一种抗未分化甲状腺癌耐药靶点及其应用
一种抗未分化甲状腺癌耐药靶点及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于分子生物学和肿瘤防治领域，更具体而言，本发明设及预测、诊断和治 疗肿瘤耐药性领域。
【背景技术】
[0002] 未分化甲状腺癌是甲状腺癌中恶性程度最高的一种，发病率约占全部甲状腺癌的 10-15%，该类肿瘤生长快，早期即可发生浸润和全身转移，恶性程度高，预后差。未分化甲 状腺癌通常具有很难预先诊断的特征，因为它对已知治疗手段具有耐受性。理解导致运类 肿瘤耐药性的分子机制，W最终开发逆转耐药的新治疗方法是当前未分化甲状腺癌防治研 究领域的重点和难点。
[0003] 为了逆转未分化甲状腺癌耐药，提高化疗疗效，本领域迫切需要通过多种方式研 究肿瘤耐药发生的机制、肿瘤耐药的关键基因祀点，并根据运些祀点设计治疗肿瘤耐药的 新药，从而引导肿瘤耐药祀向性治疗。
[0004] miRNAs是一类长度为18~24个核巧酸的可调控基因表达的内源性非编码单链小 分子RNA，通过与祀mRNA的y非翻译区域即y UTR特异性结合，引起祀mRNA降解或者翻译抑 审IJ，产生转录后基因沉默，目前研究证明，miRNA分子调控了人类基因组内约1/3的基因表 达。大量研究已经证实miRNAs在恶性肿瘤的发生发展中发挥重要作用，其中包括调控细胞 的增殖、分化、调亡、侵袭和转移等。MiR-30d定位于人染色体8q24.22,作为miR-30家族中的 重要一员在恶性肿瘤发生发展中的作用已受到广泛关注。研究报道miR-30d在前列腺癌、成 神经管细胞瘤、肝癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤中表达上调。但是，miR-30d在未分化甲状腺癌 中却呈现低表达状态，并参与未分化甲状腺癌恶性进展过程。
【发明内容】
[0005] 本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面W及简要介绍一些较佳实施 例。在本部分W及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略W避免使本部 分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而运种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
[0006] 鉴于上述和/或现有肿瘤药物及其应用中存在的问题，提出了本发明。
[0007] 因此，本发明的一个目的是提供一种肿瘤耐药的关键基因祀点及蛋白祀点，为逆 转肿瘤耐药、提高化疗疗效提供更为有效的工具。
[000引为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种抗未分化甲状腺癌耐药 祀点，所述祀点为miR-30d和/或其参与的自隧途径。
[0009] 本发明的另一个目的是提供一种miR-30d模拟剂在降低和/或消除肿瘤治疗中的 耐药性的药物中的应用。
[0010] 作为本发明所述miR-30d模拟剂在降低和/或消除肿瘤治疗中的耐药性的药物中 的应用的一种优选方案，其中：所述miR-30d模拟剂包括:miR-30d表达分子、miR-30d介导的 自隧途径抑制剂。
[0011] 作为本发明所述miR-30d模拟剂在降低和/或消除肿瘤治疗中的耐药性的药物中 的应用的一种优选方案，其中：
[0012] 所述miR-30d表达分子，其表达的碱基序列为
[001引本发明的还一个目的是提供一种药物组合物，其包括:采用miR-30d模拟剂、肿瘤 治疗剂W及药学上能够接受的载体。
[0014] 作为本发明所述药物组合物的一种优选方案，其中：所述肿瘤治疗剂包括，顺销、 阿霉素、紫杉醇、卡销等、考布他汀A-4、厄洛替尼、手霉素或索拉非尼中的一种或几种。
[0015] 作为本发明所述药物组合物的一种优选方案，其中：所述药学上能够接受的载体 包括:盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油或乙醇中的一种或几种。
[0016] 本发明的再一个目的是提供一种筛选抗耐药的肿瘤治疗药物的方法，其包括:提 供未分化甲状腺癌肿瘤细胞系、肿瘤培养物或荷瘤动物;将候选药物与提供的肿瘤细胞系、 肿瘤培养物或荷瘤动物接触，作为给药组;检测给药组中miR-30d的表达水平，并与未给予 候选药物的对照肿瘤细胞系、肿瘤培养物或荷瘤动物的miR-30d表达水平进行比较，如果检 测结果显示，给药组miR-30d的表达水平显著高于对照组，则表明该候选药物是抗耐药的肿 瘤治疗药物。
[0017] 本发明的有益效果：
[0018] (I)掲示了miR-30d与未分化甲状腺癌耐药性之间的关系，为设计和筛选耐药肿瘤 药物提供了新的途径和祀点；
[0019] (2)提供了通过上调miR-30d及其相关信号传导途径来提高未分化甲状腺癌对肿 瘤治疗的敏感性的新方法，从而起到了提高肿瘤治疗效果、减少肿瘤治疗剂用量、缓解患者 痛苦的积极作用，具有临床的实用性。
【具体实施方式】
[0020] 为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合【具体实施方式】 对本发明的【具体实施方式】做详细的说明。
[0021] 在下面的描述中阐述了很多具体细节W便于充分理解本发明，但是本发明还可W 采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可W在不违背本发明内涵的 情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
[0022] 其次，此处所称的"一个实施例"或"实施例"是指可包含于本发明至少一个实现方 式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的"在一个实施例中"并非均指 同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
[0023] 本发明研究发现:miR-30d在未分化甲状腺癌组织中低表达，并通过体内、体外实 验证实了 miR-30d是未分化甲状腺癌发生化疗抵抗的关键分子。低表达的miR-30d可优先启 动一系列抗调亡生物过程，抑制细胞调亡，引起肿瘤耐药。采用模拟剂上调miR-30d表达，可 降低或消除肿瘤的耐药性。在此基础上，本发明人完成了本发明。
[0024] 本发明的主要目的之一就是为了提供一种未分化甲状腺癌耐药的关键基因祀点 及蛋白祀点，为逆转未分化甲状腺癌耐药、提高化疗疗效提供更为有效的工具。
[0025] 本发明的另一个主要目的是根据运些祀点设计预测、诊断肿瘤耐药试剂盒、筛选 针对该小RNA及其相关分子信号通路的治疗肿瘤耐药的药物。
[0026] 本发明的目的之一是提供一种逆转未分化甲状腺癌耐药的关键祀点mir-30d，针 对该祀点及其相关信号通路，如自隧激活抑制剂，设计药物和治疗方案，上调未分化甲状腺 癌中mir-30d表达或抑制其功能，能够有效治疗耐药肿瘤。
[0027] 在本发明的一个实施方式中，所述mir-30d来自人或其它真核生物，例如小鼠、大 鼠、牛或猴等，且它们之间具有高度的保守性。
[0028] 在本发明的一个实施方式中，所述模拟剂选自针对miR-30d的合成模拟物。
[0029] 在本发明的另一个实施方式中，所述模拟剂是针对miR-30d的表达质粒，更优选所 述表达的序列为：
[0031] 在本发明的另一个实施方式中，所述肿瘤为未分化甲状腺癌。
[0032] 在本发明的另一个实施方式中，所述肿瘤治疗所采用的治疗剂选自：烧化剂、抗代 谢药、抗肿瘤抗生素、植物类抗癌药或免疫制剂。
[0033] 在在一个优选例中，所述治疗剂选自：顺销、阿霉素、紫杉醇、卡销等、考布他汀A- 4、厄洛替尼、手霉素、索拉非尼。
[0034] 在另一个优选例中，所述治疗剂优选为销类药物:顺销或卡销。
[0035] 在本发明的第二方面中，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含：
[0036] (i)miR-30d 模拟剂；
[0037] (ii)肿瘤治疗剂；
[0038] (iii)药学上可接受的载体或赋形剂。
[0039] 在一个优选例中，所述肿瘤治疗剂是化疗剂。
[0040] 在本发明的第=方面中，提供了一种药盒，所述药盒包含：
[0041 ] (A)容纳有miR-30d模拟剂的容器；
[0042] (B)容纳肿瘤治疗剂的容器和(C)使用说明书。
[0043] 在一个优选例中，本发明的药物组合物或药盒中所包含的模拟剂选自：针对miR-30d的表达分子、自隧抑制剂氯哇。
[0044] 在另一个优选例中，本发明的药物组合物或药盒中所述模拟剂是针对miR-30d的 表达分子，更优选所述表达序列为：
[0046] 在另一个优选例中，所述的自隧抑制剂氯哇作用于miR-30d低表达介导的自隧激 活信号通路。
[0047] 在另一个优选例中，所述肿瘤选自未分化甲状腺癌。
[0048] 在另一个优选例中，所述治疗剂选自：顺销、阿霉素、紫杉醇、卡销等、考布他汀A- 4、厄洛替尼、手霉素、索拉非尼。
[0049] 在本发明 的第四方面中，提供了一种筛选抗耐药的未分化甲状腺癌治疗药物的方 法，所述方法包括：
[0050] (a)提供未分化甲状腺癌肿瘤细胞系、肿瘤培养物或荷瘤动物；
[0051] (b)将候选药物与步骤(a)中提供的肿瘤细胞系、肿瘤培养物或荷瘤动物接触，作 为给药组；
[0052] (C)检测给药组中miR-30d的表达水平，并与未给予候选药物的对照肿瘤细胞系、 肿瘤培养物或荷瘤动物的miR-30d的表达水平进行比较；
[0化3] 如果检测结果显示，给药组的miR-30d的表达水平显著高于对照组，则表明该候选 药物是抗耐药的肿瘤治疗药物。
[0054] 在一个优选例中，所述方法用于筛选不会对患有肿瘤的个体产生肿瘤治疗耐药性 的肿瘤治疗药物。
[0055] 本发明中首次掲示了miR-30d是一种未分化甲状腺癌耐药相关蛋白，其在肿瘤组 织中异常低表达，优先启动一系列抗调亡蛋白过程，抑制细胞调亡，引起肿瘤耐药。
[0056] 基于本发明的上述发现，本领域普通技术人员可将miR-30d或其参与的自隧途径 作为祀点，设计或筛选抗耐药的肿瘤药物。例如，本领域普通技术人员可根据已知的miR-30d序列设计或筛选出miR-30d模拟剂，将其与化疗药物共同给予肿瘤患者，从而改善肿瘤 对治疗药物的耐药性、提高肿瘤治疗的成功率、减少肿瘤治疗药物的用量、W及减轻患者的 痛苦。
[0化7] miR-30d模拟剂包括但不限于:miR-30d表达分子、miR-30d介导的自隧途径抑制 剂。例如本发明实施例中所提供针对m i R - 3 0 d表达的碱基序列：
[005引就miRNAs模拟剂而言，随着miRNAs研究的深入，已有公司可商业化提供miRNAs的 设计和合成服务
[0059] 显然，通过上述的商业途径和服务，本领域研究人员只需提供祀基因序列，就可W 获得高质量的miR-30d模拟剂。
[0060] 此外，本领域普通技术人员也可采用本领域中已知的方法和软件来自行设计和筛 选miRNA模拟剂。
[0061] 因此，只要本领域普通技术人员获知了祀基因 miR-30d的序列，他们就可W通过商 业途径很容易地获得针对该小RNA的表达分子，也可W根据本领域中已知的原理，采用已知 的软件和方法来获得针对该小RNA的表达分子。
[0062] 药物组合物和药盒
[0063] 本发明提供了一种药物组合物，它含有有效量的所述miR-30d模拟物，W及药学上 可接受的载体。本发明的药物组合物可用于通过表达miR-30d或与自隧抑制剂结合，改善未 分化甲状腺癌耐药性，提高肿瘤治疗药物在肿瘤治疗中的有效性。
[0064] 本发明的药物组合物中药学上可接受的载体，包括(但并不限于）：盐水、缓冲液、 葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。通常药物制剂应与给药方式相匹配，本发明的药物组合 物可W被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法 进行制备。所述的药物组合物宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量。本发 明的药物制剂还可制成缓释制剂。
[0065] 本发明药物组合物中抑制剂的有效量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程 度等而变化。优选的有效量的选择可W由本领域普通技术人员根据各种因素来确定(例如 通过临床试验）。所述的因素包括但不限于:本发明抑制剂配合使用的肿瘤治疗剂的种类和 用量;抑制剂的药代动力学参数例如生物利用率、代谢、半衰期等；患者所要治疗的疾病的 严重程度、患者的体重、患者的免疫状况、给药的途径等。例如，由治疗状况的迫切要求，可 每天给予若干次分开的剂量，或将剂量按比例地减少。
[0066] 本发明药物组合物的给药方式没有特别的限制，可W是全身的或局部的。优选的， 本发明的药物组合物可通过静脉注射的方式给予对象。也可直接将模拟剂通过诸如注射等 方法给药于受试者;或者，可通过一定的途径将携带miR-30d表达单位(比如表达载体或病 毒等)递送到祀点上，并使之表达活性miR-30d。
[0067] 可将肿瘤治疗药物与本发明的模拟剂配制在同一药物组合物中，或W单独的形式 提供于药盒中。治疗药物与本发明的模拟剂在联合使用时可产生协同效果，例如miR-30d与 顺销的联合使用可对未分化甲状腺癌治疗产生协同作用。本领域普通技术人员可根据本发 明中的常规手段(例如参考本发明实施例中所掲示的方法)对运些组合进行筛选。
[0068] 筛选抗耐药的肿瘤治疗药物的方法
[0069] 本发明中还提供了一种WmiR-30d为祀点，筛选抗耐药的未分化甲状腺癌治疗药 物(例如肿瘤治疗药物）的方法，所述方法包括：（a)提供未分化甲状腺癌肿瘤细胞系、肿瘤 培养物或荷瘤动物；（b)将候选药物与步骤(a)中提供的肿瘤细胞系、肿瘤培养物或荷瘤动 物接触，作为给药组；（C)检测给药组中miR-30d的表达水平，并与未给予候选药物的对照肿 瘤细胞系、肿瘤培养物或荷瘤动物的miR-30d表达水平进行比较;如果检测结果显示，给药 组miR-30d的表达水平显著高于对照组，则表明该候选药物是抗耐药的肿瘤治疗药物。
[0070] 本发明的方法可用于从化合物库中筛选出针对肿瘤的非耐药性抗肿瘤药物，可作 为化合物筛选评估的一个重要指标。本发明的方法也可用于临床中对肿瘤患者的个性化治 疗的预测和诊断中，筛选出针对个体具有最佳肿瘤治疗效果的抗肿瘤药物。
[0071] 由此可见，本发明中提供了一种新的肿瘤耐药标志物:在未分化甲状腺癌组织中 低表达并导致肿瘤耐药的microRNA-30d，将该小RNA作为祀点，可设计出针对该小RNA及其 相关分子的预测、诊断肿瘤耐药试剂盒、筛选针对该小RNA及其相关分子的治疗未分化甲状 腺癌耐药的药物。
[0072] 应说明的是，W上实施例仅用W说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳 实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可W对本发明的技术 方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发 明的权利要求范围当中。
【主权项】
1. 一种抗未分化甲状腺癌耐药靶点，其特征在于，所述靶点为miR-30d和/或其参与的 自噬途径。2. -种miR-30d模拟剂在降低和/或消除肿瘤治疗中的耐药性的药物中的应用。3. 根据权利要求2所述的miR-30d模拟剂在降低和/或消除肿瘤治疗中的耐药性的药物 中的应用，其特征在于，所述miR-30d模拟剂包括:miR-30d表达分子、miR-30d介导的自噬途 径抑制剂。4. 根据权利要求3所述的miR-30d模拟剂在降低和/或消除肿瘤治疗中的耐药性的药物 中的应用，其特征在于，所述miR-30d表达分子，其表达的碱基序列为 GUUGUUGUAMCAUCCCCGACUGGMGCUGUMGACACAGCUMGCUUUCAGUCAGAUGUUUGCUGCUAC〇5. -种药物组合物，其特征在于，包括:如权利要求2所述的miR-30d模拟剂、肿瘤治疗 剂以及药学上能够接受的载体。6. 根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述肿瘤治疗剂包括，顺铂、阿霉 素、紫杉醇、卡铂等、考布他汀A-4、厄洛替尼、手霉素或索拉非尼中的一种或几种。7. 根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述药学上能够接受的载体包括： 盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油或乙醇中的一种或几种。8. -种筛选抗耐药的肿瘤治疗药物的方法，其特征在于，包括： 提供未分化甲状腺癌肿瘤细胞系、肿瘤培养物或荷瘤动物； 将候选药物与提供的肿瘤细胞系、肿瘤培养物或荷瘤动物接触，作为给药组； 检测给药组中miR-30d的表达水平，并与未给予候选药物的对照肿瘤细胞系、肿瘤培养 物或荷瘤动物的miR-30d表达水平进行比较，如果检测结果显示，给药组miR-30d的表达水 平显著高于对照组，则表明该候选药物是抗耐药的肿瘤治疗药物。
【专利摘要】本发明公开了一种抗未分化甲状腺癌耐药靶点及其应用，本发明中揭示了microRNA-30d对未分化甲状腺药物治疗的影响，并由此提供了microRNA-30d模拟剂在降低或消除未分化甲状腺癌化疗耐药性的药物中的用途、它作为未分化甲状腺癌耐药标志物及其作为耐药肿瘤预测、诊断以及耐药肿瘤药物设计和筛选的靶点的应用。本发明为克服肿瘤耐药、提高疗效提供新的机理，为抗肿瘤耐药提供新的靶点。
【IPC分类】A61P35/00, A61K45/06, C12Q1/68, C12Q1/02
【公开号】CN105497900
【申请号】CN201510216684
【发明人】张熠, 杨金铭, 杨伟琼, 镇学初
【申请人】苏州大学
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2015年4月30日
【技术领域】
[0001] 本发明属于分子生物学和肿瘤防治领域，更具体而言，本发明设及预测、诊断和治 疗肿瘤耐药性领域。
【背景技术】
[0002] 未分化甲状腺癌是甲状腺癌中恶性程度最高的一种，发病率约占全部甲状腺癌的 10-15%，该类肿瘤生长快，早期即可发生浸润和全身转移，恶性程度高，预后差。未分化甲 状腺癌通常具有很难预先诊断的特征，因为它对已知治疗手段具有耐受性。理解导致运类 肿瘤耐药性的分子机制，W最终开发逆转耐药的新治疗方法是当前未分化甲状腺癌防治研 究领域的重点和难点。
[0003] 为了逆转未分化甲状腺癌耐药，提高化疗疗效，本领域迫切需要通过多种方式研 究肿瘤耐药发生的机制、肿瘤耐药的关键基因祀点，并根据运些祀点设计治疗肿瘤耐药的 新药，从而引导肿瘤耐药祀向性治疗。
[0004] miRNAs是一类长度为18~24个核巧酸的可调控基因表达的内源性非编码单链小 分子RNA，通过与祀mRNA的y非翻译区域即y UTR特异性结合，引起祀mRNA降解或者翻译抑 审IJ，产生转录后基因沉默，目前研究证明，miRNA分子调控了人类基因组内约1/3的基因表 达。大量研究已经证实miRNAs在恶性肿瘤的发生发展中发挥重要作用，其中包括调控细胞 的增殖、分化、调亡、侵袭和转移等。MiR-30d定位于人染色体8q24.22,作为miR-30家族中的 重要一员在恶性肿瘤发生发展中的作用已受到广泛关注。研究报道miR-30d在前列腺癌、成 神经管细胞瘤、肝癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤中表达上调。但是，miR-30d在未分化甲状腺癌 中却呈现低表达状态，并参与未分化甲状腺癌恶性进展过程。
【发明内容】
[0005] 本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面W及简要介绍一些较佳实施 例。在本部分W及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略W避免使本部 分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而运种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
[0006] 鉴于上述和/或现有肿瘤药物及其应用中存在的问题，提出了本发明。
[0007] 因此，本发明的一个目的是提供一种肿瘤耐药的关键基因祀点及蛋白祀点，为逆 转肿瘤耐药、提高化疗疗效提供更为有效的工具。
[000引为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种抗未分化甲状腺癌耐药 祀点，所述祀点为miR-30d和/或其参与的自隧途径。
[0009] 本发明的另一个目的是提供一种miR-30d模拟剂在降低和/或消除肿瘤治疗中的 耐药性的药物中的应用。
[0010] 作为本发明所述miR-30d模拟剂在降低和/或消除肿瘤治疗中的耐药性的药物中 的应用的一种优选方案，其中：所述miR-30d模拟剂包括:miR-30d表达分子、miR-30d介导的 自隧途径抑制剂。
[0011] 作为本发明所述miR-30d模拟剂在降低和/或消除肿瘤治疗中的耐药性的药物中 的应用的一种优选方案，其中：
[0012] 所述miR-30d表达分子，其表达的碱基序列为
[001引本发明的还一个目的是提供一种药物组合物，其包括:采用miR-30d模拟剂、肿瘤 治疗剂W及药学上能够接受的载体。
[0014] 作为本发明所述药物组合物的一种优选方案，其中：所述肿瘤治疗剂包括，顺销、 阿霉素、紫杉醇、卡销等、考布他汀A-4、厄洛替尼、手霉素或索拉非尼中的一种或几种。
[0015] 作为本发明所述药物组合物的一种优选方案，其中：所述药学上能够接受的载体 包括:盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油或乙醇中的一种或几种。
[0016] 本发明的再一个目的是提供一种筛选抗耐药的肿瘤治疗药物的方法，其包括:提 供未分化甲状腺癌肿瘤细胞系、肿瘤培养物或荷瘤动物;将候选药物与提供的肿瘤细胞系、 肿瘤培养物或荷瘤动物接触，作为给药组;检测给药组中miR-30d的表达水平，并与未给予 候选药物的对照肿瘤细胞系、肿瘤培养物或荷瘤动物的miR-30d表达水平进行比较，如果检 测结果显示，给药组miR-30d的表达水平显著高于对照组，则表明该候选药物是抗耐药的肿 瘤治疗药物。
[0017] 本发明的有益效果：
[0018] (I)掲示了miR-30d与未分化甲状腺癌耐药性之间的关系，为设计和筛选耐药肿瘤 药物提供了新的途径和祀点；
[0019] (2)提供了通过上调miR-30d及其相关信号传导途径来提高未分化甲状腺癌对肿 瘤治疗的敏感性的新方法，从而起到了提高肿瘤治疗效果、减少肿瘤治疗剂用量、缓解患者 痛苦的积极作用，具有临床的实用性。
【具体实施方式】
[0020] 为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合【具体实施方式】 对本发明的【具体实施方式】做详细的说明。
[0021] 在下面的描述中阐述了很多具体细节W便于充分理解本发明，但是本发明还可W 采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可W在不违背本发明内涵的 情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
[0022] 其次，此处所称的"一个实施例"或"实施例"是指可包含于本发明至少一个实现方 式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的"在一个实施例中"并非均指 同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
[0023] 本发明研究发现:miR-30d在未分化甲状腺癌组织中低表达，并通过体内、体外实 验证实了 miR-30d是未分化甲状腺癌发生化疗抵抗的关键分子。低表达的miR-30d可优先启 动一系列抗调亡生物过程，抑制细胞调亡，引起肿瘤耐药。采用模拟剂上调miR-30d表达，可 降低或消除肿瘤的耐药性。在此基础上，本发明人完成了本发明。
[0024] 本发明的主要目的之一就是为了提供一种未分化甲状腺癌耐药的关键基因祀点 及蛋白祀点，为逆转未分化甲状腺癌耐药、提高化疗疗效提供更为有效的工具。
[0025] 本发明的另一个主要目的是根据运些祀点设计预测、诊断肿瘤耐药试剂盒、筛选 针对该小RNA及其相关分子信号通路的治疗肿瘤耐药的药物。
[0026] 本发明的目的之一是提供一种逆转未分化甲状腺癌耐药的关键祀点mir-30d，针 对该祀点及其相关信号通路，如自隧激活抑制剂，设计药物和治疗方案，上调未分化甲状腺 癌中mir-30d表达或抑制其功能，能够有效治疗耐药肿瘤。
[0027] 在本发明的一个实施方式中，所述mir-30d来自人或其它真核生物，例如小鼠、大 鼠、牛或猴等，且它们之间具有高度的保守性。
[0028] 在本发明的一个实施方式中，所述模拟剂选自针对miR-30d的合成模拟物。
[0029] 在本发明的另一个实施方式中，所述模拟剂是针对miR-30d的表达质粒，更优选所 述表达的序列为：
[0031] 在本发明的另一个实施方式中，所述肿瘤为未分化甲状腺癌。
[0032] 在本发明的另一个实施方式中，所述肿瘤治疗所采用的治疗剂选自：烧化剂、抗代 谢药、抗肿瘤抗生素、植物类抗癌药或免疫制剂。
[0033] 在在一个优选例中，所述治疗剂选自：顺销、阿霉素、紫杉醇、卡销等、考布他汀A- 4、厄洛替尼、手霉素、索拉非尼。
[0034] 在另一个优选例中，所述治疗剂优选为销类药物:顺销或卡销。
[0035] 在本发明的第二方面中，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含：
[0036] (i)miR-30d 模拟剂；
[0037] (ii)肿瘤治疗剂；
[0038] (iii)药学上可接受的载体或赋形剂。
[0039] 在一个优选例中，所述肿瘤治疗剂是化疗剂。
[0040] 在本发明的第=方面中，提供了一种药盒，所述药盒包含：
[0041 ] (A)容纳有miR-30d模拟剂的容器；
[0042] (B)容纳肿瘤治疗剂的容器和(C)使用说明书。
[0043] 在一个优选例中，本发明的药物组合物或药盒中所包含的模拟剂选自：针对miR-30d的表达分子、自隧抑制剂氯哇。
[0044] 在另一个优选例中，本发明的药物组合物或药盒中所述模拟剂是针对miR-30d的 表达分子，更优选所述表达序列为：
[0046] 在另一个优选例中，所述的自隧抑制剂氯哇作用于miR-30d低表达介导的自隧激 活信号通路。
[0047] 在另一个优选例中，所述肿瘤选自未分化甲状腺癌。
[0048] 在另一个优选例中，所述治疗剂选自：顺销、阿霉素、紫杉醇、卡销等、考布他汀A- 4、厄洛替尼、手霉素、索拉非尼。
[0049] 在本发明 的第四方面中，提供了一种筛选抗耐药的未分化甲状腺癌治疗药物的方 法，所述方法包括：
[0050] (a)提供未分化甲状腺癌肿瘤细胞系、肿瘤培养物或荷瘤动物；
[0051] (b)将候选药物与步骤(a)中提供的肿瘤细胞系、肿瘤培养物或荷瘤动物接触，作 为给药组；
[0052] (C)检测给药组中miR-30d的表达水平，并与未给予候选药物的对照肿瘤细胞系、 肿瘤培养物或荷瘤动物的miR-30d的表达水平进行比较；
[0化3] 如果检测结果显示，给药组的miR-30d的表达水平显著高于对照组，则表明该候选 药物是抗耐药的肿瘤治疗药物。
[0054] 在一个优选例中，所述方法用于筛选不会对患有肿瘤的个体产生肿瘤治疗耐药性 的肿瘤治疗药物。
[0055] 本发明中首次掲示了miR-30d是一种未分化甲状腺癌耐药相关蛋白，其在肿瘤组 织中异常低表达，优先启动一系列抗调亡蛋白过程，抑制细胞调亡，引起肿瘤耐药。
[0056] 基于本发明的上述发现，本领域普通技术人员可将miR-30d或其参与的自隧途径 作为祀点，设计或筛选抗耐药的肿瘤药物。例如，本领域普通技术人员可根据已知的miR-30d序列设计或筛选出miR-30d模拟剂，将其与化疗药物共同给予肿瘤患者，从而改善肿瘤 对治疗药物的耐药性、提高肿瘤治疗的成功率、减少肿瘤治疗药物的用量、W及减轻患者的 痛苦。
[0化7] miR-30d模拟剂包括但不限于:miR-30d表达分子、miR-30d介导的自隧途径抑制 剂。例如本发明实施例中所提供针对m i R - 3 0 d表达的碱基序列：
[005引就miRNAs模拟剂而言，随着miRNAs研究的深入，已有公司可商业化提供miRNAs的 设计和合成服务
[0059] 显然，通过上述的商业途径和服务，本领域研究人员只需提供祀基因序列，就可W 获得高质量的miR-30d模拟剂。
[0060] 此外，本领域普通技术人员也可采用本领域中已知的方法和软件来自行设计和筛 选miRNA模拟剂。
[0061] 因此，只要本领域普通技术人员获知了祀基因 miR-30d的序列，他们就可W通过商 业途径很容易地获得针对该小RNA的表达分子，也可W根据本领域中已知的原理，采用已知 的软件和方法来获得针对该小RNA的表达分子。
[0062] 药物组合物和药盒
[0063] 本发明提供了一种药物组合物，它含有有效量的所述miR-30d模拟物，W及药学上 可接受的载体。本发明的药物组合物可用于通过表达miR-30d或与自隧抑制剂结合，改善未 分化甲状腺癌耐药性，提高肿瘤治疗药物在肿瘤治疗中的有效性。
[0064] 本发明的药物组合物中药学上可接受的载体，包括(但并不限于）：盐水、缓冲液、 葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。通常药物制剂应与给药方式相匹配，本发明的药物组合 物可W被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法 进行制备。所述的药物组合物宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量。本发 明的药物制剂还可制成缓释制剂。
[0065] 本发明药物组合物中抑制剂的有效量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程 度等而变化。优选的有效量的选择可W由本领域普通技术人员根据各种因素来确定(例如 通过临床试验）。所述的因素包括但不限于:本发明抑制剂配合使用的肿瘤治疗剂的种类和 用量;抑制剂的药代动力学参数例如生物利用率、代谢、半衰期等；患者所要治疗的疾病的 严重程度、患者的体重、患者的免疫状况、给药的途径等。例如，由治疗状况的迫切要求，可 每天给予若干次分开的剂量，或将剂量按比例地减少。
[0066] 本发明药物组合物的给药方式没有特别的限制，可W是全身的或局部的。优选的， 本发明的药物组合物可通过静脉注射的方式给予对象。也可直接将模拟剂通过诸如注射等 方法给药于受试者;或者，可通过一定的途径将携带miR-30d表达单位(比如表达载体或病 毒等)递送到祀点上，并使之表达活性miR-30d。
[0067] 可将肿瘤治疗药物与本发明的模拟剂配制在同一药物组合物中，或W单独的形式 提供于药盒中。治疗药物与本发明的模拟剂在联合使用时可产生协同效果，例如miR-30d与 顺销的联合使用可对未分化甲状腺癌治疗产生协同作用。本领域普通技术人员可根据本发 明中的常规手段(例如参考本发明实施例中所掲示的方法)对运些组合进行筛选。
[0068] 筛选抗耐药的肿瘤治疗药物的方法
[0069] 本发明中还提供了一种WmiR-30d为祀点，筛选抗耐药的未分化甲状腺癌治疗药 物(例如肿瘤治疗药物）的方法，所述方法包括：（a)提供未分化甲状腺癌肿瘤细胞系、肿瘤 培养物或荷瘤动物；（b)将候选药物与步骤(a)中提供的肿瘤细胞系、肿瘤培养物或荷瘤动 物接触，作为给药组；（C)检测给药组中miR-30d的表达水平，并与未给予候选药物的对照肿 瘤细胞系、肿瘤培养物或荷瘤动物的miR-30d表达水平进行比较;如果检测结果显示，给药 组miR-30d的表达水平显著高于对照组，则表明该候选药物是抗耐药的肿瘤治疗药物。
[0070] 本发明的方法可用于从化合物库中筛选出针对肿瘤的非耐药性抗肿瘤药物，可作 为化合物筛选评估的一个重要指标。本发明的方法也可用于临床中对肿瘤患者的个性化治 疗的预测和诊断中，筛选出针对个体具有最佳肿瘤治疗效果的抗肿瘤药物。
[0071] 由此可见，本发明中提供了一种新的肿瘤耐药标志物:在未分化甲状腺癌组织中 低表达并导致肿瘤耐药的microRNA-30d，将该小RNA作为祀点，可设计出针对该小RNA及其 相关分子的预测、诊断肿瘤耐药试剂盒、筛选针对该小RNA及其相关分子的治疗未分化甲状 腺癌耐药的药物。
[0072] 应说明的是，W上实施例仅用W说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳 实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可W对本发明的技术 方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发 明的权利要求范围当中。
【主权项】
1. 一种抗未分化甲状腺癌耐药靶点，其特征在于，所述靶点为miR-30d和/或其参与的 自噬途径。2. -种miR-30d模拟剂在降低和/或消除肿瘤治疗中的耐药性的药物中的应用。3. 根据权利要求2所述的miR-30d模拟剂在降低和/或消除肿瘤治疗中的耐药性的药物 中的应用，其特征在于，所述miR-30d模拟剂包括:miR-30d表达分子、miR-30d介导的自噬途 径抑制剂。4. 根据权利要求3所述的miR-30d模拟剂在降低和/或消除肿瘤治疗中的耐药性的药物 中的应用，其特征在于，所述miR-30d表达分子，其表达的碱基序列为 GUUGUUGUAMCAUCCCCGACUGGMGCUGUMGACACAGCUMGCUUUCAGUCAGAUGUUUGCUGCUAC〇5. -种药物组合物，其特征在于，包括:如权利要求2所述的miR-30d模拟剂、肿瘤治疗 剂以及药学上能够接受的载体。6. 根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述肿瘤治疗剂包括，顺铂、阿霉 素、紫杉醇、卡铂等、考布他汀A-4、厄洛替尼、手霉素或索拉非尼中的一种或几种。7. 根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述药学上能够接受的载体包括： 盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油或乙醇中的一种或几种。8. -种筛选抗耐药的肿瘤治疗药物的方法，其特征在于，包括： 提供未分化甲状腺癌肿瘤细胞系、肿瘤培养物或荷瘤动物； 将候选药物与提供的肿瘤细胞系、肿瘤培养物或荷瘤动物接触，作为给药组； 检测给药组中miR-30d的表达水平，并与未给予候选药物的对照肿瘤细胞系、肿瘤培养 物或荷瘤动物的miR-30d表达水平进行比较，如果检测结果显示，给药组miR-30d的表达水 平显著高于对照组，则表明该候选药物是抗耐药的肿瘤治疗药物。
【专利摘要】本发明公开了一种抗未分化甲状腺癌耐药靶点及其应用，本发明中揭示了microRNA-30d对未分化甲状腺药物治疗的影响，并由此提供了microRNA-30d模拟剂在降低或消除未分化甲状腺癌化疗耐药性的药物中的用途、它作为未分化甲状腺癌耐药标志物及其作为耐药肿瘤预测、诊断以及耐药肿瘤药物设计和筛选的靶点的应用。本发明为克服肿瘤耐药、提高疗效提供新的机理，为抗肿瘤耐药提供新的靶点。
【IPC分类】A61P35/00, A61K45/06, C12Q1/68, C12Q1/02
【公开号】CN105497900
【申请号】CN201510216684
【发明人】张熠, 杨金铭, 杨伟琼, 镇学初
【申请人】苏州大学
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2015年4月30日
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