血管加压素-2受体激动剂的制作方法
血管加压素-2受体激动剂的制作方法
【专利说明】血管加压素-2受体激动剂
[0001 ] 相关申请
[0002] 本申请要求2013年7月26日提交的美国临时申请61/859,024和2014年3月12日提 交的61/952,073的利益，所述两个申请都通过引用完整地结合于此。
[0003] 题堡
[0004] 本发明涉及对血管加压素-2(V2)受体具有激动剂活性的新化合物，包含这些化合 物的药物组合物，和所述化合物用于制造用于治疗疾病的药物的用途。
[0005] 罝量
[0006] 存在三种已知的血管加压素受体亚型，Vla、Vlb和V2JU受体也称为V 3受体并且Vla 受体也称为Vi受体。各个亚型在组织中具有不同的表达模式，发现V2主要在肾中，在那里其 介导内源配体血管加压素的抗利尿活性(Favory等人，2009) Jib广泛分布于脑中（Hernando 等人，2001) 被发现于多种组织，包括平滑肌、肝、肾、血小板、脾和脑（Zingg，1996; Ostrowski等人，1994)。
[0007] V2受体的激动剂在临床上是有用的。去氨加压素(desmopressin)是一种V2受体激 动剂，其在一些地区被批准用于治疗尿崩症（diabetes insipidus)、原发性夜间遗尿症 (primary nocturnal enuresis)、夜尿症（nocturia)和凝血障石导（coagulation disorders)，包括血友病 A(haemophilia A)和血管性血友病（von Willebrand's disease)。去氨加压素结合并激活V#PVlb受体二者，对Vla有较弱活性。
[0008] 已经显示去氨加压素部分通过肾分泌(例如Fjellestad-Paulsen等人，1993)，并 且去氨加压素的半衰期在患有肾损伤的患者中增加（Ruzicka等人2003 ; Agersoe等人 2004) Jgersoe等人提示增加的半衰期可能导致延长的抗利尿效应并且增加低钠血症(血 清钠水平的降低，其可能导致不良事件如发作或昏迷)的风险。他们进一步陈述"尽管去氨 加压素似乎是安全的并且被具有受损的肾功能的患者良好耐受，但当向有效用药方案滴定 时，如果将患有中度或严重肾功能的患者用去氨加压素治疗，则应当谨慎实行。"
[0009] 因此，需要另外的对Vlb受体具有减小的活性的％受体激动剂。此外，还需要不那么 依赖肾来除去的￥ 2受体激动剂。
[0010] 挺塗
[0011] 在一个实施方案中，提供根据式I的化合物或其药用盐，
[0012]
[0013] 其中R2是H、Cl-C4烷基、卤素、-OH或-〇-d-C4烷基；
[0014] R3 是 Η或-CH2-OH或-C(0)-NR5R6;
[0015] R4是 Η或-C(=NH)-NH2;
[0016] R5和R6独立地是Η、&-〇5烷基、-CH2-环丙基、-环丙基或芳基烷基，条件是R 5和R6二 者不都是Η;
[0017] X和γ独立地是-CH2-或-S-，条件是，如果X是-CH2-，则Υ不是-CH2-;
[0018] z是-CHR7-或S并且R7是HSCrC*烷基、卤素、-OH或-0-&-C4烷基；
[0019] R8 是 Η或-CH3;并且
[0020] Ar是任选地被一个&-C4烷基、卤素、-OH或-0-&-C4烷基取代的杂芳基或苯基。
[0021] 在一些实施方案中，R5和R6独立地是Η、&_〇5烷基、或芳基烷基。
[0022] 在一些实施方案中，R5和R6独立地是Η、&_〇5烷基或芳基烷基。
[0023] 在一些实施方案中，R5和R6二者不都是Η。
[0024] 在一些实施方案中，X和Υ中仅一个是-S-。在一些实施方案中，X是-CH2-。在一些实 施方案中，X和Y二者都是 -S-。
[0025] 在一些实施方案中，Ar是噻吩。
[0026] 在一些实施方案中，R8是-CH3。
[0027] 在一些实施方案中，R3是-C(0)-NR5R6。在这些实施方案的某些中，R 5是Η并且R6是 &-C4烷基。在这些实施方案的某些中，R5和R6二者都是-CH2CH 3。
[0028] 在一些实施方案中，R2是卤素。在这些实施方案的某些中，R2是-Cl。在这些实施方 案的某些中，R 2是-F。
[0029] 根据一个实施方案，本文中还提供的是治疗尿崩症、原发性夜间遗尿症和夜尿症 中的一种的方法，所述方法包括向需要其的患者施用治疗有效量的根据式I的化合物。本发 明还包括本文所述的化合物在治疗本文所述的病症中的用途，以及本文所述的化合物在制 造药物中的用途，所述药物用于治疗本文所述的病症。
[0030] 根据一个实施方案，将式I的化合物用于药物，所述药物用于治疗尿崩症、原发性 夜间遗尿症或夜尿症。
[0031 ] 详细描述
[0032] 除非另有陈述，本申请(包括说明书和权利要求）中使用的以下术语具有以下给出 的定义。必须注意，如说明书和所附权利要求中使用的，单数形式"一个(a)"、"一个(an)"和 "所述(the)"包括复数指代，除非上下文明确另有所指。标准化学术语的定义可以在参考著 作中找到，包括Carey和Sundberg(2007)Advanced Organic Chemistry第5版·Α和B卷， Plenum Press，New York。除非另有陈述，本发明的实践将利用本领域技术内合成有机化 学、质谱、制备型和分析型色谱方法、蛋白质化学、生物化学和药理学的常规方法。
[0033] "烷基"是&-12直链或支链烷基。支链烷基包括异_、仲-和叔-构型。
[0034] "芳基"是5-12个碳原子的单-或双环芳族碳环体系，其任选地被&-C4烷基、卤素、-OH或-0-&-C4烷基取代。示例性的单和双环芳族碳环体系包括任选地取代的苯基和任选地 取代的萘基。
[0035] "芳基烷基"是具有取代基芳基或杂芳基的烷基基团。
[0036] "杂芳基"是任选地被Ci_C4烷基、卤素、-OH或-O-C1-C4烷基取代的芳族杂环五-或 六-元环体系。五元杂芳环体系是具有五个环原子的单环芳环体系，其中1、2、3或4个环原子 独立地选自N、0和S。示例性的五元杂芳环体系包括任选地取代的咪唑基、噻唑基、噻吩基、 呋喃基、吡唑基和三唑基。六元杂芳环体系是具有六个环原子的单环芳环体系，其中1、2、3 或4个环原子独立地选自N、0和S。示例性的六元杂芳环体系包括任选地取代的吡啶基、嘧啶 基和吡嗪基。
[0037] 本发明的一个实施方案提供药物组合物，所述药物组合物包含本发明的化合物。 在第一实施方案中，所述药物组合物还包含一种以上药用赋形剂或载体，和任选地其他治 疗和/或预防成分。这种赋形剂对于本领域技术人员是已知的。本发明的化合物包括，但不 限于，碱性化合物如游离碱。对药用赋形剂和盐的深入讨论可在R e m i n g t ο η ' s Pharmaceutical Sciences,(Easton,Pennsylvania:Mack Publishing Company, 1990)中获得。
[0038] 药用盐的实例包括酸加成盐，例如通过与以下各项反应形成的盐:氢卤酸如盐酸 和无机酸如硫酸、磷酸和硝酸，以及脂肪族酸、脂环酸、芳族酸或杂环磺酸或羧酸如甲酸、乙 酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、抗坏血酸、马来酸、羟基马 来酸、丙酮酸、对羟基苯甲酸、扑酸、甲磺酸、乙磺酸、羟基乙磺酸、卤代苯磺酸、三氟乙酸、三 氟甲磺酸、甲苯磺酸和萘磺酸。（参见，例如，1^找6等人，]\?1^1'111.3(3；[.66:119，1977以及 Wermuth，C·G·和P ·H. Stahl，编辑Pharmaceutical Salts : Properties，Selection and Use.Zurich:Verlag Helvetica Chimica Acta，2002)0
[0039] 根据想要的施用模式，药物组合物可以是固体、半固体或液体剂型的形式，如，例 如，片剂、栓剂、丸剂、胶囊、粉剂、液体、混悬剂、霜剂、软膏剂、洗液等，优选为适于单次施用 精确剂量的单位剂型。所述组合物将包含与药用载体结合的有效量的选择的药物，并且，此 外可以包含其他药剂、辅药、稀释剂、缓冲剂等。
[0040] 本发明包括药物组合物，所述药物组合物包含本发明的化合物连同一种或多种药 用载体和任选地其他治疗和/或预防成分，本发明的化合物包括其异构体、异构体的外消旋 或非外消旋混合物或药用盐或溶剂化物。
[0041] 对于固体组合物，常规无毒固体载体包括，例如，药用级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂 酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等。
[0042] 对于口服施用，所述组合物将通常采用片剂、胶囊、软凝胶胶囊非水溶液、混悬剂 或糖浆的形式。片剂和胶囊是优选的口服施用形式。在一些实施方案中，片剂是薄片 (wafer)，例如，速融薄片。在一些实施方案中，薄片通过舌下施用途径施用。用于口服使用 的片剂和胶囊将通常包含一种或多种通常使用的载体如乳糖和玉米淀粉。还通常加入润滑 剂，如硬脂酸镁。当使用液体悬浮液时，活性剂可以与乳化剂和悬浮剂合并。如果需要，也可 以加入调味剂、着色剂和/或甜味剂。其他用于结合入本文的口服制剂中的任选组分包括， 但不限于，防腐剂、悬浮剂、增稠剂等。
[0043]用于治疗的剂量将取决于组合疗法的成分的吸收、分布、代谢和排出速率以及本 领域技术人员已知的其他因素。剂量值也将随着要缓解的病症的严重度改变。要进一步理 解，对于任何特定受试者，可以根据个体需求和施用或监控治疗的施用的人的专业判断，随 时间调节具体的剂量方案和时间安排。在一些实施方案中，静脉内剂量为大约l〇〇ng。在一 些实施方案中，口服剂量为lyg至lmg。在一些实施方案中，鼻剂量为3mg 至6mg。
[0044] 使用的缩写有：
[0045]
[0046]
[0047]
[0048]
[0049] 除非另有指示，使用L-氨基酸并且使用常规氨基酸术语。除了二十种常规氨基酸 之外的氨基酸的实例包括：
[0050]
[0051]
[0052] 化合物[0053] 本发明的化合物具有式I的结构:
[0054] 和其药用盐，其中： ，.
[0055] R2 是Η、&-〇4 烷基、卤素、-OH 或-0-&-C4 烷基；
[0056] R3 是 Η或-CH2-OH或-C(0)-NR5R6;
[0057] R4是 Η或-C(=NH)-NH2;
[0058] R5和R6独立地是Η、&-〇5烷基、-CH2-环丙基、-环丙基或芳基烷基，条件是R 5和R6二 者不都是Η;
[0059] X和Υ独立地是-CH2-或S，条件是，如果X是-ch2-，则Υ不是-ch2-;
[0060] z是-CHR7-或S并且R7是!1或&_〇4烷基、卤素、-OH或-0-&-C4烷基；
[0061] R8 是 Η或-CH3;
[0062] Ar是任选地被一个&-C4烷基、卤素、-0Η或-0-&-C4烷基取代的杂芳基或苯基。
[0063]表1.本发明的实例化合物。
[0064]
[0065]
[0066]化合物 1-41(SEQ ID 1-41)的结构：
[0067]
[006?
[0069:
[00/
[0071：
[0072
[0073]
[0074]
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[0076
[0077
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[0079]
[0080]
[0081
[0082:
[0083]
[0084]
[0085]
[0086]
[008
[0088] 表2:化合物1-41( SEQ ID 1-41)的物理化学性质
[0089]
[0090]
[0091 ]表3:对于化合物1-41的体外测定数据
[0092]
[0093]
[0094] 表4:氨基酸命名的关键
[0095]
[0096]
实施例
[0097] 一般合成
[0098] 从商业供应商（Aapptec，EMD Millipore和Peptides International)购买氨基酸 衍生物。从商业供应商(PCAS BioMatrix Inc.和EMD Millipede)购买树脂。所有其它试剂、 化学品和溶剂从Sigma-Aldrich和VWR购买。
[0099]通过标准方法，以固相肽化学，利用Fmoc方法合成本文所述的化合物^手动地、使 用Tribute肽合成仪(Protein Technologies Inc.，Tucson，Arizona)自动地或通过手动和 自动合成的结合组装肽。
[0100] 在Waters Prep LC System上使用PrepPack cartridge Delta-Pack C18, 3〇〇A I 15μπι，47χ 300mm，以lOOmL/min的流速和/或在Phenomenex Luna C18柱，1〇〇Α，5μπι，30χ 100mm上以40mL/min的流速进行制备型Technologies 1200rr Series液 相色谱上，使用Agilent Zorbax C18柱，1·8μπι，4·6χ 110mm，以1.5mL/min的流速进行分析 型反相Technologies 1200Series色谱上，通过在Phenomenex Gemini 1 |〇A C18柱，3μπι，2χ 150mm上流速为0.3mL/min的反相HPLC进行最终化合物分析。在MAT Finningan LCQ电喷雾质谱仪上记录质谱。除非另有陈述，所有反应在室温进行。以下标准 参考文献对一般实验设置以及所需起始材料和试剂的利用度提供进一步指导：Kates， S.A.，Albericio，F.，编辑，Solid Phase Synthesis:A Practical Guide?Marcel Dekker， New York?Basel?2000；Greene?T.ff.?ffuts ?P.G.M.^Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley Sons Inc·，第2版，1991;Stewart，J.M.，Young，J.D.，Solid Phase Synthesis，Pierce Chemical Company，1984; Bisel lo，等人，J · Biol · Chem · 1998，273， 22498-22505 ;Merrifield，J.Am.Chem.Soc. 1963,85,2149-2154;以及Chang和White P.D.， 'Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis:a Practical Approach5?Oxford University Press，Oxford，2000。
[0101] 使用以下保护基来保护给定氨基酸侧链官能团:？匕以2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并 咲喃-5-磺酰基）用于Arg; tBu(叔丁基）用于Tyr并且Trt (三苯甲基）用于Cys、Gln和Asn。
[0102] Fmoc-保护的氨基酸在Tribute合成仪上的偶联利用HBTU/NMM在DMF中介导，除了 半胱氨酸衍生物以外，半胱氨酸衍生物与DIC/HOBt在DMF中偶联。合成期间使用30-60分钟 的单个循环以及5倍过量的活化的Fmoc-保护的氨基酸。Fmoc保护基的去除通过UV监测。利 用在DMF中的20%哌啶进行多次(多至10次，根据需要)肽树脂的两分钟洗涤。
[0103] 对于所有氨基酸，以手动模式采用DMF中DIC/HOBt介导的偶联。合成期间使用至少 2小时的单循环以及3倍过量的活化的Fmoc-保护的氨基酸。偶联的完成利用茚三酮 (nihidrine) (Kaiser)测试评估。Fmoc保护基的去除利用在DMF中的20%哌啶单次3〇111；[11洗 涤肽树脂实现。
[0104] 肽合成完成时，利用DCM洗涤肽树脂并在真空中干燥。将树脂用TFA/H20/TIS 96: 2:2(v/v/v)处理2h以去除侧链保护基并同时将肽从树脂上切下。将肽过滤，用二乙醚沉淀 并滗析。为了获得具有二硫桥键的肽，将沉淀溶解在纯的(neat)TFA中并且随后将溶液倒入 在水中的10%乙腈中。在一些情况下，加入额外量的乙腈以溶解底物（substrate)。将线形 肽用0.1M I2/Me0H氧化。逐滴加入氧化剂溶液，直到黄色持续存在。过量的碘用固体抗坏血 酸还原。然后利用浓氨水将pH调节至约4。将获得的溶液直接上样在HPLC制备型柱上并且用 组分B的梯度洗脱(参见下表）。
[0105] 为了通过酰胺键形成环化肽，将粗制线形肽溶解于DMF并且还制备HBTU在DMF中的 溶液。可互换地将肽溶液和活化剂溶液加入至一体积的含DIPEA的剧烈搅拌的DMF。在加入 纯DIPEA的情况下将pH维持在9-10。通过HPLC监测反应，并且在加入最后部分的活化剂和肽 溶液后通常检测不到底物峰。将反应混合物用0.1%Ac0H稀释并且将获得的溶液直接上样 在HPLC制备型柱上并且用组分B的梯度洗脱。
[0106] 利用缓冲系统T纯化各粗制肽。将通过反相分析型HPLC确定的纯度超过93%的级 分汇集并再上样到柱上并且用缓冲液T洗脱以提供三氟乙酸盐（trif luoroacetate salts)。在一些情况下，利用缓冲系统C进行另外的纯化。为了获得乙酸盐（acetate salts)，将来自利用缓冲液T或C的运行(runs)的级分再上样到柱上并且将所述柱用5体积 的0.1M乙酸铵洗涤。将终产物用缓冲液A洗脱。将级分汇集并冻干。
[0107] 表.缓冲组合物
[0108]
[0109]典型地发现制备的化合物是至少约9 5 %纯的。
[0110] 实施例 1-SEQ ID:21
[0111] 从7 · 8g(6 · 9mmol)的H-Pro-2-氯三苯甲基AM树脂(EMD Mi 11 ipore，目录号856057， 0.88mmol/g)开始手动组装1-7片段。采用在DMF中的DIC/HOBt介导的偶联。合成期间使用至 少2小时的单个循环以及3倍过量的活化的Fmoc-保护的氨基酸。利用茚三酮测试评估偶联 的完成。利用在DMF中的20 %哌啶的单次30min洗涤肽树脂实现Fmoc保护基的去除。使用以 下氨基酸衍生物来组装与树脂结合的肽的残基1-7:?111〇〇-〇78((012)3以0)0丨1311)-〇!1，？1]1〇(3-八811(1'竹)-0!^111〇(3-￥31-0!^111〇(3-111丨-0!1和8〇(3-0?3-0!1。在组装1-7肽片段后，将树脂用0〇1 彻底洗涤并用DCM/HFIP 7:3(v/v)混合物处理（2x lh，各30mL)。然后将溶剂蒸发并将剩余 物用乙醚沉淀，过滤并在真空中干燥。获得5.79g(4.63mmo 1，67 % )的粗制的受保护的线形 肽。（在本文所述的其他化合物的合成中使用该产物的剩余物。）
[0112] H-D_Arg-NEt2X 2TFA·将2·81g(5·4mmol)的Boc-D_Arg(Pbf)-〇H(Chem Impex， cat#05282)，1.95mL( 11.2mmol)的DIPEA和2.13g(5.6mmol)的HBTU溶解在 10mL DMF中。随后 将0.62mL(6mmol)的二乙胺加入所述溶液中。在5min后通过分析型HPLC未检测到底物。将反 应混合物倒入500mL的水中并且将沉淀物通过离心分离并在 真空中干燥。将剩余物用20mL TFA/TIS/H 20(96/2/2，V/v/v)处理lh并且蒸发溶剂。将剩余物用乙醚处理并滗析。获得 1.65g(3.6mmo 1，67 % )的半固体衍生物，其不纯化即用于随后的步骤。
[0113] 与H-D-Arg-NEt2偶联.将2.3g(大约1.86mmol)的线形的受保护的肽和0.76g (2mmol)的HBTU溶解在 10mL含0.73mL(4.2mmol )DIPEA的DMF中。随后将在lmL DMF中的0.93g (2.05mmol)的H-D-Arg(Pbf )-OH x 2TFA加入反应混合物中。在5min后通过HPLC未检测到底 物。将产物用1L水沉淀，过滤出并且在真空中干燥。获得2.6g (1.78mmo 1，96 % )的粗制的受 保护的线形肽。将完全保护的肽用20mL TFA/TIS/H20(96/2/2，V/v/v)处理lh并且蒸发溶 剂。将未保护的线形肽用乙醚沉淀并冻干。产量1.82g(l. 55mmol，83% )。
[0114] 将全部量的线形肽溶解在50mL的DMF中。还制备0.59g(大约1.55mmol )HBTU在10mL 的DMF中的溶液。可交替地将肽溶液和活化剂溶液分别以10个5mL和lmL的部分加入50mL剧 烈搅拌的含200yL DIPEA的DMF中。在加入纯的DIPEA的情况下将pH保持在9-10。在加入最后 部分的活化剂和肽溶液后，通过HPLC未检测到底物峰。将反应混合物用0.1 %AcOH稀释至 1L。将获得的溶液直接加载到HPLC制备型柱上并且利用缓冲系统T纯化，以组分B的梯度洗 脱(参见上表）。将通过反相分析型HPLC确定的具有超过93%的纯度的级分汇集并重新加载 到柱上。将所述柱用5体积的0.1M AcONH4洗涤并随后将化合物用缓冲液C洗脱，以提供乙酸 盐。将级分汇集并冻干。获得703.111^(0.60111111 〇1，22%，全部的，基于89.6%肽含量）的白色 肽粉末。通过分析型HPLC确定产物纯度为99.7 %并且观察的M+H是1045.6(计算的M+H = 1045·5)〇
[0115] 实施例2-SEQ ID N0:10
[0116] 将2.32g(约1.8mmol)的SEQ ID N0:21的合成中制备的受保护的线形肽溶解在7mL 的DMF中，并且加入0 · 63mL(3 · 6mmo 1，2当量)NMM，接着加入0 · 76g(2mmo 1，1 · 1 当量)HBTU。在 分开的瓶中，将0.648(2.81111]1〇1，1.5当量）的硫酸胍丁胺悬浮在71111^含0.49111以2.81]11]1〇1)的 DIPEA的DMF中。将N，0-二（三甲基甲硅烷基）乙酰胺(BTA，Sigma-Aldrich，cat#128910)加入 不时涡旋/超声处理的悬浮液中。在将4当量的BTA加入悬浮液中后获得澄清溶液。将两种溶 液合并并且在5min后通过HPLC未检测到底物肽。将产物用1L水沉淀，过滤出并在真空中干 燥。将得到的粉末用50mL的TFA/TIS/H 20 96/2/2(ν/v/v)混合物处理1.5小时。蒸发溶剂并 且将线形肽用乙醚沉淀，在水/乙腈中重构并冻干。
[0117] 将在之前的步骤获得的全部量的肽(2.13g，大约2mmo 1)溶解在50mL的DMF中。还制 备0.76g(2mmol )HBTU在10mL的DMF中的溶液。可交替地将肽溶液和活化剂溶液分别以10个 2.5mL和0.5mL的部分加入至50mL的剧烈搅拌的含400yL的DIPEA的DMF中。加入纯DIPEA，将 pH维持在9-10。在加入最后部分的活化剂和肽溶液后，未检测到底物峰。将反应混合物用 0.1 %AcOH稀释至1L并且将获得的溶液直接加载在HPLC制备型柱上并且用缓冲系统T纯化， 用组分B的梯度洗脱(参见上表）。将通过反相分析型HPLC确定的具有超过93%的纯度的级 分汇集并再加载到柱上。将柱用5体积的0.1M AcONH4洗涤并且随后将化合物用缓冲液C洗 脱，以提供乙酸盐。将级分汇集并冻干。获得656.711^(0.62111111 〇1，23%的整体产率，基于 89.5 %肽含量）的白色肽粉末。通过分析型HPLC确定产物纯度为100.0 %并且观察的M+H是 946.6 (计算的M+H为946.4)。
[0118] 实施例3-SEQ ID N0:5
[0119] 使lg(大约lmmol)的FMPB AM树脂（EMD Millipore，cat#855028)在 15ml的DCE/ TMOF 1:1混合物中膨胀。向树脂悬浮液中加入异丁胺（1.5mL，15mmol)，接着加入3.2g固体 三乙酰氧基硼氢化钠。将悬浮液震荡过夜。将树脂用MeOH、DMF和DCM洗涤并随后在DCM中用 Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH/DIC(4当量)酰化。将树脂用DMF洗涤并且利用氯醌(chloranil)测试 对酰化完成度进行测试（阴性）。将树脂分为三等份并且在Tribute合成仪上以0.33mmol规 模继续合成。使用在DMF中的HBTU/NMM介导的或DIC/HOBt (对于Cys)介导的单次偶联以及5 倍过量的Fmo c-保护的氨基酸。通过利用在DMF中的20 %哌啶的若干次连续的2mi η洗涤去除 ?111〇(3保护基。在自动合成中使用以下氨基酸衍生物:？1]1〇(3-?1'〇-〇!1，？1]1〇(3-〇5^((012)3以0) 0七1311)-0!1，卩1]1〇。-八811(1'1'1:)-0!1，卩1]1〇。-\%1-0!1，卩1]1〇。-1'11；[-0!1和130。-0卩&-0!1。在整个肽序列被 组装后，利用20mL的TFA/H 20/TIS 96:2:2(v/v/v)将肽从树脂上切割达2h。将线形肽溶解在 40mL的含200yL的DIPEA的DMF中。还制备152mg(大约0.4mmol)HBTU在5mL的DMF中的溶液。可 交替地将肽溶液和活化剂溶液分别以10个4mL和0.5mL的部分加入至40mL的剧烈搅拌的DMF 中。加入纯的DIPEA，将pH维持在9-10。在加入最后部分的活化剂溶液后，通过HPLC未检测到 底物峰。将反应混合物用0.1 %Ac0H稀释至1L。将获得的溶液直接加载到HPLC制备型柱上。 将化合物通过在缓冲液T中的三次连续运行纯化。
[0120] 将超过97%纯度的级分汇集并冻干。获得49.0mg(0.042mmol，12%整体，假设90% 肽含量）的白色肽粉末。通过分析型HPLC确定产物纯度为99.5 %并且观察的M+H为1045.6 (计算的 Μ+Η=1045·5)。
[0121] 实施例4-SEQ ID Ν0:9
[0122] 使0 · 37g(大约0 · 3mmol)的 1，4-二氨基丁烷-2-氯三苯甲基树脂(EMD Mi 11 ipore， cat#856085)在10mL的DMF中膨胀并且将树脂置于自动合成反应容器中。肽组装在Tribute 合成仪上进行。使用在DMF中的HBTU/NMM介导的或DIC/HOBt(对于Cys)介导的单次偶联利用 5倍过量的Fmoc-保护的氨基酸。通过利用在DMF中的20%哌啶的若干次连续的2min洗涤去 除Fmoc保护基。在自动合成中使用以下氨基酸衍生物:Fmoc-Pr〇-OH，Fmoc-Cys((CH2)3C(0) 0七1311)-0!1，卩1]1〇。-八811(1'1'1:)-0!1，卩1]1〇。-\%1-0!1，卩1]1〇。-1'11；[-0!1和130。-15^(^1311)-0!1。在整个肽序 列被组装后，利用30mL的HFIP/DCM3 :7(v/v)将肽从树脂上切下达2h。将树脂过滤并蒸发溶 剂。将线形的受保护的肽用无水乙醚沉淀。将沉淀滗析并悬浮在20mL乙腈中。随后将lllmg (0.4mmol)的Z(2-Cl)-0Su和0.136mL(0.8mmol)DIPEA加入悬浮液中。在底物溶解后，将溶剂 蒸发并且将剩余物用20mL的TFA/TIS/H 20 95/2.5/2.5混合物处理1.5h。然后将TFA蒸发并 且将剩余物用二乙醚沉淀。将粗制的线形肽溶解在100mL的含200yL DIPEA的DMF中。随后将 120mg(0.31mmol)HBTU在5mL DMF中的溶液加入剧烈搅拌的反应混合物中。30min后，将反应 混合物用1L 0.1%Ac0H稀释并且将获得的溶液上样到制备型HPLC柱上。在缓冲系统T中快 速(大约3%MeCN/min.)洗脱环肽。将超过97%纯度(通过分析型HPLC)的级分汇集并冻干。 在0°C将冻干物用5mL的TMSBr/茴香硫醚/TFA混合物（1/1/6^八八)处理111。将了?4蒸发并且 将肽用乙醚沉淀。通过在缓冲液T中的单次循环纯化终产物。
[0123] 将超过97 %纯度的级分汇集并冻干。获得77.5mg( 0.079mmo 1，26 %整体，假设90 % 肽含量）的白色肽粉末。通过分析型HPLC确定产物纯度为99.6%并且观察的M+H是886.4(计 算的 Μ+Η=886·4)。
[0124] 实施例5-SEQ ID Ν0:17
[0125] 使0 · 43g(大约 0 · 3mmol)的 H-Arg(Pbf)-0-2-氯三苯甲基树脂（EMD Millipore， cat#856067)在10mL的DMF中膨胀并且将树脂置于自动合成反应容器中。在Tribute合成仪 上进行肽组装。使用在DMF中的HBTU/NMM介导的或DIC/HOBt(对于Cys)介导的单次偶联，利 用5倍过量的Fmoc-保护的氨基酸。通过利用在DMF中的20 %哌啶的若干次连续的2min洗涤 去除?111〇(3保护基。在自动合成中使用以下氨基酸衍生物:？1]1〇(3-?1'〇-〇!1，？1]1〇(3-〇5^((012)3〇 (0)(^811)-0!^111〇(3-厶811(1^〇-0!^111〇(3,31-0!1和?111〇(3-111丨-0!1。在3-8肽序列组装后，使用 DIC/HOBt方法利用2倍过量的试剂将Fm〇C-Phe(4-Et)-OH手动偶联。然后通过将树脂用20% PIP/DMF处理30min并且用Boc20在DMF中酰化N端氨基官能团来将Fmoc基团用Boc基团替代。 利用30mL的HFIP/DCM 3:7(v/v)将线形肽从树脂上切下达2h。将树脂过滤并蒸发溶剂。将线 形的受保护的肽用无水乙醚沉淀。将沉淀滗析并且在真空中干燥。获得450mg粗制的保护的 肽。将全部量的肽(大约0.3mmol)溶解在10mL含0.5mL DMF和61yL(0.45mmol)NMM的1，2-二 氯乙烷中。在冰浴上将溶液冷却至〇°C并且加入61yL(0.45mmol)的氯甲酸异丁酯。将反应混 合物在〇°C磁力搅拌10min。一次性加入160mg(4.5mmo 1)硼氢化钠在5mL水中的溶液。将反应 用200mL水稀释并且通过离心将产物分离并在真空中干燥。然后将产物用20mL的TFA/TIS/ H20 95/2.5/2.5混合物处理1.5h。随后将TFA蒸发并将剩余物用二乙醚沉淀。将粗制的线形 肽溶解在80mL的含200yL DIPEA的DMF中。随后将61mg(0.15mmol)HBTU在5mL的DMF中的溶液 加入剧烈搅拌的反应混合物中。30min后，将反应混合物用1L 0.1%Ac0H稀释并且将获得溶 液上样到制备型HPLC柱上。通过在缓冲液T中的两次连续运行纯化环肽。
[0126] 将超过97%纯度的级分汇集并冻干。获得41.7mg(0.039mmol，13%整体，假定90% 肽含量）的白色肽粉末。通过分析型HPLC确定产物纯度为95.1 %并且观察的M+H是970.6(计 算的 M+H=970.5)。
[0127] 实验(生物测试)
[0128] 体外受体测定
[0129] 乂2受体活性
[0130] 在转录报告基因测定中通过将h V2受体表达DNA与包含调节萤火虫荧光素酶的表 达的细胞内钙响应启动子元件的报告DNA-起瞬时转染到HEK-293(人胚肾293细胞系)细胞 来确定化合物对人V 2受体(h V2R)的激动剂活性。对于此测定的进一步指导，参见Boss，V.， Talpade，D.J.，Murphy，T.J. J.Biol.Chem. 1996，May 3;271 (18) ,10429-10432。将细胞暴露 于每剂量稀释10倍的化合物的系列稀释液达5h，接着裂解细胞，确定荧光素酶活性，并通过 非线性回归确定化合物功效和EC 5Q值。在各实验中使用去氨加压素(dDAVP)作为内部对照。 测试的化合物的结果在表3中显示。
[0131] Vlb受体活性
[0132] 为了确定选择性，在表达人Vlb受体(hVlbR)的基于荧光素酶的转录报告基因测定 中测试化合物。在被稳定转染以表达hVlbR的Flp-In?293细胞系(HEK-flpin)中的转录报告 基因测定中确定化合物对hVlbR的激动剂活性。这些细胞用NFAT响应元件-荧光素酶(NFAT-Luc)报告子瞬时转染。将细胞暴露于每剂量10倍稀释的化合物的系列稀释液达5小时，接着 裂解细胞，确定荧光素酶活性，并通过非线性回归确定化合物功效和EC 5Q值。在各实验中使 用AVP作为内部对照。测试的化合物的结果在表3中显示。
[0133] 肾清除率
[0134] 去氨加压素主要通过肾从身体清除（"肾清除"）。本发明的化合物具有更高程度的 通过非肾机制的清除。在进行肾切除和假手术的大鼠中进行药代动力学实验。在肾切除的 大鼠中确定非肾清除率(CLnr)，并且在进行假手术的大鼠中确定总清除率(CLsham)。通过 (CLnr/CLsham)x 100计算％非肾清除率。
[0135] 对于药代动力学研究，经由颈静脉(用于化合物施用)和颈动脉(用于血液收集)给 成年雄性Sprague Dawley大鼠插入导管。将含有多种化合物的溶液(盒剂量给药)注射入颈 静脉导管(0. lmg FB/ml的各化合物，0.3ml/动物;0. lmg FB/kg/化合物的标称剂量）。使用 自动化血液取样系统Instech Laboratories Automated Blood Sampling Unit第2代 (ABS2)在施用后2、6、10、15、20、30、45、60、90和120分钟收集血液样品。使用K2EDTA作为抗 凝血剂由全血制备血浆。样品的后续生物分析包括化合物提取和使用标准LC/MS方法的血 衆浓度确定。从峰面积和校准曲线计算分析物浓度。通过非房室(noncompartmental)分析 法，使用WINN0NLIN? ν6·3软件(Pharsight Corporation)对各个动物的化合物浓度-时间 曲线进行最佳拟合来获得PK参数。
[0136] 抗利尿
[0137] 在大鼠模型中测试化合物的抗利尿活性。简言之，将插导管的正常血容量的 (euvolemic)Sprague Dawley大鼠置于代谢笼中。将各代谢笼被设置为通过置于尿收集瓶 上方的力传感器连续测量自发尿排出以使用N0T0C0RD?软件监测和记录尿排出的时间过 程。使用注射栗和旋转/系绳（swivel/tether)方法，使大鼠接受静脉内输注测试化合物或 载体达三小时。在化合物的施用期间（0-3小时）收集尿排出数据并且在施用后收集5小时。 在一些情况下，还确定尿摩尔渗透压质量浓度。本发明的化合物显示抗利尿活性。
[0138] 药物组合物
[0139] 还提供如本文定义的式(I)的化合物作为药物的用途。还提供药物组合物，其包含 本文所定义的式(I)的化合物作为活性成分，连同药用辅药、稀释剂或载体。
[0140] 所述药物组合物可以适于不同施用模式，包括例如，口服施用和鼻施用。所述组合 物可以因此例如是片剂、胶囊、粉剂、微粒、粒剂、糖浆、混悬剂和溶液的形式。
[0141] 所述药物组合物可以任选地包含例如选自以下各项的至少一种另外的添加剂:崩 解剂、粘合剂、润滑剂、调味剂、防腐剂、着色剂及其任意混合物。这样的和其他添加剂的实 例见于'Handbook of Pharmaceutical Excipients ' ；Ed.A.H.Kibbe，第3版，American Pharmaceutical Association,USA and Pharmaceutical Press UK，2000中。
[0142] 治疗方法
[0143] 在另一个方面，本发明提供上述化合物用于制造药物的用途，所述药物用于治疗 尿崩症、原发性夜间遗尿症和夜尿症。此外，提供治疗尿崩症、原发性夜间遗尿症和夜尿症 的方法。如本文使用的，'治疗'意为当以合适剂量施用本发明的化合物时，缓解症状，推迟 疾病的发作和/或治愈疾病。
[0144] 根据本发明的化合物的典型剂量在宽范围内变化并且将取决于各种因素如各个 患者的个体需求和施用途径。剂量可以每日施用一次或比每日一次更频繁地施用，例如间 歇施用。本领域技术人员的医师将能够针对手头的情况优化剂量。
[0145] 本说明书中引用的所有出版物和专利申请都通过引用并入本文，就像具体和分别 说明每个单独的出版物或专利申请都通过参考并入一样。
[0146]尽管为了清楚理解，上述发明已经通过说明和实施例的方式详细描述，根据本发 明，对本领域技术人员将容易显而易见的是，在不偏离所附权利要求的精神或范围的情况 下，可以对其中进行某些改变和改进。
【主权项】
1. 式I的化合物：或其药用盐，其中： R2是H、Ci-C4烷基、卤素、-OH或《i-C4烷基； R3 是 H或-CH2-OH 或-C(O)-NR5R6; R4 是 H或-C (=NH)-NH2; R5和R6独立地是H J1-C6烷基、-CH2-环丙基、-环丙基或芳基烷基，条件是R 5和R6二者不都 是H; X和Y独立地是-CH2-或-S-，条件是如果X是-CH2-，则Y不是-CH2-; Z是-CHR7-或S并且R7是H或C1-C4烷基、卤素、-OH或-O-C 1-C4烷基； R8 是 H或-Qfe; Ar是任选地被一个&-〇4烷基、卤素、-OH或-O-C1-C4烷基取代的杂芳基或苯基。2. 权利要求1所述的化合物，其中RdPR6独立地是HX1-C6烷基或芳基烷基。3. 权利要求1所述的化合物，其中X和Y中仅一个是-S-。4. 权利要求1所述的化合物，其中X是-CH2-。5. 权利要求1所述的化合物其中X和Y二者都是-S-。6. 根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，其中Ar是噻吩。7. 根据权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中R8是-CH3。8. 根据权利要求1 _7中任一项所述的化合物，其中R3是-C (0) -NR5R6。9. 根据权利要求1-8中任一项所述的化合物，其中R5是H并且R6是C1-C 4烷基。10. 根据权利要求1-8中任一项所述的化合物，其中R5和R6二者都是-CH2CH 3。11. 根据权利要求1-10中任一项所述的化合物，其中R2是卤素。12. 权利要求11所述的化合物，其中R2是-Cl。13. 权利要求11所述的化合物，其中R2是-F。14. 治疗尿崩症、原发性夜间遗尿症和夜尿症中的一种的方法，所述方法包括向需要其 的患者施用治疗有效量的权利要求1-13中任一项所述的化合物。15. 权利要求1-13所述的化合物中的任一种用于治疗尿崩症、原发性夜间遗尿症或夜 尿症的用途。16. 药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1-13中任一项所述的化合物，所述 药物组合物用于治疗尿崩症、原发性夜间遗尿症或夜尿症。17. 根据权利要求1-13中任一项所述的化合物用于制造药物的用途，所述药物用于治 疗尿崩症、原发性夜间遗尿症或夜尿症。
【专利摘要】血管加压素-2受体激动剂，其药物组合物和使用其治疗尿崩症、原发性夜间遗尿症和夜尿症的方法。
【IPC分类】A61K38/11, C07D417/06, C07K7/16
【公开号】CN105492441
【申请号】CN201480041380
【发明人】卡齐米日·维希涅夫斯基, 克劳迪奥·施泰加特, 皮埃尔·里维埃
【申请人】辉凌公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年7月25日
【公告号】CA2919208A1, EP3024829A1, US20150307555, WO2015013690A1
【专利说明】血管加压素-2受体激动剂
[0001 ] 相关申请
[0002] 本申请要求2013年7月26日提交的美国临时申请61/859,024和2014年3月12日提 交的61/952,073的利益，所述两个申请都通过引用完整地结合于此。
[0003] 题堡
[0004] 本发明涉及对血管加压素-2(V2)受体具有激动剂活性的新化合物，包含这些化合 物的药物组合物，和所述化合物用于制造用于治疗疾病的药物的用途。
[0005] 罝量
[0006] 存在三种已知的血管加压素受体亚型，Vla、Vlb和V2JU受体也称为V 3受体并且Vla 受体也称为Vi受体。各个亚型在组织中具有不同的表达模式，发现V2主要在肾中，在那里其 介导内源配体血管加压素的抗利尿活性(Favory等人，2009) Jib广泛分布于脑中（Hernando 等人，2001) 被发现于多种组织，包括平滑肌、肝、肾、血小板、脾和脑（Zingg，1996; Ostrowski等人，1994)。
[0007] V2受体的激动剂在临床上是有用的。去氨加压素(desmopressin)是一种V2受体激 动剂，其在一些地区被批准用于治疗尿崩症（diabetes insipidus)、原发性夜间遗尿症 (primary nocturnal enuresis)、夜尿症（nocturia)和凝血障石导（coagulation disorders)，包括血友病 A(haemophilia A)和血管性血友病（von Willebrand's disease)。去氨加压素结合并激活V#PVlb受体二者，对Vla有较弱活性。
[0008] 已经显示去氨加压素部分通过肾分泌(例如Fjellestad-Paulsen等人，1993)，并 且去氨加压素的半衰期在患有肾损伤的患者中增加（Ruzicka等人2003 ; Agersoe等人 2004) Jgersoe等人提示增加的半衰期可能导致延长的抗利尿效应并且增加低钠血症(血 清钠水平的降低，其可能导致不良事件如发作或昏迷)的风险。他们进一步陈述"尽管去氨 加压素似乎是安全的并且被具有受损的肾功能的患者良好耐受，但当向有效用药方案滴定 时，如果将患有中度或严重肾功能的患者用去氨加压素治疗，则应当谨慎实行。"
[0009] 因此，需要另外的对Vlb受体具有减小的活性的％受体激动剂。此外，还需要不那么 依赖肾来除去的￥ 2受体激动剂。
[0010] 挺塗
[0011] 在一个实施方案中，提供根据式I的化合物或其药用盐，
[0012]
[0013] 其中R2是H、Cl-C4烷基、卤素、-OH或-〇-d-C4烷基；
[0014] R3 是 Η或-CH2-OH或-C(0)-NR5R6;
[0015] R4是 Η或-C(=NH)-NH2;
[0016] R5和R6独立地是Η、&-〇5烷基、-CH2-环丙基、-环丙基或芳基烷基，条件是R 5和R6二 者不都是Η;
[0017] X和γ独立地是-CH2-或-S-，条件是，如果X是-CH2-，则Υ不是-CH2-;
[0018] z是-CHR7-或S并且R7是HSCrC*烷基、卤素、-OH或-0-&-C4烷基；
[0019] R8 是 Η或-CH3;并且
[0020] Ar是任选地被一个&-C4烷基、卤素、-OH或-0-&-C4烷基取代的杂芳基或苯基。
[0021] 在一些实施方案中，R5和R6独立地是Η、&_〇5烷基、或芳基烷基。
[0022] 在一些实施方案中，R5和R6独立地是Η、&_〇5烷基或芳基烷基。
[0023] 在一些实施方案中，R5和R6二者不都是Η。
[0024] 在一些实施方案中，X和Υ中仅一个是-S-。在一些实施方案中，X是-CH2-。在一些实 施方案中，X和Y二者都是 -S-。
[0025] 在一些实施方案中，Ar是噻吩。
[0026] 在一些实施方案中，R8是-CH3。
[0027] 在一些实施方案中，R3是-C(0)-NR5R6。在这些实施方案的某些中，R 5是Η并且R6是 &-C4烷基。在这些实施方案的某些中，R5和R6二者都是-CH2CH 3。
[0028] 在一些实施方案中，R2是卤素。在这些实施方案的某些中，R2是-Cl。在这些实施方 案的某些中，R 2是-F。
[0029] 根据一个实施方案，本文中还提供的是治疗尿崩症、原发性夜间遗尿症和夜尿症 中的一种的方法，所述方法包括向需要其的患者施用治疗有效量的根据式I的化合物。本发 明还包括本文所述的化合物在治疗本文所述的病症中的用途，以及本文所述的化合物在制 造药物中的用途，所述药物用于治疗本文所述的病症。
[0030] 根据一个实施方案，将式I的化合物用于药物，所述药物用于治疗尿崩症、原发性 夜间遗尿症或夜尿症。
[0031 ] 详细描述
[0032] 除非另有陈述，本申请(包括说明书和权利要求）中使用的以下术语具有以下给出 的定义。必须注意，如说明书和所附权利要求中使用的，单数形式"一个(a)"、"一个(an)"和 "所述(the)"包括复数指代，除非上下文明确另有所指。标准化学术语的定义可以在参考著 作中找到，包括Carey和Sundberg(2007)Advanced Organic Chemistry第5版·Α和B卷， Plenum Press，New York。除非另有陈述，本发明的实践将利用本领域技术内合成有机化 学、质谱、制备型和分析型色谱方法、蛋白质化学、生物化学和药理学的常规方法。
[0033] "烷基"是&-12直链或支链烷基。支链烷基包括异_、仲-和叔-构型。
[0034] "芳基"是5-12个碳原子的单-或双环芳族碳环体系，其任选地被&-C4烷基、卤素、-OH或-0-&-C4烷基取代。示例性的单和双环芳族碳环体系包括任选地取代的苯基和任选地 取代的萘基。
[0035] "芳基烷基"是具有取代基芳基或杂芳基的烷基基团。
[0036] "杂芳基"是任选地被Ci_C4烷基、卤素、-OH或-O-C1-C4烷基取代的芳族杂环五-或 六-元环体系。五元杂芳环体系是具有五个环原子的单环芳环体系，其中1、2、3或4个环原子 独立地选自N、0和S。示例性的五元杂芳环体系包括任选地取代的咪唑基、噻唑基、噻吩基、 呋喃基、吡唑基和三唑基。六元杂芳环体系是具有六个环原子的单环芳环体系，其中1、2、3 或4个环原子独立地选自N、0和S。示例性的六元杂芳环体系包括任选地取代的吡啶基、嘧啶 基和吡嗪基。
[0037] 本发明的一个实施方案提供药物组合物，所述药物组合物包含本发明的化合物。 在第一实施方案中，所述药物组合物还包含一种以上药用赋形剂或载体，和任选地其他治 疗和/或预防成分。这种赋形剂对于本领域技术人员是已知的。本发明的化合物包括，但不 限于，碱性化合物如游离碱。对药用赋形剂和盐的深入讨论可在R e m i n g t ο η ' s Pharmaceutical Sciences,(Easton,Pennsylvania:Mack Publishing Company, 1990)中获得。
[0038] 药用盐的实例包括酸加成盐，例如通过与以下各项反应形成的盐:氢卤酸如盐酸 和无机酸如硫酸、磷酸和硝酸，以及脂肪族酸、脂环酸、芳族酸或杂环磺酸或羧酸如甲酸、乙 酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、抗坏血酸、马来酸、羟基马 来酸、丙酮酸、对羟基苯甲酸、扑酸、甲磺酸、乙磺酸、羟基乙磺酸、卤代苯磺酸、三氟乙酸、三 氟甲磺酸、甲苯磺酸和萘磺酸。（参见，例如，1^找6等人，]\?1^1'111.3(3；[.66:119，1977以及 Wermuth，C·G·和P ·H. Stahl，编辑Pharmaceutical Salts : Properties，Selection and Use.Zurich:Verlag Helvetica Chimica Acta，2002)0
[0039] 根据想要的施用模式，药物组合物可以是固体、半固体或液体剂型的形式，如，例 如，片剂、栓剂、丸剂、胶囊、粉剂、液体、混悬剂、霜剂、软膏剂、洗液等，优选为适于单次施用 精确剂量的单位剂型。所述组合物将包含与药用载体结合的有效量的选择的药物，并且，此 外可以包含其他药剂、辅药、稀释剂、缓冲剂等。
[0040] 本发明包括药物组合物，所述药物组合物包含本发明的化合物连同一种或多种药 用载体和任选地其他治疗和/或预防成分，本发明的化合物包括其异构体、异构体的外消旋 或非外消旋混合物或药用盐或溶剂化物。
[0041] 对于固体组合物，常规无毒固体载体包括，例如，药用级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂 酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等。
[0042] 对于口服施用，所述组合物将通常采用片剂、胶囊、软凝胶胶囊非水溶液、混悬剂 或糖浆的形式。片剂和胶囊是优选的口服施用形式。在一些实施方案中，片剂是薄片 (wafer)，例如，速融薄片。在一些实施方案中，薄片通过舌下施用途径施用。用于口服使用 的片剂和胶囊将通常包含一种或多种通常使用的载体如乳糖和玉米淀粉。还通常加入润滑 剂，如硬脂酸镁。当使用液体悬浮液时，活性剂可以与乳化剂和悬浮剂合并。如果需要，也可 以加入调味剂、着色剂和/或甜味剂。其他用于结合入本文的口服制剂中的任选组分包括， 但不限于，防腐剂、悬浮剂、增稠剂等。
[0043]用于治疗的剂量将取决于组合疗法的成分的吸收、分布、代谢和排出速率以及本 领域技术人员已知的其他因素。剂量值也将随着要缓解的病症的严重度改变。要进一步理 解，对于任何特定受试者，可以根据个体需求和施用或监控治疗的施用的人的专业判断，随 时间调节具体的剂量方案和时间安排。在一些实施方案中，静脉内剂量为大约l〇〇ng。在一 些实施方案中，口服剂量为lyg至lmg。在一些实施方案中，鼻剂量为3mg 至6mg。
[0044] 使用的缩写有：
[0045]
[0046]
[0047]
[0048]
[0049] 除非另有指示，使用L-氨基酸并且使用常规氨基酸术语。除了二十种常规氨基酸 之外的氨基酸的实例包括：
[0050]
[0051]
[0052] 化合物[0053] 本发明的化合物具有式I的结构:
[0054] 和其药用盐，其中： ，.
[0055] R2 是Η、&-〇4 烷基、卤素、-OH 或-0-&-C4 烷基；
[0056] R3 是 Η或-CH2-OH或-C(0)-NR5R6;
[0057] R4是 Η或-C(=NH)-NH2;
[0058] R5和R6独立地是Η、&-〇5烷基、-CH2-环丙基、-环丙基或芳基烷基，条件是R 5和R6二 者不都是Η;
[0059] X和Υ独立地是-CH2-或S，条件是，如果X是-ch2-，则Υ不是-ch2-;
[0060] z是-CHR7-或S并且R7是!1或&_〇4烷基、卤素、-OH或-0-&-C4烷基；
[0061] R8 是 Η或-CH3;
[0062] Ar是任选地被一个&-C4烷基、卤素、-0Η或-0-&-C4烷基取代的杂芳基或苯基。
[0063]表1.本发明的实例化合物。
[0064]
[0065]
[0066]化合物 1-41(SEQ ID 1-41)的结构：
[0067]
[006?
[0069:
[00/
[0071：
[0072
[0073]
[0074]
[0075]
[0076
[0077
[0078]
[0079]
[0080]
[0081
[0082:
[0083]
[0084]
[0085]
[0086]
[008
[0088] 表2:化合物1-41( SEQ ID 1-41)的物理化学性质
[0089]
[0090]
[0091 ]表3:对于化合物1-41的体外测定数据
[0092]
[0093]
[0094] 表4:氨基酸命名的关键
[0095]
[0096]
实施例
[0097] 一般合成
[0098] 从商业供应商（Aapptec，EMD Millipore和Peptides International)购买氨基酸 衍生物。从商业供应商(PCAS BioMatrix Inc.和EMD Millipede)购买树脂。所有其它试剂、 化学品和溶剂从Sigma-Aldrich和VWR购买。
[0099]通过标准方法，以固相肽化学，利用Fmoc方法合成本文所述的化合物^手动地、使 用Tribute肽合成仪(Protein Technologies Inc.，Tucson，Arizona)自动地或通过手动和 自动合成的结合组装肽。
[0100] 在Waters Prep LC System上使用PrepPack cartridge Delta-Pack C18, 3〇〇A I 15μπι，47χ 300mm，以lOOmL/min的流速和/或在Phenomenex Luna C18柱，1〇〇Α，5μπι，30χ 100mm上以40mL/min的流速进行制备型Technologies 1200rr Series液 相色谱上，使用Agilent Zorbax C18柱，1·8μπι，4·6χ 110mm，以1.5mL/min的流速进行分析 型反相Technologies 1200Series色谱上，通过在Phenomenex Gemini 1 |〇A C18柱，3μπι，2χ 150mm上流速为0.3mL/min的反相HPLC进行最终化合物分析。在MAT Finningan LCQ电喷雾质谱仪上记录质谱。除非另有陈述，所有反应在室温进行。以下标准 参考文献对一般实验设置以及所需起始材料和试剂的利用度提供进一步指导：Kates， S.A.，Albericio，F.，编辑，Solid Phase Synthesis:A Practical Guide?Marcel Dekker， New York?Basel?2000；Greene?T.ff.?ffuts ?P.G.M.^Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley Sons Inc·，第2版，1991;Stewart，J.M.，Young，J.D.，Solid Phase Synthesis，Pierce Chemical Company，1984; Bisel lo，等人，J · Biol · Chem · 1998，273， 22498-22505 ;Merrifield，J.Am.Chem.Soc. 1963,85,2149-2154;以及Chang和White P.D.， 'Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis:a Practical Approach5?Oxford University Press，Oxford，2000。
[0101] 使用以下保护基来保护给定氨基酸侧链官能团:？匕以2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并 咲喃-5-磺酰基）用于Arg; tBu(叔丁基）用于Tyr并且Trt (三苯甲基）用于Cys、Gln和Asn。
[0102] Fmoc-保护的氨基酸在Tribute合成仪上的偶联利用HBTU/NMM在DMF中介导，除了 半胱氨酸衍生物以外，半胱氨酸衍生物与DIC/HOBt在DMF中偶联。合成期间使用30-60分钟 的单个循环以及5倍过量的活化的Fmoc-保护的氨基酸。Fmoc保护基的去除通过UV监测。利 用在DMF中的20%哌啶进行多次(多至10次，根据需要)肽树脂的两分钟洗涤。
[0103] 对于所有氨基酸，以手动模式采用DMF中DIC/HOBt介导的偶联。合成期间使用至少 2小时的单循环以及3倍过量的活化的Fmoc-保护的氨基酸。偶联的完成利用茚三酮 (nihidrine) (Kaiser)测试评估。Fmoc保护基的去除利用在DMF中的20%哌啶单次3〇111；[11洗 涤肽树脂实现。
[0104] 肽合成完成时，利用DCM洗涤肽树脂并在真空中干燥。将树脂用TFA/H20/TIS 96: 2:2(v/v/v)处理2h以去除侧链保护基并同时将肽从树脂上切下。将肽过滤，用二乙醚沉淀 并滗析。为了获得具有二硫桥键的肽，将沉淀溶解在纯的(neat)TFA中并且随后将溶液倒入 在水中的10%乙腈中。在一些情况下，加入额外量的乙腈以溶解底物（substrate)。将线形 肽用0.1M I2/Me0H氧化。逐滴加入氧化剂溶液，直到黄色持续存在。过量的碘用固体抗坏血 酸还原。然后利用浓氨水将pH调节至约4。将获得的溶液直接上样在HPLC制备型柱上并且用 组分B的梯度洗脱(参见下表）。
[0105] 为了通过酰胺键形成环化肽，将粗制线形肽溶解于DMF并且还制备HBTU在DMF中的 溶液。可互换地将肽溶液和活化剂溶液加入至一体积的含DIPEA的剧烈搅拌的DMF。在加入 纯DIPEA的情况下将pH维持在9-10。通过HPLC监测反应，并且在加入最后部分的活化剂和肽 溶液后通常检测不到底物峰。将反应混合物用0.1%Ac0H稀释并且将获得的溶液直接上样 在HPLC制备型柱上并且用组分B的梯度洗脱。
[0106] 利用缓冲系统T纯化各粗制肽。将通过反相分析型HPLC确定的纯度超过93%的级 分汇集并再上样到柱上并且用缓冲液T洗脱以提供三氟乙酸盐（trif luoroacetate salts)。在一些情况下，利用缓冲系统C进行另外的纯化。为了获得乙酸盐（acetate salts)，将来自利用缓冲液T或C的运行(runs)的级分再上样到柱上并且将所述柱用5体积 的0.1M乙酸铵洗涤。将终产物用缓冲液A洗脱。将级分汇集并冻干。
[0107] 表.缓冲组合物
[0108]
[0109]典型地发现制备的化合物是至少约9 5 %纯的。
[0110] 实施例 1-SEQ ID:21
[0111] 从7 · 8g(6 · 9mmol)的H-Pro-2-氯三苯甲基AM树脂(EMD Mi 11 ipore，目录号856057， 0.88mmol/g)开始手动组装1-7片段。采用在DMF中的DIC/HOBt介导的偶联。合成期间使用至 少2小时的单个循环以及3倍过量的活化的Fmoc-保护的氨基酸。利用茚三酮测试评估偶联 的完成。利用在DMF中的20 %哌啶的单次30min洗涤肽树脂实现Fmoc保护基的去除。使用以 下氨基酸衍生物来组装与树脂结合的肽的残基1-7:?111〇〇-〇78((012)3以0)0丨1311)-〇!1，？1]1〇(3-八811(1'竹)-0!^111〇(3-￥31-0!^111〇(3-111丨-0!1和8〇(3-0?3-0!1。在组装1-7肽片段后，将树脂用0〇1 彻底洗涤并用DCM/HFIP 7:3(v/v)混合物处理（2x lh，各30mL)。然后将溶剂蒸发并将剩余 物用乙醚沉淀，过滤并在真空中干燥。获得5.79g(4.63mmo 1，67 % )的粗制的受保护的线形 肽。（在本文所述的其他化合物的合成中使用该产物的剩余物。）
[0112] H-D_Arg-NEt2X 2TFA·将2·81g(5·4mmol)的Boc-D_Arg(Pbf)-〇H(Chem Impex， cat#05282)，1.95mL( 11.2mmol)的DIPEA和2.13g(5.6mmol)的HBTU溶解在 10mL DMF中。随后 将0.62mL(6mmol)的二乙胺加入所述溶液中。在5min后通过分析型HPLC未检测到底物。将反 应混合物倒入500mL的水中并且将沉淀物通过离心分离并在 真空中干燥。将剩余物用20mL TFA/TIS/H 20(96/2/2，V/v/v)处理lh并且蒸发溶剂。将剩余物用乙醚处理并滗析。获得 1.65g(3.6mmo 1，67 % )的半固体衍生物，其不纯化即用于随后的步骤。
[0113] 与H-D-Arg-NEt2偶联.将2.3g(大约1.86mmol)的线形的受保护的肽和0.76g (2mmol)的HBTU溶解在 10mL含0.73mL(4.2mmol )DIPEA的DMF中。随后将在lmL DMF中的0.93g (2.05mmol)的H-D-Arg(Pbf )-OH x 2TFA加入反应混合物中。在5min后通过HPLC未检测到底 物。将产物用1L水沉淀，过滤出并且在真空中干燥。获得2.6g (1.78mmo 1，96 % )的粗制的受 保护的线形肽。将完全保护的肽用20mL TFA/TIS/H20(96/2/2，V/v/v)处理lh并且蒸发溶 剂。将未保护的线形肽用乙醚沉淀并冻干。产量1.82g(l. 55mmol，83% )。
[0114] 将全部量的线形肽溶解在50mL的DMF中。还制备0.59g(大约1.55mmol )HBTU在10mL 的DMF中的溶液。可交替地将肽溶液和活化剂溶液分别以10个5mL和lmL的部分加入50mL剧 烈搅拌的含200yL DIPEA的DMF中。在加入纯的DIPEA的情况下将pH保持在9-10。在加入最后 部分的活化剂和肽溶液后，通过HPLC未检测到底物峰。将反应混合物用0.1 %AcOH稀释至 1L。将获得的溶液直接加载到HPLC制备型柱上并且利用缓冲系统T纯化，以组分B的梯度洗 脱(参见上表）。将通过反相分析型HPLC确定的具有超过93%的纯度的级分汇集并重新加载 到柱上。将所述柱用5体积的0.1M AcONH4洗涤并随后将化合物用缓冲液C洗脱，以提供乙酸 盐。将级分汇集并冻干。获得703.111^(0.60111111 〇1，22%，全部的，基于89.6%肽含量）的白色 肽粉末。通过分析型HPLC确定产物纯度为99.7 %并且观察的M+H是1045.6(计算的M+H = 1045·5)〇
[0115] 实施例2-SEQ ID N0:10
[0116] 将2.32g(约1.8mmol)的SEQ ID N0:21的合成中制备的受保护的线形肽溶解在7mL 的DMF中，并且加入0 · 63mL(3 · 6mmo 1，2当量)NMM，接着加入0 · 76g(2mmo 1，1 · 1 当量)HBTU。在 分开的瓶中，将0.648(2.81111]1〇1，1.5当量）的硫酸胍丁胺悬浮在71111^含0.49111以2.81]11]1〇1)的 DIPEA的DMF中。将N，0-二（三甲基甲硅烷基）乙酰胺(BTA，Sigma-Aldrich，cat#128910)加入 不时涡旋/超声处理的悬浮液中。在将4当量的BTA加入悬浮液中后获得澄清溶液。将两种溶 液合并并且在5min后通过HPLC未检测到底物肽。将产物用1L水沉淀，过滤出并在真空中干 燥。将得到的粉末用50mL的TFA/TIS/H 20 96/2/2(ν/v/v)混合物处理1.5小时。蒸发溶剂并 且将线形肽用乙醚沉淀，在水/乙腈中重构并冻干。
[0117] 将在之前的步骤获得的全部量的肽(2.13g，大约2mmo 1)溶解在50mL的DMF中。还制 备0.76g(2mmol )HBTU在10mL的DMF中的溶液。可交替地将肽溶液和活化剂溶液分别以10个 2.5mL和0.5mL的部分加入至50mL的剧烈搅拌的含400yL的DIPEA的DMF中。加入纯DIPEA，将 pH维持在9-10。在加入最后部分的活化剂和肽溶液后，未检测到底物峰。将反应混合物用 0.1 %AcOH稀释至1L并且将获得的溶液直接加载在HPLC制备型柱上并且用缓冲系统T纯化， 用组分B的梯度洗脱(参见上表）。将通过反相分析型HPLC确定的具有超过93%的纯度的级 分汇集并再加载到柱上。将柱用5体积的0.1M AcONH4洗涤并且随后将化合物用缓冲液C洗 脱，以提供乙酸盐。将级分汇集并冻干。获得656.711^(0.62111111 〇1，23%的整体产率，基于 89.5 %肽含量）的白色肽粉末。通过分析型HPLC确定产物纯度为100.0 %并且观察的M+H是 946.6 (计算的M+H为946.4)。
[0118] 实施例3-SEQ ID N0:5
[0119] 使lg(大约lmmol)的FMPB AM树脂（EMD Millipore，cat#855028)在 15ml的DCE/ TMOF 1:1混合物中膨胀。向树脂悬浮液中加入异丁胺（1.5mL，15mmol)，接着加入3.2g固体 三乙酰氧基硼氢化钠。将悬浮液震荡过夜。将树脂用MeOH、DMF和DCM洗涤并随后在DCM中用 Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH/DIC(4当量)酰化。将树脂用DMF洗涤并且利用氯醌(chloranil)测试 对酰化完成度进行测试（阴性）。将树脂分为三等份并且在Tribute合成仪上以0.33mmol规 模继续合成。使用在DMF中的HBTU/NMM介导的或DIC/HOBt (对于Cys)介导的单次偶联以及5 倍过量的Fmo c-保护的氨基酸。通过利用在DMF中的20 %哌啶的若干次连续的2mi η洗涤去除 ?111〇(3保护基。在自动合成中使用以下氨基酸衍生物:？1]1〇(3-?1'〇-〇!1，？1]1〇(3-〇5^((012)3以0) 0七1311)-0!1，卩1]1〇。-八811(1'1'1:)-0!1，卩1]1〇。-\%1-0!1，卩1]1〇。-1'11；[-0!1和130。-0卩&-0!1。在整个肽序列被 组装后，利用20mL的TFA/H 20/TIS 96:2:2(v/v/v)将肽从树脂上切割达2h。将线形肽溶解在 40mL的含200yL的DIPEA的DMF中。还制备152mg(大约0.4mmol)HBTU在5mL的DMF中的溶液。可 交替地将肽溶液和活化剂溶液分别以10个4mL和0.5mL的部分加入至40mL的剧烈搅拌的DMF 中。加入纯的DIPEA，将pH维持在9-10。在加入最后部分的活化剂溶液后，通过HPLC未检测到 底物峰。将反应混合物用0.1 %Ac0H稀释至1L。将获得的溶液直接加载到HPLC制备型柱上。 将化合物通过在缓冲液T中的三次连续运行纯化。
[0120] 将超过97%纯度的级分汇集并冻干。获得49.0mg(0.042mmol，12%整体，假设90% 肽含量）的白色肽粉末。通过分析型HPLC确定产物纯度为99.5 %并且观察的M+H为1045.6 (计算的 Μ+Η=1045·5)。
[0121] 实施例4-SEQ ID Ν0:9
[0122] 使0 · 37g(大约0 · 3mmol)的 1，4-二氨基丁烷-2-氯三苯甲基树脂(EMD Mi 11 ipore， cat#856085)在10mL的DMF中膨胀并且将树脂置于自动合成反应容器中。肽组装在Tribute 合成仪上进行。使用在DMF中的HBTU/NMM介导的或DIC/HOBt(对于Cys)介导的单次偶联利用 5倍过量的Fmoc-保护的氨基酸。通过利用在DMF中的20%哌啶的若干次连续的2min洗涤去 除Fmoc保护基。在自动合成中使用以下氨基酸衍生物:Fmoc-Pr〇-OH，Fmoc-Cys((CH2)3C(0) 0七1311)-0!1，卩1]1〇。-八811(1'1'1:)-0!1，卩1]1〇。-\%1-0!1，卩1]1〇。-1'11；[-0!1和130。-15^(^1311)-0!1。在整个肽序 列被组装后，利用30mL的HFIP/DCM3 :7(v/v)将肽从树脂上切下达2h。将树脂过滤并蒸发溶 剂。将线形的受保护的肽用无水乙醚沉淀。将沉淀滗析并悬浮在20mL乙腈中。随后将lllmg (0.4mmol)的Z(2-Cl)-0Su和0.136mL(0.8mmol)DIPEA加入悬浮液中。在底物溶解后，将溶剂 蒸发并且将剩余物用20mL的TFA/TIS/H 20 95/2.5/2.5混合物处理1.5h。然后将TFA蒸发并 且将剩余物用二乙醚沉淀。将粗制的线形肽溶解在100mL的含200yL DIPEA的DMF中。随后将 120mg(0.31mmol)HBTU在5mL DMF中的溶液加入剧烈搅拌的反应混合物中。30min后，将反应 混合物用1L 0.1%Ac0H稀释并且将获得的溶液上样到制备型HPLC柱上。在缓冲系统T中快 速(大约3%MeCN/min.)洗脱环肽。将超过97%纯度(通过分析型HPLC)的级分汇集并冻干。 在0°C将冻干物用5mL的TMSBr/茴香硫醚/TFA混合物（1/1/6^八八)处理111。将了?4蒸发并且 将肽用乙醚沉淀。通过在缓冲液T中的单次循环纯化终产物。
[0123] 将超过97 %纯度的级分汇集并冻干。获得77.5mg( 0.079mmo 1，26 %整体，假设90 % 肽含量）的白色肽粉末。通过分析型HPLC确定产物纯度为99.6%并且观察的M+H是886.4(计 算的 Μ+Η=886·4)。
[0124] 实施例5-SEQ ID Ν0:17
[0125] 使0 · 43g(大约 0 · 3mmol)的 H-Arg(Pbf)-0-2-氯三苯甲基树脂（EMD Millipore， cat#856067)在10mL的DMF中膨胀并且将树脂置于自动合成反应容器中。在Tribute合成仪 上进行肽组装。使用在DMF中的HBTU/NMM介导的或DIC/HOBt(对于Cys)介导的单次偶联，利 用5倍过量的Fmoc-保护的氨基酸。通过利用在DMF中的20 %哌啶的若干次连续的2min洗涤 去除?111〇(3保护基。在自动合成中使用以下氨基酸衍生物:？1]1〇(3-?1'〇-〇!1，？1]1〇(3-〇5^((012)3〇 (0)(^811)-0!^111〇(3-厶811(1^〇-0!^111〇(3,31-0!1和?111〇(3-111丨-0!1。在3-8肽序列组装后，使用 DIC/HOBt方法利用2倍过量的试剂将Fm〇C-Phe(4-Et)-OH手动偶联。然后通过将树脂用20% PIP/DMF处理30min并且用Boc20在DMF中酰化N端氨基官能团来将Fmoc基团用Boc基团替代。 利用30mL的HFIP/DCM 3:7(v/v)将线形肽从树脂上切下达2h。将树脂过滤并蒸发溶剂。将线 形的受保护的肽用无水乙醚沉淀。将沉淀滗析并且在真空中干燥。获得450mg粗制的保护的 肽。将全部量的肽(大约0.3mmol)溶解在10mL含0.5mL DMF和61yL(0.45mmol)NMM的1，2-二 氯乙烷中。在冰浴上将溶液冷却至〇°C并且加入61yL(0.45mmol)的氯甲酸异丁酯。将反应混 合物在〇°C磁力搅拌10min。一次性加入160mg(4.5mmo 1)硼氢化钠在5mL水中的溶液。将反应 用200mL水稀释并且通过离心将产物分离并在真空中干燥。然后将产物用20mL的TFA/TIS/ H20 95/2.5/2.5混合物处理1.5h。随后将TFA蒸发并将剩余物用二乙醚沉淀。将粗制的线形 肽溶解在80mL的含200yL DIPEA的DMF中。随后将61mg(0.15mmol)HBTU在5mL的DMF中的溶液 加入剧烈搅拌的反应混合物中。30min后，将反应混合物用1L 0.1%Ac0H稀释并且将获得溶 液上样到制备型HPLC柱上。通过在缓冲液T中的两次连续运行纯化环肽。
[0126] 将超过97%纯度的级分汇集并冻干。获得41.7mg(0.039mmol，13%整体，假定90% 肽含量）的白色肽粉末。通过分析型HPLC确定产物纯度为95.1 %并且观察的M+H是970.6(计 算的 M+H=970.5)。
[0127] 实验(生物测试)
[0128] 体外受体测定
[0129] 乂2受体活性
[0130] 在转录报告基因测定中通过将h V2受体表达DNA与包含调节萤火虫荧光素酶的表 达的细胞内钙响应启动子元件的报告DNA-起瞬时转染到HEK-293(人胚肾293细胞系)细胞 来确定化合物对人V 2受体(h V2R)的激动剂活性。对于此测定的进一步指导，参见Boss，V.， Talpade，D.J.，Murphy，T.J. J.Biol.Chem. 1996，May 3;271 (18) ,10429-10432。将细胞暴露 于每剂量稀释10倍的化合物的系列稀释液达5h，接着裂解细胞，确定荧光素酶活性，并通过 非线性回归确定化合物功效和EC 5Q值。在各实验中使用去氨加压素(dDAVP)作为内部对照。 测试的化合物的结果在表3中显示。
[0131] Vlb受体活性
[0132] 为了确定选择性，在表达人Vlb受体(hVlbR)的基于荧光素酶的转录报告基因测定 中测试化合物。在被稳定转染以表达hVlbR的Flp-In?293细胞系(HEK-flpin)中的转录报告 基因测定中确定化合物对hVlbR的激动剂活性。这些细胞用NFAT响应元件-荧光素酶(NFAT-Luc)报告子瞬时转染。将细胞暴露于每剂量10倍稀释的化合物的系列稀释液达5小时，接着 裂解细胞，确定荧光素酶活性，并通过非线性回归确定化合物功效和EC 5Q值。在各实验中使 用AVP作为内部对照。测试的化合物的结果在表3中显示。
[0133] 肾清除率
[0134] 去氨加压素主要通过肾从身体清除（"肾清除"）。本发明的化合物具有更高程度的 通过非肾机制的清除。在进行肾切除和假手术的大鼠中进行药代动力学实验。在肾切除的 大鼠中确定非肾清除率(CLnr)，并且在进行假手术的大鼠中确定总清除率(CLsham)。通过 (CLnr/CLsham)x 100计算％非肾清除率。
[0135] 对于药代动力学研究，经由颈静脉(用于化合物施用)和颈动脉(用于血液收集)给 成年雄性Sprague Dawley大鼠插入导管。将含有多种化合物的溶液(盒剂量给药)注射入颈 静脉导管(0. lmg FB/ml的各化合物，0.3ml/动物;0. lmg FB/kg/化合物的标称剂量）。使用 自动化血液取样系统Instech Laboratories Automated Blood Sampling Unit第2代 (ABS2)在施用后2、6、10、15、20、30、45、60、90和120分钟收集血液样品。使用K2EDTA作为抗 凝血剂由全血制备血浆。样品的后续生物分析包括化合物提取和使用标准LC/MS方法的血 衆浓度确定。从峰面积和校准曲线计算分析物浓度。通过非房室(noncompartmental)分析 法，使用WINN0NLIN? ν6·3软件(Pharsight Corporation)对各个动物的化合物浓度-时间 曲线进行最佳拟合来获得PK参数。
[0136] 抗利尿
[0137] 在大鼠模型中测试化合物的抗利尿活性。简言之，将插导管的正常血容量的 (euvolemic)Sprague Dawley大鼠置于代谢笼中。将各代谢笼被设置为通过置于尿收集瓶 上方的力传感器连续测量自发尿排出以使用N0T0C0RD?软件监测和记录尿排出的时间过 程。使用注射栗和旋转/系绳（swivel/tether)方法，使大鼠接受静脉内输注测试化合物或 载体达三小时。在化合物的施用期间（0-3小时）收集尿排出数据并且在施用后收集5小时。 在一些情况下，还确定尿摩尔渗透压质量浓度。本发明的化合物显示抗利尿活性。
[0138] 药物组合物
[0139] 还提供如本文定义的式(I)的化合物作为药物的用途。还提供药物组合物，其包含 本文所定义的式(I)的化合物作为活性成分，连同药用辅药、稀释剂或载体。
[0140] 所述药物组合物可以适于不同施用模式，包括例如，口服施用和鼻施用。所述组合 物可以因此例如是片剂、胶囊、粉剂、微粒、粒剂、糖浆、混悬剂和溶液的形式。
[0141] 所述药物组合物可以任选地包含例如选自以下各项的至少一种另外的添加剂:崩 解剂、粘合剂、润滑剂、调味剂、防腐剂、着色剂及其任意混合物。这样的和其他添加剂的实 例见于'Handbook of Pharmaceutical Excipients ' ；Ed.A.H.Kibbe，第3版，American Pharmaceutical Association,USA and Pharmaceutical Press UK，2000中。
[0142] 治疗方法
[0143] 在另一个方面，本发明提供上述化合物用于制造药物的用途，所述药物用于治疗 尿崩症、原发性夜间遗尿症和夜尿症。此外，提供治疗尿崩症、原发性夜间遗尿症和夜尿症 的方法。如本文使用的，'治疗'意为当以合适剂量施用本发明的化合物时，缓解症状，推迟 疾病的发作和/或治愈疾病。
[0144] 根据本发明的化合物的典型剂量在宽范围内变化并且将取决于各种因素如各个 患者的个体需求和施用途径。剂量可以每日施用一次或比每日一次更频繁地施用，例如间 歇施用。本领域技术人员的医师将能够针对手头的情况优化剂量。
[0145] 本说明书中引用的所有出版物和专利申请都通过引用并入本文，就像具体和分别 说明每个单独的出版物或专利申请都通过参考并入一样。
[0146]尽管为了清楚理解，上述发明已经通过说明和实施例的方式详细描述，根据本发 明，对本领域技术人员将容易显而易见的是，在不偏离所附权利要求的精神或范围的情况 下，可以对其中进行某些改变和改进。
【主权项】
1. 式I的化合物：或其药用盐，其中： R2是H、Ci-C4烷基、卤素、-OH或《i-C4烷基； R3 是 H或-CH2-OH 或-C(O)-NR5R6; R4 是 H或-C (=NH)-NH2; R5和R6独立地是H J1-C6烷基、-CH2-环丙基、-环丙基或芳基烷基，条件是R 5和R6二者不都 是H; X和Y独立地是-CH2-或-S-，条件是如果X是-CH2-，则Y不是-CH2-; Z是-CHR7-或S并且R7是H或C1-C4烷基、卤素、-OH或-O-C 1-C4烷基； R8 是 H或-Qfe; Ar是任选地被一个&-〇4烷基、卤素、-OH或-O-C1-C4烷基取代的杂芳基或苯基。2. 权利要求1所述的化合物，其中RdPR6独立地是HX1-C6烷基或芳基烷基。3. 权利要求1所述的化合物，其中X和Y中仅一个是-S-。4. 权利要求1所述的化合物，其中X是-CH2-。5. 权利要求1所述的化合物其中X和Y二者都是-S-。6. 根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，其中Ar是噻吩。7. 根据权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中R8是-CH3。8. 根据权利要求1 _7中任一项所述的化合物，其中R3是-C (0) -NR5R6。9. 根据权利要求1-8中任一项所述的化合物，其中R5是H并且R6是C1-C 4烷基。10. 根据权利要求1-8中任一项所述的化合物，其中R5和R6二者都是-CH2CH 3。11. 根据权利要求1-10中任一项所述的化合物，其中R2是卤素。12. 权利要求11所述的化合物，其中R2是-Cl。13. 权利要求11所述的化合物，其中R2是-F。14. 治疗尿崩症、原发性夜间遗尿症和夜尿症中的一种的方法，所述方法包括向需要其 的患者施用治疗有效量的权利要求1-13中任一项所述的化合物。15. 权利要求1-13所述的化合物中的任一种用于治疗尿崩症、原发性夜间遗尿症或夜 尿症的用途。16. 药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1-13中任一项所述的化合物，所述 药物组合物用于治疗尿崩症、原发性夜间遗尿症或夜尿症。17. 根据权利要求1-13中任一项所述的化合物用于制造药物的用途，所述药物用于治 疗尿崩症、原发性夜间遗尿症或夜尿症。
【专利摘要】血管加压素-2受体激动剂，其药物组合物和使用其治疗尿崩症、原发性夜间遗尿症和夜尿症的方法。
【IPC分类】A61K38/11, C07D417/06, C07K7/16
【公开号】CN105492441
【申请号】CN201480041380
【发明人】卡齐米日·维希涅夫斯基, 克劳迪奥·施泰加特, 皮埃尔·里维埃
【申请人】辉凌公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年7月25日
【公告号】CA2919208A1, EP3024829A1, US20150307555, WO2015013690A1
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