加 速的稳定性研究证明在最终制剂中W更高摩尔比的PS-8化kMnB rLP2086蛋白的亚家族B蛋 白的不稳定性。用不同比例的PS-80的进一步实验证明P0S-80与MnB rLP2086蛋白的保留效 力的最优摩尔比为大约2.8 ± 1.4。
[0067] 组合物中PS-80的浓度取决于PS-80与多肤的摩尔比。在一个实施方案中，组合物 包括PS-80与第一多肤和与第二多肤的2.8± 1.4的摩尔比。在一个实施方案中，组合物包括 PS-80与第一多肤和与第二多肤的2.8± 1.1的摩尔比。在一个实施方案中，组合物包括至少 1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2或3.3的口5-80与多肤的摩 尔比。优选地，组合物包括PS-80与多肤的2.8摩尔比。
[0068] PS-80与多肤摩尔比通过从PS-80的测量浓度和测量的总多肤浓度的计算来确定， 其中两个值均用摩尔表示。例如，PS-80与蛋白摩尔比通过计算在最终药物中测量的PS-80 的浓度(例如，通过反向高压液相色谱(RP-册LC))对于测量的总蛋白浓度(例如，通过离子 交换高压液相色谱(IEX-HPLC))来确定，其中两个值均W摩尔表示。
[0069] RP-HPLC用于定量疫苗制剂中聚山梨醋80的浓度。去污剂的浓度通过皂化脂肪酸 部分来确定；聚山梨醋80通过在40°C下碱水解转化为游离油酸。样品通过RP-HPLC使用C18 柱分离且使用UV检测器在200nm波长定量。
[0070] 第一和第二多肤通过阴离子交换HPLC解析。rLP2086(f皿P)亚家族A和B蛋白W不 同保留时间洗脱且使用针对各个rLP2086蛋白参考材料生成的标准曲线定量。
[00川术语"摩尔比"和包括fHBP和PS-80的免疫原性组合物的描述进一步公开于 W02012025873和美国专利公开US 2013/0171194中，其各自W其整体通过引用并入。
[0072] 如本文所用的术语"摩尔比"指组合物中两种不同要素的摩尔数之比。在一些实施 方案中，摩尔比是去污剂摩尔与多肤摩尔之比。在一些实施方案中，摩尔比是PS-80摩尔与 多肤摩尔之比。在一个实施方案中，基于蛋白和聚山梨醋80浓度，摩尔比可W使用W下公式 计算：
[0073] 在一个实施方案中，组合物包括约 0.0015、0.0017、0.0019、0.0021、0.0023、 0.0025、0.0027、0.0029、0.0031、0.0033、0.0035、0.0037、0.0039、0.0041、0.0043、0.0045、 0.0047、0.0049、0.0051 mg/mL PS-80。优选地，组合物包括约0.0035 mg/mL PS-80。
[0074] 在另一个实施方案中，组合物包括约10 yg、ll yg、12 yg、13 yg、14 yg、15 yg、16 yg、17 yg、18 yg、19 yg、20 yg、21 yg、22 yg、23 yg、24 yg或25 yg PS-80。在优选的实 施方案中，组合物包括约18 yg PS-80。
[00巧]在另一个实施方案中，组合物包括范围为0.0005%-1%的PS-80。例如，PS-80浓度在 组合物中可 W为至少0.0005%、0.005%、0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07〇/〇、 0.08%、0.09%、0.10%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1 %或 1.1% PS-80。在优 选的实施方案中，组合物包括约0.07% PS-80。
[0076] 任何最小值可W与本文描述的任何最大值组合W限定范围。
[0077] 侣 组合物优选包括约0.5 mg/ml憐酸侣。在一个实施方案中，组合物包括作为憐酸侣的约 0.5 111肖侣/1111。4巧〇4^〇.5〇111肖/1111加入作为稳定剂^提供增强的可制备性和稳定性。该浓 度维持亚家族A和B蛋白与侣的结合(90%结合或更好）。
[0078] 生产憐酸侣的方法描述于美国专利公开US 2009/0016946,其通过引用W其整体 并入。
[0079] 在一个实施方案中，除侣之外，组合物不进一步包括多价阳离子。在一个实施方案 中，组合物不进一步包括Al (OH) 3或AKS化)3。
[0080] 赋形剂 在一个实施方案中，组合物包括组氨酸。在一个实施方案中，组合物包括氯化钢。组合 物优选包括约10 mM组氨酸和约150 ml氯化钢。在一个实施方案中，组合物包括10 mM组氨 酸和150 mM氯化钢。
[0081] 在另一个实施方案中，组合物包括约650 yg、660 yg、670 yg、680 yg、690 yg、700 yg、710 yg、720 yg、730 yg、740 yg、750 yg、760 yg、770 yg、780 yg、790 yg、800 yg、810 yg、820 yg、830 yg、840 yg或850 yg组氨酸。优选地，组合物包括约780 yg组氨酸。任何最 小值可W与本文描述的任何最大值组合W限定范围。
[0082] 在一个实施方案中，组合物包括tris、憐酸盐或班巧酸盐缓冲液。在优选的实施方 案中，组合物不包括tris缓冲液。在优选的中，组合物不包括憐酸盐缓冲液。在一个优选的 实施方案中，组合物不包括班巧酸缓冲液。在优选的实施方案中，组合物包括组氨酸缓冲 液。
[0083] 在优选的实施方案中，组合物的pH为6.0-7.0，最优选抑6.0。在一个实施方案中， 组合物的抑为至多6.1。
[0084] 杀菌活性 通过向人施用组合物诱导的免疫应答使用使用针对四种脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B (MnB)菌株的人补体的血清杀菌测定(hSBA)来测定。hSBA中使用的4种MnB菌株选自菌株库。 该菌株库代表从美国和欧洲系统性收集的临床相关脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B菌株的集 合。用于SBA的4种菌株中的两种来自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B LP2086(f皿P)亚家族A，且 4种菌株中的另巧巾来自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B LP2086(f皿P)亚家族B。
[0085] 针对所有测试菌株尤其是表达具有与第一多肤异源的序列的脂蛋白2086变体的 菌株的高比例的hSBA应答表明组合物是广泛保护性疫苗且两剂量足W赋予至少针对脑膜 炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株的高血清保护。
[0086] 针对所有测试菌株尤其是表达具有与第一多肤和第二多肤两者异源的序列的脂 蛋白2086变体的菌株的高比例的hSBA应答表明组合物是广泛保护性疫苗且在6个月时期内 的至少3次剂量足W赋予针对表达rLP2086(FHBP)的脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A和/ 或亚家族B的高血清保护。
[0087] 在一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086(f皿P)亚家族A菌株。在一个实施方案中， hSBA菌株为表达与表达A05的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株异源的脂蛋白2086变体的LP2086 (f皿P)亚家族A菌株。例如，在一个实施方案中，hSBA菌株为表达与菌株M98250771异源的脂 蛋白2086变体的LP2086(円证P)亚家族A菌株。在一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086(円证P) A22菌株。在另一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086(f皿P)A56菌株。在进一步的实施方案 中，hSBA菌株为LP2086 (円证P) A22和LP2086 (円证P) A56菌株。在另一个实施方案中，hSBA 菌株为LP2086 A04菌株。在一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086 A05菌株。在一个实施方案 中，hSBA菌株为LP2086 A12菌株。在一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086 A22菌株。在一个 实施方案中，hSBA菌株为LP2086 A12菌株。在一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086 A04菌 株。在一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086 A19菌株。在一个实施方案中，hSBA菌株为 LP2086 A07菌株。在进一步的实施方案中，hSBA菌株包括422、412、419、405和407或其任何 组合。在一个实施方案中，hSBA菌株包括A06、Al 5和A29或其任何组合。
[0088] 在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株(其与 表达A05的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株异源)是杀菌的。在一个实施方案中，免疫应答为针对脑 膜炎奈瑟氏球菌血清群B A22菌株。在一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌 血清群B A56菌株。在一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B A06菌 株。在一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B Al5菌株。在一个实施 方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B A29菌株。在一个实施方案中，免疫应 答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B A62菌株。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈 瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株(其与脑膜炎奈瑟氏球菌菌株M98250771异源)是杀菌的。在 一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株是杀菌的，所述 脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株表达包括具有与第一多肤至少80%、81%、82%、83%、 84〇/〇、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的 氨基酸序列的因子H结合蛋白。在另一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血 清群B亚家族A菌株是杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株表达包括具有与 由脑膜炎奈瑟氏球菌菌株M98250771表达的因子H结合蛋白至少80%、81%、82%、83%、84〇/〇、 85〇/〇、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基 酸序列的因子H结合蛋白。在优选的实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群 B亚家族A菌株是杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株表达包括具有与由脑 膜炎奈瑟氏球菌菌株M98250771表达的因子H结合蛋白至少80%、更优选至少84%同一性的 氨基酸序列的因子H结合蛋白。
[0089] 在另一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株是 杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株表达包括具有与第一多肤至多81%、 82〇/〇、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100〇/〇 同一性的氨基酸序列的因子H结合蛋白。在另一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟 氏球菌血清群B亚家族A菌株是杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株表达包 括具有与由脑膜炎奈瑟氏球菌菌株M98250771表达的因子H结合蛋白至多81%、82%、83%、 84〇/〇、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的 氨基酸序列的因子H结合蛋白。在优选的实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血 清群B亚家族A菌株是杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株表达包括具有与 由脑膜炎奈瑟氏球菌菌株M98250771表达的因子H结合蛋白至多85%、更优选至多99%同一性 的氨基酸序列的因子H结合蛋白。任何最小值可W与本文描述的任何最大值组合W限定范 围。
[0090] 在一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086(f皿P)亚家族B菌株。在一个实施方案中， hSBA菌株为表达与表达BOl的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株异源的脂蛋白2086变体的LP2086 (f皿P)亚家族B菌株。例如，在一个实施方案中，hSBA菌株为表达与菌株CDC1127异源的脂蛋 白2086变体的LP2086(f皿P)亚家族B菌株。在一个优选的实施方案中，hSBA菌株为表达与菌 株CDC1573异源的脂蛋白2086变体的LP2086(甜BP)亚家族B菌株。
[0091] 在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株(其与 表达BOl的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株异源)是杀菌的。在一个实施方案中，免疫应答为针对脑 膜炎奈瑟氏球菌血清群B B24菌株。在一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌 血清群B B44菌株。在一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B B16菌 株。在一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B B03菌株。在一个实施 方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B B09菌株。在一个实施方案中，免疫应 答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B B15菌株。在一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎 奈瑟氏球菌血清群B B153菌株。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清 群B亚家族B菌株(其与脑膜炎奈瑟氏球菌菌株CDC1573异源)是杀菌的。在一个实施方案中， 免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株是杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌 血清群B亚家族B菌株表达包括具有与第二多肤至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、 88〇/〇、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 同一性的氨基酸序列的因子 H结合蛋白。在另一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株 是杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株表达包括具有与由脑膜炎奈瑟氏球 菌菌株 CDC1573 表达的因子 H 结合蛋白至少 80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89〇/〇、 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列的因子始吉合蛋 白。在优选的实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株是杀菌 的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株表达包括具有与由脑膜炎奈瑟氏球菌菌株 CDC1573表达的因子H结合蛋白至少80%同一性、更优选至少87%同一性的氨基酸序列的因子 H结合蛋白。在另一优选的实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B 菌株是杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株表达包括具有与由脑膜炎奈瑟 氏球菌菌株CDC1573表达的因子H结合蛋白100%同一性的氨基酸序列的因子H结合蛋白。
[0092] 在另一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株是 杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株表达包括具有与第二多肤至多81%、 82〇/〇、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100〇/〇 同一性的氨基酸序列的因子H结合蛋白。在另一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟 氏球菌血清群B亚家族B菌株是杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株表达包 括具有与由脑膜炎奈瑟氏球菌菌株CDC1573表达的因子H结合蛋白至多81%、82%、83%、84%、 85〇/〇、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基 酸序列的因子H结合蛋白。在优选的实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群 B亚家族B菌株是杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株表达包括具有与由脑 膜炎奈瑟氏球菌菌株CDC1573表达的因子H结合蛋白至多88%同一性、更优选至少99%同一性 的氨基酸序列的因子H结合蛋白。任何最小值可W与本文描述的任何最大值组合W限定范 围。
[0093] 在一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086(f皿P)B24菌株。在另一个实施方案中， hSBA菌株为LP2086(f皿P)B44菌株。在进一步的实施方案中，hSBA菌株包括LP2086 (f皿P) B24和LP2086 (円IBP) B44菌株。在一个实施方案中，hSBA菌株包括LP2086 (排BP) A22、 LP2086 (甜BP) A56、LP2086 (甜BP) B24和LP2086 (f皿P) B44菌株。在一个实施方案中， hSBA菌株包括B15。在一个实施方案中，hSBA菌株包括B153。在另一个实施方案中，hSBA菌株 为LP2086 B16菌株。在一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086 B03菌株。在一个实施方案中， hSBA菌株为LP2086 B09菌株。在进一步的实施方案中，hSBA菌株包括824、816、844、803和 B09或其任何组合。在另一个实施方案中，hSBA菌株包括B24、B16、B44、A22、B03、B09、A12、 A19、A05和A07或其任何组合。在另一个实施方案中，hSBA菌株包括A06、A07、A12、A15、A19、 A29、B03、B09、B15和B16或其任何组合。
[0094] 在一个实施方案中，方法诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株和针对 脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株的免疫应答。优选地，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟 氏球菌血清群B亚家族A菌株和针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株是杀菌的。
[0095] 在一个实施方案中，针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株的免疫应答比针 对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株的免疫应答更高。例如，在一个实施方案中，免疫 原性组合物诱导比针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株更高的针对脑膜炎奈瑟氏 球菌血清群B亚家族A菌株的杀菌效价，当在相同条件下测试时。在一个实施方案中，针对脑 膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株的更高的杀菌效价在针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫 原性组合物的第二剂量后30天内发生。在一个实施方案中，针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B 亚家族A菌株的更高的杀菌效价在针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物的第=剂量不 存在的情况下发生。
[0096] 在另一个实施方案中，针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株的免疫应答比 针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株的免疫应答更高。例如，在一个实施方案中，免 疫原性组合物诱导比针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株更高的针对脑膜炎奈瑟 氏球菌血清群B亚家族B菌株的杀菌效价，当在相同条件下测试时。在一个实施方案中，针对 脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株的更高的杀菌效价在针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免 疫原性组合物的第二剂量后30天内发生。在一个实施方案中，针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清 群B亚家族B菌株的更高的杀菌效价在针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物的第=剂 量不存在的情况下发生。
[0097] 效价 在一个实施方案中，当在hSBA中相同条件下 测量时，与施用一剂量的组合物前的人中 的杀菌效价相比，组合物诱导在人中杀菌效价的增加。在一个实施方案中，当在hSBA中相同 条件下测量时，与施用第一剂量的组合物前的人中的杀菌效价相比，将杀菌效价中的增加 与施用第一剂量的组合物前的人中的杀菌效价比较。在一个实施方案中，当在hSBA中相同 条件下测量时，与施用第二剂量的组合物前的人中的杀菌效价相比，在第二剂量组合物后 观察到效价的增加。在另一个实施方案中，当在hSBA中相同条件下测量时，与施用第S剂量 的组合物前的人中的杀菌效价相比，在第=剂量组合物后观察到杀菌效价的增加。
[0098] 在一个实施方案中，组合物在使用一剂量后的人中诱导杀菌效价，其中所述杀菌 效价比施用所述剂量前的人中的杀菌剂量高至少大于1倍，当在hSBA中在相同条件下测量 时。例如，当与在接受一剂量前的人中的杀菌效价相比时，杀菌效价可W在接受所述剂量的 组合物后的人中高至少1.01倍、1.1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、 11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、或16倍，当在hSBA中在相同条件下测量时。
[0099] 在一个实施方案中，"应答者"指人，其中组合物在施用一剂量后的人中诱导杀菌 效价，其中所述杀菌效价比施用所述剂量前的人中的杀菌效价高至少大于1倍。在优选的实 施方案中，应答者当与施用剂量前的人中的杀菌效价相比时实现hSBA效价中至少含4倍的 升高。此类应答者可W称为具有保护性效价。
[0100] 在一个实施方案中，hSBA效价为产生可测量的效果的血清样品的最高稀释度的倒 数。例如，在一个实施方案中，hSBA效价为运样的测试血清的最高2倍稀释度的倒数，所述最 高2倍稀释度导致相比于T30 C即值（即，在含有除测试血清外的所有测定组分的测定孔中 解育后存活的细菌数目；100%细菌存活)的MnB细菌的至少50%降低巧0%细菌存活）。
[0101] 在一个实施方案中，组合物诱导接受第一剂量的人中的杀菌效价，其比接受所述 第一剂量前的人中的杀菌效价高至少2倍(例如，比在不存在所述第一剂量的人中的杀菌效 价高），当在hSBA中在相同条件下测量时。在一个实施方案中，组合物诱导人中运样的杀菌 效价，所述杀菌效价比在接受第一剂量前的人中的杀菌效价高至少4倍，当在相同条件下在 使用人补体的人血清杀菌测定(hSBA)中来测量时。在一个实施方案中，组合物诱导人中运 样的杀菌效价，所述杀菌效价比在接受第一剂量前的人中的杀菌效价高至少8倍，当在相同 条件下在使用人补体的人血清杀菌测定化SBA)中来测量时。
[0102] 在优选的实施方案中，人血清补体来源于对于给定的SBA测试菌株具有低内在杀 菌活性的人。低内在杀菌活性指例如针对给定的SBA测试菌株至少低于1:4稀释的杀菌效 价。在一个实施方案中，人补体来源于针对给定的SBA测试菌株具有至少低于1:4诸如1:2稀 释度的hSBA效价的人，其中所述组合物没有施用给该人。
[0103] 人可W展示出在施用组合物诸如二价rLP2086组合物前低于1:4的hSBA效价，或人 可W展示出施用所述组合物前含1:4的hSBA效价。因此，在优选的实施方案和实施例中，向 人施用至少一剂量的组合物导致至少大于1:4的hSBA效价，诸如，例如，> 1:8的hSBA效价、 > 1:16的hSBA效价、和> 1:32的hSBA效价。本文描述的各个实施例包括评估具有> 1:8和/ 或> 1:16的hSBA效价的人受试者的比例，其中二价rLP2086组合物施用于人。此类大于1:4 的hSBA效价的优选的评估显示在人中诱导的保护即杀菌免疫应答与组合物相关。
[0104] 在一个实施方案中，人在施用第一剂量的组合物后具有等于或大于hSBA的定量下 限化L0Q)的hSBA效价。在另一个实施方案中，人在施用第二剂量的组合物后具有等于或大 于hSBA的化OQ的hSBA效价。在另一个实施方案中，人在施用第S剂量的组合物后具有等于 或大于hSBA的化OQ的hSBA效价。
[0105] 额外的免疫原性组合物 本发明令人惊奇地发现针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物可W与针对人乳头 瘤病毒(HPV)的免疫原性组合物施用，而不负面影响针对脑膜炎奈瑟氏球菌的杀菌应答。如 实施例7和实施例8中所解释，针对脑膜炎奈瑟氏球菌测试菌株的主要hSBA应答在施用有针 对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物和GARDASIL的人中，和在施用有针对脑膜炎奈瑟氏 球菌的免疫原性组合物和盐水的人中观察到。第=剂量的针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原 性组合物后约1个月观察到hSBA应答中的额外增加。
[0106] 此外，本发明人令人惊奇地发现与施用组合物前人中的免疫应答相比，施用针对 脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物和针对HPV的免疫原性组合物后的人中产生针对脑膜 炎奈瑟氏球菌和HPV两者的强力免疫应答。如实施例7和实施例8中所解释，如与施用免疫原 性组合物前的人中的效价相比，针对HPV的效价在施用针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性 组合物和GARDASIL后的人中增加。针对HPV的效价中的增加为至少大于1倍、至少2倍、至少3 倍、至少4倍或更高。
[0107] 因此，在一个实施方案中，方法包括在人中诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫应 答，其中所述方法进一步包括向人施用针对人乳头瘤病毒的免疫原性组合物。优选地，免疫 应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌是杀菌的。在一个优选的实施方案中，方法进一步包括诱导 针对HPV的免疫应答。在优选的实施方案中，方法进一步包括诱导针对人乳头瘤病毒6、11、 16和18型或其任何组合的免疫应答。在一个实施方案中，针对HPV的免疫原性组合物在施用 所述针对脑膜炎奈瑟氏球菌的组合物的24小时内施用于人。
[0108] 在一个实施方案中，方法包括在人中诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫应答，其 中所述方法进一步包括向人施用针对HPV的免疫原性组合物。优选地，免疫应答为针对脑膜 炎奈瑟氏球菌是杀菌的。在一个优选的实施方案中，方法进一步包括诱导针对HPV的免疫应 答。在优选的实施方案中，方法进一步包括诱导针对人乳头瘤病毒6、11、16和18型或其任何 组合的任一项的免疫应答。在一个实施方案中，针对人乳头瘤病毒的免疫原性组合物在施 用所述针对脑膜炎奈瑟氏球菌的组合物的24小时内施用于人。
[0109] 在另一方面，本发明令人惊奇地发现针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物可 W与针对白喉、破伤风、无细胞百日咳、和灭活的脊髓灰质炎病毒(CTTaP)的免疫原性组合物 一起施用，而不负面影响针对脑膜炎奈瑟氏球菌的杀菌应答。如实施例4中所解释的，在施 用针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物和REPEVAX的人中观察到对于脑膜炎奈瑟氏球 菌测试菌株的实质性hSBA应答。第S剂量的针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物后约 1个月观察到hSBA应答中的额外增加。
[0110] 此外，本发明人令人惊奇地发现与施用组合物前人中的免疫应答相比，施用针对 脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物和针对dTaP的免疫原性组合物后的人中产生针对脑 膜炎奈瑟氏球菌和dTaP两者的强力免疫应答。如实施例4中所解释，如与施用免疫原性组合 物前的人中的效价相比，针对d T a P的效价在施用针对脑膜炎奈瑟氏球菌的组合物和 REPEVAX后的人中增加。针对dTaP的效价中的增加为至少大于1倍、至少2倍、至少3倍、至少4 倍或更高。
[01U]方法和施用 在一方面，本发明设及在人中诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫应答的方法。在另一 方面，本发明设及接种人的方法。在一方面，方法包括向人施用至少一剂量的上文描述的组 合物。在另一方面，方法包括向人施用至少第一剂量和第二剂量的上文描述的组合物。
[0112] 令人惊奇地，本发明人发现两剂量时间表的组合物诱导人中针对不同的异源亚家 族A和针对不同的异源亚家族B的杀菌效价。例如，两剂量时间表的上文所述组合物后，具有 >1:8的hSBA效价的人的百分比对于表达LP2086 (円证P) A22或LP2086 (円证P) A56的SBA 测试菌株为90 %或更高。参见实施例1。
[0113] 在一个实施方案中，第二剂量在第一剂量后至少20、30、50、60、100、120、160、170 或180天施用，且在第一剂量后至多250、210、200或190天施用。任何最小值可W与本文描述 的任何最大值组合W限定范围。
[0114] 在另一个实施方案中，第二剂量在第一剂量后约30天施用。在另一实施方案中，第 二剂量在第一剂量后约60天施用，诸如例如，W〇、2月免疫时间表。在另一实施方案中，第二 剂量在第一剂量后约180天施用，诸如例如，W〇、6月免疫时间表。在仍另一实施方案中，第 二剂量在第一剂量后约120天施用，诸如例如，W2、6月免疫时间表。
[0115] 在一个实施方案中，方法包括向人施用两剂量的组合物且至多两剂量。在一个实 施方案中，两剂量在第一剂量后约6个月的时期内施用。在一个实施方案中，方法不包括进 一步向人施用加强剂量。"加强剂量(booster)"指组合物对人的额外施用。向人施用至多两 剂量的组合物可能是有利的。此类利益包括例如利于人依从完整的施用时间表且利于时间 表的成本。
[0116] 在一个实施方案中，第一剂量和第二剂量在第一剂量后约25、30、40、50、60、70、 80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或200天，且至多400、390、380、370、 365、350、340、330、320、310、300、290、280、270、260、250、240、230、220、210或200天的时期 内施用于人。任何最小值可W与本文描述的任何最大值组合W限定范围。
[0117] 在一个实施方案中，第一剂量和第二剂量经过约30天的时期施用于人。在另一个 实施方案中，第一剂量和第二剂量经过约60天的时期施用于人。在另一个实施方案中，第一 剂量和第二剂量经过约180天的时期施用于人。
[011引=个剂量 本发明人进一步令人惊奇地发现=剂量时间表的组合物比两剂量时间表在更高百分 比的人中诱导针对表达异源LP2086(f皿P)亚家族B菌株的菌株的更广泛的杀菌效价。例如， 两剂量时间表的上文所述组合物后，具有含1:8的hSBA效价的人的百分比对于SBA测试菌株 LP2086 (円证P) B24和LP2086 (円证P) B44为65%或更高。S剂量时间表的上文所述组合物 后，具有含1:8的hSBA效价的人的百分比对于SBA测试菌株B24和B44为86%或更高。参见实施 例1。
[0119] 因此，在一个实施方案中，=剂量时间表的组合物比两剂量时间表在更高百分比 的人中诱导针对表达与第一和/或第二多肤异源的LP2086(f皿P)的多个菌株的杀菌效价。
[0120] 在一个实施方案中，方法包括向人施用=剂量的组合物。在另一个实施方案中，方 法包括向人施用至多=剂量的组合物。在一个实施方案中，=剂量在第一剂量后约6个月的 时期内施用。在一个实施方案中，方法包括在第=剂量后向人施用加强剂量。在另一个实施 方案中，方法不包括在第=剂量后向人施用加强剂量。在另一实施方案中，方法不进一步包 括向人施用第四或加强剂量的组合物。在进一步的实施方案中，约6个月时期内至多=个剂 量施用于人。
[0121] 在示例性的实施方案中，第二剂量在第一剂量后约30天施用，且第=剂量在第二 剂量后约150天施用，诸如例如，W〇、l、6月免疫时间表。在另一示例性的实施方案中，第二 剂量在第一剂量后约60天施用，且第=剂量在第二剂量后约120天施用，诸如例如，W〇、2、6 月免疫时间表。
[0122] 在一个实施方案中，第一剂量、第二剂量、和第=剂量在约150、160、170或180天且 至多240、210、200或190天的时期内施用于人。任何最小值可W与本文描述的任何最大值组 合W限定范围。优选地，第一剂量、第二剂量、和第=剂量经约180天或6个月的时期施用于 人。例如，第二剂量可W在第一剂量后约60天施用于人，且第S剂量可W在第二剂量后约 120天施用于人。因此，施用的示例性时间表包括在约第0、2和6个月向人施用剂量。
[0123] 如上所述，免疫原性组合物的多个剂量可W向人施用，且各剂量之间的天数可W 改变。方法的优点包括例如对于人依从施用时间表的灵活性。 实施例
[0124] W下实施例说明本发明的实施方案。除非本文另有说明，W下实施例中提及研究 中的二价重组疫苗(rLP2086)，其是运样的组合物的优选的示例性实施方案，所述组合物包 括每0.5mL剂量60 iig的包括SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列的第一脂质化的多肤、每 0.5mL剂量60 iig的包括SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的第二脂质化多肤、与第一多肤 2.8摩尔比的聚山梨醋80、与第二多肤2.8摩尔比的聚山梨醋80、0.5 Al3Yml组合物、10 mM 组氨酸、和150 mM氯化钢。更具体而言，研究中的二价重组rLP2086疫苗包括约(a)60 yg的 包括SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列的第一脂质化的多肤；（b)60 iig的包括SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的第二脂质化多肤；（C)IS yg聚山梨醋80;(d)250 yg侣；（e)780 yg 组氨酸，和；（f)4380 yg氯化钢。各剂量为0.5 mL。
[0125] 实施例1:当在年龄为11 -18岁的健康受试者中W2或3剂量方案施用时，研究中的 脑膜炎球菌血清群B二价(MnB)rLP2086疫苗的安全性、耐受性和免疫原性 背景:在11-18岁龄的健康青少年中使用包括2或3次接种的5剂量方案(表1)来研究研 究中的二价重组疫苗(rLP2086)的安全性、耐受性和免疫原性。
[0126] 将疫苗配制为0.5 ml剂量W包含60 iig各自纯化的亚家族A和纯化的亚家族B rLP2086蛋白、2.8摩尔比的聚山梨醋80、和作为AlP化的0.25 mg的A13+、10 ml的组氨酸缓冲 的盐水P册.0。
[0127] 将盐水用作安慰剂，因为不存在可用作活性对照的已知被证实安全、免疫原性且 有效的针对MnB的疫苗。生理盐水溶液包括0.5 ml剂量中0.9%氯化钢。
[0128] 方法:在该2期、随机化的、安慰剂对照的、单盲研究中的所有受试者在第0、1、2和6 个月接受疫苗接种出诊。对于盲测(blinding),当未排定疫苗时，给予盐水对照。使用人补 体的血清杀菌测定(hSBA)用表达LP2086 (甜BP) f皿P变体A22、A56、B24和B44的4种MnB测 试菌株（即，主要终点分析中的4种"主要hSBA测试菌株"）进行，其所有均与疫苗中的变体不 同。评估未要求的不利事件(化solicited adverse event,AE)、要求的局部和全身性反应 和退热用途。
[0129] W2侧95%置信区间（Cl)在每一血液采样时间点对每一主要菌株计算集合平均 hSBA效价。几何平均倍数升高W95 % CI计算。
[0130] 将应答者定义为具有等于或高于hSBA测定的定量下限（LLOQ)的hSBA效价的受试 者。在主要终点分析中4个hSBA测试菌株的每一个的化OQ为等于1:8的hSBA效价。对于每一 主要测试菌株的检测限化OD)为等于1:4的效价(宽泛地视为与针对脑膜炎球菌疾病的保护 有关)。
[0131] 结果:最后疫苗剂量后1个月，86-99%的受试者(3剂量后；P<0.OOl)和69-100%受 试者（2剂量后）对于每一MnB测试菌株具有> 8的hSBA效价。研究剂量1后，19-27% (1.1-4.3%严重的）和23-27% (0.0-1.0%严重的）的rLP2086接受者按组分别经历发红和肿胀。注 射部位疼痛是研究剂量1(7.6-13.1%严重的）后最常见的局部反应。第一研究剂量的二价 rLP2086疫苗后在各组中3.3-6.5%经历发烧含38°C相比于盐水接受者中的2.1 %。局部和全 身性反应在剂量1后比在随后剂量之后通常更频繁。1712位受试者中的43位(2.5%)报告51 例严重AE;2例认为是相关的（1例眩晕、寒战且头疼和1例为发烧和呕吐）。未报告死亡。
[0132]结论:二价rLP2086具有可接受的安全性概况。所有5次给药方案在高比例的受试 者中产生针对所有4种测试菌株的含8的hSBA效价。相比于2剂量，3剂量后针对一些测试菌 株的更高比例表明3剂量可W提供针对不同的MnB临床菌株的最宽的保护。整体的3期临床 试验在用二价rLP2086疫苗进行中。
[0133] 本研究的目标之一是评估免疫应答，如在组1受试者(0月、1月和6月时间表，如随 机化的）和在组2受试者(0月、2月和6月时间表，如随机化的）中，用二价rLP2086第S次接种 后1个月，通过用表达LP2086亚家族A和B蛋白的MnB菌株进行的hSBA所测量的。免疫原性分 析的终点为对于4种主要MnB测试菌株(A22、A56、B24和B44)的每一种在第7个月（或在第S 剂量的二价rLP2086后1个月）实现含化OQ的hSBA效价的组1和2中受试者的比例。LLOQ对于 4种MnB测试菌株为1:8。
[0134] 对于可评价的免疫原性人群，3剂量的二价rLP2086后实现> 1:8的hSBA效价的组 1中的受试者比例为对于422为91.7%、对于456为99.4%、对于824为89%且对于844为 88.5 % (参见上文表1)。由于97.5 % CI的下限对于所有菌株为巧0% (对于菌株A22、A56、B24 和844分别为87.8%、1)<0.001;97.8%、口<0.001;84.7%、1)<0.001;和84.1%、1)<0.001)，因此 组1中的受试者达到研究目标。
[01巧]对于组2,3剂量的二价'1?2086后实现>1:8的11584效价的受试者比例为对于八22 为95.0%、对于A56为98.9%、对于B24为88.4%且对于B44为86.1%(参见上文表1)。类似于对组 1可见的，97.5%(：1的下限对于所有菌株为〉50%(对于菌株422、456、824和844分别为 91.7%、p<0.001; 96.9%、p<0.001; 84.1%、口<0.001;和81.4%、口<0.001)，表明组2中的受试 者也达到研究目标。
[0136] 次要目标为评估免疫应答，如在组3受试者(0月和6月时间表，如随机化的）中在第 二剂量的二价rLP2086后1个月，通过用表达LP2086亚家族A和B蛋白的MnB菌株进行的hSBA 所测量的。该次要目标为对于4种主要MnB测试菌株的每一种在第7个月（或在第二剂量的二 价rLP2086后1个月）实现> LLOQ (1:8)的hSBA效价的组3中受试者的比例。
[0137] 该次要目标也达到，因为2剂量的二价rLP2086后在组3中实现> 1:8的hSBA效价 的受试者比例为对于主要胞8测试菌株为93.5%、98.4%、81.1%和77.5%，^97.5%(：1的下限 对于所有菌株〉50%(对于菌株422、456、824和844分别为90.0%、9<0.001;96.2%、口< 0.0 Ol; 76.0%、!)<0.0 Ol;和72.2%、1)<0.0 Ol。参见上文表1)。
[0138] 另一次要目标为对于组1-5中的受试者在每一血液采样时间点对于4种主要MnB测 试菌株的每一种具有含化OQ的hSBA的受试者比例。对于4种主要hSBA测试菌株的每一种的 化OQ为1:8的效价。在研究时间时对于可评价的免疫原性群体具有> 1:8的hSBA效价的受 试者的比例显示在上文表1中。
[0139] 1剂量的二价rLP2086(组5[2月和6月时间表]，注射3后1个月）后具有> 1:8的 hSBA效价的受试者比例对于A22为55.9%、对于A56为67.6%、对于B24为56.9%且对于B44 为 23.8%。
[0140] 2剂量的二价rLP2086后一个月具有> 1:8的hSBA效价的受试者比例范围为对于 亚家族A菌株为74.6%-100%，且对于亚家族B菌株为54.0%-81.1%。3剂量后，对于亚家族A和 B菌株，比例增加且范围分别为91.7%-99.4%和86.1%-89.0%。
[0141] 实施例2:使用人补体的血清杀菌测定(hSBA) 从人血清清除MnB主要通过补体介导的溶菌作用实现且完整的补体系统对于针对由 MnB引起的感染的抗性是重要的。MnB的体内补体介导的溶菌作用体外通过使用人补体的血 清杀菌测定(hSBA)来模拟，其为显示为对于脑膜炎球菌疾病保护的代用品的功能性血清型 测定。即，使用人补体的血清杀菌测定(hSBA)中证实细菌杀伤与针对脑膜炎球菌疾病的保 护相关。由疫苗引发的免疫使用针对4种MnB菌株(巧BP变体A22、A56、B24和B44)的hSBA测 定。
[0142] 四种主要MnB测试菌株在描述于用于测定终点的实施例的hSBA中使用。即，将运些 菌株用于使用hSBA免疫原性终点估计疫苗效力。运些测试菌株代表占美国和欧洲中流行的 >90%的疾病分离株的6种甜BP系统发生亚群中的4种。
[0143] 在选择来自侵袭性疾病分离株的4种主要MnB测试菌株中，使用考虑体外LP2086表 面表达的群体分布的方法。此外，hSBA测试菌株必须显示低基线hSBA阳性，因为处于脑膜炎 球菌疾病的风险中的群体特征在于对于大多数菌株不存在的或低基线的杀菌活性。此外，4 种主要MnB测试菌株的每一种表达与疫苗中LP2086变体不同的LP2086变体，因此允许客观 评价针对人群中流行的侵袭性脑膜炎球菌疾病(IMD)的功能免疫原性和效力。
[0144] hSBA测量能够起始补体介导的杀菌活性的血清中抗脑膜炎球菌血清群B(MnB)抗 体的量。简言之，测试血清在2倍步骤中连续稀释且添加到96孔测定板中。加入MnB SBA测试 菌株和人血清补体，起始杀菌反应。在37°C解育测定板30-60分钟后(取决于SBA测试菌株； 称为T30)，将含有在该解育中存活的细菌的反应混合物稀释并转移至微滤板。过夜解育后， 表示为菌落形成单位(C即)的存活细菌使用Immunospot Analyzer计数。原始CFU数据电子 记录且转移至计算hSBA效价的数据分析应用。hSBA效价为运样的测试血清的最高2倍稀释 度的倒数，所述最高2倍稀释度导致相比于T30 CRJ值(即，在含有除测试血清外的所有测定 组分的测定孔中解育后存活的细菌数目；100%细菌存活）的MnB细菌的至少50%降低巧0% 细菌存活）。效价可W报道为步骤效价，例如1:4、1:8、1:16等。血清样品在相同测定中通过 两次单独的、重复测定来测试。其中重复测量值不相同的样品报道的最终效价为两次重复 测量值中的低者，当达到系统适合性和样品适合性标准(例如重复效价必须在一个2倍稀释 中一致)时。
[0145] 在Du化ecco憐酸缓冲盐溶液中连续稀释测试血清后进行hSBA测定。将细菌(粗略 2000菌落形成单位)和人血清补体(20重量％的终浓度巧日入到96孔板中连续稀释的血清并 在37°C下在小半径定轨摇床中W700巧m解育30-40min(取决于hSBA测试菌株）。解育后，将 一定比例的反应混合物转移至微滤板。过夜解育后，用Immunospot Analyzer (Cellular Technology Limited; Shaker Hei 曲 ts、0H、USA)计数存活的细菌并用SAS(9.2版）分析 hSBA效价。hSBA效价计算为与未经历测试血清的对照相比导致细菌的50%降低的内插测试 血清稀释度的倒数（即，hSBA反应结束时的存活细菌）。根据方案，hSBA基于处于或高于hSBA 测定的定量下限（如用在实施例1的表1中列出的菌株的测定的定量过 程中建立的）的hSBA 效价来完成。
[0146] 人血清是用于SBA的补体来源。然而，hSBA效价可W根据所用的人补体批次而不 同。因此，人补体优选经严格筛选和定量来控制W确保hSBA中的一致表现。对于hSBA，人血 清补体可W从多位正常健康成年人合并或从单独供体来使用（即，不合并）。
[0147] 实施例3-聚山梨醋80 对于药物制剂已优化=个参数:pH、侣浓度和聚山梨醋SO(PS-SO)与蛋白摩尔比。在具 有0.5ml总体积的组合物剂量中，最优的与侣的蛋白结合在约6.0的pH下和约0.5 mg/ml浓 度的侣(作为憐酸侣(A1P化)（其等价于0.25 mg侣/剂量））实现。PS-80与蛋白摩尔比维持在 2.8 ± 1.4W稳定制剂的体外效力。聚山梨醋SO(PS-SO)添加至药物W获得2.8的目标PS-80与蛋白摩尔比。因此，优选在药品配制过程中不加入PS-80。
[014引 实施例4 在健康青年人中与二价rLP2086疫苗同时施用的REPEVAX ?的免疫原性和安全性的随 机化的、安慰剂对照的2期研究 背景/目标:评价研究中的二价rLP2086疫苗(开发为预防青年人中的脑膜炎奈瑟氏球 菌血清群B(MnB))与同时施用RE阳VAX @ ,RE阳VAX @为该群体中同时使用的dTaP灭活脊髓 灰质炎疫苗（其可描述于美国专利号7479283、胖01990/013313和6?1666057 81^及111( Marketing Authorisation PL06745/0121)。
[0149] 方法:青年人(对RE阳VAX+rLP2086或RE阳VAX +盐水1:1随机化)在第0、2和6个月 接种。测定初始接种后30天对于9种REPEVAX抗原实现预定的抗体水平的受试者比例。接种2 和3后30天测量对于4种MnB测试菌株的免疫应答(hSBA)。评价不利事件(AE)和局部/全身性 反应。
[0150] REPEVAX (Sanofi Pasteur MSD limited)是组合的低剂量白喉、破伤风、无细胞 百日咳和灭活脊髓灰质炎病毒疫苗，其每0.5 mL剂量含有吸附在憐酸侣上（1.5 mg (0.33 mg侣））的白喉类毒素(不低于2 IU)、破伤风类毒素(不低于20 IU)、百日咳抗原（百日咳类 毒素（2.5微克）、丝状血凝素（5微克）、百日咳杆菌粘附素（3微克）和菌毛2型和3型（5微 克））、脊髓灰质炎(灭活的）1型（40 D抗原单位）、脊髓灰质炎病毒（灭活的2型（8 D抗原单 位）、脊髓灰质炎(灭活的)3型(32 D抗原单位）。
[0151] 使用多路LUMI肥X测定评估针对RE阳VAX(白喉类毒素、破伤风类毒素、百日咳类毒 素、百日咳杆菌粘附素、菌毛2型和3型W及丝状血凝素）的白喉、破伤风、和百日咳组分的免 疫应答。在病毒中和测定中测量针对脊髓灰质炎1型、2型和3型的免疫应答。将从两个组中 的所有受试者获得的血清用于运些测定中。
[0152] 对于评估针对二价rLP2086的免疫应答，在hSBA中用所述的4种主要MnB测试菌株 分析功能性抗体。选择四种主要MnB hSBA测试菌株(A22、A56、B44和B24)，2种表达LP2086亚 家族A且另巧巾表达LP2086亚家族B。使用运四种主要hSBA测试菌株(来自6种f皿P系统进化 亚群中的4种且代表美国和欧洲流行的>90%的疾病分离株）用于测定该研究中的主要免疫 原性终点。此外，A22、B24和B44变体是欧洲的流行病学相关变体，而在美国，A22和B24是在 引起疾病的MnB菌株上表达的发现的最流行变体。测试用于一级和二级分析的样品前验证 MnB hSBA。
[0153] 来自两组中50 %的随机选择的受试者的血清样品用A22和B24进行hSBA且另50 % 用A56和B44现聯。运些测试在接种1之前、接种2之后和接种3之后对血液样品进行。
[0154] RE阳VAX的免疫原性通过使用在关键的3期临床试验中在形成对于RE阳VAX的许可 基础的青少年中确定的每一抗原的预定标准来评估。REPEVAX共存抗原包括白喉、破伤风、 百日咳类毒素、百日咳丝状血凝素、百日咳百日咳杆菌粘附素、百日咳菌毛凝集原化3型、脊 髓灰质炎病毒1型、脊髓灰质炎病毒2型、脊髓灰质炎病毒3型。例外是百日咳菌毛凝集原 (FIM)2+3型，其限定在用于REPEVAX许可的测定中>5抓/mL的效价。在该研究中，百日咳 FIM 2+3型的定量下限化LOQ)为>10.6抓/mL,其更高且因此比REPEVAX的许可标准更严 格。
[015引共存抗原的化OQ如下：白喉类毒素为0.037 IM/mL;破伤风类毒素为0.05 lU/ml; 百日咳类毒素为0.9抓/mL百日咳丝状血凝素为2.9抓/mL,百日咳百日咳杆菌粘附素为 3.0抓/mL百日咳菌毛凝集原2+3型为10.6抓/mL对于脊髓灰质炎病毒1型、脊髓灰质炎 病毒2型、脊髓灰质炎病毒3型为1:8。
[0156] 对于一级目标的额外描述终点为测量为在接种1后(探视2)的几何平均效价化MT) 或几何平均浓度化MC)的针对共存疫苗抗原的抗体。
[0157] 另一终点为在接种3后(探视6)对于4种主要MnB测试菌株具有含化OQ的hSBA效价 的受试者的比例。
[0158] 共存疫苗抗原接种白喉、破伤风和百日咳无细胞(CTTaP)-IPV (REPEVAX)后1个 月实现对于共存疫苗抗原的预定标准的受试者的比例用2侧95 %精确(或Clopper-化arson 置信限）对于组巧日组2进行计算。比例的差异(二价rLP2086 / cTTaP-IPV - (TTaP-IPV,或组 1-组2)还连同2侧95%精确Cl对于差异进行计算。如果对于差异的2侧95%CI的下限对于 dTaP-IPV疫苗中所有9种抗原大于-0.10 (-10%)，则声明为非劣等(Noninferiority)。
[0159] 用主要测试菌株的hSBA对于每一主要MnB hSBA测试菌株，在每一血液采样时间 点实现> LL0Q、> 1:4、> 1:8、> 1:16和> 1:128的hSBA效价的受试者的数目和比例连同精 确2侧95 % CI (或Clopper-Pearson置信限)对于比例进行描述性概述。
[0160] 结果：在随机的749位受试者中，685位（91.5%)包括可评价的免疫原性群。 REPEVAX +rLP2086或RE阳VAX +盐水后的免疫应答对于所有9种RE阳VAX抗原是不差的。针 对二价rLP2086疫苗的免疫应答在2次剂量后是实质性的且在3次剂量后进一步增强(表2)。 轻度至中度注射部位疼痛是最常见的局部反应;头疼和疲劳是最常见的全身性事件。接种 后30天内报道AE的受试者比例是相似的（8.8%和11.4%，分别对于REPEVAX +rLP20 86和 RE阳VAX +盐水）。
[0161] 对于共存疫苗可评价的免疫原性群，在REPEVAX剂量后1个月实现针对共存疫苗抗 原的抗体的预定水平(对于应答的阔值)的受试者比例在二价rLP2086 + REPEVAX组和单独 的REPEVAX组之间对于共存的疫苗抗原是相似的：白喉类毒素(各组中99.4% )，破伤风类毒 素（各组中100%)，百日咳类毒素（分别94.7%和96.0%)，百日咳丝状血凝素（各组中 100%)，百日咳百日咳粘附菌素(各组中100%)，百日咳菌毛凝集原2+3型（分别97.6%和 98.9%)，脊髓灰质炎病毒1型（各组中100%)，脊髓灰质炎病毒2型（各组中100%)，脊髓灰 质炎病毒3型(各组中100%)。
[0162] 由于RE阳VAX剂量后一个月二价rLP2086 + RE阳VAX组（组1)和单独的RE阳VAX组 (组2)之间应答者比例中差异的2侧95%CI的下界对于RE阳VAX中的9种抗原大于-0.10 (-10%)(即，比例差异上95%CI的最低下界为-4.7%诏日咳类毒素）），因此实现非劣等。因此， 通过与二价rLP2086-同给予的RE阳VAX诱导的免疫应答对于由单独RE阳VAX诱导的免疫应 答是不差的。
[0163] 评估对于4种主要MnB测试菌株的每一种对于接种3后可评价的免疫原性群具有> 化OQ的hSBA效价的受试者比例。A22的化OQ为等于1:16的hSBA效价而对于所有其他MnB测试 菌株的LLOQ为等于1:8的hSBA效价。
[0164] 对于组1，在基线(接种1前）具有含化OQ的hSBA效价的受试者比例对于主要MnB菌 株A22为14.4 %，对于A56为18.2 %，对于B24为12.7 %，且对于B44为6.2 %。对于组2，在基线 (接种1前)具有含化OQ的hSBA效价的受试者比例对于主要MnB菌株A22为23.0%，对于A56为 21.8%，对于 B24为12.9%，且对于 B44为6.3〇/〇。
[0165] 剂量2的二价rLP2086后组1受试者中观察到实质上的hSBA应答，且接种3后1个月3 个剂量后观察到额外增加。对于组U二价rLP2086 + RE阳VAX)，接种2后1个月时和接种3后 1个月时实现 > 化〇0的hSBA效价的受试者比例对于A22为81.1%和95.6%，对于A56为97.3% 和100%，对于B24为81.0%和96.8%，且对于B44为55.5%和81.5%。尽管在仅两次二价rLP2086 剂量后实现实质上的hSBA应答，但2次剂量(接种2后一个月）相比于3次剂量(接种3后1个 月）后具有含化OQ的hSBA效价的受试者比例中的增加示例3次剂量后免疫应答的增强。在 对照组(组2)中，在接种2后1个月和在接种3后1个月时对于4种主要MnB测试菌株的每一种 具有含化OQ的hSBA效价的受试者比例与每一 MnB测试菌株的基线hSBA结果(接种1前)是相 似的。
[0166] 对于4种主要MnB测试菌株，组1中展示确定的hSBA效价的受试者比例在3次剂量后 大于2次剂量后。描述了实现^ 1:16的hSBA效价的受试者，由于该效价从1:4效价的4倍增 加（> 1:4的效价广泛接受为与针对IMD的保护相关性）。对于组1，在接种2后1个月时具有 1:16的hSBA效价的受试者比例对于A22为81.8%，对于A56为97.3%，对于B24为68.0%，且对 于B44为53.4%。在接种3后1个月时，具有1:16的hSBA效价的受试者比例对于A22为95.6%，对 于 A56 为 100%，对于 B24 为 87.3%，且对于844为79.5〇/〇。
[0167] 在对照组(组2)中，在接种2后1个月和在接种3后1个月时对于4种主要MnB测试菌 株的每一种展示确定的hSBA效价的受试者比例与具有在基线(接种1前)确定的hSBA效价的 受试者比例是相似的。
[0168] 对于组1，3次剂量的二价rLP2086后具有1:16的hSBA效价的受试者比例证明当施 用3次剂量的二价rLP2086时疫苗引发强力的免疫应答。
[0169] hSBA几何平均效价(GMT)通常，基线处GMT对于两组均低于hSBA LL0Q。对于组1，在 接种2后1个月的hSBA GMT对于A22为35.5，对于A56为91.1，对于B24为15.9且对于B44为 14.6。在接种3后1个月的hSBA GMT对于A22为63.4，对于A56为151.5，对于B24为28.3且对于 644为36.5。
[0170] 对于组1，2次剂量后对于亚家族A菌株观察的GMT W及3次剂量后对于亚家族B菌株 观察的GMT表明强力的免疫应答。
[0171] 评价显示A22、A56、B24和B44的hSBA效价分布的反向累积分布曲线(RCDC)。组1中 来自RCDC的结果显示在二价rLP2086接种后在组1受试者中观察到实质上的免疫应答;然 而，附图还显示第S剂量的二价rLP2086的益处，因为更高比例的受试者实现针对4种MnB测 试菌株的更高效价。该效果对于菌株B44是最显著的。
[0172] 结论：当同时给予二价rLP2086时，RE阳VAX诱导不比由单独RE阳VAX引发的免疫应 答差的免疫应答。二价rLP2086疫苗诱导针对四种不同MnB测试菌株强力的杀菌应答，尤其 是针对代表亚家族B的那些，其在3次剂量后比2次剂量后更高。同时施用通常是安全的且完 全耐受的。
[0173] 实施例5 健康青少年中研究中的脑膜炎球菌血清群B二价rLP2086疫苗的免疫原性 背景和目标:脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B(MnB)引起婴儿、青少年和成年人中的侵袭性 疾病。保守的、表面暴露的脂蛋白LP2086(因子H结合蛋白[f皿P])是有希望的MnB疫苗祀标。 在健康青少年（11-18岁）中研究了研究中的二价、重组疫苗(rLP2086)的安全性和免疫原 性。
[0174] 方法:将该安慰剂对照的、单盲研究中的受试者随机分至两个3剂量时间表和=个 2剂量时间表。每一 120-yg剂量含有巧巾rLP2086抗原，每个LP2086亚家族(A和B)1种。当未排 定疫苗日程时，给予盐水。使用人补体的血清杀菌测定用4种MnB测试菌株（与疫苗巧BP异 源)进行。
[0175] 结果:将1713位受试者(平均年龄14.4岁）随机化。3剂量疫苗后一个月，针对亚家 族A和B菌株的含8的hSBA效价分别在95-99%和86-89%的受试者中观察到；2剂量后，运些数 字范围分别为91-100%和69-77%的受试者。在2剂量时间表中，0和6个月诱导最高的抗体应 答(实施例5的表1)。在4种MnB异源测试菌株中，2剂量后hSBA GMT范围为6.2-125.6且3剂量 后范围为25.6-155.6。轻度至中度注射位点疼痛是最常见的局部反应。剂量1后，分别在 3.3-6.5 %和2.1 %的rLP2086和盐水接受者中经历发烧含38°C。
[0176] 结论:rLP2086是完全耐受的。所有剂量方案产生强力的杀菌应答，其在3剂量后最 为显著。
[0^7]实施例5的表1与上述的实施例1的表1相同。表2概述了通过研究时间对于可评价 的免疫原性群的hSBA GMT及相应CKGMT从基线(注射1前）增加且用二价rLP2086的每一随 后剂量持续增加。
[0178] 对于4种主要MnB菌株，3剂量的二价rLP2086后(组1和2)比2剂量后（组3、4和5)的 GMT更高。GMT在两个3剂量组之间相似，且它们在=个2剂量组之间相似。
[0179] 注射1前(基线），组1、2、3、4和5的hSBA GMT如下:对于A22分别为7.1、6.3、6.4、6.4 和6.8;对于A56分别为6.8、6.1、6.7、6.3和6.2;对于B24分别为5.3、5.1、5.0、4.9和5.1;和 对于844分别为4.4、4.5、4.5、4.6和4.4。
[0180] 对于组1(0、巧日6月），在剂量2后1个月对于所有4种主要MnB菌株观察到的GMT存在 实质上增加(对于A22、A56、B24和B44分别为24.4、77.3、13.8和13.1)。611'进一步在3剂量的 二价rLP2086后对于组1的受试者对于4种主要MnB测试菌株进一步增加；55.1 (A22); 152.96 (A56); 29.1 (B24);和40.3 (B44)。
[0181] 对于组2，2和3剂量的二价rLP2086后观察到GMT的相似增加。2剂量的二价rLP2086 后对于组2受试者的GMT对于A22为32.9，对于A56为94.6，对于B24为14.9且对于B44为15.5。 3剂量后，GMT对于A22增加为56.3，对于A56增加为155.6，对于B24增加为25.6且对于B44增 加为35.0。
[0182] 对于组1和次剂量后对于亚家族A菌株观察的GMTW及3次剂量后对于亚家族B 菌株观察的GMT表明强力的免疫应答。
[0183] 对于组3，1剂量的二价rLP2086后观察到GMT的少量增加:A22为12.0,对于A56为 18.5，对于B24为9.2且对于B44为5.7。2剂量后，GMT对于A22增加为48.4，对于A56增加为 125.6，对于B24增加为20.6且对于B44增加为22.5。
[0184] 对于组4，1剂量的二价rLP2086后GMT对于A22为13.3;对于456为17.7;对于824为 9.8且对于B44为5.9。2剂量的二价rLP2086后，GMT对于A22为37.1，对于A56为104.9，对于 B24为17.7且对于B44为19.1。
[0185] 对于组5，1剂量的二价rLP2086后GMT对于A22为16.0，对于A56为26.8，对于B24为 12.6且对于B44为6.8。2剂量的二价rLP2086后，GMT对于A22增加为39.6，对于A56增加为 111.8，对于B24增加为14.7且对于B44增加为17.8。
[0186] 总之，对于组3、4和5,观察到的GMT表明2剂量的二价rLP2086后对于亚家族A和B菌 株的免疫应答。
[0187] 总之，3剂量的二价rLP2086提供基于4种主要MnB测试菌株的hSBA效价的强力的且 最宽的免疫应答。与2剂量相比，接受3剂量的二价rLP2086的受试者的更高比例实现针对4 种主要MnB测试菌株的> 1:8的hSBA效价。
[0188] 0、1和6月剂量时间表后的结果（组1)与0、2、和6月剂量时间表后的结果（组2)相 似。对于组1和2,剂量3后实现的GMT值比剂量2后GMT值更高。对于组1和2,剂量2后GMT值对 于亚家族A菌株范围为24.2-94.6且对于亚家族B菌株范围为13.1-15.5。剂量3后GMT值对于 亚家族A菌株范围为55.1-155.6且对于亚家族B菌株范围为25.6-40.3。对于组1和2,当与2 剂量的二价rLP2086后针对4种主要MnB测试菌株实现> 1:8的hSBA效价的受试者比例相比 时，3剂量的二价rLP2086后针对4种主要MnB测试菌株更高比例的受试者实现> 1:8的hSBA 效价。
[0189] 还评估了实现> 1:16的hSBA效价的受试者。对于组1，在2剂量的二价rLP2086后一 个月实现含1:16的hSBA效价的受试者百分比对于A22为73.5%，对于A56为96.3,对于B24为 57.6，且对于B44为47.2%。3剂量的二价rLP2086后，组I中实现含1:16的hSBA效价的受试者 百分比对于A22为91.4%，对于A56为99.2%，对于B24为82.8%，且对于B44为84.8〇/〇。
[0190] 对于组2,在2剂量的二价rLP2086后一个月实现> 1:16的hSBA效价的受试者比例 对于A22为88.1%，对于A56为97.9%，对于B24为63.5%，且对于B44为58.6%。3剂量的二价 rLP2086后，组2中实现> 1:16的hSBA效价的受试者百分比对于A22为95.0%，对于A56为 98.9%，对于 B24 为 83.6%，且对于 B44 为 83.8〇/〇。
[0191] 对于组1和2,3次剂量的二价rLP2086后实现含1:16的hSBA效价的受试者百分比证 明当疫苗引发强力的免疫应答。
[0192] 对于组3,在2剂量的二价rLP2086后实现> 1:16的hSBA效价的受试者比例对于A22 为 93.2%，对于 A56 为 98.4%，对于 B24 为 73.8%，且对于 B44 为 70.8〇/〇。
[0193] 对于组4,在2剂量的二价rLP2086后一个月实现> 1:16的hSBA效价的受试者比例 对于A22为90.8%，对于A56为99.2%，对于B24为67.1%，且对于B44为64.5〇/〇。
[0194] 对于组5,在2剂量的二价rLP2086后实现> 1:16的hSBA效价的受试者比例对于A22 为91.0%，对于A56 为99.1%，对于 B24为64.5%，且对于 B44为66.7〇/〇。
[0195] 对于组3、4和5,实现>1:16的hSBA效价的受试者百分比证明仅2次剂量后疫苗引 发针对亚家族A菌株的强力免疫应答。然而，3次剂量增加针对亚家族B菌株的应答的强度。
[0196] 3次剂量的二价rLP2086后实现> 1:16的hSBA效价的受试者的百分比显示疫苗引 发针对表达与疫苗组分不同的LP2086变体的MnB菌株的强力且广泛的免疫应答。
[0197] 通过研究时间显示hSBA效价分布的反向累积分布曲线(RCDC)也对于每一菌株组 间对于可评价的免疫原性群进行评估。RCDC显示2次剂量的二价rLP2086亚家族A菌株后的 强力免疫应答。第S剂量的二价rLP2086后，应答曲线下面积对于所有4种主要MnB测试菌株 增加，由此证实3剂量的二价rLP2086后免疫应答的增强。
[0198] 来自主要和次要免疫原性终点分析的结果显示疫苗可W产生具有针对MnB的异源 亚家族A和亚家族B变体的显著hSBA活性的抗体。尽管2或3次剂量的二价rLP2086后实现> 1:8的hSBA效价的受试者比例更高，但高比例的受试者在1次剂量的二价rLP2086后一个月 实现> 1:8的hSBA效价。例如，参见组5。
[0199] 对于4种主要MnB测试菌株，3剂量的二价rLP2086后（组1和2)比2剂量后（组3、4和 5)的GMT更高。GMT在两个3剂量组中是相似的。GMT还在立个2剂量组中是相似的。运些数据 也基于实现> 1:16的hSBA效价的受试者百分比证明3次剂量的二价rLP2086后的强力hSBA 应答。
[0200] 运些数据证明二价rLP2086的最终制剂产生强力免疫应答且当W2或3次剂量给予 时是安全且完全耐受的。甚至1剂量的二价rLP2086也提供了高于基线的实质上的免疫应答 且也是安全且完全耐受的。总之，在2或3次剂量的二价rLP2086后在安全性概况中不存在临 床上有意义的差异。
[0201 ] 实施例6 在=期、随机化的、设置对照的研究中脑膜炎球菌血清群B二价rLP2086疫苗在年龄Ills 岁的健康青少年中的安全性、耐受性和免疫原性 背景:脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B(MnB)是青少年中侵袭性脑膜炎球菌疾病的主要原 因。保守的、表面暴露的脂蛋白LP2086(因子H结合蛋白[f皿P])是保护免于由MnB引起的侵 袭性疾病的有希望的疫苗祀标。在=期2、随机化的、设置对照的研究中在11-18岁龄的健康 青少年中检查研究中的二价、重组MnB疫苗(包括SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO: 2、2.8摩尔比 的聚山梨醋80、0.5 111邑/1111侣、1〇11^组氨酸和15〇11^氯化钢，本文所有实施例中称为"二价 rLP2086")的安全性、耐受性和免疫原性。
[0202] 方法:研究1012检查了二价rLP2086的5种疫苗方案，而研究1010和1011评价了分 别与TdaP-IPV和HPV疫苗同时给予的二价rLP2086的3剂量时间表。每一剂量的二价rLP2086 含有60 yg的rLP2086亚家族A变体A05和60 yg的rLP2086亚家族B变体B01。为了检查二价 rLP2086在S项研究中的每一项中的免疫原性，用表达异源f皿P变体A22、A56、B24和B44的4 种MnB测试菌株进行使用人补体的血清杀菌测定(hSBA)，选择所述测试菌株W代表甜BP变 异性的相关多样性W及提供对于针对表达流行病学上流行的巧BP变体的菌株的疫苗引发 的免疫应答宽度的观点。评价不利事件W及收集的局部和全身性反应。
[0203] 结果:所有3个研究中82-100%的受试者在剂量3后1个月实现对于4种MnB测试菌株 的每一种高于定量下限化L0Q)的hSBA效价(表）。在运些研究中，大部分全身性事件和局部 反应在严重程度上是轻度至中度的;不利事件通常不严重或不与研究疫苗有关。
[0204] 结论: 高于1:4的血清杀菌抗体效价保护免于侵袭性脑膜炎球菌疾病。在运些青少 年2期研究中针对4种MnB巧聯菌株(各自对疫苗抗原是异源的）的hSBA效价 >化09的证实表 明二价rLP2086疫苗提供功能性抗体应答，其可W针对不同MnB疾病相关菌株是广泛有活性 的。用二价rLP2086接种通常是完全耐受的。
[020引实施例7 当同时施用人乳头瘤病毒疫苗时在11-18岁龄的健康青少年中脑膜炎球菌血清群B二 价rLP2086疫苗的免疫原性 该2期、随机化的、观察者盲测的(observer-blind)、设置对照的研究在> 11至<18岁龄 的健康青少年中评价具有或不具有共施用GARDASIL ?的二价rLP2086的免疫原性，所述 GARDASIL?为针对人乳头瘤病毒(HPV4)的四价疫苗（也描述于美国专利号5,820,870中）。 GA畑AS IL含有HPV 6型、11型、16型和18型（即HPV-6、HPV-11、HPV-16和HPV-18化蛋白的重组 抗原。终点为在每一可应用的血液采样时间点对于4种主要MnB测试菌株的每一种的hSBA GMT。
[0206] 方法:受试者在第0、2和6个月时接受二价rLP2086 (包括SEQ ID NO: 1和沈Q ID 腸：2、2.8摩尔比的聚山梨醋80、0.5 111旨/1111侣、1〇1111组氨酸、和15〇1111氯化钢）+册￥4 (组1)、二价rLP2086 +盐水(组2)或HPV4 +盐水(组3)。通过使用人补体的血清杀菌测试 (hSBA)使用4种MnB测试菌株(其各自表达与疫苗组分异源且代表甜BP多样性的宽度W及流 行病学流行性的f皿P(A22、A56、B44和B24))测试来自接种1前、和接种2和3后1个月的组1和 2中的受试者的血清。评价的终点包括具有> 定量下限化L0Q; 1:16 [A22]或1:8 [A56、 B44、B24])的hSBA效价的受试者比例和hSBA几何平均效价化MT)。
[0207] 为了证实相比于单独的GARDASIL施用GARDASIL加二价rLP2086的非劣等性，用2个 hSBA(使用1种代表亚家族A变体主要测试菌株(A22)和1种代表亚家族B变体的主要测试菌 株（B24))来进行免疫原性评价。然而，所有4种主要MnB测试菌株用于测定额外的二价 rLP2086免疫原性/效力探索性终点。
[020引为了评估针对二价rLP2086的免疫应答，在hSBA中用随机选自Pf izer代表性MnB SBA菌株库的脑膜炎球菌血清群B菌株分析功能性抗体，如实施例2中所述。hSBA测量人血清 中的功能性抗体，其W补体依赖性方式杀死祀脑膜炎球菌菌株。
[0209] 结果:814位和812位受试者分别包括对于组1和2可评价的免疫原性群。与接种1前 相比，针对所有4种测试菌株具有hSBA效价 > 化09的受试者比例在接种2(55%-99%)和3 (83%-99%;图1)后更高。实施例7的表A呈现通过对于可评价的免疫原性群的采样时间点的 对于4种主要MnB菌株的每一种的hSBA GMT和相应CI。基线处GMT对于两组均低于hSBA LLOQdGMT在组1和2中范围分别为接种1后为11.1-70.6和11.9-76.3,和接种2后为25.8- 117.2 和 28.0-128.2(下文表 A)。
[0210] 对于可评价的免疫原性群，对于组1和组2的接种3二价rLP2086后1个月时针对巧中 主要MnB菌株的hSBA GMT如下:对于A22分别为53.3和57.8，和对于B24分别为25.8和28.0。
[0211] 对于组2(二价rLP2086 +盐水），在接种2后1个月的hSBA GMT对于A22为33.7，对于 A56为76.3，对于B24为16.3且对于B44为11.9。在接种3后1个月的hSBA GMT对于A22为57.8， 对于A56为128.2，对于B24为28.0且对于B44为31.9。
[0212] 对于组1(二价'1^^2086+641?045比），在接种2后1个月的11584 611'对于422为31.9， 对于A56为70.6，对于B24为15.0且对于B44为11.1。在接种3后1个月的hSBA GMT对于A22为 53.3，对于A56为117.2，对于B24为25.8且对于B44为27.2。
[0213] 显示对于A22、A56、B24和B44的hSBA效价分布的反向累积分布曲线(RCDC)在可评 价的免疫原性群的所有采样时间点对于组1和组2进行评价。RCDC显示大部分受试者在接种 2后应答且在接种3后对于4种主要MnB测试菌株具有效价中的额外增加。对于抗原的免疫应 答对于组1和2是相似的。
[0214] 结论:二价rLP2086可W与HPV4施用而不影响通过hSBA血清应答或GMT评价的杀菌 应答。由于hSBA效价含1:4与针对脑膜炎球菌疾病的保护相关，因此运些数据表明在同时施 用HPV疫苗环境中施用二价rLP2086后针对宽范围的MnB菌株的对于青少年保护的潜力。
[0引引实施例8 在健康青少年中与针对脑膜炎球菌血清群B的二价rLP2086疫苗共施用的人乳头瘤病 毒疫苗的免疫原性 背景:该2期、随机化的研究在年龄含11至<18岁的健康青少年中评价共施用针对人乳 头瘤病毒(HPV4)的四价疫苗与二价rLP2086(针对由脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B(MnB)引起 的侵袭性疾病的研究中的疫苗）。
[0216] 方法:在第0、2和6个月受试者接受册V4+二价rLP2086(组1)、二价rLP2086+盐水 (组2)、或盐水+HPV4(组3)。在所有组中在基线和剂量巧日3后收集血清。通过竞争性LUMI肥X 免疫测定(cLIAs)测定针对HPV4抗原化PV-6、11、16和18)的免疫应答。通过使用人补体的血 清杀菌测定(hSBA)用表达与疫苗异源的f皿P变体的巧巾MnB测试菌株(A22和B24)测量二价 rLP2086免疫原性。免疫原性终点（剂量3后的所有)包括:组1和3中针对HPV抗原的几何平均 效价化MT);组1和2中对于表达变体A22和B24的菌株的hSBA GMT;和组1和3中对于基线血清 阴性受试者中的HPV抗原的血清转换率。二价rLP2086的安全性还在与HPV4或盐水共施用后 评价。
[0217] 针对GA畑ASIL化PV 6型、11型、16型、和18型Ll蛋白）的免疫应答的评价使用基 于巧光标记的基于微球的平台化UMINEX)的化IAs来进行。从用GARDASIL首次接种前(探视 I) 和用GARDASIL第S次接种后1个月（探视5)的组1和3中的所有受试者获得血清用在运些 测定中。
[0引8] 组1和组3的针对4种HPV抗原的GMT的比较、及其组1与组3的相应GMT比率(GMR)和 所述比率的2侧95%CI呈现在本实施例下文的表A中。非劣等性边缘的标准为1.5倍，其对应 于GMR的2侧95 % CI的下限的0.67的值。0.67的1.5倍标准对于除了HPV-18外的所有MnB测试 菌株和HPV抗原均达到，所述HPV-18具有0.62的下界95 %置信区间（CI)。在单独的分析中， >99%的受试者在盐水+HPV4和rLP2086+HPV4组中血清转换为所有4种抗原。
[0219] 本研究的另一目标是描述由二价rLP20 86 + GARDASIL (组1)和由盐水+GA畑AS IL (组3)诱导的免疫应答，如同在两组中GA畑ASIL的接种3剂量后(探视5)的HPV免疫原性测定 中通过血清转换所测量的。
[0220] 对于组1和组3中在基线处为血清阴性的受试者在最后剂量的GARDASIL后1个月， 对于4种HPV抗原的每一种的血清转换率计算为对于HPV-6具有含20 mMU/ml、对于HPV-Il具 有 > 16 mMU/ml、对于HPV-16具有 > 20 mMU/ml和对于HPV-18具有 > 24 mMU/ml的抗HPV血清 CLIA水平的受试者比例。
[0221] 对于基线HPV血清阴性的可评价免疫原性群，在各组中用相应95%CI对于4种HPV 抗原的血清转换实现预定标准的基线HPV血清阴性受试者的数目和比例、比例中的百分比 差异(组1-组3)、和差异的95%CI均呈现在实施例8的表B中。
[0222] 结果：对于4种册V抗原中的巧巾（不是册V-18)和两种MnB测试菌株达到（表A)，在 1.5倍设置预定非劣等性标准(对于GMR，95%CI的0.67下限）。组1和3的血清转换率对于所 有HPV抗原为> 99%(表B)。相比于盐水，rLP2086后发生更高的局部反应原性，但用更晚的剂 量不会增加;注射部位疼痛是最常见的局部反应。所有3组中的全身性事件通常在严重程度 上是轻度和中度的。
[0223] 对于可评价的免疫原性群，对于组1和组3的接种3时在GARDASIL剂量1个月后抗体 对4种HPV抗原的GMT如下：分别为451.8和550.3化PV-6);分别为892.9和1084.3 (HPV- II) ;分别为3695.4和4763.4 (HPV-16);和分别为744.0和 1047.4 (册V-18)。接种3时 GARDASIL剂量后一个月时组I与组3的GMR对于HPV-6为0.82(95% CI:0.72, 0.94)，对于 HPV-Il为0.82 (95% CI:0.74，0.91)，对于HPV-16为0.78(95% CI:0.68，0.88)，和对于 HPV-18为0.71 (95% CI:0.62, 0.81)。因此，组 1 相比于组3的抗HPV GMR的2侧95%CI的下 限对于HPV-6 为0.72、对于HPV-Il为0.74、对于 HPV-16 为0.68和对于HPV-18为0.62。0.67的 1.5倍标准化MR的2侧95 %CI的下限)对于除了HPV-18的所有HPV抗原均达到，所述HPV-18具 有0.62的95%CI的下界。
[0224]接种3二价rLP2086剂量后一个月，二价rLP2086 + GA畑ASIL组比二价rLP2086 + 盐水组的GMR对于A22为0.92 (95%CI:0.85, 1.00)，和对于B24为0.92 (95%CI:0.84, 1.01)。组1与组2相比的11584 611?的2侧95%(：1的下限对于422为0.85和对于824为0.84，其 均大于0.67且因此达到1.5倍的非劣等性边缘。
[022引通过分析接种3后1个月时对于巧中主要MnB菌株(A22和B24)的hSBA效价4倍应答率 将来自二价rLP2086 + GARDASIL (组1)施用的数据与来自二价rLP2086 +盐水(组2)的数 据比较。对于接受二价rLP2086 + GARDASIL的组1受试者和接受二价rLP2086 +盐水的组2 受试者测量从基线至对于巧中主要MnB菌株的接种3后1个月的hSBA效价中实现含4倍升高的 受试者的比例。在组1的受试者中，85.3%展示出针对B24的hSBA效价的含4倍升高。在组2的 受试者中，86.4 %展示出针对A22的hSBA效价中含4倍升高，且84.8 %展示出针对B24的hSBA 效价中>4倍升高。
[0226] 接种3后1个月组1和组2之间应答者比例中的差异为对于A22为-1.1%(95%(：1:-4.6，2.3)，和对于B24为-1.4% (95%CI:-5.1，2.3)。4倍应答率的差异均接近1%的值， 且比例差异的95%CI的下界为-4.6% A22和-5.1% B24。
[0227] 相比于盐水+ GARDASIL或相比于二价rLP2086 +盐水的二价rLP2086 + GARDASIL 的非劣等性标准要求接种3后I个月对于针对HPV(对于所有4种HPV抗原化PV-6, HPV-Il， HPV-16和HPV-18))的抗体和对于使用巧巾主要MnB测试菌株(A22和B24)的hSBA效价的GMR的 2侧95 % CI的下限大于0.67。对于两种MnB测试菌株和4种HPV抗原中的至少巧巾达到了该预 定标准。对于HPV-18，GMR的2侧CI的下限略微低于0.67的预定阔值，为在0.62。
[022引对于巧巾主要MnB测试菌株（A22和B24)的4倍升高应答在接受二价rLP2086 + GARDASIL的组和接受二价rLP2086 +盐水的组之间是相似的（范围83.4%-86.4%)。
[0229] 组1和2中具有接种前（即接种1前化SBA效价> 1:4的受试者比例对于菌株A22分别 为15.跳和18.8%;对于菌株A56分别为10.4%和10.5%;对于B24分别为6.1%和8.4%;和对于菌 株B44分别为1.7%和3.2%。此外，组2和1中具有接种前hSBA效价含1:16的受试者比例对于菌 株A22分别为13.7%和16.4%;对于菌株A56分别为9.0%和9.1%;对于B24分别为4.1%和5.4%; 和对于菌株B44分别为1.2%和2.1〇/〇。
[0230] 在组2(二价rLP2086 +盐水）中，在接种2后1个月时具有> 1:4的hSBA效价的受试 者比例对于A22为86.3%，对于A56为98.7%，对于B24为77.1%，且对于B44为60.1%。接种3后1 个月，具有M :4的hSBA效价的受试者比例对于A22为96.4%，对于A56为99.4%，对于B24为 92.8%，且对于844为86.5%。在组1(二价'1口2086 + 64畑45化）中，在接种2后1个月时具有> 1:4的hSBA效价的受试者比例对于A22为83.8%，对于A56为97.8%，对于B24为71.9%，且对于 B44为57.7%。接种3后1个月，具有含1:4的hSBA效价的受试者比例对于A22为94.3%，对于A56 为99.1%，对于 B24为91.1%，且对于 B44为84.4〇/〇。
[0231] 在组2(二价rLP2086 +盐水）中，在接种2后I个月时具有> 1:16的hSBA效价的受试 者比例对于A22为85.8%，对于A56为98.4%，对于B24为68.8%，且对于B44为49.9%。在接种3后 1个月时，具有> 1:16的hSBA效价的受试者比例对于A22为96.3%，对于A56为99.4%，对于B24 为89.2%，且对于844为82.4%。在组1(二价'1口2086+641?^5比）中，在接种2后1个月时具有 M : 16的hSBA效价的受试者比例对于A22为83.0%，对于A56为97.2%，对于B24为65.2%，且对 于B44为46.4%。在接种3后1个月时，具有> 1:16的hSBA效价的受试者比例对于A22为94.0%， 对于A56为98.9%，对于B24为86.3%，且对于B44为78.0〇/〇。
[0232] 对于组1和组2两者，2或3次剂量的二价rLP2086后高比例的受试者实现> 1:16或 更高的hSBA效价，而在接种前探视1时大部分受试者对于主要MnB测试菌株的任一种均不具 有可测量的hSBA效价。
[0233] 对于基线HPV血清阴性可评价免疫原性群，对于二价rLP2086 + GARDASIliaail) 和盐水+ GA畑ASIL组(组3)在接种3的GA畑ASIL剂量后1个月时，对于HPV抗原实现HPV血清 转换的预定标准的受试者比例如下：HPV-6 (分别为99.4%和99.3%), HPV-Il (分别为 99.6%和99.5%)，HPV-16 (分别为99.6%和99.5%)，和HPV-18 (分别为99.5%和99.0%)。
[0234] GARDASIL剂量后 1 个月时二价rLP2086 + GARDASIL组(组 1)和盐水+ GARDASIL 组 (组3)之间应答者的比例中的差异为对于HPV-6为0.1%(95%CI; -0.9，1.5)，对于HPV-11 为0.1% (95% Cl: -0.7，1.3)，对于HPV-16为0.1% (95% Cl; -0.7，1.3)，和对于 HPV-18为0.5% (95% Cl; -0.6， 1.9)。
[02巧]对于二价rLP2086 + GA畑ASIL组（组1)和盐水+ GA畑ASIL组（组3)，在所有4种 HPV抗原的血清转换率差异在0.1 %和0.5 %内，且血清转换率组间非常相似，对于所有4种 HPV抗原具有大于99 %的受试者血清转换。
[0236] 作为额外评价，通过分析接种3后1个月时对于巧巾主要MnB菌株(A22和B24)的hSBA 效价4倍应答率将二价rLP2086 + GARDASIL (组1)与二价rLP2086 +盐水(组2)比较。从基 线至接种3后1个月对于巧巾主要MnB菌株实现hSBA效价倍数升高含4的受试者比例如下:在 组1的受试者中，85.3%展示出针对测试菌株A22的hSBA效价中含4倍升高，且83.4%展示出针 对测试菌株B24的hSBA效价中> 4倍升高。在组2的受试者中，86.4%展示出针对测试菌株A22 的hSBA效价中含4倍升高，且84.8%展示出针对测试菌株B24的hSBA效价中含4倍升高。
[0237] 接种3后1个月组1和组2之间应答者比例中的差异为对于A22为-1.1%(95%(：1:-4.6，2.3)和对于B24为-1.4% (95% Cl: -5.1，2.3)。4倍应答率的差异均接近1%的值，且 比例差异的95%CI的下界为-4.6% A22和-5.1% B24。
[0238] 针对二价rLP2086的免疫应答本研究的另一目标是描述如通过用4种主要MnB测试 菌株(2种表达LP2086亚家族A蛋白（A22和A56)且巧中表达LP2086亚家族B蛋白（B24和B44)) 进行的hSBA测量的(在第二次探视(探视3)和用二价rLP2086第S次(探视5)接种后1个月测 量的)免疫应答。
[0239] 该目标的终点之一是在接种2(探视3)后1个月时和在接种3(探视5)后1个月时对 于4种主要MnB测试菌株的每一种具有hSBA效价含化OQ的受试者的比例。评估对于4种主要 MnB测试菌株的每一种对于可评价的免疫原性群具有含化OQ的hSBA效价的受试者比例。A22 的LLOQ为等于1:16的hSBA效价而对于所有其他MnB测试菌株的LLOQ为等于1:8的hSBA效价。
[0240] 对于组2(二价rLP2086 +盐水），在基线（接种1前）具有 > 化09的hSBA效价的受试 者比例对于A22为16.4%，对于A56为9.3%，对于B24为6.9%，且对于B44为2.5%。对于组2，接种 2后1个月时和接种3后1个月时实现>化09的11584效价的受试者比例对于422分别为85.8% 和96.3%，对于A56分别为98.5%和99.4%，对于B24分别为74.2%和92.6%，且对于B44分别为 57.P/0 和 85.7〇/〇。
[0241 ] 对于组1(二价rLP2086 + GARDASIL)，在基线（接种1前）具有>1X0Q的hSBA效价的 受试者比例对于A22为13.7%，对于A56为9.2%，对于B24为5.1%，且对于B44为1.4%。对于组1， 接种2后1个月时和接种3后1个月时实现 > 化09的hSBA效价的受试者比例对于A22分别为 83.0%和94.0%，对于A56分别为97.5%和98.9%，对于B24分别为70.6%和90.5%，且对于B44分 别为 54.5%和82.7〇/〇。
[0242] 接种2后1个月时在组1和组2受试者中观察到针对4种主要MnB测试菌株的实质上 的hSBA应答，且接种3后1个月观察到额外的增加。
[0243] 评价对于4种主要MnB测试菌株的每一种实现hSBA效价倍数升高含4的受试者比例 和对于可评价免疫原性群实现复合应答的受试者比例。在基线(接种1前)对于组合的所有4 种MnB菌株具有观察到的hSBA效价含化OQ的受试者比例在组1 (0.3%)和组2 (0.7%)之间是相 似的。
[0244] 对于组2(二价rLP2086 +盐水），从基线至接种3后1个月实现hSBA效价倍数升高> 4的受试者比例对于A22为86.4%，对于A56为95.3%，对于B24为84.8%，和对于B44为 80.7%，且83.9%的受试者实现复合hSBA应答（对于组合的所有4种主要菌株hSBA > 化OQ)。接种2后1个月时，从基线实现hSBA效价倍数升高含4的受试者比例对于A22为74.2%， 对于A56为92.6%，对于B24为63.4%，和对于B44为47.4%，且51.9%的受试者实现复合hSBA应 答。
[024引对于组1(二价rLP2086 +盐水），从基线至接种3后1个月实现hSBA效价倍数升高> 4的受试者比例对于A22为86.4%，对于A56为95.3%，对于B24为84.8%，和对于B44为 80.7%，且83.9%的受试者实现复合hSBA应答（对于组合的所有4种主要菌株hSBA > 化OQ)。接种2后1个月时，从基线实现hSBA效价倍数升高含4的受试者比例对于A22为74.2%， 对于A56为92.6%，对于B24为63.4%，和对于B44为47.4%，且51.9%的受试者实现复合hSBA应 答。
[0246] 额外的hSBA倍数应答。其他终点为从基线至每一接种后血液采样探视对于4种主 要MnB菌株的每一种实现至少2倍和3倍hSBA效价增加的受试者的比例。注意A22的化OQ为等 于1:16的hSBA效价而对于所有其他MnB测试菌株的LLOQ为等于1:8的hSBA效价。
[0247] 从基线至接种2后1个月组1和组2的对于MnB菌株实现hSBA效价中> 2倍升高的受 试者比例对于A22分别为77.3%和81.1%，对于A56分别为94.4%和95.3%，对于B24分别为 63.0%和66.0%，且对于B44分别为46.1%和48.6%。从基线至接种3后1个月组1和组2的对于 MnB菌株实现hSBA效价倍数升高含2的受试者比例对于A22分别为90.2%和92.8%，对于A56分 别为97.跳和97.9%，对于B24分别为84.6%和87.2%，且对于B44分别为77.7%和81.7〇/〇。
[0248] 从基线至接种2后1个月组1和组3的对于MnB菌株实现hSBA效价倍数升高> 3的受 试者比例对于A22分别为73.1%和74.2%，对于A56分别为92.5%和92.6%，对于B24分别为 61.3%和63.4%，且对于B44分别为45.7%和47.4%。从基线至接种3后1个月组1和组3的对于 MnB菌株实现hSBA效价倍数升高含3的受试者比例对于A22分别为85.3%和86.4%，对于A56分 别为95.0%和95.3%，对于B24分别为83.4%和84.8%，且对于B44分别为77.0%和80.7〇/〇。
[0249] 对目标下描述性终点概况说来，对于组1(二价rLP2086 + GARDASIL)和组2 (二价 rLP2086 +盐水）两者，大部分受试者实现对于所有4种主要MnB测试菌株的hSBA效价> LL0Q，而仅非常小比例的受试者在基线（接种前探视1)时具有可测量的hSBA效价> LL0Q。 用4种MnB菌株的实质上免疫应答在接种2后1个月观察到，且对于组1和组2受试者在接种3 后1个月观察到额外的增加。运一结论通过W下证实:3次剂量后具有hSBA效价>1:16的受 试者的比例，两组中2次剂量后和3次剂量后实现的观察到的GMT，和对于4种主要MnB测试菌 株的RCDC。
[0250] 对于组1和组2,高比例的受试者实现对于主要MnB测试菌株的每一种的hSBA效价 倍数升高^ 4和第S次研究接种后对于所有4种主要MnB菌株的复合hSBA应答^ LL0Q。
[0巧1] 此外，对于组1(二价rLP2086 + GA畑ASIL)和组2 (二价rLP2086 +盐水），大多数 受试者实现对于4种主要Mn B菌株在所有采样时间点的hSBA效价倍数升高含3和hSBA效价倍 数升高含2。具有达到运些标准的结果的受试者比例相比于2次接种在3次接种后更高。
[0巧2] 运些结果支持运一论据，即当与HPV疫苗GA畑ASIL共施用时，针对二价rLP2086的 免疫应答产生与针对二价rLP2086 +盐水的免疫应答相当的强力的免疫应答。
[0253] 实施例8的表B呈现在可评价免疫原性群中对于组1(二价rLP2086 + GARDASIL)和 组3 (盐水+ GARDASIL)在接种3后1个月时对于4种HPV抗原的每一种的GMT和相应的Cl。
[0254] 对于组3,在基线（接种1前）和接种3后1个月时的HPV GMT对于HPV-6分别为6.0和 550.3;对于HPV-11分别为4.3和1084.3;对于HPV-16分别为6.1和4763.4;和对于HPV-18分 别为5.3和1047.4。对于组1(二价rLP2086 + GARDASIL),在基线(接种1前)和接种3后1个月 时的HPV GMT对于HPV-6分别为5.8和451.8;对于HPV-11分别为4.2和892.9;对于HPV-16分 别为5.8和3695.4;和对于HPV-18分别为5.2和744.0。总体上，相比于组1，GMT对于组3在数 值上更高。显示对于册V-6，HPV-11，册V-16和册V-18的效价分布的反向累积分布曲线 (RCDC)在可评价的免疫原性群的所有采样时间点对于组1(二价rLP2086 + GARDASIL)和组 3(盐水+ GARDASIL)进行评价。RCDC显示对于组1和组3在接种3后受试者中的强力免疫应 答。
[02巧]针对GARDASIL的免疫应答的概述。相比于组1(二价rLP2086 + GARDASIL),针对 HPV抗原的GMT对于组3(盐水+ GA畑ASIL)在数值上更高，且接种3后观察到的HPV GMT表明 对于两组的强力的免疫应答。RCDC还支持对于组1和组3在接种3后的强力免疫应答。运也被 对于4种HPV抗原具有血清阳性状态的受试者比例所支持，其在接种3后1个月对于两组均为 〉99%。组3(盐水+ GARDASIL)中年龄更小的亚组比年龄更大的亚组具有更高的HPV GMT。当 GARDASIL与二价rLP2086同时给予时维持运一差异。
[0巧6] 免疫原性结论相比于盐水+ GARDASIL或相比于二价rLP2086 +盐水的二价 rLP2086 _ GA畑ASIL的非劣等性标准要求接种3后1个月对于针对HPV(对于所有4种HPV抗 原化PV-6,册V-11,册V-16和册V-18))的抗体和对于使用巧巾主要MnB测试菌株(A22和 B24)的hSBA效价的几何平均效价比率(GMR)的2侧95%CI的下限大于0.67。对于两种MnB菌 株和4种HPV抗原中的巧巾达到了该预定阔值。对于HPV-18，GMR的2侧95%CI的下限略微低于 0.67的预定阔值，为在0.62。
[0257] 99 %或更多的同时接受GARDASIL与二价rLP2086或盐水的组的受试者实现对于所 有4种HPV抗体的血清转换。对于所有4种HPV抗原的RCDC显示大多数受试者实现在接种3后I 个月高于血清转换阔值的应答。相对于基线的强力GMT对于接受GA畑ASIL的两组均观察到。 [0巧引对于巧巾主要MnB测试菌株（A22和B24)的4倍升高应答在接受二价rLP2086 + GARDASIL的组（分别为85.3%和83.4%)和接受二价rLP2086 +盐水的组（分别为86.4%和 84.8%)之间是相似的（范围83.4%-86.4%)。
[0259] 针对二价rLP2086的应答的进一步描述性分析使用4种主要MnB测试菌株(A22, A56, B24和B44)进行。在接种2或3后1个月，对于接受二价rLP2086与同时的GA畑ASIL (二 价rLP2086 + GARDASIL)或与同时的盐水(二价rLP2086 +盐水）的两组，高比例的受试者 实现对于可评价的免疫原性群的hSBA效价倍数升高含4和复合应答(所有4种MnB测试菌株 和3期临床程序中使用的相同的免疫原性/效力终点定义）。运些应答实质上高于hSBA效价 >1:4(其已证实与保护免于包括血清群B疾病在内的脑膜炎球菌疾病相关）。运些结果还表 明和支持针对二价rLP2086(无论是否与盐水或与GARDASIL同时施用）的强力免疫应答的证 据。
[0260] 结论:数据表明针对两种疫苗的强力免疫应答在同时施用rLP2086 + HPV4后产 生。预定的非劣等性标准对于6种抗原中的5中达到。尽管针对HPV-18的GMR勉强错过非劣等 性标准，但高比例的应答者（> 99%)表明预期同时在施用后维持临床有效性。二价rLP2086 是完全耐受且引发针对表达与疫苗中的那些异源的f皿P的测试菌株的强力免疫应答。
CI=置信区间;GMT=几何平均效价;HPV=人乳头瘤病毒;hSBA=使用人补体的血清杀菌测 定;LLOQ=定量下限;NA=不可应用。 注意:LLOQ=对于HPV-6为 11 mMU/ml,对于HPV-Il为8 mMU/ml;对于HPV-16为 11 mMU/ ml;和对于HPV-18为 10 mMU/mlDLLOQ=对于A22为 1:16;对于A56, B24和B44为1:8。低于 LLOQ的结果设定为0.5*LL0Q用于分析。 a. n=对于给定抗原或菌株具有有效且确定的测定结果的受试者数目。 b. 使用在接种3后1个月具有有效且确定的测定结果的所有受试者计算几何平均效价 (GMT)O C.置信区间（Cl)为基于Student t分布对于测定结果的平均对数的置信区间的回转 换（back transformations)。 d. GMT的比率(对于HPV抗原效价为组I/组3，和对于hSBA菌株效价为组I/组2 )。 e. 置信区间（Cl)为基于Student t分布对于测定值对数的平均差的置信区间的回转 换(对于HPV效价为组1-组3，和对于hSBA菌株效价为组1-组2)。
CI=置信区间;HPV=人乳头瘤病毒。 a. N=对于给定抗原具有基线HPV血清阴性状态的受试者数目。 b. n=对于给定抗原在接种3后1个月实现血清转换(预定标准)的受试者数目。 C.基于观察到的受试者比例的精确2侧置信区间(Clopper和化arson)。 d. 比例中的差异，表示为百分比。 e. 对于比例中的差异的精确2侧置信区间(基于化an & Zhang),表示为百分比。
[0261] 实施例9:二价rLP2086疫苗效力 二价rLP2086的效力已使用hSBA应答作为效力的代用品和针对侵袭性脑膜炎奈瑟氏球 菌血清群B(MnB)菌株的血清杀菌抗体应答的证实来推断。
[0262] 对于MnB菌株，引起侵袭性脑膜炎球菌疾病（IMD)的菌株代表用于评价中。每一MnB 测试菌株表达巧BP蛋白变体(A22, A56, B24或B44)，其与疫苗组分(A05和B01)异源（不 同）。
[0263] 二价rLP2086的效力在美国和欧洲的4459位11-18岁龄的青少年中进行的3随机对 照的II期研究中评价。还参见实施例6。总计2293位使用0、2和6月接种时间表接受至少1剂 量的120 iig二价rLP2086。效力通过在接种有二价rLP2086的受试者中评价hSBA免疫应答来 评估。
[0264] 使用5个主要疗效(co-primary)免疫原性终点推断效力。对于5个主要疗效终点中 的4个，受试者中的预定比例必须在3次剂量的二价rLP2086后针对4种MnB现聯菌株的每一 种实现hSBA效价中的4倍升高。第五共同主要疗效终点为复合终点，其需要预定的高比例的 受试者各自在3次剂量的二价rLP2086后在用主要MnB测试菌株的所有4种hSBA中均应答。免 疫应答还基于第S剂量疫苗后1个月实现hSBA效价含定量下限化L0Q)的受试者比例来评 估。LLOQ定义为可W测量的样品中抗体的最低量。
[026引研究1(描述于实施例7和实施例8)为11期、随机化的、活性对照的（active-controlled)、观察者盲测的、多中屯、试验，其中 2499 位美国受试者 （11-17 岁龄) 随机分配至 (W2:2:l比例）3组中的一组:组1接受二价rLP2086 + HPV4,组2接受二价rLP2086 +盐水， 和组3接受盐水+ HPV4。所有接种在0、2和6月时间表上施用。
[0266]研究2(描述于实施例4)为II期、随机化的、安慰剂对照的、单盲试验，其中753位欧 洲受试者（11-18岁龄)随机分配至（Wl :1比例）2组:组I接受在0、2和6月时的二价rLP2086 和第O月时的dTa-IPV(白喉、破伤风、无细胞百日咳-灭活的脊髓灰质炎病毒）。组2接受在0、 2和6月时的盐水和第0月时的dTa-IPV。
[0267]研究3 (描述于实施例5)为II期、随机化的、安慰剂对照的、单盲的、多中屯、试验，其 中1，713位欧洲受试者（11-18岁龄)随机分配至（^3:3:3:2:1比例巧组。受试者接受在0、1、 和6月时间表(组1);在0、2和6月时间表(组2);在0和6月时间表(组3);在0和2月时间表(组 4);或在0和4月时间表(组5)施用的2或3次剂量的二价rLP2086。每组中施用盐水注射（1或2 次剂量，取决于组）W维持盲测(the bl ind)。
[026引研究1、2和3中在0、2和6月时接受3剂量系列的二价rLP2086的受试者中的结果上 文描述于各实施例4-8中。4倍和复合应答率的评价为所有研究的探索性终点。4倍应答率显 示对于所有4个终点的95%置信区间(Cl)的下界在3个研究中是相似的且一致地达到HI期 终点的阔值限。实现hSBA效价^ LLOQ的受试者比例在3个研究中是相似的。
[0269] 基于1或2个月分开给予疫苗的2次施用后获得的hSBA数据，在运些间隔上施用2次 剂量的疫苗可W提供针对由于潜在暴露于脑膜炎球菌血清群B疾病的病例而处于增加的风 险中的个体的保护。1或2个月分开递送的2次疫苗施用后观察到的应答显示一定比例的受 试者表达等于或高于对于4种主要测试菌株的每一种的化OQ值的hSBA水平（参见组1和组2 的研究1的结果;参见组1的研究2的结果;参见组2的研究3的结果）。6个月时施用的第S剂 量的疫苗可W实现疫苗介导的保护。
[0270] 同时疫苗施用研究1(描述于实施例7和实施例8)评价在美国青少年中二价 rLP2086和HPV4的同时使用。研究终点包括第S接种后1个月对于HPV4抗原（基于几何平均 效价[GMT])和对于二价rLP2086(基于使用两种MnB测试菌株[变体A22和B24]的hSBA)的免 疫应答的非劣等性评价。HPV4免疫应答还通过4种HPV抗原的每一种的血清转换来评价。
[0271] 研究1显示组1(二价rLP2086+HPV4)和组3(盐水+HPV4)的抗体针对HPV抗原的几何 平均效价(GMT)，W及组1和组3之间的其相应的GMT比率(GMR)和该比率的2侧95%CI。研究1 还提供组1和组2的针对巧巾主要MnB测试菌株的hSBA GMT的比较W及组1和组2之间其相应 的GMR和该比率的2侧95%CI。非劣等性边缘的标准为1.5倍，其对应于GMR的2侧95%CI的下 限的0.67的值。0.67的1.5倍标准对于除了HPV-18外的所有MnB现聯菌株和HPV抗原均达到， 所述HPV-18具有0.62的下界95 %置信区间（Cl)。尽管针对HPV-18的应答未达到预定的非劣 等性标准，但差异是微小的。在单独的分析中，含99%的受试者在盐水+HPV4和二价rLP2086 +HPV4组中血清转换为所有4种抗原。
[0272] 实施例10: 二价rLP2086在个体中引发抗体，其提供针对表达流行的和爆发相关的f皿P变体的MnB 菌株的宽覆盖 使用人补体的血清杀菌测定化SBA)中测量的杀菌抗体已与针对脑膜炎球菌疾病的保 护相关且hSBA应答已常规用作疫苗效力的代用品。f皿P多样性的全球流行病学研究掲示 ~80%的脑膜炎球菌疾病由表达10种流行f皿P变体之一的菌株引起。
[0273] 方法:在用二价rLP2086免疫的个别人受试者中评价针对表达在美国和欧洲中10 种最流行甜BP变体(824、816、844、422、803、809、412、419、405和407)的脑膜炎奈瑟氏球菌 血清群B(MnB)菌株的hSBA应答。表达运十种最流行变体的MnB菌株代表甜BP多样性的宽度， 包括6种主要甜BP亚群中的5种，其分别代表MnB SBA菌株库和MnB SBA菌株库的美国子集中 〉98%和97%的菌株亚群计）。二十S种MnB测试菌株获自Pfizer MnB SBA菌株库（N= 1263)，其代表在2000年和2006年之间系统收集自美国和欧洲的菌株。此外，来自近期MnB疾 病爆发的分离株也包括在分析内。匹配的接种前和接种后血清(剂量2后和剂量3后)随机获 自参与临床研究B1971005、B1971012或B1971003的青少年和年轻成年人受试者。
[0274] 为了提供支持用二价rLP2086接种提供的潜在覆盖的额外信息，用爆发菌株和来 自用二价rLP2086免疫的9位受试者的血清样品进行hSBA(临床研究B1971012,描述于实施 例5和实施例6)。受试者（11至<19岁龄)已接受在0、2和6个月时3次剂量的二价rLP2086。为 了确保保守hSBA评价，W无偏见方式从一组不具有针对主要MnB测试菌株的基线hSBA活性 的受试者中选择9位受试者。测试克隆的普林斯顿大学爆发菌株中的两株（PMB5021和 PMB5025)和UCSB爆发菌株中的两株(两种基因簇PMB4478和PMB4479各一株）。
[0275] 克隆的普林斯顿大学MnB爆发菌株的基因表征如下:数据表明普林斯顿大学爆发 菌株是克隆的。菌株的每一株录入为CC41/44 (ST 409)并且表达巧BP变体B153 (SEQ ID N0:6)。菌株对于NHBA (2)、porA (亚型Pl.5-1,2-2)和PO巧（3-82)具有相同的等位基因 分配，所有菌株均不含nadA，并且所有菌株具有相同的脉冲场凝胶电泳(PFGE)概况(429)。
[0276] 2013 加 iversity of California Santa Barbara爆发菌株的基因表征如下： UCSB菌株录入为CC32化T5 ; ST32)，表达甜BP变体B24，且与自从1993年已导致高度地方性 的血清群B疾病的化egon克隆相关。与菌株的Princeton爆发组不同，UCSB菌株遗传上分离 为两个不同簇，其通过其PFGE概况(468或467)和PO巧类型（3-461或3-24)而有所区别。菌株 对于船(14(1)、畑84(5)、口〇'4(亚型？1.7，16-20)具有相同的等位基因分配。
[02W]对于所有受试者和所有爆发菌株在基线的hSBA效价< 4,表明受试者在用二价 rLP2086免疫前不具有针对任何爆发菌株的保护性抗体。
[0278] 结果:所有23种MnB菌株在用来自用二价rLP2086免疫的单独受试者的血清的hSBA 中是易感的。代表所有10种流行性f皿P变体的菌株W及额外菌株均被hSBA杀死。基线hSBA 血清保护率(实现hSBA效价含1:4的受试者的比例)普遍低。二价rLP2086免疫前受试者中观 察到的更低的血清保护率例证未接种的青少年或年轻成年人群对于MnB疾病的脆弱性。然 而，在青少年和年轻成年人中用接种后血清观察到强力的血清保护率:取决于MnB菌株和测 试的群体，对于运些菌株的83%观察到>70%的血清保护率。表达最流行的亚家族A和B f皿P 变体B24和A22的菌株的接种后血清保护率对于表达f皿P变体B24和B153的近期爆发菌株范 围为81.0%-100%和77.8%-100%。此外，针对所有爆发菌株的强力剂量2后应答(相比于基线） 在运些受试者中观察到，取决于hSBA中所用的爆发菌株，范围为56-89%。相反，对于近期美 国爆发的菌株，接种前血清保护率是低的或不可检测的。针对普林斯顿大学和UCSB爆发菌 株的hSBA应答显示于图2。
[0279] 结论:二价rLP2086引发个体中对于表达美国和欧洲流行的fHBP的不同侵袭性MnS 菌株W及新近出现的变体(B153KSEQ ID NO: 6)的强力的血清保护性hSBA应答。用二价 rLP2086接种后显示血清保护性应答的受试者比例大大超过了在基线处血清保护的受试者 的比例。数据支持二价rLP2086具有为青少年和年轻成年人提供免于侵袭性脑膜炎球菌血 清群B疾病包括来自近期爆发的疾病的广泛保护的潜力。
【主权项】
1. 组合物，其包含 a) 包含SEQIDNO: 1所示的氨基酸序列的第一脂质化多肽、 b) 包含SEQIDN0:2所示的氨基酸序列的第二脂质化多肽。2. 根据权利要求1的组合物，其进一步包含聚山梨酯80、铝、组氨酸和氯化钠。3. 根据权利要求2的组合物，其中所述组合物包含约120yg/ml的第一多肽;约120yg/ ml的第二多肽;约2.8摩尔比的聚山梨酯80;约0.5mg/ml·!;约10mM组氨酸;和约150mM氯 化钠。4. 根据权利要求2的组合物，其中所述组合物包含约60yg的第一多肽;约60yg的第二 多肽;约18yg的聚山梨酯80;约250yg铝;约780yg组氨酸;和约4380yg氯化钠。5. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物诱导血清免疫球蛋白的杀菌效价，当在相 同条件下在使用人补体的血清杀菌测定中测量时，所述血清免疫球蛋白的杀菌效价为在接 受第一剂量后的人中比在接受所述第一剂量前的人中的血清免疫球蛋白的杀菌效价高至 少大于1倍。6. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物诱导血清免疫球蛋白的杀菌效价，当在相 同条件下在使用人补体的血清杀菌测定中测量时，所述血清免疫球蛋白的杀菌效价为在接 受第一剂量后的人中比在接受所述第一剂量前的人中的血清免疫球蛋白的杀菌效价高至 少2倍。7. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物诱导血清免疫球蛋白的杀菌效价，当在相 同条件下在使用人补体的血清杀菌测定中测量时，所述血清免疫球蛋白的杀菌效价为在接 受第一剂量后的人中比在接受所述第一剂量前的人中的血清免疫球蛋白的杀菌效价高至 少4倍。8. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物诱导血清免疫球蛋白的杀菌效价，当在相 同条件下在使用人补体的血清杀菌测定中测量时，所述血清免疫球蛋白的杀菌效价为在接 受第一剂量后的人中比在接受所述第一剂量前的人中的血清免疫球蛋白的杀菌效价高至 少8倍。9. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物不进一步包含与SEQIDNO: 1具有少于 100%序列同一性的多肽。10. 根据权利要求1的组合物，其中所述第一多肽具有总计258个氨基酸。11. 根据权利要求1的组合物，其中所述第一多肽在多肽的N末端包括SEQIDNO:3所示 的氨基酸序列。12. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物不进一步包含与SEQIDNO: 2具有少于 100%序列同一性的多肽。13. 根据权利要求1的组合物，其中所述第二多肽具有总计261个氨基酸。14. 根据权利要求1的组合物，其中所述第二多肽在多肽的N末端包括SEQIDN0:3所示 的氨基酸序列。15. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物包含至多两种脂质化的多肽。16. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物不进一步包含与SEQIDNO: 1具有少于 100%序列同一性的多肽。17. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物不进一步包含与SEQIDNO: 2具有少于 100%序列同一性的多肽。18. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物不包含杂合蛋白。19. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物不包含嵌合蛋白。20. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物不包含融合蛋白。21. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物不是冻干的。22. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物是液体组合物。23. 在人中诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseriameningitidis)血清群B亚家族A菌 株和针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株的杀菌免疫应答的方法，其包括向人施用 有效量的组合物，所述组合物包含 a) 包含SEQIDNO: 1所示的氨基酸序列的第一脂质化多肽，和 b) 包含SEQIDN0:2所示的氨基酸序列的第二脂质化多肽。24. 根据权利要求23的方法，其中所述组合物进一步包含聚山梨酯80、铝、组氨酸和氯 化钠。25. 根据权利要求23的方法，其中针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株的免疫 应答比针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株的免疫应答更高。26. 根据权利要求23的方法，其中在人中的针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌 株的免疫应答包含比在人中的针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株的杀菌效价更 尚的杀菌效价。27. 根据权利要求23的方法，其中所述组合物诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B 八22^56、824、844菌株中任一种、或其任何组合的杀菌免疫应答。28. 根据权利要求23的方法，其中所述组合物诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B 824、816、844^22、803、809^12^19^05^07、8153菌株中任一种、或其任何组合的杀菌免 疫应答。29. 根据权利要求23的方法，其中所述方法进一步包括向人施用针对人乳头瘤病毒的 免疫原性组合物。30. 根据权利要求29的方法，其中所述针对人乳头瘤病毒的免疫原性组合物在施用所 述针对脑膜炎奈瑟氏球菌的组合物的24小时内施用于人。31. 根据权利要求29的方法，其进一步包括诱导针对人乳头瘤病毒6型、11型、16型、18 型中任一种、或其任何组合的免疫应答。32. 根据权利要求23的方法，其中所述方法进一步包括向人施用针对白喉、破伤风、百 日咳和脊髓灰质炎的免疫原性组合物。33. 根据权利要求32的方法，其中所述针对白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎的免疫 原性组合物在施用所述针对脑膜炎奈瑟氏球菌的组合物的24小时内施用于人。34. 根据权利要求32的方法，其中所述方法进一步包括在人中诱导针对白喉、破伤风、 百日咳、脊髓灰质炎中的任一种、或其任何组合的免疫应答。35. 在人中诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B表达B153因子Η结合蛋白的菌株的杀菌 免疫应答的方法，其包括向人施用有效量的组合物，所述组合物包含 a) 包含SEQIDNO: 1所示的氨基酸序列的第一脂质化多肽，和 b) 包含SEQIDN0:2所示的氨基酸序列的第二脂质化多肽。
【专利摘要】在一方面，本发明涉及包括具有SEQ？ID？NO:1所示的序列的第一多肽和具有SEQ？ID？NO:2所示的序列的第二多肽的组合物。在一个实施方案中，组合物包括约120μg/ml的包括SEQ？ID？NO:1中所示的氨基酸序列的第一多肽、120μg/ml的包括SEQ？ID？NO:2中所示的氨基酸序列的第二多肽、与所述第一多肽约2.8摩尔比的聚山梨酯80、与所述第二多肽约2.8摩尔比的聚山梨酯80、约0.5？mg/ml铝、约10mM组氨酸、和约150mM氯化钠。在一个实施方案中，一剂量的组合物为总体积约0.5？ml。在一个实施方案中，两剂量的组合物诱导人中针对不同的异源超家族A和超家族B菌株的杀菌效价。
【IPC分类】A61K39/095
【公开号】CN105492021
【申请号】CN201480049420
【发明人】A.S.安德森, R.G.阿鲁穆格哈姆, J.E.法利, L.D.弗勒特彻尔, S.哈里斯, K.U.詹森, T.R.乔内斯, L.克汉德科, B.劳恩, J.L.佩雷兹, G.W.兹洛特尼克
【申请人】辉瑞公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年8月27日
【公告号】CA2923129A1, EP3041502A2, US20150071959, WO2015033251A2, WO2015033251A3
【专利说明】脑膜炎奈瑟氏球菌组合物及其方法
[0001] 相关申请的交叉引用 本申请要求提交于2013年9月8日的美国临时专利申请序列号61/875,068、提交于2014 年1月13日的美国临时专利申请序列号61 /926，717和提交于2014年5月6日的美国临时专利 申请序列号61/989,432的权益，所述申请W其整体通过引用并入本文。 发明领域
[0002] 本发明设及脑膜炎奈瑟氏球菌(化isseria meningitidis)组合物及其方法。
[0003] 发明背景 脑膜炎奈瑟氏球菌是可W引起脈毒症、脑膜炎和死亡的革兰氏阴性的有芙膜的细菌。 脑膜炎奈瑟氏球菌基于化学上和抗原性上不同的多糖芙膜可W归类为至少12个血清群(包 括血清群A、B、C、2犯、山1、1(、1^、胖-135心、￥和2)。具有五种血清群(4、8、(：、￥和化35)的菌株导 致大部分疾病。
[0004] 脑膜炎球菌性脑膜炎是破坏性疾病，其可W在尽管使用抗生素的情况下在数小时 内杀死儿童和青年人。存在针对脑膜炎球菌血清群A、B、C、Y和W135和/或X的改进的免疫原 性组合物的需求。
[000引目前，针对广泛的MnB分离株的有效的交叉保护性疫苗或组合物仍未市售。例如， 截至目前关于批准的针对血清群B疾病提供保护的多组分组合物的公开结果，尚未证明针 对表达异源LP2086 (f皿P)变体的多个菌株的直接杀菌免疫应答，至少在青少年中是运 样。至多，截至目前的关于针对血清群B疾病提供保护的多组分组合物的公开结果似乎显示 针对LP2086 (f皿P)变体的免疫原性，所述LP2086 (f皿P)变体与多组分组合物中的LP2086 (f皿P)变体同源。因此，当决定针对一组不同的或异源的脑膜炎球菌菌株(例如，代表不同 的地理区域）的现实疫苗覆盖时，需要针对不同MnB分离株的有效的交叉反应疫苗或组合 物。
[0006] 发明概述 为了实现运些和其他需求，本发明设及脑膜炎奈瑟氏球菌组合物及其方法。
[0007] 在一方面，本发明设及组合物，其包括约120 iig/ml的包括SEQ ID NO: 1中所示的 氨基酸序列的第一脂质化的多肤、120 iig/ml的包括SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的 第二脂质化多肤、与所述第一多肤约2.8摩尔比的聚山梨醋80、与所述第二多肤约2.8摩尔 比的聚山梨醋80、约0.5 mg/ml侣、约10 mM组氨酸、和约150 mM氯化钢。在一个实施方案中， 第一剂量为总体积中约0.5 ml。在一个实施方案中，组合物诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血 清群B的杀菌免疫应答。在一个实施方案中，组合物诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群A、C、 29E、H、I、K、L、W-135、X、Y或Z的杀菌免疫应答。在一个实施方案中，组合物不进一步包括与 SEQ ID NO: 1具有少于100%序列同一性的多肤。在一个实施方案中，组合物不进一步包括 与SEQ ID NO: 2具有少于100%序列同一性的多肤。在一个实施方案中，第一多肤具有总计 258个氨基酸。在一个实施方案中，第二多肤具有总计261个氨基酸。在一个实施方案中，组 合物诱导运样的血清免疫球蛋白的杀菌效价，所述杀菌效价为在接受第一剂量后的人中比 在接受第一剂量前的人中的血清免疫球蛋白的杀菌效价高至少2倍，其中杀菌效价中的所 述增加在相同条件下在血清杀菌测定中使用人补体来测量。在一个实施方案中，第一脂质 化多肤由SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列组成。在一个实施方案中，第二脂质化多肤由SEQ ID N0:2所示的氨基酸序列组成。
[0008] 在另一方面，本发明设及在人中诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫应答的方法。 所述方法包括向人施用第一剂量和第二剂量的有效量的组合物，所述组合物包括120 yg/ ml的包括SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列的第一脂质化的多肤、120 μg/ml的包括SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的第二脂质化多肤、与所述第一多肤2.8摩尔比的聚山梨醋 80、与所述第二多肤2.8摩尔比的聚山梨醋80、0.5 111肖/1111侣、10 11^组氨酸、和150 11^氯化 钢。在一个实施方案中，组合物的剂量具有0.5 ml的总体积。在一个实施方案中，人至多施 用两个剂量的组合物。在一个实施方案中，人不进一步施用加强剂量的组合物。在一个实施 方案中，人施用第=剂量的组合物。在一个实施方案中，第=剂量后人不进一步施用加强剂 量的组合物。在一个实施方案中，人不进一步施用第四剂量的组合物。在一个实施方案中， 第=剂量在第一剂量后约6个月的时期内施用给人。在一个实施方案中，第二剂量在第一剂 量后至少30天施用。在一个实施方案中，方法进一步包括施用第=剂量的组合物，其中所述 第=剂量在第二剂量后至少90天施用。在一个实施方案中，组合物诱导运样的血清免疫球 蛋白的杀菌效价，所述杀菌效价为在接受第一剂量后的人中比在接受第一剂量前的人中的 血清免疫球蛋白的杀菌效价高至少2倍，当在相同条件下在血清杀菌测定中使用人补体来 测量时。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株(其与表 达A05的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株异源)是杀菌的。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎 奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株(其与表达BOl的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株异源)是杀菌的。 在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株(其与脑膜炎奈 瑟氏球菌菌株M98250771异源)是杀菌的。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟氏 球菌血清群B亚家族B菌株(其与脑膜炎奈瑟氏球菌菌株CDC1127异源)是杀菌的。在一个优 选的实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株(其与脑膜炎奈瑟 氏球菌菌株CDC1573异源)是杀菌的。在一个实施方案中，第一多肤具有总计258个氨基酸。 在一个实施方案中，第二多肤具有总计261个氨基酸。在一个实施方案中，第一脂质化多肤 由SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列组成。在一个实施方案中，第二脂质化多肤由SEQ ID NO: 2所示的氨基酸序列组成。
[0009] 在一方面，本发明设及组合物，其包括60 iig的包括SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸 序列的第一脂质化的多肤、60 iig的包括SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的第二脂质化 多肤、与所述第一多肤2.8摩尔比的聚山梨醋80、与所述第二多肤2.8摩尔比的聚山梨醋80、 0.5 mg/ml侣、10 mM组氨酸、和150 mM氯化钢，其中所述组合物具有约0.5 ml的总体积。
[0010] 在一个实施方案中，组合物诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株(其 与表达A05的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株异源）的杀菌免疫应答。在一个实施方案中，组合物诱 导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株(其与表达BOl的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株异 源）的杀菌免疫应答。在一个实施方案中，组合物诱导运样的血清免疫球蛋白的杀菌效价， 所述杀菌效价为在接受第一剂量后的人中比在接受第一剂量前的人中的血清免疫球蛋白 的杀菌效价高至少2倍，当在相同条件下在血清杀菌测定中使用人补体来测量时。在一个实 施方案中，组合物不进一步包括与SEQ ID NO: 2具有少于100%序列同一性的多肤。在一个 实施方案中，组合物不进一步包括与SEQ ID N0:2具有少于100%序列同一性的多肤。在一 个实施方案中，第一多肤具有总计258个氨基酸。在一个实施方案中，第二多肤具有总计261 个氨基酸。在一个实施方案中，第一脂质化多肤由SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列组成。在 一个实施方案中，第二脂质化多肤由SEQ ID N0:2所示的氨基酸序列组成。
[0011] 附图简述 图1 一实现hSBA效价 > 化09的受试者比例。hSBA =使用人补体的血清杀菌测定;LLOQ = 定量下限。
[0012] 图2-用rLP2086免疫后实现hSBA效价中针对普林斯顿大学爆发菌株和个别人个 体的UCSB爆发菌株的4x升高的受试者的百分比（研究B1971012-描述于实施例5、实施例 6)。在临床研究B1971012中用二价rLP2086免疫的9个人受试者的血清样品在探索性hSBA中 使用来自普林斯顿大学和来自UCSB的MnB爆发菌株进行评价。参见实施例9。
[001引序列标识符 SEQ ID NO: 1表示重组脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B，2086变体A05多肤抗原的氨基酸序 列。
[0014] SEQ ID NO: 2表示重组脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B，2086变体BOl多肤抗原的氨基 酸序列。
[001引 SEQ ID NO:3表示在沈Q ID NO: 1和沈Q ID NO: 2的位置1-4处的氨基酸残基。
[0016] 沈Q ID N0:4表示重组奈瑟氏球菌亚家族A LP2086多肤(rLP2086) (A05)多肤抗 原的N末端的氨基酸序列。
[0017] SEQ ID N0:5表示奈瑟氏球菌亚家族A LP2086 M98250771多肤(A05)多肤抗原的N 末端的氨基酸序列。
[0018] SEQ ID NO:6表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体B153的氨基酸序列。
[0019] SEQ ID NO:7表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体A04的氨基酸序列。
[0020] SEQ ID NO:8表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体A05的氨基酸序列。
[0021 ] SEQ ID NO:9表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体A12的氨基酸序列。
[0022] SEQ ID NO: 10表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体A22的氨基酸序列。
[0023] SEQ ID NO: 11表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体B02的氨基酸序列。
[0024] SEQ ID NO: 12表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体B03的氨基酸序列。
[00巧]SEQ ID NO: 13表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体B09的氨基酸序列。
[0026] SEQ ID NO: 14表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体B22的氨基酸序列。
[0027] SEQ ID NO: 15表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体B24的氨基酸序列。
[0028] SEQ ID NO: 16表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体B44的氨基酸序列。
[0029] SEQ ID NO: 17表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体B16的氨基酸序列。
[0030] SEQ ID NO: 18表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体A07的氨基酸序列。
[0031 ] SEQ ID NO: 19表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体A19的氨基酸序列。
[0032] SEQ ID NO:20表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体A06的氨基酸序列。
[0033] SEQ ID NO:21表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体A15的氨基酸序列。
[0034] SEQ ID NO:22表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体A29的氨基酸序列。
[00巧]SEQ ID NO:23表示脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B,2086变体B15的氨基酸序列。
[0036] 发明详述 本发明人令人惊奇地发现包括包含SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列的第一脂质化 多肤和包含SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的第二脂质化多肤的组合物。组合物具有在 人中可接受的安全性概况且组合物令人惊奇地在人中引发针对至少超过两种不同的脑膜 炎奈瑟氏球菌菌株的广泛的交叉反应性杀菌免疫应答。
[0037] 本发明人进一步发现用异源LP2086 (因子H结合蛋白（f皿P))亚家族A和B疫苗的2 剂量施用时间表和3剂量施用时间表令人惊奇地在人受试者中W高比例产生针对来自脑膜 炎奈瑟氏球菌血清群B的测试菌株的> 8的hSBA效价。当相比于2剂量施用时间表时，3剂量 施用时间表可W提供在人中针对不同的MnB临床菌株的最广泛的保护。
[0038] 本发明人还令人惊奇地发现在同时施用rLP2086组合物和针对人乳头状瘤病毒 (HPV4)的四价免疫原性组合物后产生针对人乳头状瘤病毒和脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B的 强力的免疫应答。例如，同时施用rLP2086组合物和HPV4组合物产生至少针对表达甜BP(其 与rLP2086组合物中的那些f皿P异源）的脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B测试菌株的免疫应答。 此类异源测试菌株包括表达A22巧BP、A56 f皿P、B24 f皿P或B44 f皿P的野生型脑膜炎奈 瑟氏球菌血清群B菌株，其与rLP2086组合物中的円证P各自异源。参见W0/2012/032489、WO/ 2013/132452、美国专利公开号US20120093852和美国专利公开号US20130243807,其描述了 变体甜BP蛋白，尤其包括A22巧BP、A56 f皿P、B24 f皿P和B44 f皿P。运些参考文献各自W 其整体通过引用并入。同时施用还令人惊奇地产生至少针对HPV 6型、11型、16型和/或18型 的免疫应答。同时施用rLP2086组合物和HPV4组合物后针对HPV型的免疫应答当相比于在不 存在rLP2086组合物的情况下由施用HPV4组合物产生的免疫应答时是不差的 (noninferior)。
[0039] 此外，本发明人令人惊奇地发现在同时施用rLP2086组合物和针对白喉、破伤风、 百日咳和脊髓灰质炎的组合物后产生针对白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎和脑膜炎奈 瑟氏球菌血清群B的强力的免疫应答。例如，同时施用rLP2086组合物和RE阳VAX组合物产生 至少针对表达巧BP(其与rLP2086组合物中的那些甜BP异源）的脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B 测试菌株的免疫应答。同时施用还令人惊奇地产生至少针对REPEVAX中9种抗原的免疫应 答：白喉、破伤风、百日咳类毒素、百日咳丝状血凝素、百日咳百日咳杆菌粘附素、百日咳菌 毛凝集原（fimbrial agglutinogen)2 + 3型、脊髓灰质炎病毒1型、脊髓灰质炎病毒2型、脊 髓灰质炎病毒3型。同时施用rLP2086组合物和RE阳VAX组合物后针对RE阳VAX抗原的免疫应 答当相比于在不存在rLP2086组合物的情况下由施用REPEVAX组合物产生的免疫应答时是 不差的（noninferior)。
[0040] 此外，本发明人令人惊奇地发现rLP2086组合物诱导针对表达巧BP B153变体的 ST409脑膜炎奈瑟氏球菌的杀菌免疫应答。例如，在使用人补体的血清杀菌测定(hSBA)中发 现当接触人二价rLP2086组合物免疫血清时，表达f皿P B153变体的菌株易于被杀灭。
[0041 ] 组合物和疫苗 在一方面，本发明设及针对脑膜炎奈瑟氏球菌的组合物。组合物包括具有SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列的第一脂质化多肤和具有SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的第二 脂质化多肤。
[0042] 本发明人令人惊奇地发现诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B的多个菌株的有效 的广泛保护性免疫应答的单一脑膜炎奈瑟氏球菌多肤组分。因此，在一个实施方案中，组合 物不包括融合蛋白。在一个实施方案中，组合物不包括嵌合蛋白。在一个实施方案中，组合 物不包括杂合蛋白。在一个实施方案中，组合物不进一步包括肤片段。在另一实施方案中， 组合物不进一步包括不是f皿P的奈瑟氏球菌多肤。例如，在一个实施方案中，组合物不包括 PorA蛋白。在另一个实施方案中，组合物不包括化dA蛋白。在另一实施方案中，组合物不进 一步包括奈瑟氏球菌肝素结合抗原(NHBA)。在另一实施方案中，组合物不进一步包括奈瑟 氏球菌外膜囊泡(0MV)。在一个优选的实施方案中，除了第一多肤和第二多肤外，组合物不 进一步包括抗原。
[0043] 在另一方面，本发明人令人惊奇地发现衍生自至少两种脑膜炎奈瑟氏球菌血清群 B菌株的多肤抗原诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B的多个菌株的有效的广泛保护性免 疫应答。因此，在一个实施方案中，组合物不进一步包括不是衍生自脑膜炎奈瑟氏球菌血清 群B亚家族A M98250771菌株和/或脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B CDC1573菌株的多 肤。
[0044] 在一个实施方案中，组合物不进一步包括与SEQ ID NO: 1具有少于100%序列同一 性的多肤。在一个实施方案中，组合物不进一步包括与SEQ ID NO: 2具有少于100%序列同 一性的多肤。在一个实施方案中，组合物不进一步包括与SEQ ID NO: 1和/或SEQ ID NO: 2 的全长具有少于100%序列同一性的多肤。
[004引在一个实施方案中，组合物进一步包括聚山梨醋80、侣、组氨酸和氯化钢。在一方 面，组合物包括约60 iig的包括SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列的第一脂质化的多肤、约 60 iig的包括SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的第二脂质化多肤、与每一多肤2.8摩尔比 的聚山梨醋80、作为憐酸侣的0.5 mg侣/ml、10 mM组氨酸、和150 mM氯化钢，其中所述组合 物优选具有约0.5 ml的总体积。
[0046] 在一方面，组合物包括约120 μg/ml的包括SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列的 第一脂质化的多肤、约120 μg/ml的包括SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的第二脂质化 多肤、与每一多肤2.8摩尔比的聚山梨醋80、作为憐酸侣的0.5 mg侣/ml、10 mM组氨酸、和 150 mM氯化钢。
[0047] 在进一步的方面，组合物包括约a)60 Jig的包括SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序 列的第一脂质化的多肤;b)60 iig的包括SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的第二脂质化 多肤;c)18 yg聚山梨醋80;d)250 yg侣;e)780 yg组氨酸，和;f)4380 yg氯化钢。
[0048] 在一个示例性实施方案中，组合物包括约60 iig的由SEQ ID NO: 1中所示的氨基 酸序列组成的第一脂质化的多肤、约60 yg的由SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列组成的 第二脂质化多肤、与第一脂质化多肤和与第二脂质化多肤2.8摩尔比的聚山梨醋80、0.5 mg/ml憐酸侣、10 mM组氨酸、和150 mM氯化钢，其中所述组合物具有约0.5 ml的总体积。在 示例性的实施方案中，组合物是无菌等渗缓冲的液体悬浮液。在示例性的实施方案中，组合 物具有P册.0。在示例性的实施方案中，第一多肤和第二多肤吸附在侣上。
[0049] 在一个实施方案中，组合物具有约0.5 ml的总体积。在一个实施方案中，组合物的 第一剂量具有约0.5 ml的总体积。"第一剂量"指在第0日施用的组合物的剂量。"第二剂量" 或"第=剂量"指在第一剂量后施用的组合物的剂量，其可W是或可W不是与所述第一剂量 相同的量。
[0050] 在使用第一剂量给人后，组合物是免疫原性的。在一个实施方案中，第一剂量为总 体积中约0.5 ml。
[0051] 组合物诱导运样的血清免疫球蛋白的杀菌效价，所述杀菌效价为在接受第一剂量 后的人中比在接受第一剂量前的人中的血清免疫球蛋白的杀菌效价高至少1倍、优选高至 少2倍，当在相同条件下在使用人补体的血清杀菌测定化SBA)中测量时。
[0052] 杀菌效价或杀菌免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B。在优选的实施方案 中，杀菌效价或杀菌免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株且针对脑膜炎 奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株。最优选的，杀菌效价或杀菌免疫应答至少针对脑膜炎奈 瑟氏球菌血清群B亚家族B，BO1菌株。
[0053] 在一个实施方案中，组合物诱导运样的血清免疫球蛋白的杀菌效价，所述杀菌效 价为在接受第一剂量的组合物后的人中比在接受所述剂量前的人中的血清免疫球蛋白的 杀菌效价高至少1倍、诸如例如，至少1.01倍、1.1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8 倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、或16倍，当在相同条件下在血清杀菌测定中使 用人补体来测量时。
[0054] 在一个实施方案中，组合物是免疫原性组合物。在一个实施方案中，组合物是用于 人的免疫原性组合物。在另一个实施方案中，组合物是疫苗。"疫苗"指包括抗原的组合物， 其含有诱导对于该抗原特异性的免疫应答的至少一种表位。疫苗可W通过皮下、经口、口 鼻、或鼻内施用途径直接施用于受试者。优选地，肌内施用疫苗。在一个实施方案中，组合物 是人疫苗。在一个实施方案中，组合物是针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物。
[0055] 在一个实施方案中，组合物是液体组合物。在一个优选的实施方案中，组合物是液 体悬浮液组合物。在另一个优选的实施方案中，组合物不是冻干的。
[0056] 第一多肤 在一个实施方案中，组合物包括具有SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列的第一多肤。在一 个优选的实施方案中，组合物包括约60 iig的包含SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列的第一多 肤，其中所述组合物优选具有0.5 ml的总体积。在另一个实施方案中，组合物包括约120 y g/ml的包含SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列的第一多肤。多肤是来自脑膜炎奈瑟氏球菌菌 株M98250771的经修饰的因子H结合蛋白（円证P)。円证P的描述公开于W02012032489和美国专 利公开US 2012/0093852,其各自W其整体通过引用并入。多肤是在多肤的S个位置共价连 接的=种主要脂肪酸C16:0、C16:1和C18:l的N末端脂质化的。第一多肤包括总计258个氨基 酸。
[0057] 第一多肤包括在所述多肤的N末端区域引入的两个修饰，当相比于来自脑膜炎奈 瑟氏球菌菌株M98250771的对应野生型序列时。第二位置的甘氨酸作为引入克隆位点的结 果而加入。第二修饰包括缺失四个氨基酸。因此，在一个实施方案中，第一多肤包括在N末端 的C-G-S-S序列（SEQ ID NO: 3)。参见沈Q ID NO: 1，前四个氨基酸残基。
[0058] 第一多肤序列和野生型奈瑟氏球菌序列之间的N末端序列差异如下。因此，在一个 实施方案中，第一多肤包括SEQ ID N0:1所示的氨基酸序列的至少前2、3、4、5、6、7、8、9、10、 11、12、13个或更多个氨基酸残基。优选地，第一多肤包括SEQ ID NO: 1的至少前4个、更优选 至少前6个、且最优选至少前8个氨基酸残基。
[0059] 在一个实施方案中，第一多肤包括SEQ ID NO: I所示的氨基酸序列。在一个实施方 案中，第一多肤具有总计258个氨基酸。在一个实施方案中，第一多肤不包括与SEQ ID NO: 1 具有少于100%序列同一性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，第一多肤由SEQ ID NO: 1 所示的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，第一多肤包括氨基酸序列KDN。参见例如， SEQ ID NO: 1的氨基酸残基73-75。在另一个实施方案中，第一多肤在多肤的N末端包括SEQ ID N0:3所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，第一多肤在多肤的N末端包括SEQ ID NO: 4所示的氨基酸序列。
[0060] 在优选的实施方案中，第一多肤使用本领域已知的标准技术在重组宿主细胞中容 易地表达。在另一个优选的实施方案中，第一多肤包括SEQ ID NO: 1的N和/或C结构域上的 杀菌表位。在一个实施方案中，第一多肤包括SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列的至少前4、 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、 32、33、34、 35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、 57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、 82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100个氨基酸残基。优选 地，第一多肤包括SEQ ID NO: 1的至少前2个、更优选至少前4个、且最优选至少前8个氨基酸 残基。
[0061] 在一个实施方案中，第一多肤包括SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列的至少最后 4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、 56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、 81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99 或 100 个氨基酸残基。
[0062] 第二多肤 在一个实施方案中，组合物包括具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的第二多肤。在一 个优选的实施方案中，组合物包括约60 iig的包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的第二多 肤，其中所述组合物优选具有0.5 ml的总体积。在另一个实施方案中，组合物包括120 yg/ ml的包含SEQ ID N0:2所示的氨基酸序列的第二多肤。多肤是来自脑膜炎奈瑟氏球菌菌株 CDC1573的因子H结合蛋白WHBP)。巧BP的描述公开于W02012032489和美国专利公开US 2012/0093852,其各自W其整体通过引用并入。多肤是在多肤的=个位置共价连接的=种 主要脂肪酸C16:0、C16:1和C18:1的N末端脂质化的。第二多肤包括总计261个氨基酸。在一 个实施方案中，第二多肤包括在N末端的C-G-S-S序列（SEQ ID NO: 3)。参见SEQ ID N0:2的 前四个氨基酸残基。
[0063] 在一个实施方案中，第二多肤包括SEQ ID N0:2所示的氨基酸序列。在一个实施方 案中，第二多肤具有总计261个氨基酸。在一个实施方案中，第二多肤由SEQ ID NO:2所示的 氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，第二多肤不进一步包括与SEQ ID N0:2具有少于 100%序列同一性的多肤。在优选的实施方案中，第一多肤和第二多肤包括在各个多肤的N 末端的C-G-S-S (沈Q ID NO: 3)序列。
[0064] 在优选的实施方案中，第二多肤使用本领域已知的标准技术在重组宿主细胞中容 易地表达。在另一个优选的实施方案中，第二多肤包括SEQ ID NO: 2的N和/或C结构域上的 杀菌表位。在一个实施方案中，第二多肤包括SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的至少前4、 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、 32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、 57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、 82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100个氨基酸残基。优选 地，第二多肤包括SEQ ID N0:2的至少前2个、更优选至少前4个、且最优选至少前8个氨基酸 残基。
[0065] 在一个实施方案中，第一多肤包括SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的至少最后 4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、 56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、 81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99 或 100 个氨基酸残基。
[0066] 聚山梨醋80 聚山梨醋SO(PS-SO)是非离子表面活性剂。使用体外基于单克隆抗体的效价测定的加 速的稳定性研究证明在最终制剂中W更高摩尔比的PS-8化kMnB rLP2086蛋白的亚家族B蛋 白的不稳定性。用不同比例的PS-80的进一步实验证明P0S-80与MnB rLP2086蛋白的保留效 力的最优摩尔比为大约2.8 ± 1.4。
[0067] 组合物中PS-80的浓度取决于PS-80与多肤的摩尔比。在一个实施方案中，组合物 包括PS-80与第一多肤和与第二多肤的2.8± 1.4的摩尔比。在一个实施方案中，组合物包括 PS-80与第一多肤和与第二多肤的2.8± 1.1的摩尔比。在一个实施方案中，组合物包括至少 1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2或3.3的口5-80与多肤的摩 尔比。优选地，组合物包括PS-80与多肤的2.8摩尔比。
[0068] PS-80与多肤摩尔比通过从PS-80的测量浓度和测量的总多肤浓度的计算来确定， 其中两个值均用摩尔表示。例如，PS-80与蛋白摩尔比通过计算在最终药物中测量的PS-80 的浓度(例如，通过反向高压液相色谱(RP-册LC))对于测量的总蛋白浓度(例如，通过离子 交换高压液相色谱(IEX-HPLC))来确定，其中两个值均W摩尔表示。
[0069] RP-HPLC用于定量疫苗制剂中聚山梨醋80的浓度。去污剂的浓度通过皂化脂肪酸 部分来确定；聚山梨醋80通过在40°C下碱水解转化为游离油酸。样品通过RP-HPLC使用C18 柱分离且使用UV检测器在200nm波长定量。
[0070] 第一和第二多肤通过阴离子交换HPLC解析。rLP2086(f皿P)亚家族A和B蛋白W不 同保留时间洗脱且使用针对各个rLP2086蛋白参考材料生成的标准曲线定量。
[00川术语"摩尔比"和包括fHBP和PS-80的免疫原性组合物的描述进一步公开于 W02012025873和美国专利公开US 2013/0171194中，其各自W其整体通过引用并入。
[0072] 如本文所用的术语"摩尔比"指组合物中两种不同要素的摩尔数之比。在一些实施 方案中，摩尔比是去污剂摩尔与多肤摩尔之比。在一些实施方案中，摩尔比是PS-80摩尔与 多肤摩尔之比。在一个实施方案中，基于蛋白和聚山梨醋80浓度，摩尔比可W使用W下公式 计算：
[0073] 在一个实施方案中，组合物包括约 0.0015、0.0017、0.0019、0.0021、0.0023、 0.0025、0.0027、0.0029、0.0031、0.0033、0.0035、0.0037、0.0039、0.0041、0.0043、0.0045、 0.0047、0.0049、0.0051 mg/mL PS-80。优选地，组合物包括约0.0035 mg/mL PS-80。
[0074] 在另一个实施方案中，组合物包括约10 yg、ll yg、12 yg、13 yg、14 yg、15 yg、16 yg、17 yg、18 yg、19 yg、20 yg、21 yg、22 yg、23 yg、24 yg或25 yg PS-80。在优选的实 施方案中，组合物包括约18 yg PS-80。
[00巧]在另一个实施方案中，组合物包括范围为0.0005%-1%的PS-80。例如，PS-80浓度在 组合物中可 W为至少0.0005%、0.005%、0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07〇/〇、 0.08%、0.09%、0.10%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1 %或 1.1% PS-80。在优 选的实施方案中，组合物包括约0.07% PS-80。
[0076] 任何最小值可W与本文描述的任何最大值组合W限定范围。
[0077] 侣 组合物优选包括约0.5 mg/ml憐酸侣。在一个实施方案中，组合物包括作为憐酸侣的约 0.5 111肖侣/1111。4巧〇4^〇.5〇111肖/1111加入作为稳定剂^提供增强的可制备性和稳定性。该浓 度维持亚家族A和B蛋白与侣的结合(90%结合或更好）。
[0078] 生产憐酸侣的方法描述于美国专利公开US 2009/0016946,其通过引用W其整体 并入。
[0079] 在一个实施方案中，除侣之外，组合物不进一步包括多价阳离子。在一个实施方案 中，组合物不进一步包括Al (OH) 3或AKS化)3。
[0080] 赋形剂 在一个实施方案中，组合物包括组氨酸。在一个实施方案中，组合物包括氯化钢。组合 物优选包括约10 mM组氨酸和约150 ml氯化钢。在一个实施方案中，组合物包括10 mM组氨 酸和150 mM氯化钢。
[0081] 在另一个实施方案中，组合物包括约650 yg、660 yg、670 yg、680 yg、690 yg、700 yg、710 yg、720 yg、730 yg、740 yg、750 yg、760 yg、770 yg、780 yg、790 yg、800 yg、810 yg、820 yg、830 yg、840 yg或850 yg组氨酸。优选地，组合物包括约780 yg组氨酸。任何最 小值可W与本文描述的任何最大值组合W限定范围。
[0082] 在一个实施方案中，组合物包括tris、憐酸盐或班巧酸盐缓冲液。在优选的实施方 案中，组合物不包括tris缓冲液。在优选的中，组合物不包括憐酸盐缓冲液。在一个优选的 实施方案中，组合物不包括班巧酸缓冲液。在优选的实施方案中，组合物包括组氨酸缓冲 液。
[0083] 在优选的实施方案中，组合物的pH为6.0-7.0，最优选抑6.0。在一个实施方案中， 组合物的抑为至多6.1。
[0084] 杀菌活性 通过向人施用组合物诱导的免疫应答使用使用针对四种脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B (MnB)菌株的人补体的血清杀菌测定(hSBA)来测定。hSBA中使用的4种MnB菌株选自菌株库。 该菌株库代表从美国和欧洲系统性收集的临床相关脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B菌株的集 合。用于SBA的4种菌株中的两种来自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B LP2086(f皿P)亚家族A，且 4种菌株中的另巧巾来自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B LP2086(f皿P)亚家族B。
[0085] 针对所有测试菌株尤其是表达具有与第一多肤异源的序列的脂蛋白2086变体的 菌株的高比例的hSBA应答表明组合物是广泛保护性疫苗且两剂量足W赋予至少针对脑膜 炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株的高血清保护。
[0086] 针对所有测试菌株尤其是表达具有与第一多肤和第二多肤两者异源的序列的脂 蛋白2086变体的菌株的高比例的hSBA应答表明组合物是广泛保护性疫苗且在6个月时期内 的至少3次剂量足W赋予针对表达rLP2086(FHBP)的脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A和/ 或亚家族B的高血清保护。
[0087] 在一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086(f皿P)亚家族A菌株。在一个实施方案中， hSBA菌株为表达与表达A05的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株异源的脂蛋白2086变体的LP2086 (f皿P)亚家族A菌株。例如，在一个实施方案中，hSBA菌株为表达与菌株M98250771异源的脂 蛋白2086变体的LP2086(円证P)亚家族A菌株。在一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086(円证P) A22菌株。在另一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086(f皿P)A56菌株。在进一步的实施方案 中，hSBA菌株为LP2086 (円证P) A22和LP2086 (円证P) A56菌株。在另一个实施方案中，hSBA 菌株为LP2086 A04菌株。在一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086 A05菌株。在一个实施方案 中，hSBA菌株为LP2086 A12菌株。在一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086 A22菌株。在一个 实施方案中，hSBA菌株为LP2086 A12菌株。在一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086 A04菌 株。在一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086 A19菌株。在一个实施方案中，hSBA菌株为 LP2086 A07菌株。在进一步的实施方案中，hSBA菌株包括422、412、419、405和407或其任何 组合。在一个实施方案中，hSBA菌株包括A06、Al 5和A29或其任何组合。
[0088] 在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株(其与 表达A05的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株异源)是杀菌的。在一个实施方案中，免疫应答为针对脑 膜炎奈瑟氏球菌血清群B A22菌株。在一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌 血清群B A56菌株。在一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B A06菌 株。在一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B Al5菌株。在一个实施 方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B A29菌株。在一个实施方案中，免疫应 答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B A62菌株。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈 瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株(其与脑膜炎奈瑟氏球菌菌株M98250771异源)是杀菌的。在 一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株是杀菌的，所述 脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株表达包括具有与第一多肤至少80%、81%、82%、83%、 84〇/〇、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的 氨基酸序列的因子H结合蛋白。在另一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血 清群B亚家族A菌株是杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株表达包括具有与 由脑膜炎奈瑟氏球菌菌株M98250771表达的因子H结合蛋白至少80%、81%、82%、83%、84〇/〇、 85〇/〇、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基 酸序列的因子H结合蛋白。在优选的实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群 B亚家族A菌株是杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株表达包括具有与由脑 膜炎奈瑟氏球菌菌株M98250771表达的因子H结合蛋白至少80%、更优选至少84%同一性的 氨基酸序列的因子H结合蛋白。
[0089] 在另一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株是 杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株表达包括具有与第一多肤至多81%、 82〇/〇、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100〇/〇 同一性的氨基酸序列的因子H结合蛋白。在另一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟 氏球菌血清群B亚家族A菌株是杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株表达包 括具有与由脑膜炎奈瑟氏球菌菌株M98250771表达的因子H结合蛋白至多81%、82%、83%、 84〇/〇、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的 氨基酸序列的因子H结合蛋白。在优选的实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血 清群B亚家族A菌株是杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株表达包括具有与 由脑膜炎奈瑟氏球菌菌株M98250771表达的因子H结合蛋白至多85%、更优选至多99%同一性 的氨基酸序列的因子H结合蛋白。任何最小值可W与本文描述的任何最大值组合W限定范 围。
[0090] 在一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086(f皿P)亚家族B菌株。在一个实施方案中， hSBA菌株为表达与表达BOl的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株异源的脂蛋白2086变体的LP2086 (f皿P)亚家族B菌株。例如，在一个实施方案中，hSBA菌株为表达与菌株CDC1127异源的脂蛋 白2086变体的LP2086(f皿P)亚家族B菌株。在一个优选的实施方案中，hSBA菌株为表达与菌 株CDC1573异源的脂蛋白2086变体的LP2086(甜BP)亚家族B菌株。
[0091] 在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株(其与 表达BOl的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株异源)是杀菌的。在一个实施方案中，免疫应答为针对脑 膜炎奈瑟氏球菌血清群B B24菌株。在一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌 血清群B B44菌株。在一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B B16菌 株。在一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B B03菌株。在一个实施 方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B B09菌株。在一个实施方案中，免疫应 答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B B15菌株。在一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎 奈瑟氏球菌血清群B B153菌株。在一个实施方案中，免疫应答针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清 群B亚家族B菌株(其与脑膜炎奈瑟氏球菌菌株CDC1573异源)是杀菌的。在一个实施方案中， 免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株是杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌 血清群B亚家族B菌株表达包括具有与第二多肤至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、 88〇/〇、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 同一性的氨基酸序列的因子 H结合蛋白。在另一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株 是杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株表达包括具有与由脑膜炎奈瑟氏球 菌菌株 CDC1573 表达的因子 H 结合蛋白至少 80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89〇/〇、 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基酸序列的因子始吉合蛋 白。在优选的实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株是杀菌 的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株表达包括具有与由脑膜炎奈瑟氏球菌菌株 CDC1573表达的因子H结合蛋白至少80%同一性、更优选至少87%同一性的氨基酸序列的因子 H结合蛋白。在另一优选的实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B 菌株是杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株表达包括具有与由脑膜炎奈瑟 氏球菌菌株CDC1573表达的因子H结合蛋白100%同一性的氨基酸序列的因子H结合蛋白。
[0092] 在另一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株是 杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株表达包括具有与第二多肤至多81%、 82〇/〇、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100〇/〇 同一性的氨基酸序列的因子H结合蛋白。在另一个实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟 氏球菌血清群B亚家族B菌株是杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株表达包 括具有与由脑膜炎奈瑟氏球菌菌株CDC1573表达的因子H结合蛋白至多81%、82%、83%、84%、 85〇/〇、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的氨基 酸序列的因子H结合蛋白。在优选的实施方案中，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群 B亚家族B菌株是杀菌的，所述脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株表达包括具有与由脑 膜炎奈瑟氏球菌菌株CDC1573表达的因子H结合蛋白至多88%同一性、更优选至少99%同一性 的氨基酸序列的因子H结合蛋白。任何最小值可W与本文描述的任何最大值组合W限定范 围。
[0093] 在一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086(f皿P)B24菌株。在另一个实施方案中， hSBA菌株为LP2086(f皿P)B44菌株。在进一步的实施方案中，hSBA菌株包括LP2086 (f皿P) B24和LP2086 (円IBP) B44菌株。在一个实施方案中，hSBA菌株包括LP2086 (排BP) A22、 LP2086 (甜BP) A56、LP2086 (甜BP) B24和LP2086 (f皿P) B44菌株。在一个实施方案中， hSBA菌株包括B15。在一个实施方案中，hSBA菌株包括B153。在另一个实施方案中，hSBA菌株 为LP2086 B16菌株。在一个实施方案中，hSBA菌株为LP2086 B03菌株。在一个实施方案中， hSBA菌株为LP2086 B09菌株。在进一步的实施方案中，hSBA菌株包括824、816、844、803和 B09或其任何组合。在另一个实施方案中，hSBA菌株包括B24、B16、B44、A22、B03、B09、A12、 A19、A05和A07或其任何组合。在另一个实施方案中，hSBA菌株包括A06、A07、A12、A15、A19、 A29、B03、B09、B15和B16或其任何组合。
[0094] 在一个实施方案中，方法诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株和针对 脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株的免疫应答。优选地，免疫应答为针对脑膜炎奈瑟 氏球菌血清群B亚家族A菌株和针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株是杀菌的。
[0095] 在一个实施方案中，针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株的免疫应答比针 对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株的免疫应答更高。例如，在一个实施方案中，免疫 原性组合物诱导比针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株更高的针对脑膜炎奈瑟氏 球菌血清群B亚家族A菌株的杀菌效价，当在相同条件下测试时。在一个实施方案中，针对脑 膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株的更高的杀菌效价在针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫 原性组合物的第二剂量后30天内发生。在一个实施方案中，针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B 亚家族A菌株的更高的杀菌效价在针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物的第=剂量不 存在的情况下发生。
[0096] 在另一个实施方案中，针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株的免疫应答比 针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株的免疫应答更高。例如，在一个实施方案中，免 疫原性组合物诱导比针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株更高的针对脑膜炎奈瑟 氏球菌血清群B亚家族B菌株的杀菌效价，当在相同条件下测试时。在一个实施方案中，针对 脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株的更高的杀菌效价在针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免 疫原性组合物的第二剂量后30天内发生。在一个实施方案中，针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清 群B亚家族B菌株的更高的杀菌效价在针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物的第=剂 量不存在的情况下发生。
[0097] 效价 在一个实施方案中，当在hSBA中相同条件下 测量时，与施用一剂量的组合物前的人中 的杀菌效价相比，组合物诱导在人中杀菌效价的增加。在一个实施方案中，当在hSBA中相同 条件下测量时，与施用第一剂量的组合物前的人中的杀菌效价相比，将杀菌效价中的增加 与施用第一剂量的组合物前的人中的杀菌效价比较。在一个实施方案中，当在hSBA中相同 条件下测量时，与施用第二剂量的组合物前的人中的杀菌效价相比，在第二剂量组合物后 观察到效价的增加。在另一个实施方案中，当在hSBA中相同条件下测量时，与施用第S剂量 的组合物前的人中的杀菌效价相比，在第=剂量组合物后观察到杀菌效价的增加。
[0098] 在一个实施方案中，组合物在使用一剂量后的人中诱导杀菌效价，其中所述杀菌 效价比施用所述剂量前的人中的杀菌剂量高至少大于1倍，当在hSBA中在相同条件下测量 时。例如，当与在接受一剂量前的人中的杀菌效价相比时，杀菌效价可W在接受所述剂量的 组合物后的人中高至少1.01倍、1.1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、 11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、或16倍，当在hSBA中在相同条件下测量时。
[0099] 在一个实施方案中，"应答者"指人，其中组合物在施用一剂量后的人中诱导杀菌 效价，其中所述杀菌效价比施用所述剂量前的人中的杀菌效价高至少大于1倍。在优选的实 施方案中，应答者当与施用剂量前的人中的杀菌效价相比时实现hSBA效价中至少含4倍的 升高。此类应答者可W称为具有保护性效价。
[0100] 在一个实施方案中，hSBA效价为产生可测量的效果的血清样品的最高稀释度的倒 数。例如，在一个实施方案中，hSBA效价为运样的测试血清的最高2倍稀释度的倒数，所述最 高2倍稀释度导致相比于T30 C即值（即，在含有除测试血清外的所有测定组分的测定孔中 解育后存活的细菌数目；100%细菌存活)的MnB细菌的至少50%降低巧0%细菌存活）。
[0101] 在一个实施方案中，组合物诱导接受第一剂量的人中的杀菌效价，其比接受所述 第一剂量前的人中的杀菌效价高至少2倍(例如，比在不存在所述第一剂量的人中的杀菌效 价高），当在hSBA中在相同条件下测量时。在一个实施方案中，组合物诱导人中运样的杀菌 效价，所述杀菌效价比在接受第一剂量前的人中的杀菌效价高至少4倍，当在相同条件下在 使用人补体的人血清杀菌测定(hSBA)中来测量时。在一个实施方案中，组合物诱导人中运 样的杀菌效价，所述杀菌效价比在接受第一剂量前的人中的杀菌效价高至少8倍，当在相同 条件下在使用人补体的人血清杀菌测定化SBA)中来测量时。
[0102] 在优选的实施方案中，人血清补体来源于对于给定的SBA测试菌株具有低内在杀 菌活性的人。低内在杀菌活性指例如针对给定的SBA测试菌株至少低于1:4稀释的杀菌效 价。在一个实施方案中，人补体来源于针对给定的SBA测试菌株具有至少低于1:4诸如1:2稀 释度的hSBA效价的人，其中所述组合物没有施用给该人。
[0103] 人可W展示出在施用组合物诸如二价rLP2086组合物前低于1:4的hSBA效价，或人 可W展示出施用所述组合物前含1:4的hSBA效价。因此，在优选的实施方案和实施例中，向 人施用至少一剂量的组合物导致至少大于1:4的hSBA效价，诸如，例如，> 1:8的hSBA效价、 > 1:16的hSBA效价、和> 1:32的hSBA效价。本文描述的各个实施例包括评估具有> 1:8和/ 或> 1:16的hSBA效价的人受试者的比例，其中二价rLP2086组合物施用于人。此类大于1:4 的hSBA效价的优选的评估显示在人中诱导的保护即杀菌免疫应答与组合物相关。
[0104] 在一个实施方案中，人在施用第一剂量的组合物后具有等于或大于hSBA的定量下 限化L0Q)的hSBA效价。在另一个实施方案中，人在施用第二剂量的组合物后具有等于或大 于hSBA的化OQ的hSBA效价。在另一个实施方案中，人在施用第S剂量的组合物后具有等于 或大于hSBA的化OQ的hSBA效价。
[0105] 额外的免疫原性组合物 本发明令人惊奇地发现针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物可W与针对人乳头 瘤病毒(HPV)的免疫原性组合物施用，而不负面影响针对脑膜炎奈瑟氏球菌的杀菌应答。如 实施例7和实施例8中所解释，针对脑膜炎奈瑟氏球菌测试菌株的主要hSBA应答在施用有针 对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物和GARDASIL的人中，和在施用有针对脑膜炎奈瑟氏 球菌的免疫原性组合物和盐水的人中观察到。第=剂量的针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原 性组合物后约1个月观察到hSBA应答中的额外增加。
[0106] 此外，本发明人令人惊奇地发现与施用组合物前人中的免疫应答相比，施用针对 脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物和针对HPV的免疫原性组合物后的人中产生针对脑膜 炎奈瑟氏球菌和HPV两者的强力免疫应答。如实施例7和实施例8中所解释，如与施用免疫原 性组合物前的人中的效价相比，针对HPV的效价在施用针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性 组合物和GARDASIL后的人中增加。针对HPV的效价中的增加为至少大于1倍、至少2倍、至少3 倍、至少4倍或更高。
[0107] 因此，在一个实施方案中，方法包括在人中诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫应 答，其中所述方法进一步包括向人施用针对人乳头瘤病毒的免疫原性组合物。优选地，免疫 应答为针对脑膜炎奈瑟氏球菌是杀菌的。在一个优选的实施方案中，方法进一步包括诱导 针对HPV的免疫应答。在优选的实施方案中，方法进一步包括诱导针对人乳头瘤病毒6、11、 16和18型或其任何组合的免疫应答。在一个实施方案中，针对HPV的免疫原性组合物在施用 所述针对脑膜炎奈瑟氏球菌的组合物的24小时内施用于人。
[0108] 在一个实施方案中，方法包括在人中诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫应答，其 中所述方法进一步包括向人施用针对HPV的免疫原性组合物。优选地，免疫应答为针对脑膜 炎奈瑟氏球菌是杀菌的。在一个优选的实施方案中，方法进一步包括诱导针对HPV的免疫应 答。在优选的实施方案中，方法进一步包括诱导针对人乳头瘤病毒6、11、16和18型或其任何 组合的任一项的免疫应答。在一个实施方案中，针对人乳头瘤病毒的免疫原性组合物在施 用所述针对脑膜炎奈瑟氏球菌的组合物的24小时内施用于人。
[0109] 在另一方面，本发明令人惊奇地发现针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物可 W与针对白喉、破伤风、无细胞百日咳、和灭活的脊髓灰质炎病毒(CTTaP)的免疫原性组合物 一起施用，而不负面影响针对脑膜炎奈瑟氏球菌的杀菌应答。如实施例4中所解释的，在施 用针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物和REPEVAX的人中观察到对于脑膜炎奈瑟氏球 菌测试菌株的实质性hSBA应答。第S剂量的针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物后约 1个月观察到hSBA应答中的额外增加。
[0110] 此外，本发明人令人惊奇地发现与施用组合物前人中的免疫应答相比，施用针对 脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫原性组合物和针对dTaP的免疫原性组合物后的人中产生针对脑 膜炎奈瑟氏球菌和dTaP两者的强力免疫应答。如实施例4中所解释，如与施用免疫原性组合 物前的人中的效价相比，针对d T a P的效价在施用针对脑膜炎奈瑟氏球菌的组合物和 REPEVAX后的人中增加。针对dTaP的效价中的增加为至少大于1倍、至少2倍、至少3倍、至少4 倍或更高。
[01U]方法和施用 在一方面，本发明设及在人中诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫应答的方法。在另一 方面，本发明设及接种人的方法。在一方面，方法包括向人施用至少一剂量的上文描述的组 合物。在另一方面，方法包括向人施用至少第一剂量和第二剂量的上文描述的组合物。
[0112] 令人惊奇地，本发明人发现两剂量时间表的组合物诱导人中针对不同的异源亚家 族A和针对不同的异源亚家族B的杀菌效价。例如，两剂量时间表的上文所述组合物后，具有 >1:8的hSBA效价的人的百分比对于表达LP2086 (円证P) A22或LP2086 (円证P) A56的SBA 测试菌株为90 %或更高。参见实施例1。
[0113] 在一个实施方案中，第二剂量在第一剂量后至少20、30、50、60、100、120、160、170 或180天施用，且在第一剂量后至多250、210、200或190天施用。任何最小值可W与本文描述 的任何最大值组合W限定范围。
[0114] 在另一个实施方案中，第二剂量在第一剂量后约30天施用。在另一实施方案中，第 二剂量在第一剂量后约60天施用，诸如例如，W〇、2月免疫时间表。在另一实施方案中，第二 剂量在第一剂量后约180天施用，诸如例如，W〇、6月免疫时间表。在仍另一实施方案中，第 二剂量在第一剂量后约120天施用，诸如例如，W2、6月免疫时间表。
[0115] 在一个实施方案中，方法包括向人施用两剂量的组合物且至多两剂量。在一个实 施方案中，两剂量在第一剂量后约6个月的时期内施用。在一个实施方案中，方法不包括进 一步向人施用加强剂量。"加强剂量(booster)"指组合物对人的额外施用。向人施用至多两 剂量的组合物可能是有利的。此类利益包括例如利于人依从完整的施用时间表且利于时间 表的成本。
[0116] 在一个实施方案中，第一剂量和第二剂量在第一剂量后约25、30、40、50、60、70、 80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或200天，且至多400、390、380、370、 365、350、340、330、320、310、300、290、280、270、260、250、240、230、220、210或200天的时期 内施用于人。任何最小值可W与本文描述的任何最大值组合W限定范围。
[0117] 在一个实施方案中，第一剂量和第二剂量经过约30天的时期施用于人。在另一个 实施方案中，第一剂量和第二剂量经过约60天的时期施用于人。在另一个实施方案中，第一 剂量和第二剂量经过约180天的时期施用于人。
[011引=个剂量 本发明人进一步令人惊奇地发现=剂量时间表的组合物比两剂量时间表在更高百分 比的人中诱导针对表达异源LP2086(f皿P)亚家族B菌株的菌株的更广泛的杀菌效价。例如， 两剂量时间表的上文所述组合物后，具有含1:8的hSBA效价的人的百分比对于SBA测试菌株 LP2086 (円证P) B24和LP2086 (円证P) B44为65%或更高。S剂量时间表的上文所述组合物 后，具有含1:8的hSBA效价的人的百分比对于SBA测试菌株B24和B44为86%或更高。参见实施 例1。
[0119] 因此，在一个实施方案中，=剂量时间表的组合物比两剂量时间表在更高百分比 的人中诱导针对表达与第一和/或第二多肤异源的LP2086(f皿P)的多个菌株的杀菌效价。
[0120] 在一个实施方案中，方法包括向人施用=剂量的组合物。在另一个实施方案中，方 法包括向人施用至多=剂量的组合物。在一个实施方案中，=剂量在第一剂量后约6个月的 时期内施用。在一个实施方案中，方法包括在第=剂量后向人施用加强剂量。在另一个实施 方案中，方法不包括在第=剂量后向人施用加强剂量。在另一实施方案中，方法不进一步包 括向人施用第四或加强剂量的组合物。在进一步的实施方案中，约6个月时期内至多=个剂 量施用于人。
[0121] 在示例性的实施方案中，第二剂量在第一剂量后约30天施用，且第=剂量在第二 剂量后约150天施用，诸如例如，W〇、l、6月免疫时间表。在另一示例性的实施方案中，第二 剂量在第一剂量后约60天施用，且第=剂量在第二剂量后约120天施用，诸如例如，W〇、2、6 月免疫时间表。
[0122] 在一个实施方案中，第一剂量、第二剂量、和第=剂量在约150、160、170或180天且 至多240、210、200或190天的时期内施用于人。任何最小值可W与本文描述的任何最大值组 合W限定范围。优选地，第一剂量、第二剂量、和第=剂量经约180天或6个月的时期施用于 人。例如，第二剂量可W在第一剂量后约60天施用于人，且第S剂量可W在第二剂量后约 120天施用于人。因此，施用的示例性时间表包括在约第0、2和6个月向人施用剂量。
[0123] 如上所述，免疫原性组合物的多个剂量可W向人施用，且各剂量之间的天数可W 改变。方法的优点包括例如对于人依从施用时间表的灵活性。 实施例
[0124] W下实施例说明本发明的实施方案。除非本文另有说明，W下实施例中提及研究 中的二价重组疫苗(rLP2086)，其是运样的组合物的优选的示例性实施方案，所述组合物包 括每0.5mL剂量60 iig的包括SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列的第一脂质化的多肤、每 0.5mL剂量60 iig的包括SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的第二脂质化多肤、与第一多肤 2.8摩尔比的聚山梨醋80、与第二多肤2.8摩尔比的聚山梨醋80、0.5 Al3Yml组合物、10 mM 组氨酸、和150 mM氯化钢。更具体而言，研究中的二价重组rLP2086疫苗包括约(a)60 yg的 包括SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列的第一脂质化的多肤；（b)60 iig的包括SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列的第二脂质化多肤；（C)IS yg聚山梨醋80;(d)250 yg侣；（e)780 yg 组氨酸，和；（f)4380 yg氯化钢。各剂量为0.5 mL。
[0125] 实施例1:当在年龄为11 -18岁的健康受试者中W2或3剂量方案施用时，研究中的 脑膜炎球菌血清群B二价(MnB)rLP2086疫苗的安全性、耐受性和免疫原性 背景:在11-18岁龄的健康青少年中使用包括2或3次接种的5剂量方案(表1)来研究研 究中的二价重组疫苗(rLP2086)的安全性、耐受性和免疫原性。
[0126] 将疫苗配制为0.5 ml剂量W包含60 iig各自纯化的亚家族A和纯化的亚家族B rLP2086蛋白、2.8摩尔比的聚山梨醋80、和作为AlP化的0.25 mg的A13+、10 ml的组氨酸缓冲 的盐水P册.0。
[0127] 将盐水用作安慰剂，因为不存在可用作活性对照的已知被证实安全、免疫原性且 有效的针对MnB的疫苗。生理盐水溶液包括0.5 ml剂量中0.9%氯化钢。
[0128] 方法:在该2期、随机化的、安慰剂对照的、单盲研究中的所有受试者在第0、1、2和6 个月接受疫苗接种出诊。对于盲测(blinding),当未排定疫苗时，给予盐水对照。使用人补 体的血清杀菌测定(hSBA)用表达LP2086 (甜BP) f皿P变体A22、A56、B24和B44的4种MnB测 试菌株（即，主要终点分析中的4种"主要hSBA测试菌株"）进行，其所有均与疫苗中的变体不 同。评估未要求的不利事件(化solicited adverse event,AE)、要求的局部和全身性反应 和退热用途。
[0129] W2侧95%置信区间（Cl)在每一血液采样时间点对每一主要菌株计算集合平均 hSBA效价。几何平均倍数升高W95 % CI计算。
[0130] 将应答者定义为具有等于或高于hSBA测定的定量下限（LLOQ)的hSBA效价的受试 者。在主要终点分析中4个hSBA测试菌株的每一个的化OQ为等于1:8的hSBA效价。对于每一 主要测试菌株的检测限化OD)为等于1:4的效价(宽泛地视为与针对脑膜炎球菌疾病的保护 有关)。
[0131] 结果:最后疫苗剂量后1个月，86-99%的受试者(3剂量后；P<0.OOl)和69-100%受 试者（2剂量后）对于每一MnB测试菌株具有> 8的hSBA效价。研究剂量1后，19-27% (1.1-4.3%严重的）和23-27% (0.0-1.0%严重的）的rLP2086接受者按组分别经历发红和肿胀。注 射部位疼痛是研究剂量1(7.6-13.1%严重的）后最常见的局部反应。第一研究剂量的二价 rLP2086疫苗后在各组中3.3-6.5%经历发烧含38°C相比于盐水接受者中的2.1 %。局部和全 身性反应在剂量1后比在随后剂量之后通常更频繁。1712位受试者中的43位(2.5%)报告51 例严重AE;2例认为是相关的（1例眩晕、寒战且头疼和1例为发烧和呕吐）。未报告死亡。
[0132]结论:二价rLP2086具有可接受的安全性概况。所有5次给药方案在高比例的受试 者中产生针对所有4种测试菌株的含8的hSBA效价。相比于2剂量，3剂量后针对一些测试菌 株的更高比例表明3剂量可W提供针对不同的MnB临床菌株的最宽的保护。整体的3期临床 试验在用二价rLP2086疫苗进行中。
[0133] 本研究的目标之一是评估免疫应答，如在组1受试者(0月、1月和6月时间表，如随 机化的）和在组2受试者(0月、2月和6月时间表，如随机化的）中，用二价rLP2086第S次接种 后1个月，通过用表达LP2086亚家族A和B蛋白的MnB菌株进行的hSBA所测量的。免疫原性分 析的终点为对于4种主要MnB测试菌株(A22、A56、B24和B44)的每一种在第7个月（或在第S 剂量的二价rLP2086后1个月）实现含化OQ的hSBA效价的组1和2中受试者的比例。LLOQ对于 4种MnB测试菌株为1:8。
[0134] 对于可评价的免疫原性人群，3剂量的二价rLP2086后实现> 1:8的hSBA效价的组 1中的受试者比例为对于422为91.7%、对于456为99.4%、对于824为89%且对于844为 88.5 % (参见上文表1)。由于97.5 % CI的下限对于所有菌株为巧0% (对于菌株A22、A56、B24 和844分别为87.8%、1)<0.001;97.8%、口<0.001;84.7%、1)<0.001;和84.1%、1)<0.001)，因此 组1中的受试者达到研究目标。
[01巧]对于组2,3剂量的二价'1?2086后实现>1:8的11584效价的受试者比例为对于八22 为95.0%、对于A56为98.9%、对于B24为88.4%且对于B44为86.1%(参见上文表1)。类似于对组 1可见的，97.5%(：1的下限对于所有菌株为〉50%(对于菌株422、456、824和844分别为 91.7%、p<0.001; 96.9%、p<0.001; 84.1%、口<0.001;和81.4%、口<0.001)，表明组2中的受试 者也达到研究目标。
[0136] 次要目标为评估免疫应答，如在组3受试者(0月和6月时间表，如随机化的）中在第 二剂量的二价rLP2086后1个月，通过用表达LP2086亚家族A和B蛋白的MnB菌株进行的hSBA 所测量的。该次要目标为对于4种主要MnB测试菌株的每一种在第7个月（或在第二剂量的二 价rLP2086后1个月）实现> LLOQ (1:8)的hSBA效价的组3中受试者的比例。
[0137] 该次要目标也达到，因为2剂量的二价rLP2086后在组3中实现> 1:8的hSBA效价 的受试者比例为对于主要胞8测试菌株为93.5%、98.4%、81.1%和77.5%，^97.5%(：1的下限 对于所有菌株〉50%(对于菌株422、456、824和844分别为90.0%、9<0.001;96.2%、口< 0.0 Ol; 76.0%、!)<0.0 Ol;和72.2%、1)<0.0 Ol。参见上文表1)。
[0138] 另一次要目标为对于组1-5中的受试者在每一血液采样时间点对于4种主要MnB测 试菌株的每一种具有含化OQ的hSBA的受试者比例。对于4种主要hSBA测试菌株的每一种的 化OQ为1:8的效价。在研究时间时对于可评价的免疫原性群体具有> 1:8的hSBA效价的受 试者的比例显示在上文表1中。
[0139] 1剂量的二价rLP2086(组5[2月和6月时间表]，注射3后1个月）后具有> 1:8的 hSBA效价的受试者比例对于A22为55.9%、对于A56为67.6%、对于B24为56.9%且对于B44 为 23.8%。
[0140] 2剂量的二价rLP2086后一个月具有> 1:8的hSBA效价的受试者比例范围为对于 亚家族A菌株为74.6%-100%，且对于亚家族B菌株为54.0%-81.1%。3剂量后，对于亚家族A和 B菌株，比例增加且范围分别为91.7%-99.4%和86.1%-89.0%。
[0141] 实施例2:使用人补体的血清杀菌测定(hSBA) 从人血清清除MnB主要通过补体介导的溶菌作用实现且完整的补体系统对于针对由 MnB引起的感染的抗性是重要的。MnB的体内补体介导的溶菌作用体外通过使用人补体的血 清杀菌测定(hSBA)来模拟，其为显示为对于脑膜炎球菌疾病保护的代用品的功能性血清型 测定。即，使用人补体的血清杀菌测定(hSBA)中证实细菌杀伤与针对脑膜炎球菌疾病的保 护相关。由疫苗引发的免疫使用针对4种MnB菌株(巧BP变体A22、A56、B24和B44)的hSBA测 定。
[0142] 四种主要MnB测试菌株在描述于用于测定终点的实施例的hSBA中使用。即，将运些 菌株用于使用hSBA免疫原性终点估计疫苗效力。运些测试菌株代表占美国和欧洲中流行的 >90%的疾病分离株的6种甜BP系统发生亚群中的4种。
[0143] 在选择来自侵袭性疾病分离株的4种主要MnB测试菌株中，使用考虑体外LP2086表 面表达的群体分布的方法。此外，hSBA测试菌株必须显示低基线hSBA阳性，因为处于脑膜炎 球菌疾病的风险中的群体特征在于对于大多数菌株不存在的或低基线的杀菌活性。此外，4 种主要MnB测试菌株的每一种表达与疫苗中LP2086变体不同的LP2086变体，因此允许客观 评价针对人群中流行的侵袭性脑膜炎球菌疾病(IMD)的功能免疫原性和效力。
[0144] hSBA测量能够起始补体介导的杀菌活性的血清中抗脑膜炎球菌血清群B(MnB)抗 体的量。简言之，测试血清在2倍步骤中连续稀释且添加到96孔测定板中。加入MnB SBA测试 菌株和人血清补体，起始杀菌反应。在37°C解育测定板30-60分钟后(取决于SBA测试菌株； 称为T30)，将含有在该解育中存活的细菌的反应混合物稀释并转移至微滤板。过夜解育后， 表示为菌落形成单位(C即)的存活细菌使用Immunospot Analyzer计数。原始CFU数据电子 记录且转移至计算hSBA效价的数据分析应用。hSBA效价为运样的测试血清的最高2倍稀释 度的倒数，所述最高2倍稀释度导致相比于T30 CRJ值(即，在含有除测试血清外的所有测定 组分的测定孔中解育后存活的细菌数目；100%细菌存活）的MnB细菌的至少50%降低巧0% 细菌存活）。效价可W报道为步骤效价，例如1:4、1:8、1:16等。血清样品在相同测定中通过 两次单独的、重复测定来测试。其中重复测量值不相同的样品报道的最终效价为两次重复 测量值中的低者，当达到系统适合性和样品适合性标准(例如重复效价必须在一个2倍稀释 中一致)时。
[0145] 在Du化ecco憐酸缓冲盐溶液中连续稀释测试血清后进行hSBA测定。将细菌(粗略 2000菌落形成单位)和人血清补体(20重量％的终浓度巧日入到96孔板中连续稀释的血清并 在37°C下在小半径定轨摇床中W700巧m解育30-40min(取决于hSBA测试菌株）。解育后，将 一定比例的反应混合物转移至微滤板。过夜解育后，用Immunospot Analyzer (Cellular Technology Limited; Shaker Hei 曲 ts、0H、USA)计数存活的细菌并用SAS(9.2版）分析 hSBA效价。hSBA效价计算为与未经历测试血清的对照相比导致细菌的50%降低的内插测试 血清稀释度的倒数（即，hSBA反应结束时的存活细菌）。根据方案，hSBA基于处于或高于hSBA 测定的定量下限（如用在实施例1的表1中列出的菌株的测定的定量过 程中建立的）的hSBA 效价来完成。
[0146] 人血清是用于SBA的补体来源。然而，hSBA效价可W根据所用的人补体批次而不 同。因此，人补体优选经严格筛选和定量来控制W确保hSBA中的一致表现。对于hSBA，人血 清补体可W从多位正常健康成年人合并或从单独供体来使用（即，不合并）。
[0147] 实施例3-聚山梨醋80 对于药物制剂已优化=个参数:pH、侣浓度和聚山梨醋SO(PS-SO)与蛋白摩尔比。在具 有0.5ml总体积的组合物剂量中，最优的与侣的蛋白结合在约6.0的pH下和约0.5 mg/ml浓 度的侣(作为憐酸侣(A1P化)（其等价于0.25 mg侣/剂量））实现。PS-80与蛋白摩尔比维持在 2.8 ± 1.4W稳定制剂的体外效力。聚山梨醋SO(PS-SO)添加至药物W获得2.8的目标PS-80与蛋白摩尔比。因此，优选在药品配制过程中不加入PS-80。
[014引 实施例4 在健康青年人中与二价rLP2086疫苗同时施用的REPEVAX ?的免疫原性和安全性的随 机化的、安慰剂对照的2期研究 背景/目标:评价研究中的二价rLP2086疫苗(开发为预防青年人中的脑膜炎奈瑟氏球 菌血清群B(MnB))与同时施用RE阳VAX @ ,RE阳VAX @为该群体中同时使用的dTaP灭活脊髓 灰质炎疫苗（其可描述于美国专利号7479283、胖01990/013313和6?1666057 81^及111( Marketing Authorisation PL06745/0121)。
[0149] 方法:青年人(对RE阳VAX+rLP2086或RE阳VAX +盐水1:1随机化)在第0、2和6个月 接种。测定初始接种后30天对于9种REPEVAX抗原实现预定的抗体水平的受试者比例。接种2 和3后30天测量对于4种MnB测试菌株的免疫应答(hSBA)。评价不利事件(AE)和局部/全身性 反应。
[0150] REPEVAX (Sanofi Pasteur MSD limited)是组合的低剂量白喉、破伤风、无细胞 百日咳和灭活脊髓灰质炎病毒疫苗，其每0.5 mL剂量含有吸附在憐酸侣上（1.5 mg (0.33 mg侣））的白喉类毒素(不低于2 IU)、破伤风类毒素(不低于20 IU)、百日咳抗原（百日咳类 毒素（2.5微克）、丝状血凝素（5微克）、百日咳杆菌粘附素（3微克）和菌毛2型和3型（5微 克））、脊髓灰质炎(灭活的）1型（40 D抗原单位）、脊髓灰质炎病毒（灭活的2型（8 D抗原单 位）、脊髓灰质炎(灭活的)3型(32 D抗原单位）。
[0151] 使用多路LUMI肥X测定评估针对RE阳VAX(白喉类毒素、破伤风类毒素、百日咳类毒 素、百日咳杆菌粘附素、菌毛2型和3型W及丝状血凝素）的白喉、破伤风、和百日咳组分的免 疫应答。在病毒中和测定中测量针对脊髓灰质炎1型、2型和3型的免疫应答。将从两个组中 的所有受试者获得的血清用于运些测定中。
[0152] 对于评估针对二价rLP2086的免疫应答，在hSBA中用所述的4种主要MnB测试菌株 分析功能性抗体。选择四种主要MnB hSBA测试菌株(A22、A56、B44和B24)，2种表达LP2086亚 家族A且另巧巾表达LP2086亚家族B。使用运四种主要hSBA测试菌株(来自6种f皿P系统进化 亚群中的4种且代表美国和欧洲流行的>90%的疾病分离株）用于测定该研究中的主要免疫 原性终点。此外，A22、B24和B44变体是欧洲的流行病学相关变体，而在美国，A22和B24是在 引起疾病的MnB菌株上表达的发现的最流行变体。测试用于一级和二级分析的样品前验证 MnB hSBA。
[0153] 来自两组中50 %的随机选择的受试者的血清样品用A22和B24进行hSBA且另50 % 用A56和B44现聯。运些测试在接种1之前、接种2之后和接种3之后对血液样品进行。
[0154] RE阳VAX的免疫原性通过使用在关键的3期临床试验中在形成对于RE阳VAX的许可 基础的青少年中确定的每一抗原的预定标准来评估。REPEVAX共存抗原包括白喉、破伤风、 百日咳类毒素、百日咳丝状血凝素、百日咳百日咳杆菌粘附素、百日咳菌毛凝集原化3型、脊 髓灰质炎病毒1型、脊髓灰质炎病毒2型、脊髓灰质炎病毒3型。例外是百日咳菌毛凝集原 (FIM)2+3型，其限定在用于REPEVAX许可的测定中>5抓/mL的效价。在该研究中，百日咳 FIM 2+3型的定量下限化LOQ)为>10.6抓/mL,其更高且因此比REPEVAX的许可标准更严 格。
[015引共存抗原的化OQ如下：白喉类毒素为0.037 IM/mL;破伤风类毒素为0.05 lU/ml; 百日咳类毒素为0.9抓/mL百日咳丝状血凝素为2.9抓/mL,百日咳百日咳杆菌粘附素为 3.0抓/mL百日咳菌毛凝集原2+3型为10.6抓/mL对于脊髓灰质炎病毒1型、脊髓灰质炎 病毒2型、脊髓灰质炎病毒3型为1:8。
[0156] 对于一级目标的额外描述终点为测量为在接种1后(探视2)的几何平均效价化MT) 或几何平均浓度化MC)的针对共存疫苗抗原的抗体。
[0157] 另一终点为在接种3后(探视6)对于4种主要MnB测试菌株具有含化OQ的hSBA效价 的受试者的比例。
[0158] 共存疫苗抗原接种白喉、破伤风和百日咳无细胞(CTTaP)-IPV (REPEVAX)后1个 月实现对于共存疫苗抗原的预定标准的受试者的比例用2侧95 %精确(或Clopper-化arson 置信限）对于组巧日组2进行计算。比例的差异(二价rLP2086 / cTTaP-IPV - (TTaP-IPV,或组 1-组2)还连同2侧95%精确Cl对于差异进行计算。如果对于差异的2侧95%CI的下限对于 dTaP-IPV疫苗中所有9种抗原大于-0.10 (-10%)，则声明为非劣等(Noninferiority)。
[0159] 用主要测试菌株的hSBA对于每一主要MnB hSBA测试菌株，在每一血液采样时间 点实现> LL0Q、> 1:4、> 1:8、> 1:16和> 1:128的hSBA效价的受试者的数目和比例连同精 确2侧95 % CI (或Clopper-Pearson置信限)对于比例进行描述性概述。
[0160] 结果：在随机的749位受试者中，685位（91.5%)包括可评价的免疫原性群。 REPEVAX +rLP2086或RE阳VAX +盐水后的免疫应答对于所有9种RE阳VAX抗原是不差的。针 对二价rLP2086疫苗的免疫应答在2次剂量后是实质性的且在3次剂量后进一步增强(表2)。 轻度至中度注射部位疼痛是最常见的局部反应;头疼和疲劳是最常见的全身性事件。接种 后30天内报道AE的受试者比例是相似的（8.8%和11.4%，分别对于REPEVAX +rLP20 86和 RE阳VAX +盐水）。
[0161] 对于共存疫苗可评价的免疫原性群，在REPEVAX剂量后1个月实现针对共存疫苗抗 原的抗体的预定水平(对于应答的阔值)的受试者比例在二价rLP2086 + REPEVAX组和单独 的REPEVAX组之间对于共存的疫苗抗原是相似的：白喉类毒素(各组中99.4% )，破伤风类毒 素（各组中100%)，百日咳类毒素（分别94.7%和96.0%)，百日咳丝状血凝素（各组中 100%)，百日咳百日咳粘附菌素(各组中100%)，百日咳菌毛凝集原2+3型（分别97.6%和 98.9%)，脊髓灰质炎病毒1型（各组中100%)，脊髓灰质炎病毒2型（各组中100%)，脊髓灰 质炎病毒3型(各组中100%)。
[0162] 由于RE阳VAX剂量后一个月二价rLP2086 + RE阳VAX组（组1)和单独的RE阳VAX组 (组2)之间应答者比例中差异的2侧95%CI的下界对于RE阳VAX中的9种抗原大于-0.10 (-10%)(即，比例差异上95%CI的最低下界为-4.7%诏日咳类毒素）），因此实现非劣等。因此， 通过与二价rLP2086-同给予的RE阳VAX诱导的免疫应答对于由单独RE阳VAX诱导的免疫应 答是不差的。
[0163] 评估对于4种主要MnB测试菌株的每一种对于接种3后可评价的免疫原性群具有> 化OQ的hSBA效价的受试者比例。A22的化OQ为等于1:16的hSBA效价而对于所有其他MnB测试 菌株的LLOQ为等于1:8的hSBA效价。
[0164] 对于组1，在基线(接种1前）具有含化OQ的hSBA效价的受试者比例对于主要MnB菌 株A22为14.4 %，对于A56为18.2 %，对于B24为12.7 %，且对于B44为6.2 %。对于组2，在基线 (接种1前)具有含化OQ的hSBA效价的受试者比例对于主要MnB菌株A22为23.0%，对于A56为 21.8%，对于 B24为12.9%，且对于 B44为6.3〇/〇。
[0165] 剂量2的二价rLP2086后组1受试者中观察到实质上的hSBA应答，且接种3后1个月3 个剂量后观察到额外增加。对于组U二价rLP2086 + RE阳VAX)，接种2后1个月时和接种3后 1个月时实现 > 化〇0的hSBA效价的受试者比例对于A22为81.1%和95.6%，对于A56为97.3% 和100%，对于B24为81.0%和96.8%，且对于B44为55.5%和81.5%。尽管在仅两次二价rLP2086 剂量后实现实质上的hSBA应答，但2次剂量(接种2后一个月）相比于3次剂量(接种3后1个 月）后具有含化OQ的hSBA效价的受试者比例中的增加示例3次剂量后免疫应答的增强。在 对照组(组2)中，在接种2后1个月和在接种3后1个月时对于4种主要MnB测试菌株的每一种 具有含化OQ的hSBA效价的受试者比例与每一 MnB测试菌株的基线hSBA结果(接种1前)是相 似的。
[0166] 对于4种主要MnB测试菌株，组1中展示确定的hSBA效价的受试者比例在3次剂量后 大于2次剂量后。描述了实现^ 1:16的hSBA效价的受试者，由于该效价从1:4效价的4倍增 加（> 1:4的效价广泛接受为与针对IMD的保护相关性）。对于组1，在接种2后1个月时具有 1:16的hSBA效价的受试者比例对于A22为81.8%，对于A56为97.3%，对于B24为68.0%，且对 于B44为53.4%。在接种3后1个月时，具有1:16的hSBA效价的受试者比例对于A22为95.6%，对 于 A56 为 100%，对于 B24 为 87.3%，且对于844为79.5〇/〇。
[0167] 在对照组(组2)中，在接种2后1个月和在接种3后1个月时对于4种主要MnB测试菌 株的每一种展示确定的hSBA效价的受试者比例与具有在基线(接种1前)确定的hSBA效价的 受试者比例是相似的。
[0168] 对于组1，3次剂量的二价rLP2086后具有1:16的hSBA效价的受试者比例证明当施 用3次剂量的二价rLP2086时疫苗引发强力的免疫应答。
[0169] hSBA几何平均效价(GMT)通常，基线处GMT对于两组均低于hSBA LL0Q。对于组1，在 接种2后1个月的hSBA GMT对于A22为35.5，对于A56为91.1，对于B24为15.9且对于B44为 14.6。在接种3后1个月的hSBA GMT对于A22为63.4，对于A56为151.5，对于B24为28.3且对于 644为36.5。
[0170] 对于组1，2次剂量后对于亚家族A菌株观察的GMT W及3次剂量后对于亚家族B菌株 观察的GMT表明强力的免疫应答。
[0171] 评价显示A22、A56、B24和B44的hSBA效价分布的反向累积分布曲线(RCDC)。组1中 来自RCDC的结果显示在二价rLP2086接种后在组1受试者中观察到实质上的免疫应答;然 而，附图还显示第S剂量的二价rLP2086的益处，因为更高比例的受试者实现针对4种MnB测 试菌株的更高效价。该效果对于菌株B44是最显著的。
[0172] 结论：当同时给予二价rLP2086时，RE阳VAX诱导不比由单独RE阳VAX引发的免疫应 答差的免疫应答。二价rLP2086疫苗诱导针对四种不同MnB测试菌株强力的杀菌应答，尤其 是针对代表亚家族B的那些，其在3次剂量后比2次剂量后更高。同时施用通常是安全的且完 全耐受的。
[0173] 实施例5 健康青少年中研究中的脑膜炎球菌血清群B二价rLP2086疫苗的免疫原性 背景和目标:脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B(MnB)引起婴儿、青少年和成年人中的侵袭性 疾病。保守的、表面暴露的脂蛋白LP2086(因子H结合蛋白[f皿P])是有希望的MnB疫苗祀标。 在健康青少年（11-18岁）中研究了研究中的二价、重组疫苗(rLP2086)的安全性和免疫原 性。
[0174] 方法:将该安慰剂对照的、单盲研究中的受试者随机分至两个3剂量时间表和=个 2剂量时间表。每一 120-yg剂量含有巧巾rLP2086抗原，每个LP2086亚家族(A和B)1种。当未排 定疫苗日程时，给予盐水。使用人补体的血清杀菌测定用4种MnB测试菌株（与疫苗巧BP异 源)进行。
[0175] 结果:将1713位受试者(平均年龄14.4岁）随机化。3剂量疫苗后一个月，针对亚家 族A和B菌株的含8的hSBA效价分别在95-99%和86-89%的受试者中观察到；2剂量后，运些数 字范围分别为91-100%和69-77%的受试者。在2剂量时间表中，0和6个月诱导最高的抗体应 答(实施例5的表1)。在4种MnB异源测试菌株中，2剂量后hSBA GMT范围为6.2-125.6且3剂量 后范围为25.6-155.6。轻度至中度注射位点疼痛是最常见的局部反应。剂量1后，分别在 3.3-6.5 %和2.1 %的rLP2086和盐水接受者中经历发烧含38°C。
[0176] 结论:rLP2086是完全耐受的。所有剂量方案产生强力的杀菌应答，其在3剂量后最 为显著。
[0^7]实施例5的表1与上述的实施例1的表1相同。表2概述了通过研究时间对于可评价 的免疫原性群的hSBA GMT及相应CKGMT从基线(注射1前）增加且用二价rLP2086的每一随 后剂量持续增加。
[0178] 对于4种主要MnB菌株，3剂量的二价rLP2086后(组1和2)比2剂量后（组3、4和5)的 GMT更高。GMT在两个3剂量组之间相似，且它们在=个2剂量组之间相似。
[0179] 注射1前(基线），组1、2、3、4和5的hSBA GMT如下:对于A22分别为7.1、6.3、6.4、6.4 和6.8;对于A56分别为6.8、6.1、6.7、6.3和6.2;对于B24分别为5.3、5.1、5.0、4.9和5.1;和 对于844分别为4.4、4.5、4.5、4.6和4.4。
[0180] 对于组1(0、巧日6月），在剂量2后1个月对于所有4种主要MnB菌株观察到的GMT存在 实质上增加(对于A22、A56、B24和B44分别为24.4、77.3、13.8和13.1)。611'进一步在3剂量的 二价rLP2086后对于组1的受试者对于4种主要MnB测试菌株进一步增加；55.1 (A22); 152.96 (A56); 29.1 (B24);和40.3 (B44)。
[0181] 对于组2，2和3剂量的二价rLP2086后观察到GMT的相似增加。2剂量的二价rLP2086 后对于组2受试者的GMT对于A22为32.9，对于A56为94.6，对于B24为14.9且对于B44为15.5。 3剂量后，GMT对于A22增加为56.3，对于A56增加为155.6，对于B24增加为25.6且对于B44增 加为35.0。
[0182] 对于组1和次剂量后对于亚家族A菌株观察的GMTW及3次剂量后对于亚家族B 菌株观察的GMT表明强力的免疫应答。
[0183] 对于组3，1剂量的二价rLP2086后观察到GMT的少量增加:A22为12.0,对于A56为 18.5，对于B24为9.2且对于B44为5.7。2剂量后，GMT对于A22增加为48.4，对于A56增加为 125.6，对于B24增加为20.6且对于B44增加为22.5。
[0184] 对于组4，1剂量的二价rLP2086后GMT对于A22为13.3;对于456为17.7;对于824为 9.8且对于B44为5.9。2剂量的二价rLP2086后，GMT对于A22为37.1，对于A56为104.9，对于 B24为17.7且对于B44为19.1。
[0185] 对于组5，1剂量的二价rLP2086后GMT对于A22为16.0，对于A56为26.8，对于B24为 12.6且对于B44为6.8。2剂量的二价rLP2086后，GMT对于A22增加为39.6，对于A56增加为 111.8，对于B24增加为14.7且对于B44增加为17.8。
[0186] 总之，对于组3、4和5,观察到的GMT表明2剂量的二价rLP2086后对于亚家族A和B菌 株的免疫应答。
[0187] 总之，3剂量的二价rLP2086提供基于4种主要MnB测试菌株的hSBA效价的强力的且 最宽的免疫应答。与2剂量相比，接受3剂量的二价rLP2086的受试者的更高比例实现针对4 种主要MnB测试菌株的> 1:8的hSBA效价。
[0188] 0、1和6月剂量时间表后的结果（组1)与0、2、和6月剂量时间表后的结果（组2)相 似。对于组1和2,剂量3后实现的GMT值比剂量2后GMT值更高。对于组1和2,剂量2后GMT值对 于亚家族A菌株范围为24.2-94.6且对于亚家族B菌株范围为13.1-15.5。剂量3后GMT值对于 亚家族A菌株范围为55.1-155.6且对于亚家族B菌株范围为25.6-40.3。对于组1和2,当与2 剂量的二价rLP2086后针对4种主要MnB测试菌株实现> 1:8的hSBA效价的受试者比例相比 时，3剂量的二价rLP2086后针对4种主要MnB测试菌株更高比例的受试者实现> 1:8的hSBA 效价。
[0189] 还评估了实现> 1:16的hSBA效价的受试者。对于组1，在2剂量的二价rLP2086后一 个月实现含1:16的hSBA效价的受试者百分比对于A22为73.5%，对于A56为96.3,对于B24为 57.6，且对于B44为47.2%。3剂量的二价rLP2086后，组I中实现含1:16的hSBA效价的受试者 百分比对于A22为91.4%，对于A56为99.2%，对于B24为82.8%，且对于B44为84.8〇/〇。
[0190] 对于组2,在2剂量的二价rLP2086后一个月实现> 1:16的hSBA效价的受试者比例 对于A22为88.1%，对于A56为97.9%，对于B24为63.5%，且对于B44为58.6%。3剂量的二价 rLP2086后，组2中实现> 1:16的hSBA效价的受试者百分比对于A22为95.0%，对于A56为 98.9%，对于 B24 为 83.6%，且对于 B44 为 83.8〇/〇。
[0191] 对于组1和2,3次剂量的二价rLP2086后实现含1:16的hSBA效价的受试者百分比证 明当疫苗引发强力的免疫应答。
[0192] 对于组3,在2剂量的二价rLP2086后实现> 1:16的hSBA效价的受试者比例对于A22 为 93.2%，对于 A56 为 98.4%，对于 B24 为 73.8%，且对于 B44 为 70.8〇/〇。
[0193] 对于组4,在2剂量的二价rLP2086后一个月实现> 1:16的hSBA效价的受试者比例 对于A22为90.8%，对于A56为99.2%，对于B24为67.1%，且对于B44为64.5〇/〇。
[0194] 对于组5,在2剂量的二价rLP2086后实现> 1:16的hSBA效价的受试者比例对于A22 为91.0%，对于A56 为99.1%，对于 B24为64.5%，且对于 B44为66.7〇/〇。
[0195] 对于组3、4和5,实现>1:16的hSBA效价的受试者百分比证明仅2次剂量后疫苗引 发针对亚家族A菌株的强力免疫应答。然而，3次剂量增加针对亚家族B菌株的应答的强度。
[0196] 3次剂量的二价rLP2086后实现> 1:16的hSBA效价的受试者的百分比显示疫苗引 发针对表达与疫苗组分不同的LP2086变体的MnB菌株的强力且广泛的免疫应答。
[0197] 通过研究时间显示hSBA效价分布的反向累积分布曲线(RCDC)也对于每一菌株组 间对于可评价的免疫原性群进行评估。RCDC显示2次剂量的二价rLP2086亚家族A菌株后的 强力免疫应答。第S剂量的二价rLP2086后，应答曲线下面积对于所有4种主要MnB测试菌株 增加，由此证实3剂量的二价rLP2086后免疫应答的增强。
[0198] 来自主要和次要免疫原性终点分析的结果显示疫苗可W产生具有针对MnB的异源 亚家族A和亚家族B变体的显著hSBA活性的抗体。尽管2或3次剂量的二价rLP2086后实现> 1:8的hSBA效价的受试者比例更高，但高比例的受试者在1次剂量的二价rLP2086后一个月 实现> 1:8的hSBA效价。例如，参见组5。
[0199] 对于4种主要MnB测试菌株，3剂量的二价rLP2086后（组1和2)比2剂量后（组3、4和 5)的GMT更高。GMT在两个3剂量组中是相似的。GMT还在立个2剂量组中是相似的。运些数据 也基于实现> 1:16的hSBA效价的受试者百分比证明3次剂量的二价rLP2086后的强力hSBA 应答。
[0200] 运些数据证明二价rLP2086的最终制剂产生强力免疫应答且当W2或3次剂量给予 时是安全且完全耐受的。甚至1剂量的二价rLP2086也提供了高于基线的实质上的免疫应答 且也是安全且完全耐受的。总之，在2或3次剂量的二价rLP2086后在安全性概况中不存在临 床上有意义的差异。
[0201 ] 实施例6 在=期、随机化的、设置对照的研究中脑膜炎球菌血清群B二价rLP2086疫苗在年龄Ills 岁的健康青少年中的安全性、耐受性和免疫原性 背景:脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B(MnB)是青少年中侵袭性脑膜炎球菌疾病的主要原 因。保守的、表面暴露的脂蛋白LP2086(因子H结合蛋白[f皿P])是保护免于由MnB引起的侵 袭性疾病的有希望的疫苗祀标。在=期2、随机化的、设置对照的研究中在11-18岁龄的健康 青少年中检查研究中的二价、重组MnB疫苗(包括SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO: 2、2.8摩尔比 的聚山梨醋80、0.5 111邑/1111侣、1〇11^组氨酸和15〇11^氯化钢，本文所有实施例中称为"二价 rLP2086")的安全性、耐受性和免疫原性。
[0202] 方法:研究1012检查了二价rLP2086的5种疫苗方案，而研究1010和1011评价了分 别与TdaP-IPV和HPV疫苗同时给予的二价rLP2086的3剂量时间表。每一剂量的二价rLP2086 含有60 yg的rLP2086亚家族A变体A05和60 yg的rLP2086亚家族B变体B01。为了检查二价 rLP2086在S项研究中的每一项中的免疫原性，用表达异源f皿P变体A22、A56、B24和B44的4 种MnB测试菌株进行使用人补体的血清杀菌测定(hSBA)，选择所述测试菌株W代表甜BP变 异性的相关多样性W及提供对于针对表达流行病学上流行的巧BP变体的菌株的疫苗引发 的免疫应答宽度的观点。评价不利事件W及收集的局部和全身性反应。
[0203] 结果:所有3个研究中82-100%的受试者在剂量3后1个月实现对于4种MnB测试菌株 的每一种高于定量下限化L0Q)的hSBA效价(表）。在运些研究中，大部分全身性事件和局部 反应在严重程度上是轻度至中度的;不利事件通常不严重或不与研究疫苗有关。
[0204] 结论: 高于1:4的血清杀菌抗体效价保护免于侵袭性脑膜炎球菌疾病。在运些青少 年2期研究中针对4种MnB巧聯菌株(各自对疫苗抗原是异源的）的hSBA效价 >化09的证实表 明二价rLP2086疫苗提供功能性抗体应答，其可W针对不同MnB疾病相关菌株是广泛有活性 的。用二价rLP2086接种通常是完全耐受的。
[020引实施例7 当同时施用人乳头瘤病毒疫苗时在11-18岁龄的健康青少年中脑膜炎球菌血清群B二 价rLP2086疫苗的免疫原性 该2期、随机化的、观察者盲测的(observer-blind)、设置对照的研究在> 11至<18岁龄 的健康青少年中评价具有或不具有共施用GARDASIL ?的二价rLP2086的免疫原性，所述 GARDASIL?为针对人乳头瘤病毒(HPV4)的四价疫苗（也描述于美国专利号5,820,870中）。 GA畑AS IL含有HPV 6型、11型、16型和18型（即HPV-6、HPV-11、HPV-16和HPV-18化蛋白的重组 抗原。终点为在每一可应用的血液采样时间点对于4种主要MnB测试菌株的每一种的hSBA GMT。
[0206] 方法:受试者在第0、2和6个月时接受二价rLP2086 (包括SEQ ID NO: 1和沈Q ID 腸：2、2.8摩尔比的聚山梨醋80、0.5 111旨/1111侣、1〇1111组氨酸、和15〇1111氯化钢）+册￥4 (组1)、二价rLP2086 +盐水(组2)或HPV4 +盐水(组3)。通过使用人补体的血清杀菌测试 (hSBA)使用4种MnB测试菌株(其各自表达与疫苗组分异源且代表甜BP多样性的宽度W及流 行病学流行性的f皿P(A22、A56、B44和B24))测试来自接种1前、和接种2和3后1个月的组1和 2中的受试者的血清。评价的终点包括具有> 定量下限化L0Q; 1:16 [A22]或1:8 [A56、 B44、B24])的hSBA效价的受试者比例和hSBA几何平均效价化MT)。
[0207] 为了证实相比于单独的GARDASIL施用GARDASIL加二价rLP2086的非劣等性，用2个 hSBA(使用1种代表亚家族A变体主要测试菌株(A22)和1种代表亚家族B变体的主要测试菌 株（B24))来进行免疫原性评价。然而，所有4种主要MnB测试菌株用于测定额外的二价 rLP2086免疫原性/效力探索性终点。
[020引为了评估针对二价rLP2086的免疫应答，在hSBA中用随机选自Pf izer代表性MnB SBA菌株库的脑膜炎球菌血清群B菌株分析功能性抗体，如实施例2中所述。hSBA测量人血清 中的功能性抗体，其W补体依赖性方式杀死祀脑膜炎球菌菌株。
[0209] 结果:814位和812位受试者分别包括对于组1和2可评价的免疫原性群。与接种1前 相比，针对所有4种测试菌株具有hSBA效价 > 化09的受试者比例在接种2(55%-99%)和3 (83%-99%;图1)后更高。实施例7的表A呈现通过对于可评价的免疫原性群的采样时间点的 对于4种主要MnB菌株的每一种的hSBA GMT和相应CI。基线处GMT对于两组均低于hSBA LLOQdGMT在组1和2中范围分别为接种1后为11.1-70.6和11.9-76.3,和接种2后为25.8- 117.2 和 28.0-128.2(下文表 A)。
[0210] 对于可评价的免疫原性群，对于组1和组2的接种3二价rLP2086后1个月时针对巧中 主要MnB菌株的hSBA GMT如下:对于A22分别为53.3和57.8，和对于B24分别为25.8和28.0。
[0211] 对于组2(二价rLP2086 +盐水），在接种2后1个月的hSBA GMT对于A22为33.7，对于 A56为76.3，对于B24为16.3且对于B44为11.9。在接种3后1个月的hSBA GMT对于A22为57.8， 对于A56为128.2，对于B24为28.0且对于B44为31.9。
[0212] 对于组1(二价'1^^2086+641?045比），在接种2后1个月的11584 611'对于422为31.9， 对于A56为70.6，对于B24为15.0且对于B44为11.1。在接种3后1个月的hSBA GMT对于A22为 53.3，对于A56为117.2，对于B24为25.8且对于B44为27.2。
[0213] 显示对于A22、A56、B24和B44的hSBA效价分布的反向累积分布曲线(RCDC)在可评 价的免疫原性群的所有采样时间点对于组1和组2进行评价。RCDC显示大部分受试者在接种 2后应答且在接种3后对于4种主要MnB测试菌株具有效价中的额外增加。对于抗原的免疫应 答对于组1和2是相似的。
[0214] 结论:二价rLP2086可W与HPV4施用而不影响通过hSBA血清应答或GMT评价的杀菌 应答。由于hSBA效价含1:4与针对脑膜炎球菌疾病的保护相关，因此运些数据表明在同时施 用HPV疫苗环境中施用二价rLP2086后针对宽范围的MnB菌株的对于青少年保护的潜力。
[0引引实施例8 在健康青少年中与针对脑膜炎球菌血清群B的二价rLP2086疫苗共施用的人乳头瘤病 毒疫苗的免疫原性 背景:该2期、随机化的研究在年龄含11至<18岁的健康青少年中评价共施用针对人乳 头瘤病毒(HPV4)的四价疫苗与二价rLP2086(针对由脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B(MnB)引起 的侵袭性疾病的研究中的疫苗）。
[0216] 方法:在第0、2和6个月受试者接受册V4+二价rLP2086(组1)、二价rLP2086+盐水 (组2)、或盐水+HPV4(组3)。在所有组中在基线和剂量巧日3后收集血清。通过竞争性LUMI肥X 免疫测定(cLIAs)测定针对HPV4抗原化PV-6、11、16和18)的免疫应答。通过使用人补体的血 清杀菌测定(hSBA)用表达与疫苗异源的f皿P变体的巧巾MnB测试菌株(A22和B24)测量二价 rLP2086免疫原性。免疫原性终点（剂量3后的所有)包括:组1和3中针对HPV抗原的几何平均 效价化MT);组1和2中对于表达变体A22和B24的菌株的hSBA GMT;和组1和3中对于基线血清 阴性受试者中的HPV抗原的血清转换率。二价rLP2086的安全性还在与HPV4或盐水共施用后 评价。
[0217] 针对GA畑ASIL化PV 6型、11型、16型、和18型Ll蛋白）的免疫应答的评价使用基 于巧光标记的基于微球的平台化UMINEX)的化IAs来进行。从用GARDASIL首次接种前(探视 I) 和用GARDASIL第S次接种后1个月（探视5)的组1和3中的所有受试者获得血清用在运些 测定中。
[0引8] 组1和组3的针对4种HPV抗原的GMT的比较、及其组1与组3的相应GMT比率(GMR)和 所述比率的2侧95%CI呈现在本实施例下文的表A中。非劣等性边缘的标准为1.5倍，其对应 于GMR的2侧95 % CI的下限的0.67的值。0.67的1.5倍标准对于除了HPV-18外的所有MnB测试 菌株和HPV抗原均达到，所述HPV-18具有0.62的下界95 %置信区间（CI)。在单独的分析中， >99%的受试者在盐水+HPV4和rLP2086+HPV4组中血清转换为所有4种抗原。
[0219] 本研究的另一目标是描述由二价rLP20 86 + GARDASIL (组1)和由盐水+GA畑AS IL (组3)诱导的免疫应答，如同在两组中GA畑ASIL的接种3剂量后(探视5)的HPV免疫原性测定 中通过血清转换所测量的。
[0220] 对于组1和组3中在基线处为血清阴性的受试者在最后剂量的GARDASIL后1个月， 对于4种HPV抗原的每一种的血清转换率计算为对于HPV-6具有含20 mMU/ml、对于HPV-Il具 有 > 16 mMU/ml、对于HPV-16具有 > 20 mMU/ml和对于HPV-18具有 > 24 mMU/ml的抗HPV血清 CLIA水平的受试者比例。
[0221] 对于基线HPV血清阴性的可评价免疫原性群，在各组中用相应95%CI对于4种HPV 抗原的血清转换实现预定标准的基线HPV血清阴性受试者的数目和比例、比例中的百分比 差异(组1-组3)、和差异的95%CI均呈现在实施例8的表B中。
[0222] 结果：对于4种册V抗原中的巧巾（不是册V-18)和两种MnB测试菌株达到（表A)，在 1.5倍设置预定非劣等性标准(对于GMR，95%CI的0.67下限）。组1和3的血清转换率对于所 有HPV抗原为> 99%(表B)。相比于盐水，rLP2086后发生更高的局部反应原性，但用更晚的剂 量不会增加;注射部位疼痛是最常见的局部反应。所有3组中的全身性事件通常在严重程度 上是轻度和中度的。
[0223] 对于可评价的免疫原性群，对于组1和组3的接种3时在GARDASIL剂量1个月后抗体 对4种HPV抗原的GMT如下：分别为451.8和550.3化PV-6);分别为892.9和1084.3 (HPV- II) ;分别为3695.4和4763.4 (HPV-16);和分别为744.0和 1047.4 (册V-18)。接种3时 GARDASIL剂量后一个月时组I与组3的GMR对于HPV-6为0.82(95% CI:0.72, 0.94)，对于 HPV-Il为0.82 (95% CI:0.74，0.91)，对于HPV-16为0.78(95% CI:0.68，0.88)，和对于 HPV-18为0.71 (95% CI:0.62, 0.81)。因此，组 1 相比于组3的抗HPV GMR的2侧95%CI的下 限对于HPV-6 为0.72、对于HPV-Il为0.74、对于 HPV-16 为0.68和对于HPV-18为0.62。0.67的 1.5倍标准化MR的2侧95 %CI的下限)对于除了HPV-18的所有HPV抗原均达到，所述HPV-18具 有0.62的95%CI的下界。
[0224]接种3二价rLP2086剂量后一个月，二价rLP2086 + GA畑ASIL组比二价rLP2086 + 盐水组的GMR对于A22为0.92 (95%CI:0.85, 1.00)，和对于B24为0.92 (95%CI:0.84, 1.01)。组1与组2相比的11584 611?的2侧95%(：1的下限对于422为0.85和对于824为0.84，其 均大于0.67且因此达到1.5倍的非劣等性边缘。
[022引通过分析接种3后1个月时对于巧中主要MnB菌株(A22和B24)的hSBA效价4倍应答率 将来自二价rLP2086 + GARDASIL (组1)施用的数据与来自二价rLP2086 +盐水(组2)的数 据比较。对于接受二价rLP2086 + GARDASIL的组1受试者和接受二价rLP2086 +盐水的组2 受试者测量从基线至对于巧中主要MnB菌株的接种3后1个月的hSBA效价中实现含4倍升高的 受试者的比例。在组1的受试者中，85.3%展示出针对B24的hSBA效价的含4倍升高。在组2的 受试者中，86.4 %展示出针对A22的hSBA效价中含4倍升高，且84.8 %展示出针对B24的hSBA 效价中>4倍升高。
[0226] 接种3后1个月组1和组2之间应答者比例中的差异为对于A22为-1.1%(95%(：1:-4.6，2.3)，和对于B24为-1.4% (95%CI:-5.1，2.3)。4倍应答率的差异均接近1%的值， 且比例差异的95%CI的下界为-4.6% A22和-5.1% B24。
[0227] 相比于盐水+ GARDASIL或相比于二价rLP2086 +盐水的二价rLP2086 + GARDASIL 的非劣等性标准要求接种3后I个月对于针对HPV(对于所有4种HPV抗原化PV-6, HPV-Il， HPV-16和HPV-18))的抗体和对于使用巧巾主要MnB测试菌株(A22和B24)的hSBA效价的GMR的 2侧95 % CI的下限大于0.67。对于两种MnB测试菌株和4种HPV抗原中的至少巧巾达到了该预 定标准。对于HPV-18，GMR的2侧CI的下限略微低于0.67的预定阔值，为在0.62。
[022引对于巧巾主要MnB测试菌株（A22和B24)的4倍升高应答在接受二价rLP2086 + GARDASIL的组和接受二价rLP2086 +盐水的组之间是相似的（范围83.4%-86.4%)。
[0229] 组1和2中具有接种前（即接种1前化SBA效价> 1:4的受试者比例对于菌株A22分别 为15.跳和18.8%;对于菌株A56分别为10.4%和10.5%;对于B24分别为6.1%和8.4%;和对于菌 株B44分别为1.7%和3.2%。此外，组2和1中具有接种前hSBA效价含1:16的受试者比例对于菌 株A22分别为13.7%和16.4%;对于菌株A56分别为9.0%和9.1%;对于B24分别为4.1%和5.4%; 和对于菌株B44分别为1.2%和2.1〇/〇。
[0230] 在组2(二价rLP2086 +盐水）中，在接种2后1个月时具有> 1:4的hSBA效价的受试 者比例对于A22为86.3%，对于A56为98.7%，对于B24为77.1%，且对于B44为60.1%。接种3后1 个月，具有M :4的hSBA效价的受试者比例对于A22为96.4%，对于A56为99.4%，对于B24为 92.8%，且对于844为86.5%。在组1(二价'1口2086 + 64畑45化）中，在接种2后1个月时具有> 1:4的hSBA效价的受试者比例对于A22为83.8%，对于A56为97.8%，对于B24为71.9%，且对于 B44为57.7%。接种3后1个月，具有含1:4的hSBA效价的受试者比例对于A22为94.3%，对于A56 为99.1%，对于 B24为91.1%，且对于 B44为84.4〇/〇。
[0231] 在组2(二价rLP2086 +盐水）中，在接种2后I个月时具有> 1:16的hSBA效价的受试 者比例对于A22为85.8%，对于A56为98.4%，对于B24为68.8%，且对于B44为49.9%。在接种3后 1个月时，具有> 1:16的hSBA效价的受试者比例对于A22为96.3%，对于A56为99.4%，对于B24 为89.2%，且对于844为82.4%。在组1(二价'1口2086+641?^5比）中，在接种2后1个月时具有 M : 16的hSBA效价的受试者比例对于A22为83.0%，对于A56为97.2%，对于B24为65.2%，且对 于B44为46.4%。在接种3后1个月时，具有> 1:16的hSBA效价的受试者比例对于A22为94.0%， 对于A56为98.9%，对于B24为86.3%，且对于B44为78.0〇/〇。
[0232] 对于组1和组2两者，2或3次剂量的二价rLP2086后高比例的受试者实现> 1:16或 更高的hSBA效价，而在接种前探视1时大部分受试者对于主要MnB测试菌株的任一种均不具 有可测量的hSBA效价。
[0233] 对于基线HPV血清阴性可评价免疫原性群，对于二价rLP2086 + GARDASIliaail) 和盐水+ GA畑ASIL组(组3)在接种3的GA畑ASIL剂量后1个月时，对于HPV抗原实现HPV血清 转换的预定标准的受试者比例如下：HPV-6 (分别为99.4%和99.3%), HPV-Il (分别为 99.6%和99.5%)，HPV-16 (分别为99.6%和99.5%)，和HPV-18 (分别为99.5%和99.0%)。
[0234] GARDASIL剂量后 1 个月时二价rLP2086 + GARDASIL组(组 1)和盐水+ GARDASIL 组 (组3)之间应答者的比例中的差异为对于HPV-6为0.1%(95%CI; -0.9，1.5)，对于HPV-11 为0.1% (95% Cl: -0.7，1.3)，对于HPV-16为0.1% (95% Cl; -0.7，1.3)，和对于 HPV-18为0.5% (95% Cl; -0.6， 1.9)。
[02巧]对于二价rLP2086 + GA畑ASIL组（组1)和盐水+ GA畑ASIL组（组3)，在所有4种 HPV抗原的血清转换率差异在0.1 %和0.5 %内，且血清转换率组间非常相似，对于所有4种 HPV抗原具有大于99 %的受试者血清转换。
[0236] 作为额外评价，通过分析接种3后1个月时对于巧巾主要MnB菌株(A22和B24)的hSBA 效价4倍应答率将二价rLP2086 + GARDASIL (组1)与二价rLP2086 +盐水(组2)比较。从基 线至接种3后1个月对于巧巾主要MnB菌株实现hSBA效价倍数升高含4的受试者比例如下:在 组1的受试者中，85.3%展示出针对测试菌株A22的hSBA效价中含4倍升高，且83.4%展示出针 对测试菌株B24的hSBA效价中> 4倍升高。在组2的受试者中，86.4%展示出针对测试菌株A22 的hSBA效价中含4倍升高，且84.8%展示出针对测试菌株B24的hSBA效价中含4倍升高。
[0237] 接种3后1个月组1和组2之间应答者比例中的差异为对于A22为-1.1%(95%(：1:-4.6，2.3)和对于B24为-1.4% (95% Cl: -5.1，2.3)。4倍应答率的差异均接近1%的值，且 比例差异的95%CI的下界为-4.6% A22和-5.1% B24。
[0238] 针对二价rLP2086的免疫应答本研究的另一目标是描述如通过用4种主要MnB测试 菌株(2种表达LP2086亚家族A蛋白（A22和A56)且巧中表达LP2086亚家族B蛋白（B24和B44)) 进行的hSBA测量的(在第二次探视(探视3)和用二价rLP2086第S次(探视5)接种后1个月测 量的)免疫应答。
[0239] 该目标的终点之一是在接种2(探视3)后1个月时和在接种3(探视5)后1个月时对 于4种主要MnB测试菌株的每一种具有hSBA效价含化OQ的受试者的比例。评估对于4种主要 MnB测试菌株的每一种对于可评价的免疫原性群具有含化OQ的hSBA效价的受试者比例。A22 的LLOQ为等于1:16的hSBA效价而对于所有其他MnB测试菌株的LLOQ为等于1:8的hSBA效价。
[0240] 对于组2(二价rLP2086 +盐水），在基线（接种1前）具有 > 化09的hSBA效价的受试 者比例对于A22为16.4%，对于A56为9.3%，对于B24为6.9%，且对于B44为2.5%。对于组2，接种 2后1个月时和接种3后1个月时实现>化09的11584效价的受试者比例对于422分别为85.8% 和96.3%，对于A56分别为98.5%和99.4%，对于B24分别为74.2%和92.6%，且对于B44分别为 57.P/0 和 85.7〇/〇。
[0241 ] 对于组1(二价rLP2086 + GARDASIL)，在基线（接种1前）具有>1X0Q的hSBA效价的 受试者比例对于A22为13.7%，对于A56为9.2%，对于B24为5.1%，且对于B44为1.4%。对于组1， 接种2后1个月时和接种3后1个月时实现 > 化09的hSBA效价的受试者比例对于A22分别为 83.0%和94.0%，对于A56分别为97.5%和98.9%，对于B24分别为70.6%和90.5%，且对于B44分 别为 54.5%和82.7〇/〇。
[0242] 接种2后1个月时在组1和组2受试者中观察到针对4种主要MnB测试菌株的实质上 的hSBA应答，且接种3后1个月观察到额外的增加。
[0243] 评价对于4种主要MnB测试菌株的每一种实现hSBA效价倍数升高含4的受试者比例 和对于可评价免疫原性群实现复合应答的受试者比例。在基线(接种1前)对于组合的所有4 种MnB菌株具有观察到的hSBA效价含化OQ的受试者比例在组1 (0.3%)和组2 (0.7%)之间是相 似的。
[0244] 对于组2(二价rLP2086 +盐水），从基线至接种3后1个月实现hSBA效价倍数升高> 4的受试者比例对于A22为86.4%，对于A56为95.3%，对于B24为84.8%，和对于B44为 80.7%，且83.9%的受试者实现复合hSBA应答（对于组合的所有4种主要菌株hSBA > 化OQ)。接种2后1个月时，从基线实现hSBA效价倍数升高含4的受试者比例对于A22为74.2%， 对于A56为92.6%，对于B24为63.4%，和对于B44为47.4%，且51.9%的受试者实现复合hSBA应 答。
[024引对于组1(二价rLP2086 +盐水），从基线至接种3后1个月实现hSBA效价倍数升高> 4的受试者比例对于A22为86.4%，对于A56为95.3%，对于B24为84.8%，和对于B44为 80.7%，且83.9%的受试者实现复合hSBA应答（对于组合的所有4种主要菌株hSBA > 化OQ)。接种2后1个月时，从基线实现hSBA效价倍数升高含4的受试者比例对于A22为74.2%， 对于A56为92.6%，对于B24为63.4%，和对于B44为47.4%，且51.9%的受试者实现复合hSBA应 答。
[0246] 额外的hSBA倍数应答。其他终点为从基线至每一接种后血液采样探视对于4种主 要MnB菌株的每一种实现至少2倍和3倍hSBA效价增加的受试者的比例。注意A22的化OQ为等 于1:16的hSBA效价而对于所有其他MnB测试菌株的LLOQ为等于1:8的hSBA效价。
[0247] 从基线至接种2后1个月组1和组2的对于MnB菌株实现hSBA效价中> 2倍升高的受 试者比例对于A22分别为77.3%和81.1%，对于A56分别为94.4%和95.3%，对于B24分别为 63.0%和66.0%，且对于B44分别为46.1%和48.6%。从基线至接种3后1个月组1和组2的对于 MnB菌株实现hSBA效价倍数升高含2的受试者比例对于A22分别为90.2%和92.8%，对于A56分 别为97.跳和97.9%，对于B24分别为84.6%和87.2%，且对于B44分别为77.7%和81.7〇/〇。
[0248] 从基线至接种2后1个月组1和组3的对于MnB菌株实现hSBA效价倍数升高> 3的受 试者比例对于A22分别为73.1%和74.2%，对于A56分别为92.5%和92.6%，对于B24分别为 61.3%和63.4%，且对于B44分别为45.7%和47.4%。从基线至接种3后1个月组1和组3的对于 MnB菌株实现hSBA效价倍数升高含3的受试者比例对于A22分别为85.3%和86.4%，对于A56分 别为95.0%和95.3%，对于B24分别为83.4%和84.8%，且对于B44分别为77.0%和80.7〇/〇。
[0249] 对目标下描述性终点概况说来，对于组1(二价rLP2086 + GARDASIL)和组2 (二价 rLP2086 +盐水）两者，大部分受试者实现对于所有4种主要MnB测试菌株的hSBA效价> LL0Q，而仅非常小比例的受试者在基线（接种前探视1)时具有可测量的hSBA效价> LL0Q。 用4种MnB菌株的实质上免疫应答在接种2后1个月观察到，且对于组1和组2受试者在接种3 后1个月观察到额外的增加。运一结论通过W下证实:3次剂量后具有hSBA效价>1:16的受 试者的比例，两组中2次剂量后和3次剂量后实现的观察到的GMT，和对于4种主要MnB测试菌 株的RCDC。
[0250] 对于组1和组2,高比例的受试者实现对于主要MnB测试菌株的每一种的hSBA效价 倍数升高^ 4和第S次研究接种后对于所有4种主要MnB菌株的复合hSBA应答^ LL0Q。
[0巧1] 此外，对于组1(二价rLP2086 + GA畑ASIL)和组2 (二价rLP2086 +盐水），大多数 受试者实现对于4种主要Mn B菌株在所有采样时间点的hSBA效价倍数升高含3和hSBA效价倍 数升高含2。具有达到运些标准的结果的受试者比例相比于2次接种在3次接种后更高。
[0巧2] 运些结果支持运一论据，即当与HPV疫苗GA畑ASIL共施用时，针对二价rLP2086的 免疫应答产生与针对二价rLP2086 +盐水的免疫应答相当的强力的免疫应答。
[0253] 实施例8的表B呈现在可评价免疫原性群中对于组1(二价rLP2086 + GARDASIL)和 组3 (盐水+ GARDASIL)在接种3后1个月时对于4种HPV抗原的每一种的GMT和相应的Cl。
[0254] 对于组3,在基线（接种1前）和接种3后1个月时的HPV GMT对于HPV-6分别为6.0和 550.3;对于HPV-11分别为4.3和1084.3;对于HPV-16分别为6.1和4763.4;和对于HPV-18分 别为5.3和1047.4。对于组1(二价rLP2086 + GARDASIL),在基线(接种1前)和接种3后1个月 时的HPV GMT对于HPV-6分别为5.8和451.8;对于HPV-11分别为4.2和892.9;对于HPV-16分 别为5.8和3695.4;和对于HPV-18分别为5.2和744.0。总体上，相比于组1，GMT对于组3在数 值上更高。显示对于册V-6，HPV-11，册V-16和册V-18的效价分布的反向累积分布曲线 (RCDC)在可评价的免疫原性群的所有采样时间点对于组1(二价rLP2086 + GARDASIL)和组 3(盐水+ GARDASIL)进行评价。RCDC显示对于组1和组3在接种3后受试者中的强力免疫应 答。
[02巧]针对GARDASIL的免疫应答的概述。相比于组1(二价rLP2086 + GARDASIL),针对 HPV抗原的GMT对于组3(盐水+ GA畑ASIL)在数值上更高，且接种3后观察到的HPV GMT表明 对于两组的强力的免疫应答。RCDC还支持对于组1和组3在接种3后的强力免疫应答。运也被 对于4种HPV抗原具有血清阳性状态的受试者比例所支持，其在接种3后1个月对于两组均为 〉99%。组3(盐水+ GARDASIL)中年龄更小的亚组比年龄更大的亚组具有更高的HPV GMT。当 GARDASIL与二价rLP2086同时给予时维持运一差异。
[0巧6] 免疫原性结论相比于盐水+ GARDASIL或相比于二价rLP2086 +盐水的二价 rLP2086 _ GA畑ASIL的非劣等性标准要求接种3后1个月对于针对HPV(对于所有4种HPV抗 原化PV-6,册V-11,册V-16和册V-18))的抗体和对于使用巧巾主要MnB测试菌株(A22和 B24)的hSBA效价的几何平均效价比率(GMR)的2侧95%CI的下限大于0.67。对于两种MnB菌 株和4种HPV抗原中的巧巾达到了该预定阔值。对于HPV-18，GMR的2侧95%CI的下限略微低于 0.67的预定阔值，为在0.62。
[0257] 99 %或更多的同时接受GARDASIL与二价rLP2086或盐水的组的受试者实现对于所 有4种HPV抗体的血清转换。对于所有4种HPV抗原的RCDC显示大多数受试者实现在接种3后I 个月高于血清转换阔值的应答。相对于基线的强力GMT对于接受GA畑ASIL的两组均观察到。 [0巧引对于巧巾主要MnB测试菌株（A22和B24)的4倍升高应答在接受二价rLP2086 + GARDASIL的组（分别为85.3%和83.4%)和接受二价rLP2086 +盐水的组（分别为86.4%和 84.8%)之间是相似的（范围83.4%-86.4%)。
[0259] 针对二价rLP2086的应答的进一步描述性分析使用4种主要MnB测试菌株(A22, A56, B24和B44)进行。在接种2或3后1个月，对于接受二价rLP2086与同时的GA畑ASIL (二 价rLP2086 + GARDASIL)或与同时的盐水(二价rLP2086 +盐水）的两组，高比例的受试者 实现对于可评价的免疫原性群的hSBA效价倍数升高含4和复合应答(所有4种MnB测试菌株 和3期临床程序中使用的相同的免疫原性/效力终点定义）。运些应答实质上高于hSBA效价 >1:4(其已证实与保护免于包括血清群B疾病在内的脑膜炎球菌疾病相关）。运些结果还表 明和支持针对二价rLP2086(无论是否与盐水或与GARDASIL同时施用）的强力免疫应答的证 据。
[0260] 结论:数据表明针对两种疫苗的强力免疫应答在同时施用rLP2086 + HPV4后产 生。预定的非劣等性标准对于6种抗原中的5中达到。尽管针对HPV-18的GMR勉强错过非劣等 性标准，但高比例的应答者（> 99%)表明预期同时在施用后维持临床有效性。二价rLP2086 是完全耐受且引发针对表达与疫苗中的那些异源的f皿P的测试菌株的强力免疫应答。
CI=置信区间;GMT=几何平均效价;HPV=人乳头瘤病毒;hSBA=使用人补体的血清杀菌测 定;LLOQ=定量下限;NA=不可应用。 注意:LLOQ=对于HPV-6为 11 mMU/ml,对于HPV-Il为8 mMU/ml;对于HPV-16为 11 mMU/ ml;和对于HPV-18为 10 mMU/mlDLLOQ=对于A22为 1:16;对于A56, B24和B44为1:8。低于 LLOQ的结果设定为0.5*LL0Q用于分析。 a. n=对于给定抗原或菌株具有有效且确定的测定结果的受试者数目。 b. 使用在接种3后1个月具有有效且确定的测定结果的所有受试者计算几何平均效价 (GMT)O C.置信区间（Cl)为基于Student t分布对于测定结果的平均对数的置信区间的回转 换（back transformations)。 d. GMT的比率(对于HPV抗原效价为组I/组3，和对于hSBA菌株效价为组I/组2 )。 e. 置信区间（Cl)为基于Student t分布对于测定值对数的平均差的置信区间的回转 换(对于HPV效价为组1-组3，和对于hSBA菌株效价为组1-组2)。
CI=置信区间;HPV=人乳头瘤病毒。 a. N=对于给定抗原具有基线HPV血清阴性状态的受试者数目。 b. n=对于给定抗原在接种3后1个月实现血清转换(预定标准)的受试者数目。 C.基于观察到的受试者比例的精确2侧置信区间(Clopper和化arson)。 d. 比例中的差异，表示为百分比。 e. 对于比例中的差异的精确2侧置信区间(基于化an & Zhang),表示为百分比。
[0261] 实施例9:二价rLP2086疫苗效力 二价rLP2086的效力已使用hSBA应答作为效力的代用品和针对侵袭性脑膜炎奈瑟氏球 菌血清群B(MnB)菌株的血清杀菌抗体应答的证实来推断。
[0262] 对于MnB菌株，引起侵袭性脑膜炎球菌疾病（IMD)的菌株代表用于评价中。每一MnB 测试菌株表达巧BP蛋白变体(A22, A56, B24或B44)，其与疫苗组分(A05和B01)异源（不 同）。
[0263] 二价rLP2086的效力在美国和欧洲的4459位11-18岁龄的青少年中进行的3随机对 照的II期研究中评价。还参见实施例6。总计2293位使用0、2和6月接种时间表接受至少1剂 量的120 iig二价rLP2086。效力通过在接种有二价rLP2086的受试者中评价hSBA免疫应答来 评估。
[0264] 使用5个主要疗效(co-primary)免疫原性终点推断效力。对于5个主要疗效终点中 的4个，受试者中的预定比例必须在3次剂量的二价rLP2086后针对4种MnB现聯菌株的每一 种实现hSBA效价中的4倍升高。第五共同主要疗效终点为复合终点，其需要预定的高比例的 受试者各自在3次剂量的二价rLP2086后在用主要MnB测试菌株的所有4种hSBA中均应答。免 疫应答还基于第S剂量疫苗后1个月实现hSBA效价含定量下限化L0Q)的受试者比例来评 估。LLOQ定义为可W测量的样品中抗体的最低量。
[026引研究1(描述于实施例7和实施例8)为11期、随机化的、活性对照的（active-controlled)、观察者盲测的、多中屯、试验，其中 2499 位美国受试者 （11-17 岁龄) 随机分配至 (W2:2:l比例）3组中的一组:组1接受二价rLP2086 + HPV4,组2接受二价rLP2086 +盐水， 和组3接受盐水+ HPV4。所有接种在0、2和6月时间表上施用。
[0266]研究2(描述于实施例4)为II期、随机化的、安慰剂对照的、单盲试验，其中753位欧 洲受试者（11-18岁龄)随机分配至（Wl :1比例）2组:组I接受在0、2和6月时的二价rLP2086 和第O月时的dTa-IPV(白喉、破伤风、无细胞百日咳-灭活的脊髓灰质炎病毒）。组2接受在0、 2和6月时的盐水和第0月时的dTa-IPV。
[0267]研究3 (描述于实施例5)为II期、随机化的、安慰剂对照的、单盲的、多中屯、试验，其 中1，713位欧洲受试者（11-18岁龄)随机分配至（^3:3:3:2:1比例巧组。受试者接受在0、1、 和6月时间表(组1);在0、2和6月时间表(组2);在0和6月时间表(组3);在0和2月时间表(组 4);或在0和4月时间表(组5)施用的2或3次剂量的二价rLP2086。每组中施用盐水注射（1或2 次剂量，取决于组）W维持盲测(the bl ind)。
[026引研究1、2和3中在0、2和6月时接受3剂量系列的二价rLP2086的受试者中的结果上 文描述于各实施例4-8中。4倍和复合应答率的评价为所有研究的探索性终点。4倍应答率显 示对于所有4个终点的95%置信区间(Cl)的下界在3个研究中是相似的且一致地达到HI期 终点的阔值限。实现hSBA效价^ LLOQ的受试者比例在3个研究中是相似的。
[0269] 基于1或2个月分开给予疫苗的2次施用后获得的hSBA数据，在运些间隔上施用2次 剂量的疫苗可W提供针对由于潜在暴露于脑膜炎球菌血清群B疾病的病例而处于增加的风 险中的个体的保护。1或2个月分开递送的2次疫苗施用后观察到的应答显示一定比例的受 试者表达等于或高于对于4种主要测试菌株的每一种的化OQ值的hSBA水平（参见组1和组2 的研究1的结果;参见组1的研究2的结果;参见组2的研究3的结果）。6个月时施用的第S剂 量的疫苗可W实现疫苗介导的保护。
[0270] 同时疫苗施用研究1(描述于实施例7和实施例8)评价在美国青少年中二价 rLP2086和HPV4的同时使用。研究终点包括第S接种后1个月对于HPV4抗原（基于几何平均 效价[GMT])和对于二价rLP2086(基于使用两种MnB测试菌株[变体A22和B24]的hSBA)的免 疫应答的非劣等性评价。HPV4免疫应答还通过4种HPV抗原的每一种的血清转换来评价。
[0271] 研究1显示组1(二价rLP2086+HPV4)和组3(盐水+HPV4)的抗体针对HPV抗原的几何 平均效价(GMT)，W及组1和组3之间的其相应的GMT比率(GMR)和该比率的2侧95%CI。研究1 还提供组1和组2的针对巧巾主要MnB测试菌株的hSBA GMT的比较W及组1和组2之间其相应 的GMR和该比率的2侧95%CI。非劣等性边缘的标准为1.5倍，其对应于GMR的2侧95%CI的下 限的0.67的值。0.67的1.5倍标准对于除了HPV-18外的所有MnB现聯菌株和HPV抗原均达到， 所述HPV-18具有0.62的下界95 %置信区间（Cl)。尽管针对HPV-18的应答未达到预定的非劣 等性标准，但差异是微小的。在单独的分析中，含99%的受试者在盐水+HPV4和二价rLP2086 +HPV4组中血清转换为所有4种抗原。
[0272] 实施例10: 二价rLP2086在个体中引发抗体，其提供针对表达流行的和爆发相关的f皿P变体的MnB 菌株的宽覆盖 使用人补体的血清杀菌测定化SBA)中测量的杀菌抗体已与针对脑膜炎球菌疾病的保 护相关且hSBA应答已常规用作疫苗效力的代用品。f皿P多样性的全球流行病学研究掲示 ~80%的脑膜炎球菌疾病由表达10种流行f皿P变体之一的菌株引起。
[0273] 方法:在用二价rLP2086免疫的个别人受试者中评价针对表达在美国和欧洲中10 种最流行甜BP变体(824、816、844、422、803、809、412、419、405和407)的脑膜炎奈瑟氏球菌 血清群B(MnB)菌株的hSBA应答。表达运十种最流行变体的MnB菌株代表甜BP多样性的宽度， 包括6种主要甜BP亚群中的5种，其分别代表MnB SBA菌株库和MnB SBA菌株库的美国子集中 〉98%和97%的菌株亚群计）。二十S种MnB测试菌株获自Pfizer MnB SBA菌株库（N= 1263)，其代表在2000年和2006年之间系统收集自美国和欧洲的菌株。此外，来自近期MnB疾 病爆发的分离株也包括在分析内。匹配的接种前和接种后血清(剂量2后和剂量3后)随机获 自参与临床研究B1971005、B1971012或B1971003的青少年和年轻成年人受试者。
[0274] 为了提供支持用二价rLP2086接种提供的潜在覆盖的额外信息，用爆发菌株和来 自用二价rLP2086免疫的9位受试者的血清样品进行hSBA(临床研究B1971012,描述于实施 例5和实施例6)。受试者（11至<19岁龄)已接受在0、2和6个月时3次剂量的二价rLP2086。为 了确保保守hSBA评价，W无偏见方式从一组不具有针对主要MnB测试菌株的基线hSBA活性 的受试者中选择9位受试者。测试克隆的普林斯顿大学爆发菌株中的两株（PMB5021和 PMB5025)和UCSB爆发菌株中的两株(两种基因簇PMB4478和PMB4479各一株）。
[0275] 克隆的普林斯顿大学MnB爆发菌株的基因表征如下:数据表明普林斯顿大学爆发 菌株是克隆的。菌株的每一株录入为CC41/44 (ST 409)并且表达巧BP变体B153 (SEQ ID N0:6)。菌株对于NHBA (2)、porA (亚型Pl.5-1,2-2)和PO巧（3-82)具有相同的等位基因 分配，所有菌株均不含nadA，并且所有菌株具有相同的脉冲场凝胶电泳(PFGE)概况(429)。
[0276] 2013 加 iversity of California Santa Barbara爆发菌株的基因表征如下： UCSB菌株录入为CC32化T5 ; ST32)，表达甜BP变体B24，且与自从1993年已导致高度地方性 的血清群B疾病的化egon克隆相关。与菌株的Princeton爆发组不同，UCSB菌株遗传上分离 为两个不同簇，其通过其PFGE概况(468或467)和PO巧类型（3-461或3-24)而有所区别。菌株 对于船(14(1)、畑84(5)、口〇'4(亚型？1.7，16-20)具有相同的等位基因分配。
[02W]对于所有受试者和所有爆发菌株在基线的hSBA效价< 4,表明受试者在用二价 rLP2086免疫前不具有针对任何爆发菌株的保护性抗体。
[0278] 结果:所有23种MnB菌株在用来自用二价rLP2086免疫的单独受试者的血清的hSBA 中是易感的。代表所有10种流行性f皿P变体的菌株W及额外菌株均被hSBA杀死。基线hSBA 血清保护率(实现hSBA效价含1:4的受试者的比例)普遍低。二价rLP2086免疫前受试者中观 察到的更低的血清保护率例证未接种的青少年或年轻成年人群对于MnB疾病的脆弱性。然 而，在青少年和年轻成年人中用接种后血清观察到强力的血清保护率:取决于MnB菌株和测 试的群体，对于运些菌株的83%观察到>70%的血清保护率。表达最流行的亚家族A和B f皿P 变体B24和A22的菌株的接种后血清保护率对于表达f皿P变体B24和B153的近期爆发菌株范 围为81.0%-100%和77.8%-100%。此外，针对所有爆发菌株的强力剂量2后应答(相比于基线） 在运些受试者中观察到，取决于hSBA中所用的爆发菌株，范围为56-89%。相反，对于近期美 国爆发的菌株，接种前血清保护率是低的或不可检测的。针对普林斯顿大学和UCSB爆发菌 株的hSBA应答显示于图2。
[0279] 结论:二价rLP2086引发个体中对于表达美国和欧洲流行的fHBP的不同侵袭性MnS 菌株W及新近出现的变体(B153KSEQ ID NO: 6)的强力的血清保护性hSBA应答。用二价 rLP2086接种后显示血清保护性应答的受试者比例大大超过了在基线处血清保护的受试者 的比例。数据支持二价rLP2086具有为青少年和年轻成年人提供免于侵袭性脑膜炎球菌血 清群B疾病包括来自近期爆发的疾病的广泛保护的潜力。
【主权项】
1. 组合物，其包含 a) 包含SEQIDNO: 1所示的氨基酸序列的第一脂质化多肽、 b) 包含SEQIDN0:2所示的氨基酸序列的第二脂质化多肽。2. 根据权利要求1的组合物，其进一步包含聚山梨酯80、铝、组氨酸和氯化钠。3. 根据权利要求2的组合物，其中所述组合物包含约120yg/ml的第一多肽;约120yg/ ml的第二多肽;约2.8摩尔比的聚山梨酯80;约0.5mg/ml·!;约10mM组氨酸;和约150mM氯 化钠。4. 根据权利要求2的组合物，其中所述组合物包含约60yg的第一多肽;约60yg的第二 多肽;约18yg的聚山梨酯80;约250yg铝;约780yg组氨酸;和约4380yg氯化钠。5. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物诱导血清免疫球蛋白的杀菌效价，当在相 同条件下在使用人补体的血清杀菌测定中测量时，所述血清免疫球蛋白的杀菌效价为在接 受第一剂量后的人中比在接受所述第一剂量前的人中的血清免疫球蛋白的杀菌效价高至 少大于1倍。6. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物诱导血清免疫球蛋白的杀菌效价，当在相 同条件下在使用人补体的血清杀菌测定中测量时，所述血清免疫球蛋白的杀菌效价为在接 受第一剂量后的人中比在接受所述第一剂量前的人中的血清免疫球蛋白的杀菌效价高至 少2倍。7. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物诱导血清免疫球蛋白的杀菌效价，当在相 同条件下在使用人补体的血清杀菌测定中测量时，所述血清免疫球蛋白的杀菌效价为在接 受第一剂量后的人中比在接受所述第一剂量前的人中的血清免疫球蛋白的杀菌效价高至 少4倍。8. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物诱导血清免疫球蛋白的杀菌效价，当在相 同条件下在使用人补体的血清杀菌测定中测量时，所述血清免疫球蛋白的杀菌效价为在接 受第一剂量后的人中比在接受所述第一剂量前的人中的血清免疫球蛋白的杀菌效价高至 少8倍。9. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物不进一步包含与SEQIDNO: 1具有少于 100%序列同一性的多肽。10. 根据权利要求1的组合物，其中所述第一多肽具有总计258个氨基酸。11. 根据权利要求1的组合物，其中所述第一多肽在多肽的N末端包括SEQIDNO:3所示 的氨基酸序列。12. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物不进一步包含与SEQIDNO: 2具有少于 100%序列同一性的多肽。13. 根据权利要求1的组合物，其中所述第二多肽具有总计261个氨基酸。14. 根据权利要求1的组合物，其中所述第二多肽在多肽的N末端包括SEQIDN0:3所示 的氨基酸序列。15. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物包含至多两种脂质化的多肽。16. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物不进一步包含与SEQIDNO: 1具有少于 100%序列同一性的多肽。17. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物不进一步包含与SEQIDNO: 2具有少于 100%序列同一性的多肽。18. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物不包含杂合蛋白。19. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物不包含嵌合蛋白。20. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物不包含融合蛋白。21. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物不是冻干的。22. 根据权利要求1的组合物，其中所述组合物是液体组合物。23. 在人中诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseriameningitidis)血清群B亚家族A菌 株和针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株的杀菌免疫应答的方法，其包括向人施用 有效量的组合物，所述组合物包含 a) 包含SEQIDNO: 1所示的氨基酸序列的第一脂质化多肽，和 b) 包含SEQIDN0:2所示的氨基酸序列的第二脂质化多肽。24. 根据权利要求23的方法，其中所述组合物进一步包含聚山梨酯80、铝、组氨酸和氯 化钠。25. 根据权利要求23的方法，其中针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌株的免疫 应答比针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株的免疫应答更高。26. 根据权利要求23的方法，其中在人中的针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族A菌 株的免疫应答包含比在人中的针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B亚家族B菌株的杀菌效价更 尚的杀菌效价。27. 根据权利要求23的方法，其中所述组合物诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B 八22^56、824、844菌株中任一种、或其任何组合的杀菌免疫应答。28. 根据权利要求23的方法，其中所述组合物诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B 824、816、844^22、803、809^12^19^05^07、8153菌株中任一种、或其任何组合的杀菌免 疫应答。29. 根据权利要求23的方法，其中所述方法进一步包括向人施用针对人乳头瘤病毒的 免疫原性组合物。30. 根据权利要求29的方法，其中所述针对人乳头瘤病毒的免疫原性组合物在施用所 述针对脑膜炎奈瑟氏球菌的组合物的24小时内施用于人。31. 根据权利要求29的方法，其进一步包括诱导针对人乳头瘤病毒6型、11型、16型、18 型中任一种、或其任何组合的免疫应答。32. 根据权利要求23的方法，其中所述方法进一步包括向人施用针对白喉、破伤风、百 日咳和脊髓灰质炎的免疫原性组合物。33. 根据权利要求32的方法，其中所述针对白喉、破伤风、百日咳和脊髓灰质炎的免疫 原性组合物在施用所述针对脑膜炎奈瑟氏球菌的组合物的24小时内施用于人。34. 根据权利要求32的方法，其中所述方法进一步包括在人中诱导针对白喉、破伤风、 百日咳、脊髓灰质炎中的任一种、或其任何组合的免疫应答。35. 在人中诱导针对脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B表达B153因子Η结合蛋白的菌株的杀菌 免疫应答的方法，其包括向人施用有效量的组合物，所述组合物包含 a) 包含SEQIDNO: 1所示的氨基酸序列的第一脂质化多肽，和 b) 包含SEQIDN0:2所示的氨基酸序列的第二脂质化多肽。
【专利摘要】在一方面，本发明涉及包括具有SEQ？ID？NO:1所示的序列的第一多肽和具有SEQ？ID？NO:2所示的序列的第二多肽的组合物。在一个实施方案中，组合物包括约120μg/ml的包括SEQ？ID？NO:1中所示的氨基酸序列的第一多肽、120μg/ml的包括SEQ？ID？NO:2中所示的氨基酸序列的第二多肽、与所述第一多肽约2.8摩尔比的聚山梨酯80、与所述第二多肽约2.8摩尔比的聚山梨酯80、约0.5？mg/ml铝、约10mM组氨酸、和约150mM氯化钠。在一个实施方案中，一剂量的组合物为总体积约0.5？ml。在一个实施方案中，两剂量的组合物诱导人中针对不同的异源超家族A和超家族B菌株的杀菌效价。
【IPC分类】A61K39/095
【公开号】CN105492021
【申请号】CN201480049420
【发明人】A.S.安德森, R.G.阿鲁穆格哈姆, J.E.法利, L.D.弗勒特彻尔, S.哈里斯, K.U.詹森, T.R.乔内斯, L.克汉德科, B.劳恩, J.L.佩雷兹, G.W.兹洛特尼克
【申请人】辉瑞公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年8月27日
【公告号】CA2923129A1, EP3041502A2, US20150071959, WO2015033251A2, WO2015033251A3
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