用于制备多元不饱和酮化合物的方法
用于制备多元不饱和酮化合物的方法
【技术领域】
[0001] 本发明总体上涉及一种制造多元不饱和酯或硫酯化合物的方法。本发明进一步涉 及硫酯转化为其相应的硫醇以及硫醇转化为多元不饱和酮。更具体地，本发明涉及制备多 元不饱和硫酯以及随后的硫醇和多元不饱和酮化合物的方法，在所述方法中不希望的氧化 及顺/反异构反应在合成时实质上被减少或消除。
【背景技术】
[0002] 许多生物活性的多元不饱和脂肪酸具有一个或多个顺式的碳-碳双键。有报道称 自由基可支持这些键异构成为较为不希望的反式构象。顺/反异构化会对预期用于药物用 途的多元不饱和化合物造成不利的影响，例如，通过减小生物活性和/或使合成复杂化。例 如，可参见C.Ferreri等人（2007)M〇1 .Biotech. ,37:19;Chatgilialoglu，C等人（2002)Free Rrad · Biology&Medicine，33:1681;以及WO 2002-100991。
[0003] 有些，但并非全部，有报道称自由基可支持特定的多元不饱和化合物的顺/反异 构。人们认为自由基作为中介的氧化反应的动力学取决于一些参数，包括待制造的不饱和 化合物的化学性质、温度、PH、有光或无光、氧等。已有报道称自由基可在环境中自然发生或 作为由某些化学反应产生的不希望的副产物。例如，参见161^616 3^.等人（2010) Mos.Univ.Chemistry Bull.,65:210〇
[0004] 人们已经对减少碳-碳双键的氧化以及顺/反异构作出了尝试。在一种方法中，加 入抗氧化剂例如酸辛酯、抗坏血酸、多酚、巯基乙醇、β-胡萝卜素，或例如2,6_二叔丁基-4-甲 基苯(ΒΗΤ)以减少不希望的氧化反应。参见Mengele，E.A，ibid;Klein，EmN.Weber(2001) J.Agric.Food Chem. ,49:1224;以及Hung，W_L等人（2011)J.Agric.Food Chem.，1968。
[0005] 已有报道称某些多元不饱和三氟甲基酮化合物具有有益的生物活性。例如，参见 美国专利7,687,543;!1丽丨161厶.等人（2012)81.1.?1^顶1.，167:1691。
[0006] 制备特定多元不饱和酮的方法已被公开。在一个公开了合成特定的不饱和三氟甲 基酮的方法中，光延(Mitsunobu)类反应被用以将醇转化为对应的硫酯。据说进一步的化学 反应生成了产率为71%的不饱和三氟甲基酮（其中的化合物18)。可参见!1〇11116丨(16^.和 L.Skattebo1(2000)J.Chem.Soc.Perkin Trans.,1:2271〇
[0007] 人们公认的预期用于药物用途化合物应该以高产率生成，例如70%或以上。低于 满意的产率与不希望的副产物有关。将这些副产物从主产物(API)中去除的成本很高或很 困难，由此造成进一步的药物开发很困难。另外，监管机构通常要求对预期用于药物用途的 化合物中的副产物进行详细的分析。这一要求使得量产的成本过高。
[0008] 有报道称光延反应包含了在其他试剂中使用膦和偶氮二羧酸酯加入新的官能团， 通常是酯，到伯醇或仲醇。有报道称反应的机理很复杂，且对反应中间产物的认定存在争 议。例如，参见But，T.和P.Toy(2007)Chem.Asian J. ,2:1340;以及Swamy，K.C.等人（2009) Chem.Rev. ,109:2551。这使得某些光延反应的产物难以预测。
[0009] 在许多情况下，光延反应通过在低温下将醇、羧酸反应物以及膦在溶剂中混合在 一起来进行。接着，通常加入偶氮二羧酸酯，然后搅拌反应数小时以允许羧酸和醇反应生成 酯。本发明人发现了这一过程在本发明的多元不饱和化合物的环境中会产生杂质。例如，这 个反应级数通常导致不希望的氧化和/或顺/反异构，并导致HPLC中清晰的杂质峰。
[0010] 本发明人寻找用于生产多元不饱和酯或硫酯以及最终相应的多元不饱和酮的方 法，该多元不饱和酮通过适当的纯化之后，生产含有极少的氧化和顺/反异构化副产物的药 物级化合物。
【发明内容】
[0011] 本发明人发现利用光延反应传统上不能够提供具有足以用于药物用途的纯度和 产率的不饱和酮。然而，本发明人出人意料地发现，如果使用特定的反应级数并存在至少一 种抗氧化剂时，光延化学可用于制造在此公开的适合用于药物用途的特定的化合物。更具 体地，我们发现了直接制造药学上可接受的多元不饱和酯或硫酯化合物的方法，其可最终 转化为此处讨论的有益的酮化合物，其中不希望的氧化和顺/反异构化实质上被减少或消 除。本发明的方法可实际用于生产包括此处详述的多种适于药物用途的多元不饱和酮化合 物。
[0012] 因此，本发明的一个目的在于制备药学上可接受的多元不饱和酯或硫酯化合物， 其可最终转化为此处讨论的有益的酮化合物，其中不希望的氧化和顺/反异构化实质上被 减少或消除。本发明的方法包括利用特定的光延化学在抗氧化剂的存在下将醇转化为酯或 更优选地转化为硫酯。
[0013] 本发明的目的还在于提供高纯度的目标化合物，例如监管机构通常所要求的。有 提议称这可以在光延反应的情况下通过在多元不饱和醇的加入之前对反应中所有的硫代 酸或酸亲核试剂基本上去质子化反应来实现。人们认为前述的有益效果通常可以通过在醇 加入到亲核试剂之前将多元不饱和醇与至少一种药学上可接受的抗氧化剂结合来得到增 强。出乎意料地，抗氧化剂的存在并不影响光延化学的成功。
[0014] 优选地，后续的生成多元不饱和酮的步骤也在同样的或不同的药学上可接受的抗 氧化剂的存在下进行，以将后续反应中的氧化或顺/反异构化的可能性最小化。
[0015] 如果所使用的多元不饱和醇是通过在足以制造多元不饱和醇的条件下将多元不 饱和醛与适合的亲电还原剂接触来制备，也在本发明的范围之内。人们还认为使用温和的 亲电还原剂减少了不希望的双键的还原，由此有助于整个合成达到更好的纯度。
[0016] 因此，由一个方面来看，本发明提供了用于制备多元不饱和酯或硫酯的方法，包 括：
[0017] (1)在第一容器中，在膦的存在下，将羧酸或硫代酸在将其中所有的羧酸或硫代酸 基本上去质子化的条件下和偶氮二羧酸酯化合物结合；
[0018] (2)在第二容器中，将多元不饱和醇和至少一种药学上可接受的抗氧化剂结合；以 及
[0019] (3)将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合以形成所述多元不饱和酯或 硫醋。
[0020] 由另一个方面来看，本发明提供了用于制备多元不饱和硫醇的方法，包括：
[0021] (1)在第一容器中，在膦的存在下，将多元不饱和硫代酸在可其中所有的硫代酸基 本上去质子化的条件下和偶氮二羧酸酯化合物结合；
[0022] (2)在第二容器中，将多元不饱和醇和至少一种药学上可接受的抗氧化剂结合；
[0023] (3)将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合以形成所述多元不饱和硫 酯；以及
[0024] (4)将至少一种药学上可接受的抗氧化剂加至步骤(3)的多元不饱和硫酯中，所述 抗氧化剂可以与步骤(2)所用的抗氧化剂相同或不同，并将步骤(3)的硫酯在足以制造多元 不饱和硫醇的条件下还原。
[0025] 由另一个方面来看，本发明提供了用于制备多元不饱和酮化合物的方法，包括：
[0026] (1)在第一容器中，在膦的存在下，将多元不饱和硫代酸在将其中所有的硫代酸基 本上去质子化的条件下和偶氮二羧酸酯化合物结合；
[0027] (2)在第二容器中，将多元不饱和醇和至少一种药学上可接受的抗氧化剂结合；
[0028] (3)将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合以形成所述多元不饱和硫 醋；
[0029] (4)将至少一种药学上可接受的抗氧化剂加至步骤(3)的多元不饱和硫酯中，所述 抗氧化剂可以与步骤(2)所用的抗氧化剂相同或不同，并将步骤(3)的硫酯在足以制造多元 不饱和硫醇的条件下还原；以及
[0030] (5)将所述多元不饱和硫醇与化合物(LG)R3C0X反应，其中X为吸电子基团且R 3为带 有离去基团(LG)的烯基，（例如LG-CH2-形成
[0031]
[0032] 其中X为吸电子基团且LG为离去基团），可选地在进一步加入的氧化剂的存在下， 以形成多元不饱和酮化合物，理想地如此处限定的式（II)。
[0033] 由另一个方面来看，本发明提供了上文所限定的方法得到的产品。
[0034] 由另一个方面来看，本发明提供了一种用于生产药学上可接受的1，1，1_三氟-3-( ((2E ， 6Z ， 9Z ， 12Z ， 15Z ， ）-十八碳-2 ， 6 ， 9 ， 12 ， 15-五烯-1-基) 硫)丙-2-酮的方法 ，所述方法 包括步骤：
[0035] A)在第一容器中，将三苯基膦、偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)和硫代乙酸在溶剂中 结合以形成混合物，并将所述混合物优选地在〇_5°C反应大约10-60分钟以允许完全去质子 化发生；
[0036] B)在第二容器中，将（2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-醇和 (+/_) _α_生育酸结合；
[0037] C)将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合，优选地10分钟至1小时之间 以制造 S-((2E，6Z，9Z，12Z，15Z，）_ 十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-基）乙酰硫酯；
[0038] D)将步骤C)中生成的酯在将所述酯纯化至由HPLC( %面积)测定的至少90%纯的 条件下进行快速干柱色谱；
[0039] E)将步骤D)中生成的纯化的酯在还原酯基并生成对应的硫醇（2E，6Z，9Z，12Z， 15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-硫醇）的条件下与碳酸钾和(+/-)-€ [-生育酚接触；
[0040] F)将步骤E)中生成的硫醇在生成酮
[0041]的条件下与3-溴-1，1，1-三氟丙酮接触，其
>：S>. 中X为CF3;以及
[0042] G)在将酮纯化至由HPLC( %面积）测定的至少90%纯的条件下通过快速干柱色谱 纯化步骤F中生成的粗制酮。
[0043] 由另一个方面来看，本发明提供了生产药学上可接受的1，1，1_三氟-3-(( (3Z，6Z， 92，122，152)-十八碳-3,6,9，12，15-五烯-1-基)硫)丙-2-酮的方法，所述方法包括以下步 骤：
[0044] A)在第一容器中，将三苯基膦、偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)和硫代乙酸在溶剂中 结合以形成混合物，并将所述混合物优选地在〇_5°C反应大约10-60分钟，以允许完全去质 子化发生；
[0045] B)在第二容器中，将（32,62,92，122，152)-十八碳-3,6,9，12，15-五烯-1-醇和 (+/_)_α_生育酸结合；
[0046] C)将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合，优选地10分钟至1小时之间， 以制造 S-((3Z，6Z，9Z，12Z，15Z，）_ 十八碳-3,6,9，12，15-五烯-1-基）乙酰硫酯；
[0047] D)将步骤C)中生成的酯在将所述酯纯化至由HPLC( % 面积)测定的至少90%纯的 条件下进行快速干柱色谱；
[0048] E)将步骤D)中生成的纯化的酯在还原酯基并生成对应的硫醇（3Z，6Z，9Z，12Z， 15Z)-十八碳-3,6,9，12，15-五烯-卜硫醇的条件下与碳酸钾和(+/-)-€[-生育酚接触；
[0049] F)将步骤E)生成的硫醇在生成粗
[0050]
条件下与3-溴-1，1，1-三氟丙酮接触， 其中X为CF3;以及
[0051] G)在将酮纯化至由HPLC( %面积）测定的至少90%纯的条件下通过快速干柱色谱 纯化步骤F中生成的粗制酮。
[0052] 在本发明的任一方法中，如果多元不饱和醇是由其相应的醛在亲电还原剂例如 DIBAH的存在下还原获得是更优选的。
[0053] 由另一个方面来看，本发明提供了一种包含上文所限定的方法的产品以及至少一 种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
[0054] 定义
[0055] 术语多元不饱和酯或多元不饱和硫酯是指包含含有多个双键的烃链，以及当然包 含酯基或硫酯基的化合物。
[0056] 多元不饱和醇是指包含含有多个双键的烃链，以及当然包含醇基的化合物。
[0057] 多元不饱和酮是指包含含有多个双键的烃链，以及当然包含酮基的化合物。
[0058]硫代酸是包含-C0-SH基团的化合物。本发明方法的步骤（1)中使用的羧酸或硫代 酸通常为分子量250g/mol或更低的低分子量化合物。
[0059] 通常，本发明的任一多兀不饱和酮都具有小于500g/mol的分子量，优选地450g/ mol或更小，更优选地400g/mol或更小。
[0060] 术语"药学上可接受的"意为可用于制备药物，通常是无毒的且是非生物有害的， 其用于兽医用途和/或人类药物用途是可接受的。
[0061] 发明具体说明
[0062] 本发明涉及生产多元不饱和酯或硫酯进而最终多元不饱和硫醇和多元不饱和酮 的方法。所述方法提供了高产率和高纯度。特别是，可以设想的，在合适的纯化过后本发明 的方法步骤提供药物级的目标化合物。
[0063] 本发明提供了在提供监管机构通常所要求的产率和纯度的化合物的条件下，制造 多元不饱和酯或硫酯、将任何硫酯还原以形成硫醇并随后将该硫醇转化为酮的方法。例如， 不希望束缚于任何理论，人们认为在上述步骤(3)中不希望的氧化产物的生成可以通过去 质子化减少或者甚至消除，进而在步骤(2)中多元不饱和醇的加入之前基本上消耗步骤(1) 中将所有的酸/硫代酸。因此，混合步骤(3)在步骤（1)中所有的酸/硫代酸基本上反应之后 发生。
[0064] 步骤(2)中使用的本发明方法的起始原料为多元不饱和醇。优选地，所述醇如式 (I)所示
[0065] R-〇H (I)
[0066] 其中R为可选地被取代的C9-23不饱和烃基，可选地被一个或多个选自S，0，N，S0，S0 2 的杂原子或杂原子基团打断，所述烃基包括至少2个双键，优选地至少4个双键。
[0067] 如果在任意基团R中，双键不是共辄是优选的。基团R优选地包括5至9个双键，优选 地5至8个双键，例如5至7个双键，例如5或6个双键。
[0068] 如果双键不与羟基共辄是优选的。
[0069] 基团R中存在的双键可能为顺式或反式构型，然而如果多数存在的双键（至少 50%)为顺式构型是优选的。在更有益的实施例中，基团R中所有的双键均为顺式构型，或者 除了最接近0H基团的双键可能为反式构型外所有双键均为顺式构型。
[0070] 基团R可具有9至23个碳原子，优选地11至19个碳原子，特别是16至18个碳原子。基 团R中的碳原子优选地为线型。
[0071] 有时R基团可以被至少一个杂原子或杂原子基团中断，这不是优选的，且R基团的 主链优选地仅含有碳原子。
[0072] R基团可选地为取代的，例如带有多达三个取代基，例如选自卤原子、Ci-6烷基例如 甲基、Ch烷氧基。如果存在，取代基优选地为非极性的且很小，例如甲基。然而，如果R基团 保持未取代则是优选的。
[0073] 基团R优选地为线型，即在R链上没有支链。它优选地来自天然原料例如长链脂肪 酸或酯。特别是，R基团来自花生四烯酸、二十二碳六烯酸或二十碳五烯酸。
[0074] 因此，本发明使用的多元不饱和醇来自对应的脂肪酸或醛(如下所述的方案1)。我 们进一步发现当多元不饱和醇来自其对应的醛时，该多元不饱和醇优选地由包含将多元不 饱和醛在足以制造所述多元不饱和醇的条件下和合适的亲电还原剂接触的反应获得。不希 望束缚于任何理论，人们认为使用温和的亲电还原剂减少了不希望的双键的还原，由此有 助于整个合成获得更好的产率和纯度。
[0075] 在这方面使用二异丁基氢化铝(DIBAL)是特别优选的。本发明人出人意料地发现， 一些其它公知的还原剂例如硼氢化钠不能成功地用在该还原反应，因为它们增加了形成的 杂质的数量。出人意料的是，使用DIBAH似乎减少了异构并因此最大程度地减少了杂质的形 成。
[0076] 本发明的方法的第一步骤涉及光延化学。该反应通常包括醇、羧酸和三苯基膦在 溶剂中的溶解，随后加入在溶剂中溶解的偶氮二羧酸。然而，这样的方法在这种情况下行不 通。
[0077]我们提出了改变反应级数以避免在本发明化合物的环境中的氧化和/或异构化。 出人意料的是，我们使用的反应级数为我们提供了在没有显著的异构化或氧化下制备我们 目标化合物的机会。因此，直到我们的发明才清楚，我们采用的特定的反应级数将解决不希 望的氧化和顺反异构化的问题。此外，更出人意料的是，我们采用的反应级数在抗氧化剂的 存在下起作用。
[0078]任何已知的在光延反应中使用的偶氮二羧酸酯和膦化合物可用于本发明。膦是一 组公知的具有式R'3P(R=有机衍生物，典型的是烷基、芳基或杂芳基）的有机磷化合物。偶 氮二羧酸酯是通式为R"〇〇C-N=N-CO〇-R"的化合物，其中R"为有机衍生物如烷基或芳基。 [00 79]因此优选的膦包含在式 [0080] PY3中
[0081 ] 其中Υ为C1-10烷基、C6-10芳基、C7-12芳基烷基、C7-12烷基芳基、C3-10环烷基、 C4-10-杂芳基、C6-10芳基0-，其中的任一可选地被一个或多个选自NH2、NHRaSNR a2的基团 取代，其中RaSCl-6烷基。
[0082]合适的杂芳基包括吡啶。
[0083]优选的本发明方法中使用的膦为三芳基膦例如三苯基膦或烷基芳基膦例如二环 己基苯基膦、二乙基苯基膦、异丙基二苯基膦、三丁基膦、三环己基膦、三己基膦和三正辛基 膦。其他感兴趣的膦包括4_(二甲氨基)苯基二苯基膦、二苯基-2-吡啶基膦和苯氧基二苯基 膦。使用三芳基膦例如三苯基膦是特别优选的。
[0084] 优选的偶氮二羧酸酯化合物是式
[0085] Z00C-N=N-C00-Z 的那些化合物
[0086] 其中每个Z独立地为C1-10烷基、C6-10芳基、C7-12芳基烷基、C7-12烷基芳基、C4-10杂芳基、C4-10杂环或C3-10环烷基，其中任一可选地被一个或多个选自卤化物的基团取 代。两个Z基团优选地为相同。合适的杂芳基包括吡啶。合适的杂环包括哌啶或哌嗪。
[0087] 合适的偶氮二羧酸酯化合物通常基于可选地被取代的C1-6-烷基酯，例如偶氮二 甲酸二乙酯(DEAD)、二叔丁基偶氮二羧酸酯或偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)，或可选地被取 代的芳基酯，例如二-4-氯苄基偶氮二羧酸酯。其它感兴趣的化合物包括1，V _(偶氮二甲 酰)二哌啶。
[0088] 因此，一般而言本发明的方法中使用的膦和偶氮二羧酸酯化合物的性质不是关键 的，任何已知的膦或在文献中已知的偶氮二羧酸酯试剂都可以使用。
[0089] 多元不饱和醇与羧酸或硫代酸反应。羧酸或硫代酸一般是低分子量的，例如250g/ mol或更小。羧酸或硫代酸优选地为一元酸或一元硫代酸。最优选地，它是化合物MCOOH或 MCOSH，其中R1为C1-6烷基、C6-10芳基、C7-12烷基芳基或C7-12芳基烷基（如苄基或甲苯 基）。理想地，R 1为乙基或甲基，尤其是甲基。
[0090] 因此本发明中如上文限定的化合物R-OH与化合物RkOOH或RkOSH的反应得到了化 合物 R-0C0R1 或 RSC0R1。
[0091] 本发明方法的步骤(2)要求抗氧化剂的存在，即能抑制氧化反应的化合物。如果抗 氧化剂为小分子，例如具有500g/mol或更小的分子量，例如250g/mol或更小是优选的。抗氧 化剂最好应是由FDA批准使用的。
[0092]在本发明方法的步骤(2)中使用的抗氧化剂优选地为丁基羟基茴香醚、丁基羟基 甲苯、没食子酸丙酯、生育酚、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、硫代甘油、巯基乙酸、亚硫酸氢 钠、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、乙二胺四乙酸四钠或m)TA。
[0093] 使用生育酚是特别优选的，尤其是(+/-)-α-生育酚。
[0094] 应当理解的是，本发明的化合物主要是用于医药用途，因而所用的抗氧化剂优选 地为药学上可接受的。
[0095] 加入到多元不饱和醇的抗氧化剂的量可为0.01至1 %mol，0 · 1至0· 5%mol多元不 饱和醇。
[0096] 有报道称典型的光延反应是复杂的，且有关反应中间产物的认定和活性还有争 议。然而，本发明人发现，在上述步骤(3)中加入多元不饱和醇之前基本上消耗掉所有的酸/ 硫代酸将能够本质上提高产率，而且最重要的是，所得到的多元不饱和酯/硫酯的纯度达到 许多药物应用接受的水平。他们还了解到，药学上可接受的抗氧化剂的存在可以在本方法 中被用以帮助减少不希望的顺/反异构化，而不会被破坏或者被在许多光延反应中使用的 试剂和条件所阻止或灭活。出人意料的是抗氧化剂的存在不影响该反应的成功。给定了光 延反应实际作用的机理的不确定性，关于额外试剂如抗氧化剂的存在是否将与反应中产生 的许多瞬态中间产物干扰总是存在一个问号。
[0097] 典型地，在光延反应中可使用1:1:1比例的试剂。在所要求保护的方法中，我们需 要使用足量的膦和偶氮二羧酸酯将酸或硫代酸基本上完全地去质子化，优选地完全去质子 化。因此尤其是，不应当有过量的酸或硫代酸存在。实际上，如果使用的光延试剂过量是优 选。
[0098] 步骤（1)的反应可以用低温控制，优选地低于10°C，例如0至5°C。步骤⑴的混合物 理想地放置10分钟到一小时的时间，例如至少20或至少30分钟，以确保酸或硫代酸去质子 化成为其相应的羧酸或硫代羧酸离子。为确保充分的去质子化，应当理解的是，相对于酸或 硫代乙酸应当存在过量的光延试剂。
[0099]因此，理想地，与酸或硫代酸相比，膦和偶氮二羧酸两种反应物应当至少有1.1摩 尔当量。这将确保完全去质子化的发生。
[0100]理想地，膦、偶氮二羧酸酯和酸/硫代酸的混合形成溶液，特别是澄清的溶液。应当 没有物料粘着在发生反应的容器的侧面。当去质子化迅速发生时，在良好的搅拌下充分的 去质子化应该会非常迅速(如果不是更小的话几秒钟)地发生，并必定在10分钟时间之内。 [0101]如果充分的去质子化没有发生，会体现在最终的产品含有大量杂质。未经充分的 去质子化，有可能在最终产品中观察到l〇wt%或更多的杂质。
[0102] 人们认为， 在纯度方面的有益效果通过在将醇加入步骤（1)的反应物料之前将多 元不饱和醇和至少一种药学上可接受的抗氧化剂在步骤(2)中结合得到增强。优选地，这些 步骤和随后的制造多元不饱和酮的步骤，在相同或不同的药物学上可接受的抗氧化剂的存 在下进行，以将反应中顺/反异构化的可能性最小化。
[0103] 本发明方法的步骤(3)中的实际反应可能需要10分钟到1小时，并可以在任何方便 的温度下进行，例如环境温度。
[0104] 应当理解，典型地多元不饱和醇的摩尔量与存在的酸或硫代酸的量是成化学计量 比的。一旦硫酯或酯已经形成，就可以常规处理，例如进行快速干柱色谱。理想地，此时酯或 硫酯应具有通过HPLC( %面积)测定的至少90 %的纯度）。更优选地纯度应为91 %或更高，例 如92%或更高，理想地93%或更高，尤其是94%或甚至95%或更高。
[0105] 此方法已被发现可以高产率生产酯或硫酯，例如70%或更高。此外，如我们在我们 的实施例中所示的，我们可以消除在HPLC上可检测的杂质的存在。
[0106] 在一个优选的实施例中，本发明方法形成的硫酯接着自身转化成其相应的硫醇。 有时这在理论上可以使用任何常规的还原方法进行，例如使用二异丁基氢化铝，为了避免 副反应、杂质的形成和存在的双键的顺-反异构化，发明人提出在抗氧化剂的存在下进行该 反应。抗氧化剂优选地在此阶段加入，虽然理论上如果硫酯的形成中有残留的抗氧化剂，则 可能不需要进一步的抗氧化剂。然而，通常在形成硫酯的过程中加入的任何抗氧化剂在所 述硫酯的纯化过程中会被去除，因此进一步的抗氧化剂是需要的。
[0107] 该抗氧化剂可以与上述方法步骤(2)中加入的抗氧化剂相同或不同。所述抗氧化 剂优选地为选自丁基羟基茴香醚、丁基羟基甲苯、没食子酸丙酯、生育酚、抗坏血酸、抗坏血 酸棕榈酸酯、硫代甘油、巯基乙酸、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、乙二胺四乙酸四钠 或EDTA。
[0108] 使用生育酚是特别优选的。添加/存在的抗氧化剂的量相对于存在的多元不饱和 硫酯的量可再次达到0.01至l%mol，优选为0· 1至0.5%mol〇
[0109] 另外，上述的有益效果可以通过在一个反应中制造多元不饱和硫醇得到进一步增 强，所述反应涉及在足以制造多元不饱和硫醇的条件下将多元不饱和硫酯与合适的温和的 亲电还原剂接触。不希望束缚于任何理论，据信使用温和的亲电还原剂，如下面所讨论的， 减少了不希望的双键的还原，从而有助于整个合成获得更好的产率和纯度。
[0110]合适的还原剂理想地为金属碳酸盐，如碳酸钾。溶剂的使用例如甲醇是合适的。 [cm]因此，根据进一步的方面，本发明提供了用于制备药学上可接受的多元不饱和硫 醇的方法，所述方法包括：
[0112] (1)在第一容器中，在膦的存在下，将硫代酸在将其中所有的硫代酸基本上去质子 化的条件下和偶氮二羧酸酯化合物结合；
[0113] (2)在第二容器中，将多元不饱和醇和至少一种药学上可接受的抗氧化剂结合；以 及
[0114] (3)在足以制造相应的多元不饱和硫酯的条件下将所述第一容器和所述第二容器 中的内容物混合;以及
[0115] (4)将多元不饱和硫酯与第二药学上可接受的抗氧化剂接触，并在足以制造多元 不饱和硫醇的条件下使所得混合物反应。
[0116] 因此优选的硫酯为式R-SC0R1，其中R和R1如上文所限定。优选的硫醇简单地为RSH。
[0117] 理想地，此时所述硫醇应当具有通过HPLC( %面积）测定的至少90%的纯度。更优 选地纯度应为91 %或更高，例如92 %或更高，理想地93 %或更高，尤其是94 %或甚至95 %或 更尚。
[0118] 此方法已被发现可以高产率生产硫醇，例如70 %或更高。此外，如我们在我们的例 子中所示，我们可以消除在HPLC上可检测的杂质的存在。
[0119] 当然理想地，本发明方法旨在多种药学上可接受的多元不饱和酮，它们适合于药 物用途。优选的化合物包含酮基，所述酮基包含吸电子基团和在酮基的α、β、γ或δ位置的硫 原子。吸电子基团或EWG吸引电子远离反应中心。
[0120]因此本发明优选的多元不饱和酮目标物为式(II)
[0121] R2-C〇-X (II)
[0122] 其中R2为在酮基的α、β、γ或δ位置被S原子打断的C1Q-24多元不饱和烃基;且
[0123] X为吸电子基团(EWG)。
[0124] 本发明任何化合物的合适的吸电子基团X为CN、苯基、CHal3、CHal 2H、CHalH2其中 Ha 1代表卤素，特别是F。所述EWG特别为CHa 13，例如CF3。
[0125] 如果在S原子在羰基的β位是最优选的。
[0126] 如果在任何基团R2中，双键不是共辄是优选的。基团R2优选地包含5至9个双键，优 选地5或8个双键，例如5至7个双键，例如5或6个双键。
[0127]优选的是如果双键不与羟基共辄。
[0128] 基团R2中存在的双键可能为顺式或反式构型，然而如果多数存在的双键（至少 50% )为顺式构型是优选的。在更有益的实施例中，基团R2中所有的双键均为顺式构型，或 者除了最接近S基团的双键可能为反式构型外所有双键均为顺式构型。
[0129] 基团R2可具有10至24个碳原子，优选地12至20个碳原子，特别是17至19个碳原子。
[0130] 在一个优选的实施例中，本发明提供了生产药学上可接受的1，1，1_三氟-3-(((2E，6Z，9Z，12Z，15Z，）-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-基)硫)丙-2-酮的方法(也可参见 此处的方案1):
[0131] nsssnssssnsV
、、、、《·、、、、、、、'
[0132] 其中X为CF3;或相关化合物
[0133]
[0134] 其中 X 为 CF3。
[0135] 因此，本发明的方法的最后步骤包括硫醇与合适的酮反应以形成所希望的式（II) 化合物。反应的酮化合物优选地为式(LG) R3C〇-X，其中R3与在步骤(2)中使用的多元不饱和 醇的R基团加在一起形成式(II)中的基团R 2,即
[0136]
[0137] R3优选为C1-3-亚烃基，如亚甲基。LG表示离去基团，其被巯基亲核取代。离去基团 是一个分子片段，其在杂原子键裂解时带着一对电子离去。当然优选地，（lg)r 3-cox表示化 合物LG-CH2-⑶X，其中LG为离去基团例如卤素、甲苯磺酰基、甲磺酰基等。理想地LG为卤素 例如Brd是在上述式中如上文限定的吸电子基团，优选地还是为CF 3。最优选地(LG)R3-C0X 为 BrCH2-COCF3。
[0138] 这个最后的反应步骤可以在如上文所限定的进一步抗氧化剂的存在下发生。再 次，抗氧化剂可能作为从硫酯还原步骤的留存固有地存在，在这种情况下，可能未必需要加 入更多的抗氧化剂。然而加入更多的抗氧化剂，例如其中所形成的硫醇被纯化因而抗氧化 剂被除去，也在本发明的范围之内。
[0139] 如果采用抗氧化剂，使用生育酚是特别优选的。与多元不饱和硫醇的含量相比，加 入/存在的抗氧化剂的量可再次达到0.01至1% mol，优选为0 · 1至0 · 5 % mo 1 〇
[0140] 应当理解，此处所述的任何反应可能需要在无氧的条件下进行，例如在Ar气氛下。
[0141] 理想地，此时的酮应具有通过HPLC( %面积）测定的至少90 %的纯度。更优选地纯 度应为91 %或更高，例如92 %或更高，理想地93 %或更高，尤其是94 %或甚至95 %或更高。 [0142]此处的方法已被发现可以高产率生产酮，例如70%或更高。此外，如我们在我们的 实施例中所示，我们可以消除在HPLC上可检测的杂质的存在。
[0143] 在一个最优选的实施例中，本发明的方法至少包括以下步骤：
[0144] A)在第一容器中，将膦、偶氮二羧酸酯和硫代乙酸在溶剂中结合以形成混合物，并 允许所述硫代乙酸的完全去质子化发生；
[0145] B)在第二容器中，将（2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-醇（C18 稀丙基醇)和抗氧化剂结合；
[0146] C)将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合以制造 S_((2E，6Z，9Z，12Z， 152，）-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-基）乙酰硫酯。
[0147] 更具体的，本发明的方法需要以下步骤：
[0148] A)在第一容器中，将三苯基膦、偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)和硫代乙酸在溶剂中 结合，并允许所述硫代乙酸的完全去质子化发生；
[0149] B)在第二容器中，将(2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-醇和生 育酚结合；
[0150] C)将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合以制造 S-( (2E，6Z，9Z，12Z， 152，）-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-基）乙酰硫酯。
[0151] 进一步优选的是如果所述S-((2E，6Z，9Z，12Z，15Z，）_十八碳_2,6，9,12,15-五烯-1 _基）乙醜硫酯是：
[0152] D)在将所述酯纯化至由HPLC( %面积）测定的至少90 %纯度的条件下进行快速干 柱色谱。
[0153] 此外，在步骤C或D之后，优选的是如果，
[0154] E)将可选地纯化的在步骤C)或D)中生成S-((2E，6Z，9Z，12Z，15Z，）-十八碳-2,6， 9，12，15-五烯-1-基）乙酰硫酯在还原酯基并生成对应的硫醇（2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八 碳_2,6,9,12,15-五烯-1-硫醇）的条件下与金属碳酸盐，例如碳酸钾，和生育酚接触。
[0155] 接着优选的是如果，F)将步骤E)生成的硫醇在生成
[0156]
[0157] 的条件下与3-溴三氟丙酮接触，其中X为CF3。
[0158] 该化合物可通过快速干柱色谱被纯化至通过HPLC( %面积）测定的至少90%的纯 度以产生药学上可接受的化合物。
[0159]在另一个方面，本发明提供了生产在药学上可接受的三氟-3_(((3Z，6Z， 9Z，12Z，15Z)-十八碳-3，6，9，12，15-五烯-1 -基)硫)丙-2-酮的方法
[0160
[0161]其中X为CF3;按照上述方案将起始的醇进行适当的取代生成（3Z，6Z，9Z，12Z， 15Z)-十八碳-3,6,9，12，15-五烯-1-醇。
[0162] 应当理解，本发明的方法制得的化合物具有各种应用，例如在慢性炎性疾病的治 疗。它们可以使用公知的技术配制为药物组合物。这里不需要对这样的技术进行进一步的 讨论。
[0163] 本发明现在将参考以下非限制性的实施例和附图进行描述。
[0164] 图1至图8是显示下列各实施例的产物的HPLC色谱图。 实施例
[0165] 实施例 1:合成1,1,1-三氟-3-(((2E，6Z，9Z，12Z，15Z，）_ 十八碳 _2,6,9，12，15_五 稀-1-基)硫)-丙-2-酬概述
[0166] 以下信息提供了多元不饱和酮的合成的 一般性概述。参见方案1，步骤A和步骤B在 下面实施例6中提及了更多的细节。
[0167] 旨在制造 C18的稀丙基醇的所有步骤（下面的方案1)基本上如J . Chem . Soc .， Perkin Trans · 1，2000，2271-2276(:S:fcatteb0丨和Holmeide)所述的进行，有一处修改：将醛 还原成醇时不使用硼氢化钠，而使用二异丁基氢化铝(DIBAL)以减少反式双键的过度还原。 在最后三个步骤(下面的方案1)时，引入以下预防措施/修改：
[0168] 所有反应均在氩气气氛下进行。通风橱的灯都被关闭。没有其他关于光保护的预 防措施被认为是必要的。另外，最后的3个步骤(分别称为A、B和C步骤)在α-生育酚的存在下 进行。在光延反应中，为了避免异构化，试剂添加的顺序被认为是重要的。可以预料的是，在 引入C18烯丙基醇之前所有的硫代乙酸已经完全反应是至关重要的。另外，步骤(Α)的粗产 物和纯化产物都用盖有翻口塞的氩气冲洗，并放置于冰箱中存储。步骤(Β)在不经纯化下进 行，但同样:如果需要存储，粗产物将在-18°C、氩气氛下贮存。在最后的步骤时，必须非常小 心以确保粗产物和纯化的物料都在氩气下保存。
[0169]
[0170] 方案1:合成1，1，1-三氟-3-( ((2E，6Z，9Z，12Z，15Z，）_十八碳-2，6，9，12，15-五烯-1-基)硫)-丙-2-酮概述
[0171] 比较实施例2:生产多元不饱和硫酯产生了靠近主产物峰迀移的杂质。
[0172]
[0173] 通风橱的灯都被关闭。没有其他关于光保护的预防措施被认为是必要的。在氩气 下，以下溶液在带有玻璃塞的200ml容量瓶中制备：
[0174] (2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-醇（（l)，15·0g，57·6mmol)、 硫代乙酸（5.00ml，70.0 mmol)以及α-生育酚(30.4mg)在无水THF(150ml)中结合。溶液被降 温至0°C。
[0175] 在1升的圆底烧瓶中，放入三苯基膦（18. lg，69. lmmol)，随后加入无水THF (300ml)。带有翻口塞的烧瓶中加入搅拌棒，用氩气冲洗并浸入冰浴中，在0°C下搅拌10分 钟。偶氮二甲酸二异丙酯（13.6ml，57.6mmol)用注射器通过翻口塞一次加入，将反应混合物 在0°C搅拌30分钟。预冷却的无水THF中的（2E，6Z，9Z，12Z，15Z)_十八碳_2,6,9，12，15_五 烯-1-醇、硫代乙酸和生育酚溶液一次加入。撤去冷却浴并且将反应混合物搅拌一小时。 将澄清的黄色溶液在低压下(旋转蒸发器)蒸发以除去THF。向残余物中加入乙醚（120ml)并 将烧瓶在室温下在旋转蒸发器上旋转10分钟。将混合物通过烧结玻璃(类型3)过滤，并用乙 醚(2X50ml)将残留物冲洗掉。将合并的滤液在低压下(旋转蒸发器)蒸发。向残余物中加入 庚烷(100ml )，并将烧瓶在室温下旋转10分钟。通过上述烧结玻璃过滤，用庚烷(2 X 25ml)冲 洗并浓缩，得到24.8g粗产物，为黄色油状物。通过快速干柱色谱和快速色谱(庚烷:EtOAc梯 度)进行纯化，得到 12·5克（68%)S-((2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-基）乙酰硫酯，为无色油状物。
[0176] 图1和图2示出了合成产物的色谱图。在图1和2中副产物可被看作是主产物峰右边 紧邻的一个肩峰。
[0177] 实施例3:在加入多元不饱和醇之前的先进行硫代乙酸的反应减少了杂质的存在
[0178]
[0179] 要将通风橱中的灯关闭。没有其他关于光保护的预防措施被认为是必要的。
[0180]称取三苯基膦(6.06g，23. lmmol )，转移到带有磁力搅拌棒的1升圆底烧瓶中，将其 溶于无水THF(300ml)中，用氩气冲洗，用翻口塞盖住并浸没在冰/水浴中。将溶液在0.5°C搅 拌11分钟。
[0181] 偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)(4.50ml，20.8mmol)-次加入到反应混合物中，并将 混合物在〇. 5°C搅拌32分钟。
[0182] 硫代乙酸（1.50ml，21mmol)-次加入到反应混合物中，并将混合物在3.5°C搅拌15 分钟。
[0183] 称取 α-生育酚（9.8mg)和十八碳 _2^)，6(2)，9(2)，12(2)，15(2)-五烯-1-醇 (5.008，19.2111111〇1)，转移到锥形瓶中并溶解在无水1'册(501^)中，且一次加入到反应混合物 中。在加入后，撤去冷却浴并将混合物搅拌47分钟。
[0184] 将反应混合物在低压下浓缩。向残余物中加入乙醚(40ml)并将烧瓶在室温下在旋 转蒸发器上旋转10分钟。将混合物通过烧结玻璃(类型3)过滤并用乙醚(2X 15ml)将残留物 冲洗掉。将合并的滤液在低压下(旋转蒸发器)蒸发。向残余物中加入庚烷(35ml)，并将烧瓶 在室温下旋转10分钟。通过上述烧结玻璃过滤，用庚烷(2X 10ml)冲洗并浓缩，得到粗产物， 为黄色油状物。通过快速干柱色谱(庚烷:EtOAc梯度)进行纯化，得到4.52克(74% ) S-( (2E， 62,92，122，152)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-基）乙酰硫酯，为无色油状物。
[0185] 图3和图4显示实施例2中的杂质没有出现。
[0186] 比较实施例4:无抗氧化剂下生产多元不饱三氟酮产生了靠近主产物峰迀移的杂 质
[0187]
[0188] 向（2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2，6，9，12，15-五烯-1-硫醇（52 · 36g，189 · 4mmol) 的乙醇（1200ml)和水(805ml)溶液中加入碳酸氢钠(33.48g，397.7mmol)，并在室温和氮气 下将反应混合物搅拌15分钟。将3-溴-1，1，1-三氟丙酮(23.6ml，227.3mmol)-次性加入。在 氮气和室温下将反应混合物搅拌40分钟，转移至分液漏斗中，用庚烷(2X1升)萃取水相。将 有机层用盐水(250ml)洗涤，干燥（用Na 2S04)，过滤并浓缩。通过快速干柱色谱(庚烷:EtOAc 梯度），得到 43.19g(59%)l，l，l-三氟-3-(((2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五 烯-1-基)硫)丙-2-酮，为浅黄色油状物。
[0189] 下图示出了在没有抗氧化剂(α-生育酚)的存在下AVX001合成的产物的色谱图。在 图5和图6中杂质可被看作是靠近主产物峰迀移的一个肩峰。
[0190] 实施例5:用抗氧化剂生产多元不饱和三氟酮消除了杂质的出现。
[0191]
[0192] 向（2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-硫醇（5·06g，18·3mmol)的 乙醇（120ml)和水(80ml)溶液中加入碳酸氢钠(3.23g，38.43mmol)，将反应混合物在室温和 氮气下搅拌15分钟。将3-溴-1，1，1-三氟丙酮(2.3ml，22.0mmol)-次性加入。在室温和氮气 下将反应混合物搅拌35分钟，转移至分液漏斗中并用庚烷(2X 100ml)萃取水相。将有机层 用盐水(30ml)洗涤，干燥（用Na2S04)，过滤并浓缩。通过快速色谱(庚烷:EtOAc梯度），得到 5·51g(78%)l，l，l-三氟-3-(((2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-基）硫） 丙-2-酮，为无色油状物。图7和图8示出了在抗氧化剂(α-生育酚）的存在下，三氟丙酮合成 中的产物的色谱图。通风橱的灯都要被关闭。没有其他关于光保护的预防措施被认为是必 要的。
[0193] 实施例6:1，1，1_三氟-3-(((2E，6Z，9Z，12Z，15Z，）-十八碳_2,6，9,12,15-五烯-1-基)硫)丙-2-酮(4)的合成
[0194] 以下示出了制造多元不饱和三氟丙酮的过程。为了消除或减少不希望的杂质的出 现，在加入多元不饱和醇之前在一个单独的反应中硫代酸被消耗。此外，α-生育酚与醇在一 个单独的反应室中混合，以减少或消除不希望的氧化。以下示出的这些步骤及其它被发现 将化合物的产率和纯度提高至93%或更高(面积％ )。
[0195] Α.步骤Α(参见上述方案1)
[0196] 称取三苯基膦(6.05g±0.10g)，转移至装有磁力搅拌棒的1升圆底烧瓶中，将其溶 于无水THF(310ml ± 15ml)，用氩气冲洗，用翻口塞盖住并浸入冰/水浴中。将溶液在0-5°C搅 拌10-20分钟。将偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD) (4.55ml ±0.09ml)-次性加入反应混合物中。 将混合物在〇_5°C搅拌30-40分钟。将硫代乙酸（1.50ml ±0.03ml) (A)-次性加入反应混合 物中。将混合物在〇_5°C搅拌15-20分钟。
[0197] 称取 α-生育酚（l〇mg±〇.2mg)和十八碳-2(E)，6(Z)，9(Z)，12(Z)，15(Z)-五烯-1-醇(C-18醇）（A)(5·00g±0·10g)，转移至锥形瓶并溶解在无水THF(50ml±2·5ml)中，然后一 次性加入到反应混合物中。
[0198] 加入之后，撤去冷却浴并将混合物搅拌45-55分钟。将反应混合物在低压下浓缩。 在水浴温度为小于或等于30C。将所得的粗产物通过HPLC分析(见下文）。将残余物用盖有翻 口塞的氩气冲洗并置于冰箱中。
[0199]合成进行三次且将批次合并，并通过色谱进行纯化。
[0200] Hit。只有通过验收标准的粗产物才合并。将庚烷（50ml ± 2.5ml)加入到残余物 中，并将烧瓶在室温下在旋转蒸发器上旋转5-15分钟。将混合物通过烧结玻璃漏斗(3级)过 滤;将庚烷(25ml ± lml)加入到反应烧瓶中，震荡并通过烧结玻璃漏斗过滤。将沉淀物用庚 烷(25ml± lml)洗涤。将滤液和洗涤液在低压下浓缩，水浴的温度小于或等于30C。将残余物 通过氩气冲洗并用翻口塞封盖并放置在冰箱中贮存。
[0201 ]快速干柱色谱。将二氧化硅(500g±25g)转移到1000ml的烧结玻璃漏斗（3级）中， 并用庚烷500mL预洗脱。将庚烷20-40ml加入到粗产物，并将混合物装载到柱上。该柱用 250ml±25ml馏分洗脱。用于这种目的，带刻度的锥形瓶250mL就具有足够的精度了。在制备 庚烷:Et0Ac(100 :l)的洗脱液时，将25ml EtOAc加入之前未开封的2500ml庚烷的烧瓶中就 足够精确了。馏分通过TLC分析(洗脱液庚烷:EtOAc为95: 5)。产品的Rf约0.4，使用PMA斑点 或钼酸铵/硫酸铈斑点显色。洗脱持续到整个产品出柱。收集馏分，其中产物以大于或等于 93 % (面积-% )的纯度出现，且RRT = 1.03的峰小于或等于4 % (面积-% )，且RRT = 0.59的峰 小于或等于1% (面积-%)。将物料转移到1升的圆底烧瓶中并在低压下，温度<35°C下蒸 发，得到13.5(73.8%)产物，为无色油状物。将产物在氩气气氛下于约-18°C贮存。
[0202] B.合成步骤B-参见上述方案1
[0203] 溶液的制备。将浓HC1 (12.3 ±0.25ml)加入到含有一些自来水的250ml量筒 ，另加 自来水补至（150mL)刻度并混合。将NaCl U 40克）和自来水（110ml ± 10ml)在锥形瓶中混 合。将通风橱的灯关闭。没有其他关于光保护的预防措施被认为是必要的。称取α-生育酚 (27.2mg)并称取Me0H(130ml)，并溶解和转移到含有硫代乙酸S-十八碳-2(Ε)，6(Ζ)，9(Ζ)， 12 (Ζ)，15 (Ζ)-五烯基酯（13.5g)的1升圆底烧瓶中，其中装备有磁力搅拌棒和100ml滴液漏 斗。将K2C0 3(6.45克)一次性加入到反应混合物中。用氩气冲洗并盖上翻口塞。在室温下搅拌 30-40分钟。将反应烧瓶浸没在冰/水浴中并将1M HC1 (150mL)小心地通过滴液漏斗逐滴加 入，然后将其转移到分液漏斗并用庚烷[2X200ml]萃取。将合并的有机相用盐水（100mL)洗 涤，转移至装有磁力搅拌棒的锥形瓶并加入Na 2S04(70.4克）。如果需要的话，可以加入更多 的Na2S〇4。将悬浮液搅拌10-20分钟。将悬浮液过滤，将滤饼用庚烷U 25ml)洗涤，转移至1升 圆底烧瓶中并在低压下，温度<35°C蒸发。此粗产物（12.0克，定量产率)不经进一步纯化即 用于下一步骤。将产物在氩气气氛下于小于或等于_18°C贮存。
[0204] C.多元不饱和三氟酮的制备(参见方案1)
[0205] 溶液的制备
[0206]将NaClU40g)与自来水（I)(110ml)混合。将通风橱的灯关闭。没有其他关于光保 护预防措施被认为是必要的。称取NaHC03(7.68g)并量取Et0H(290ml)和自来水（192ml)，并 转移到含有十八碳_2化），6(2)，9(2)，12(2)，15(2)-五烯-1-硫醇（12.(^)的1升烧瓶中，并 用氩气冲洗。在室温下将其剧烈搅拌15-20分钟。将3-溴三氟丙酮(5.4ml) -次性加 入并剧烈搅拌35-45分钟。将物料转移到分液漏斗，并用庚烷（I)(2 X 200ml)萃取。合并的有 机相用盐水（1 OOmL)洗涤，并转移到装有磁力搅拌棒的锥形瓶中并加入Na2S〇4(I) (60g)。如 果需要，可以加入更多的Na2S〇4。将悬浮液搅拌10-20分钟。
[0207]将悬浮液过滤，将滤饼用庚烷U 25mL)冲洗，并转移到1L圆底烧瓶中，并在低压 下，温度U35°C)蒸发。
[0208]快速干柱色谱。将二氧化硅(500g±25g)转移到1000ml的烧结玻璃漏斗（3级）中。 用庚烷500±25ml预洗脱。庚烷20-25ml加入到粗产物中，并将混合物装载到柱上。该柱用 350mL±20ml馏分洗脱。用于这种量取，带刻度的500ml锥形烧瓶即具有足够的精度。当制备 庚烷:Et0Ac(100 :X)的洗脱液时，将25x ml EtOAc加入之前未开封的2500ml庚烷的烧瓶中 就足够精确了。馏分通过TLC(洗脱液庚烷:EtOAc 80: 20)进行分析。产品的Rf约为0.26，使 用PMA斑点或钼酸铵/硫酸铈斑点显色。继续洗脱直到整个产品出柱。用庚烷-庚烷:EtOAc (100:1)-(100:2)-(100:3)-(100:10)洗脱。如果在产物之前的杂质是在馏分#21之后出柱， 可以从馏分#22开始使用（100 :10)，否则继续（100 :2)或（100 :3)。当在产物之前的杂质出 柱，可以使用（100:10)。
[0209]通过HPLC分析，通过TLC的馏分是纯的或仅含有少量的杂质。收集含有纯度在HPLC 规格(面积-%)范围内的产物的馏分。将物料转移到1升的圆底烧瓶中并在低压下，温度< 35°C蒸发。当压力达到平衡时旋转蒸发器中充满氩气。用庚烷通过折叠过滤器转移到250mL 圆底烧瓶中，并在低压，温度（<35°C)蒸发。当初始蒸发结束，将高真空栗连接于旋转蒸发 器并蒸发1-2小时，得到10.29g产物(61%)，为无色油状物。产物在氩气气氛下于小于或等 于-18°C贮存。
[0210] 以下物料和方法根据需要在本实施例6中使用。
[0211] 1. TLC:使用庚烷:EtOAc (80: 20)作为洗脱液通过TLC根据需要对产物的少量样品 进行分析。产品Rf约〇. 26，用PMA斑点或钼酸铵/硫酸铺斑点显色。只允许有少量的杂质。
[0212] 2-HPLC
[0213] HPLC/UV 条件
[0214] 分析柱:EC-C18，150x 4.6mm,2·7μπι颗粒尺寸
[0215] 流速：1.5ml/min
[0216] 停止时间：22min
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[0219] 流动相:A: ACN/水70:30w/0 · 02 % v/v 甲酸
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[0221] 12 min 80% 20 min 100%
【主权项】
1. 一种用于制备多元不饱和酯或硫酯的方法，包括： (1) 在第一容器中，在膦的存在下，将羧酸或硫代酸在将其中所有的羧酸或硫代酸基本 上去质子化的条件下和偶氮二羧酸酯化合物结合； (2) 在第二容器中，将多元不饱和醇和至少一种药学上可接受的抗氧化剂结合；以及 (3) 将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合以形成所述多元不饱和酯或硫 酯。2. -种用于制备多元不饱和硫醇的方法，包括： (1) 在第一容器中，在膦的存在下，将多元不饱和硫代酸在将其中所有的硫代酸基本上 去质子化的条件下和偶氮二羧酸酯化合物结合； (2) 在第二容器中，将多元不饱和醇和至少一种药学上可接受的抗氧化剂结合； (3) 将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合以形成所述多元不饱和硫酯；以 及 (4) 将至少一种药学上可接受的抗氧化剂加至步骤(3)的所述多元不饱和硫酯中，所述 抗氧化剂可以与步骤(2)所用的抗氧化剂相同或不同，并将步骤(3)的硫酯在足以制造多元 不饱和硫醇的条件下还原。3. -种用于制备多元不饱和酮化合物的方法，包括： (1) 在第一容器中，在膦的存在下，将多元不饱和硫代酸在将其中所有的硫代酸基本上 去质子化的条件下和偶氮二羧酸酯化合物结合； (2) 在第二容器中，将式为ROH的多元不饱和醇和至少一种药学上可接受的抗氧化剂结 合，其中R为C9-23多元不饱和烃基； (3) 将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合以形成所述多元不饱和硫酯； (4) 将至少一种药学上可接受的抗氧化剂加至步骤(3)的多元不饱和硫酯中，所述抗氧 化剂可以与步骤(2)所用的抗氧化剂相同或不同，并将步骤(3)的硫酯在足以制造多元不饱 和硫醇RSH的条件下还原；以及 (5) 将所述多元不饱和硫醇与化合物(LG)R3COX反应，其中X为吸电子基团且R3为带有离 去基团LG的Ci-3烯基，可选地在进一步加入的抗氧化剂的存在下，以理想地形成式(II)的多 元不饱和酮化合物 R2-CO-X(II) 其中R2为在酮基的β、γ或δ位置被S原子打断的C1Q-24多元不饱和烃基;且 X为吸电子基团。4. 如权利要求1-3所述的方法，其中所述药学上可接受的抗氧化剂为生育酚。5. 如权利要求1-4所述的方法，其中所述多元不饱和硫酯为通过HPLC( %面积)测定的 至少90%纯。6. 如权利要求5所述的方法，其中所述多元不饱和硫酯为通过HPLC( %面积）测定的至 少91 %、92%、93%、94%或至少95%纯。7. 如权利要求3所述的方法，其中所述多元不饱和酮为通过HPLC( %面积）测定的至少 90% 纯。8. 如权利要求7所述的方法，其中所述多元不饱和酮为通过HPLC( %面积）测定的至少 91%、92%、93%、94% 或至少 95% 纯。9. 如权利要求1-8所述的方法，其中所述膦为三苯基膦。10. 如权利要求1-9所述的方法，其中所述偶氮二羧酸酯为偶氮二甲酸二异丙酯 (DIAD)011. 如前述任一权利要求所述的方法，其中步骤(1)中膦和偶氮二羧酸酯相对于硫代酸 或酸存在摩尔过量。12. 如权利要求1-11所述的方法，其中所述多元不饱和醇为式(I) R-OH (I) 其中R为可选地被取代的C9-23不饱和烃基，可选地被一个或多个选自S、0、N、S0、S02的杂 原子或杂原子基团打断，所述烃基包括至少2个双键，优选地至少4个双键。13. 如权利要求1-12所述的方法，其中所述多元不饱和醇为含有5个双键的C18醇。14. 如权利要求13所述的方法，其中所述多元不饱和醇为（2Ε，6Ζ，9Ζ，12Ζ，15Ζ)-+Λ 碳-2，6，9，12，15 -五稀醇。15. 如权利要求1-14所述的方法，其中所述多元不饱和硫酯为含有5个双键的C18多元 不饱和硫代乙酸酯。16. 如权利要求15所述的方法，其中所述多元不饱和硫代乙酸酯为S-((2E，6Z，9Z，12Z， 152)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-基）乙酰硫酯。17. 如权利要求1所述的方法，包含步骤： A) 在第一容器中，将膦、偶氮二羧酸酯和硫代乙酸在溶剂中结合以形成混合物，并允许 所述硫代乙酸的完全去质子化发生； B) 在第二容器中，将(2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-醇(C18烯丙 基醇)和抗氧化剂结合； C) 将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合以制造S-( (2E，6Z，9Z，12Z，15Z，）-十八碳-2，6，9，12，15-五烯-1 -基）乙酰硫酯。18. 如权利要求17所述的方法，进一步可选地包含： D) 将步骤C)中生成的酯在将所述酯纯化至由HPLC( %面积)测定的至少90%纯的条件 下进行快速干柱色谱； E) 将步骤C)或D)中生成的可选地纯化的S-((2E，6Z，9Z，12Z，15Z，）-十八碳-2,6,9，12， 15-五烯-1-基）乙酰硫酯在还原酯基并生成对应的硫醇(2E，6Z，9Z，12Z，15Z)_十八碳_2,6， 9,12,15-五烯-1-硫醇）的条件下与金属碳酸盐和生育酚接触，所述金属碳酸盐例如碳酸 钾。19. 如权利要求18所述的方法，进一步包含： F) 将步骤E)生成的硫醇在生成的条件下与3-溴-1，1，1-三氟丙酮接触，其中X为CF3。20. 如权利要求3所述的方法，其中所述酮为其中X为CF3。21.如前述任一权利要求所述的方法，其中所述多元不饱和醇是由其相应的醛在亲电 还原剂例如DIBAH的存在下还原获得。
【专利摘要】本发明涉及某些多元不饱和化合物的制备，在至少一种抗氧化剂存在下采用了光延反应的一种特殊应用。我们发现了一种直接制备药物学上可接受的多元不饱和酯或硫酯的方法，其最终可被转化为有益的酮化合物，通过使用特殊的光延反应其中不希望的氧化及顺/反异构化实质上被减少或消除。
【IPC分类】C07C327/22, C07C319/02, C07C319/14, C07C321/08, C07C323/22
【公开号】CN105492421
【申请号】CN201480044978
【发明人】马塞尔·桑德伯格, 英厄·雷敦·奥克鲁斯特
【申请人】埃维克辛公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年7月23日
【公告号】CA2918950A1, EP3024818A1, US20160159737, WO2015011206A1
【技术领域】
[0001] 本发明总体上涉及一种制造多元不饱和酯或硫酯化合物的方法。本发明进一步涉 及硫酯转化为其相应的硫醇以及硫醇转化为多元不饱和酮。更具体地，本发明涉及制备多 元不饱和硫酯以及随后的硫醇和多元不饱和酮化合物的方法，在所述方法中不希望的氧化 及顺/反异构反应在合成时实质上被减少或消除。
【背景技术】
[0002] 许多生物活性的多元不饱和脂肪酸具有一个或多个顺式的碳-碳双键。有报道称 自由基可支持这些键异构成为较为不希望的反式构象。顺/反异构化会对预期用于药物用 途的多元不饱和化合物造成不利的影响，例如，通过减小生物活性和/或使合成复杂化。例 如，可参见C.Ferreri等人（2007)M〇1 .Biotech. ,37:19;Chatgilialoglu，C等人（2002)Free Rrad · Biology&Medicine，33:1681;以及WO 2002-100991。
[0003] 有些，但并非全部，有报道称自由基可支持特定的多元不饱和化合物的顺/反异 构。人们认为自由基作为中介的氧化反应的动力学取决于一些参数，包括待制造的不饱和 化合物的化学性质、温度、PH、有光或无光、氧等。已有报道称自由基可在环境中自然发生或 作为由某些化学反应产生的不希望的副产物。例如，参见161^616 3^.等人（2010) Mos.Univ.Chemistry Bull.,65:210〇
[0004] 人们已经对减少碳-碳双键的氧化以及顺/反异构作出了尝试。在一种方法中，加 入抗氧化剂例如酸辛酯、抗坏血酸、多酚、巯基乙醇、β-胡萝卜素，或例如2,6_二叔丁基-4-甲 基苯(ΒΗΤ)以减少不希望的氧化反应。参见Mengele，E.A，ibid;Klein，EmN.Weber(2001) J.Agric.Food Chem. ,49:1224;以及Hung，W_L等人（2011)J.Agric.Food Chem.，1968。
[0005] 已有报道称某些多元不饱和三氟甲基酮化合物具有有益的生物活性。例如，参见 美国专利7,687,543;!1丽丨161厶.等人（2012)81.1.?1^顶1.，167:1691。
[0006] 制备特定多元不饱和酮的方法已被公开。在一个公开了合成特定的不饱和三氟甲 基酮的方法中，光延(Mitsunobu)类反应被用以将醇转化为对应的硫酯。据说进一步的化学 反应生成了产率为71%的不饱和三氟甲基酮（其中的化合物18)。可参见!1〇11116丨(16^.和 L.Skattebo1(2000)J.Chem.Soc.Perkin Trans.,1:2271〇
[0007] 人们公认的预期用于药物用途化合物应该以高产率生成，例如70%或以上。低于 满意的产率与不希望的副产物有关。将这些副产物从主产物(API)中去除的成本很高或很 困难，由此造成进一步的药物开发很困难。另外，监管机构通常要求对预期用于药物用途的 化合物中的副产物进行详细的分析。这一要求使得量产的成本过高。
[0008] 有报道称光延反应包含了在其他试剂中使用膦和偶氮二羧酸酯加入新的官能团， 通常是酯，到伯醇或仲醇。有报道称反应的机理很复杂，且对反应中间产物的认定存在争 议。例如，参见But，T.和P.Toy(2007)Chem.Asian J. ,2:1340;以及Swamy，K.C.等人（2009) Chem.Rev. ,109:2551。这使得某些光延反应的产物难以预测。
[0009] 在许多情况下，光延反应通过在低温下将醇、羧酸反应物以及膦在溶剂中混合在 一起来进行。接着，通常加入偶氮二羧酸酯，然后搅拌反应数小时以允许羧酸和醇反应生成 酯。本发明人发现了这一过程在本发明的多元不饱和化合物的环境中会产生杂质。例如，这 个反应级数通常导致不希望的氧化和/或顺/反异构，并导致HPLC中清晰的杂质峰。
[0010] 本发明人寻找用于生产多元不饱和酯或硫酯以及最终相应的多元不饱和酮的方 法，该多元不饱和酮通过适当的纯化之后，生产含有极少的氧化和顺/反异构化副产物的药 物级化合物。
【发明内容】
[0011] 本发明人发现利用光延反应传统上不能够提供具有足以用于药物用途的纯度和 产率的不饱和酮。然而，本发明人出人意料地发现，如果使用特定的反应级数并存在至少一 种抗氧化剂时，光延化学可用于制造在此公开的适合用于药物用途的特定的化合物。更具 体地，我们发现了直接制造药学上可接受的多元不饱和酯或硫酯化合物的方法，其可最终 转化为此处讨论的有益的酮化合物，其中不希望的氧化和顺/反异构化实质上被减少或消 除。本发明的方法可实际用于生产包括此处详述的多种适于药物用途的多元不饱和酮化合 物。
[0012] 因此，本发明的一个目的在于制备药学上可接受的多元不饱和酯或硫酯化合物， 其可最终转化为此处讨论的有益的酮化合物，其中不希望的氧化和顺/反异构化实质上被 减少或消除。本发明的方法包括利用特定的光延化学在抗氧化剂的存在下将醇转化为酯或 更优选地转化为硫酯。
[0013] 本发明的目的还在于提供高纯度的目标化合物，例如监管机构通常所要求的。有 提议称这可以在光延反应的情况下通过在多元不饱和醇的加入之前对反应中所有的硫代 酸或酸亲核试剂基本上去质子化反应来实现。人们认为前述的有益效果通常可以通过在醇 加入到亲核试剂之前将多元不饱和醇与至少一种药学上可接受的抗氧化剂结合来得到增 强。出乎意料地，抗氧化剂的存在并不影响光延化学的成功。
[0014] 优选地，后续的生成多元不饱和酮的步骤也在同样的或不同的药学上可接受的抗 氧化剂的存在下进行，以将后续反应中的氧化或顺/反异构化的可能性最小化。
[0015] 如果所使用的多元不饱和醇是通过在足以制造多元不饱和醇的条件下将多元不 饱和醛与适合的亲电还原剂接触来制备，也在本发明的范围之内。人们还认为使用温和的 亲电还原剂减少了不希望的双键的还原，由此有助于整个合成达到更好的纯度。
[0016] 因此，由一个方面来看，本发明提供了用于制备多元不饱和酯或硫酯的方法，包 括：
[0017] (1)在第一容器中，在膦的存在下，将羧酸或硫代酸在将其中所有的羧酸或硫代酸 基本上去质子化的条件下和偶氮二羧酸酯化合物结合；
[0018] (2)在第二容器中，将多元不饱和醇和至少一种药学上可接受的抗氧化剂结合；以 及
[0019] (3)将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合以形成所述多元不饱和酯或 硫醋。
[0020] 由另一个方面来看，本发明提供了用于制备多元不饱和硫醇的方法，包括：
[0021] (1)在第一容器中，在膦的存在下，将多元不饱和硫代酸在可其中所有的硫代酸基 本上去质子化的条件下和偶氮二羧酸酯化合物结合；
[0022] (2)在第二容器中，将多元不饱和醇和至少一种药学上可接受的抗氧化剂结合；
[0023] (3)将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合以形成所述多元不饱和硫 酯；以及
[0024] (4)将至少一种药学上可接受的抗氧化剂加至步骤(3)的多元不饱和硫酯中，所述 抗氧化剂可以与步骤(2)所用的抗氧化剂相同或不同，并将步骤(3)的硫酯在足以制造多元 不饱和硫醇的条件下还原。
[0025] 由另一个方面来看，本发明提供了用于制备多元不饱和酮化合物的方法，包括：
[0026] (1)在第一容器中，在膦的存在下，将多元不饱和硫代酸在将其中所有的硫代酸基 本上去质子化的条件下和偶氮二羧酸酯化合物结合；
[0027] (2)在第二容器中，将多元不饱和醇和至少一种药学上可接受的抗氧化剂结合；
[0028] (3)将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合以形成所述多元不饱和硫 醋；
[0029] (4)将至少一种药学上可接受的抗氧化剂加至步骤(3)的多元不饱和硫酯中，所述 抗氧化剂可以与步骤(2)所用的抗氧化剂相同或不同，并将步骤(3)的硫酯在足以制造多元 不饱和硫醇的条件下还原；以及
[0030] (5)将所述多元不饱和硫醇与化合物(LG)R3C0X反应，其中X为吸电子基团且R 3为带 有离去基团(LG)的烯基，（例如LG-CH2-形成
[0031]
[0032] 其中X为吸电子基团且LG为离去基团），可选地在进一步加入的氧化剂的存在下， 以形成多元不饱和酮化合物，理想地如此处限定的式（II)。
[0033] 由另一个方面来看，本发明提供了上文所限定的方法得到的产品。
[0034] 由另一个方面来看，本发明提供了一种用于生产药学上可接受的1，1，1_三氟-3-( ((2E ， 6Z ， 9Z ， 12Z ， 15Z ， ）-十八碳-2 ， 6 ， 9 ， 12 ， 15-五烯-1-基) 硫)丙-2-酮的方法 ，所述方法 包括步骤：
[0035] A)在第一容器中，将三苯基膦、偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)和硫代乙酸在溶剂中 结合以形成混合物，并将所述混合物优选地在〇_5°C反应大约10-60分钟以允许完全去质子 化发生；
[0036] B)在第二容器中，将（2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-醇和 (+/_) _α_生育酸结合；
[0037] C)将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合，优选地10分钟至1小时之间 以制造 S-((2E，6Z，9Z，12Z，15Z，）_ 十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-基）乙酰硫酯；
[0038] D)将步骤C)中生成的酯在将所述酯纯化至由HPLC( %面积)测定的至少90%纯的 条件下进行快速干柱色谱；
[0039] E)将步骤D)中生成的纯化的酯在还原酯基并生成对应的硫醇（2E，6Z，9Z，12Z， 15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-硫醇）的条件下与碳酸钾和(+/-)-€ [-生育酚接触；
[0040] F)将步骤E)中生成的硫醇在生成酮
[0041]的条件下与3-溴-1，1，1-三氟丙酮接触，其
>：S>. 中X为CF3;以及
[0042] G)在将酮纯化至由HPLC( %面积）测定的至少90%纯的条件下通过快速干柱色谱 纯化步骤F中生成的粗制酮。
[0043] 由另一个方面来看，本发明提供了生产药学上可接受的1，1，1_三氟-3-(( (3Z，6Z， 92，122，152)-十八碳-3,6,9，12，15-五烯-1-基)硫)丙-2-酮的方法，所述方法包括以下步 骤：
[0044] A)在第一容器中，将三苯基膦、偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)和硫代乙酸在溶剂中 结合以形成混合物，并将所述混合物优选地在〇_5°C反应大约10-60分钟，以允许完全去质 子化发生；
[0045] B)在第二容器中，将（32,62,92，122，152)-十八碳-3,6,9，12，15-五烯-1-醇和 (+/_)_α_生育酸结合；
[0046] C)将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合，优选地10分钟至1小时之间， 以制造 S-((3Z，6Z，9Z，12Z，15Z，）_ 十八碳-3,6,9，12，15-五烯-1-基）乙酰硫酯；
[0047] D)将步骤C)中生成的酯在将所述酯纯化至由HPLC( % 面积)测定的至少90%纯的 条件下进行快速干柱色谱；
[0048] E)将步骤D)中生成的纯化的酯在还原酯基并生成对应的硫醇（3Z，6Z，9Z，12Z， 15Z)-十八碳-3,6,9，12，15-五烯-卜硫醇的条件下与碳酸钾和(+/-)-€[-生育酚接触；
[0049] F)将步骤E)生成的硫醇在生成粗
[0050]
条件下与3-溴-1，1，1-三氟丙酮接触， 其中X为CF3;以及
[0051] G)在将酮纯化至由HPLC( %面积）测定的至少90%纯的条件下通过快速干柱色谱 纯化步骤F中生成的粗制酮。
[0052] 在本发明的任一方法中，如果多元不饱和醇是由其相应的醛在亲电还原剂例如 DIBAH的存在下还原获得是更优选的。
[0053] 由另一个方面来看，本发明提供了一种包含上文所限定的方法的产品以及至少一 种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
[0054] 定义
[0055] 术语多元不饱和酯或多元不饱和硫酯是指包含含有多个双键的烃链，以及当然包 含酯基或硫酯基的化合物。
[0056] 多元不饱和醇是指包含含有多个双键的烃链，以及当然包含醇基的化合物。
[0057] 多元不饱和酮是指包含含有多个双键的烃链，以及当然包含酮基的化合物。
[0058]硫代酸是包含-C0-SH基团的化合物。本发明方法的步骤（1)中使用的羧酸或硫代 酸通常为分子量250g/mol或更低的低分子量化合物。
[0059] 通常，本发明的任一多兀不饱和酮都具有小于500g/mol的分子量，优选地450g/ mol或更小，更优选地400g/mol或更小。
[0060] 术语"药学上可接受的"意为可用于制备药物，通常是无毒的且是非生物有害的， 其用于兽医用途和/或人类药物用途是可接受的。
[0061] 发明具体说明
[0062] 本发明涉及生产多元不饱和酯或硫酯进而最终多元不饱和硫醇和多元不饱和酮 的方法。所述方法提供了高产率和高纯度。特别是，可以设想的，在合适的纯化过后本发明 的方法步骤提供药物级的目标化合物。
[0063] 本发明提供了在提供监管机构通常所要求的产率和纯度的化合物的条件下，制造 多元不饱和酯或硫酯、将任何硫酯还原以形成硫醇并随后将该硫醇转化为酮的方法。例如， 不希望束缚于任何理论，人们认为在上述步骤(3)中不希望的氧化产物的生成可以通过去 质子化减少或者甚至消除，进而在步骤(2)中多元不饱和醇的加入之前基本上消耗步骤(1) 中将所有的酸/硫代酸。因此，混合步骤(3)在步骤（1)中所有的酸/硫代酸基本上反应之后 发生。
[0064] 步骤(2)中使用的本发明方法的起始原料为多元不饱和醇。优选地，所述醇如式 (I)所示
[0065] R-〇H (I)
[0066] 其中R为可选地被取代的C9-23不饱和烃基，可选地被一个或多个选自S，0，N，S0，S0 2 的杂原子或杂原子基团打断，所述烃基包括至少2个双键，优选地至少4个双键。
[0067] 如果在任意基团R中，双键不是共辄是优选的。基团R优选地包括5至9个双键，优选 地5至8个双键，例如5至7个双键，例如5或6个双键。
[0068] 如果双键不与羟基共辄是优选的。
[0069] 基团R中存在的双键可能为顺式或反式构型，然而如果多数存在的双键（至少 50%)为顺式构型是优选的。在更有益的实施例中，基团R中所有的双键均为顺式构型，或者 除了最接近0H基团的双键可能为反式构型外所有双键均为顺式构型。
[0070] 基团R可具有9至23个碳原子，优选地11至19个碳原子，特别是16至18个碳原子。基 团R中的碳原子优选地为线型。
[0071] 有时R基团可以被至少一个杂原子或杂原子基团中断，这不是优选的，且R基团的 主链优选地仅含有碳原子。
[0072] R基团可选地为取代的，例如带有多达三个取代基，例如选自卤原子、Ci-6烷基例如 甲基、Ch烷氧基。如果存在，取代基优选地为非极性的且很小，例如甲基。然而，如果R基团 保持未取代则是优选的。
[0073] 基团R优选地为线型，即在R链上没有支链。它优选地来自天然原料例如长链脂肪 酸或酯。特别是，R基团来自花生四烯酸、二十二碳六烯酸或二十碳五烯酸。
[0074] 因此，本发明使用的多元不饱和醇来自对应的脂肪酸或醛(如下所述的方案1)。我 们进一步发现当多元不饱和醇来自其对应的醛时，该多元不饱和醇优选地由包含将多元不 饱和醛在足以制造所述多元不饱和醇的条件下和合适的亲电还原剂接触的反应获得。不希 望束缚于任何理论，人们认为使用温和的亲电还原剂减少了不希望的双键的还原，由此有 助于整个合成获得更好的产率和纯度。
[0075] 在这方面使用二异丁基氢化铝(DIBAL)是特别优选的。本发明人出人意料地发现， 一些其它公知的还原剂例如硼氢化钠不能成功地用在该还原反应，因为它们增加了形成的 杂质的数量。出人意料的是，使用DIBAH似乎减少了异构并因此最大程度地减少了杂质的形 成。
[0076] 本发明的方法的第一步骤涉及光延化学。该反应通常包括醇、羧酸和三苯基膦在 溶剂中的溶解，随后加入在溶剂中溶解的偶氮二羧酸。然而，这样的方法在这种情况下行不 通。
[0077]我们提出了改变反应级数以避免在本发明化合物的环境中的氧化和/或异构化。 出人意料的是，我们使用的反应级数为我们提供了在没有显著的异构化或氧化下制备我们 目标化合物的机会。因此，直到我们的发明才清楚，我们采用的特定的反应级数将解决不希 望的氧化和顺反异构化的问题。此外，更出人意料的是，我们采用的反应级数在抗氧化剂的 存在下起作用。
[0078]任何已知的在光延反应中使用的偶氮二羧酸酯和膦化合物可用于本发明。膦是一 组公知的具有式R'3P(R=有机衍生物，典型的是烷基、芳基或杂芳基）的有机磷化合物。偶 氮二羧酸酯是通式为R"〇〇C-N=N-CO〇-R"的化合物，其中R"为有机衍生物如烷基或芳基。 [00 79]因此优选的膦包含在式 [0080] PY3中
[0081 ] 其中Υ为C1-10烷基、C6-10芳基、C7-12芳基烷基、C7-12烷基芳基、C3-10环烷基、 C4-10-杂芳基、C6-10芳基0-，其中的任一可选地被一个或多个选自NH2、NHRaSNR a2的基团 取代，其中RaSCl-6烷基。
[0082]合适的杂芳基包括吡啶。
[0083]优选的本发明方法中使用的膦为三芳基膦例如三苯基膦或烷基芳基膦例如二环 己基苯基膦、二乙基苯基膦、异丙基二苯基膦、三丁基膦、三环己基膦、三己基膦和三正辛基 膦。其他感兴趣的膦包括4_(二甲氨基)苯基二苯基膦、二苯基-2-吡啶基膦和苯氧基二苯基 膦。使用三芳基膦例如三苯基膦是特别优选的。
[0084] 优选的偶氮二羧酸酯化合物是式
[0085] Z00C-N=N-C00-Z 的那些化合物
[0086] 其中每个Z独立地为C1-10烷基、C6-10芳基、C7-12芳基烷基、C7-12烷基芳基、C4-10杂芳基、C4-10杂环或C3-10环烷基，其中任一可选地被一个或多个选自卤化物的基团取 代。两个Z基团优选地为相同。合适的杂芳基包括吡啶。合适的杂环包括哌啶或哌嗪。
[0087] 合适的偶氮二羧酸酯化合物通常基于可选地被取代的C1-6-烷基酯，例如偶氮二 甲酸二乙酯(DEAD)、二叔丁基偶氮二羧酸酯或偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)，或可选地被取 代的芳基酯，例如二-4-氯苄基偶氮二羧酸酯。其它感兴趣的化合物包括1，V _(偶氮二甲 酰)二哌啶。
[0088] 因此，一般而言本发明的方法中使用的膦和偶氮二羧酸酯化合物的性质不是关键 的，任何已知的膦或在文献中已知的偶氮二羧酸酯试剂都可以使用。
[0089] 多元不饱和醇与羧酸或硫代酸反应。羧酸或硫代酸一般是低分子量的，例如250g/ mol或更小。羧酸或硫代酸优选地为一元酸或一元硫代酸。最优选地，它是化合物MCOOH或 MCOSH，其中R1为C1-6烷基、C6-10芳基、C7-12烷基芳基或C7-12芳基烷基（如苄基或甲苯 基）。理想地，R 1为乙基或甲基，尤其是甲基。
[0090] 因此本发明中如上文限定的化合物R-OH与化合物RkOOH或RkOSH的反应得到了化 合物 R-0C0R1 或 RSC0R1。
[0091] 本发明方法的步骤(2)要求抗氧化剂的存在，即能抑制氧化反应的化合物。如果抗 氧化剂为小分子，例如具有500g/mol或更小的分子量，例如250g/mol或更小是优选的。抗氧 化剂最好应是由FDA批准使用的。
[0092]在本发明方法的步骤(2)中使用的抗氧化剂优选地为丁基羟基茴香醚、丁基羟基 甲苯、没食子酸丙酯、生育酚、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、硫代甘油、巯基乙酸、亚硫酸氢 钠、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、乙二胺四乙酸四钠或m)TA。
[0093] 使用生育酚是特别优选的，尤其是(+/-)-α-生育酚。
[0094] 应当理解的是，本发明的化合物主要是用于医药用途，因而所用的抗氧化剂优选 地为药学上可接受的。
[0095] 加入到多元不饱和醇的抗氧化剂的量可为0.01至1 %mol，0 · 1至0· 5%mol多元不 饱和醇。
[0096] 有报道称典型的光延反应是复杂的，且有关反应中间产物的认定和活性还有争 议。然而，本发明人发现，在上述步骤(3)中加入多元不饱和醇之前基本上消耗掉所有的酸/ 硫代酸将能够本质上提高产率，而且最重要的是，所得到的多元不饱和酯/硫酯的纯度达到 许多药物应用接受的水平。他们还了解到，药学上可接受的抗氧化剂的存在可以在本方法 中被用以帮助减少不希望的顺/反异构化，而不会被破坏或者被在许多光延反应中使用的 试剂和条件所阻止或灭活。出人意料的是抗氧化剂的存在不影响该反应的成功。给定了光 延反应实际作用的机理的不确定性，关于额外试剂如抗氧化剂的存在是否将与反应中产生 的许多瞬态中间产物干扰总是存在一个问号。
[0097] 典型地，在光延反应中可使用1:1:1比例的试剂。在所要求保护的方法中，我们需 要使用足量的膦和偶氮二羧酸酯将酸或硫代酸基本上完全地去质子化，优选地完全去质子 化。因此尤其是，不应当有过量的酸或硫代酸存在。实际上，如果使用的光延试剂过量是优 选。
[0098] 步骤（1)的反应可以用低温控制，优选地低于10°C，例如0至5°C。步骤⑴的混合物 理想地放置10分钟到一小时的时间，例如至少20或至少30分钟，以确保酸或硫代酸去质子 化成为其相应的羧酸或硫代羧酸离子。为确保充分的去质子化，应当理解的是，相对于酸或 硫代乙酸应当存在过量的光延试剂。
[0099]因此，理想地，与酸或硫代酸相比，膦和偶氮二羧酸两种反应物应当至少有1.1摩 尔当量。这将确保完全去质子化的发生。
[0100]理想地，膦、偶氮二羧酸酯和酸/硫代酸的混合形成溶液，特别是澄清的溶液。应当 没有物料粘着在发生反应的容器的侧面。当去质子化迅速发生时，在良好的搅拌下充分的 去质子化应该会非常迅速(如果不是更小的话几秒钟)地发生，并必定在10分钟时间之内。 [0101]如果充分的去质子化没有发生，会体现在最终的产品含有大量杂质。未经充分的 去质子化，有可能在最终产品中观察到l〇wt%或更多的杂质。
[0102] 人们认为， 在纯度方面的有益效果通过在将醇加入步骤（1)的反应物料之前将多 元不饱和醇和至少一种药学上可接受的抗氧化剂在步骤(2)中结合得到增强。优选地，这些 步骤和随后的制造多元不饱和酮的步骤，在相同或不同的药物学上可接受的抗氧化剂的存 在下进行，以将反应中顺/反异构化的可能性最小化。
[0103] 本发明方法的步骤(3)中的实际反应可能需要10分钟到1小时，并可以在任何方便 的温度下进行，例如环境温度。
[0104] 应当理解，典型地多元不饱和醇的摩尔量与存在的酸或硫代酸的量是成化学计量 比的。一旦硫酯或酯已经形成，就可以常规处理，例如进行快速干柱色谱。理想地，此时酯或 硫酯应具有通过HPLC( %面积)测定的至少90 %的纯度）。更优选地纯度应为91 %或更高，例 如92%或更高，理想地93%或更高，尤其是94%或甚至95%或更高。
[0105] 此方法已被发现可以高产率生产酯或硫酯，例如70%或更高。此外，如我们在我们 的实施例中所示的，我们可以消除在HPLC上可检测的杂质的存在。
[0106] 在一个优选的实施例中，本发明方法形成的硫酯接着自身转化成其相应的硫醇。 有时这在理论上可以使用任何常规的还原方法进行，例如使用二异丁基氢化铝，为了避免 副反应、杂质的形成和存在的双键的顺-反异构化，发明人提出在抗氧化剂的存在下进行该 反应。抗氧化剂优选地在此阶段加入，虽然理论上如果硫酯的形成中有残留的抗氧化剂，则 可能不需要进一步的抗氧化剂。然而，通常在形成硫酯的过程中加入的任何抗氧化剂在所 述硫酯的纯化过程中会被去除，因此进一步的抗氧化剂是需要的。
[0107] 该抗氧化剂可以与上述方法步骤(2)中加入的抗氧化剂相同或不同。所述抗氧化 剂优选地为选自丁基羟基茴香醚、丁基羟基甲苯、没食子酸丙酯、生育酚、抗坏血酸、抗坏血 酸棕榈酸酯、硫代甘油、巯基乙酸、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、乙二胺四乙酸四钠 或EDTA。
[0108] 使用生育酚是特别优选的。添加/存在的抗氧化剂的量相对于存在的多元不饱和 硫酯的量可再次达到0.01至l%mol，优选为0· 1至0.5%mol〇
[0109] 另外，上述的有益效果可以通过在一个反应中制造多元不饱和硫醇得到进一步增 强，所述反应涉及在足以制造多元不饱和硫醇的条件下将多元不饱和硫酯与合适的温和的 亲电还原剂接触。不希望束缚于任何理论，据信使用温和的亲电还原剂，如下面所讨论的， 减少了不希望的双键的还原，从而有助于整个合成获得更好的产率和纯度。
[0110]合适的还原剂理想地为金属碳酸盐，如碳酸钾。溶剂的使用例如甲醇是合适的。 [cm]因此，根据进一步的方面，本发明提供了用于制备药学上可接受的多元不饱和硫 醇的方法，所述方法包括：
[0112] (1)在第一容器中，在膦的存在下，将硫代酸在将其中所有的硫代酸基本上去质子 化的条件下和偶氮二羧酸酯化合物结合；
[0113] (2)在第二容器中，将多元不饱和醇和至少一种药学上可接受的抗氧化剂结合；以 及
[0114] (3)在足以制造相应的多元不饱和硫酯的条件下将所述第一容器和所述第二容器 中的内容物混合;以及
[0115] (4)将多元不饱和硫酯与第二药学上可接受的抗氧化剂接触，并在足以制造多元 不饱和硫醇的条件下使所得混合物反应。
[0116] 因此优选的硫酯为式R-SC0R1，其中R和R1如上文所限定。优选的硫醇简单地为RSH。
[0117] 理想地，此时所述硫醇应当具有通过HPLC( %面积）测定的至少90%的纯度。更优 选地纯度应为91 %或更高，例如92 %或更高，理想地93 %或更高，尤其是94 %或甚至95 %或 更尚。
[0118] 此方法已被发现可以高产率生产硫醇，例如70 %或更高。此外，如我们在我们的例 子中所示，我们可以消除在HPLC上可检测的杂质的存在。
[0119] 当然理想地，本发明方法旨在多种药学上可接受的多元不饱和酮，它们适合于药 物用途。优选的化合物包含酮基，所述酮基包含吸电子基团和在酮基的α、β、γ或δ位置的硫 原子。吸电子基团或EWG吸引电子远离反应中心。
[0120]因此本发明优选的多元不饱和酮目标物为式(II)
[0121] R2-C〇-X (II)
[0122] 其中R2为在酮基的α、β、γ或δ位置被S原子打断的C1Q-24多元不饱和烃基;且
[0123] X为吸电子基团(EWG)。
[0124] 本发明任何化合物的合适的吸电子基团X为CN、苯基、CHal3、CHal 2H、CHalH2其中 Ha 1代表卤素，特别是F。所述EWG特别为CHa 13，例如CF3。
[0125] 如果在S原子在羰基的β位是最优选的。
[0126] 如果在任何基团R2中，双键不是共辄是优选的。基团R2优选地包含5至9个双键，优 选地5或8个双键，例如5至7个双键，例如5或6个双键。
[0127]优选的是如果双键不与羟基共辄。
[0128] 基团R2中存在的双键可能为顺式或反式构型，然而如果多数存在的双键（至少 50% )为顺式构型是优选的。在更有益的实施例中，基团R2中所有的双键均为顺式构型，或 者除了最接近S基团的双键可能为反式构型外所有双键均为顺式构型。
[0129] 基团R2可具有10至24个碳原子，优选地12至20个碳原子，特别是17至19个碳原子。
[0130] 在一个优选的实施例中，本发明提供了生产药学上可接受的1，1，1_三氟-3-(((2E，6Z，9Z，12Z，15Z，）-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-基)硫)丙-2-酮的方法(也可参见 此处的方案1):
[0131] nsssnssssnsV
、、、、《·、、、、、、、'
[0132] 其中X为CF3;或相关化合物
[0133]
[0134] 其中 X 为 CF3。
[0135] 因此，本发明的方法的最后步骤包括硫醇与合适的酮反应以形成所希望的式（II) 化合物。反应的酮化合物优选地为式(LG) R3C〇-X，其中R3与在步骤(2)中使用的多元不饱和 醇的R基团加在一起形成式(II)中的基团R 2,即
[0136]
[0137] R3优选为C1-3-亚烃基，如亚甲基。LG表示离去基团，其被巯基亲核取代。离去基团 是一个分子片段，其在杂原子键裂解时带着一对电子离去。当然优选地，（lg)r 3-cox表示化 合物LG-CH2-⑶X，其中LG为离去基团例如卤素、甲苯磺酰基、甲磺酰基等。理想地LG为卤素 例如Brd是在上述式中如上文限定的吸电子基团，优选地还是为CF 3。最优选地(LG)R3-C0X 为 BrCH2-COCF3。
[0138] 这个最后的反应步骤可以在如上文所限定的进一步抗氧化剂的存在下发生。再 次，抗氧化剂可能作为从硫酯还原步骤的留存固有地存在，在这种情况下，可能未必需要加 入更多的抗氧化剂。然而加入更多的抗氧化剂，例如其中所形成的硫醇被纯化因而抗氧化 剂被除去，也在本发明的范围之内。
[0139] 如果采用抗氧化剂，使用生育酚是特别优选的。与多元不饱和硫醇的含量相比，加 入/存在的抗氧化剂的量可再次达到0.01至1% mol，优选为0 · 1至0 · 5 % mo 1 〇
[0140] 应当理解，此处所述的任何反应可能需要在无氧的条件下进行，例如在Ar气氛下。
[0141] 理想地，此时的酮应具有通过HPLC( %面积）测定的至少90 %的纯度。更优选地纯 度应为91 %或更高，例如92 %或更高，理想地93 %或更高，尤其是94 %或甚至95 %或更高。 [0142]此处的方法已被发现可以高产率生产酮，例如70%或更高。此外，如我们在我们的 实施例中所示，我们可以消除在HPLC上可检测的杂质的存在。
[0143] 在一个最优选的实施例中，本发明的方法至少包括以下步骤：
[0144] A)在第一容器中，将膦、偶氮二羧酸酯和硫代乙酸在溶剂中结合以形成混合物，并 允许所述硫代乙酸的完全去质子化发生；
[0145] B)在第二容器中，将（2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-醇（C18 稀丙基醇)和抗氧化剂结合；
[0146] C)将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合以制造 S_((2E，6Z，9Z，12Z， 152，）-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-基）乙酰硫酯。
[0147] 更具体的，本发明的方法需要以下步骤：
[0148] A)在第一容器中，将三苯基膦、偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)和硫代乙酸在溶剂中 结合，并允许所述硫代乙酸的完全去质子化发生；
[0149] B)在第二容器中，将(2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-醇和生 育酚结合；
[0150] C)将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合以制造 S-( (2E，6Z，9Z，12Z， 152，）-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-基）乙酰硫酯。
[0151] 进一步优选的是如果所述S-((2E，6Z，9Z，12Z，15Z，）_十八碳_2,6，9,12,15-五烯-1 _基）乙醜硫酯是：
[0152] D)在将所述酯纯化至由HPLC( %面积）测定的至少90 %纯度的条件下进行快速干 柱色谱。
[0153] 此外，在步骤C或D之后，优选的是如果，
[0154] E)将可选地纯化的在步骤C)或D)中生成S-((2E，6Z，9Z，12Z，15Z，）-十八碳-2,6， 9，12，15-五烯-1-基）乙酰硫酯在还原酯基并生成对应的硫醇（2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八 碳_2,6,9,12,15-五烯-1-硫醇）的条件下与金属碳酸盐，例如碳酸钾，和生育酚接触。
[0155] 接着优选的是如果，F)将步骤E)生成的硫醇在生成
[0156]
[0157] 的条件下与3-溴三氟丙酮接触，其中X为CF3。
[0158] 该化合物可通过快速干柱色谱被纯化至通过HPLC( %面积）测定的至少90%的纯 度以产生药学上可接受的化合物。
[0159]在另一个方面，本发明提供了生产在药学上可接受的三氟-3_(((3Z，6Z， 9Z，12Z，15Z)-十八碳-3，6，9，12，15-五烯-1 -基)硫)丙-2-酮的方法
[0160
[0161]其中X为CF3;按照上述方案将起始的醇进行适当的取代生成（3Z，6Z，9Z，12Z， 15Z)-十八碳-3,6,9，12，15-五烯-1-醇。
[0162] 应当理解，本发明的方法制得的化合物具有各种应用，例如在慢性炎性疾病的治 疗。它们可以使用公知的技术配制为药物组合物。这里不需要对这样的技术进行进一步的 讨论。
[0163] 本发明现在将参考以下非限制性的实施例和附图进行描述。
[0164] 图1至图8是显示下列各实施例的产物的HPLC色谱图。 实施例
[0165] 实施例 1:合成1,1,1-三氟-3-(((2E，6Z，9Z，12Z，15Z，）_ 十八碳 _2,6,9，12，15_五 稀-1-基)硫)-丙-2-酬概述
[0166] 以下信息提供了多元不饱和酮的合成的 一般性概述。参见方案1，步骤A和步骤B在 下面实施例6中提及了更多的细节。
[0167] 旨在制造 C18的稀丙基醇的所有步骤（下面的方案1)基本上如J . Chem . Soc .， Perkin Trans · 1，2000，2271-2276(:S:fcatteb0丨和Holmeide)所述的进行，有一处修改：将醛 还原成醇时不使用硼氢化钠，而使用二异丁基氢化铝(DIBAL)以减少反式双键的过度还原。 在最后三个步骤(下面的方案1)时，引入以下预防措施/修改：
[0168] 所有反应均在氩气气氛下进行。通风橱的灯都被关闭。没有其他关于光保护的预 防措施被认为是必要的。另外，最后的3个步骤(分别称为A、B和C步骤)在α-生育酚的存在下 进行。在光延反应中，为了避免异构化，试剂添加的顺序被认为是重要的。可以预料的是，在 引入C18烯丙基醇之前所有的硫代乙酸已经完全反应是至关重要的。另外，步骤(Α)的粗产 物和纯化产物都用盖有翻口塞的氩气冲洗，并放置于冰箱中存储。步骤(Β)在不经纯化下进 行，但同样:如果需要存储，粗产物将在-18°C、氩气氛下贮存。在最后的步骤时，必须非常小 心以确保粗产物和纯化的物料都在氩气下保存。
[0169]
[0170] 方案1:合成1，1，1-三氟-3-( ((2E，6Z，9Z，12Z，15Z，）_十八碳-2，6，9，12，15-五烯-1-基)硫)-丙-2-酮概述
[0171] 比较实施例2:生产多元不饱和硫酯产生了靠近主产物峰迀移的杂质。
[0172]
[0173] 通风橱的灯都被关闭。没有其他关于光保护的预防措施被认为是必要的。在氩气 下，以下溶液在带有玻璃塞的200ml容量瓶中制备：
[0174] (2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-醇（（l)，15·0g，57·6mmol)、 硫代乙酸（5.00ml，70.0 mmol)以及α-生育酚(30.4mg)在无水THF(150ml)中结合。溶液被降 温至0°C。
[0175] 在1升的圆底烧瓶中，放入三苯基膦（18. lg，69. lmmol)，随后加入无水THF (300ml)。带有翻口塞的烧瓶中加入搅拌棒，用氩气冲洗并浸入冰浴中，在0°C下搅拌10分 钟。偶氮二甲酸二异丙酯（13.6ml，57.6mmol)用注射器通过翻口塞一次加入，将反应混合物 在0°C搅拌30分钟。预冷却的无水THF中的（2E，6Z，9Z，12Z，15Z)_十八碳_2,6,9，12，15_五 烯-1-醇、硫代乙酸和生育酚溶液一次加入。撤去冷却浴并且将反应混合物搅拌一小时。 将澄清的黄色溶液在低压下(旋转蒸发器)蒸发以除去THF。向残余物中加入乙醚（120ml)并 将烧瓶在室温下在旋转蒸发器上旋转10分钟。将混合物通过烧结玻璃(类型3)过滤，并用乙 醚(2X50ml)将残留物冲洗掉。将合并的滤液在低压下(旋转蒸发器)蒸发。向残余物中加入 庚烷(100ml )，并将烧瓶在室温下旋转10分钟。通过上述烧结玻璃过滤，用庚烷(2 X 25ml)冲 洗并浓缩，得到24.8g粗产物，为黄色油状物。通过快速干柱色谱和快速色谱(庚烷:EtOAc梯 度)进行纯化，得到 12·5克（68%)S-((2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-基）乙酰硫酯，为无色油状物。
[0176] 图1和图2示出了合成产物的色谱图。在图1和2中副产物可被看作是主产物峰右边 紧邻的一个肩峰。
[0177] 实施例3:在加入多元不饱和醇之前的先进行硫代乙酸的反应减少了杂质的存在
[0178]
[0179] 要将通风橱中的灯关闭。没有其他关于光保护的预防措施被认为是必要的。
[0180]称取三苯基膦(6.06g，23. lmmol )，转移到带有磁力搅拌棒的1升圆底烧瓶中，将其 溶于无水THF(300ml)中，用氩气冲洗，用翻口塞盖住并浸没在冰/水浴中。将溶液在0.5°C搅 拌11分钟。
[0181] 偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)(4.50ml，20.8mmol)-次加入到反应混合物中，并将 混合物在〇. 5°C搅拌32分钟。
[0182] 硫代乙酸（1.50ml，21mmol)-次加入到反应混合物中，并将混合物在3.5°C搅拌15 分钟。
[0183] 称取 α-生育酚（9.8mg)和十八碳 _2^)，6(2)，9(2)，12(2)，15(2)-五烯-1-醇 (5.008，19.2111111〇1)，转移到锥形瓶中并溶解在无水1'册(501^)中，且一次加入到反应混合物 中。在加入后，撤去冷却浴并将混合物搅拌47分钟。
[0184] 将反应混合物在低压下浓缩。向残余物中加入乙醚(40ml)并将烧瓶在室温下在旋 转蒸发器上旋转10分钟。将混合物通过烧结玻璃(类型3)过滤并用乙醚(2X 15ml)将残留物 冲洗掉。将合并的滤液在低压下(旋转蒸发器)蒸发。向残余物中加入庚烷(35ml)，并将烧瓶 在室温下旋转10分钟。通过上述烧结玻璃过滤，用庚烷(2X 10ml)冲洗并浓缩，得到粗产物， 为黄色油状物。通过快速干柱色谱(庚烷:EtOAc梯度)进行纯化，得到4.52克(74% ) S-( (2E， 62,92，122，152)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-基）乙酰硫酯，为无色油状物。
[0185] 图3和图4显示实施例2中的杂质没有出现。
[0186] 比较实施例4:无抗氧化剂下生产多元不饱三氟酮产生了靠近主产物峰迀移的杂 质
[0187]
[0188] 向（2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2，6，9，12，15-五烯-1-硫醇（52 · 36g，189 · 4mmol) 的乙醇（1200ml)和水(805ml)溶液中加入碳酸氢钠(33.48g，397.7mmol)，并在室温和氮气 下将反应混合物搅拌15分钟。将3-溴-1，1，1-三氟丙酮(23.6ml，227.3mmol)-次性加入。在 氮气和室温下将反应混合物搅拌40分钟，转移至分液漏斗中，用庚烷(2X1升)萃取水相。将 有机层用盐水(250ml)洗涤，干燥（用Na 2S04)，过滤并浓缩。通过快速干柱色谱(庚烷:EtOAc 梯度），得到 43.19g(59%)l，l，l-三氟-3-(((2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五 烯-1-基)硫)丙-2-酮，为浅黄色油状物。
[0189] 下图示出了在没有抗氧化剂(α-生育酚)的存在下AVX001合成的产物的色谱图。在 图5和图6中杂质可被看作是靠近主产物峰迀移的一个肩峰。
[0190] 实施例5:用抗氧化剂生产多元不饱和三氟酮消除了杂质的出现。
[0191]
[0192] 向（2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-硫醇（5·06g，18·3mmol)的 乙醇（120ml)和水(80ml)溶液中加入碳酸氢钠(3.23g，38.43mmol)，将反应混合物在室温和 氮气下搅拌15分钟。将3-溴-1，1，1-三氟丙酮(2.3ml，22.0mmol)-次性加入。在室温和氮气 下将反应混合物搅拌35分钟，转移至分液漏斗中并用庚烷(2X 100ml)萃取水相。将有机层 用盐水(30ml)洗涤，干燥（用Na2S04)，过滤并浓缩。通过快速色谱(庚烷:EtOAc梯度），得到 5·51g(78%)l，l，l-三氟-3-(((2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-基）硫） 丙-2-酮，为无色油状物。图7和图8示出了在抗氧化剂(α-生育酚）的存在下，三氟丙酮合成 中的产物的色谱图。通风橱的灯都要被关闭。没有其他关于光保护的预防措施被认为是必 要的。
[0193] 实施例6:1，1，1_三氟-3-(((2E，6Z，9Z，12Z，15Z，）-十八碳_2,6，9,12,15-五烯-1-基)硫)丙-2-酮(4)的合成
[0194] 以下示出了制造多元不饱和三氟丙酮的过程。为了消除或减少不希望的杂质的出 现，在加入多元不饱和醇之前在一个单独的反应中硫代酸被消耗。此外，α-生育酚与醇在一 个单独的反应室中混合，以减少或消除不希望的氧化。以下示出的这些步骤及其它被发现 将化合物的产率和纯度提高至93%或更高(面积％ )。
[0195] Α.步骤Α(参见上述方案1)
[0196] 称取三苯基膦(6.05g±0.10g)，转移至装有磁力搅拌棒的1升圆底烧瓶中，将其溶 于无水THF(310ml ± 15ml)，用氩气冲洗，用翻口塞盖住并浸入冰/水浴中。将溶液在0-5°C搅 拌10-20分钟。将偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD) (4.55ml ±0.09ml)-次性加入反应混合物中。 将混合物在〇_5°C搅拌30-40分钟。将硫代乙酸（1.50ml ±0.03ml) (A)-次性加入反应混合 物中。将混合物在〇_5°C搅拌15-20分钟。
[0197] 称取 α-生育酚（l〇mg±〇.2mg)和十八碳-2(E)，6(Z)，9(Z)，12(Z)，15(Z)-五烯-1-醇(C-18醇）（A)(5·00g±0·10g)，转移至锥形瓶并溶解在无水THF(50ml±2·5ml)中，然后一 次性加入到反应混合物中。
[0198] 加入之后，撤去冷却浴并将混合物搅拌45-55分钟。将反应混合物在低压下浓缩。 在水浴温度为小于或等于30C。将所得的粗产物通过HPLC分析(见下文）。将残余物用盖有翻 口塞的氩气冲洗并置于冰箱中。
[0199]合成进行三次且将批次合并，并通过色谱进行纯化。
[0200] Hit。只有通过验收标准的粗产物才合并。将庚烷（50ml ± 2.5ml)加入到残余物 中，并将烧瓶在室温下在旋转蒸发器上旋转5-15分钟。将混合物通过烧结玻璃漏斗(3级)过 滤;将庚烷(25ml ± lml)加入到反应烧瓶中，震荡并通过烧结玻璃漏斗过滤。将沉淀物用庚 烷(25ml± lml)洗涤。将滤液和洗涤液在低压下浓缩，水浴的温度小于或等于30C。将残余物 通过氩气冲洗并用翻口塞封盖并放置在冰箱中贮存。
[0201 ]快速干柱色谱。将二氧化硅(500g±25g)转移到1000ml的烧结玻璃漏斗（3级）中， 并用庚烷500mL预洗脱。将庚烷20-40ml加入到粗产物，并将混合物装载到柱上。该柱用 250ml±25ml馏分洗脱。用于这种目的，带刻度的锥形瓶250mL就具有足够的精度了。在制备 庚烷:Et0Ac(100 :l)的洗脱液时，将25ml EtOAc加入之前未开封的2500ml庚烷的烧瓶中就 足够精确了。馏分通过TLC分析(洗脱液庚烷:EtOAc为95: 5)。产品的Rf约0.4，使用PMA斑点 或钼酸铵/硫酸铈斑点显色。洗脱持续到整个产品出柱。收集馏分，其中产物以大于或等于 93 % (面积-% )的纯度出现，且RRT = 1.03的峰小于或等于4 % (面积-% )，且RRT = 0.59的峰 小于或等于1% (面积-%)。将物料转移到1升的圆底烧瓶中并在低压下，温度<35°C下蒸 发，得到13.5(73.8%)产物，为无色油状物。将产物在氩气气氛下于约-18°C贮存。
[0202] B.合成步骤B-参见上述方案1
[0203] 溶液的制备。将浓HC1 (12.3 ±0.25ml)加入到含有一些自来水的250ml量筒 ，另加 自来水补至（150mL)刻度并混合。将NaCl U 40克）和自来水（110ml ± 10ml)在锥形瓶中混 合。将通风橱的灯关闭。没有其他关于光保护的预防措施被认为是必要的。称取α-生育酚 (27.2mg)并称取Me0H(130ml)，并溶解和转移到含有硫代乙酸S-十八碳-2(Ε)，6(Ζ)，9(Ζ)， 12 (Ζ)，15 (Ζ)-五烯基酯（13.5g)的1升圆底烧瓶中，其中装备有磁力搅拌棒和100ml滴液漏 斗。将K2C0 3(6.45克)一次性加入到反应混合物中。用氩气冲洗并盖上翻口塞。在室温下搅拌 30-40分钟。将反应烧瓶浸没在冰/水浴中并将1M HC1 (150mL)小心地通过滴液漏斗逐滴加 入，然后将其转移到分液漏斗并用庚烷[2X200ml]萃取。将合并的有机相用盐水（100mL)洗 涤，转移至装有磁力搅拌棒的锥形瓶并加入Na 2S04(70.4克）。如果需要的话，可以加入更多 的Na2S〇4。将悬浮液搅拌10-20分钟。将悬浮液过滤，将滤饼用庚烷U 25ml)洗涤，转移至1升 圆底烧瓶中并在低压下，温度<35°C蒸发。此粗产物（12.0克，定量产率)不经进一步纯化即 用于下一步骤。将产物在氩气气氛下于小于或等于_18°C贮存。
[0204] C.多元不饱和三氟酮的制备(参见方案1)
[0205] 溶液的制备
[0206]将NaClU40g)与自来水（I)(110ml)混合。将通风橱的灯关闭。没有其他关于光保 护预防措施被认为是必要的。称取NaHC03(7.68g)并量取Et0H(290ml)和自来水（192ml)，并 转移到含有十八碳_2化），6(2)，9(2)，12(2)，15(2)-五烯-1-硫醇（12.(^)的1升烧瓶中，并 用氩气冲洗。在室温下将其剧烈搅拌15-20分钟。将3-溴三氟丙酮(5.4ml) -次性加 入并剧烈搅拌35-45分钟。将物料转移到分液漏斗，并用庚烷（I)(2 X 200ml)萃取。合并的有 机相用盐水（1 OOmL)洗涤，并转移到装有磁力搅拌棒的锥形瓶中并加入Na2S〇4(I) (60g)。如 果需要，可以加入更多的Na2S〇4。将悬浮液搅拌10-20分钟。
[0207]将悬浮液过滤，将滤饼用庚烷U 25mL)冲洗，并转移到1L圆底烧瓶中，并在低压 下，温度U35°C)蒸发。
[0208]快速干柱色谱。将二氧化硅(500g±25g)转移到1000ml的烧结玻璃漏斗（3级）中。 用庚烷500±25ml预洗脱。庚烷20-25ml加入到粗产物中，并将混合物装载到柱上。该柱用 350mL±20ml馏分洗脱。用于这种量取，带刻度的500ml锥形烧瓶即具有足够的精度。当制备 庚烷:Et0Ac(100 :X)的洗脱液时，将25x ml EtOAc加入之前未开封的2500ml庚烷的烧瓶中 就足够精确了。馏分通过TLC(洗脱液庚烷:EtOAc 80: 20)进行分析。产品的Rf约为0.26，使 用PMA斑点或钼酸铵/硫酸铈斑点显色。继续洗脱直到整个产品出柱。用庚烷-庚烷:EtOAc (100:1)-(100:2)-(100:3)-(100:10)洗脱。如果在产物之前的杂质是在馏分#21之后出柱， 可以从馏分#22开始使用（100 :10)，否则继续（100 :2)或（100 :3)。当在产物之前的杂质出 柱，可以使用（100:10)。
[0209]通过HPLC分析，通过TLC的馏分是纯的或仅含有少量的杂质。收集含有纯度在HPLC 规格(面积-%)范围内的产物的馏分。将物料转移到1升的圆底烧瓶中并在低压下，温度< 35°C蒸发。当压力达到平衡时旋转蒸发器中充满氩气。用庚烷通过折叠过滤器转移到250mL 圆底烧瓶中，并在低压，温度（<35°C)蒸发。当初始蒸发结束，将高真空栗连接于旋转蒸发 器并蒸发1-2小时，得到10.29g产物(61%)，为无色油状物。产物在氩气气氛下于小于或等 于-18°C贮存。
[0210] 以下物料和方法根据需要在本实施例6中使用。
[0211] 1. TLC:使用庚烷:EtOAc (80: 20)作为洗脱液通过TLC根据需要对产物的少量样品 进行分析。产品Rf约〇. 26，用PMA斑点或钼酸铵/硫酸铺斑点显色。只允许有少量的杂质。
[0212] 2-HPLC
[0213] HPLC/UV 条件
[0214] 分析柱:EC-C18，150x 4.6mm,2·7μπι颗粒尺寸
[0215] 流速：1.5ml/min
[0216] 停止时间：22min
[0217] 温度：15°C
[0218] 检测器：UV 210:8ref 360:100PW>0.05min
[0219] 流动相:A: ACN/水70:30w/0 · 02 % v/v 甲酸
[0220] B:ACN w/0.02%v/v甲酸 流动相梯度程序：时间 Γ η 初始 0%
[0221] 12 min 80% 20 min 100%
【主权项】
1. 一种用于制备多元不饱和酯或硫酯的方法，包括： (1) 在第一容器中，在膦的存在下，将羧酸或硫代酸在将其中所有的羧酸或硫代酸基本 上去质子化的条件下和偶氮二羧酸酯化合物结合； (2) 在第二容器中，将多元不饱和醇和至少一种药学上可接受的抗氧化剂结合；以及 (3) 将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合以形成所述多元不饱和酯或硫 酯。2. -种用于制备多元不饱和硫醇的方法，包括： (1) 在第一容器中，在膦的存在下，将多元不饱和硫代酸在将其中所有的硫代酸基本上 去质子化的条件下和偶氮二羧酸酯化合物结合； (2) 在第二容器中，将多元不饱和醇和至少一种药学上可接受的抗氧化剂结合； (3) 将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合以形成所述多元不饱和硫酯；以 及 (4) 将至少一种药学上可接受的抗氧化剂加至步骤(3)的所述多元不饱和硫酯中，所述 抗氧化剂可以与步骤(2)所用的抗氧化剂相同或不同，并将步骤(3)的硫酯在足以制造多元 不饱和硫醇的条件下还原。3. -种用于制备多元不饱和酮化合物的方法，包括： (1) 在第一容器中，在膦的存在下，将多元不饱和硫代酸在将其中所有的硫代酸基本上 去质子化的条件下和偶氮二羧酸酯化合物结合； (2) 在第二容器中，将式为ROH的多元不饱和醇和至少一种药学上可接受的抗氧化剂结 合，其中R为C9-23多元不饱和烃基； (3) 将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合以形成所述多元不饱和硫酯； (4) 将至少一种药学上可接受的抗氧化剂加至步骤(3)的多元不饱和硫酯中，所述抗氧 化剂可以与步骤(2)所用的抗氧化剂相同或不同，并将步骤(3)的硫酯在足以制造多元不饱 和硫醇RSH的条件下还原；以及 (5) 将所述多元不饱和硫醇与化合物(LG)R3COX反应，其中X为吸电子基团且R3为带有离 去基团LG的Ci-3烯基，可选地在进一步加入的抗氧化剂的存在下，以理想地形成式(II)的多 元不饱和酮化合物 R2-CO-X(II) 其中R2为在酮基的β、γ或δ位置被S原子打断的C1Q-24多元不饱和烃基;且 X为吸电子基团。4. 如权利要求1-3所述的方法，其中所述药学上可接受的抗氧化剂为生育酚。5. 如权利要求1-4所述的方法，其中所述多元不饱和硫酯为通过HPLC( %面积)测定的 至少90%纯。6. 如权利要求5所述的方法，其中所述多元不饱和硫酯为通过HPLC( %面积）测定的至 少91 %、92%、93%、94%或至少95%纯。7. 如权利要求3所述的方法，其中所述多元不饱和酮为通过HPLC( %面积）测定的至少 90% 纯。8. 如权利要求7所述的方法，其中所述多元不饱和酮为通过HPLC( %面积）测定的至少 91%、92%、93%、94% 或至少 95% 纯。9. 如权利要求1-8所述的方法，其中所述膦为三苯基膦。10. 如权利要求1-9所述的方法，其中所述偶氮二羧酸酯为偶氮二甲酸二异丙酯 (DIAD)011. 如前述任一权利要求所述的方法，其中步骤(1)中膦和偶氮二羧酸酯相对于硫代酸 或酸存在摩尔过量。12. 如权利要求1-11所述的方法，其中所述多元不饱和醇为式(I) R-OH (I) 其中R为可选地被取代的C9-23不饱和烃基，可选地被一个或多个选自S、0、N、S0、S02的杂 原子或杂原子基团打断，所述烃基包括至少2个双键，优选地至少4个双键。13. 如权利要求1-12所述的方法，其中所述多元不饱和醇为含有5个双键的C18醇。14. 如权利要求13所述的方法，其中所述多元不饱和醇为（2Ε，6Ζ，9Ζ，12Ζ，15Ζ)-+Λ 碳-2，6，9，12，15 -五稀醇。15. 如权利要求1-14所述的方法，其中所述多元不饱和硫酯为含有5个双键的C18多元 不饱和硫代乙酸酯。16. 如权利要求15所述的方法，其中所述多元不饱和硫代乙酸酯为S-((2E，6Z，9Z，12Z， 152)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-基）乙酰硫酯。17. 如权利要求1所述的方法，包含步骤： A) 在第一容器中，将膦、偶氮二羧酸酯和硫代乙酸在溶剂中结合以形成混合物，并允许 所述硫代乙酸的完全去质子化发生； B) 在第二容器中，将(2E，6Z，9Z，12Z，15Z)-十八碳-2,6,9，12，15-五烯-1-醇(C18烯丙 基醇)和抗氧化剂结合； C) 将所述第一容器和所述第二容器中的内容物混合以制造S-( (2E，6Z，9Z，12Z，15Z，）-十八碳-2，6，9，12，15-五烯-1 -基）乙酰硫酯。18. 如权利要求17所述的方法，进一步可选地包含： D) 将步骤C)中生成的酯在将所述酯纯化至由HPLC( %面积)测定的至少90%纯的条件 下进行快速干柱色谱； E) 将步骤C)或D)中生成的可选地纯化的S-((2E，6Z，9Z，12Z，15Z，）-十八碳-2,6,9，12， 15-五烯-1-基）乙酰硫酯在还原酯基并生成对应的硫醇(2E，6Z，9Z，12Z，15Z)_十八碳_2,6， 9,12,15-五烯-1-硫醇）的条件下与金属碳酸盐和生育酚接触，所述金属碳酸盐例如碳酸 钾。19. 如权利要求18所述的方法，进一步包含： F) 将步骤E)生成的硫醇在生成的条件下与3-溴-1，1，1-三氟丙酮接触，其中X为CF3。20. 如权利要求3所述的方法，其中所述酮为其中X为CF3。21.如前述任一权利要求所述的方法，其中所述多元不饱和醇是由其相应的醛在亲电 还原剂例如DIBAH的存在下还原获得。
【专利摘要】本发明涉及某些多元不饱和化合物的制备，在至少一种抗氧化剂存在下采用了光延反应的一种特殊应用。我们发现了一种直接制备药物学上可接受的多元不饱和酯或硫酯的方法，其最终可被转化为有益的酮化合物，通过使用特殊的光延反应其中不希望的氧化及顺/反异构化实质上被减少或消除。
【IPC分类】C07C327/22, C07C319/02, C07C319/14, C07C321/08, C07C323/22
【公开号】CN105492421
【申请号】CN201480044978
【发明人】马塞尔·桑德伯格, 英厄·雷敦·奥克鲁斯特
【申请人】埃维克辛公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年7月23日
【公告号】CA2918950A1, EP3024818A1, US20160159737, WO2015011206A1
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