作为idh2突变体抑制剂用于癌症治疗的n,6-双(芳基或杂芳基)-1,3,5-三嗪-2,4-二胺化合物的制作方法
作为idh2突变体抑制剂用于癌症治疗的n,6-双(芳基或杂芳基)-1,3,5-三嗪-2,4-二胺化合物的制作方法
【专利说明】作为IDH2突变体抑制剂用于癌症治疗的N,6-双(芳基或杂芳 基)-1 ,3,5-三嗪-2,4-二胺化合物
[00011优先权声明
[0002]本申请要求2013年7月11日提交的美国申请序列号61/845352的优先权，其通过引 用以其整体结合到本文中。
[0003] 发明背景
[0004] 异柠檬酸脱氢酶（IDH)催化异柠檬酸至2-酮戊二酸（即α-酮戊二酸）的氧化脱羧。 这些酶属于两个不同的亚类，其中的一个利用NAD( + )作为电子接纳体，另一个利用NADP (+ )。已报告了 5种异柠檬酸脱氢酶:3种NAD( + )依赖型异柠檬酸脱氢酶，其位于线粒体基质， 2种NADP( + )依赖型异柠檬酸脱氢酶，其中一种是线粒体的，另一种主要是胞质的。各NADP (+ )依赖型同工酶是同二聚体。
[0005] IDH2(异柠檬酸脱氢酶 2(NADP+)，线粒体）亦称为 IDH;IDP;IDHM;IDPM;ICD-M 或 mNADP-IDH。由该基因编码的蛋白质是存在于线粒体中的NADP( + )依赖型异柠檬酸脱氢酶。 它在中间代谢和能量生产中起作用。该蛋白质可与丙酮酸脱氢酶复合体紧密缔合并相互作 用。人IDH2基因编码452个氨基酸的蛋白质。IDH2的核苷酸和氨基酸序列可分别以GenBank 条目NM_002168.2和NP_002159.2查询。人IDH2的核苷酸和氨基酸序列还描述于例如Huh等， 提交（1992年9 月）给EMBL/GenBank/DDBJ 数据库；和MGC Project Team，Genome Res.14: 2121-2127(2004)。
[0006] 例如在以下正向反应中，非突变型(例如野生型）IDH2催化异柠檬酸至α-酮戊二酸 (a-KG)的氧化脱羧，从而使NAD+ (NADP+)还原成为NADH(NADPH):
[0007] 异柠檬酸+NAD+(NADP+)-a-KG+C〇2+NADH(NADPH)+H+。
[0008] 发现存在于某些癌细胞的IDH2突变导致该酶催化NAPH依赖型还原a-酮戊二酸成 为R (-) -2-羟基戊二酸（2HG)的新的能力。通过野生型IDH2不形成2HG。2HG的产生被认为促 进癌症的形成和发展(Dang，L等，Nature2009，462:739-44)。
[0009] 因此，突变型IDH2及其新生活性的抑制是癌症的有效的治疗性治疗。因此，存在对 具有α羟基新活性的ID Η 2突变体的抑制剂的持续需要。
[0010] 发明概述
[0011] 本文提供结构式I化合物或其药学上可接受的盐或水合物：
[0012]
[0013] 环Α为任选取代的5-6元单环芳基或单环杂芳基;和
[0014] 环B为任选取代的5-6元单环芳基或单环杂芳基;其中：
[0015] a.环A和环B不同时是任选取代的6元单环芳基；
[0016] b.当环A为未取代的吡啶基时，则环B不是被1-3个独立选自以下的基团任选取代 的苯基：甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、CH(OH)CH 3、Cl、Br、S^PCF3;
[0017] c.当环A为5元杂芳基时，则环B不是被1-2个独立选自以下的基团任选取代的苯 基:？、(：1、50201 3、(：(0)0013、甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、〇-苯基、0?3、0!1和勵 2;
[0018] d.当环A为2，4-二取代的5-噻唑基时，则环B不是取代的苯基；
[0019] e.化合物不是：
[0020](丨）N2-2-吡啶基_6_ (3-吡啶基)_丨，3，5_三嗪-2，4-二胺；
[0021 ] (2)6-(6-甲氧基-3-吡啶基)-N2_(4-甲基苯基)_1，3，5-三嗪-2，4-二胺；
[0022] (3)6-(2-甲氧基-3-吡啶基)，2-(4-甲基苯基)-1，3,5-三嗪-2,4-二胺；
[0023] (4)吧-(3-氯苯基)-6-(2-氯-4-吡啶基)-1，3,5-三嗪-2,4-二胺；
[0024] (5)3-[[4-[4-氨基- 6-[(3-氯苯基)氨基]-1，3,5-三嗪-2-基]-2-吡啶基]氨基]-1 _丙醇；
[0025] (6)N-[3-[[4-氨基-6-(2-甲基-4-嘧啶基）-1，3,5_三嗪-2-基]氨基]-4-甲基苯 基]-N'_[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-脲；
[0026] (7)N4，N4'_二苯基-[2,2'_二-1,3,5-三嗪]-4,4'，6,6'_四胺；
[0027] (8)6,6'-(2,6_ 吡啶二基)双[N-苯基-1，3,5-三嗪-2,4-二胺;或
[0028] (9) 6，6 ' -(2，3-吡嗪二基)双[N-苯基-1，3，5-三嗪-2，4-二胺。
[0029] 本文任一个实施方案所述的式I或II的化合物抑制突变型IDH2,特别是具有α羟基 新活性的突变型IDH2。本文还提供包含式I化合物的药物组合物和使用所述组合物治疗特 征在于存在突变型IDH2的癌症的方法。
[0030] 发明详述
[0031] 下面的描述给出或附图中说明的成分的结构和排列的详情无意是限制性的。明确 包括实施本发明的其它实施方案和不同方式。此外，本文所用措词和术语用于说明目的，不 应视为限制性的。本文中"包括"、"包含"或"具有"、"含有"、"涉及"及其变化形式的使用意 在包括之后所列项目及其等同项目以及其它项目。
[0032] 定义:
[0033] 卤代"或"卤素"是指氟、氯、溴或碘的任一基团。
[0034] 术语"烷基"是指可为直链或支链、含有规定碳原子数的完全饱和或不饱和烃链。 例如，Ci-Cu烷基表示其中可具有1-12(包括1和12)个碳原子的基团。术语"卤代烷基"是指 其中一个或多个氢原子被卤素置换的烷基，并包括所有氢被卤素置换的烷基部分(例如全 氟烷基）。术语"芳基烷基"或"芳烷基"是指其中烷基氢原子被芳基置换的烷基部分。芳烷基 包括其中一个以上的氢原子被芳基置换的基团。"芳基烷基"或"芳烷基"的实例包括苄基、 2-苯基乙基、3-苯基丙基、9-芴基、二苯甲基和三苯甲基。术语"烷基"包括"烯基"和"炔基"。
[0035] 术语"亚烷基"是指二价烷基，例如-CH2-、-CH2CH2-、-CH 2CH2CH2-和-ch2ch(ch3) CH2-0
[0036] 术语"烯基"是指含有2-12个碳原子且具有一个或多个双键的直链或支链烃链。烯 基的实例包括但不限于烯丙基、丙烯基、2-丁烯基、3-己烯基和3-辛烯基。双键碳之一可任 选为烯基取代基的连接点。
[0037] 术语"炔基"是指含有2-12个碳原子且特征在于具有一个或多个三键的直链或支 链烃链。炔基的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基和3-己炔基。三键碳之一可任选为炔基取 代基的连接点。
[0038] 术语"烷氧基"是指-0-烷基。术语"卤代烷氧基"是指其中一个或多个氢原子被卤 素置换的烷氧基，并包括其中全部氢被卤素置换的烷氧基部分(例如全氟烷氧基）。
[0039] 除非另有说明，否则术语"芳基"是指全芳族的单环、双环或三环烃环系统。芳基部 分的实例为苯基、萘基和蒽基。除非另有说明，否则芳基中的任何环原子可被一个或多个取 代基取代。术语"单环芳基"意指被一个或多个取代基任选取代的不可形成稠合双环或三环 的单环全芳族烃环系统。
[0040] 术语"碳环基"是指非芳族的单环、双环或三环烃环系统。碳环基包括完全饱和的 环状系统(例如环烷基)和部分饱和的环状系统。
[0041 ]本文所用术语"环烷基"包括具有3-12个碳的饱和的环状、双环、三环或多环烃基。 任何环原子可以是取代的(例如被一个或多个取代基取代）。环烷基部分的实例包括但不限 于环丙基、环己基、甲基环己基、金刚烷基和降冰片烷基。
[0042]除非另有说明，否则术语"杂芳基"是指如果为单环则具有1-3个杂原子、如果为双 环则具有1-6个杂原子或如果为三环则具有1-9个杂原子的全芳族的5-8元单环、8-12元双 环或11-14元三环环状系统，所述杂原子选自0、N或S(或氧化形式例如N +-0'S(0)和S(0)2)。 术语"单环杂芳基"意指具有1-3个杂原子、任选被一个或多个取代基取代的不可形成稠合 双环或三环的单环全芳族环状系统。
[0043]术语"杂环基"是指如果为单环则具有1-3个杂原子、如果为双环则具有1-6个杂原 子或如果为三环则具有1-9个杂原子的非芳族的3-10元单环、8-12元双环或11-14元三环环 状系统，所述杂原子选自〇、N或S(或氧化形式例如N +-0'S(0)和S(0)2)。杂原子可任选为杂 环基取代基的连接点。杂环基的实例包括但不限于四氢呋喃基、四氢吡喃基、哌啶基、吗啉 代、吡咯啉基、嘧啶基和吡咯烷基。杂环基包括完全饱和的环状系统和部分饱和的环状系 统。
[0044] 含有一个或多个杂原子和芳环和非芳环两者的双环和三环环状系统被视为杂环 基或杂芳基。其中芳基或杂芳基与碳环基或杂环基稠合且环状系统与分子的其余部分连接 的点是通过芳环的双环或三环环状系统分别被视为芳基或杂芳基。其中芳基或杂芳基与碳 环基或杂环基稠合且环状系统与分子的其余部分连接的点是通过非芳环的双环或三环环 状系统分别被视为碳环基(例如环烷基)或杂环基。
[0045] 除非另有说明，否则单独或作为基团的一部分(例如芳烷基的芳基部分）的芳基、 杂芳基、碳环基(包括环烷基)和杂环基在一个或多个可取代的原子上被独立选自以下的取 代基任选取代：卤素、-C三N、Ci-C4烷基、=0、_0R b、_0Rb'、_SRb、-SRb'、-(Ci-C4烷基）_N(R b) (Rb)烷基）_N(Rb) (Rb'）、-N(Rb) (Rb)、-N(Rb) (Rb'）、-〇-(&-〇4烷基）_N(Rb) (Rb)、-0-(Ci-C4^S)_N(Rb)(R b)、-(Ci-C4^S)_0_(Ci -C4^S)_N(Rb)(Rb)、-(Ci -C4^S)_0_(Ci-C4 烷基)_N(Rb) (Rb'）、-C(0)-N(Rb) (Rb)'-(&-C4烷基)-C(0)-N(Rb) (Rb)'-(&-C4烷基)-C(0)-N (Rb) (Rb'）、-0Rb'、Rb'、-C(0) (C1-C4烷基）、_C(0)Rb'、-C(0)N(Rb'）（Rb)、-N(R b)C(0) (Rb)、-N(Rb) C(0) (Rb'）、-N(Rb)S02(Rb)、-S0 2N(Rb) (Rb)、-N(Rb)S02(Rb'）和-S0 2N(Rb) (Rb'），其中任何烷基 取代基任选被以下的一个或多个进一步取代:-OH、-0-(&-C4烷基）、卤素、-NH 2、-NH(&-C4烷 基)或-Ν(&-〇4烷基)2;
[0046] 各妒独立选自氢和-CrC4烷基;或
[0047] 2个妒与它们所结合的氮原子一起形成任选包含选自N、S和0的另一个杂原子的4-8元杂环基;和
[0048] 各Rb'独立选自C3-C7碳环基、苯基、杂芳基和杂环基，其中所述苯基、环烷基、杂芳 基或杂环取代基的一个或多个可取代的位置任选被以下的一个或多个进一步取代 烷基）、_(Ci-C4氣烷基）、_0H、-0 -(Ci-C4烷基）、_0_(Ci-C4氣烷基）、卤素、 -NH2、_NH(Ci-C4烧 基)或-Ν(&-〇4烷基)2。
[0049] 单独或作为基团的一部分的杂环基在任一个或多个可取代的氮原子上被氧代、- &-C4烷基或氟取代的&-〇4烷基任选取代。
[0050] 术语"取代的"是指氢原子被另一个基团置换。
[0051] 本文所用术语"高水平的2HG"意指与不携带突变型IDH2等位基因的对象中存在的 相比，10%、20%、30%、50%、75%、100%、200%、500%或更高的2邢。术语"高水平的2邪" 可指细胞内、肿瘤内、包含肿瘤的器官内或体液内的2HG的量。
[0052] 术语"体液"包括以下一种或多种:胎儿四周的羊水、房水、血液(例如血浆）、血清、 脑脊液、訂聍、食糜、尿道球腺液、女性排出液、间质液、淋巴液、母乳、粘液(例如鼻引流液或 氮）、胸膜液、脓、唾液、皮脂、精液、血清、汗液、泪液、尿液、阴道分泌物或呕吐物。
[0053] 本文所用术语"抑制"或"防止"包括完全和部分抑制和防止两种。抑制剂可完全或 部分抑制既定靶标。
[0054] 术语"治疗"意指降低、阻止、减轻、减小、制止或稳定疾病/病症(例如癌症）的发生 或发展、减轻疾病/病症（例如癌症）的严重程度或改善与疾病/病症（例如癌症)有关的症 状。
[0055] 如本文所用，有效治疗病症的化合物的量或"治疗有效量"是指在单剂量或多剂 量 给予对象时，在处理细胞中或在医治、减轻、缓解或改善患有病症的对象中是有效的化合物 的量，超出不存在所述治疗所预期的情况。
[0056] 本文所用术语"对象"欲包括人和非人动物。示例性的人类对象包括患有病症例如 本文所述病症的人类患者(称为患者)或正常对象。本发明一个方面的术语"非人动物"包括 所有脊椎动物，例如非哺乳动物(例如鸡、两栖动物、爬行动物)和哺乳动物，例如非人灵长 类动物，驯养动物和/或农业上有用的动物，例如绵羊、狗、猫、牛、猪等。
[0057] 化合物
[0058] 提供结构式I的化合物或其药学上可接受的盐或水合物:
[0059]
[0060] 环Α为任选取代的5-6元单环芳基或单环杂芳基;和
[0061] 环B为任选取代的5-6元单环芳基或单环杂芳基;其中：
[0062] a.环A和环B不同时是任选取代的6元单环芳基；
[0063] b.当环A为未取代的吡啶基时，则环B不是被1-3个独立选自以下的基团任选取代 的苯基：甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、CH(OH)CH 3、Cl、Br、S^PCF3;
[0064] c.当环A为5元杂芳基时，则环B不是被1-2个独立选自以下的基团任选取代的苯 基:？、(：1、50201 3、(：(0)0013、甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、〇-苯基、0?3、0!1和勵 2;
[0065] d.当环A为2，4-二取代的5-噻唑基时，则环B不是取代的苯基；
[0066] e.化合物不是：
[0067] (DN2-2-吡啶基 _6_(3-吡啶基)-13,5-三嗪-2,4-二胺；
[0068] (2)6-(6-甲氧基-3-吡啶基)-N2_(4-甲基苯基)_1，3，5-三嗪-2，4-二胺；
[0069] (3)6-(2-甲氧基-3-吡啶基)-N2_(4-甲基苯基)_1，3，5-三嗪-2，4-二胺；
[0070] (4)N2-(3-氯苯基)-6-(2-氯-4-吡啶基)_1，3，5-三嗪-2，4-二胺；
[0071] (5)3-[[4-[4_氨基-6-[(3_氯苯基)氨基]-1，3,5-三嗪-2-基]-2-吡啶基]氨基]-1 _丙醇；
[0072] (6)N-[3-[[4-氨基-6-(2-甲基-4-嘧啶基）-1，3,5_三嗪-2-基]氨基]-4-甲基苯 基]-N'_[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-脲；
[0073] (7)N4，N4'_二苯基-[2,2'_二-1，3,5-三嗪]_4,4'，6,6'_四胺；
[0074] (8)6,6'-(2,6_ 吡啶二基)双[N-苯基-1，3,5-三嗪-2,4-二胺;或
[0075] (9)6，6 ' -(2，3-吡嗪二基)双[N-苯基-1，3，5-三嗪-2，4-二胺。
[0076] 在一些实施方案中，环A为任选取代的6元单环芳基。在一些实施方案中，环A为任 选取代的5-6元杂芳基。在一些实施方案中，环A为任选取代的6元杂芳基。
[0077] 在一些实施方案中，环A选自苯基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基、嘧啶基、P比 嗪基和噻唑基，其中环A被至多2个独立选自以下的取代基任选取代：卤素、-&-C4烷基、 C4[iM^^S、_Ci-C45S^^S、_NH-S(0)2 _(Ci-C4^S)、_S(0)2NH(Ci-C4^S)、 _CN、-S(0)2_ (&-C4烷基）、&-C4烷氧基、-NH(CrC4烷基）、-OH、-0CF3、-CN、-NH 2、-c (0)NH2、-c (0) NH(CrC4 烷基）、-(Χ0)-Ν(&-04烷基)2和被OH任选取代的环丙基。
[0078] 在一些实施方案中，环A选自苯基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基、啼啶基、吡 嗪基和噻唑基，其中环A被至多2个独立选自以下的取代基任选取代：卤素、-&-C4烷基、 C4[iM^^S、_Ci-C45S^^S、_NH-S(0)2 _(Ci-C4^S)、_S(0)2NH(Ci-C4^S)、 _CN、-S(0)2_ (Ci-C4烷基）、Ci-C4烷氧基、-NH( Ci-C4烷基）、_0H、-CN和-順2 0
[0079] 在一些实施方案中，环B选自苯基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、吡啶基、嘧 啶基、啦嗪基和吡嗪基，其中环B被至多2个独立选自以下的取代基任选取代:卤素、?4烷 基、 -C2_C4炔基、_Cl-C4[ii代烷基、-Cl -C4羟基烷基、C3_C6环烷基、_ ( C0-C2亚烷基)_0_Cl-C4烧 基、 _0_(Cl-C4亚烷基)_C3_C6环烷基、 -NH-S(0)2_(Cl-C4烷基）、_S(0)2NH(Cl -C4烷基）、_S(0)2_ NH-(C3-C6环烷基）、-S(0)2-(饱和杂环基）烷基）^NiKCi-Ca烷基）、_N (&-C4 烷基)2、-OH、C (0) -ο- (&-C4 烷基）、饱和杂环基和-NH2。
[0080] 在另一个实施方案中，化合物是具有以下结构式II的化合物：
[0081]
[)或其药学上可接受的盐，其中：
[0082] 环a '选自苯基、嘧啶-2-基、嘧啶-4-基、嘧啶-5-基、噁唑-4-基、异噁唑-3-基、噻 唑-2-基、吡啶-3-基和吡啶-2-基，其中环A'被一个或两个独立选自以下的取代基任选取 代：1 -丙烯基、-环丙基-OH、氯、氟、-CF3、-CHF2、-CH3、-CH 2CH3、-CF2CH3、-S (0) CH3、-S (0) 2CH3、-CH2OH、-CH (OH) CH3、_CH (OH) CF3、-OH、-〇CH3、-〇CF3、-OCH2CH3、_C (0) -NH2、-CH2NH2、-NH2、-NH (CH3)、-CN 和-N (CH3) 2;和
[0083] 环B '选自苯基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、哒嗪-4-基、异噁唑-4-基、异噁唑-3-基、噻 唑-5-基、嘧啶-5-基和吡唑-4-基，其中环B'被1-2个独立选自以下的取代基任选取代：卤 素; -CN; -OH;被卤素、CN或-OH任选取代的C1-C4烷基;-S(0)2-Ci_C4烷基;-S(0)_Ci_C4烷基;-S (0) rNH-Ci-C* 烷基；-S (0) 2-NH-CH2-CF3; -S (0) 2-N (Ci-C4 烷基）2; -S (0) 2-氮杂环丁烷-1 -基;-〇_Ci-C4烷基;_CH2_0_CH3、吗琳 _4-基、环丙基、环丙基-Ci-C4烷基、环丙基 -Ci-C4烷氧基、 环丙基_01'1、-3(0)2 _順-环丙基;-3(0)2_順-〇12 _环丙基;_〇(0)-〇1-〇4烷基，_〇(0)?!13;其 中：
[0084] a.环A'和环B'不同时为任选取代的6元单环芳基；
[0085] b.如果环A'是未取代的吡啶基，则环B'不是被1-3个独立选自以下的基团任选取 代的苯基：甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、CH(OH)CH 3、Cl、Br、S!^PCF3;
[0086] c.如果环A'是5元杂芳基，则环B'不是被1-2个独立选自以下的基团任选取代的苯 基:？、(：1、50201 3、(：(0)0013、甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、〇-苯基、0?3、0!1和勵 2;
[0087] d.化合物不是：
[0088] (D^-2-吡啶基 _6_(3-吡啶基)-13,5-三嗪-2,4-二胺；
[0089] (2)6-(6-甲氧基-3-吡啶基)-N2_(4-甲基苯基)_1，3，5-三嗪-2，4-二胺；
[0090] (3)6-(2-甲氧基-3-吡啶基)，2-(4-甲基苯基)-1，3,5-三嗪-2,4-二胺；
[0091] (4)N2-(3-氯苯基)-6-(2-氯-4-吡啶基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺；
[0092] (5)3-[[4-[4-氨基-6-[(3-氯苯基)氨基]-1，3,5-三嗪-2-基]-2-吡啶基]氨基]_ 1_丙醇；
[0093] (6)N-[3-[[4-氨基-6-(2-甲基-4-嘧啶基）-1，3,5_三嗪-2-基]氨基]-4-甲基苯 基]-N'_[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-脲；
[0094] (7)N4，N4'_二苯基-[2,2'_二-1,3,5-三嗪]-4,4'，6,6'_四胺；
[0095] (8)6,6'-(2,6_ 吡啶二基)双[N-苯基-1，3,5-三嗪-2,4-二胺;或
[0096 ] (9)6,6'-(2,3-吡嗪二基)双[N-苯基-1，3，5-三嗪-2，4-二胺。
[0097]在式II的某些实施方案中，环A'选自2-氯苯基、2-氟苯基、2-甲氧基苯基、3-羟基 苯基、3_氛基苯基、3_甲基亚横醜基苯基、3_甲基横醜基苯基、3_(1_甲醇）苯基、3_甲胺苯 基、3_甲氧基_2_氣苯基、5_甲氧基_2_氣苯基、3_羟基_2_氣苯基、5_羟基_2_氣苯基、5_轻 基 _3_氣苯基、3_甲醇苯基、3，5_二羟基苯基、3_二氣甲基_5_氣苯基、3_(1_羟基_2，2，2_二 氣乙基)苯基、3_( 1-羟基乙基)苯基、3_( 1-羟基环丙基)苯基、3_羟基甲基_5_苯酸、吡啶_2_ 基、3_氣啦啶_2_基、3_氛基啦啶_2_基、3，6_二氣啦啶_2_基、3_氣_6_甲氧基啦啶_2_基、3_ 氟-6-羟基吡啶-2-基、3-氟-6-氨基吡啶-2-基、4-氟-6-氨基吡啶-2-基、6-丙烯-1-基吡啶-2-基、6-丙-1-基吡啶-2-基、6-甲基氨基吡啶-2-基、3-氟-6-三氟甲基吡啶-2-基、4-氯-6-氨基吡啶-2-基、4-氟-6-氨基吡啶-2-基、4-氯-6-甲氧基吡啶-2-基、6-氨基吡啶-3-基、2-甲氧基吡啶-3-基、6-氨基吡啶-2-基、6-氯吡啶-2-基、6-三氟甲基吡啶-2-基、6-二氟甲基 吡啶-2-基、4-(CH 20H)-6-三氟甲基-吡啶-2-基、4-(CH20H)-6-氯-吡啶-2-基、6-(1,1-二氟 乙基）-4_氟吡啶-2-基、4-三氟甲基嘧啶-2-基、4-氨基嘧啶-2-基、6-三氟甲基-4-氨基嘧 啶-2-基、4-三氟甲基-6-氨基嘧啶-2-基、4-氨基嘧啶-2-基、2-氨基嘧啶-4-基、2-氨基嘧 啶 _5_基、4，6_二氣P比啶_2_基、3，5_二氣苯基、2，6_二氣苯基、2_甲基惡唑_4_基、3_甲基异 噁唑-5-基、4-三氟甲基-噻唑-2-基、4-甲基噻唑-2-基和苯基。
[0098] 在式II的某些实施方案中，环B'选自2_(吗啉-4-基）吡啶-4-基、2-二甲基氨基吡 啶 _4_基、3_ (2_甲氧基乙基)苯基、3，5_二氣苯基、3_氣苯基、3_氛基甲基苯基、3_氛基苯基、 3_(环丙基甲基)苯基、3-环丙基氨基磺酰基苯基、3-二甲基氨基磺酰基苯基、3-乙基磺酰基 苯基、3_氣苯基、3_甲基横醜基苯基、4_氣苯基、3_ (1_羟基异丙基)苯基、3_甲基横醜基_5_ 氯苯基、3-甲基横酰基_5_氣苯基、3-(N-2，2，2，-二氣乙基氨基横酰基)苯基、3-(N-环丙基） 苯甲酰胺、5-氯吡啶-3-基、5-氰基吡啶-3-基、5-氰基吡啶-3-基、5-氰基吡啶-4-基、5-氟吡 啶-3-基、2-(1-羟基异丙基)吡啶-4-基、5-三氟甲基吡啶-3-基、2-三氟甲基吡啶-4-基、2-二氟甲基吡啶-4-基、2-氯吡啶-4-基、6-氯吡啶-4-基、6-氰基吡啶-4-基、2-氰基吡啶-4-基、6-环丙基吡啶-4-基、6-乙氧基吡啶-4-基、6-氟吡啶-3-基、2-氟吡啶-4-基、5，6-二氟吡 啶-3-基、6-氟吡啶-4-基、6-甲基吡啶-4-基、2-二氟甲基吡啶-4-基、6-三氟甲基吡啶-4-基、2-(1-甲氧基环丙基)吡啶-4-基、2-环丙基吡啶-4-基、2-(丙-1-酮)吡啶-4-基、2-(1-甲 基环丙基）吡啶-4-基、2-(1-氰基环丙基）吡啶-4-基、2-(1-氰基异丙基）吡啶-4-基、异噁 唑-4-基、苯基、吡啶-4-基、吡啶羧酸-2-基(picolinat-2-y 1)、嘧啶-5-基、1-丙基吡唑-4-基、6-甲基-哒嗪-4-基和噻唑-5-基。
[0099] 本文提供的其它实施方案包括上文给出的具体实施方案的一个或多个的组合。
[0100] 在另一个实施方案中，化合物选自下表1给出的任一化合物 [0101] 表1.代表性化合物
[0102]
[0103]
[0104]
[01
[OlUDJ
[01u/j
[01
[(
[0110]
[0111]
[0112]
[0113]
[0114]
[0115]
[On /J
[0118]
[01
[ο
[0121] ___ Η
_：_
[0122] 包括了用于制备式I化合物或本文所述实施方案任一个的化合 物的方法，所述方 法包括使
5NH3反应。在一些实施方案中，前述方法包括步骤（1)使 t NH3反应。
[0123] 本发明一个方面的化合物可含有一个或多个不对称中心，因此作为外消旋体、外 消旋混合物、成比例（s ca 1 emi c)混合物和非对映体混合物以及基本不含另一种可能的对映 异构体或立体异构体的单一对映异构体或各个立体异构体存在。本文所用术语"基本不含 其它立体异构体"意指富集在一个或多个选择的立构中心上具有所选的立体化学结构的化 合物达至少约 60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98% 或 99% 的制 备物。术语"富集的"意指至少指定百分比的在一个或多个选择的立构中心上具有所选的立 体化学结构的化合物的制备物。获得或合成指定化合物的各个对映异构体或立体异构体的 方法是本领域已知的，并且可适用于最终的化合物或起始原料或中间体。
[0124] 在某些实施方案中，针对在一个或多个碳原子上具有选择的立体化学结构的一种 或多种结构富集式I或II的化合物。例如，富集呈特殊立体异构体的化合物达至少约60%、 65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98% 或 99%。
[0125] 式I或II化合物还可包含一个或多个同位素取代。例如，Η可为任何同位素形式，包 括1H、2H(D或氘)和 3Η(Τ或氚）；C可为任何同位素形式，包括nC、12C、13C和 14C;N可为任何同位 素形式，包括13n、14n和15N;0可为任何同位素形式，包括 150、160和180;F可为任何同位素形式， 包括18F等。例如，富集特殊同位素形式的H、C、N、0和/或F达至少约60%、65%、70%、75%、 80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99% 的化合物。
[0126] 除非另有说明，否则要了解，当所公开的化合物通过未指定立体化学结构并具有 一个或多个手性中心的结构命名或描述时，表示化合物的所有可能的立体异构体。
[0127] 本发明一个方面的化合物还可以多种互变异构形式表示，在这种情况下，本发明 的一个方面明确包括本文所述化合物的所有互变异构形式，即使可只提供单一的互变异构 形式(例如环状系统的烷基化可导致多个位置的烷基化，本发明的一个方面明确包括全部 这类反应产物和酮-烯醇互变异构体）。所述化合物的所有这类异构形式明确包括在本文 中。
[0128] 制备、纯化和/或处理活性化合物的相应盐（例如药学上可接受的盐)可能是适宜 或需要的。药学上可接受的盐的实例描述于Berge等，1977, "Pharmaceutically Acceptable Salts · ''J.Pharm. Sci ·第66卷，第1-19页。
[0129] 例如，如果化合物是阴离子的或具有可以是阴离子的官能团（例如-(：00!1可为-C0(T)，则可用合适的阳离子形成盐。合适的无机阳离子的实例包括但不限于碱金属离子例 如Na+和K+，碱土金属阳离子例如Ca 2+和Mg2+和其它阳离子例如Al3+。合适的有机阳离子的实 例包括但不限于铵离子（即NH4+)和取代的铵离子(例如NH 3R+、NH2R2+、NHR3+、NR4+)。一些合适 的取代铵离子的实例是来源以下的取代铵离子：乙胺、二乙胺、二环己基胺、三乙胺、丁胺、 乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、苄胺、苯基苄胺、胆碱、葡甲胺和氨丁三醇，以及氨基酸，例 如赖氨酸和精氨酸。常见的季铵离子的实例为N(CH 3)4+。
[0130 ]如果化合物是阳离子的或具有可以是阳离子的官能团（例如-NH2可为-NH3+ )，则可 用合适的阴离子形成盐。合适的无机阴离子的实例包括但不限于来源于下列无机酸的无机 阴离子:盐酸、氢溴酸、硫酸、硫磺酸、柠檬酸、亚硝酸、磷酸和亚磷酸。
[0131]合适的有机阴离子的实例包括但不限于来源于下列有机酸的有机阴离子:2_乙氧 基苯甲酸、乙酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯甲酸、樟脑磺酸、肉桂酸、柠檬酸、依地酸、乙二磺 酸、乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡萄糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羟基马来酸、羟基萘甲酸、羟乙磺 酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、粘酸、油酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、泛 酸、苯乙酸、苯磺酸、丙酸、丙酮酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、酒石酸、甲苯磺酸和戊 酸。本文明确包括表1中各化合物的甲磺酸盐。合适的聚合有机阴离子的实例包括但不限于 来源于下列聚合酸(polymeric acid)的聚合有机阴离子:单宁酸、羧甲基纤维素。
[0132] 本文提供的化合物因此包括化合物本身及其盐、水合物及其前药，若适用的话。可 通过附加合适的官能团将本文提供的化合物修饰并转化成前药以提高所选的生物学性质， 例如靶向特定组织。所述修饰（即前药)是本领域已知的，包括提高生物渗透入指定生物区 室（例如血液、淋巴系统、中枢神经系统）、提高口服可利用性、提高溶解度以允许通过注射 给药、改变代谢和改变排泄率的修饰。前药的实例包括在给予对象时能够提供活性化合物 的酯(例如磷酸酯、氨基酸(例如缬氨酸)酯）、氨基甲酸酯和其它药学上可接受的衍生物。若 适用的话，本文明确包括表1中各化合物的磷酸钙和磷酸钠。若适用的话，本文明确包括表1 中各化合物的氨基酸(例如缬氨酸)酯。
[0133] 组合物和给药途径
[0134] 用于本文所述方法的化合物可在给予对象前与药学上可接受的载体或辅助剂一 起配制成药学上可接受的组合物。在另一个实施方案中，所述药学上可接受的组合物还包 含有效实现调节疾病或疾病症状(包括本文所述疾病或疾病症状)的量的其它治疗剂。
[0135] 术语"药学上可接受的载体或辅助剂"是指与本发明一个方面的化合物一起给予 对象、不破坏其药理活性且当以足以递送治疗量的化合物的剂量给予时是无毒的载体或辅 助剂。
[0136] 可用于本发明一个方面的药物组合物的药学上可接受的载体、辅助剂和溶媒包括 但不限于离子交换剂、氧化铝、硬硼酸铝、卵磷脂、自乳化递药系统(SEDDS)例如d-α-生育酚 聚乙二醇1000琥珀酸酯、用于药物剂型中的表面活性剂例如Tween或其它类似的聚合物递 送基质、血清蛋白质例如人血清白蛋白、缓冲物质例如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、 饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸 氢钾、氯化钠、锌盐、胶态硅石、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、 羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸脂、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段共聚物、聚乙二醇和羊毛脂。环糊 精例如α-、β_和γ -环糊精或化学修饰的衍生物例如羟基烷基环糊精，包括2-和3-羟基丙 基-β-环糊精或其它增溶衍生物也可有利地用于提高本文所述式的化合物的递送。
[0137] 本发明一个方面的药物组合物可口服、胃肠外、通过吸入喷雾、局部、直肠、经鼻、 含服、阴道或通过植入药库给予，优选通过口服给药或经注射给药。本发明一个方面的药物 组合物可含有任何常规无毒的药学上可接受的载体、辅助剂或溶媒。在某些情况下，制剂的 pH可用药学上可接受的酸、碱或缓冲剂调节以提高配制的化合物或其递送形式的稳定性。 本文所用术语胃肠外包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、 损害内和颅内注射或输注技术。
[0138] 药物组合物可呈无菌注射制剂的形式，例如作为无菌注射用水性或油性混悬剂。 这种混悬剂可使用合适的分散剂或润湿剂（例如Tween 80)和助悬剂按照本领域已知技术 制备。无菌注射制剂也可为无毒胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射用溶液剂或混 悬剂，例如作为1，3-丁二醇中的溶液剂。可使用的可接受的溶媒和溶剂为甘露糖醇、水、林 格氏液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌固定油按惯例用作溶剂或悬浮介质。为此，可使用任 何平和的固定油，包括合成甘油单酯或甘油二酯。脂肪酸，例如油酸及其甘油酯衍生物可用 于制备注射剂，天然药学上可接受的油，例如橄榄油或蓖麻油，尤其呈其聚氧乙烯化形式也 如此。这些油溶液剂或混悬剂还可含有长链醇稀释剂或分散剂或羧甲基纤维素或通常用于 药学上可接受的剂型的制剂(例如乳剂和/或混悬剂）中的类似分散剂。其它常用的表面活 性剂例如Tween或Span和/或常用于制备药学上可接受的固体、液体或其它剂型的其它类似 乳化剂或生物利用度增强剂也可用于制剂的目的。
[0139] 本发明一个方面的药物组合物可以任何口服可接受的剂型口服给予，包括但不限 于胶囊剂、片剂、乳剂和水性混悬剂、分散剂和溶液剂。在口服使用的片剂的情况下，常用的 载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还加入润滑剂，例如硬脂酸镁。对于胶囊剂形式的口服给 药，有用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。在口服给予水性混悬剂和/或乳剂时，可将 活性成分悬浮或溶于与乳化剂和/或助悬剂混合的油相中。如有需要，可加入某些甜味剂 和/或矫味剂和/或着色剂。
[0140] 本发明一个方面的药物组合物还可以栓剂的形式给予用于直肠给药。这些组合物 可通过将本发明一个方面的化合物与合适的无刺激性的赋形剂混合来制备，所述赋形剂在 室温下为固体但在直肠温度下为液体因此在直肠中融化以释放活性组分。所述材料包括但 不限于可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
[0141] 本发明一个方面的药物组合物的局部给药当所需治疗涉及通过局部施用容易达 到的部位或器官时是有用的。对于局部施用于皮肤，药物组合物可用含有悬浮或溶于载体 中的活性组分的合适软膏配制。用于本发明一个方面的化合物的局部给药的载体包括但不 限于矿物油、液体石油、白石油(white petroleum)、丙二醇、聚氧乙稀聚氧丙稀化合物、乳 化蜡和水。或者，药物组合物可用含有悬浮或溶于载体中的活性化合物的合适的洗剂或乳 膏与合适的乳化剂一起配制。合适的载体包括但不限于矿物油、山梨醇酐单硬脂酸酯、聚山 梨醇酯60、十六烷基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。本发明一个方面的药 物组合物还可通过直肠栓剂或以合适的灌肠剂局部施用于下肠道。局部经皮贴剂也包括在 本发明的一个方面中。
[0142] 本发明一个方面的药物组合物可通过经鼻气雾剂或吸入剂给予。这类组合物按照 药物制剂领域众所周知的技术制备，并且可使用苯甲醇或其它合适的防腐剂、提高生物可 利用度的吸收促进剂、碳氟化合物和/或本领域已知的其它增溶剂或分散剂，在盐水中制备 成溶液剂。
[0143] 当本发明一个方面的组合物包含本文所述式的化合物和一种或多种其它治疗剂 或预防剂的组合时，所述化合物和其它作用剂应以在单一疗法方案中通常给予的剂量的约 1 %与100 %之间、更优选约5 %与95 %之间的剂量水平存在。其它作用剂可有别于本发明一 个方面的化合物单独、作为多剂量方案的一部分给予。或者，这些作用剂可为单一剂型的一 部分，与本发明一个方面的化合物一起在单一组合物中混合。
[0144] 本文所述化合物可通过例如注射、静脉内、动脉内、皮下、腹膜内、肌内或皮下；或 口服、含服、经鼻、跨粘膜、局部、以眼用制剂或通过吸入剂每4-120小时，以约0.5-约100mg/ kg体重的剂量范围，或者以1 mg和10 0 Omg/剂之间的剂量或者按照具体药物的规格给予。本 文的方法考虑给予有效量的化合物或化合物组合物以达到所需的或规定的效果。通常，本 发明一个方面的药物组合物可每天给予约1-约6次，或备选，作为连续输注给予。这类给药 可用作慢性或急性疗法。可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量可随受治疗的 宿主和具体的给药方式而变化。典型的制剂可含有约5%-约95%活性化合物(w/w)。或者， 所述制剂含有约20 % -约80 %活性化合物。
[0145] 可能需要比上述剂量低或高的剂量。任何特定对象的具体剂量和治疗方案将取决 于各种因素，包括所使用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药 时间、排泄率、药物组合、疾病的严重程度和进程、病况或症状、对象对疾病、病况或症状的 易感性和治疗医生的判断。
[0146] 在对象状况改善时，如有需要，可给予本发明一个方面的维持剂量的化合物、组合 物或组合。随后，可随症状而变，降低给药的剂量或频率或两者到当症状减轻到所需水平时 所保持的改善状况的水平。然而，在长期基础上在任何疾病症状复发时，对象可能需要间歇 治疗。
[0147] 包含结构式I或II的化合物或本文实施方案的任一个中描述的化合物的上述药物 组合物还可包含可用于治疗癌症的另一种治疗剂。
[0148] 使用方法
[0149] 可通过实施例A所述方法或类似方法测试本文提供的化合物针对IDH2突变体(例 如IDH2R140Q和IDH2R172K)的抑制活性。
[0150]提供用于抑制突变型IDH2活性的方法，所述方法包括使有需要的对象与结构式I 或II的化合物、本文实施方案的任一个描述的化合物或其药学上可接受的盐接触。在一个 实施方案中，待治疗的癌症的特征在于IDH2的突变型等位基因，其中IDH2突变导致对象中 酶催化α-酮戊二酸NAPH依赖型地还原成R(-)_2-羟基戊二酸的新的能力。在该实施方案的 一个方面，突变型I DH2具有R140X突变。在该实施方案的另一个方面，R140X突变是R140Q突 变。在该实施方案的另一个方面，R140X突变是R140W突变。在该实施方案的另一个方面， R140X突变是R140L突变。在该实施方案的另一个方面，突变型IDH2具有R172X突变。在该实 施方案的另一个方面，R172X突变是R172K突变。在该实施方案的另一个方面，R172X突变是 R172G突变。
[0151]还提供治疗特征在于存在IDH2的突变型等位基因的癌症的方法，所述方法包括将 (a)结构式I或II的化合物、本文实施方案的任一个中描述的化合物或其药学上可接受的盐 或(b)包含(a)和药学上可接受的载体的药物组合物给予有需要的对象的步骤。
[0152] 在一个实施方案中，待治疗的癌症的特征在于IDH2的突变型等位基因，其中IDH2 突变导致患者中酶催化α-酮戊二酸NAPH依赖型地还原成R(-)_2-羟基戊二酸的新的能力。 在该实施方案的一个方面，突变型IDH2具有R140X突变。在该实施方案的另一个方面，R140X 突变是R140Q突变。在该实施方案的另一个方面，R140X突变是R140W突变。在该实施方案的 另一个方面，R140X突变是R140L突变。在该实施方案的另一个方面，突变型IDH2具有R172X 突变。在该实施方案的另一个方面，R172X突变是R172K突变。在该实施方案的另一个方面， R172X突变是R172G突变。可通过对细胞样品进行测序以确定IDH2的氨基酸140和/或172处 突变的存在和特殊性质(例如存在的带电荷的氨基酸），来分析癌症。
[0153] 虽不受理论的束缚，但是申请人认为，其中不考虑癌细胞的性质或身体的部位， IDH2突变导致酶催化α-酮戊二酸NAPH依赖型地还原成R(-)-2-羟基戊二酸的新的能力的 IDH2的突变型等位基因（具体地说IDH2的R140Q和/或R172K突变），其特征在于所有癌症类 型的亚型。因此，本发明一个方面的化合物和方法可用于治疗特征在于赋予所述活性的 IDH2的突变型等位基因、具体地说IDH2R140Q和/或R172K突变的存在的任何类型的癌症。
[0154] 在该实施方案的一个方面，通过测量对象的2HG的水平，来监测癌症治疗的功效。 通常在治疗前测量2HG的水平，其中水平升高表明使用式I或II的化合物或本文所述实施方 案的任一个描述的化合物以治疗癌症。一旦确定水平升高，在治疗进程中和/或在终止治疗 后测定2HG的水平以证实功效。在某些实施方案中，只在治疗进程中和/或在终止治疗后测 定2HG的水平。在治疗进程中和在治疗后2HG水平降低表明有功效。同样，在治疗进程中和在 治疗后测定2HG水平不升高也表明有功效。通常，可连同癌症治疗功效的其它众所周知的测 定(例如肿瘤和/或其它癌症相关病变的数目和大小降低、对象一般健康状况改善和与癌症 治疗功效有效的其它生物标记的改变)一起，利用这些2HG测量。
[0155] 可通过LC/MS检测样品中的2HG。将样品80 : 20与甲醇混合，在4摄氏度下以3， OOOrpm离心20分钟。可收集所得上清液，在进行LC-MS/MS以评价2-羟基戊二酸水平之前保 存在-80摄氏度下。可采用各种不同的液相色谱法(LC)分离方法。每种方法可通过负电喷雾 电离(ESI，-3.0kV)与以多重反应监测(MRM)模式操作的三重四极质谱仪偶联，其MS参数在 注入代谢物标准溶液中优化。可根据之前报告的方法的变化形式，使用10mM三丁胺作为流 动相中的离子配对剂，通过反相色谱法分离代谢物(Luo等，J Chromatogr A 1147,153-64， 2007)。一种方法允许解析 TCA 代谢物:t = 0,50%B;t = 5,95%B;t = 7,95%B;t = 8,0%B，其 中B是指100%甲醇的有机流动相。另一种方法是对2-羟基戊二酸有特异性的，在5分钟内从 50%到95%13(上述定义的缓冲剂)运行快速线性梯度。如上所述，可使用37116作;[取(11'0-RP，100mm X 2mm，2 · Ιμπι粒径(Phenomonex)作为柱。可将峰面积与已知浓度的纯代谢物标准 进行比较，来量化代谢物。可按例如Munger等，Nat Biotechnol 26，1179-86,2008中所述， 自13C_谷氨酰胺进行代谢物流量研究。
[0156] 在一个实施方案中，直接评价2HG。
[0157] 在另一个实施方案中，评价了在进行分析方法的过程中形成的2HG的衍生物。举例 来说，这类衍生物可以是MS分析中形成的衍生物。衍生物可包括盐加合物，例如Na加合物、 水合物变体或同样是盐加合物的水合物变体，例如MS分析中形成的例如Na加合物。
[0158] 在另一个实施方案中，评价了2HG的代谢衍生物。实例包括由于2HG的存在积累或 升高或降低的物类，例如将与2HG(例如R-2HG)有关的戊二酸或谷氨酸盐。
[0159] 示例性2HG衍生物包括脱水衍生物，例如下面提供的化合物或其盐加合物：
[0160]
[0161] 在一个实施方案中，癌症是其中在诊断或治疗时至少30、40、50、60、70、80或90% 的肿瘤细胞携带IDH2突变，具体讲为IDH2R140Q、R140W或R140L和/或R172K或R172G突变的 肿瘤。
[0162] 在另一个实施方案中，本发明的一个方面提供通过以有效治疗癌症的量将式I或 式II化合物给予患者来治疗患者的选自以下癌症的方法:成胶质细胞瘤(神经胶质瘤）、骨 髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增殖性瘤(MPN)、急性髓细胞白血病(AML)、肉瘤、黑素瘤、非 小细胞肺癌、软骨肉瘤、胆管癌或血管免疫母细胞性淋巴瘤。在一个更具体的实施方案中， 待治疗的癌症是神经胶质瘤、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增殖性瘤(MPN)、急性髓细胞 白血病(AML)、黑素瘤、软骨肉瘤或血管免疫母细胞性非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
[0163] 在另一个实施方案中，本文所述方法用于治疗患者的神经胶质瘤（成胶质细胞 瘤）、急性髓细胞白血病、肉瘤、黑素瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、胆管癌（例如肝内胆管癌 (IHCC))、软骨肉瘤、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增殖性瘤(MPN)、前列腺癌、慢性粒-单 核细胞白血病（CMML)、B-急性成淋巴细胞白血病（B-ALL)、B-急性成淋巴细胞白血病（B-ALL)、骨髓样肉瘤、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、直肠癌或血管免疫母细胞性非霍奇金淋巴瘤 (NHL)〇
[0164] 在另一个实施方案中，待治疗的癌症是选自以下的晚期血液系统恶性肿瘤:淋巴 瘤（例如非霍奇金淋巴瘤(NHL)例如B-细胞淋巴瘤（例如伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血 病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B-细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞性大 细胞淋巴瘤、前体B-成淋巴细胞淋巴瘤和套细胞淋巴瘤)和T-细胞淋巴瘤(例如蕈样肉芽肿 病、间变性大细胞淋巴瘤和前体T-成淋巴细胞淋巴瘤）。
[0165] 已知2HG在遗传性代谢病症2-羟基戊二酸酸尿症中蓄积。该疾病因缺乏将2HG转化 为 α-KG 的酶 2-羟基戊二酸脱氢酶引起（Struys，E.A.等，Am J Hum Genet 76,358-60 (2005))。如通过MRI和CSF分析评价的一样，患有2-羟基戊二酸脱氢酶缺乏症的患者在脑中 蓄积2HG，发生脑白质病，并有发生脑肿瘤的风险（Aghili，M.，Zahedi，F.和Rafiee，J Neurooncol 91,233-6(2009);Kolker，S.，Mayatepek，E.和Hoffmann, G·F·Neuropediatrics 33,225-31(2002);Wajner，M.，Latini，A.，Wyse，A.T.和Dutra-Filho，C.S.J Inherit Metab Dis 27,427-48(2004))。此外，脑2HG的水平升高导致ROSA 平提高（Kolker，S.等，Eur J Neurosci 16,21-8(2002) ;Latini, Α·等，Eur J Neurosci 17,2017-22(2003))，可能引起癌症风险增加。2HG用作匪DA受体激动剂的能力可能促进这 种作用(Kolker，S.等，Eur J Neurosci 16,21-8(2002))。通过竞争性抑制利用谷氨酸盐 和/或aKG的酶，2HG还可能对细胞有毒性。这些包括允许利用谷氨酸氮用于氨基酸和核酸生 物合成的转氨酶和aKG依赖型脯氨酰羟化酶例如调节Hifl-α水平的那些酶。
[0166] 因此，按照另一个实施方案，本发明的一个方面提供通过将结构式I或II的化合物 或本文所述实施方案任一个描述的化合物给予患者来治疗患者的2-羟基戊二酸酸尿症，特 别是D-2-羟基戊二酸酸尿症的方法。
[0167] 本文所述治疗方法还可包括在用结构式I或II的化合物或本文所述实施方案任一 个描述的化合物治疗之前和/或之后的各种评价步骤。
[0168] 在一个实施方案中，在用结构式I或II的化合物或本文所述实施方案任一个描述 的化合物治疗之前和/或之后，所述方法还包括评价癌的生长、大小、重量、侵袭力、阶段和/ 或其它表型的步骤。
[0169] 在一个实施方案中，用式I或II的化合物或本文所述实施方案任一个描述的化合 物治疗之前和/或之后，所述方法还包括评价癌的IDH2基因型的步骤。这可通过本领域的普 通方法实现，例如DNA测序、免疫分析和/或评价2HG的存在、分布或水平。
[0170] 在一个实施方案中，用式I或II的化合物或本文所述实施方案任一个描述的化合 物治疗之前和/或之后，所述方法还包括测定对象的2HG水平的步骤。这可如下实现:通过分 光镜分析，例如核磁共振型分析，例如MRI和/或MRS测量，例如通过质谱法进行的体液的样 品分析例如血清、骨髓、血液、尿液或脊髓液分析或通过手术材料的分析。
[0171] 组合疗法
[0172] 在一些实施方案中，本文所述方法包括将第二疗法例如另外的癌症治疗剂或另外 的癌症治疗给予有需要的对象的另外的步骤。示例性的另外的癌症治疗剂包括例如化学疗 法、靶向疗法、抗体疗法、免疫疗法和激素疗法。另外的癌症治疗包括例如：手术和放射疗 法。下面提供这些治疗每一个的实例。
[0173] 本文所用的有关另外的癌症治疗剂的术语"共同给予"意指另外的癌症治疗剂可 连同本发明一个方面的化合物作为单一剂型的一部分(例如包含本发明一个方面的化合物 和上述第二治疗剂的本发明一个方面的组合物)或作为单独的多个剂型一起给予。或者，另 外的癌症治疗剂可在给予本发明一个方面的化合物之前给予、序贯给予或之后给予。在这 类联合疗法治疗中，本发明一个方面的化合物和第二治疗剂两者通过常规方法给予。将包 含本发明一个方面的化合物和第二治疗剂两者的本发明一个方面的组合物给予对象不妨 碍在治疗进程的另一时间将该相同治疗剂、任何其它的第二治疗剂或本发明一个方面的任 何化合物分别给予所述对象。术语本文所用的有关另外的癌症治疗的"共同给予"意指另外 的癌症治疗可在给予本发明一个方面的化合物之前发生、序贯发生或之后发生。
[0174] 在一些实施方案中，另外的癌症治疗剂是化学疗法药剂。用于癌症疗法的化学疗 法药剂的实例包括例如抗代谢物(例如叶酸、嘌呤和嘧啶衍生物）、烷化剂(例如氮芥、亚硝 基脲类、铂、烷基磺酸盐、肼类、三氮烯类、吖丙啶类、纺锤体毒素、细胞毒性剂、拓扑异构酶 抑制剂等)和低甲基化剂(例如地西他滨(5-氮杂-脱氧胞苷）、zebularine、异硫氰酸酯、阿 扎胞苷(5-氮杂胞苷）、5-氟-2 脱氧胞苷、5，6-二氢-5-氮杂胞苷等）。示例性治疗剂包括阿 柔比星、放线菌素、阿利维A酸、六甲蜜胺、氨基蝶呤、氨基酮戊酸、氨柔比星、安吖啶、阿那格 雷、三氧化二砷、天冬酰胺酶、阿曲生坦、贝洛替康、贝沙罗汀、苯达莫司汀、博来霉素、硼替 佐米、白消安、喜树碱、卡培他滨、卡钼、卡波醌、卡莫氟、卡莫司汀、塞来考昔、苯丁酸氮芥、 氮芥、顺钼、克拉屈滨、氯法拉滨、Cr i santaspase、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、D放线菌 素、柔红霉素、地西他滨、秋水仙胺、多西他赛、多柔比星、乙法昔罗、Elesclomol、依沙芦星、 依诺他滨、表柔比星、雌莫司汀、依托格鲁、依托泊苷、氟尿苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶(5FU)、福 莫司汀、吉西他滨、卡氮芥植入剂、羟基脲、羟基脲、伊达比星、异环磷酰胺、伊立替康、伊罗 夫文、伊沙匹隆、拉罗他赛、亚叶酸、多柔比星脂质体、柔红霉素脂质体、氯尼达明、洛莫司 汀、硫蒽酮、甘露舒凡、马索罗酚、美法仑、巯基嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、氨基酮戊酸甲酯、二 溴甘露醇、米托胍腙、米托坦、丝裂霉素、米托蒽醌、奈达铂、尼莫司汀、奥利美生、 Omacetaxine、奥他赛、奥沙利铂、紫杉醇、培门冬酶、培美曲塞、喷司他丁、吡柔比星、匹蒽 醌、普卡霉素、扑吩姆钠、泼尼莫司汀、丙卡巴肼、雷替曲塞、雷莫司汀、卢比替康、沙帕他滨、 司莫司汀、Sitimagene ceradenovec、Strataplatin、链佐星、他拉泊芬、替加氟-尿啼啶、替 莫泊芬、替莫唑 胺、替尼泊苷、替司他赛、睾内酯、四硝酸酯、塞替派、噻唑呋林、硫鸟嘌呤 (Tioguanine)、替匹法尼、托泊替康、曲贝替定、三亚胺醌、曲他胺、Triplatin、维A酸、曲奥 舒凡、曲磷胺、乌拉莫司汀、戊柔比星、维替泊芬、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春氟宁、长 春瑞滨、伏林司他、佐柔比星和本文所述的其它细胞生长抑制剂或细胞毒性剂。
[0175] 因为一些药物在一起比单独的更好地起作用，所以通常在同一时间给予两种或更 多种药物。两种或更多种化学疗法药剂常常用作联合化学疗法。
[0176] 在一些实施方案中，另外的癌症治疗剂是分化剂。所述分化剂包括类视黄醇类(例 如全反式-维甲酸（ATRA)、9_顺式维甲酸、13-顺式维甲酸（13-cRA)和4-羟基-phenretinamide(4-HPR));三氧化二砷；组蛋白脱乙酰酶抑制剂HDAC(例如氮杂胞苷 (Vidaza)和丁酸盐类（例如苯基丁酸钠））；杂合极性化合物（例如六甲撑双乙酰胺 ((HMBA));维生素 D和细胞因子(例如集落刺激因子包括G-CSF和GM-CSF和干扰素）。
[0177] 在一些实施方案中，另外的癌症治疗剂是靶向疗法药剂。靶向疗法构成对癌细胞 的失调(deregulated)蛋白质有特异性的药剂的使用。小分子革E1向疗法药物一般是癌细胞 内的突变、过量表达或另外的关键蛋白质的酶结构域的抑制剂。主要实例为酪氨酸激酶抑 制剂例如阿昔替尼、波舒替尼、Cediranib、达沙替尼、埃罗替尼、伊马替尼、吉非替尼、拉帕 替尼、来他替尼、尼洛替尼、司马沙尼、索拉非尼、舒尼替尼和凡德他尼，以及细胞周期蛋白 依赖型激酶抑制剂例如阿伏西地和塞利西利。单克隆抗体疗法是其中治疗剂是与癌细胞表 面上的蛋白质特异性结合的抗体的另一种策略。实例包括通常用于乳腺癌的抗HER2/neu抗 体曲妥珠单抗(HERCEPTIN?)和通常用于各种B细胞恶性肿瘤的抗⑶20抗体利妥昔单 抗和托西莫单抗。其它示例性抗体包括西妥昔单抗、帕尼单抗、曲妥珠单抗、阿仑珠单抗、贝 伐单抗、依决洛单抗和吉妥珠单抗。示例性融合蛋白包括阿柏西普(Af 1 ibercept)和地尼白 介素-毒素连接物。在一些实施方案中，靶向疗法可与本文所述化合物，例如双胍例如二甲 双胍或苯乙双胍，优选苯乙双胍联用。
[0178] 靶向疗法还可包括小肽，如可与细胞表面受体或瘤周围的受影响的胞内基质结合 的"导向基团"。如果核素在细胞附近衰减，则与这些肽连接的放射性核素(例如RGD)最终杀 死癌细胞。这类疗法的实例包括BEXXAR?。
[0179] 在一些实施方案中，另外的癌症治疗剂是免疫疗法药剂。癌症免疫疗法是指经设 计诱导对象自身的免疫系统抗击肿瘤的不同类型的治疗策略。用于产生针对肿瘤的免疫应 答的同期方法包括浅表性膀胱癌的泡内BCG免疫疗法和在肾细胞癌和黑素瘤对象中诱导免 疫应答的干扰素和其它细胞因子的使用。
[0180] 同种异体造血干细胞移植可视为免疫疗法的一种形式，因为供体免疫细胞常常可 以移植物抗宿主作用攻击肿瘤。在一些实施方案中，免疫疗法药剂可与本文所述化合物或 组合物联用。
[0181] 在一些实施方案中，另外的癌症治疗剂是激素疗法药剂。通过提供或阻断某些激 素可抑制一些癌的生长。激素敏感性肿瘤的普通实例包括乳腺癌和前列腺癌的某些类型。 除去或阻断雌激素或睾酮常常是一种另外的重要治疗。在某些癌症中，给予激素激动剂例 如孕激素可能在治疗上是有益的。在一些实施方案中，激素疗法药剂可与本文所述化合物 或组合物联用。
[0182] 其它可能的额外的治疗形式包括伊马替尼、基因疗法、肽和树突细胞疫苗、合成的 氯毒素和放射性标记的药物和抗体。 实施例
[0183] 缩略语
[0184] anhy·-无水的 H2SO4-硫酸
[0185] aq._含水的 MM-氯化铵
[0186] min-分钟 K0H-氢氧化钾
[0187] mL-毫升 NaOH-氛氧化纳
[0188] mmol-晕摩尔 K2CO3-碳酸钟
[0189] mol-摩尔 Na2C〇3-碳酸钠
[0190] MS-质谱法 TFA-三氟乙酸
[0191] NMR-核磁共振 Na2S〇4_硫酸钠
[0192] TLC-薄层色谱法 NaBHf硼氢化钠
[0193] HPLC-高效液相色谱法 NaHC03-碳酸氢钠
[0194] Hz-赫兹 LiHMDS-六甲基二硅烷基氨基锂
[0195] δ-化学位移 NaHMDS-六甲基二硅烷基氨基
[0196] J-耦合常数 钠
[0197] s-单峰 LAH-氢化铝锂
[0198] d-双峰 NaBH4_硼氢化钠
[0199] t-三重峰 LDA-二异丙基氨基锂
[0200] q-四重峰 Et3N_三乙胺
[0201 ] m-多重峰 DMAP-4_(二甲基氨基)吡啶
[0202] br-宽峰 DIPEA-Ν,Ν-二异丙基乙胺
[0203] qd_四双峰 NH40H-氢氧化铵
[0204] dquin-双五重峰 EDCI-1-乙基-3_(3_二甲基氨基丙
[0205] dd_双双峰 基）碳二亚胺
[0206] dt-双三重峰 HOBt-Ι-羟基苯并三唑
[0207] CHC13-氯仿 HATU-0_(7-氮杂苯并三唑1-
[0208] DCM-二氯甲烷 基)-Ν,Ν,Ν'，Ν'-四甲基脲鑰
[0209] DMF-二甲基甲酰胺 81熟卩-2,2'-双(二苯膦基)-1，1'-联
[0210] Et2〇-乙醚 萘基
[0211] EtOH-乙醇
[0212] EtOAc-乙酸乙酯
[0213] MeOH-甲醇
[0214] MeCN-乙腈
[0215] PE-石油醚
[0216] THF-四氢呋喃
[0217] AcOH-乙酸
[0218] HC1-盐酸
[0219] 本文可使用的试剂购自商业来源，并且无需进一步纯化便可使用。核磁共振(NMR) 谱在Brucker AMX_400NMR(Brucker，Switzerland)上获得。化学位移以自四甲基硅烷的百 万分率(ppm，δ)低磁场报告。质谱用来自Waters LCT T0F质谱仪(Waters，USA)的电喷雾电 离(ESI)运行。
[0220] 对于本节公开的示例性化合物，立体异构体的描述(例如(R)或(S)立体异构体)表 明该化合物的制备使得以指定立构中心富集达至少约90 %、95 %、96 %、97 %、98 %或99 % 的化合物。下文所述各示例性化合物的化学名称通过ChemDraw软件产生。可通过本领域已 知方法，例如按照国际专利申请PCT/CN2013/000009和美国专利申请13/735,467所述类似 程序，制备式I化合物。
[0221] 实施例1.制备其中A为苯基的式I化合物的中间体的制备
[0222]
[0223] 2，4-二氯-6-苯基-1，3，5-三嗪的制备。在氮气保护下，在-10至_0°C下，向2，4，6-三氯-[1，3，5 ]三嗪（120g，0.65 2mo 1)的无水THF (1200mL)溶液中滴加到苯基溴化镁(217mL， 0.651mol，3M乙醚中）。在加入后，使混合物升温至室温，并搅拌2小时。使反应物冷却至0°C， 通过加入饱和NH4Cl(200mL)猝灭，然后用乙酸乙酯萃取。有机层经干燥、浓缩并通过柱色谱 法纯化（用石油醚洗脱），得到2，4-二氯-6-苯基-1，3，5-三嗪，为白色固体。 1H NMR(CDC13)δ 7·51-7·55(m，2Η)，7·64-7·67(m，1Η)，8·49-8·63(m，2Η)。
[0224] 实施例2.用于制备其中环A是取代的吡啶-2-基的式I化合物的中间体的制备。
[0225]
[0226] 步骤1 :6-氯-吡啶-2-甲酸甲酯（2-II)的制备。向6-氯-吡啶-2-甲酸（48g， 0.3lmo 1)的甲醇(770ml)溶液中加入浓HC1 (6ml)。在80°C下搅拌混合物48小时，然后浓缩除 去挥发物。粗产物用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHC03溶液洗涤。有机层用无水Na 2S〇4干燥，浓 缩，得到6-氯-吡啶-2-甲酸甲酯，为白色固体。
[0227]
iS：m/z 172.0(M+H)+〇
[0228] 便用合迠的起始原料2-1，采用步骤1给出的程序，得到下列中间体(2-II)。
[0229] 6-三氟甲基-吡啶-2-甲酸甲酯。
[0230]
,C-MS：m/z 206(M+H)+〇
[0231] 步骤2:6-(6-氯吡啶-2-基）-1，3,5-三嗪-2,4二酮的制备。向恥（328,0.16!11〇1)的 乙醇（500mL)溶液中加入6-氯吡啶甲酸甲酯（32g，0.16mol)和双缩脲（5.3g，0.052molMi 混合物加热回流1小时。然后浓缩得到残余物，将其倒入水中，加入饱和NaHC03溶液以调节 pH至7，经过滤收集沉淀的固体，干燥得到6-( 6-氯吡啶-2-基)-1，3，5-三嗪-2，4二酮。
[0232]
￡-MS：m/z 225(M+H)+〇
[0233] 用合适的中间体2-II开始，采用步骤2得到下列中间体(2-111)。
[0234] 6-(6-二氟甲基-吡啶-2-基)-1Η-1，3，5-三嗪-2，4二酮，为灰白色固体。
[0235] LC-MS：m/z 259(M+H)+〇 Ο：
[0236] 6-吡啶-2-基-1Η-1，3，5-三嗪-2，4 二酮。
[0237]
[0238] ΧΗ NMR(DMS0-d4)：5ll.9-12.5(s,lH),11.3-11.6(s,lH),8.7-8.9(m,lH),8.2-8·4(m，1Η)，8·0-8·2(m，1Η)，7·6-7·8(m，1Η)〇
[0239] 步骤3:2，4-二氯-6-( 6-氯吡啶-2-基)-1，3，5-三嗪的制备
[0240] 向 6-(吡啶-2-基）-1,3,5-三嗪-2,4(1H，3H)二酮（3.0g，013mol)的 P0Cl3(48mL)溶 液中加入?(：15(238,0.1!11 〇1)。在100°0下搅拌混合物2小时，然后浓缩除去挥发物。残余物用 乙酸乙酯稀释，用饱和NaHC03溶液洗涤。有机层经无水Na 2S〇4干燥，浓缩，得到2，4-二氯-6-(6_氣吡啶_2_基)_1，3，5_二嘆，为褐色固体。
[0241 ]LC-MS：m/z 260.9(M+H) + 〇
IN Ml ：〇
[0242] 采用步骤3给出的程序以及合适的起始中间体2-111，得到下列中间体(2-IV)。
[0243] 2，4-二氯-6-( 6-三氟甲基-吡啶-2-基)-1，3，5-三嗪，为浅黄色固体。
[0244]-MS:m/z 294.9(M+H)+。
u
[0245] 2，4-二氯-6-吡啶-2-基-[1，3，5]三嗪（1 · 0g，80 % )，为褐色固体。
[0246] MS:m/z 227.0(M+H)+。
[0247] .......i为取代的芳基或杂芳基的式I化合物的制备。
[0248]
[0249] 4-氯-6-(4-三氟甲基-嘧啶-2-基）-[1，3,5]三嗪-2-基]-(2-三氟甲基-吡啶-4-基)_胺的制备。向2,4_二氯-6-(4-(三氟甲基）嘧啶-2-基)-1，3,5_三嗪（981mg，3.31mmol) 的THF(80mL)溶液中加入2-(三氟甲基）吡啶-4-胺（590mg，3 · 64mmo 1)和NaHC03 (556mg， 6.6mmol)。在回流中搅拌混合物18小时。使混合物浓缩并倒入水中，用乙酸乙酯萃取，经硫 酸钠干燥，过滤，浓缩，得到残余物，将其用Si0 2色谱法纯化，得到4-氯-6-(4-三氟甲基-嘧 啶-2-基W H 5 ?二噻-2-某? -(2-三氟甲基-吡啶-4-基)-胺。
[0250] v 丨 M
IN Η
[0251] LCMS:m/z 422.2(Μ+Η)+。
[0252] 照此类似地制备下列中间体：
[0253] 4-氯-6-(6-(三氟甲基）吡啶-2-基)-N-(2_(三氟甲基）吡啶-4-基）-1，3,5_三嗪-2_胺
[0254 η
[0255] LCMS:m/z 421.2(Μ+Η)+。
[0256] 4-氯-二氟乙基）吡啶-2-基)-Ν-(2_(三氟甲基）吡啶-4-基）-1,3,5-三 嗪-2-胺
[0257]
[0258] LCMS：m/z
416.3(M+H)T〇
[0259] 实施例4: 6-(6-(三氟甲基）吡啶-2-基)-N2-(2-(三氟甲基）吡啶-4-基)-1,3,5-三 嗪-2，4-二胺(化合物378)的制备
[0260]
冋謝3的THm〇%，15ml)中加人4-鼠-6-(6-(三m甲基）啦啶-2-基）-N-(2_(三氟 甲基）吡啶-4-基)-1，3,5_三嗪-2-胺(2.(^，4.76111111〇1)，同时形成沉淀。在另搅拌2小时后， 固体经过滤，干燥，得到所需产物1 · 6g (收率:82 % )。MW(402 · 2，M+1)。4 NMR(400MHz，MeOH- d)5：8.71(d ,J = 7.8Hz,lH),8.52(d ,J = 5.1Hz,lH) ,8.38(br.s. , 1H), 8.24(t ,J = 7.5Hz , lH),8.18(br.s. ,lH),8.01(d,J = 7.8Hz,lH)〇
[0262] 实施例A.酶和细胞测定法。
[0263] 酶测定法。通过辅因子耗尽测定法，针对IDH2R172K抑制活性对化合物进行测定。 将化合物与酶一起预温育，然后通过加入NADPH和α-KG开始反应，允许在之前证实的相对于 辅因子和底物消耗两者时间为线性的条件下进行60分钟。通过加入第二种酶即心肌黄酶和 相应的底物即刃天青终止反应。心肌黄酶将刃天青还原为高荧光的试卤灵，同时NADPH氧化 成NADP，两者通过耗尽可用的辅因子库终止IDH2反应，并且在通过易检测荧光团定量产生 一定时间后促进剩余辅因子的量的测定。
[0264] 具体地说，向384孔板的12孔每个中加入ΙμL ΙΟΟχ化合物稀释系列，接着加入40μ1 含有 1.25μg/ml IDH2R172K的缓冲液（50mM磷酸钾（K2HP〇4)，pH 7.5;150mM NaCl、10mM MgCl2、10 %甘油、0.05 %牛血清白蛋白、2mMi3-巯基乙醇）。然后使试验化合物在室温下与酶 一起温育1小时之后，在上述缓冲液中加入1〇μ1含有50μΜ NADPH和6.3mMa-KG的底物混合物 开始IDH2反应。在室温下再1小时后，终止反应，并通过加入25μ1终止混合物(36μg/ml心肌 黄酶和60μΜ刃天青;缓冲液中），通过刃天青转化成试卤灵，测量剩余的NADPH。在1分钟温育 后，将板在读板仪中以Ex544/Em590读数。
[0265] 为了在与上述类似的测定方式中测量化合物针对IDH2 R140Q的抑制效能，进行了 类似的程序，不同的是最终的测试浓度为〇.25μg/ml IDH2 R140Q蛋白、4μΜ NADPH和1.6mM a-KG，且预温育时间为1小时或16小时。
[0266] 为了以高通量筛选方式测量化合物针对IDH2 R140Q的抑制效能，进行了类似程 序，不同的是在预温育步骤中使用〇.25μg/ml IDH2 R140Q蛋白，并且通过加入4μΜ NADPH和 8yMa-KG开始反应。
[0267] 基于U87MG pLVX-IDH2R140Q-neo细胞的测定法。使U87MG pLVX-IDH2R140Q-neo细 胞在125培养瓶在含有10%FBS、lx青霉素/链霉素和500yg/mL G418的DMEM中生长。通过胰 蛋白酶收获细胞，以5000细胞个/孔的密度按1 OOyl /孔接种在96孔白底板中的含10 % FBS的 DMEM中。不将细胞接种在1和12列中。使细胞在37°C、5%C02下温育过夜。次日以2χ浓度配制 化合物，将l〇〇ul加入各细胞孔中。DMS0的终浓度为0.2%，将DMS0对照孔加入G排。然后将板 置于培养箱中48小时。48小时时，从各孔中取出100ul培养基，通过LC-MS分析2-HG浓度。将 细胞板放回培养箱中再持续24小时。在加入化合物后72小时，使10mL/板的Promega Cell Titer Glo试剂融化并混合。从培养箱中取出细胞板，允许平衡至室温。然后将100ul试剂加 入各孔的培养基中。然后将细胞板置于定轨摇床中10分钟，然后允许在室温下静置20分钟。 然后以500ms的积分时间针对发光读板测定化合物对生长抑制的作用。
[0268] 如前所述或与之类似，在R140Q酶测定法（16小时预温育时间）和基于R140Q细胞的 测定法中测试了代表性化合物378,两种测定法中的IC50小于50nM。
[0269] 在此已描述了若干实施方案的若干方面，要认识到本领域技术人员可容易地想到 不同的改变、修改和改进。所述改变、修改和改进欲成为本公开内容的一部分，并且预期在 本发明的精神和范围内。因此，前面的描述和附图仅仅通过实例说明。
【主权项】
1. 具有下式I的化合物或其药学上可接受的盐或水合物：其中： 环A为任选取代的5-6元单环芳基或单环杂芳基;和 环B为任选取代的5-6元单环芳基或单环杂芳基;其中： a. 环A和环B不同时是任选取代的6元单环芳基； b. 当环A为未取代的吡啶基时，则环B不是被1-3个独立选自以下的基团任选取代的苯 基：甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、CH(0H)CH 3、C1、Br、SH和CF3; c. 当环A为5元杂芳基时，则环B不是被1-2个独立选自以下的基团任选取代的苯基:F、 C1、S02CH 3、C(0)0CH3、甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、0-苯基、CF3、0H和NO 2; d. 当环A为2，4-二取代的5-噻唑基时，则环B不是取代的苯基； e. 化合物不是： (I )N2-2-吡啶基-6-(3-吡啶基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺； (2) 6- (6-甲氧基-3-吡啶基)-N2- (4-甲基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺； (3) 6- (2-甲氧基-3-吡啶基)-N2- (4-甲基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺； (4) N2-(3-氯苯基)-6-(2-氯-4-吡啶基)-1，3,5_ 三嗪-2,4-二胺； (5) 3-[[4-[4_氨基-6-[(3-氯苯基)氨基]-1，3,5-三嗪-2-基]-2-吡啶基]氨基]-1-丙 醇； (6) N-[3-[ [4-氨基-6-(2-甲基-4-嘧啶基)-1，3,5_三嗪-2-基]氨基]-4-甲基苯基]_ N'-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-脲； (7) N4，N4'_二苯基 _[2,2'_二-1，3,5-三嗪]-4,4'，6,6'-四胺； (8) 6,6'-(2,6-吡啶二基)双[^苯基-1，3,5-三嗪-2,4-二胺;或 (9) 6,6'-(2,3-吡嗪二基)双[^苯基-1，3,5-三嗪-2,4-二胺。2. 权利要求1的化合物，其中环A选自苯基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基、嘧啶基、 吡嗪基和噻唑基，其中环A被至多2个独立选自以下的取代基任选取代：卤素、-C 1-C4烷基、_ Ci_C4卤代烷基、-Ci-C4羟基烷基、-NH -S (0) 2_ (Ci-C4烷基）、_S (0) 2NH(Ci-C4烷基）、_CN、-S (0) 2_ (Ci-C4烷基）、Ci-C4烷氧基、-NH(Ci-C4烷基）、 _0H、-CN和-順2 〇3. 权利要求1的化合物，其中环B选自苯基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、吡啶基、 嘧啶基、哒嗪基和吡嗪基，其中环B被至多2个独立选自以下的取代基任选取代：卤素、-C 1-C4 烷基、_C2_C4炔基、_Cl-C4[ii代烷基、 -Cl-C4羟基烷基、C3_C6环烷基、_ ( C〇-C2亚烷基)_0_Cl-C4 烷基、 _〇_ (Ci-C4亚烷基）_C3_C6环烷基、-NH -S (0) 2_ (Ci-C4烷基）、_S (0) 2NH(Ci-C4烷基）、_S (0)2_NH-(C3 _C6环烷基）、_S(0)2_(饱和杂环基）、_CN、 -S(0) 2_(Ci-C4烷基）、_NH(Ci-C4烧 基）、-N(C 1-C4烷基)2、-OH、C(0) -ο-(C1-C4烷基）、饱和杂环基和-NH2。4. 具有结构式II的化合物或其药学上可接受的盐：其中： 环A '选自苯基和吡啶-2-基，其中环A '被一个或两个独立选自以下的取代基任选取代： 氯、氟、-CF3、-CHF2、-CH3、-CH2CH 3、-CF2CH3、-OH、-OCH3、-OCH 2CH3、-NH2、-NH (CH3)和 _N( CH3) 2; 环B '选自吡啶-3-基、吡啶-4-基、异噁唑-4-基、异噁唑-3-基、噻唑-5-基、嘧啶-5-基和 吡唑-4-基，其中环B '被1 -2个独立选自以下的取代基任选取代：卤素;-CN; -OH;被卤素、CN 或-OH 任选取代的 C1-C4 烷基;-S (0) 2-&-C4 烷基；-S (0) -C1-C4 烷基；-S (0) 2-NH-&-C4 烷基;-S (0)2-Ν(&-〇4 烷基)2; -S(O)2-氮杂环丁烷-1-基;-O-C1-C4 烷基;-CH2-O-CH3;吗啉-4-基;环丙 基;-S (0) 2-ΝΗ-环丙基;-C (0) -O-CH3;和 -C(Rla) (R2a) (R3a)选自被卤素或-OH任选取代的C1-C6烷基;-(Co-C 1亚烷基)-环烷基，其 中亚烷基被甲基任选取代，环烷基被以下任选取代：卤素、-OCH3或甲基;被卤素或甲基任选 取代的饱和杂环基; _C( 0) -〇-Ci_C6烷基;-C (0) - ( Cq-Ci亚烷基)-环丙基和C (0)-苄基。5. 权利要求4的化合物，其中环A '选自2-氯苯基、2-氟苯基、2-甲氧基苯基、3-羟基苯 基、6_氛基啦啶_2_基、6_氣啦啶_2_基、6_二氣甲基啦啶_2_基和苯基。6. 权利要求4的化合物，其中环B'选自2-(吗啉-4-基）吡啶-4-基、2-二甲基氨基吡啶-4_基、3_ (2_甲氧基乙基)苯基、3，5_二氣苯基、3_氣苯基、3_氛基甲基苯基、3_氛基苯基、3_ 环丙基氨基磺酰基苯基、3-二甲基氨基磺酰基苯基、3-乙基磺酰基苯基、3-氟苯基、3-甲基 横酰基苯基、4-氣苯基、5-氯啦啶_3_基、5-氛基啦啶_3_基、5-氛基啦啶_3_基、5-氛基P比啶-4-基、5-氟吡啶-3-基、5-三氟甲基吡啶-3-基、6-氯吡啶-4-基、6-氰基吡啶-4-基、6-环丙基 吡啶-4-基、6-乙氧基吡啶-4-基、6-氟吡啶-3-基、6-氟吡啶-4-基、6-甲基吡啶-4-基、6-三 氟甲基吡啶-4-基、异噁唑-4-基、苯基、吡啶-4-基和噻唑-5-基。7. 药物组合物，其包含权利要求1的化合物和药学上可接受的载体。8. 权利要求7的组合物，其还包含用于治疗癌症的第二治疗剂。9. 治疗特征在于存在IDH2突变的癌症的方法，其中所述IDH2突变导致患者中酶催化α-酮戊二酸NAPH依赖型地还原成R(-)-2-羟基戊二酸的新的能力，所述方法包括将权利要求7 的组合物给予有需要的患者的步骤。10. 权利要求9的方法，其中所述IDH2突变是IDH2R140Q或R172K突变。11. 权利要求10的方法，其中所述IDH2突变是IDH2R140Q突变。12. 权利要求9的方法，其中所述癌症选自成胶质细胞瘤(或神经胶质瘤）、骨髓增生异 常综合征(MDS)、骨髓增殖性瘤(MPN)、急性髓细胞白血病(AML)、肉瘤、黑素瘤、非小细胞肺 癌、软骨肉瘤、胆管癌或血管免疫母细胞性非霍奇金淋巴瘤(NHL)。13. 权利要求9的方法，所述方法还包括将可用于治疗癌症的第二治疗剂给予有需要的 患者。14. 权利要求7的组合物在治疗特征在于存在IDH2突变的癌症中的用途，其中所述IDH2 突变导致患者中酶催化α-酮戊二酸NAPH依赖型地还原成R(-)-2-羟基戊二酸的新的能力。15. 权利要求14的用途的组合物，其中所述IDH2突变是IDH2R140Q或R172K突变。16. 权利要求15的用途的组合物，其中所述IDH2突变是IDH2R140Q突变。17. 权利要求14的用途的组合物，其中所述癌症选自成胶质细胞瘤(或神经胶质瘤）、骨 髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增殖性瘤(MPN)、急性髓细胞白血病(AML)、肉瘤、黑素瘤、非 小细胞肺癌、软骨肉瘤、胆管癌或血管免疫母细胞性非霍奇金淋巴瘤(NHL)。18. 权利要求14的用途的组合物，所述组合物还包含用于治疗癌症的第二治疗剂。
【专利摘要】提供式(I)的化合物，其中：环A和环B各自独立地为任选取代的5-6元单环芳基或杂芳基。所述化合物是可用于治疗癌症的异柠檬酸脱氢酶2(IDH2)突变体的抑制剂。
【IPC分类】C07D403/04, C07D403/12, C07D401/14, C07D251/18, C07D413/12, A61P35/00, A61K31/53, C07D417/14, C07D401/12, C07D417/12, C07D401/04
【公开号】CN105492435
【申请号】CN201480047026
【发明人】J·特维斯, 卢克·乌特里
【申请人】安吉奥斯医药品有限公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年7月10日
【公告号】CA2917592A1, EP3019490A1, US20160158241, WO2015006592A1
【专利说明】作为IDH2突变体抑制剂用于癌症治疗的N,6-双(芳基或杂芳 基)-1 ,3,5-三嗪-2,4-二胺化合物
[00011优先权声明
[0002]本申请要求2013年7月11日提交的美国申请序列号61/845352的优先权，其通过引 用以其整体结合到本文中。
[0003] 发明背景
[0004] 异柠檬酸脱氢酶（IDH)催化异柠檬酸至2-酮戊二酸（即α-酮戊二酸）的氧化脱羧。 这些酶属于两个不同的亚类，其中的一个利用NAD( + )作为电子接纳体，另一个利用NADP (+ )。已报告了 5种异柠檬酸脱氢酶:3种NAD( + )依赖型异柠檬酸脱氢酶，其位于线粒体基质， 2种NADP( + )依赖型异柠檬酸脱氢酶，其中一种是线粒体的，另一种主要是胞质的。各NADP (+ )依赖型同工酶是同二聚体。
[0005] IDH2(异柠檬酸脱氢酶 2(NADP+)，线粒体）亦称为 IDH;IDP;IDHM;IDPM;ICD-M 或 mNADP-IDH。由该基因编码的蛋白质是存在于线粒体中的NADP( + )依赖型异柠檬酸脱氢酶。 它在中间代谢和能量生产中起作用。该蛋白质可与丙酮酸脱氢酶复合体紧密缔合并相互作 用。人IDH2基因编码452个氨基酸的蛋白质。IDH2的核苷酸和氨基酸序列可分别以GenBank 条目NM_002168.2和NP_002159.2查询。人IDH2的核苷酸和氨基酸序列还描述于例如Huh等， 提交（1992年9 月）给EMBL/GenBank/DDBJ 数据库；和MGC Project Team，Genome Res.14: 2121-2127(2004)。
[0006] 例如在以下正向反应中，非突变型(例如野生型）IDH2催化异柠檬酸至α-酮戊二酸 (a-KG)的氧化脱羧，从而使NAD+ (NADP+)还原成为NADH(NADPH):
[0007] 异柠檬酸+NAD+(NADP+)-a-KG+C〇2+NADH(NADPH)+H+。
[0008] 发现存在于某些癌细胞的IDH2突变导致该酶催化NAPH依赖型还原a-酮戊二酸成 为R (-) -2-羟基戊二酸（2HG)的新的能力。通过野生型IDH2不形成2HG。2HG的产生被认为促 进癌症的形成和发展(Dang，L等，Nature2009，462:739-44)。
[0009] 因此，突变型IDH2及其新生活性的抑制是癌症的有效的治疗性治疗。因此，存在对 具有α羟基新活性的ID Η 2突变体的抑制剂的持续需要。
[0010] 发明概述
[0011] 本文提供结构式I化合物或其药学上可接受的盐或水合物：
[0012]
[0013] 环Α为任选取代的5-6元单环芳基或单环杂芳基;和
[0014] 环B为任选取代的5-6元单环芳基或单环杂芳基;其中：
[0015] a.环A和环B不同时是任选取代的6元单环芳基；
[0016] b.当环A为未取代的吡啶基时，则环B不是被1-3个独立选自以下的基团任选取代 的苯基：甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、CH(OH)CH 3、Cl、Br、S^PCF3;
[0017] c.当环A为5元杂芳基时，则环B不是被1-2个独立选自以下的基团任选取代的苯 基:？、(：1、50201 3、(：(0)0013、甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、〇-苯基、0?3、0!1和勵 2;
[0018] d.当环A为2，4-二取代的5-噻唑基时，则环B不是取代的苯基；
[0019] e.化合物不是：
[0020](丨）N2-2-吡啶基_6_ (3-吡啶基)_丨，3，5_三嗪-2，4-二胺；
[0021 ] (2)6-(6-甲氧基-3-吡啶基)-N2_(4-甲基苯基)_1，3，5-三嗪-2，4-二胺；
[0022] (3)6-(2-甲氧基-3-吡啶基)，2-(4-甲基苯基)-1，3,5-三嗪-2,4-二胺；
[0023] (4)吧-(3-氯苯基)-6-(2-氯-4-吡啶基)-1，3,5-三嗪-2,4-二胺；
[0024] (5)3-[[4-[4-氨基- 6-[(3-氯苯基)氨基]-1，3,5-三嗪-2-基]-2-吡啶基]氨基]-1 _丙醇；
[0025] (6)N-[3-[[4-氨基-6-(2-甲基-4-嘧啶基）-1，3,5_三嗪-2-基]氨基]-4-甲基苯 基]-N'_[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-脲；
[0026] (7)N4，N4'_二苯基-[2,2'_二-1,3,5-三嗪]-4,4'，6,6'_四胺；
[0027] (8)6,6'-(2,6_ 吡啶二基)双[N-苯基-1，3,5-三嗪-2,4-二胺;或
[0028] (9) 6，6 ' -(2，3-吡嗪二基)双[N-苯基-1，3，5-三嗪-2，4-二胺。
[0029] 本文任一个实施方案所述的式I或II的化合物抑制突变型IDH2,特别是具有α羟基 新活性的突变型IDH2。本文还提供包含式I化合物的药物组合物和使用所述组合物治疗特 征在于存在突变型IDH2的癌症的方法。
[0030] 发明详述
[0031] 下面的描述给出或附图中说明的成分的结构和排列的详情无意是限制性的。明确 包括实施本发明的其它实施方案和不同方式。此外，本文所用措词和术语用于说明目的，不 应视为限制性的。本文中"包括"、"包含"或"具有"、"含有"、"涉及"及其变化形式的使用意 在包括之后所列项目及其等同项目以及其它项目。
[0032] 定义:
[0033] 卤代"或"卤素"是指氟、氯、溴或碘的任一基团。
[0034] 术语"烷基"是指可为直链或支链、含有规定碳原子数的完全饱和或不饱和烃链。 例如，Ci-Cu烷基表示其中可具有1-12(包括1和12)个碳原子的基团。术语"卤代烷基"是指 其中一个或多个氢原子被卤素置换的烷基，并包括所有氢被卤素置换的烷基部分(例如全 氟烷基）。术语"芳基烷基"或"芳烷基"是指其中烷基氢原子被芳基置换的烷基部分。芳烷基 包括其中一个以上的氢原子被芳基置换的基团。"芳基烷基"或"芳烷基"的实例包括苄基、 2-苯基乙基、3-苯基丙基、9-芴基、二苯甲基和三苯甲基。术语"烷基"包括"烯基"和"炔基"。
[0035] 术语"亚烷基"是指二价烷基，例如-CH2-、-CH2CH2-、-CH 2CH2CH2-和-ch2ch(ch3) CH2-0
[0036] 术语"烯基"是指含有2-12个碳原子且具有一个或多个双键的直链或支链烃链。烯 基的实例包括但不限于烯丙基、丙烯基、2-丁烯基、3-己烯基和3-辛烯基。双键碳之一可任 选为烯基取代基的连接点。
[0037] 术语"炔基"是指含有2-12个碳原子且特征在于具有一个或多个三键的直链或支 链烃链。炔基的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基和3-己炔基。三键碳之一可任选为炔基取 代基的连接点。
[0038] 术语"烷氧基"是指-0-烷基。术语"卤代烷氧基"是指其中一个或多个氢原子被卤 素置换的烷氧基，并包括其中全部氢被卤素置换的烷氧基部分(例如全氟烷氧基）。
[0039] 除非另有说明，否则术语"芳基"是指全芳族的单环、双环或三环烃环系统。芳基部 分的实例为苯基、萘基和蒽基。除非另有说明，否则芳基中的任何环原子可被一个或多个取 代基取代。术语"单环芳基"意指被一个或多个取代基任选取代的不可形成稠合双环或三环 的单环全芳族烃环系统。
[0040] 术语"碳环基"是指非芳族的单环、双环或三环烃环系统。碳环基包括完全饱和的 环状系统(例如环烷基)和部分饱和的环状系统。
[0041 ]本文所用术语"环烷基"包括具有3-12个碳的饱和的环状、双环、三环或多环烃基。 任何环原子可以是取代的(例如被一个或多个取代基取代）。环烷基部分的实例包括但不限 于环丙基、环己基、甲基环己基、金刚烷基和降冰片烷基。
[0042]除非另有说明，否则术语"杂芳基"是指如果为单环则具有1-3个杂原子、如果为双 环则具有1-6个杂原子或如果为三环则具有1-9个杂原子的全芳族的5-8元单环、8-12元双 环或11-14元三环环状系统，所述杂原子选自0、N或S(或氧化形式例如N +-0'S(0)和S(0)2)。 术语"单环杂芳基"意指具有1-3个杂原子、任选被一个或多个取代基取代的不可形成稠合 双环或三环的单环全芳族环状系统。
[0043]术语"杂环基"是指如果为单环则具有1-3个杂原子、如果为双环则具有1-6个杂原 子或如果为三环则具有1-9个杂原子的非芳族的3-10元单环、8-12元双环或11-14元三环环 状系统，所述杂原子选自〇、N或S(或氧化形式例如N +-0'S(0)和S(0)2)。杂原子可任选为杂 环基取代基的连接点。杂环基的实例包括但不限于四氢呋喃基、四氢吡喃基、哌啶基、吗啉 代、吡咯啉基、嘧啶基和吡咯烷基。杂环基包括完全饱和的环状系统和部分饱和的环状系 统。
[0044] 含有一个或多个杂原子和芳环和非芳环两者的双环和三环环状系统被视为杂环 基或杂芳基。其中芳基或杂芳基与碳环基或杂环基稠合且环状系统与分子的其余部分连接 的点是通过芳环的双环或三环环状系统分别被视为芳基或杂芳基。其中芳基或杂芳基与碳 环基或杂环基稠合且环状系统与分子的其余部分连接的点是通过非芳环的双环或三环环 状系统分别被视为碳环基(例如环烷基)或杂环基。
[0045] 除非另有说明，否则单独或作为基团的一部分(例如芳烷基的芳基部分）的芳基、 杂芳基、碳环基(包括环烷基)和杂环基在一个或多个可取代的原子上被独立选自以下的取 代基任选取代：卤素、-C三N、Ci-C4烷基、=0、_0R b、_0Rb'、_SRb、-SRb'、-(Ci-C4烷基）_N(R b) (Rb)烷基）_N(Rb) (Rb'）、-N(Rb) (Rb)、-N(Rb) (Rb'）、-〇-(&-〇4烷基）_N(Rb) (Rb)、-0-(Ci-C4^S)_N(Rb)(R b)、-(Ci-C4^S)_0_(Ci -C4^S)_N(Rb)(Rb)、-(Ci -C4^S)_0_(Ci-C4 烷基)_N(Rb) (Rb'）、-C(0)-N(Rb) (Rb)'-(&-C4烷基)-C(0)-N(Rb) (Rb)'-(&-C4烷基)-C(0)-N (Rb) (Rb'）、-0Rb'、Rb'、-C(0) (C1-C4烷基）、_C(0)Rb'、-C(0)N(Rb'）（Rb)、-N(R b)C(0) (Rb)、-N(Rb) C(0) (Rb'）、-N(Rb)S02(Rb)、-S0 2N(Rb) (Rb)、-N(Rb)S02(Rb'）和-S0 2N(Rb) (Rb'），其中任何烷基 取代基任选被以下的一个或多个进一步取代:-OH、-0-(&-C4烷基）、卤素、-NH 2、-NH(&-C4烷 基)或-Ν(&-〇4烷基)2;
[0046] 各妒独立选自氢和-CrC4烷基;或
[0047] 2个妒与它们所结合的氮原子一起形成任选包含选自N、S和0的另一个杂原子的4-8元杂环基;和
[0048] 各Rb'独立选自C3-C7碳环基、苯基、杂芳基和杂环基，其中所述苯基、环烷基、杂芳 基或杂环取代基的一个或多个可取代的位置任选被以下的一个或多个进一步取代 烷基）、_(Ci-C4氣烷基）、_0H、-0 -(Ci-C4烷基）、_0_(Ci-C4氣烷基）、卤素、 -NH2、_NH(Ci-C4烧 基)或-Ν(&-〇4烷基)2。
[0049] 单独或作为基团的一部分的杂环基在任一个或多个可取代的氮原子上被氧代、- &-C4烷基或氟取代的&-〇4烷基任选取代。
[0050] 术语"取代的"是指氢原子被另一个基团置换。
[0051] 本文所用术语"高水平的2HG"意指与不携带突变型IDH2等位基因的对象中存在的 相比，10%、20%、30%、50%、75%、100%、200%、500%或更高的2邢。术语"高水平的2邪" 可指细胞内、肿瘤内、包含肿瘤的器官内或体液内的2HG的量。
[0052] 术语"体液"包括以下一种或多种:胎儿四周的羊水、房水、血液(例如血浆）、血清、 脑脊液、訂聍、食糜、尿道球腺液、女性排出液、间质液、淋巴液、母乳、粘液(例如鼻引流液或 氮）、胸膜液、脓、唾液、皮脂、精液、血清、汗液、泪液、尿液、阴道分泌物或呕吐物。
[0053] 本文所用术语"抑制"或"防止"包括完全和部分抑制和防止两种。抑制剂可完全或 部分抑制既定靶标。
[0054] 术语"治疗"意指降低、阻止、减轻、减小、制止或稳定疾病/病症(例如癌症）的发生 或发展、减轻疾病/病症（例如癌症）的严重程度或改善与疾病/病症（例如癌症)有关的症 状。
[0055] 如本文所用，有效治疗病症的化合物的量或"治疗有效量"是指在单剂量或多剂 量 给予对象时，在处理细胞中或在医治、减轻、缓解或改善患有病症的对象中是有效的化合物 的量，超出不存在所述治疗所预期的情况。
[0056] 本文所用术语"对象"欲包括人和非人动物。示例性的人类对象包括患有病症例如 本文所述病症的人类患者(称为患者)或正常对象。本发明一个方面的术语"非人动物"包括 所有脊椎动物，例如非哺乳动物(例如鸡、两栖动物、爬行动物)和哺乳动物，例如非人灵长 类动物，驯养动物和/或农业上有用的动物，例如绵羊、狗、猫、牛、猪等。
[0057] 化合物
[0058] 提供结构式I的化合物或其药学上可接受的盐或水合物:
[0059]
[0060] 环Α为任选取代的5-6元单环芳基或单环杂芳基;和
[0061] 环B为任选取代的5-6元单环芳基或单环杂芳基;其中：
[0062] a.环A和环B不同时是任选取代的6元单环芳基；
[0063] b.当环A为未取代的吡啶基时，则环B不是被1-3个独立选自以下的基团任选取代 的苯基：甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、CH(OH)CH 3、Cl、Br、S^PCF3;
[0064] c.当环A为5元杂芳基时，则环B不是被1-2个独立选自以下的基团任选取代的苯 基:？、(：1、50201 3、(：(0)0013、甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、〇-苯基、0?3、0!1和勵 2;
[0065] d.当环A为2，4-二取代的5-噻唑基时，则环B不是取代的苯基；
[0066] e.化合物不是：
[0067] (DN2-2-吡啶基 _6_(3-吡啶基)-13,5-三嗪-2,4-二胺；
[0068] (2)6-(6-甲氧基-3-吡啶基)-N2_(4-甲基苯基)_1，3，5-三嗪-2，4-二胺；
[0069] (3)6-(2-甲氧基-3-吡啶基)-N2_(4-甲基苯基)_1，3，5-三嗪-2，4-二胺；
[0070] (4)N2-(3-氯苯基)-6-(2-氯-4-吡啶基)_1，3，5-三嗪-2，4-二胺；
[0071] (5)3-[[4-[4_氨基-6-[(3_氯苯基)氨基]-1，3,5-三嗪-2-基]-2-吡啶基]氨基]-1 _丙醇；
[0072] (6)N-[3-[[4-氨基-6-(2-甲基-4-嘧啶基）-1，3,5_三嗪-2-基]氨基]-4-甲基苯 基]-N'_[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-脲；
[0073] (7)N4，N4'_二苯基-[2,2'_二-1，3,5-三嗪]_4,4'，6,6'_四胺；
[0074] (8)6,6'-(2,6_ 吡啶二基)双[N-苯基-1，3,5-三嗪-2,4-二胺;或
[0075] (9)6，6 ' -(2，3-吡嗪二基)双[N-苯基-1，3，5-三嗪-2，4-二胺。
[0076] 在一些实施方案中，环A为任选取代的6元单环芳基。在一些实施方案中，环A为任 选取代的5-6元杂芳基。在一些实施方案中，环A为任选取代的6元杂芳基。
[0077] 在一些实施方案中，环A选自苯基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基、嘧啶基、P比 嗪基和噻唑基，其中环A被至多2个独立选自以下的取代基任选取代：卤素、-&-C4烷基、 C4[iM^^S、_Ci-C45S^^S、_NH-S(0)2 _(Ci-C4^S)、_S(0)2NH(Ci-C4^S)、 _CN、-S(0)2_ (&-C4烷基）、&-C4烷氧基、-NH(CrC4烷基）、-OH、-0CF3、-CN、-NH 2、-c (0)NH2、-c (0) NH(CrC4 烷基）、-(Χ0)-Ν(&-04烷基)2和被OH任选取代的环丙基。
[0078] 在一些实施方案中，环A选自苯基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基、啼啶基、吡 嗪基和噻唑基，其中环A被至多2个独立选自以下的取代基任选取代：卤素、-&-C4烷基、 C4[iM^^S、_Ci-C45S^^S、_NH-S(0)2 _(Ci-C4^S)、_S(0)2NH(Ci-C4^S)、 _CN、-S(0)2_ (Ci-C4烷基）、Ci-C4烷氧基、-NH( Ci-C4烷基）、_0H、-CN和-順2 0
[0079] 在一些实施方案中，环B选自苯基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、吡啶基、嘧 啶基、啦嗪基和吡嗪基，其中环B被至多2个独立选自以下的取代基任选取代:卤素、?4烷 基、 -C2_C4炔基、_Cl-C4[ii代烷基、-Cl -C4羟基烷基、C3_C6环烷基、_ ( C0-C2亚烷基)_0_Cl-C4烧 基、 _0_(Cl-C4亚烷基)_C3_C6环烷基、 -NH-S(0)2_(Cl-C4烷基）、_S(0)2NH(Cl -C4烷基）、_S(0)2_ NH-(C3-C6环烷基）、-S(0)2-(饱和杂环基）烷基）^NiKCi-Ca烷基）、_N (&-C4 烷基)2、-OH、C (0) -ο- (&-C4 烷基）、饱和杂环基和-NH2。
[0080] 在另一个实施方案中，化合物是具有以下结构式II的化合物：
[0081]
[)或其药学上可接受的盐，其中：
[0082] 环a '选自苯基、嘧啶-2-基、嘧啶-4-基、嘧啶-5-基、噁唑-4-基、异噁唑-3-基、噻 唑-2-基、吡啶-3-基和吡啶-2-基，其中环A'被一个或两个独立选自以下的取代基任选取 代：1 -丙烯基、-环丙基-OH、氯、氟、-CF3、-CHF2、-CH3、-CH 2CH3、-CF2CH3、-S (0) CH3、-S (0) 2CH3、-CH2OH、-CH (OH) CH3、_CH (OH) CF3、-OH、-〇CH3、-〇CF3、-OCH2CH3、_C (0) -NH2、-CH2NH2、-NH2、-NH (CH3)、-CN 和-N (CH3) 2;和
[0083] 环B '选自苯基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、哒嗪-4-基、异噁唑-4-基、异噁唑-3-基、噻 唑-5-基、嘧啶-5-基和吡唑-4-基，其中环B'被1-2个独立选自以下的取代基任选取代：卤 素; -CN; -OH;被卤素、CN或-OH任选取代的C1-C4烷基;-S(0)2-Ci_C4烷基;-S(0)_Ci_C4烷基;-S (0) rNH-Ci-C* 烷基；-S (0) 2-NH-CH2-CF3; -S (0) 2-N (Ci-C4 烷基）2; -S (0) 2-氮杂环丁烷-1 -基;-〇_Ci-C4烷基;_CH2_0_CH3、吗琳 _4-基、环丙基、环丙基-Ci-C4烷基、环丙基 -Ci-C4烷氧基、 环丙基_01'1、-3(0)2 _順-环丙基;-3(0)2_順-〇12 _环丙基;_〇(0)-〇1-〇4烷基，_〇(0)?!13;其 中：
[0084] a.环A'和环B'不同时为任选取代的6元单环芳基；
[0085] b.如果环A'是未取代的吡啶基，则环B'不是被1-3个独立选自以下的基团任选取 代的苯基：甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、CH(OH)CH 3、Cl、Br、S!^PCF3;
[0086] c.如果环A'是5元杂芳基，则环B'不是被1-2个独立选自以下的基团任选取代的苯 基:？、(：1、50201 3、(：(0)0013、甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、〇-苯基、0?3、0!1和勵 2;
[0087] d.化合物不是：
[0088] (D^-2-吡啶基 _6_(3-吡啶基)-13,5-三嗪-2,4-二胺；
[0089] (2)6-(6-甲氧基-3-吡啶基)-N2_(4-甲基苯基)_1，3，5-三嗪-2，4-二胺；
[0090] (3)6-(2-甲氧基-3-吡啶基)，2-(4-甲基苯基)-1，3,5-三嗪-2,4-二胺；
[0091] (4)N2-(3-氯苯基)-6-(2-氯-4-吡啶基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺；
[0092] (5)3-[[4-[4-氨基-6-[(3-氯苯基)氨基]-1，3,5-三嗪-2-基]-2-吡啶基]氨基]_ 1_丙醇；
[0093] (6)N-[3-[[4-氨基-6-(2-甲基-4-嘧啶基）-1，3,5_三嗪-2-基]氨基]-4-甲基苯 基]-N'_[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-脲；
[0094] (7)N4，N4'_二苯基-[2,2'_二-1,3,5-三嗪]-4,4'，6,6'_四胺；
[0095] (8)6,6'-(2,6_ 吡啶二基)双[N-苯基-1，3,5-三嗪-2,4-二胺;或
[0096 ] (9)6,6'-(2,3-吡嗪二基)双[N-苯基-1，3，5-三嗪-2，4-二胺。
[0097]在式II的某些实施方案中，环A'选自2-氯苯基、2-氟苯基、2-甲氧基苯基、3-羟基 苯基、3_氛基苯基、3_甲基亚横醜基苯基、3_甲基横醜基苯基、3_(1_甲醇）苯基、3_甲胺苯 基、3_甲氧基_2_氣苯基、5_甲氧基_2_氣苯基、3_羟基_2_氣苯基、5_羟基_2_氣苯基、5_轻 基 _3_氣苯基、3_甲醇苯基、3，5_二羟基苯基、3_二氣甲基_5_氣苯基、3_(1_羟基_2，2，2_二 氣乙基)苯基、3_( 1-羟基乙基)苯基、3_( 1-羟基环丙基)苯基、3_羟基甲基_5_苯酸、吡啶_2_ 基、3_氣啦啶_2_基、3_氛基啦啶_2_基、3，6_二氣啦啶_2_基、3_氣_6_甲氧基啦啶_2_基、3_ 氟-6-羟基吡啶-2-基、3-氟-6-氨基吡啶-2-基、4-氟-6-氨基吡啶-2-基、6-丙烯-1-基吡啶-2-基、6-丙-1-基吡啶-2-基、6-甲基氨基吡啶-2-基、3-氟-6-三氟甲基吡啶-2-基、4-氯-6-氨基吡啶-2-基、4-氟-6-氨基吡啶-2-基、4-氯-6-甲氧基吡啶-2-基、6-氨基吡啶-3-基、2-甲氧基吡啶-3-基、6-氨基吡啶-2-基、6-氯吡啶-2-基、6-三氟甲基吡啶-2-基、6-二氟甲基 吡啶-2-基、4-(CH 20H)-6-三氟甲基-吡啶-2-基、4-(CH20H)-6-氯-吡啶-2-基、6-(1,1-二氟 乙基）-4_氟吡啶-2-基、4-三氟甲基嘧啶-2-基、4-氨基嘧啶-2-基、6-三氟甲基-4-氨基嘧 啶-2-基、4-三氟甲基-6-氨基嘧啶-2-基、4-氨基嘧啶-2-基、2-氨基嘧啶-4-基、2-氨基嘧 啶 _5_基、4，6_二氣P比啶_2_基、3，5_二氣苯基、2，6_二氣苯基、2_甲基惡唑_4_基、3_甲基异 噁唑-5-基、4-三氟甲基-噻唑-2-基、4-甲基噻唑-2-基和苯基。
[0098] 在式II的某些实施方案中，环B'选自2_(吗啉-4-基）吡啶-4-基、2-二甲基氨基吡 啶 _4_基、3_ (2_甲氧基乙基)苯基、3，5_二氣苯基、3_氣苯基、3_氛基甲基苯基、3_氛基苯基、 3_(环丙基甲基)苯基、3-环丙基氨基磺酰基苯基、3-二甲基氨基磺酰基苯基、3-乙基磺酰基 苯基、3_氣苯基、3_甲基横醜基苯基、4_氣苯基、3_ (1_羟基异丙基)苯基、3_甲基横醜基_5_ 氯苯基、3-甲基横酰基_5_氣苯基、3-(N-2，2，2，-二氣乙基氨基横酰基)苯基、3-(N-环丙基） 苯甲酰胺、5-氯吡啶-3-基、5-氰基吡啶-3-基、5-氰基吡啶-3-基、5-氰基吡啶-4-基、5-氟吡 啶-3-基、2-(1-羟基异丙基)吡啶-4-基、5-三氟甲基吡啶-3-基、2-三氟甲基吡啶-4-基、2-二氟甲基吡啶-4-基、2-氯吡啶-4-基、6-氯吡啶-4-基、6-氰基吡啶-4-基、2-氰基吡啶-4-基、6-环丙基吡啶-4-基、6-乙氧基吡啶-4-基、6-氟吡啶-3-基、2-氟吡啶-4-基、5，6-二氟吡 啶-3-基、6-氟吡啶-4-基、6-甲基吡啶-4-基、2-二氟甲基吡啶-4-基、6-三氟甲基吡啶-4-基、2-(1-甲氧基环丙基)吡啶-4-基、2-环丙基吡啶-4-基、2-(丙-1-酮)吡啶-4-基、2-(1-甲 基环丙基）吡啶-4-基、2-(1-氰基环丙基）吡啶-4-基、2-(1-氰基异丙基）吡啶-4-基、异噁 唑-4-基、苯基、吡啶-4-基、吡啶羧酸-2-基(picolinat-2-y 1)、嘧啶-5-基、1-丙基吡唑-4-基、6-甲基-哒嗪-4-基和噻唑-5-基。
[0099] 本文提供的其它实施方案包括上文给出的具体实施方案的一个或多个的组合。
[0100] 在另一个实施方案中，化合物选自下表1给出的任一化合物 [0101] 表1.代表性化合物
[0102]
[0103]
[0104]
[01
[OlUDJ
[01u/j
[01
[(
[0110]
[0111]
[0112]
[0113]
[0114]
[0115]
[On /J
[0118]
[01
[ο
[0121] ___ Η
_：_
[0122] 包括了用于制备式I化合物或本文所述实施方案任一个的化合 物的方法，所述方 法包括使
5NH3反应。在一些实施方案中，前述方法包括步骤（1)使 t NH3反应。
[0123] 本发明一个方面的化合物可含有一个或多个不对称中心，因此作为外消旋体、外 消旋混合物、成比例（s ca 1 emi c)混合物和非对映体混合物以及基本不含另一种可能的对映 异构体或立体异构体的单一对映异构体或各个立体异构体存在。本文所用术语"基本不含 其它立体异构体"意指富集在一个或多个选择的立构中心上具有所选的立体化学结构的化 合物达至少约 60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98% 或 99% 的制 备物。术语"富集的"意指至少指定百分比的在一个或多个选择的立构中心上具有所选的立 体化学结构的化合物的制备物。获得或合成指定化合物的各个对映异构体或立体异构体的 方法是本领域已知的，并且可适用于最终的化合物或起始原料或中间体。
[0124] 在某些实施方案中，针对在一个或多个碳原子上具有选择的立体化学结构的一种 或多种结构富集式I或II的化合物。例如，富集呈特殊立体异构体的化合物达至少约60%、 65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98% 或 99%。
[0125] 式I或II化合物还可包含一个或多个同位素取代。例如，Η可为任何同位素形式，包 括1H、2H(D或氘)和 3Η(Τ或氚）；C可为任何同位素形式，包括nC、12C、13C和 14C;N可为任何同位 素形式，包括13n、14n和15N;0可为任何同位素形式，包括 150、160和180;F可为任何同位素形式， 包括18F等。例如，富集特殊同位素形式的H、C、N、0和/或F达至少约60%、65%、70%、75%、 80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99% 的化合物。
[0126] 除非另有说明，否则要了解，当所公开的化合物通过未指定立体化学结构并具有 一个或多个手性中心的结构命名或描述时，表示化合物的所有可能的立体异构体。
[0127] 本发明一个方面的化合物还可以多种互变异构形式表示，在这种情况下，本发明 的一个方面明确包括本文所述化合物的所有互变异构形式，即使可只提供单一的互变异构 形式(例如环状系统的烷基化可导致多个位置的烷基化，本发明的一个方面明确包括全部 这类反应产物和酮-烯醇互变异构体）。所述化合物的所有这类异构形式明确包括在本文 中。
[0128] 制备、纯化和/或处理活性化合物的相应盐（例如药学上可接受的盐)可能是适宜 或需要的。药学上可接受的盐的实例描述于Berge等，1977, "Pharmaceutically Acceptable Salts · ''J.Pharm. Sci ·第66卷，第1-19页。
[0129] 例如，如果化合物是阴离子的或具有可以是阴离子的官能团（例如-(：00!1可为-C0(T)，则可用合适的阳离子形成盐。合适的无机阳离子的实例包括但不限于碱金属离子例 如Na+和K+，碱土金属阳离子例如Ca 2+和Mg2+和其它阳离子例如Al3+。合适的有机阳离子的实 例包括但不限于铵离子（即NH4+)和取代的铵离子(例如NH 3R+、NH2R2+、NHR3+、NR4+)。一些合适 的取代铵离子的实例是来源以下的取代铵离子：乙胺、二乙胺、二环己基胺、三乙胺、丁胺、 乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、苄胺、苯基苄胺、胆碱、葡甲胺和氨丁三醇，以及氨基酸，例 如赖氨酸和精氨酸。常见的季铵离子的实例为N(CH 3)4+。
[0130 ]如果化合物是阳离子的或具有可以是阳离子的官能团（例如-NH2可为-NH3+ )，则可 用合适的阴离子形成盐。合适的无机阴离子的实例包括但不限于来源于下列无机酸的无机 阴离子:盐酸、氢溴酸、硫酸、硫磺酸、柠檬酸、亚硝酸、磷酸和亚磷酸。
[0131]合适的有机阴离子的实例包括但不限于来源于下列有机酸的有机阴离子:2_乙氧 基苯甲酸、乙酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯甲酸、樟脑磺酸、肉桂酸、柠檬酸、依地酸、乙二磺 酸、乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡萄糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羟基马来酸、羟基萘甲酸、羟乙磺 酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、粘酸、油酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、泛 酸、苯乙酸、苯磺酸、丙酸、丙酮酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、酒石酸、甲苯磺酸和戊 酸。本文明确包括表1中各化合物的甲磺酸盐。合适的聚合有机阴离子的实例包括但不限于 来源于下列聚合酸(polymeric acid)的聚合有机阴离子:单宁酸、羧甲基纤维素。
[0132] 本文提供的化合物因此包括化合物本身及其盐、水合物及其前药，若适用的话。可 通过附加合适的官能团将本文提供的化合物修饰并转化成前药以提高所选的生物学性质， 例如靶向特定组织。所述修饰（即前药)是本领域已知的，包括提高生物渗透入指定生物区 室（例如血液、淋巴系统、中枢神经系统）、提高口服可利用性、提高溶解度以允许通过注射 给药、改变代谢和改变排泄率的修饰。前药的实例包括在给予对象时能够提供活性化合物 的酯(例如磷酸酯、氨基酸(例如缬氨酸)酯）、氨基甲酸酯和其它药学上可接受的衍生物。若 适用的话，本文明确包括表1中各化合物的磷酸钙和磷酸钠。若适用的话，本文明确包括表1 中各化合物的氨基酸(例如缬氨酸)酯。
[0133] 组合物和给药途径
[0134] 用于本文所述方法的化合物可在给予对象前与药学上可接受的载体或辅助剂一 起配制成药学上可接受的组合物。在另一个实施方案中，所述药学上可接受的组合物还包 含有效实现调节疾病或疾病症状(包括本文所述疾病或疾病症状)的量的其它治疗剂。
[0135] 术语"药学上可接受的载体或辅助剂"是指与本发明一个方面的化合物一起给予 对象、不破坏其药理活性且当以足以递送治疗量的化合物的剂量给予时是无毒的载体或辅 助剂。
[0136] 可用于本发明一个方面的药物组合物的药学上可接受的载体、辅助剂和溶媒包括 但不限于离子交换剂、氧化铝、硬硼酸铝、卵磷脂、自乳化递药系统(SEDDS)例如d-α-生育酚 聚乙二醇1000琥珀酸酯、用于药物剂型中的表面活性剂例如Tween或其它类似的聚合物递 送基质、血清蛋白质例如人血清白蛋白、缓冲物质例如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、 饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸 氢钾、氯化钠、锌盐、胶态硅石、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、 羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸脂、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段共聚物、聚乙二醇和羊毛脂。环糊 精例如α-、β_和γ -环糊精或化学修饰的衍生物例如羟基烷基环糊精，包括2-和3-羟基丙 基-β-环糊精或其它增溶衍生物也可有利地用于提高本文所述式的化合物的递送。
[0137] 本发明一个方面的药物组合物可口服、胃肠外、通过吸入喷雾、局部、直肠、经鼻、 含服、阴道或通过植入药库给予，优选通过口服给药或经注射给药。本发明一个方面的药物 组合物可含有任何常规无毒的药学上可接受的载体、辅助剂或溶媒。在某些情况下，制剂的 pH可用药学上可接受的酸、碱或缓冲剂调节以提高配制的化合物或其递送形式的稳定性。 本文所用术语胃肠外包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、 损害内和颅内注射或输注技术。
[0138] 药物组合物可呈无菌注射制剂的形式，例如作为无菌注射用水性或油性混悬剂。 这种混悬剂可使用合适的分散剂或润湿剂（例如Tween 80)和助悬剂按照本领域已知技术 制备。无菌注射制剂也可为无毒胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射用溶液剂或混 悬剂，例如作为1，3-丁二醇中的溶液剂。可使用的可接受的溶媒和溶剂为甘露糖醇、水、林 格氏液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌固定油按惯例用作溶剂或悬浮介质。为此，可使用任 何平和的固定油，包括合成甘油单酯或甘油二酯。脂肪酸，例如油酸及其甘油酯衍生物可用 于制备注射剂，天然药学上可接受的油，例如橄榄油或蓖麻油，尤其呈其聚氧乙烯化形式也 如此。这些油溶液剂或混悬剂还可含有长链醇稀释剂或分散剂或羧甲基纤维素或通常用于 药学上可接受的剂型的制剂(例如乳剂和/或混悬剂）中的类似分散剂。其它常用的表面活 性剂例如Tween或Span和/或常用于制备药学上可接受的固体、液体或其它剂型的其它类似 乳化剂或生物利用度增强剂也可用于制剂的目的。
[0139] 本发明一个方面的药物组合物可以任何口服可接受的剂型口服给予，包括但不限 于胶囊剂、片剂、乳剂和水性混悬剂、分散剂和溶液剂。在口服使用的片剂的情况下，常用的 载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还加入润滑剂，例如硬脂酸镁。对于胶囊剂形式的口服给 药，有用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。在口服给予水性混悬剂和/或乳剂时，可将 活性成分悬浮或溶于与乳化剂和/或助悬剂混合的油相中。如有需要，可加入某些甜味剂 和/或矫味剂和/或着色剂。
[0140] 本发明一个方面的药物组合物还可以栓剂的形式给予用于直肠给药。这些组合物 可通过将本发明一个方面的化合物与合适的无刺激性的赋形剂混合来制备，所述赋形剂在 室温下为固体但在直肠温度下为液体因此在直肠中融化以释放活性组分。所述材料包括但 不限于可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
[0141] 本发明一个方面的药物组合物的局部给药当所需治疗涉及通过局部施用容易达 到的部位或器官时是有用的。对于局部施用于皮肤，药物组合物可用含有悬浮或溶于载体 中的活性组分的合适软膏配制。用于本发明一个方面的化合物的局部给药的载体包括但不 限于矿物油、液体石油、白石油(white petroleum)、丙二醇、聚氧乙稀聚氧丙稀化合物、乳 化蜡和水。或者，药物组合物可用含有悬浮或溶于载体中的活性化合物的合适的洗剂或乳 膏与合适的乳化剂一起配制。合适的载体包括但不限于矿物油、山梨醇酐单硬脂酸酯、聚山 梨醇酯60、十六烷基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。本发明一个方面的药 物组合物还可通过直肠栓剂或以合适的灌肠剂局部施用于下肠道。局部经皮贴剂也包括在 本发明的一个方面中。
[0142] 本发明一个方面的药物组合物可通过经鼻气雾剂或吸入剂给予。这类组合物按照 药物制剂领域众所周知的技术制备，并且可使用苯甲醇或其它合适的防腐剂、提高生物可 利用度的吸收促进剂、碳氟化合物和/或本领域已知的其它增溶剂或分散剂，在盐水中制备 成溶液剂。
[0143] 当本发明一个方面的组合物包含本文所述式的化合物和一种或多种其它治疗剂 或预防剂的组合时，所述化合物和其它作用剂应以在单一疗法方案中通常给予的剂量的约 1 %与100 %之间、更优选约5 %与95 %之间的剂量水平存在。其它作用剂可有别于本发明一 个方面的化合物单独、作为多剂量方案的一部分给予。或者，这些作用剂可为单一剂型的一 部分，与本发明一个方面的化合物一起在单一组合物中混合。
[0144] 本文所述化合物可通过例如注射、静脉内、动脉内、皮下、腹膜内、肌内或皮下；或 口服、含服、经鼻、跨粘膜、局部、以眼用制剂或通过吸入剂每4-120小时，以约0.5-约100mg/ kg体重的剂量范围，或者以1 mg和10 0 Omg/剂之间的剂量或者按照具体药物的规格给予。本 文的方法考虑给予有效量的化合物或化合物组合物以达到所需的或规定的效果。通常，本 发明一个方面的药物组合物可每天给予约1-约6次，或备选，作为连续输注给予。这类给药 可用作慢性或急性疗法。可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量可随受治疗的 宿主和具体的给药方式而变化。典型的制剂可含有约5%-约95%活性化合物(w/w)。或者， 所述制剂含有约20 % -约80 %活性化合物。
[0145] 可能需要比上述剂量低或高的剂量。任何特定对象的具体剂量和治疗方案将取决 于各种因素，包括所使用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药 时间、排泄率、药物组合、疾病的严重程度和进程、病况或症状、对象对疾病、病况或症状的 易感性和治疗医生的判断。
[0146] 在对象状况改善时，如有需要，可给予本发明一个方面的维持剂量的化合物、组合 物或组合。随后，可随症状而变，降低给药的剂量或频率或两者到当症状减轻到所需水平时 所保持的改善状况的水平。然而，在长期基础上在任何疾病症状复发时，对象可能需要间歇 治疗。
[0147] 包含结构式I或II的化合物或本文实施方案的任一个中描述的化合物的上述药物 组合物还可包含可用于治疗癌症的另一种治疗剂。
[0148] 使用方法
[0149] 可通过实施例A所述方法或类似方法测试本文提供的化合物针对IDH2突变体(例 如IDH2R140Q和IDH2R172K)的抑制活性。
[0150]提供用于抑制突变型IDH2活性的方法，所述方法包括使有需要的对象与结构式I 或II的化合物、本文实施方案的任一个描述的化合物或其药学上可接受的盐接触。在一个 实施方案中，待治疗的癌症的特征在于IDH2的突变型等位基因，其中IDH2突变导致对象中 酶催化α-酮戊二酸NAPH依赖型地还原成R(-)_2-羟基戊二酸的新的能力。在该实施方案的 一个方面，突变型I DH2具有R140X突变。在该实施方案的另一个方面，R140X突变是R140Q突 变。在该实施方案的另一个方面，R140X突变是R140W突变。在该实施方案的另一个方面， R140X突变是R140L突变。在该实施方案的另一个方面，突变型IDH2具有R172X突变。在该实 施方案的另一个方面，R172X突变是R172K突变。在该实施方案的另一个方面，R172X突变是 R172G突变。
[0151]还提供治疗特征在于存在IDH2的突变型等位基因的癌症的方法，所述方法包括将 (a)结构式I或II的化合物、本文实施方案的任一个中描述的化合物或其药学上可接受的盐 或(b)包含(a)和药学上可接受的载体的药物组合物给予有需要的对象的步骤。
[0152] 在一个实施方案中，待治疗的癌症的特征在于IDH2的突变型等位基因，其中IDH2 突变导致患者中酶催化α-酮戊二酸NAPH依赖型地还原成R(-)_2-羟基戊二酸的新的能力。 在该实施方案的一个方面，突变型IDH2具有R140X突变。在该实施方案的另一个方面，R140X 突变是R140Q突变。在该实施方案的另一个方面，R140X突变是R140W突变。在该实施方案的 另一个方面，R140X突变是R140L突变。在该实施方案的另一个方面，突变型IDH2具有R172X 突变。在该实施方案的另一个方面，R172X突变是R172K突变。在该实施方案的另一个方面， R172X突变是R172G突变。可通过对细胞样品进行测序以确定IDH2的氨基酸140和/或172处 突变的存在和特殊性质(例如存在的带电荷的氨基酸），来分析癌症。
[0153] 虽不受理论的束缚，但是申请人认为，其中不考虑癌细胞的性质或身体的部位， IDH2突变导致酶催化α-酮戊二酸NAPH依赖型地还原成R(-)-2-羟基戊二酸的新的能力的 IDH2的突变型等位基因（具体地说IDH2的R140Q和/或R172K突变），其特征在于所有癌症类 型的亚型。因此，本发明一个方面的化合物和方法可用于治疗特征在于赋予所述活性的 IDH2的突变型等位基因、具体地说IDH2R140Q和/或R172K突变的存在的任何类型的癌症。
[0154] 在该实施方案的一个方面，通过测量对象的2HG的水平，来监测癌症治疗的功效。 通常在治疗前测量2HG的水平，其中水平升高表明使用式I或II的化合物或本文所述实施方 案的任一个描述的化合物以治疗癌症。一旦确定水平升高，在治疗进程中和/或在终止治疗 后测定2HG的水平以证实功效。在某些实施方案中，只在治疗进程中和/或在终止治疗后测 定2HG的水平。在治疗进程中和在治疗后2HG水平降低表明有功效。同样，在治疗进程中和在 治疗后测定2HG水平不升高也表明有功效。通常，可连同癌症治疗功效的其它众所周知的测 定(例如肿瘤和/或其它癌症相关病变的数目和大小降低、对象一般健康状况改善和与癌症 治疗功效有效的其它生物标记的改变)一起，利用这些2HG测量。
[0155] 可通过LC/MS检测样品中的2HG。将样品80 : 20与甲醇混合，在4摄氏度下以3， OOOrpm离心20分钟。可收集所得上清液，在进行LC-MS/MS以评价2-羟基戊二酸水平之前保 存在-80摄氏度下。可采用各种不同的液相色谱法(LC)分离方法。每种方法可通过负电喷雾 电离(ESI，-3.0kV)与以多重反应监测(MRM)模式操作的三重四极质谱仪偶联，其MS参数在 注入代谢物标准溶液中优化。可根据之前报告的方法的变化形式，使用10mM三丁胺作为流 动相中的离子配对剂，通过反相色谱法分离代谢物(Luo等，J Chromatogr A 1147,153-64， 2007)。一种方法允许解析 TCA 代谢物:t = 0,50%B;t = 5,95%B;t = 7,95%B;t = 8,0%B，其 中B是指100%甲醇的有机流动相。另一种方法是对2-羟基戊二酸有特异性的，在5分钟内从 50%到95%13(上述定义的缓冲剂)运行快速线性梯度。如上所述，可使用37116作;[取(11'0-RP，100mm X 2mm，2 · Ιμπι粒径(Phenomonex)作为柱。可将峰面积与已知浓度的纯代谢物标准 进行比较，来量化代谢物。可按例如Munger等，Nat Biotechnol 26，1179-86,2008中所述， 自13C_谷氨酰胺进行代谢物流量研究。
[0156] 在一个实施方案中，直接评价2HG。
[0157] 在另一个实施方案中，评价了在进行分析方法的过程中形成的2HG的衍生物。举例 来说，这类衍生物可以是MS分析中形成的衍生物。衍生物可包括盐加合物，例如Na加合物、 水合物变体或同样是盐加合物的水合物变体，例如MS分析中形成的例如Na加合物。
[0158] 在另一个实施方案中，评价了2HG的代谢衍生物。实例包括由于2HG的存在积累或 升高或降低的物类，例如将与2HG(例如R-2HG)有关的戊二酸或谷氨酸盐。
[0159] 示例性2HG衍生物包括脱水衍生物，例如下面提供的化合物或其盐加合物：
[0160]
[0161] 在一个实施方案中，癌症是其中在诊断或治疗时至少30、40、50、60、70、80或90% 的肿瘤细胞携带IDH2突变，具体讲为IDH2R140Q、R140W或R140L和/或R172K或R172G突变的 肿瘤。
[0162] 在另一个实施方案中，本发明的一个方面提供通过以有效治疗癌症的量将式I或 式II化合物给予患者来治疗患者的选自以下癌症的方法:成胶质细胞瘤(神经胶质瘤）、骨 髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增殖性瘤(MPN)、急性髓细胞白血病(AML)、肉瘤、黑素瘤、非 小细胞肺癌、软骨肉瘤、胆管癌或血管免疫母细胞性淋巴瘤。在一个更具体的实施方案中， 待治疗的癌症是神经胶质瘤、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增殖性瘤(MPN)、急性髓细胞 白血病(AML)、黑素瘤、软骨肉瘤或血管免疫母细胞性非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
[0163] 在另一个实施方案中，本文所述方法用于治疗患者的神经胶质瘤（成胶质细胞 瘤）、急性髓细胞白血病、肉瘤、黑素瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、胆管癌（例如肝内胆管癌 (IHCC))、软骨肉瘤、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增殖性瘤(MPN)、前列腺癌、慢性粒-单 核细胞白血病（CMML)、B-急性成淋巴细胞白血病（B-ALL)、B-急性成淋巴细胞白血病（B-ALL)、骨髓样肉瘤、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、直肠癌或血管免疫母细胞性非霍奇金淋巴瘤 (NHL)〇
[0164] 在另一个实施方案中，待治疗的癌症是选自以下的晚期血液系统恶性肿瘤:淋巴 瘤（例如非霍奇金淋巴瘤(NHL)例如B-细胞淋巴瘤（例如伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血 病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B-细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞性大 细胞淋巴瘤、前体B-成淋巴细胞淋巴瘤和套细胞淋巴瘤)和T-细胞淋巴瘤(例如蕈样肉芽肿 病、间变性大细胞淋巴瘤和前体T-成淋巴细胞淋巴瘤）。
[0165] 已知2HG在遗传性代谢病症2-羟基戊二酸酸尿症中蓄积。该疾病因缺乏将2HG转化 为 α-KG 的酶 2-羟基戊二酸脱氢酶引起（Struys，E.A.等，Am J Hum Genet 76,358-60 (2005))。如通过MRI和CSF分析评价的一样，患有2-羟基戊二酸脱氢酶缺乏症的患者在脑中 蓄积2HG，发生脑白质病，并有发生脑肿瘤的风险（Aghili，M.，Zahedi，F.和Rafiee，J Neurooncol 91,233-6(2009);Kolker，S.，Mayatepek，E.和Hoffmann, G·F·Neuropediatrics 33,225-31(2002);Wajner，M.，Latini，A.，Wyse，A.T.和Dutra-Filho，C.S.J Inherit Metab Dis 27,427-48(2004))。此外，脑2HG的水平升高导致ROSA 平提高（Kolker，S.等，Eur J Neurosci 16,21-8(2002) ;Latini, Α·等，Eur J Neurosci 17,2017-22(2003))，可能引起癌症风险增加。2HG用作匪DA受体激动剂的能力可能促进这 种作用(Kolker，S.等，Eur J Neurosci 16,21-8(2002))。通过竞争性抑制利用谷氨酸盐 和/或aKG的酶，2HG还可能对细胞有毒性。这些包括允许利用谷氨酸氮用于氨基酸和核酸生 物合成的转氨酶和aKG依赖型脯氨酰羟化酶例如调节Hifl-α水平的那些酶。
[0166] 因此，按照另一个实施方案，本发明的一个方面提供通过将结构式I或II的化合物 或本文所述实施方案任一个描述的化合物给予患者来治疗患者的2-羟基戊二酸酸尿症，特 别是D-2-羟基戊二酸酸尿症的方法。
[0167] 本文所述治疗方法还可包括在用结构式I或II的化合物或本文所述实施方案任一 个描述的化合物治疗之前和/或之后的各种评价步骤。
[0168] 在一个实施方案中，在用结构式I或II的化合物或本文所述实施方案任一个描述 的化合物治疗之前和/或之后，所述方法还包括评价癌的生长、大小、重量、侵袭力、阶段和/ 或其它表型的步骤。
[0169] 在一个实施方案中，用式I或II的化合物或本文所述实施方案任一个描述的化合 物治疗之前和/或之后，所述方法还包括评价癌的IDH2基因型的步骤。这可通过本领域的普 通方法实现，例如DNA测序、免疫分析和/或评价2HG的存在、分布或水平。
[0170] 在一个实施方案中，用式I或II的化合物或本文所述实施方案任一个描述的化合 物治疗之前和/或之后，所述方法还包括测定对象的2HG水平的步骤。这可如下实现:通过分 光镜分析，例如核磁共振型分析，例如MRI和/或MRS测量，例如通过质谱法进行的体液的样 品分析例如血清、骨髓、血液、尿液或脊髓液分析或通过手术材料的分析。
[0171] 组合疗法
[0172] 在一些实施方案中，本文所述方法包括将第二疗法例如另外的癌症治疗剂或另外 的癌症治疗给予有需要的对象的另外的步骤。示例性的另外的癌症治疗剂包括例如化学疗 法、靶向疗法、抗体疗法、免疫疗法和激素疗法。另外的癌症治疗包括例如：手术和放射疗 法。下面提供这些治疗每一个的实例。
[0173] 本文所用的有关另外的癌症治疗剂的术语"共同给予"意指另外的癌症治疗剂可 连同本发明一个方面的化合物作为单一剂型的一部分(例如包含本发明一个方面的化合物 和上述第二治疗剂的本发明一个方面的组合物)或作为单独的多个剂型一起给予。或者，另 外的癌症治疗剂可在给予本发明一个方面的化合物之前给予、序贯给予或之后给予。在这 类联合疗法治疗中，本发明一个方面的化合物和第二治疗剂两者通过常规方法给予。将包 含本发明一个方面的化合物和第二治疗剂两者的本发明一个方面的组合物给予对象不妨 碍在治疗进程的另一时间将该相同治疗剂、任何其它的第二治疗剂或本发明一个方面的任 何化合物分别给予所述对象。术语本文所用的有关另外的癌症治疗的"共同给予"意指另外 的癌症治疗可在给予本发明一个方面的化合物之前发生、序贯发生或之后发生。
[0174] 在一些实施方案中，另外的癌症治疗剂是化学疗法药剂。用于癌症疗法的化学疗 法药剂的实例包括例如抗代谢物(例如叶酸、嘌呤和嘧啶衍生物）、烷化剂(例如氮芥、亚硝 基脲类、铂、烷基磺酸盐、肼类、三氮烯类、吖丙啶类、纺锤体毒素、细胞毒性剂、拓扑异构酶 抑制剂等)和低甲基化剂(例如地西他滨(5-氮杂-脱氧胞苷）、zebularine、异硫氰酸酯、阿 扎胞苷(5-氮杂胞苷）、5-氟-2 脱氧胞苷、5，6-二氢-5-氮杂胞苷等）。示例性治疗剂包括阿 柔比星、放线菌素、阿利维A酸、六甲蜜胺、氨基蝶呤、氨基酮戊酸、氨柔比星、安吖啶、阿那格 雷、三氧化二砷、天冬酰胺酶、阿曲生坦、贝洛替康、贝沙罗汀、苯达莫司汀、博来霉素、硼替 佐米、白消安、喜树碱、卡培他滨、卡钼、卡波醌、卡莫氟、卡莫司汀、塞来考昔、苯丁酸氮芥、 氮芥、顺钼、克拉屈滨、氯法拉滨、Cr i santaspase、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、D放线菌 素、柔红霉素、地西他滨、秋水仙胺、多西他赛、多柔比星、乙法昔罗、Elesclomol、依沙芦星、 依诺他滨、表柔比星、雌莫司汀、依托格鲁、依托泊苷、氟尿苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶(5FU)、福 莫司汀、吉西他滨、卡氮芥植入剂、羟基脲、羟基脲、伊达比星、异环磷酰胺、伊立替康、伊罗 夫文、伊沙匹隆、拉罗他赛、亚叶酸、多柔比星脂质体、柔红霉素脂质体、氯尼达明、洛莫司 汀、硫蒽酮、甘露舒凡、马索罗酚、美法仑、巯基嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、氨基酮戊酸甲酯、二 溴甘露醇、米托胍腙、米托坦、丝裂霉素、米托蒽醌、奈达铂、尼莫司汀、奥利美生、 Omacetaxine、奥他赛、奥沙利铂、紫杉醇、培门冬酶、培美曲塞、喷司他丁、吡柔比星、匹蒽 醌、普卡霉素、扑吩姆钠、泼尼莫司汀、丙卡巴肼、雷替曲塞、雷莫司汀、卢比替康、沙帕他滨、 司莫司汀、Sitimagene ceradenovec、Strataplatin、链佐星、他拉泊芬、替加氟-尿啼啶、替 莫泊芬、替莫唑 胺、替尼泊苷、替司他赛、睾内酯、四硝酸酯、塞替派、噻唑呋林、硫鸟嘌呤 (Tioguanine)、替匹法尼、托泊替康、曲贝替定、三亚胺醌、曲他胺、Triplatin、维A酸、曲奥 舒凡、曲磷胺、乌拉莫司汀、戊柔比星、维替泊芬、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春氟宁、长 春瑞滨、伏林司他、佐柔比星和本文所述的其它细胞生长抑制剂或细胞毒性剂。
[0175] 因为一些药物在一起比单独的更好地起作用，所以通常在同一时间给予两种或更 多种药物。两种或更多种化学疗法药剂常常用作联合化学疗法。
[0176] 在一些实施方案中，另外的癌症治疗剂是分化剂。所述分化剂包括类视黄醇类(例 如全反式-维甲酸（ATRA)、9_顺式维甲酸、13-顺式维甲酸（13-cRA)和4-羟基-phenretinamide(4-HPR));三氧化二砷；组蛋白脱乙酰酶抑制剂HDAC(例如氮杂胞苷 (Vidaza)和丁酸盐类（例如苯基丁酸钠））；杂合极性化合物（例如六甲撑双乙酰胺 ((HMBA));维生素 D和细胞因子(例如集落刺激因子包括G-CSF和GM-CSF和干扰素）。
[0177] 在一些实施方案中，另外的癌症治疗剂是靶向疗法药剂。靶向疗法构成对癌细胞 的失调(deregulated)蛋白质有特异性的药剂的使用。小分子革E1向疗法药物一般是癌细胞 内的突变、过量表达或另外的关键蛋白质的酶结构域的抑制剂。主要实例为酪氨酸激酶抑 制剂例如阿昔替尼、波舒替尼、Cediranib、达沙替尼、埃罗替尼、伊马替尼、吉非替尼、拉帕 替尼、来他替尼、尼洛替尼、司马沙尼、索拉非尼、舒尼替尼和凡德他尼，以及细胞周期蛋白 依赖型激酶抑制剂例如阿伏西地和塞利西利。单克隆抗体疗法是其中治疗剂是与癌细胞表 面上的蛋白质特异性结合的抗体的另一种策略。实例包括通常用于乳腺癌的抗HER2/neu抗 体曲妥珠单抗(HERCEPTIN?)和通常用于各种B细胞恶性肿瘤的抗⑶20抗体利妥昔单 抗和托西莫单抗。其它示例性抗体包括西妥昔单抗、帕尼单抗、曲妥珠单抗、阿仑珠单抗、贝 伐单抗、依决洛单抗和吉妥珠单抗。示例性融合蛋白包括阿柏西普(Af 1 ibercept)和地尼白 介素-毒素连接物。在一些实施方案中，靶向疗法可与本文所述化合物，例如双胍例如二甲 双胍或苯乙双胍，优选苯乙双胍联用。
[0178] 靶向疗法还可包括小肽，如可与细胞表面受体或瘤周围的受影响的胞内基质结合 的"导向基团"。如果核素在细胞附近衰减，则与这些肽连接的放射性核素(例如RGD)最终杀 死癌细胞。这类疗法的实例包括BEXXAR?。
[0179] 在一些实施方案中，另外的癌症治疗剂是免疫疗法药剂。癌症免疫疗法是指经设 计诱导对象自身的免疫系统抗击肿瘤的不同类型的治疗策略。用于产生针对肿瘤的免疫应 答的同期方法包括浅表性膀胱癌的泡内BCG免疫疗法和在肾细胞癌和黑素瘤对象中诱导免 疫应答的干扰素和其它细胞因子的使用。
[0180] 同种异体造血干细胞移植可视为免疫疗法的一种形式，因为供体免疫细胞常常可 以移植物抗宿主作用攻击肿瘤。在一些实施方案中，免疫疗法药剂可与本文所述化合物或 组合物联用。
[0181] 在一些实施方案中，另外的癌症治疗剂是激素疗法药剂。通过提供或阻断某些激 素可抑制一些癌的生长。激素敏感性肿瘤的普通实例包括乳腺癌和前列腺癌的某些类型。 除去或阻断雌激素或睾酮常常是一种另外的重要治疗。在某些癌症中，给予激素激动剂例 如孕激素可能在治疗上是有益的。在一些实施方案中，激素疗法药剂可与本文所述化合物 或组合物联用。
[0182] 其它可能的额外的治疗形式包括伊马替尼、基因疗法、肽和树突细胞疫苗、合成的 氯毒素和放射性标记的药物和抗体。 实施例
[0183] 缩略语
[0184] anhy·-无水的 H2SO4-硫酸
[0185] aq._含水的 MM-氯化铵
[0186] min-分钟 K0H-氢氧化钾
[0187] mL-毫升 NaOH-氛氧化纳
[0188] mmol-晕摩尔 K2CO3-碳酸钟
[0189] mol-摩尔 Na2C〇3-碳酸钠
[0190] MS-质谱法 TFA-三氟乙酸
[0191] NMR-核磁共振 Na2S〇4_硫酸钠
[0192] TLC-薄层色谱法 NaBHf硼氢化钠
[0193] HPLC-高效液相色谱法 NaHC03-碳酸氢钠
[0194] Hz-赫兹 LiHMDS-六甲基二硅烷基氨基锂
[0195] δ-化学位移 NaHMDS-六甲基二硅烷基氨基
[0196] J-耦合常数 钠
[0197] s-单峰 LAH-氢化铝锂
[0198] d-双峰 NaBH4_硼氢化钠
[0199] t-三重峰 LDA-二异丙基氨基锂
[0200] q-四重峰 Et3N_三乙胺
[0201 ] m-多重峰 DMAP-4_(二甲基氨基)吡啶
[0202] br-宽峰 DIPEA-Ν,Ν-二异丙基乙胺
[0203] qd_四双峰 NH40H-氢氧化铵
[0204] dquin-双五重峰 EDCI-1-乙基-3_(3_二甲基氨基丙
[0205] dd_双双峰 基）碳二亚胺
[0206] dt-双三重峰 HOBt-Ι-羟基苯并三唑
[0207] CHC13-氯仿 HATU-0_(7-氮杂苯并三唑1-
[0208] DCM-二氯甲烷 基)-Ν,Ν,Ν'，Ν'-四甲基脲鑰
[0209] DMF-二甲基甲酰胺 81熟卩-2,2'-双(二苯膦基)-1，1'-联
[0210] Et2〇-乙醚 萘基
[0211] EtOH-乙醇
[0212] EtOAc-乙酸乙酯
[0213] MeOH-甲醇
[0214] MeCN-乙腈
[0215] PE-石油醚
[0216] THF-四氢呋喃
[0217] AcOH-乙酸
[0218] HC1-盐酸
[0219] 本文可使用的试剂购自商业来源，并且无需进一步纯化便可使用。核磁共振(NMR) 谱在Brucker AMX_400NMR(Brucker，Switzerland)上获得。化学位移以自四甲基硅烷的百 万分率(ppm，δ)低磁场报告。质谱用来自Waters LCT T0F质谱仪(Waters，USA)的电喷雾电 离(ESI)运行。
[0220] 对于本节公开的示例性化合物，立体异构体的描述(例如(R)或(S)立体异构体)表 明该化合物的制备使得以指定立构中心富集达至少约90 %、95 %、96 %、97 %、98 %或99 % 的化合物。下文所述各示例性化合物的化学名称通过ChemDraw软件产生。可通过本领域已 知方法，例如按照国际专利申请PCT/CN2013/000009和美国专利申请13/735,467所述类似 程序，制备式I化合物。
[0221] 实施例1.制备其中A为苯基的式I化合物的中间体的制备
[0222]
[0223] 2，4-二氯-6-苯基-1，3，5-三嗪的制备。在氮气保护下，在-10至_0°C下，向2，4，6-三氯-[1，3，5 ]三嗪（120g，0.65 2mo 1)的无水THF (1200mL)溶液中滴加到苯基溴化镁(217mL， 0.651mol，3M乙醚中）。在加入后，使混合物升温至室温，并搅拌2小时。使反应物冷却至0°C， 通过加入饱和NH4Cl(200mL)猝灭，然后用乙酸乙酯萃取。有机层经干燥、浓缩并通过柱色谱 法纯化（用石油醚洗脱），得到2，4-二氯-6-苯基-1，3，5-三嗪，为白色固体。 1H NMR(CDC13)δ 7·51-7·55(m，2Η)，7·64-7·67(m，1Η)，8·49-8·63(m，2Η)。
[0224] 实施例2.用于制备其中环A是取代的吡啶-2-基的式I化合物的中间体的制备。
[0225]
[0226] 步骤1 :6-氯-吡啶-2-甲酸甲酯（2-II)的制备。向6-氯-吡啶-2-甲酸（48g， 0.3lmo 1)的甲醇(770ml)溶液中加入浓HC1 (6ml)。在80°C下搅拌混合物48小时，然后浓缩除 去挥发物。粗产物用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHC03溶液洗涤。有机层用无水Na 2S〇4干燥，浓 缩，得到6-氯-吡啶-2-甲酸甲酯，为白色固体。
[0227]
iS：m/z 172.0(M+H)+〇
[0228] 便用合迠的起始原料2-1，采用步骤1给出的程序，得到下列中间体(2-II)。
[0229] 6-三氟甲基-吡啶-2-甲酸甲酯。
[0230]
,C-MS：m/z 206(M+H)+〇
[0231] 步骤2:6-(6-氯吡啶-2-基）-1，3,5-三嗪-2,4二酮的制备。向恥（328,0.16!11〇1)的 乙醇（500mL)溶液中加入6-氯吡啶甲酸甲酯（32g，0.16mol)和双缩脲（5.3g，0.052molMi 混合物加热回流1小时。然后浓缩得到残余物，将其倒入水中，加入饱和NaHC03溶液以调节 pH至7，经过滤收集沉淀的固体，干燥得到6-( 6-氯吡啶-2-基)-1，3，5-三嗪-2，4二酮。
[0232]
￡-MS：m/z 225(M+H)+〇
[0233] 用合适的中间体2-II开始，采用步骤2得到下列中间体(2-111)。
[0234] 6-(6-二氟甲基-吡啶-2-基)-1Η-1，3，5-三嗪-2，4二酮，为灰白色固体。
[0235] LC-MS：m/z 259(M+H)+〇 Ο：
[0236] 6-吡啶-2-基-1Η-1，3，5-三嗪-2，4 二酮。
[0237]
[0238] ΧΗ NMR(DMS0-d4)：5ll.9-12.5(s,lH),11.3-11.6(s,lH),8.7-8.9(m,lH),8.2-8·4(m，1Η)，8·0-8·2(m，1Η)，7·6-7·8(m，1Η)〇
[0239] 步骤3:2，4-二氯-6-( 6-氯吡啶-2-基)-1，3，5-三嗪的制备
[0240] 向 6-(吡啶-2-基）-1,3,5-三嗪-2,4(1H，3H)二酮（3.0g，013mol)的 P0Cl3(48mL)溶 液中加入?(：15(238,0.1!11 〇1)。在100°0下搅拌混合物2小时，然后浓缩除去挥发物。残余物用 乙酸乙酯稀释，用饱和NaHC03溶液洗涤。有机层经无水Na 2S〇4干燥，浓缩，得到2，4-二氯-6-(6_氣吡啶_2_基)_1，3，5_二嘆，为褐色固体。
[0241 ]LC-MS：m/z 260.9(M+H) + 〇
IN Ml ：〇
[0242] 采用步骤3给出的程序以及合适的起始中间体2-111，得到下列中间体(2-IV)。
[0243] 2，4-二氯-6-( 6-三氟甲基-吡啶-2-基)-1，3，5-三嗪，为浅黄色固体。
[0244]-MS:m/z 294.9(M+H)+。
u
[0245] 2，4-二氯-6-吡啶-2-基-[1，3，5]三嗪（1 · 0g，80 % )，为褐色固体。
[0246] MS:m/z 227.0(M+H)+。
[0247] .......i为取代的芳基或杂芳基的式I化合物的制备。
[0248]
[0249] 4-氯-6-(4-三氟甲基-嘧啶-2-基）-[1，3,5]三嗪-2-基]-(2-三氟甲基-吡啶-4-基)_胺的制备。向2,4_二氯-6-(4-(三氟甲基）嘧啶-2-基)-1，3,5_三嗪（981mg，3.31mmol) 的THF(80mL)溶液中加入2-(三氟甲基）吡啶-4-胺（590mg，3 · 64mmo 1)和NaHC03 (556mg， 6.6mmol)。在回流中搅拌混合物18小时。使混合物浓缩并倒入水中，用乙酸乙酯萃取，经硫 酸钠干燥，过滤，浓缩，得到残余物，将其用Si0 2色谱法纯化，得到4-氯-6-(4-三氟甲基-嘧 啶-2-基W H 5 ?二噻-2-某? -(2-三氟甲基-吡啶-4-基)-胺。
[0250] v 丨 M
IN Η
[0251] LCMS:m/z 422.2(Μ+Η)+。
[0252] 照此类似地制备下列中间体：
[0253] 4-氯-6-(6-(三氟甲基）吡啶-2-基)-N-(2_(三氟甲基）吡啶-4-基）-1，3,5_三嗪-2_胺
[0254 η
[0255] LCMS:m/z 421.2(Μ+Η)+。
[0256] 4-氯-二氟乙基）吡啶-2-基)-Ν-(2_(三氟甲基）吡啶-4-基）-1,3,5-三 嗪-2-胺
[0257]
[0258] LCMS：m/z
416.3(M+H)T〇
[0259] 实施例4: 6-(6-(三氟甲基）吡啶-2-基)-N2-(2-(三氟甲基）吡啶-4-基)-1,3,5-三 嗪-2，4-二胺(化合物378)的制备
[0260]
冋謝3的THm〇%，15ml)中加人4-鼠-6-(6-(三m甲基）啦啶-2-基）-N-(2_(三氟 甲基）吡啶-4-基)-1，3,5_三嗪-2-胺(2.(^，4.76111111〇1)，同时形成沉淀。在另搅拌2小时后， 固体经过滤，干燥，得到所需产物1 · 6g (收率:82 % )。MW(402 · 2，M+1)。4 NMR(400MHz，MeOH- d)5：8.71(d ,J = 7.8Hz,lH),8.52(d ,J = 5.1Hz,lH) ,8.38(br.s. , 1H), 8.24(t ,J = 7.5Hz , lH),8.18(br.s. ,lH),8.01(d,J = 7.8Hz,lH)〇
[0262] 实施例A.酶和细胞测定法。
[0263] 酶测定法。通过辅因子耗尽测定法，针对IDH2R172K抑制活性对化合物进行测定。 将化合物与酶一起预温育，然后通过加入NADPH和α-KG开始反应，允许在之前证实的相对于 辅因子和底物消耗两者时间为线性的条件下进行60分钟。通过加入第二种酶即心肌黄酶和 相应的底物即刃天青终止反应。心肌黄酶将刃天青还原为高荧光的试卤灵，同时NADPH氧化 成NADP，两者通过耗尽可用的辅因子库终止IDH2反应，并且在通过易检测荧光团定量产生 一定时间后促进剩余辅因子的量的测定。
[0264] 具体地说，向384孔板的12孔每个中加入ΙμL ΙΟΟχ化合物稀释系列，接着加入40μ1 含有 1.25μg/ml IDH2R172K的缓冲液（50mM磷酸钾（K2HP〇4)，pH 7.5;150mM NaCl、10mM MgCl2、10 %甘油、0.05 %牛血清白蛋白、2mMi3-巯基乙醇）。然后使试验化合物在室温下与酶 一起温育1小时之后，在上述缓冲液中加入1〇μ1含有50μΜ NADPH和6.3mMa-KG的底物混合物 开始IDH2反应。在室温下再1小时后，终止反应，并通过加入25μ1终止混合物(36μg/ml心肌 黄酶和60μΜ刃天青;缓冲液中），通过刃天青转化成试卤灵，测量剩余的NADPH。在1分钟温育 后，将板在读板仪中以Ex544/Em590读数。
[0265] 为了在与上述类似的测定方式中测量化合物针对IDH2 R140Q的抑制效能，进行了 类似的程序，不同的是最终的测试浓度为〇.25μg/ml IDH2 R140Q蛋白、4μΜ NADPH和1.6mM a-KG，且预温育时间为1小时或16小时。
[0266] 为了以高通量筛选方式测量化合物针对IDH2 R140Q的抑制效能，进行了类似程 序，不同的是在预温育步骤中使用〇.25μg/ml IDH2 R140Q蛋白，并且通过加入4μΜ NADPH和 8yMa-KG开始反应。
[0267] 基于U87MG pLVX-IDH2R140Q-neo细胞的测定法。使U87MG pLVX-IDH2R140Q-neo细 胞在125培养瓶在含有10%FBS、lx青霉素/链霉素和500yg/mL G418的DMEM中生长。通过胰 蛋白酶收获细胞，以5000细胞个/孔的密度按1 OOyl /孔接种在96孔白底板中的含10 % FBS的 DMEM中。不将细胞接种在1和12列中。使细胞在37°C、5%C02下温育过夜。次日以2χ浓度配制 化合物，将l〇〇ul加入各细胞孔中。DMS0的终浓度为0.2%，将DMS0对照孔加入G排。然后将板 置于培养箱中48小时。48小时时，从各孔中取出100ul培养基，通过LC-MS分析2-HG浓度。将 细胞板放回培养箱中再持续24小时。在加入化合物后72小时，使10mL/板的Promega Cell Titer Glo试剂融化并混合。从培养箱中取出细胞板，允许平衡至室温。然后将100ul试剂加 入各孔的培养基中。然后将细胞板置于定轨摇床中10分钟，然后允许在室温下静置20分钟。 然后以500ms的积分时间针对发光读板测定化合物对生长抑制的作用。
[0268] 如前所述或与之类似，在R140Q酶测定法（16小时预温育时间）和基于R140Q细胞的 测定法中测试了代表性化合物378,两种测定法中的IC50小于50nM。
[0269] 在此已描述了若干实施方案的若干方面，要认识到本领域技术人员可容易地想到 不同的改变、修改和改进。所述改变、修改和改进欲成为本公开内容的一部分，并且预期在 本发明的精神和范围内。因此，前面的描述和附图仅仅通过实例说明。
【主权项】
1. 具有下式I的化合物或其药学上可接受的盐或水合物：其中： 环A为任选取代的5-6元单环芳基或单环杂芳基;和 环B为任选取代的5-6元单环芳基或单环杂芳基;其中： a. 环A和环B不同时是任选取代的6元单环芳基； b. 当环A为未取代的吡啶基时，则环B不是被1-3个独立选自以下的基团任选取代的苯 基：甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、CH(0H)CH 3、C1、Br、SH和CF3; c. 当环A为5元杂芳基时，则环B不是被1-2个独立选自以下的基团任选取代的苯基:F、 C1、S02CH 3、C(0)0CH3、甲基、乙基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、0-苯基、CF3、0H和NO 2; d. 当环A为2，4-二取代的5-噻唑基时，则环B不是取代的苯基； e. 化合物不是： (I )N2-2-吡啶基-6-(3-吡啶基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺； (2) 6- (6-甲氧基-3-吡啶基)-N2- (4-甲基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺； (3) 6- (2-甲氧基-3-吡啶基)-N2- (4-甲基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺； (4) N2-(3-氯苯基)-6-(2-氯-4-吡啶基)-1，3,5_ 三嗪-2,4-二胺； (5) 3-[[4-[4_氨基-6-[(3-氯苯基)氨基]-1，3,5-三嗪-2-基]-2-吡啶基]氨基]-1-丙 醇； (6) N-[3-[ [4-氨基-6-(2-甲基-4-嘧啶基)-1，3,5_三嗪-2-基]氨基]-4-甲基苯基]_ N'-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-脲； (7) N4，N4'_二苯基 _[2,2'_二-1，3,5-三嗪]-4,4'，6,6'-四胺； (8) 6,6'-(2,6-吡啶二基)双[^苯基-1，3,5-三嗪-2,4-二胺;或 (9) 6,6'-(2,3-吡嗪二基)双[^苯基-1，3,5-三嗪-2,4-二胺。2. 权利要求1的化合物，其中环A选自苯基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基、嘧啶基、 吡嗪基和噻唑基，其中环A被至多2个独立选自以下的取代基任选取代：卤素、-C 1-C4烷基、_ Ci_C4卤代烷基、-Ci-C4羟基烷基、-NH -S (0) 2_ (Ci-C4烷基）、_S (0) 2NH(Ci-C4烷基）、_CN、-S (0) 2_ (Ci-C4烷基）、Ci-C4烷氧基、-NH(Ci-C4烷基）、 _0H、-CN和-順2 〇3. 权利要求1的化合物，其中环B选自苯基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、吡啶基、 嘧啶基、哒嗪基和吡嗪基，其中环B被至多2个独立选自以下的取代基任选取代：卤素、-C 1-C4 烷基、_C2_C4炔基、_Cl-C4[ii代烷基、 -Cl-C4羟基烷基、C3_C6环烷基、_ ( C〇-C2亚烷基)_0_Cl-C4 烷基、 _〇_ (Ci-C4亚烷基）_C3_C6环烷基、-NH -S (0) 2_ (Ci-C4烷基）、_S (0) 2NH(Ci-C4烷基）、_S (0)2_NH-(C3 _C6环烷基）、_S(0)2_(饱和杂环基）、_CN、 -S(0) 2_(Ci-C4烷基）、_NH(Ci-C4烧 基）、-N(C 1-C4烷基)2、-OH、C(0) -ο-(C1-C4烷基）、饱和杂环基和-NH2。4. 具有结构式II的化合物或其药学上可接受的盐：其中： 环A '选自苯基和吡啶-2-基，其中环A '被一个或两个独立选自以下的取代基任选取代： 氯、氟、-CF3、-CHF2、-CH3、-CH2CH 3、-CF2CH3、-OH、-OCH3、-OCH 2CH3、-NH2、-NH (CH3)和 _N( CH3) 2; 环B '选自吡啶-3-基、吡啶-4-基、异噁唑-4-基、异噁唑-3-基、噻唑-5-基、嘧啶-5-基和 吡唑-4-基，其中环B '被1 -2个独立选自以下的取代基任选取代：卤素;-CN; -OH;被卤素、CN 或-OH 任选取代的 C1-C4 烷基;-S (0) 2-&-C4 烷基；-S (0) -C1-C4 烷基；-S (0) 2-NH-&-C4 烷基;-S (0)2-Ν(&-〇4 烷基)2; -S(O)2-氮杂环丁烷-1-基;-O-C1-C4 烷基;-CH2-O-CH3;吗啉-4-基;环丙 基;-S (0) 2-ΝΗ-环丙基;-C (0) -O-CH3;和 -C(Rla) (R2a) (R3a)选自被卤素或-OH任选取代的C1-C6烷基;-(Co-C 1亚烷基)-环烷基，其 中亚烷基被甲基任选取代，环烷基被以下任选取代：卤素、-OCH3或甲基;被卤素或甲基任选 取代的饱和杂环基; _C( 0) -〇-Ci_C6烷基;-C (0) - ( Cq-Ci亚烷基)-环丙基和C (0)-苄基。5. 权利要求4的化合物，其中环A '选自2-氯苯基、2-氟苯基、2-甲氧基苯基、3-羟基苯 基、6_氛基啦啶_2_基、6_氣啦啶_2_基、6_二氣甲基啦啶_2_基和苯基。6. 权利要求4的化合物，其中环B'选自2-(吗啉-4-基）吡啶-4-基、2-二甲基氨基吡啶-4_基、3_ (2_甲氧基乙基)苯基、3，5_二氣苯基、3_氣苯基、3_氛基甲基苯基、3_氛基苯基、3_ 环丙基氨基磺酰基苯基、3-二甲基氨基磺酰基苯基、3-乙基磺酰基苯基、3-氟苯基、3-甲基 横酰基苯基、4-氣苯基、5-氯啦啶_3_基、5-氛基啦啶_3_基、5-氛基啦啶_3_基、5-氛基P比啶-4-基、5-氟吡啶-3-基、5-三氟甲基吡啶-3-基、6-氯吡啶-4-基、6-氰基吡啶-4-基、6-环丙基 吡啶-4-基、6-乙氧基吡啶-4-基、6-氟吡啶-3-基、6-氟吡啶-4-基、6-甲基吡啶-4-基、6-三 氟甲基吡啶-4-基、异噁唑-4-基、苯基、吡啶-4-基和噻唑-5-基。7. 药物组合物，其包含权利要求1的化合物和药学上可接受的载体。8. 权利要求7的组合物，其还包含用于治疗癌症的第二治疗剂。9. 治疗特征在于存在IDH2突变的癌症的方法，其中所述IDH2突变导致患者中酶催化α-酮戊二酸NAPH依赖型地还原成R(-)-2-羟基戊二酸的新的能力，所述方法包括将权利要求7 的组合物给予有需要的患者的步骤。10. 权利要求9的方法，其中所述IDH2突变是IDH2R140Q或R172K突变。11. 权利要求10的方法，其中所述IDH2突变是IDH2R140Q突变。12. 权利要求9的方法，其中所述癌症选自成胶质细胞瘤(或神经胶质瘤）、骨髓增生异 常综合征(MDS)、骨髓增殖性瘤(MPN)、急性髓细胞白血病(AML)、肉瘤、黑素瘤、非小细胞肺 癌、软骨肉瘤、胆管癌或血管免疫母细胞性非霍奇金淋巴瘤(NHL)。13. 权利要求9的方法，所述方法还包括将可用于治疗癌症的第二治疗剂给予有需要的 患者。14. 权利要求7的组合物在治疗特征在于存在IDH2突变的癌症中的用途，其中所述IDH2 突变导致患者中酶催化α-酮戊二酸NAPH依赖型地还原成R(-)-2-羟基戊二酸的新的能力。15. 权利要求14的用途的组合物，其中所述IDH2突变是IDH2R140Q或R172K突变。16. 权利要求15的用途的组合物，其中所述IDH2突变是IDH2R140Q突变。17. 权利要求14的用途的组合物，其中所述癌症选自成胶质细胞瘤(或神经胶质瘤）、骨 髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增殖性瘤(MPN)、急性髓细胞白血病(AML)、肉瘤、黑素瘤、非 小细胞肺癌、软骨肉瘤、胆管癌或血管免疫母细胞性非霍奇金淋巴瘤(NHL)。18. 权利要求14的用途的组合物，所述组合物还包含用于治疗癌症的第二治疗剂。
【专利摘要】提供式(I)的化合物，其中：环A和环B各自独立地为任选取代的5-6元单环芳基或杂芳基。所述化合物是可用于治疗癌症的异柠檬酸脱氢酶2(IDH2)突变体的抑制剂。
【IPC分类】C07D403/04, C07D403/12, C07D401/14, C07D251/18, C07D413/12, A61P35/00, A61K31/53, C07D417/14, C07D401/12, C07D417/12, C07D401/04
【公开号】CN105492435
【申请号】CN201480047026
【发明人】J·特维斯, 卢克·乌特里
【申请人】安吉奥斯医药品有限公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年7月10日
【公告号】CA2917592A1, EP3019490A1, US20160158241, WO2015006592A1
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