神经调节蛋白用于预防、治疗或延迟心脏室性心律失常的方法和组合物的制作方法
神经调节蛋白用于预防、治疗或延迟心脏室性心律失常的方法和组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及纽兰格林蛋白在制备用于预防、治疗或延缓人类室性必律失常的药物 中的应用，W及所述用于预防、治疗或延缓人类室性必律失常的药物的使用方法。特别地， 本发明提供了预防、治疗或延缓人类室性必律失常的方法，该方法是在患有必律失常或者 具有必律失常风险的特殊人群中使用包含纽兰格林蛋白的药物。具体而言，本发明涉及神 经调节蛋白在必血管疾病治疗中的新适应症抗室性必律失常。
[0002] 发明背景
[0003] 神经调节蛋白（neuregulin, NRG ;heregulin, HRG)，又叫神经胶质生长因子 (glial growth factor, GGF)，neu 分化因子（new differentiation_facto;r，NDFO,为分子 量在44KD左右的糖蛋白，它们在细胞间传递信号，是酪氨酸激酶受体化bB家族的配体。神 经调节蛋白家族含 4 个成员；NRG1，NRG2, NRG3, NRG4(化Ils et al.，Exp Cell Res. 284 : 14-30,2003)。NRGl在神经系统、必脏和乳腺中起着重要作用，还有证据显示NRGl信号传递 在其他一些器官系统的发育、功能W及人类疾病（包括精神分裂症和乳腺癌）的发病机理 中起作用。NRGl有很多异构体。对基因突变小鼠（基因敲除小鼠）的研究说明在N末端区 或表皮生长因子巧G巧类似区不同的异构体，其在体功能也不一样。本发明是W神经调节 蛋白1目（NRGl目）为基础的。
[0004] 神经调节蛋白 1目为一跨膜蛋白化Olmes et al.，Science 256,1205-1210， 1992)。膜外部分是N末端，包括免疫球蛋白类似区（Ig-Uke_domain)和EGF类似区 巧GF-Uke domain),膜内部分是C末端。在细胞外基质的金属蛋白酶作用下，神经调节蛋 白的膜外部分可被酶切下来而呈游离状态，从而有利于和周围细胞表面的化bB受体结合， 激活相应的细胞信号传递。化bB受体家族也分为四类，ErbBl、ErbB2、ErbB3和化bB4,它们 都是跨膜蛋白，分子量在180-185KD附近。除化bB2外，它们在膜外的N末端都含配体结合 区；除化bB3外，它们在膜内的C末端都含蛋白酪氨酸激酶活性。其中化bB 1是表皮生长因 子的受体，ErbB3和化bB4都是神经调节蛋白的受体。在神经调节蛋白的受体中，只有化bB2 和化 bB4 在必脏表达量较高（Yarden et al.，化 t Rev Mol Cell Biol，2;127-137,2001)。
[0005] 当神经调节蛋白与化bB3或化bB4的膜外部分结合时，将引起化bB3、ErbB4与 其他化bB受体（常常包括化bB2)形成异源二聚体，或化bB4自身形成同源二聚体，然后 导致受体的膜内部分被磯酸化灯arden et al.，化t Rev Mol Cell Biol, 2 :127-137, 2001)。磯酸化的膜内部分可进一步与细胞内的多种信号传递蛋白结合，从而激活下游 E服或AKT信号通路，引起一系列细胞反应；包括刺激或抑制细胞增殖、细胞调亡、细胞迁 移、细胞分化或细胞粘连。神经调节蛋白对必脏的发育尤其重要（W00037095, CN1276381， W003099300, W09426298, US6444642, W09918976, W00064400, Zhao et al. , J.BioL 化em. 273,10261-10269,1998)。在胚胎发育早期，神经调节蛋白的表达主要局限于必内膜， 随后通过旁分泌途径释放到周围必肌细胞并与细胞膜上的蛋白酪氨酸激酶受体化bB4膜 外部分结合，ErbB4进而与化bB2形成异源二聚体。ErbB4/ErbB2复合物的形成及激活对 早期海绵样也脏形成小梁是必须的。神经调节蛋白、ErbB4和ErbB2兰个蛋白基因中的任 何一个缺失都会使胚胎没有小梁并在发育早期死于子宫。W00037095显示一定浓度的神经 调节蛋白可持续激活ERK信号通路，促进也肌细胞的生长及分化，引导也肌细胞和细胞粘 连处肌节和细胞骨架的重建，改善也肌细胞的结构，增强也肌细胞的收缩。W00037095及 W0003099300还指出神经调节蛋白可用于检测、诊断和治疗各种也血管疾病。
[0006] 下面列举了与本发明有关的一些现有技术文献：1. Cardiac muscle化nction and manipulation :W00037095 ;2.生长因子神经调节蛋白及其类似物的新应用：CN1276381 ; 3. Neuregulin based methods and composition for treating cardiovascular diseases :W003099300 ;4.Zhao YY， Sawyer DR, Baliga RR， Opel DJ， Han X， Marchionni MA and Kelly RA. Neuregulins Promote Survival and Growth of Cardiac Myocytes. J. Biol. Qiem.273,10261-10269(1998) ;5. Methods for treating muscle diseases and disorder :W09426298 ;6. Methods of increasing myotube formation or survival or muscle cell mitogenesis. differentiation of survival using a neuregulin ： US6444642. 7. Therapeutic methods comprising use of a neuregulin ：W09918976 ； 8.Methods for treating congestive heart failure :W00064400;9.Holmes WE, Sliwkowski MX, Akita RW，Henzel WJ，Lee J，Park JW，Yansura D，Abadi N，Raab H， Lewis GD, et al. Identification of heregulin，a specific activator pl85erbB2. Science 256,1205-1210(1992) ； 10.Falls DL.Neuregulins :functions，forms and signalingstrategies. Experimental Cell 民esearch，284,14-30 (2003). 11. Yarden Y， Sliwkowski X. Untangling the ErbB signaling Network. Nature Reviews=Molecular Cell Biology,2127-137(2001).
[0007] 必律失常是由于窦房结激动异常或激动产生于窦房结W外，激动的传导缓慢、阻 滞或经异常通道传导，即必脏活动的起源和（或）传导障碍导致必脏搏动的频率和（或）节 律异常。按起源部位可分为窦性、房性、房室交接处性和室性四种。其中W室性必律失常最 常见。室性必律失常指起源于必室的必律奈乱，包括室性早搏（室早）、室性必动过速（室 速）、必室颤动（室颤）等。
[0008] 必律失常可见于各种器质性必脏病，其中W冠状动脉粥样硬化性必脏病（简称冠 必病），必肌病，必肌炎和风湿性必脏病（简称风必病）为多见，尤其在发生必力衰竭或急性 必肌梗塞时 ，发生在基本健康者或植物神经功能失调患者中的必律失常也不少见，其他病 因尚有电解质或内分泌失调，麻醉，低温，胸腔或必脏手术，药物作用和中枢神经系统疾病 等，部分病因不明。
[0009] 目前临床应用的抗必律失常药物已近50余种，至今还没有统一的分类标准，根据 药物对必脏的不同作用原理将抗必律失常药物分W下四类，W指导临床合理用药，其中I 类药又分为A、B、C H个亚类。
[0010] (1) I类一钢通道阻滞药
[0011] DIA类适度阻滞钢通道，属此类的有奎尼了等药。
[001引 。IB类轻度阻滞钢通道，属此类的有利多卡因等药。
[0013] 3) IC类明显阻滞钢通道，属此类的有氣卡尼等药。
[0014] (2) II类一目肾上腺素受体阻断药
[0015] 因阻断目受体而有效，代表性药物为普蔡洛尔。
[0016] (3) III类一选择地延长复极过程的药
[0017] 属此类的有胺贿丽。
[001引 （4) IV类--巧枯抗药
[0019] 它们阻滞巧通道而抑制化内流，代表性药有维拉帕米。
[0020] 长期服用抗必律失常药均有不同程度的副作用，严重的可引起必脏传导阻滞而致 命。室性必律失常发病率高、预后重，长期药物治疗风险高，而且中、重度或伴充血性必力衰 竭（CH巧的室性必律失常，治疗的难度非常大，许多抗必律失常药物不能应用。
[0021] 现有技术文献中没有关于神经调节蛋白对于室性必律失常方面的调节作用，也没 有关于神经调节蛋白对于室性早搏（室早）、室性必动过速（室速）、必室颤动（室颤）等 的报道。
[0022] 本发明发现给予哺乳动物神经调节蛋白能大大降低或延迟必衰患者室性必律失 常和/或室性早搏的发生率，并使QTc间期有明显缩短的趋势。
【发明内容】
[002引 A.发明概述
[0024] 本发明是基于NRG对必脏发育至关重要，对成年必脏的功能维持也起到非常重要 的作用的科学发现；基于NRG可W加强必肌细胞肌小节和细胞骨架W及细胞间连接的形 成的科学发现；基于NRG在各种动物模型和临床试验中可W提高必衰动物或病人的必脏功 能的科学发现。NRG，NRG多肤，NRG突变体或其它具有NRG样功能的复合物都属于本发明的 范畴。神经调节蛋白可与必肌细胞表面的化bB受体结合，持续激活细胞内的ERK信号通路， 改变必肌细胞的结构，从而提高必肌的收缩力，因此被用于治疗必力衰竭。而在对必衰患者 给予神经调节蛋白后，对其必电图研究表明；神经调节蛋白可改变人类的必律，缩短QTc间 期，特别是可大大降低室性必律失常和/或室性早搏的发生率。
[0025] 本发明的第一个方面，是提供了一种预防、治疗或延迟哺乳动物特别是人室性必 律失常和/或室性早搏的方法。包括对需要或希望预防、治疗或延迟室性必律失常和/或 室性早搏的哺乳动物特别是人施用有效量的NRG或其功能片段，或编码NRG或其功能片段 的核酸，或提高NRG产量和/或功能的物质，从而达到预防、治疗或延迟室性必律失常和/ 或室性早搏的效果。
[0026] 本发明的第二个方面，是提供了一种预防、治疗或延迟哺乳动物特别是人室性必 律失常和/或室性早搏的药物制剂。该药物制剂包含有效量的NRG或其功能片段，或编码 NRG或其功能片段的核酸，或提高NRG产量和/或功能的物质，W及药学上可W接受的载体、 赋形剂等。该药物制剂可W和其它可用于预防、治疗或延缓室性必律失常和/或室性早搏 的药物一起使用。
[0027] 本发明的另一个方面，是提供了一种用于预防、治疗或延迟哺乳动物特别是人室 性必律失常和/或室性早搏的组合物。该组合物包含了本发明所提供的用于预防、治疗或 延迟哺乳动物必脏室性必律失常和/或室性早搏的药物制剂，W及其它预防、治疗或延缓 室性必律失常和/或室性早搏的药物。
[0028] 本发明还提供了一种用于预防、治疗或延迟哺乳动物特别是人室性必律失常和/ 或室性早搏的药盒，其中包含了一次或多次使用剂量的上述预防、治疗或延迟必脏室性必 律失常和/或室性早搏的药物制剂或组合物，W及如何使用该药物制剂或组合物的说明 书。
[0029] 本发明所提供的药物制剂或组合物，可W在室性必律失常和/或室性早搏发生 前、发生时或发生后给予。
[0030] B.定义
[0031] 除另有定义，送里使用的所有科技术语与本发明所属技术领域的普通技术人员理 解含义相同。所有专利文献、专利申请文献、公开的专利文献和其它出版物均作为参考。如 本节阐述的定义与上述参考文献所述的定义不一致或相反时，W本节阐述的定义为准。
[0032] 除非特别指明，在此所用"一个"的意思是"至少一个"或"一个或多于一个"。
[0033] 此处所用"神经调节蛋白"或"neuregulin"或"NRG"是指能够结合并激活化bB2、 ErbB3、ErbB4或其异源或同源二聚体的蛋白或多肤，包括神经调节蛋白的异构体、神经调节 蛋白中的EGF样功能域、包含神经调节蛋白EGF样功能域的多肤、神经调节蛋白的突变体或 衍生物W及其它能够激活上述受体的神经调节蛋白样的基因产物。神经调节蛋白还包括 NRG-1，NRG-2, NRG-3和NRG-4蛋白、多肤、片段W及具有NRG样功能的复合物。优选的，神 经调节蛋白是可W结合并激活化bB2/化bB4或化bB2/化bB3异源二聚体的蛋白或多肤。作 为例子，但并非为了限制的目的，本发明的神经调节蛋白是NRG-I目2异构体的一个片段， 即177-237位氨基酸片段，其中包含了 EGF样功能域。该片段的氨基酸序列为；SHLVKCAEK 邸TFCVNGGECFMV邸LSNPSRYLCKCP肥FTGDRCQNYVMASFYKAEELYQ (沈Q ID N0;1)。本发明所用 神经调节蛋白可W激活上述受体并调节它们的生物学功能，比如刺激骨骼肌细胞合成己醜 胆碱受体；促进必肌细胞的分化、存活W及DNA合成。神经调节蛋白还包括郝些具有并不 实质性影响生物学功能的保守性突变的神经调节蛋白突变体。本技术领域中普通技术人 员熟知，非关键区域的单个氨基酸的突变一般不会引起该蛋白或多肤的生物学功能的改变 (参见 Watson 等人，Molecular Biology of the Gene, 4th Edition, 1987, Hie Bejacmin/ Cummings Pub. CO.，p. 224)。本发明所用神经调节蛋白可W从天然的来源分离得到，或者通 过重组技术、人工合成或其它手段得到。
[0034] 此处所用"EGF样功能域"或"EGF-Uke domain"是指由neuregulin基因所编码 的可W结合并激活化bB2、化bB3、化bB4或其异源或同源二聚体的多肤片段，并且与下述 参考文献中描述的EGF受体结合区域具有结构相似性；WO 00/64400 ;化Imes等，Science, 256 :1205-1210(1992);美国专利 5,530, 109 和 5,716,930 巧ijazi 等，Int. J. Oncol.， 13 :1061-1067(1998) ;Qiang 等，化 1:ure，387 :509-512(1997) sCarraway 等，化 1:ure，387 : 512-516(1997) ;Higashiyama 等，J. Biochem. ,122:675-680(1997) ; W及 WO 97/09425。在 某些实施方案中，EGF样功能域结合并激活化bB2/化bB4或化bB2/化bB3异源二聚体。在 某些实施方案中，EGF样功能域包含NRG-I的受体结合区氨基酸。在某些实施方案中，EGF 样功 能域是指NRG-I的第177-226位、177-237位或177-240位氨基酸。在某些实施方案 中，EGF样功能域包含NRG-2的受体结合区氨基酸。在某些实施方案中，EGF样功能域包含 NRG-3的受体结合区氨基酸。在某些实施方案中，EGF样功能域包含NRG-4的受体结合区 氨基酸。在某些实施方案中，EGF样功能域包含美国专利5, 834, 229中描述的氨基酸序列： Ala Glu Lys Glu Lys 1"虹陆e Cys 化 1 Asn Gly Gly Glu Cys 陆e Met 化 1 Lys Asp Leu SerAsn Pro。
[0035] 此处所用"必律失常"是指由于窦房结激动异常或激动产生于窦房结W外，激动的 传导缓慢、阻滞或经异常通道传导，即必脏活动的起源和（或）传导障碍导致必脏搏动的频 率和（或）节律异常。必律失常是必血管疾病中重要的一组疾病。它可单独发病亦可与必 血管病伴发。可突然发作而致粹死，亦可持续累及必脏而衰竭。按起源部位可分为窦性、房 性、房室交接处性和室性四种。
[0036] 此处所用"室性必律失常"是指起源于必室的必律奈乱，具体指室性早搏（室早）、 室性必动过速（室速）、必室颤动（室颤）等。室性早搏包括二联律、H联律、室性并行必 律；室速包括阵发性室速、加速性必室自主节律、尖端扭转型室速。室早数目随年龄而增加， 但复杂性室早并不相应增多，较高级别室早化own分级）的老年人必电图异常检出率较高。 常伴必肌肥厚、梗死等异常表现。室性早搏作不同情况下具有完全不同的临床意义和预后， 与有无器质性必脏病、必脏病种类和必功能状况等有关。室性必动过速简称室速，常见于 AMI、室壁瘤、必衰、电解质奈乱及药物中毒等情况。尖端扭转型室速是由于必室复极离散度 增大引起多环路折返或折返不规则所致。多见于低钟、奎尼了、胺贿丽、H环类抗抑郁药中 毒。必室扑动与颤动常见于缺血性必脏病。此外，抗必律失常药物，特别是引起QT间期延 长与尖端扭转的药物，严重缺氧、缺血、预激综合征合并房颤与极快的必室率、电击伤等亦 可引起。
[0037] 此处所用"QTc间期"是指按必率校正的QT间期，是反映必脏去极化和复极作用的 指标。QTc间期延长表示必脏复极延迟，反映了必电异常，通常与必律失常敏感性增高密切 相关。其正常范围，男性< 430ms，女性< 450ms，QTc间期延长发生率不高，但潜在危害性 大，大多数表现为显著的尖端扭转型必动过速，严重时可诱发室性必律失常甚至粹死。
[0038] 此处所用"其它用于抗必律失常的药物"是指已知的可用于治疗必律失常的药物， 包括钢通道阻滞药，比如适度阻滞钢通道的奎尼了等，轻度阻滞钢通道的利多卡因等，明显 阻滞钢通道的氣卡尼等；包括目肾上腺素受体阻断药，如普蔡洛尔等；包括选择地延长复 极过程的药，如胺贿丽等，还有巧枯抗药等。
【附图说明】
[0039] 图1是用药前室性必律失常（室早、室速和室颤）发生率较基线值变化的组间比 较图；
[0040] 图2是用药后室性必律失常（室早、室速和室颤）发生率较基线值变化的组间比 较图；
[0041] 图3是用药前/后室性必律失常（室早、室速和室颤）的发生率之和较基线值变 化的组间比较图；
[0042] 图4是用药前室性早搏发生率较基线值变化的组间比较图；
[0043] 图5是用药后室性早搏发生率较基线值变化的组间比较图；
[0044] 图6是用药前/后室性早搏的发生率之和较基线值变化的组间比较图；
[0045] 图7是受试者每次用药后QTc相对基线期的变化值的频数分布图。
[0046] 下文将结合附图来阐述本发明的【具体实施方式】。需要明白，送些实施方式是示例 性的，而非限制性的。
【具体实施方式】
[0047] 实施例1 ;随机、双盲、多中必、标准治疗基础上的安慰剂并行对照评价重组人纽 兰格林对慢性必力衰竭患者的生存研究
[0048] 为了评价注射用重组人纽兰格林-1对慢性必力衰竭的疗效，在中国的多个临 床中必进行了双盲、多中必、标准治疗基础上的安慰剂并行对照的II期临床试验。共有 351位必功能为NYHA III或IV级的慢性必力衰竭入组，并被随机分为安慰组或riiNRG组 (0.6 U g/kg)。各组之间在统计学和背景治疗方面无显著性差异。按照计划，病人在医院连 续10天施用药物，第11天允许出院。从第3周到第25周做为口诊病人每周用药一次。在 该研究的第53周采集生存信息。每次用药前后均进行了 12导联ECG的检查。
[004引受试药物：
[0050] 规格；Neucardin?，61个氨基酸构成化uregulin-1目2异构体的EGF类似功能域， 分子量为 7054 Dal (1 U g = 0. 14nmol)。250 U g 巧000 EU) / 支（1 U g = 20 EU)
[00川 安慰剂：
[0052] 规格；NeucardinTM的赋形剂（250 U g/支，不含重组人纽兰格林-1蛋白活性成分） [005引药物剂型；粉针剂
[0054] 存储；置于安全处，避光，3-8C下保存
[0055] 给药方式：静脉滴注或输注 [005引给药方案：
[005引临床试验的入组标准包括年龄为18-65岁、左必室射血分数（LVE巧《40%的慢性 必衰患者（NYHA必功能分级HI或IV级），临床症状稳定（包括临床症状、体征和接受必衰 标准基础治疗已达目标剂量或最大耐受量1个月W上）。
[0059] 主要的排除标准包括急性必肌梗死，肥厚型必肌病，缩窄性必包炎，明显的瓣膜病 变或先天性必脏病，重度肺动脉高压，收缩压< 90mmHg或> leOmmHg，严重室性必律失常， 前6个月内有必脏外科治疗或脑血管意外者，幽闭恐惧症或怀孕女性。
[0060] 所用患者均需理解并签署知情同意书。
[0061] 本研究过程包括H个阶段，分别是筛选期、给药期和停药后的随访期，整个研究周 期为12个月（52周）。共进行35次现场访视和2次电话访视，研究过程中需观察多个指 标。（详见表1)
[0062] 表1研究过程及观察的指标
[0063]
[0064] 结果与数据分析：
[0065] 本研究对所有的ECG进行了分析，描述每次用药前后ECG的异常变化；分析每次用 药前后ECG各参数的变化，包描。率、QRS间期、PR间期、RR间期、QT、QTc间期；对QTc，分 别进行集中趋势（均数、标准差、中位数）和分类分析。组内比较采用符合秩和检验，组间 比较采用WILCOXON秩和检验。所有入选患者的基线期ECG诊断及参数比较请见表2。两 组受试者每次用药前室性必律失常（室早、室速和室颤）发生率较基线值变化的比较见表 3和图1。两组受试者每次用药后室性必律失常（室早、室速和室颤）的发生率较基线值变 化的比较见表4和图2。两组受试者每次用药前和用药后室性必律失常（室早、室速和室 颤）的发生率之和较基线值变化的比较见表5和图3。另外，对室性早搏做了进一步的分 析。两组受试者每次用药前室性早搏发生率较基线值变化的比较见表6和图4。两组受试 者每次用药后室性早搏的发生率较基线值变化的比较见表7和图5。两组受试者每次用药 前和用药后室性早搏的发生率之和较基线值变化的比较见表8和图6。此外，所有入选患者 每次用药后QTc变化的频数分布结果请见图7。
[0066] 表2两组受试者基线期ECG诊断及参数比较
[006引表2数据显示，基线期两组受试者ECG异常的比率（87. 35% VS 83. 83% )和异位 必律的发生率（2 2. 9% VS 22. 8% )相当，具有可比性（P > 0. 05)，但纽兰格林组受试者的 RR(829. 2 + 182. 2vs782. 6 + 168. 9)和 QTc 间期（445. 7 + 45. 5vs 433. 6 + 39. 9)却明显长于 安慰剂组（P分别为0. 0245和0. 011)。
[0069] 表3两组受试者每次用药前室性必律失常（室早、室速和室颤）发生率较基线值 变化的组间比较（P < 0. 0001)。
[0071] 表中显示数据是每次用药前室性必律失常发生率与基线期室性必律失常发生率 的差值，N为ECG检查次数，Mean为均值，Median为中位数值，Min, Max为送些差值中最小 和最大的值。
[0072] 表4两组受试者每次用药后室性必律失常（室早、室速和室颤）发生率较基线值 变化的组间比较
[0074] 表中显示数据是每次用药后室性必律失常发生率与基线期室性必律失常发生率 的差值，N为ECG检查次数，Mean为均值，Median为中位数值，Min, Max为送些差值中最小 和最大的值。
[00巧]表5两组受试者每次用药前/后室性必律失常（室早、室速和室颤）的发生率之 和较基线值变化的组间比较（P < 0. 001)
[0077] 表中显示数据是每次用药前/后室性必律失常发生率之和与基线期室性必律失 常发生率的差值，N为ECG检查次数，Mean为均值，Median为中位数值，Min, Max为送些差 值中最小和最大的值。
[0078] 表6两组受试者每次用药前室性早搏发生率较基线值变化的组间比较（P < 0. 0001)
[0080] 表中显示数据是每次用药前室性早搏发生率与基线期室性早搏发生率的差值，N 为ECG检查次数，Mean为均值，Median为中位数值，Min, Max为送些差值中最小和最大的 值。
[0081] 表7两组受试者每次用药后室性早搏发生率较基线值变化的组间比较（P < 0. 001)
[0082]
[0083] 表中显示数据是每次用药后室性早搏发生率与基线期室性早搏发生率的差值，N 为ECG检查次数，Mean为均值，Median为中位数值，Min, Max为送些差值中最小和最大的 值。
[0084] 表8两组受试者每次用药前/后室性早搏的发生率之和较基线值变化的组间比 较（P < 0. 0001)
[0086] 表中显示数据是每次用药前/后室性早搏发生率之和与基线期室性早搏发生率 的差值，N为ECG检查次数，Mean为均值，Median为中位数值，Min, Max为送些差值中最小 和最大的值。
[0087] 讨论：
[0088] 基线期纽兰格林和安慰剂两组受试者必律失常的发生率分别为22. 9 %和 22. 8%，其中室早发生率分别为11. 4%和6. 0%，室速发生率为0. 6%和0,室颤发生率均为 0,两组间比较均没有显著性差异。（见表2)
[0089] 表3,4和5数据显示，整个研究期间内的ECG检查（包括用药前后，共68次），相 较于安慰剂组，纽兰格林组受试者无论是用药前，还是用药前/后，其室性必律失常的发生 率均有非常显著的减小趋势（P < 0. 0001)。结果见图1，2和3。
[0090] 另外，对室性早搏做了进一步的分析，每次用药前/后相较于基线期室早发生率 的变化，表6, 7和8数据显示，纽兰格林组受试者的室早变化率均与安慰剂组相比有非常 显著的减少趋势（P < 0. 0001)。结果见图4,5和6。
[0091] 尽管试验药组受试者基线期ECG的RR间期、QT、QTc间期均较安慰剂组明显延长， 但接受药物后，QTc与基线值相比，不但没有进行性延长，反而大多数给药后呈明显缩短趋 势，如图7中所有受试者每次用药后QTc变化的频数分布结果显示，试验药组受试者的QTc 较安慰剂组有总体缩短趋势
[0092] 综合分析ECG诊断和各参数数据显示：尽管试验药组基线期有87. 35 %的受试者 ECG诊断异常且有临床意义，包括房颤、房室传导阻滞、室性早搏、ST-T改变等，但用药后， 送些异常改变并未进行性加重或恶化。结果显示，试验药组受试者的QTc较安慰剂组有总 体缩短趋势，且室性必律失常和/或室性早搏发生率的变化较安慰剂组明显降低。
[0093] 上述列举的实施例不会限制本发明的保护范围。在没有背离本发明的宗旨和范围 的情况下，本技术领域内的技术人员可W对本发明进行调整和改变。因此，本发明的保护范 围应当根据权利要求来定义，而不是通过具体的实施例来限定。
【主权项】
1. NRG用于制备预防、治疗或延迟哺乳动物室性心律失常的药物的用途。2. 根据权利要求1所述的用途，其中NRG选自NRG-1，NRG-2, NRG-3或NRG-4。3. 根据权利要求1所述的用途，其中所述NRG是NRG-1。4. 根据权利要求1所述的用途，其中所述NRG包含SEQ ID NO :2的氨基酸序列。5. 根据权利要求1所述的用途，其中所述哺乳动物是人。6. 根据权利要求1所述的用途，其中所述室性心律失常包括室性早搏（室早）和/或 室性心动过速（室速）和/或心室颤动（室颤）。7. -种用于预防、治疗或延迟哺乳动物室性心律失常的药物制剂，其特征在于其含有 有效剂量的NRG。8. 根据权利要求7所述的制剂，其中NRG选自NRG-1，NRG-2, NRG-3或NRG-4。9. 根据权利要求7所述的制剂，其中所述NRG是NRG-1。10. 根据权利要求7所述的制剂，其中所述NRG包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列。11. 根据权利要求7所述的制剂，其中所述哺乳动物是人。12. 根据权利要求7所述的制剂，其中所述室性心律失常包括室性早搏（室早）和/或 室性心动过速（室速）和/或心室颤动（室颤）。13. -种用于预防、治疗或延迟哺乳动物室性心律失常的组合物，其特征在于其含有如 权利要求7所述的药物制剂以及其它用于治疗室性心律失常的药物。14. 根据权利要求13所述的组合物，其中所述其它用于治疗室性心律失常的药物包含 钠通道阻滞药。15. 根据权利要求13所述的组合物，其中所述其它用于治疗室性心律失常的药物包含 β肾上腺素受体阻断药。16. 根据权利要求13所述的组合物，其中所述室性心律失常包括室性早搏（室早）和 /或室性心动过速（室速）和/或心室颤动（室颤）。17. -种用于预防、治疗或延迟哺乳动物室性心律失常的药盒，其中含有如权利要求6 所述的药物制剂以及如何使用该药物制剂的说明书。18. 根据权利要求17所述的药盒，其中所述室性心律失常包括室性早搏（室早）和/ 或室性心动过速（室速）和/或心室颤动（室颤）。
【专利摘要】本发明涉及纽兰格林蛋白在制备用于预防、治疗或延缓人类室性心律失常的药物中的应用，以及所述用于预防、治疗或延缓人类室性心律失常的药物的使用方法。特别地，本发明提供了预防、治疗或延缓人类室性心律失常的方法，该方法是在患有心律失常或者具有心律失常风险的特殊人群中使用包含纽兰格林蛋白的药物。具体而言，本发明涉及神经调节蛋白在心血管疾病治疗中的新适应症抗室性心律失常。
【IPC分类】A61K45/00, A61K38/18, A61P9/06
【公开号】CN105497876
【申请号】CN201410529437
【发明人】周明东
【申请人】上海泽生科技开发股份有限公司
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2014年9月24日
【公告号】WO2016045493A1
【技术领域】
[0001] 本发明涉及纽兰格林蛋白在制备用于预防、治疗或延缓人类室性必律失常的药物 中的应用，W及所述用于预防、治疗或延缓人类室性必律失常的药物的使用方法。特别地， 本发明提供了预防、治疗或延缓人类室性必律失常的方法，该方法是在患有必律失常或者 具有必律失常风险的特殊人群中使用包含纽兰格林蛋白的药物。具体而言，本发明涉及神 经调节蛋白在必血管疾病治疗中的新适应症抗室性必律失常。
[0002] 发明背景
[0003] 神经调节蛋白（neuregulin, NRG ;heregulin, HRG)，又叫神经胶质生长因子 (glial growth factor, GGF)，neu 分化因子（new differentiation_facto;r，NDFO,为分子 量在44KD左右的糖蛋白，它们在细胞间传递信号，是酪氨酸激酶受体化bB家族的配体。神 经调节蛋白家族含 4 个成员；NRG1，NRG2, NRG3, NRG4(化Ils et al.，Exp Cell Res. 284 : 14-30,2003)。NRGl在神经系统、必脏和乳腺中起着重要作用，还有证据显示NRGl信号传递 在其他一些器官系统的发育、功能W及人类疾病（包括精神分裂症和乳腺癌）的发病机理 中起作用。NRGl有很多异构体。对基因突变小鼠（基因敲除小鼠）的研究说明在N末端区 或表皮生长因子巧G巧类似区不同的异构体，其在体功能也不一样。本发明是W神经调节 蛋白1目（NRGl目）为基础的。
[0004] 神经调节蛋白 1目为一跨膜蛋白化Olmes et al.，Science 256,1205-1210， 1992)。膜外部分是N末端，包括免疫球蛋白类似区（Ig-Uke_domain)和EGF类似区 巧GF-Uke domain),膜内部分是C末端。在细胞外基质的金属蛋白酶作用下，神经调节蛋 白的膜外部分可被酶切下来而呈游离状态，从而有利于和周围细胞表面的化bB受体结合， 激活相应的细胞信号传递。化bB受体家族也分为四类，ErbBl、ErbB2、ErbB3和化bB4,它们 都是跨膜蛋白，分子量在180-185KD附近。除化bB2外，它们在膜外的N末端都含配体结合 区；除化bB3外，它们在膜内的C末端都含蛋白酪氨酸激酶活性。其中化bB 1是表皮生长因 子的受体，ErbB3和化bB4都是神经调节蛋白的受体。在神经调节蛋白的受体中，只有化bB2 和化 bB4 在必脏表达量较高（Yarden et al.，化 t Rev Mol Cell Biol，2;127-137,2001)。
[0005] 当神经调节蛋白与化bB3或化bB4的膜外部分结合时，将引起化bB3、ErbB4与 其他化bB受体（常常包括化bB2)形成异源二聚体，或化bB4自身形成同源二聚体，然后 导致受体的膜内部分被磯酸化灯arden et al.，化t Rev Mol Cell Biol, 2 :127-137, 2001)。磯酸化的膜内部分可进一步与细胞内的多种信号传递蛋白结合，从而激活下游 E服或AKT信号通路，引起一系列细胞反应；包括刺激或抑制细胞增殖、细胞调亡、细胞迁 移、细胞分化或细胞粘连。神经调节蛋白对必脏的发育尤其重要（W00037095, CN1276381， W003099300, W09426298, US6444642, W09918976, W00064400, Zhao et al. , J.BioL 化em. 273,10261-10269,1998)。在胚胎发育早期，神经调节蛋白的表达主要局限于必内膜， 随后通过旁分泌途径释放到周围必肌细胞并与细胞膜上的蛋白酪氨酸激酶受体化bB4膜 外部分结合，ErbB4进而与化bB2形成异源二聚体。ErbB4/ErbB2复合物的形成及激活对 早期海绵样也脏形成小梁是必须的。神经调节蛋白、ErbB4和ErbB2兰个蛋白基因中的任 何一个缺失都会使胚胎没有小梁并在发育早期死于子宫。W00037095显示一定浓度的神经 调节蛋白可持续激活ERK信号通路，促进也肌细胞的生长及分化，引导也肌细胞和细胞粘 连处肌节和细胞骨架的重建，改善也肌细胞的结构，增强也肌细胞的收缩。W00037095及 W0003099300还指出神经调节蛋白可用于检测、诊断和治疗各种也血管疾病。
[0006] 下面列举了与本发明有关的一些现有技术文献：1. Cardiac muscle化nction and manipulation :W00037095 ;2.生长因子神经调节蛋白及其类似物的新应用：CN1276381 ; 3. Neuregulin based methods and composition for treating cardiovascular diseases :W003099300 ;4.Zhao YY， Sawyer DR, Baliga RR， Opel DJ， Han X， Marchionni MA and Kelly RA. Neuregulins Promote Survival and Growth of Cardiac Myocytes. J. Biol. Qiem.273,10261-10269(1998) ;5. Methods for treating muscle diseases and disorder :W09426298 ;6. Methods of increasing myotube formation or survival or muscle cell mitogenesis. differentiation of survival using a neuregulin ： US6444642. 7. Therapeutic methods comprising use of a neuregulin ：W09918976 ； 8.Methods for treating congestive heart failure :W00064400;9.Holmes WE, Sliwkowski MX, Akita RW，Henzel WJ，Lee J，Park JW，Yansura D，Abadi N，Raab H， Lewis GD, et al. Identification of heregulin，a specific activator pl85erbB2. Science 256,1205-1210(1992) ； 10.Falls DL.Neuregulins :functions，forms and signalingstrategies. Experimental Cell 民esearch，284,14-30 (2003). 11. Yarden Y， Sliwkowski X. Untangling the ErbB signaling Network. Nature Reviews=Molecular Cell Biology,2127-137(2001).
[0007] 必律失常是由于窦房结激动异常或激动产生于窦房结W外，激动的传导缓慢、阻 滞或经异常通道传导，即必脏活动的起源和（或）传导障碍导致必脏搏动的频率和（或）节 律异常。按起源部位可分为窦性、房性、房室交接处性和室性四种。其中W室性必律失常最 常见。室性必律失常指起源于必室的必律奈乱，包括室性早搏（室早）、室性必动过速（室 速）、必室颤动（室颤）等。
[0008] 必律失常可见于各种器质性必脏病，其中W冠状动脉粥样硬化性必脏病（简称冠 必病），必肌病，必肌炎和风湿性必脏病（简称风必病）为多见，尤其在发生必力衰竭或急性 必肌梗塞时 ，发生在基本健康者或植物神经功能失调患者中的必律失常也不少见，其他病 因尚有电解质或内分泌失调，麻醉，低温，胸腔或必脏手术，药物作用和中枢神经系统疾病 等，部分病因不明。
[0009] 目前临床应用的抗必律失常药物已近50余种，至今还没有统一的分类标准，根据 药物对必脏的不同作用原理将抗必律失常药物分W下四类，W指导临床合理用药，其中I 类药又分为A、B、C H个亚类。
[0010] (1) I类一钢通道阻滞药
[0011] DIA类适度阻滞钢通道，属此类的有奎尼了等药。
[001引 。IB类轻度阻滞钢通道，属此类的有利多卡因等药。
[0013] 3) IC类明显阻滞钢通道，属此类的有氣卡尼等药。
[0014] (2) II类一目肾上腺素受体阻断药
[0015] 因阻断目受体而有效，代表性药物为普蔡洛尔。
[0016] (3) III类一选择地延长复极过程的药
[0017] 属此类的有胺贿丽。
[001引 （4) IV类--巧枯抗药
[0019] 它们阻滞巧通道而抑制化内流，代表性药有维拉帕米。
[0020] 长期服用抗必律失常药均有不同程度的副作用，严重的可引起必脏传导阻滞而致 命。室性必律失常发病率高、预后重，长期药物治疗风险高，而且中、重度或伴充血性必力衰 竭（CH巧的室性必律失常，治疗的难度非常大，许多抗必律失常药物不能应用。
[0021] 现有技术文献中没有关于神经调节蛋白对于室性必律失常方面的调节作用，也没 有关于神经调节蛋白对于室性早搏（室早）、室性必动过速（室速）、必室颤动（室颤）等 的报道。
[0022] 本发明发现给予哺乳动物神经调节蛋白能大大降低或延迟必衰患者室性必律失 常和/或室性早搏的发生率，并使QTc间期有明显缩短的趋势。
【发明内容】
[002引 A.发明概述
[0024] 本发明是基于NRG对必脏发育至关重要，对成年必脏的功能维持也起到非常重要 的作用的科学发现；基于NRG可W加强必肌细胞肌小节和细胞骨架W及细胞间连接的形 成的科学发现；基于NRG在各种动物模型和临床试验中可W提高必衰动物或病人的必脏功 能的科学发现。NRG，NRG多肤，NRG突变体或其它具有NRG样功能的复合物都属于本发明的 范畴。神经调节蛋白可与必肌细胞表面的化bB受体结合，持续激活细胞内的ERK信号通路， 改变必肌细胞的结构，从而提高必肌的收缩力，因此被用于治疗必力衰竭。而在对必衰患者 给予神经调节蛋白后，对其必电图研究表明；神经调节蛋白可改变人类的必律，缩短QTc间 期，特别是可大大降低室性必律失常和/或室性早搏的发生率。
[0025] 本发明的第一个方面，是提供了一种预防、治疗或延迟哺乳动物特别是人室性必 律失常和/或室性早搏的方法。包括对需要或希望预防、治疗或延迟室性必律失常和/或 室性早搏的哺乳动物特别是人施用有效量的NRG或其功能片段，或编码NRG或其功能片段 的核酸，或提高NRG产量和/或功能的物质，从而达到预防、治疗或延迟室性必律失常和/ 或室性早搏的效果。
[0026] 本发明的第二个方面，是提供了一种预防、治疗或延迟哺乳动物特别是人室性必 律失常和/或室性早搏的药物制剂。该药物制剂包含有效量的NRG或其功能片段，或编码 NRG或其功能片段的核酸，或提高NRG产量和/或功能的物质，W及药学上可W接受的载体、 赋形剂等。该药物制剂可W和其它可用于预防、治疗或延缓室性必律失常和/或室性早搏 的药物一起使用。
[0027] 本发明的另一个方面，是提供了一种用于预防、治疗或延迟哺乳动物特别是人室 性必律失常和/或室性早搏的组合物。该组合物包含了本发明所提供的用于预防、治疗或 延迟哺乳动物必脏室性必律失常和/或室性早搏的药物制剂，W及其它预防、治疗或延缓 室性必律失常和/或室性早搏的药物。
[0028] 本发明还提供了一种用于预防、治疗或延迟哺乳动物特别是人室性必律失常和/ 或室性早搏的药盒，其中包含了一次或多次使用剂量的上述预防、治疗或延迟必脏室性必 律失常和/或室性早搏的药物制剂或组合物，W及如何使用该药物制剂或组合物的说明 书。
[0029] 本发明所提供的药物制剂或组合物，可W在室性必律失常和/或室性早搏发生 前、发生时或发生后给予。
[0030] B.定义
[0031] 除另有定义，送里使用的所有科技术语与本发明所属技术领域的普通技术人员理 解含义相同。所有专利文献、专利申请文献、公开的专利文献和其它出版物均作为参考。如 本节阐述的定义与上述参考文献所述的定义不一致或相反时，W本节阐述的定义为准。
[0032] 除非特别指明，在此所用"一个"的意思是"至少一个"或"一个或多于一个"。
[0033] 此处所用"神经调节蛋白"或"neuregulin"或"NRG"是指能够结合并激活化bB2、 ErbB3、ErbB4或其异源或同源二聚体的蛋白或多肤，包括神经调节蛋白的异构体、神经调节 蛋白中的EGF样功能域、包含神经调节蛋白EGF样功能域的多肤、神经调节蛋白的突变体或 衍生物W及其它能够激活上述受体的神经调节蛋白样的基因产物。神经调节蛋白还包括 NRG-1，NRG-2, NRG-3和NRG-4蛋白、多肤、片段W及具有NRG样功能的复合物。优选的，神 经调节蛋白是可W结合并激活化bB2/化bB4或化bB2/化bB3异源二聚体的蛋白或多肤。作 为例子，但并非为了限制的目的，本发明的神经调节蛋白是NRG-I目2异构体的一个片段， 即177-237位氨基酸片段，其中包含了 EGF样功能域。该片段的氨基酸序列为；SHLVKCAEK 邸TFCVNGGECFMV邸LSNPSRYLCKCP肥FTGDRCQNYVMASFYKAEELYQ (沈Q ID N0;1)。本发明所用 神经调节蛋白可W激活上述受体并调节它们的生物学功能，比如刺激骨骼肌细胞合成己醜 胆碱受体；促进必肌细胞的分化、存活W及DNA合成。神经调节蛋白还包括郝些具有并不 实质性影响生物学功能的保守性突变的神经调节蛋白突变体。本技术领域中普通技术人 员熟知，非关键区域的单个氨基酸的突变一般不会引起该蛋白或多肤的生物学功能的改变 (参见 Watson 等人，Molecular Biology of the Gene, 4th Edition, 1987, Hie Bejacmin/ Cummings Pub. CO.，p. 224)。本发明所用神经调节蛋白可W从天然的来源分离得到，或者通 过重组技术、人工合成或其它手段得到。
[0034] 此处所用"EGF样功能域"或"EGF-Uke domain"是指由neuregulin基因所编码 的可W结合并激活化bB2、化bB3、化bB4或其异源或同源二聚体的多肤片段，并且与下述 参考文献中描述的EGF受体结合区域具有结构相似性；WO 00/64400 ;化Imes等，Science, 256 :1205-1210(1992);美国专利 5,530, 109 和 5,716,930 巧ijazi 等，Int. J. Oncol.， 13 :1061-1067(1998) ;Qiang 等，化 1:ure，387 :509-512(1997) sCarraway 等，化 1:ure，387 : 512-516(1997) ;Higashiyama 等，J. Biochem. ,122:675-680(1997) ; W及 WO 97/09425。在 某些实施方案中，EGF样功能域结合并激活化bB2/化bB4或化bB2/化bB3异源二聚体。在 某些实施方案中，EGF样功能域包含NRG-I的受体结合区氨基酸。在某些实施方案中，EGF 样功 能域是指NRG-I的第177-226位、177-237位或177-240位氨基酸。在某些实施方案 中，EGF样功能域包含NRG-2的受体结合区氨基酸。在某些实施方案中，EGF样功能域包含 NRG-3的受体结合区氨基酸。在某些实施方案中，EGF样功能域包含NRG-4的受体结合区 氨基酸。在某些实施方案中，EGF样功能域包含美国专利5, 834, 229中描述的氨基酸序列： Ala Glu Lys Glu Lys 1"虹陆e Cys 化 1 Asn Gly Gly Glu Cys 陆e Met 化 1 Lys Asp Leu SerAsn Pro。
[0035] 此处所用"必律失常"是指由于窦房结激动异常或激动产生于窦房结W外，激动的 传导缓慢、阻滞或经异常通道传导，即必脏活动的起源和（或）传导障碍导致必脏搏动的频 率和（或）节律异常。必律失常是必血管疾病中重要的一组疾病。它可单独发病亦可与必 血管病伴发。可突然发作而致粹死，亦可持续累及必脏而衰竭。按起源部位可分为窦性、房 性、房室交接处性和室性四种。
[0036] 此处所用"室性必律失常"是指起源于必室的必律奈乱，具体指室性早搏（室早）、 室性必动过速（室速）、必室颤动（室颤）等。室性早搏包括二联律、H联律、室性并行必 律；室速包括阵发性室速、加速性必室自主节律、尖端扭转型室速。室早数目随年龄而增加， 但复杂性室早并不相应增多，较高级别室早化own分级）的老年人必电图异常检出率较高。 常伴必肌肥厚、梗死等异常表现。室性早搏作不同情况下具有完全不同的临床意义和预后， 与有无器质性必脏病、必脏病种类和必功能状况等有关。室性必动过速简称室速，常见于 AMI、室壁瘤、必衰、电解质奈乱及药物中毒等情况。尖端扭转型室速是由于必室复极离散度 增大引起多环路折返或折返不规则所致。多见于低钟、奎尼了、胺贿丽、H环类抗抑郁药中 毒。必室扑动与颤动常见于缺血性必脏病。此外，抗必律失常药物，特别是引起QT间期延 长与尖端扭转的药物，严重缺氧、缺血、预激综合征合并房颤与极快的必室率、电击伤等亦 可引起。
[0037] 此处所用"QTc间期"是指按必率校正的QT间期，是反映必脏去极化和复极作用的 指标。QTc间期延长表示必脏复极延迟，反映了必电异常，通常与必律失常敏感性增高密切 相关。其正常范围，男性< 430ms，女性< 450ms，QTc间期延长发生率不高，但潜在危害性 大，大多数表现为显著的尖端扭转型必动过速，严重时可诱发室性必律失常甚至粹死。
[0038] 此处所用"其它用于抗必律失常的药物"是指已知的可用于治疗必律失常的药物， 包括钢通道阻滞药，比如适度阻滞钢通道的奎尼了等，轻度阻滞钢通道的利多卡因等，明显 阻滞钢通道的氣卡尼等；包括目肾上腺素受体阻断药，如普蔡洛尔等；包括选择地延长复 极过程的药，如胺贿丽等，还有巧枯抗药等。
【附图说明】
[0039] 图1是用药前室性必律失常（室早、室速和室颤）发生率较基线值变化的组间比 较图；
[0040] 图2是用药后室性必律失常（室早、室速和室颤）发生率较基线值变化的组间比 较图；
[0041] 图3是用药前/后室性必律失常（室早、室速和室颤）的发生率之和较基线值变 化的组间比较图；
[0042] 图4是用药前室性早搏发生率较基线值变化的组间比较图；
[0043] 图5是用药后室性早搏发生率较基线值变化的组间比较图；
[0044] 图6是用药前/后室性早搏的发生率之和较基线值变化的组间比较图；
[0045] 图7是受试者每次用药后QTc相对基线期的变化值的频数分布图。
[0046] 下文将结合附图来阐述本发明的【具体实施方式】。需要明白，送些实施方式是示例 性的，而非限制性的。
【具体实施方式】
[0047] 实施例1 ;随机、双盲、多中必、标准治疗基础上的安慰剂并行对照评价重组人纽 兰格林对慢性必力衰竭患者的生存研究
[0048] 为了评价注射用重组人纽兰格林-1对慢性必力衰竭的疗效，在中国的多个临 床中必进行了双盲、多中必、标准治疗基础上的安慰剂并行对照的II期临床试验。共有 351位必功能为NYHA III或IV级的慢性必力衰竭入组，并被随机分为安慰组或riiNRG组 (0.6 U g/kg)。各组之间在统计学和背景治疗方面无显著性差异。按照计划，病人在医院连 续10天施用药物，第11天允许出院。从第3周到第25周做为口诊病人每周用药一次。在 该研究的第53周采集生存信息。每次用药前后均进行了 12导联ECG的检查。
[004引受试药物：
[0050] 规格；Neucardin?，61个氨基酸构成化uregulin-1目2异构体的EGF类似功能域， 分子量为 7054 Dal (1 U g = 0. 14nmol)。250 U g 巧000 EU) / 支（1 U g = 20 EU)
[00川 安慰剂：
[0052] 规格；NeucardinTM的赋形剂（250 U g/支，不含重组人纽兰格林-1蛋白活性成分） [005引药物剂型；粉针剂
[0054] 存储；置于安全处，避光，3-8C下保存
[0055] 给药方式：静脉滴注或输注 [005引给药方案：
[005引临床试验的入组标准包括年龄为18-65岁、左必室射血分数（LVE巧《40%的慢性 必衰患者（NYHA必功能分级HI或IV级），临床症状稳定（包括临床症状、体征和接受必衰 标准基础治疗已达目标剂量或最大耐受量1个月W上）。
[0059] 主要的排除标准包括急性必肌梗死，肥厚型必肌病，缩窄性必包炎，明显的瓣膜病 变或先天性必脏病，重度肺动脉高压，收缩压< 90mmHg或> leOmmHg，严重室性必律失常， 前6个月内有必脏外科治疗或脑血管意外者，幽闭恐惧症或怀孕女性。
[0060] 所用患者均需理解并签署知情同意书。
[0061] 本研究过程包括H个阶段，分别是筛选期、给药期和停药后的随访期，整个研究周 期为12个月（52周）。共进行35次现场访视和2次电话访视，研究过程中需观察多个指 标。（详见表1)
[0062] 表1研究过程及观察的指标
[0063]
[0064] 结果与数据分析：
[0065] 本研究对所有的ECG进行了分析，描述每次用药前后ECG的异常变化；分析每次用 药前后ECG各参数的变化，包描。率、QRS间期、PR间期、RR间期、QT、QTc间期；对QTc，分 别进行集中趋势（均数、标准差、中位数）和分类分析。组内比较采用符合秩和检验，组间 比较采用WILCOXON秩和检验。所有入选患者的基线期ECG诊断及参数比较请见表2。两 组受试者每次用药前室性必律失常（室早、室速和室颤）发生率较基线值变化的比较见表 3和图1。两组受试者每次用药后室性必律失常（室早、室速和室颤）的发生率较基线值变 化的比较见表4和图2。两组受试者每次用药前和用药后室性必律失常（室早、室速和室 颤）的发生率之和较基线值变化的比较见表5和图3。另外，对室性早搏做了进一步的分 析。两组受试者每次用药前室性早搏发生率较基线值变化的比较见表6和图4。两组受试 者每次用药后室性早搏的发生率较基线值变化的比较见表7和图5。两组受试者每次用药 前和用药后室性早搏的发生率之和较基线值变化的比较见表8和图6。此外，所有入选患者 每次用药后QTc变化的频数分布结果请见图7。
[0066] 表2两组受试者基线期ECG诊断及参数比较
[006引表2数据显示，基线期两组受试者ECG异常的比率（87. 35% VS 83. 83% )和异位 必律的发生率（2 2. 9% VS 22. 8% )相当，具有可比性（P > 0. 05)，但纽兰格林组受试者的 RR(829. 2 + 182. 2vs782. 6 + 168. 9)和 QTc 间期（445. 7 + 45. 5vs 433. 6 + 39. 9)却明显长于 安慰剂组（P分别为0. 0245和0. 011)。
[0069] 表3两组受试者每次用药前室性必律失常（室早、室速和室颤）发生率较基线值 变化的组间比较（P < 0. 0001)。
[0071] 表中显示数据是每次用药前室性必律失常发生率与基线期室性必律失常发生率 的差值，N为ECG检查次数，Mean为均值，Median为中位数值，Min, Max为送些差值中最小 和最大的值。
[0072] 表4两组受试者每次用药后室性必律失常（室早、室速和室颤）发生率较基线值 变化的组间比较
[0074] 表中显示数据是每次用药后室性必律失常发生率与基线期室性必律失常发生率 的差值，N为ECG检查次数，Mean为均值，Median为中位数值，Min, Max为送些差值中最小 和最大的值。
[00巧]表5两组受试者每次用药前/后室性必律失常（室早、室速和室颤）的发生率之 和较基线值变化的组间比较（P < 0. 001)
[0077] 表中显示数据是每次用药前/后室性必律失常发生率之和与基线期室性必律失 常发生率的差值，N为ECG检查次数，Mean为均值，Median为中位数值，Min, Max为送些差 值中最小和最大的值。
[0078] 表6两组受试者每次用药前室性早搏发生率较基线值变化的组间比较（P < 0. 0001)
[0080] 表中显示数据是每次用药前室性早搏发生率与基线期室性早搏发生率的差值，N 为ECG检查次数，Mean为均值，Median为中位数值，Min, Max为送些差值中最小和最大的 值。
[0081] 表7两组受试者每次用药后室性早搏发生率较基线值变化的组间比较（P < 0. 001)
[0082]
[0083] 表中显示数据是每次用药后室性早搏发生率与基线期室性早搏发生率的差值，N 为ECG检查次数，Mean为均值，Median为中位数值，Min, Max为送些差值中最小和最大的 值。
[0084] 表8两组受试者每次用药前/后室性早搏的发生率之和较基线值变化的组间比 较（P < 0. 0001)
[0086] 表中显示数据是每次用药前/后室性早搏发生率之和与基线期室性早搏发生率 的差值，N为ECG检查次数，Mean为均值，Median为中位数值，Min, Max为送些差值中最小 和最大的值。
[0087] 讨论：
[0088] 基线期纽兰格林和安慰剂两组受试者必律失常的发生率分别为22. 9 %和 22. 8%，其中室早发生率分别为11. 4%和6. 0%，室速发生率为0. 6%和0,室颤发生率均为 0,两组间比较均没有显著性差异。（见表2)
[0089] 表3,4和5数据显示，整个研究期间内的ECG检查（包括用药前后，共68次），相 较于安慰剂组，纽兰格林组受试者无论是用药前，还是用药前/后，其室性必律失常的发生 率均有非常显著的减小趋势（P < 0. 0001)。结果见图1，2和3。
[0090] 另外，对室性早搏做了进一步的分析，每次用药前/后相较于基线期室早发生率 的变化，表6, 7和8数据显示，纽兰格林组受试者的室早变化率均与安慰剂组相比有非常 显著的减少趋势（P < 0. 0001)。结果见图4,5和6。
[0091] 尽管试验药组受试者基线期ECG的RR间期、QT、QTc间期均较安慰剂组明显延长， 但接受药物后，QTc与基线值相比，不但没有进行性延长，反而大多数给药后呈明显缩短趋 势，如图7中所有受试者每次用药后QTc变化的频数分布结果显示，试验药组受试者的QTc 较安慰剂组有总体缩短趋势
[0092] 综合分析ECG诊断和各参数数据显示：尽管试验药组基线期有87. 35 %的受试者 ECG诊断异常且有临床意义，包括房颤、房室传导阻滞、室性早搏、ST-T改变等，但用药后， 送些异常改变并未进行性加重或恶化。结果显示，试验药组受试者的QTc较安慰剂组有总 体缩短趋势，且室性必律失常和/或室性早搏发生率的变化较安慰剂组明显降低。
[0093] 上述列举的实施例不会限制本发明的保护范围。在没有背离本发明的宗旨和范围 的情况下，本技术领域内的技术人员可W对本发明进行调整和改变。因此，本发明的保护范 围应当根据权利要求来定义，而不是通过具体的实施例来限定。
【主权项】
1. NRG用于制备预防、治疗或延迟哺乳动物室性心律失常的药物的用途。2. 根据权利要求1所述的用途，其中NRG选自NRG-1，NRG-2, NRG-3或NRG-4。3. 根据权利要求1所述的用途，其中所述NRG是NRG-1。4. 根据权利要求1所述的用途，其中所述NRG包含SEQ ID NO :2的氨基酸序列。5. 根据权利要求1所述的用途，其中所述哺乳动物是人。6. 根据权利要求1所述的用途，其中所述室性心律失常包括室性早搏（室早）和/或 室性心动过速（室速）和/或心室颤动（室颤）。7. -种用于预防、治疗或延迟哺乳动物室性心律失常的药物制剂，其特征在于其含有 有效剂量的NRG。8. 根据权利要求7所述的制剂，其中NRG选自NRG-1，NRG-2, NRG-3或NRG-4。9. 根据权利要求7所述的制剂，其中所述NRG是NRG-1。10. 根据权利要求7所述的制剂，其中所述NRG包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列。11. 根据权利要求7所述的制剂，其中所述哺乳动物是人。12. 根据权利要求7所述的制剂，其中所述室性心律失常包括室性早搏（室早）和/或 室性心动过速（室速）和/或心室颤动（室颤）。13. -种用于预防、治疗或延迟哺乳动物室性心律失常的组合物，其特征在于其含有如 权利要求7所述的药物制剂以及其它用于治疗室性心律失常的药物。14. 根据权利要求13所述的组合物，其中所述其它用于治疗室性心律失常的药物包含 钠通道阻滞药。15. 根据权利要求13所述的组合物，其中所述其它用于治疗室性心律失常的药物包含 β肾上腺素受体阻断药。16. 根据权利要求13所述的组合物，其中所述室性心律失常包括室性早搏（室早）和 /或室性心动过速（室速）和/或心室颤动（室颤）。17. -种用于预防、治疗或延迟哺乳动物室性心律失常的药盒，其中含有如权利要求6 所述的药物制剂以及如何使用该药物制剂的说明书。18. 根据权利要求17所述的药盒，其中所述室性心律失常包括室性早搏（室早）和/ 或室性心动过速（室速）和/或心室颤动（室颤）。
【专利摘要】本发明涉及纽兰格林蛋白在制备用于预防、治疗或延缓人类室性心律失常的药物中的应用，以及所述用于预防、治疗或延缓人类室性心律失常的药物的使用方法。特别地，本发明提供了预防、治疗或延缓人类室性心律失常的方法，该方法是在患有心律失常或者具有心律失常风险的特殊人群中使用包含纽兰格林蛋白的药物。具体而言，本发明涉及神经调节蛋白在心血管疾病治疗中的新适应症抗室性心律失常。
【IPC分类】A61K45/00, A61K38/18, A61P9/06
【公开号】CN105497876
【申请号】CN201410529437
【发明人】周明东
【申请人】上海泽生科技开发股份有限公司
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2014年9月24日
【公告号】WO2016045493A1
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