作为蛋白激酶c抑制剂的吲哚基马来酰亚胺衍生物的制作方法
专利名称：作为蛋白激酶c抑制剂的吲哚基马来酰亚胺衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及吲哚基马来酰亚胺衍生物、其制备方法和含有它们的药用组合物。
更具体地讲，本发明提供式I化合物 其中Ra为H；C1-4烷基；或被下列基团取代的C1-4烷基OH、NH2、NHC1-4烷基或N(二-C1-4烷基)2；Rb为H；或C1-4烷基；R为式(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的基团 其中R1、R4、R7、R8、R11和R14各自为OH；SH；杂环基；NR16R17，其中R16和R17各自独立地为H或C1-4烷基，或者R16和R17与它们所连接的氮原子一起形成杂环基；或者为式α的基团，
-X-Rc-Y (α)在该式中X直接为键、或为O、S或NR18，其中R18为H或C1-4烷基，Rc为C1-4亚烷基或其中一个CH2被CRxRy替代的C1-4亚烷基，在此Rx和Ry之一为H且另一个为CH3，Rx和Ry分别为CH3，或者Rx和Ry一起形成-CH2-CH2-，且Y与末端碳原子相连，并选自OH、杂环基和-NR19R20，其中R19和R20分别独立地为H、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-4烷基、芳基-C1-4烷基或任选在末端碳原子上被OH取代的C1-4烷基，或者R19和R20与它们所连接的氮原子一起形成杂环基；R2、R3、R5、R6、R9、R10、R12、R13、R15和R’15分别独立地为H、卤素、C1-4烷基、CF3、OH、SH、NH2、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、NHC1-4烷基、N(二-C1-4烷基)2或CN；E为-N＝，而G为-CH＝，或者E为-CH＝，而G为-N＝；且环A任选被取代。
任何烷基或诸如烷氧基中的烷基部分均可以是直链的，也可以是分支的。卤素可以为F、Cl、Br或I，优选F或Cl。任何芳基都可以为苯基或萘基，优选苯基。
由R1、R4、R7、R8、R11、R14或Y表示或分别由NR16R17或NR19R20形成的杂环基是指3-8元、优选5-8元饱和、不饱和或芳族杂环，该杂环可包括1或2个优选选自N、O和S的杂原子，并任选被取代。适当的示例包括如吡啶基，如3-吡啶基或4-吡啶基；哌啶基，如哌啶-1-基、3-哌啶基或4-哌啶基、高哌啶基、哌嗪基、高哌嗪基、吗啉-4-基、咪唑基、咪唑烷基、吡咯基或吡咯烷基，这些基团任选被取代，如单-取代或多取代。当所述杂环基为取代的杂环基时，该取代可以在一个或多个环碳原子上和/或，当存在环氮原子时，在环氮原子上。环碳原子上的取代基的示例包括诸如C1-4烷基(如CH3)；C3-6环烷基(诸如环丙基)，任选进一步被C1-4烷基取代； ，其中p为1、2或3，优选1；CF3；卤素；OH；NH2；-CH2-NH2；-CH2-OH；哌啶-1-基；或吡咯烷基。环氮原子上的取代基的示例为诸如C1-6烷基；酰基，如R’x-CO，其中R’x为H、C1-6烷基或任选被C1-4烷基、C1-4烷氧基或氨基取代的苯基，如甲酰基；C3-6环烷基；C3-6环烷基-C1-4烷基；苯基；苯基-C1-4烷基，如苄基；杂环基，如上面公开的那些，诸如含有1或2个氮原子的芳族杂环基；或式β的基团-R21-Y′ (β)，其中R21为C1-4亚烷基或被O间隔的C2-4亚烷基，Y′为OH、NH2、NH(C1-4烷基)或N(C1-4烷基)2。
被O间隔的C2-4亚烷基可以为如-CH2-CH2-O-CH2-CH2-。
当环氮上的取代基为杂环基时，它可以为5元或6元饱和、不饱和或芳族杂环，该杂环包括1或2个优选选自N、O和S的杂原子。其示例包括如3-吡啶基或4-吡啶基；哌啶基，诸如哌啶-1-基、3-哌啶基或4-哌啶基、高哌啶基、哌嗪基、高哌嗪基、嘧啶基、吗啉-4-基、咪唑基、咪唑烷基、吡咯基或吡咯烷基。
当Ra为取代的C1-4烷基时，该取代基优选位于末端碳原子上。
当环A为取代的时，它可以为单取代的，也可以为多取代的，优选为单取代的，所述取代基选自如卤素、OH、C1-4烷氧基(诸如OCH3)，C1-4烷基(诸如CH3)、NO2、CF3、NH2、NHC1-4烷基、N(二-C1-4烷基)2和CN。例如，环A可以为下式的基团 其中Rd为H、C1-4烷基或卤素；Re为OH、NO2、NH2、NHC1-4烷基或N(二-C1-4烷基)2。优选Rd位于1位；优选Re位于3位。
当Rc中有一个CH2被CRxRy替代时，优选所述CH2上带有Y。
由R1、R4、R7、R8、R11、R14或Y表示的或分别由NR16R17或NR19R20形成的杂环基包括如式(γ)的基团 其中环D为5、6或7元饱和、不饱和或芳族环；Xb为-N-、-C＝或-CH-；Xc为-N＝、-NRf-、-CRf′＝或-CHRf′-，其中Rf为上述指定的环氮原子上的取代基，Rf′为上述指定的环碳原子上的取代基；C1和C2之间的键为饱和的或不饱和的；C1和C2分别独立地为碳原子，任选被一个或两个选自上述指定的环碳原子上的取代基的取代基取代；且C3和Xb以及C1和Xb之间的连线分别代表形成5、6或7元环D所需的碳原子数。
优选的式(γ)的基团为这样的基团，其中环D形成任选地按如上所述在C-和/或N-上被取代的1，4-哌嗪基环。
式(γ)基团的代表性示例为如3-吡啶基或4-吡啶基；哌啶-1-基；1-N-(C1-4烷基)-或-(ω-羟基-C1-4烷基)-3-哌啶基；吗啉-4-基；咪唑基；吡咯烷基；1-哌嗪基；2-C1-4烷基-或-C3-6环烷基-1-哌嗪基；3-C1-4烷基-或-C3-6环烷基-1-哌嗪基；2，2-、3，5-、2，5-或2，6-二(C1-4烷基)-1-哌嗪基；3，4，5-三-(C1-4烷基)-1-哌嗪基；4-N-(C1-4烷基)-、-(ω-羟基-C1-4烷基)-或-(ω-二甲基氨基-C1-4烷基)-1-哌嗪基；4-N-吡啶-4-基-1-哌嗪基；4-N-苯基-或-C3-6环烷基-1-哌嗪基；4-N-(C1-4烷基)-或-(ω-羟基-C1-4烷基)-3-C1-4烷基-或-3，3-二(C1-4烷基)-1-哌嗪基；4-N-(1-C1-4烷基-C3-6环烷基)-1-哌嗪基；4-N-甲酰基-1-哌嗪基；4-N-嘧啶-2-基-1-哌嗪基；或4-N-C1-4烷基-1-高哌嗪基。
式I化合物可以以游离形式存在，也可以以盐形式存在，如，当R1、R4、R7、R8、R11或R14和/或R2、R3、R5、R6、R9、R10、R11、R13或R15包括可以形成酸加成盐的任选取代的氨基或杂环基时，式I化合物可以采取与诸如有机酸或无机酸(如盐酸、乙酸)的加成盐的形式存在。
可以理解，式I化合物可以以旋光异构体、外消旋物或非对映异构体的形式存在。例如，由R1、R4、R7、R8、R11、R14或Y表示的或分别由NR16R17或NR19R20形成的杂环基的环碳原子上具有取代基时，该碳原子为不对称碳原子，因此可以为D-或L-构型。可以理解，本发明包括所有这些对映体以及它们的混合物。类似的考虑也适用于具有不对称碳原子的原料。
在式I化合物中，优选下列各定义以及它们的任何组合1.Ra为H或CH3；2.Rb为H；3.环A为未取代的或为7位被甲基取代的；4.由NR16R17形成的杂环基优选为如哌嗪-1-基，任选为N取代的，诸如由C1-4烷基、ω-羟基-C1-4烷基、ω-二甲基氨基-C1-4烷基、C5-6环烷基、C1-4烷基-C5-6环烷基、包括1个或2个氮原子的芳族杂环基(诸如吡啶基或嘧啶-2-基)或者上面定义的式β的基团取代，和/或任选为C-取代的，诸如由CH3，如在2位，和/或3位和/或5位和/或6位和/或2，2或3，3位取代，或者由 ，如在2位或3位取代；哌啶-1-基，任选为C取代的，诸如在4位被NH2、-CH2-NH2或哌啶-1-基取代，或者在3位被如OH或NH2取代；或者吡咯烷基，任选为C-取代的，在3位被OH或NH2取代；5.R18为H或CH3；6.Rc为C1-4亚烷基或末端CH2被CRxRy替代的C1-4亚烷基，其中Rx和Ry一起形成-CH2-CH2-；7.X为O；8.式(α)的基团为-O-CH2-CH2-Y；9.R19和R20分别为H、C1-4烷基(如甲基)、在末端碳原子上由OH取代的C1-4烷基(如-CH2-CH2-OH)或环丙基；10.由NR19R20形成的杂环基优选为如哌嗪-1-基，任选由C1-4烷基或式β的基团进行N-取代；哌啶-1-基；1-(C1-4烷基)-哌啶-3-基；3-吡啶基或4-吡啶基；咪唑基；吡咯烷基；或吗啉-4-基；
11.R1、R4、R7、R8、R11或R14各自独立地为1-N-甲基-哌啶-4-基；4-甲基-哌嗪-1-基；4-甲基-1-高哌嗪基；4-(2-羟基乙基)-哌嗪-1-基；或-X′-C1、 2或3-亚烷基-NR19R20，其中X′直接为键、或为O或NH；12.在式(a)基团中，R2和R3分别为H，或者R2和R3之一为H而另一个为F、Cl、CH3、OH、OCH3或CF3；13.在式(a)基团中，R2为OH；14.在式(b)基团中，或者R5和R6分别为H，或者R5和R6之一为H而另一个为F、Cl、CH3、OCH3或CF3；15.在式(b)基团中，R4为式(α)基团或NR16R17；16.在式(d)基团中，或者R9和R10分别为H，或者R9和R10之一为H而另一个为F、Cl、CH3、OCH3或CF3；优选R10为H而R9位于5、6、7或8位，优选位于6位；17.在式(e)基团中，R12和R13分别为H；18.在式(e)基团中，R12和R13之一为H，另一个为F、Cl、CH3、OCH3或CF3；当E为-N＝、G为-CH＝时，优选R13为H，R12位于6或7位；当E为-CH＝、G为-N＝时，优选R13为H，R12位于7位；19.在式(f)基团中，R15为H、CH3或Cl，如位于5位或6位；20.在式(f)基团中，R15为H或CH3，如位于5位，优选为H；21.R为式(d)、(e)或(f)的基团。
本发明还包括制备式I化合物的方法，该方法包括a)使式II化合物 其中Ra、Rb和环A如上所定义，与式III化合物R-CH2-CO-NH2(III)
反应，其中R如上所定义，b)使式IV化合物 其中Ra、Rb和环A如上所定义，与式V的化合物R-CO-CO-OCH3(V)反应，其中R如上所定义；或c)将式I化合物中的取代基R1、R4、R7、R8、R11或R14转化为另一种取代基R1、R4、R7、R8、R11或R14，并且在需要时，将获得的游离形式的式I化合物转化为盐形式，适合时，反之亦然。
步骤a)和(b)可以方便地在强碱如t-BuOK存在下进行。当式III或V化合物包括不应发生反应的OH基团时，此类OH基团可以为保护的形式。可以根据本领域已知的方法，在缩合步骤a)或b)结束时，脱除OH-保护基团。步骤c)可以根据已知的方法进行例如，当R1、R4、R7、R8、R11或R14包括最终OH基团时，该OH基团可以被所需的-NR16R17或-NR19R20替代。
式II可以通过使相应的吲哚化合物在碱性条件下与草酰卤(如草酰氯)反应或者与单烷基草酰氯反应制备，如实施例28中所公开的。
可以根据已知的方法，如通过向式III′化合物或式V′化合物中分别引入所需的取代基R1、R4、R7、R8、R11或R14来制备用作原料的式III化合物或式V化合物，其中式III′和式V′化合物如下所示R′-CH2-CO-NH2(III′)R″-CO-CO-OCH3(V′)其中R′和R″分别为其中均包含了替代R1、R4、R7、R8、R11或R14的离去基团(如卤素)的式(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的基团。
另外，还可以根据已知的方法，通过使式III′的化合物(其中R′为式(a)、(b)或(c)的基团，它们均包括替代R1、R4或R7的OH)与式Xa-X-Rc-Y化合物(其中Xa为离去基团，如Cl，且X、Rc或Y如上所定义)反应来制备其中R为式(a)、(b)或(c)的基团且R1、R4或R7为式(α)的基团的式III化合物。
也可以通过使上述定义的式II化合物与其中R′为式(e’)基团的式III′化合物及式VI化合物一起反应，制备式I化合物，其中R为式(e)的基团，在该式中，E为-N＝，G为-CH＝，R11为-O-Rc-Y或-S-Rc-Y，而上述式(e’)化合物为 其中R12和R13与上述定义相同，Xa为离去基团(如卤素)，上述式VI化合物为R′11H (VI)，其中R′11为-O-Rc-Y或-S-Rc-Y。该反应可以根据已知的方法，如根据在下面的实施例28中公开的方法进行。
式I化合物(其中R为式(d)或(f)的基团，其中R8或R14为-O-Rc-Y或-S-Rc-Y)也可以通过使上述定义的式II化合物与式III′化合物及式VI’化合物一起反应制备；在式III′化合物中，R″为式(d′)或(f′)的基团 或 其中R9、R10、R15和R’15与上述定义相同，Xa为离去基团，如卤素；上述式VI’化合物为A-H (VI)，其中A为-O-Rc-Y或-S-Rc-Y。该反应可以根据已知的方法进行。
本申请没有对原料的生产方法进行具体的描述，这是因为这些化合物或者是已知的化合物，或者可以采用与本领域已知方法或此后所述方法相类似的方法制备。
下列实施例用于举例说明本发明。
RT＝室温THF＝四氢呋喃FCC＝急骤柱层析TBAF＝氟化四丁基铵BINAP＝2，2′-双(二苯基膦基)-1，1′-联萘实施例13-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-二甲氨基-乙氧基)-5-羟基-苯基]-吡咯-2，5-二酮 于室温下，将400mg(0.58mmol)3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-甲磺酰氧基-乙氧基)-5-三苯基甲氧基-苯基]-吡咯-2，5-二酮的5mL 33％二甲胺(于乙醇中)溶液搅拌过夜。用乙酸乙酯稀释反应混合物，产生的混合物用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，分离各层，水层用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机溶液用饱和的盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱过滤残留物(70∶30乙酸乙酯/甲醇)，得到3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-二甲氨基-乙氧基)-5-三苯基甲氧基-苯基]-吡咯-2，5-二酮，将该产物不经进一步纯化立即用于下一步骤。
向370mg(0.58mmol)3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-二甲氨基-乙氧基)-5-三苯基甲氧基-苯基]-吡咯-2，5-二酮的5mL甲醇溶液中加入251mg(1.46mmol)对-甲苯磺酸。于室温下搅拌2小时后，用乙酸乙酯稀释混合物，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。用乙酸乙酯萃取水层三次。以饱和的盐水洗涤合并的有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残留物(7∶3乙酸乙酯/甲醇)，得到标题化合物，为橙色泡沫状物。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.89(s，1H)，11.00(s，1H)，9.45(s，1H)，7.98(s，1H)，7.43(d，J＝8.0Hz，1H)，7.08(t，J＝7.4Hz，1H)，6.78(t，J＝7.4Hz，1H)，6.50(m，2H)，6.34(s，1H)，6.30(s，1H)，3.69(t，J＝5.9Hz，2H)，2.35(t，J＝5.9Hz，2H)，2.06(s，6H)；MS(EI，负电离)m/z 390[M-H]-，(EI，正电离)m/z 392[M+H]+可以根据如下方法制备用作原料的3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-甲磺酰氧基-乙氧基)-5-羟基-苯基]-吡咯-2，5-二酮a)[3-(2-三异丙基甲硅烷氧基-乙氧基)-5-羟基-苯基]-乙酸甲酯于室温下，将9.39g(51.5mmol)(3，5-二羟基-苯基)-乙酸甲酯(根据U.Eder，G.Sauer，G.Haffer，G.Neef，R.Wiechert，US 4,066,674中所述方法制备)、11.38g(61.8mmol)1-溴-2-三异丙基甲硅烷氧基乙烷和14.50g(51.5mmol)碳酸铯的混合物搅拌1小时，再于60℃搅拌1小时。然后用饱和碳酸钠水溶液处理反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。分离各层，用饱和碳酸钠水溶液洗涤有机层三次。合并水层并用乙酸乙酯萃取三次，然后用饱和盐水洗涤合并的有机溶液，干燥，过滤并减压浓缩，通过硅胶柱色谱纯化残留物(用85∶15己烷/乙酸乙酯、然后用70∶30己烷/乙酸乙酯、最后用纯乙酸乙酯洗脱)，得到上述标题化合物，为黄色油状物。
MS(EI，负电离)m/z 381[M-H]-，(EI，正电离)m/z 405[M+Na]+b)2-[3-(2-三异丙基甲硅烷氧基-乙氧基)-5-羟基-苯基]-乙酰胺于室温下，将3.9g(10.2mmol)步骤a)的化合物和40mL浓氨水溶液的混合物搅拌2天并减压去除溶剂。将残留物溶于乙酸乙酯并通过硅胶柱过滤。减压浓缩滤液，将残留物溶于最少量的乙酸乙酯中，加入正己烷使所需产物结晶，过滤并干燥后，得到上述标题化合物。
MS(EI，负电离)m/z 366[M-H]-，(EI，正电离)m/z 390[M+Na]+c)2-[3-(2-三异丙基甲硅烷氧基-乙氧基)-5-三苯基甲氧基-苯基]-乙酰胺于室温下，将1.6g(4.38mm0l)步骤b)的化合物、3.7g(13.27mmol)三苯基氯甲烷、3.7mL(26.69mmol)三乙胺和535mg(4.38mmol)二甲氨基吡啶的50mL二氯甲烷溶液搅拌2小时，加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取混合物三次，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤合并的有机层两次，用饱和的盐水洗涤一次，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残留物(1∶2正己烷/乙酸乙酯，然后为100％乙酸乙酯)，得到标题化合物c)，为白色泡沫状物。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.46-7.20(m，16H)，6.81(s，1H)，6.38(s，1H)，6.28(s，1H)，5.92(s，1H)，3.81(dd，J＝4.5，4.7Hz，2H)，3.68(dd，J＝4.5，4.7Hz，2H)，3.13(s，2H)，1.11-0.91(m，21H)；MS(EI，负电离)m/z 608[M-H]-，(EI，正电离)m/z 632[M+Na]+d)3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-三异丙基甲硅烷氧基-乙氧基)-5-三苯基甲氧基-苯基]-吡咯-2，5-二酮于室温下，向搅拌中的2.5g(4.12mmol)化合物c)和1.3g(6.40mmol)(1.H.-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯的18mL THF溶液中加入20.6mL(20.6mmol)1M的t-BuOK的THF溶液。将反应混合物加热至60℃45分钟，然后冷却至室温。加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯稀释产生的混合物。分离各层，用乙酸乙酯萃取水层三次，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤合并的有机溶液两次，用饱和的盐水洗涤一次，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩.通过硅胶柱色谱纯化残留物(2∶1正己烷/乙酸乙酯，然后为100％乙酸乙酯)，得到标题化合物d)，为橙色泡沫状物。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.90(s，1H)，10.95(s，1H)，7.93(s，1H)，7.43(d，J＝8.0Hz，1H)，7.37-7.20(m，15H)，7.11(dd，J＝7.4，7.6Hz，1H)，6.74(t，J＝7.6Hz，1H)， 6.56(s，1H)，6.33(s，1H)，6.16(d，J＝8.0Hz，1H)，6.07(t，J＝2.1Hz，1H)，3.65(dd，J＝4.1，5.1Hz，2H)，3.39(m，2H)，1.04-0.87(m，21H)；MS(EI，负电离)m/z 761[M-H]-，518[M-Ph3C]-，(EI，正电离)m/z785[M+Na]+e)3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-羟基-乙氧基)-5-三苯基甲氧基-苯基]-吡咯-2，5-二酮向搅拌并冷却至0℃的1.8化合物d)的15mL THF溶液中加入7.1mL(7.1mmol)1M TBAF的THF溶液。45分钟后，加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯稀释产生的混合物，分离各层，用乙酸乙酯萃取水层三次。用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤合并的有机层两次，用饱和的盐水洗涤一次，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩.通过硅胶柱色谱纯化残留物(1∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到标题化合物e)，为橙色泡沫状物。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.89(s，1H)，10.95(s，1H)，7.91(d，J＝2.1Hz，1H)，7.45(d，J＝8.0Hz，1H)，7.40-7.20(m，15H)，7.13(dd，J＝7.4，7.6Hz，1H)，6.77(dd，J＝7.2，7.8Hz，1H)，6.51(s，1H)，6.34(s，1H)，6.20(d，J＝8.0Hz，1H)，6.08(t，J＝2.1Hz，1H)，4.66(s，1H)，3.37(s，4H)；MS(EI，负电离)m/z 605[M-H]-，362[M-Ph3C]-，(EI，正电离)m/z629[M+Na]+，645[M+K]+f)3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-甲磺酰氧基-乙氧基)-5-三苯基甲氧基-苯基]-吡咯-2，5-二酮于室温下，将化合物e)、1.0g(5.74mmol)甲磺酸酐和0.76mL(9.42mmol)吡啶于20mL THF中的混合物搅拌1小时，加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯稀释产生的混合物，分离各层，用乙酸乙酯萃取水层三次，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤合并的有机层两次，用饱和的盐水洗涤一次，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩.通过硅胶柱色谱纯化残留物(1∶2正己烷/乙酸乙酯，随后为100％乙酸乙酯)，得到标题化合物f)，为橙色油状物。
根据实施例1的方法，但是采用适当的原料可以制备式X1化合物 其中R1和R2如表1中所定义。不经过实施例1中所述的保护步骤，可以制备不含有OH取代基的原料化合物。
表1
实施例283-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-二甲氨基-乙氧基)-萘-1-基]吡咯-2，5-二酮 于室温下，将2.10g(4.41mmol)3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-甲磺酰氧基-乙氧基)-萘-1-基]-吡咯-2，5-二酮在20mL 33％二甲胺的乙醇溶液中的悬浮液搅拌过夜，减压去除溶剂。使产物从1∶1乙腈/水中结晶，过滤并用1∶1乙腈/水、乙醚和正己烷洗涤。由此得到标题化合物，为红橙色结晶固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.84(s，1H)，11.13(s，1H)，7.97(s，1H)，7.84(d，J＝8.2Hz，1H)，7.62(d，J＝8.4Hz，1H)，7.47(s，1H)，7.39(t，J＝7.4Hz，1H)，7.31(d，J＝8.2Hz，1H)，7.16(t，J＝7.4Hz，1H)，7.12(s，1H)，6.92(dd，J＝7.4，7.6Hz，1H)，6.46(dd，J＝7.4，7.6Hz，1H)，6.25(d，J＝8.2Hz，1H)，4.16(m，2H)，2.63(dd，J＝5.5，5.7Hz，2H)，2.20(s，6H)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)δ173.3，173.2，156.3，137.1，136.6，135.3，132.2，131.6，128.6，128.1，127.7，127.3，126.4，125.6，124.7，122.8，121.9，121.3，120.7，112.9，109.2，105.9，66.8，58.4，46.4；IR(KBr)3244，1698，1629，1597，1220，1039.
可以根据如下方法制备用作原料的3-(I.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-甲磺酰氧基-乙氧基)-萘-1-基]-吡咯-2，5-二酮a)1-溴-3-(2-三异丙基甲硅烷氧基-乙氧基)-萘将4.38g(19.6mmol)1-溴-萘-3-酚(根据M.S.Newman，V.Sankaran，D.R.Olson，J.Am.Chem.Soc.1976，98，3237-3242中所述方法制备)、5.52g(19.6mmol)1-溴-2-三异丙基甲硅烷氧基-乙烷、13.56g(98.1mmol)碳酸钾和1.45g(3.9mmol)碘化四丁基铵在50mL二甲基甲酰胺中的搅拌混合物加热至60℃ 4小时。然后再加入0.55g(2.0mmol)1-溴-2-三异丙基甲硅烷氧基-乙烷，于60℃继续搅拌1小时，此后经TLC分析表明1-溴-萘-3-酚消耗完毕。使该混合物冷却至室温，加入盐水。用乙酸乙酯萃取形成的溶液，用盐水洗涤有机溶液两次，再用乙酸乙酯萃取合并的水层。合并有机层，干燥，过滤并减压浓缩。油状棕色残留物经硅胶柱层析纯化(97.5∶2.5正己烷/乙醚)，得到上述标题化合物，为棕色固体。
b)氧代-[3-(2-三异丙基甲硅烷氧基-乙氧基)-萘-1-基]-乙酸甲酯向搅拌、冷却(-78℃)的1.59g步骤a)的化合物的15mL THF溶液中加入2.6mL(4.13mmol)1.6M n-BuLi的正己烷溶液。搅拌产生的混合物1小时，滴加886mg(7.50mmmol)草酸二甲酯的5mL THF溶液。于-78℃搅拌反应混合物30分钟后，使其温热至0℃，再于此温度下继续搅拌3小时，然后再加入132mg(1.12mmol)草酸二甲酯的1mL THF溶液。于0℃搅拌1小时，加入饱和的氯化铵水溶液使反应终止，加入乙酸乙酯，分离各层，用饱和的盐水洗涤有机层两次。合并水层，再用乙酸乙酯萃取一次以上，干燥合并的有机溶液，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残留物(95∶5正己烷/乙醚)，得到上述标题化合物，为黄色油状物。
c)3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-三异丙基甲硅烷氧基-乙氧基)-萘-1-基]-吡咯-2，5-二酮于室温下，向1.070g步骤b)的化合物和0.436g(2.50mmol)2-(1.H.-吲哚-3-基)-乙酰胺的10mL THF溶液中加入12.5mL(12.5mmol)1MtBuOK的THF溶液，加入完毕后，将混合物加热至60℃ 4小时，然后冷却至室温，加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取产生的混合物，用饱和的盐水洗涤有机层两次。合并水层并用乙酸乙酯萃取。干燥合并的有机萃取物，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残留物(60∶40正己烷/乙酸乙酯)，得到上述标题化合物，为红橙色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.85(s，1H)，11.15(s，1H)，7.98(s，1H)，7.83(d，J＝8.2Hz，1H)，7.60(d，J＝8.4Hz，1H)，7.47(s，1H)，7.39(dd，J＝7.4，7.6Hz，1H)，7.31(d，J＝8.0Hz，1H)，7.15(m，2H)，6.92(dd，J＝7.4，7.6Hz，1H)，6.44(dd，J＝7.4，7.8Hz，1H)，6.26(d，J＝8.0Hz，1H)，4.18(m，2H)，4.03(dd，J＝4.3，4.5Hz，2H)，1.16-0.92(m，21H)；IR(KBr)3346，1710cm-1；MS(EI，负电离)m/z 553[M-H]-，(EI，正电离)m/z 574[2M+K+H]2+，577[M+Na]+d)3-(I.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-羟基-乙氧基)-萘-1-基]-吡咯-2，5-二酮向搅拌、冷却(0℃)的807mg(1.45mmol)步骤c)的化合物的10mLTHF溶液中加入4.4mL(4.40mmol)1M TBAF的THF溶液。1小时后，加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取产生的混合物，用饱和的盐水洗涤有机层两次，合并水层并用乙酸乙酯萃取。干燥合并的乙酸乙酯溶液，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残留物(乙酸乙酯)，得到上述标题化合物，为红橙色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.85(s，1H)，11.15(s，1H)，7.97(s，1H)，7.84(d，J＝8.2Hz，1H)，7.60(d，J＝8.4Hz，1H)，7.45(d，J＝1.8Hz，1H)，7.38(dd，J＝7.2，7.6Hz，1H)，7.31(d，J＝8.0Hz，1H)，7.15(m，2H)，6.92(dd，J＝7.4，7.6Hz，1H)，6.47(dd，J＝7.4，7.8Hz，1H)，6.29(d，J＝8.2Hz，1H)，4.92(t，J＝5.5Hz，1H)，4.11(m，2H)，3.76(m，2H)；IR(KBr)1705cm-1；MS(EI，负电离)m/z 397[M-H]-，(EI，正电离)m/z 418[2M+K+H]2+，421[M+Na]+e)3-(1-H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-甲磺酰氧基-乙氧基)-萘-1-基]-吡咯-2，5-二酮将1.99g(5.00mmol)步骤d)的化合物、2.18g(12.50mmol)甲磺酸酐和1.6mL(19.80mmol)吡啶在25mL THF中的混合物加热至60℃ 1小时。冷却反应混合物至室温并过滤。减压浓缩滤液。然后使产物从乙醚中结晶，过滤并用乙醚洗涤一次，用水洗涤两次，再用乙醚洗涤一次。该方法得到上述标题化合物，为红橙色结晶。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.83(s，1H)，11.14(s，1H)，7.96(d，J＝2.5Hz，1H)，7.84(d，J＝8.2Hz，1H)，7.61(d，J＝8.2Hz，1H)，7.50(d，J＝2.1Hz，1H)，7.40(dd，J＝7.4，7.6Hz，1H)，7.30(d，J＝8.2Hz，1H)，7.16(m，2H)，6.92(dd，J＝7.4，7.8Hz，1H)，6.46(t，J＝7.6Hz，1H)，6.28(d，J＝8.2Hz，1H)，4.57(dd，J＝3.9，4.1Hz，2H)，4.39(m，2H)，3.21(s，3H)；MS(EI，负电离)m/z 475[M-H]-，(EI，正电离)m/z 499[M+Na]+根据实施例28的方法，但是采用适当的原料，可以制备其中R3如表2中所定义的式X2化合物
表2
实施例48和52的化合物为外消旋物，采用相应的顺式或反式化合物原料时，也可以以纯顺式或反式对映异构体形式制备。这同样适用于实施例50的顺式异构体其也可以以外消旋物形式或以纯反式形式制备。
实施例533-[3-(2-羟基-乙氧基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-4-(1.H.-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮
于室温下，用TFA/H2O(5ml，95/5)将3-[3-(2-叔丁氧基-乙氧基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-4-(1.H.-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮处理15分钟。将反应混合物倾至冰冷饱和的碳酸氢钠水溶液中，用乙酸乙酯萃取形成的悬浮液。经硅胶纯化(用环己烷/乙酸乙酯(2/1)作流动相)，得到为橙色粉末的标题化合物纯品。MH+403(ES+)1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δ11.84(bs，1H)，10.96(s，1H)，7.95(d，1H，J＝1.47Hz)，7.37(d，1H，J＝8.32Hz)，7.03(t，1H，J＝7.34Hz)，6.72(d，1H，J＝2.44Hz)，6.67(t，1H，J＝7.33Hz)，6，62(d，1H，J＝2.69Hz)，6.45(d，1H，J＝8.07Hz)，4.77(t，1H，J＝5.38Hz)，3.87(m，2H)，3.62(q，2H，J＝5.38Hz)，2.67(m，2H)，2.34(m，1H)，2.06(m，1H)，1.59(m，1H)，1.49(m，1H)，1.36(m，2H)根据下面的方法可以制备用作原料的3-[3-(2-叔丁氧基-乙氧基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-4-(l.H.-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮a)8-溴-6-乙酰基四氢化萘于室温、机械搅拌下，向AlCl3(9.9g，75mmol)中滴加6-乙酰基四氢化萘(5.25g，30mmol)。于70℃下20分钟后，将反应物冷却至室温，分小份用Br2(5.76g[＝1.86ml]，36mmol)处理30分钟。于85℃再搅拌混合物60分钟。冷却至室温后，加入冰-水(450ml)，用二氯甲烷萃取化合物，经硅胶纯化，用环己烷/乙酸乙酯2/1至1/1混合物洗脱，得到产物，为淡黄色固体。
b)乙酸8-溴-四氢化萘-6-基酯将步骤a)的化合物(7.28g，28.75mmol)溶于CH2Cl2(60ml)中。于室温下，加入2当量的间氯苯甲酸(11.7g，FLUKA25800，70％)，加入硫酸钠(5g)后，用三氟甲磺酸(250ml，2.88mmol)处理反应混合物。将反应物保持于室温下16小时。薄层监测反应后，向反应物中加入间氯苯甲酸(2.25g，11mmol)、硫酸钠(2g)和三氟甲磺酸(50μl，0.57mmol)(6小时内2次)。过滤有机层，用硫代亚硫酸钠水溶液洗涤三次。经硅胶纯化化合物，用环-己烷/乙酸乙酯2/1至1/1混合物洗脱，得到为无色油状物的产物。
c)5，6，7，8-四氢-4-溴-2-萘酚于室温下，将步骤b)的化合物(6.1g，22.66mmol)加至MeOH(200ml)中，将1N甲醇钠的甲醇(22.7ml)溶液搅拌15分钟，向混合物中加入amberlite IR-120(H+-形式)至反应混合物呈中性。滤除离子交换剂，蒸发溶剂，分离粗品产物，不经进一步纯化，为淡黄色固体。
d)2-(2-叔丁氧基-乙氧基)-4-溴-5，6，7，8-四氢-萘于室温下，将步骤c)的化合物(2.8g，12.33mmol)加至THF(100ml)中，加入三苯膦(16.82g，64.13mmol)，10分钟后加入偶氮二甲酸二异丙酯(11.66ml，59.2mmol)，将混合物搅拌14小时。去除溶剂，硅胶上纯化残留物，用环己烷(100％)至环己烷/二氯甲烷(1/1)作为流动相，得到产物，为淡黄色固体。
e)3-(2-叔丁氧基-乙氧基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基-氧代-乙酸甲酯于室温下，将步骤d)的化合物(2.61g，7.96mmol)溶于无水THF(70ml)中，冷却至-70℃。于惰性环境(氩气环境)下，向反应混合物中滴加丁基锂(5.5ml，8.76mmol，1.6M于己烷中的溶液)，再向反应混合物中加入草酸二甲酯(1.9g，15.92mmol)的5ml无水THF溶液，使反应物温热至室温。将反应混合物倾至Titrisol缓冲液(pH7)中并用乙酸乙酯萃取。干燥有机层，经硅胶纯化，用环己烷/二氯甲烷1/2作为流动相，得到为白色固体的产物。
f)3-[3-(2-叔丁氧基-乙氧基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-4-(1.H.-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮将步骤e)的化合物(1g，2.99mmol)和吲哚-3-乙酰胺(270mg，1.49mmol)加至THF(10ml)中，加热至回流。于氩气下滴加t-BuOK(6ml，6mmol，1M于THF中的溶液)，于回流下保持反应物1小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物，用饱和的碳酸氢钠水溶液萃取。干燥有机层，去除溶剂后，分离得到为橙色固体的化合物，该化合物不需经进一步纯化。
实施例543-[3-(2-二甲氨基-乙氧基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-4-(1.H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮 将实施例53的化合物(380mg，0.94mmol)悬浮于含有225μl吡啶(2.8mmol)的二氯甲烷(20ml)中。加入甲磺酸酐(393mg，2.26mmol)后，于室温下，保持反应混合物14小时。用1N HCl水溶液萃取反应物，经硫酸钠干燥有机层，减压去除溶剂。将残留物溶于THF中，然后用二甲胺水溶液(2.5ml)处理。96小时后，去除溶剂，经硅胶层析(甲醇/乙酸乙酯1/1作为流动相)，分离得到为橙色粉末的标题化合物纯品。MH+430(ES+)1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.87(bs，1H)，10.99(s，1H)，7.98(t，1H，J＝0.40Hz)，7.39(d，1H，J＝8.07Hz)，7.05(t，1H，J＝7.34Hz)，6.75(d，1H，J＝2.44Hz)，6.68(t，1H，J＝7.33Hz)，6，63(d，1H，J＝2.69Hz)，6.44(d，1H，J＝8.07Hz)，3.98(m，2H)，2.70(m，2H)，2.63(m，2H)，2.40(m，1H)，2.23(s，6H)，2.12(m，1H)，1.63(m，1H)，1.53(m，1H)，1.41(m，2H)
实施例55A3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5，6，7，8-四氢萘-1-基]-吡咯-2，5-二酮采用与实施例53(步骤f)类似的方法，通过使2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5，6，7，8四氢-萘-1-基]-乙酰胺与(1.H.-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯缩合，制备标题化合物。MH+441(ES+)实施例55B3-(1-甲基-1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-吡咯-2，5-二酮采用与实施例53(步骤f)类似的方法，通过使2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-乙酰胺与(1-甲基-1.H.-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯缩合，制备标题化合物。MH+455(ES)+ 实施例55A 实施例55B根据下面的方法可以制备用作原料的2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-乙酰胺a)5-溴-7-甲氧基-1，2，3，4-四氢-萘将5，6，7，8-四氢-4-溴-2-萘酚(7g，30.8mmol；实施例29的步骤c)溶于无水丙酮(100ml)，并用K2CO3(15g，0.11mol)和甲基碘(7.25ml，0.13mmol)处理。于室温下，将反应混合物保持过夜。过滤并去除溶剂后，残留物经硅胶纯化(二氯甲烷/环己烷1/1)，得到所述化合物，为白色固体。
b)(3-甲氧基-5，6，7，8-四氢-萘-1-基)-乙酸乙酯向步骤a)的化合物(2.75g，11.4mmol)在DMF(110ml)、ZnBr2(3.4g，14.8mmol)中在溶液中，加入α-(三丁基甲锡烷基)乙酸酯(5.5g，14.8mmol)和二氯双(三邻甲苯基膦)-钯。于80℃、氩气环境下将反应物保持过夜。减压去除DMF，将粗品残留物溶于乙酸乙酯中，用NaHCO3水溶液(6％)萃取。干燥有机层，浓缩并经硅胶纯化(二氯甲烷/环己烷1/1)，得到化合物纯品。
c)(3-羟基-5，6，7，8-四氢-萘-1-基)-乙酸乙酯将DL-甲硫氨酸(1.11g，7.5mmol)和步骤b)的化合物溶于甲磺酸(9ml)中，于室温下保持过夜。将反应物倾至冰冷的饱和氯化钠溶液中，用二氯甲烷萃取3次，干燥有机层，浓缩并经硅胶纯化(二氯甲烷/甲醇95/5)，得到化合物纯品。
d)(3-三氟甲磺酰氧基-5，6，7，8-四氢-萘-1-基)-乙酸乙酯于0℃，向步骤c)的化合物(940mg，4mmol)的吡啶(2ml)溶液中加入三氟甲磺酸酐(720μl，4.4mmol)。将反应混合物保持于室温下过夜，然后将反应物倾至冰冷的水中，用乙醚萃取3次。干燥有机层，浓缩并经硅胶纯化(用二氯甲烷洗脱)，得到所述化合物。
e)[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-乙酸乙酯 于氩气环境下，向步骤d)的化合物(0.5g，1.36mmol)的无水THF(10ml)溶液中加入K3PO4(405mg，1.90mmol)、N-甲基哌嗪(180μl，163mmol)、三(二亚苄基丙酮丙酮)-二钯(O)(60mg，0.07mmol)和2-(二-叔丁基膦基)联苯(21mg，0.07mmol)。将反应物保持于80℃、氩气环境下24小时。过滤后，减压去除DMF，粗品残留物经硅胶纯化(二氯甲烷/甲醇95/5)，得到化合物纯品。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.68(d，1H，J＝2.44Hz)，6.59(d，1H，J＝2.20Hz)，4.15(q，2H，J＝7.34Hz)，3.55(s，2H)，3.17(t，4H，J＝5.13Hz)，2.75(t，2H，J＝5.87Hz)，2.60(t，2H，J＝6.11Hz)，2.57(t，4H，J＝4.90Hz)，2.35(s，3H)，1.77(m，4H)，1.25(t，3H，J＝7.10Hz)f)2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-乙酰胺将步骤e)的化合物(394mg，1.2mmol)的甲醇/NH3(4mol)溶液转移至高压釜中并于120℃保持48小时。冷却后，浓缩反应物，粗品残留物经硅胶纯化(二氯甲烷/甲醇90/105)，得到标题化合物纯品。
实施例563-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮 将2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹唑啉-4-基]-乙酰胺(213mg，0.75mmol)和3-吲哚乙醛酸甲酯(167mg，1.1当量)溶于THF(15mL)中。于0℃，向形成的悬浮液中滴加t-BuOK 1.0M的THF溶液(2.25mL，3.0当量)。于室温下搅拌混合物过夜。加入第二部分乙醛酸酯(30mg，0.2当量)和t-BuOK(0.5mL)，于室温下搅拌化合物24小时。加入AcOEt，用1.0M NaHCO3水溶液和盐水洗涤有机相。经Na2SO4干燥有机相并蒸发。残留物经FCC(Et2O/MeOH/NH4OH水溶液，90∶10∶1)纯化，得到标题化合物，为橙红色粉末。ESI-MS437[M-H]+；1H NMR(DMSO，400MHz)δ2.13(s，3H)，2.16(m，4H)，3.69(m，4H)，6.35(d，J＝8.0Hz，1H)，6.64(dd，J＝7.8，7.4Hz，1H)，7.02(dd，J＝7.6，7.4Hz，1H)，7.10(dd，J＝7.8，7.2Hz，1H)，7.38(d，J＝8.2Hz，1H)，7.53(d，J＝8.4Hz，1H)，7.63-7.73(m，2H)，8.13(s，1H)，11.29(br s，1H)，12.01(br s，1H).
将产生的化合物溶于乙醇中，加入1.2当量的乙酸。减压去除溶剂，得到乙酸盐。
可以根据如下方法制备用作原料的2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹唑啉-4-基]-乙酰胺 a)向1H，3H-喹唑啉-2，4-二酮(10.0g，61.7mmol)在POCl3(37.0mL)中的悬浮液中滴加N，N-二甲基苯胺(7.8mL，1.0当量)。将混合物加热至110℃，于回流下保持35小时。将溶液冷却至室温，倾至冰水混合物中。滤除沉淀，用H2O洗涤。将固体再溶于AcOEt中，用H2O和盐水洗涤。经Na2SO4干燥有机相并蒸发，得到粗品2，4-二氯喹唑啉，使其从甲苯/戊烷中结晶。EI-MS198[M-H]+，163[M-Cl]+；b)于0℃，将溶于THF(25mL)中的乙酰乙酸乙酯(5.08mL，2.0当量)滴加至NaH(60％，1.04g，1.3当量)的THF(25mL)悬浮液中，于0℃搅拌形成的溶液30分钟，蒸发溶剂。将残留物再溶于甲苯(125mL)中，加入2，4-二氯-喹唑啉(4.0g，20.0mmol)。于回流下将混合物搅拌30分钟，蒸发甲苯。将油状残留物再溶于NH4OH 25％水溶液(80mL)中，于室温下搅拌过夜。蒸发所有挥发性物质，将残留物溶于AcOEt(80mL)中。于回流下加热形成的悬浮液15分钟，冷却至0℃，过滤后得到为白色固体的2-(2-氯-喹唑啉-4-基)-乙酰胺。EI-MS221[M]+178；IR(KBr)νmax3302，3138，1681，1542，1388，1287，948，771；1H NMR(DMSO，400MHz)δ 4.21(s，2H)，7.24(br s，1H)，7.75-7.84(m，2H)，7.97(d，J＝8.4 Hz，1H)，8.08(dd，J＝8.4，7.5Hz，1H)，8.34(d，J＝8.4Hz，1H)c)将2-(2-氯-喹唑啉-4-基)-乙酰胺(221mg，1.0mmol)溶于1-甲基-2-吡咯烷酮(2.0mL)中，加入N-甲基哌嗪(555μl，5.0当量)。于50℃加热形成的混合物45分钟。加入AcOEt，过滤悬浮液后得到为白色固体的2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹唑啉-4-基]-乙酰胺。ESI-MS284[M-H]+，241；1H NMR(DMSO，400MHz)δ2.24(s，3H)，2.40(m，4H)，3.86(m，4H)，3.98(s，2H)，7.12(br s，1H)，7.24(dd，J＝8.2，7.5Hz，1H)，7.49(d，J＝8.4Hz，1H)，7.63-7.72(m，2H)，7.95(d，J＝8.2Hz，1H)；
根据实施例56的方法，采用适当的原料，可以制备其中R1、R5、R6和R7如表3所定义的下面式X3的化合物。适当时，也可以根据实施例56中公开的化合物的转化方法，将这些化合物转化为乙酸盐。
表3
采用相应的顺式或反式化合物原料，也可以以纯顺式或反式对映体形式制备为外消旋物的实施例77的化合物。这同样适用于实施例75和89-92的顺式异构体以及实施例81的反式异构体使用相应原料，它们也可以以外消旋物形式或以纯反式或顺式形式制备。实施例116和117的化合物也可以以外消旋物形式或以相应的S或R异构体形式制备。
根据实施例56的方法，采用适当取代的(1.H.-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯作为原料，可以制备其中R、R1和R2如下面表4所定义的式X4的化合物。
表4
实施例149A和149B根据实施例56的方法，采用适当取代的(1.H.-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯，可以制备这些化合物。
实施例149A 实施例149BM+486 M+500可以根据如下方法制备用作原料的(7-氟-1.H.-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯将7-氟吲哚(0.147g，1.09mmol)溶于无水THF(5ml)中，冷却形成的溶液至0℃。加入2M草酰氯的二氯甲烷溶液(0.65mL，1.31mmol)，于0℃再搅拌该混合物10分钟，于室温下搅拌4小时。冷却混合物至0℃，加入甲醇(10ml)，再于室温下搅拌该混合物18小时。减压蒸发混合物至干，用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)混和液洗涤固体残留物并在高空下干燥，得到(7-氟-1.H.-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯。该产物可不经进一步纯化使用。
ESI-MS220[M-H]+根据类似的方法，由相应的吲哚化合物制备在实施例123-148制备中用作原料的相应取代的(1.H.-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯。
根据实施例56的方法，采用适当取代的(1.H.-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯作为原料，可以制备其中R、R1和R2如下面表5所定义的式X5的化合物。
表5
实施例1623-[2-(2-二甲氨基-乙氧基)-喹啉-4-基]-4-(1.H.-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮 于0℃，将2-(2-氯-喹啉-4-基)-乙酰胺(110mg，0.5mmol)、3-吲哚乙醛酸甲酯(102mg，0.5mmol)和N，N-二甲氨基乙醇(508μL，10当量)溶于无水THF(5.0mL)中，加入1.0M t-BuOK(2.5mL，5当量)，于80℃搅拌反应物过夜，使混合物冷却至室温，用AcOEt(20mL)稀释，用H2O(10mL)和盐水(5mL)洗涤。经Na2SO4干燥有机相并蒸发。残留物经FCC纯化(AcOEt/EtOH/28％ NH4OH 90∶9∶1)，得到红色粉末，使其从CH2Cl2/Et2O中结晶，得到标题化合物纯品。1H NMR(DMSO，400MHz)δ2.20(s，6H)，2.67(m，2H)，4.51(m，2H)，6.38(d，J＝8.4Hz，1H)，6.53(dd，J＝8.4，7.5Hz，1H)，6.95(m，2H)，7.21(dd，J＝8.4，7.5Hz，1H)，7.34(d，J＝8.4Hz，1H)，7.57(dd，J＝8.4，7.5Hz，1H)，7.64(d，J＝8.4Hz，1H)，7.78(d，J＝8.4Hz，1H)，8.00(s，1H)，11.20(br s，1H)，11.92(br s，1H)；ES-MS427[M+H]+可以根据如下方法制备用作原料的2-(2-氯-喹啉-4-基)-乙酰胺 a)可以根据EP A1-0 364 327和Indian J.Chem.1994，33B，747-751中公开的方法制备2-(2-氯-喹啉-4-基)-乙酸甲酯。
b)将2-(2-氯-喹啉-4-基)-乙酸甲酯(100mg，0.42mmol)悬浮于28％NH4OH(2.0mL)中。于室温下搅拌混合物过夜。蒸发溶剂，得到为固体的2-(2-氯-喹啉-4-基)-乙酰胺。1H NMR(DMSO，300MHz)d 3.88(s，2H)，7.16(br s，1H)，7.30(s，1H)，7.65(dd，J＝8.4，7.5Hz，1H)，7.70(br s，1H)，7.80(dd，J＝8.4，7.5Hz，1H)，7.93(d，J＝8.4Hz，1H)，8.12(d，J＝8.4Hz，1H)实施例1633-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮 于0℃，将2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹啉-4-基]-乙酰胺(200mg，0.70mmol)和3-吲哚乙醛酸甲酯(143mg，0.70mmol)溶于DMF(7.0mL)中，加入1.0M t-BuOK(3.52mL，5当量)，于80℃搅拌反应物过夜，使混合物冷却至室温，用CH2Cl2(40mL)稀释，用水(2×10mL)和盐水(5mL)洗涤。经Na2SO4干燥有机相并蒸发。残留物经FCC纯化((AcOEt/H2O/AcOH 7∶1∶1)，得到乙酸盐。将该盐再溶于AcOEt(20mL)中，用饱和NaHCO3水溶液(2×10mL)洗涤。有机相经Na2SO4干燥并蒸发，得到为红色粉末的标题化合物。1H NMR(DMSO，400MHz)δ2.22(s，3H)，2.37(m，4H)，3.62(m，4H)，6.63(dd，J＝8.4，7.5Hz，1H)，6.74(d，J＝8.4Hz，1H)，6.95-7.05(m，2H)，7.10(s，1H)，7.34(d，J＝8.4Hz，1H)，7.41-7.50(m，2H)，7.60(d，J＝8.4Hz，1H)，7.85(s，1H)，10.77(br s，1H)，11.48(br s，1H)；ES-MS438[M+H]+可以根据如下方法制备用作原料的2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹啉-4-基]-乙酰胺
将2-(2-氯-喹啉-4-基)-乙酰胺(500mg，2.27mmol)溶于1-甲基-2吡咯烷酮(3.0mL)中，加入N-甲基哌嗪(1.3mL，5当量)，于80℃搅拌反应物48小时。加入AcOEt(20mL)，沉淀经FCC纯化(AcOEt/EtOH/28％NH4OH80∶18∶1)，得到为固体的2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹啉-4-基]-乙酰胺。1H NMR(DMSO，400MHz)δ2.25(s，3H)，2.47(m，4H)，3.67(m，4H)，3.77(s，2H)，7.00(brs，1H)，7.16(s，1H)，7.22(dd，J＝8.4，7.5Hz，1H)，7.50(dd，J＝8.4，7.5Hz，1H)，7.56(m，2H)，7.85(d，J＝8.4Hz，1H)；ES-MS285[M+H]+根据实施例162或163的方法，采用适当的原料，可以制备其中R8和R9如下面表6中定义的式X6化合物。
表6
实施例1813-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-异喹啉-1-基]-吡咯-2，5-二酮
将3-(3-氯-异喹啉-1-基)-4-(1.H.-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(110mg，0.30mmol)悬浮于N-甲基哌嗪(2.5ml)中，于130℃保持24小时。于60℃、高真空下去除过量的N-甲基哌嗪，将残留物溶于乙酸乙酯中，用0.5N H2O水溶液萃取。用1N NaOH将深橙色水相的pH调至9并用乙酸乙酯萃取，分离有机相，经Na2SO4干燥，浓缩并经硅胶纯化，用二氯甲烷/甲醇/乙酸50％(9/1/0.25)作为流动相。收集含有标题化合物的级分，用NaHCO3水溶液(6％)萃取。分离有机相，经Na2SO4干燥，浓缩后得到为橙色粉末的标题化合物纯品。
MH+438(ES+)1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.88(s，1H)，11.14(broad，1H)，8.04(s，1H)，7.68(d，1H，J＝8.56Hz)，7.65(d，1H，J＝9.05Hz)，7.45(t，1H，J＝8.07Hz)，7.31(d，1H，J＝8.07Hz)，7.08(s，1H，J＝8.33Hz)，7.08(t，1H，J＝8.31Hz)，6,94(t，1H，J＝8.07Hz)，6.50(t，1H，J＝7.34Hz)，6.16(d，1H，J＝8.07Hz)，3.53(m，4H)，2.30(m，4H)，2.14(s，3H)可以根据如下方法制备用作原料的3-(3-氯-异喹啉-1-基)-4-(1.H.-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮
a)根据T.Kametani等在Chem.Pharm.Bull.，15(5)，704(1967)中公开的方法制备(3-氯-异喹啉-1-基)乙酸乙酯b)将(3-氯-异喹啉-1-基)-乙酸乙酯(2.5g，10mmol)溶于4N NH3/MeOH(50ml)中，然后将形成的溶液转移至高压釜中，于120℃保持48小时，冷却至室温后，去除溶剂，形成的粗品经硅胶纯化，用二氯甲烷(100％)→二氯甲烷/甲醇(95/5)作为洗脱剂，得到为淡黄色固体的2-(3-氯-异喹啉-1-基)-乙酰胺。
c)将2-(3-氯-异喹啉-1-基)-乙酰胺(440mg，2.5mmol)和3-吲哚乙醛酸甲酯(1.0g，5mmol)加至THF(10ml)中，加热至回流。于氩气环境下滴加t-BuOK(10ml，10mmol，1M于THF中的溶液)，于回流下保持反应物1小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物，用饱和的碳酸氢钠水溶液萃取。经硫酸钠干燥有机层，用乙醚处理并过滤后，得到为橙色固体的化合物。MH+375(ES+)1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.04(s，1H)，11.30(s，1H)，8.14(s，1H)，8.11(s，1H)，7.99(d，1H，J＝8.32Hz)，7.95(d，1H，J＝8.56Hz)，7.75(t，1H，J＝8.33Hz)，7.50(t，1H，J＝8.33Hz)，7.32(d，1H，J＝8.07Hz)，6，92(t，1H，J＝8.07Hz)，6.48(t，1H，J＝7.33Hz)，5.96(d，1H，J＝8.07Hz)实施例1823-(1-甲基-1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-异喹啉-1-基]-吡咯-2，5-二酮 根据上述实施例181c)所述方法，在回流下，使2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-异喹啉-1-基]-乙酰胺(710mg，2.5mmol)和(1-甲基吲哚基)-3-乙醛酸甲酯(1.1g，5mmol)在THF中、于t-BuOK存在下发生反应。按实施例181c)公开方法分离标题化合物。MH+452(ES+)
可以根据如下方法制备用作原料的2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-异喹啉-1-基]-乙酰胺a)于氩气环境下，将(3-氯-异喹啉-1-基)-乙酸乙酯(13g，50mmol)溶于二氧杂环己烷(150ml)中，再于氩气环境下向该溶液中加入BINAP(1.3g，2mmol)、乙酸钯(II)(1.3g，4mmol)、N-甲基哌嗪(11ml，0.1mol)和t-BuONa(5.4g，55mmol)，将反应物保持于回流下30分钟。冷却后，用二氯甲烷(300ml)稀释，用0.5N HCl水溶液(300ml)萃取。过滤后，用固体碳酸氢钠将水相的pH调至8.5，用二氯甲烷萃取(3x)。干燥(Na2SO4)合并的有机相并浓缩。粗品经硅胶纯化，用二氯甲烷(100％)→二氯甲烷/甲醇(90/10)作为洗脱剂，得到为淡黄色固体的产物。
b)于氩气环境下，向[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-异喹啉-1-基]-乙酸乙酯(1.7g，5.4mmol)的DMF溶液中加入甲酰胺(0.72ml，18.1mmol)，加热至100℃后，用45分钟、分10份(每份0.1ml)加入5.4N MeONa的甲醇溶液(1ml)。于100℃、60分钟后，使反应物冷却至室温，用异丙醇(100ml)稀释，减压去除溶剂，将残留物溶于乙酸乙酯中，用碳酸氢钠水溶液(5％)萃取。干燥有机相(Na2SO4)并浓缩。经硅胶纯化粗品，用二氯甲烷/甲醇(90/10→80/20)作为洗脱剂，得到为白色固体的产物。
根据实施例181的方法，采用适当的原料，制备其中Ra、Re、R8和R9如下面表7中定义的式X7化合物。
表7
如下面的体外和体内测定中所示，游离形式或药学上可接受的盐形式的式I化合物显示出有价值的药理活性，如可以抑制蛋白激酶C(PKC)(诸如PKC同种型，像α、β、δ、ε、η或θ的活性)、抑制T-细胞活化和增殖(如通过抑制T-细胞或细胞因子如IL-2产生、通过抑制T-细胞对细胞因子如IL-2的增殖性应答)，所以这些化合物可以用于治疗中。
A.体外1.蛋白激酶C测定根据公开的方法(D.Geiges等，Biochem.Pharmacol.1997；53865-875)，测定式I化合物对各种PKC同种型的活性。该测定在96空聚丙烯微量滴定板(Costar 3794)上进行，所述滴定板预先用Sigmacote(SigmaSL-2)进行硅化。反应混合物(50μl)中含有10μl相关的PKC同工酶、25μl受试化合物和15μl混和液，所述混和液在20mM Tris-缓冲液(pH7.4，并含有0.1％BSA)中含有200μg/ml硫酸鱼精蛋白、10mM Mg(NO3)2、10μM ATP(Boehringer 519987)和3750 Bq的33P-ATP(Hartmann AnalyticSFC301，110TBq/mmol)。在32℃下、于微量滴定板振荡培养箱(BiolaboScientific Instruments)中孵育15分钟。加入10μl 0.5M Na2EDTA(pH7.4)终止反应。在轻微压力下将50μl混和液移液至预湿的磷酸纤维素滤纸上(Whatmann 3698-915)。用100μl双蒸水洗去未掺入的ATP。用0.5％H3PO4洗涤纸两次，共15分钟，接着用EtOH洗涤5分钟。此后，干燥滤纸并置于omnifilter(Packard 6005219)上，以10μl/孔Microscint-O(Packard6013611)覆盖，然后采用Topcount放射活性计数器(Packard)进行计数。根据前面描述的方法，通过与1-1000μM浓度范围内的抑制剂系列稀释液一起孵育常规进行IC50测定。由S形曲线拟合图计算IC50值。
2.蛋白激酶Cθ测定根据上述描述的测定条件，采用人重组PKCθ进行。在该测定中，式I化合物可以抑制PKCθ，其IC50≤1μM。实施例56的化合物在该测定中可以抑制PKCθ，其IC50＜10n.M。
3.蛋白激酶Cα测定由Oxford Biomedical Research获得人重组PKCα，在上述A.1部分描述的测定条件下进行测定实施例100的化合物在该测定中可以抑制PKCα，其IC50为39±15nM。
4.蛋白激酶Cβ1测定由Oxford Biomedical Research获得人重组PKC β1，在上述A.1部分描述的测定条件下进行测定实施例163的化合物在该测定中可以抑制PKCβ1，其IC50为8±2nM。
5.蛋白激酶Cδ测定由Oxford Biomedical Research获得人重组PKCδ，在上述A.1部分描述的测定条件下进行测定实施例181的化合物在该测定中可以抑制PKCδ，其IC50为18±8nM。
6.蛋白激酶Cε测定由Oxford Biomedical Research获得人重组PKCε，在上述A.1部分描述的测定条件下进行测定实施例139的化合物在该测定中可以抑制PKCε，其IC50为20±7nM。
7.蛋白激酶Cη测定由PanVera获得人重组PKCη，在上述A.1部分描述的测定条件下进行测定实施例85的化合物在该测定中可以抑制PKCη，其IC50为50±9nM。
8.CD28共刺激测定该测定采用用人白细胞介素-2启动子/报道基因构建物转染的Jurkat细胞进行，所述构建物根据Baumann G等在Transplant.Proc.1992；2443-8中描述的方法构建，其中β-半乳糖苷酶报道基因被萤光素酶基因(deWet J.等，Mol.Cell Biol.1987，7(2)，725-737)取代。根据下述方法，采用固相偶联的抗体或乙酸肉豆蔻佛波醇(PMA)和Ca++离子载体离子霉素刺激细胞。对于抗体介导的刺激反应，首先于室温下，每孔用3μg/ml山羊抗小鼠IgG Fc抗体(Jackson)(在55μl磷酸盐缓冲液(PBS)中)将Microlite TM1微量滴定板(Dynatech)包被3小时。除去抗体后，于室温下，与2％牛血清白蛋白(BSA)一起在PBS(300μl/孔)中孵育2小时封闭滴定板。每孔用300μlPBS洗涤三次，加入在50μl 2％BSA/PBS中的10ng/ml抗T细胞受体抗体(WT31，Becton&Dickinson)和300ng/ml抗-CD28抗体(15E8)作为刺激抗体，于4℃孵育过夜。最后，每孔用300μl PBS洗涤三次。在不同的滴定板上以复份制备受试化合物的7个于测定培养液中的三倍系列稀释液，所述培养液为RPMI 1640/10％胎牛血清(FCS)，含有50μM 2-巯基乙醇、100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素，将受试化合物与转染的Jurkat细胞(克隆K22 290-H23)混合并于37℃、5％CO2下孵育30分钟。然后将含有1×105个细胞的100μl混合物转移至抗体包被的测试滴定板上。对于平行试验，则将100μ1混合物和40ng/ml PMA以及2μM离子霉素一起孵育。于37℃、5％CO2下孵育5.5小时后，经生物萤光法测定萤光素酶的水平。于500g将滴定板离心10分钟，轻弹去除上清液，加入含有25mMTris-磷酸盐(pH7.8)、2mM DTT、2mM 1，2-二氨基环己烷-N，N，N′，N-四乙酸、10％(v/v)甘油和1％(v/v)Triton X-100的裂解缓冲液(20μl/孔)。于室温、持继震摇下将滴定板孵育10分钟。在每孔中自动加入50μl萤光素酶反应缓冲液后，用生物萤光读板仪(Labsystem，Helsinlki，Finland)测定萤光素酶活性，所述反应缓冲液含有20mM Tricine、1.07mM(MgCO3)4Mg(OH)2x5H2O、2.67mM MgSO4、0.1mM EDTA、33.3mMDTT、270μM辅酶A、470μM萤光素(Chemie Brunschwig AG)、530μMATP(pH7.8)。滞后时间为0.5秒，总测定时间为1或2秒。低对照值为从抗T-细胞受体或PMA-刺激的细胞获得的光单位，高对照值为不加入受试样品时由抗-T细胞受体/抗CD28-或PMA/离子霉素刺激的细胞获得的光单位。由所有值中减去低对照值。受试化合物产生的抑制作用以高对照值的抑制百分比计算。由剂量曲线获得产生50％抑制时受试化合物的浓度(IC50)。在该测定中，式I化合物可以抑制抗-T细胞受体/抗-CD28和PMA/离子霉素刺激的Jurkat细胞，其IC50≤1μM。在该测定中，实施例56的化合物的IC50为42±12nM。
9.异源混合的淋巴细胞反应(MLR)根据标准方法进行双向MLR(J.Immunol. Methods，1973，2，279和Meo T.等，Immunological Methods，New York，Academic Press，1979，227-39)。简言之，由CBA和BALB/c小鼠获得的脾细胞(在平底组织培养微量滴定板中，每孔每株1.6×105个细胞，总共3.2×105个细胞)在RPMI培养液中孵育，培养液中含有10％FCS、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素(Gibco BRL，Basel，Switzerland)、50μM 2-巯基乙醇(Fluka，Buchs，Switzerland)和系列稀释的化合物。每种受试化合物平行两次进行7个三倍稀释步骤。孵育4天后，加入1μCi3H-胸苷。再孵育5小时后，收获细胞，采用标准方法测定掺入的3H-胸苷。MLR的背景值(低对照值)为单独的BALB/c细胞的增殖值。由所有值中减去低对照值。不含样品的高对照值作为100％增殖。计算样品的抑制百分比，测定50％抑制所需的浓度(IC50值)。在该测定中，实施例56的化合物的IC50为168±20nM。
B.体内测定大鼠心脏移植采用的组合株系为雄性Lewis大鼠(RT1单元型)和BN大鼠(RT1单元型)。吸入异氟醚使动物麻醉。通过供体大鼠的腹下腔静脉进行血液肝素化，同时通过主动脉放血，之后打开胸腔，快速冷却心脏。于第一分支远端结扎并分开主动脉，在第一个分杈点将头臂动脉干分开。结扎并分开左肺动脉，分开右侧肺动脉但保留开放。解剖所有其他血管使之游离、结扎并分离，将供体心脏取出置于冰冷的盐水中。
解剖并将肾下腹部主动脉和腔静脉交叉夹住以制备受体。用10/0单丝缝合线以端-侧吻合术植入移植物，供体的头臂动脉干与受体的主动脉相连，供体的右肺动脉与受体的腔静脉相连。去除夹子，移植物束于腹后，用温盐水洗涤腹内容物，缝合动脉胸腔，使动物在加热灯下恢复。每日透过腹壁对跳动的供体心脏触诊来监测移植物的存活。当心跳停止时，认为完全排斥。以1-30mg/kg的剂量每日经口给予式I化合物来处理动物，可以使移植物的存活期延长。以1-30mg/kg的剂量给予实施例100的化合物时，可以显著延长移植物的存活期，因此，式I化合物可以用于治疗和/或预防T淋巴细胞和/或PKC介导的疾病或紊乱，如急性或慢性器官或组织同种移植物或异种移植物的排斥反应、动脉粥样硬化、由于血管损伤如血管成形术引起的血管栓塞、再狭窄、高血压、心力衰竭、慢性阻塞性肺疾病、CNS疾病如阿尔茨海默氏病或肌萎缩性侧索硬化症、癌症、感染性疾病如AIDS、脓毒性休克或成人呼吸窘迫综合征、局部缺血/再灌注损伤如心肌梗死、中风、消化道缺血、肾衰竭或出血性休克或创伤性休克。式I化合物也可以用于治疗和/或预防T-细胞介导的急性或慢性炎性疾病或自身免疫病，如类风湿性关节炎、骨关节炎、系统性红斑狼疮、桥本甲状腺炎、多发性硬化、重症肌无力、I型糖尿病或II型糖尿病及与其相关的疾病、呼吸道疾病如哮喘、或炎性肺损伤、炎性肝损伤、炎性肾小球损伤、免疫性疾病的皮肤表现、炎性和过度增生性皮肤疾病(如牛皮癣、特应性皮炎、变应性接触性皮炎、刺激性接触性皮炎和其他的湿疹性皮炎、脂溢性皮炎)、炎性眼疾病，如斯耶格伦综合征、角结膜炎或眼色素层炎、炎性肠疾病、局限性回肠炎或溃疡性结肠炎。在用于上述用途时，所需的剂量应该随给药方式、所治疗的具体疾病以及所需产生的作用而发生变化。一般而言，以约0.1-100mg/kg体重日剂量全身给药时，显示可获得令人满意的效果。在体积较大的哺乳动物如人中，所需的日剂量约为0.5mg-2000mg，适宜如以多至4次/天的分剂量或以延迟形式给药。
可以以任何方便的途径给予式I化合物，这些途径具体有例如以如片剂或胶囊剂形式给予的经肠途径如口服，或者以如注射溶液或悬浮液形式给予的胃肠外途径，以洗剂、胶凝剂、膏剂或霜剂形式或以鼻用形式或栓剂形式给予的局部给药途径。可以根据常规的方法，通过将游离或药学上可接受的盐形式的式I化合物与药学上可接受的载体或稀释剂混合，制备含有游离或药学上可接受的盐形式的式I化合物与至少一种药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。用于口服给药的单位剂型含有如约0.1mg-500mg活性组分。
局部给药包括如皮肤给药。另外，局部给药的形式也包括眼部给药。
可以以游离形式或以药学上可接受的盐形式给予上述式I化合物，如上所述。此类盐可以以常规方法制备并具有与游离化合物相同数量级的活性。
根据前述，本发明还提供1.1在需要此类治疗的对象中，预防或治疗T淋巴细胞和/或PKC介导的紊乱或疾病(如上面所述的那些紊乱或疾病)的方法，该方法包括给予所述对象有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐；1.2在需要此类治疗的对象中，预防或治疗急性或慢性移植物排斥反应或T淋巴细胞介导的炎性或自身免疫性疾病(如上面所述的那些疾病)的方法，该方法包括给予所述对象有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐；2.游离形式或药学上可接受的盐形式的式I化合物用作药物，如在上述1.1和1.2所述的方法中用作药物；3.用于上述1.1和1.2所述的方法中的药物组合物，包括游离形式或药学上可接受的盐形式的式I化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
4.式I化合物或其药学上可接受的盐用于制备在上述1.1和1.2所述的方法中采用的药物组合物。
可以将式I化合物作为单一活性组分给予，也可以将其与免疫调节疗法中的其它药物或其它抗炎药物一起给予，如用于治疗或预防同种或异种移植的急性或慢性排斥反应、或炎性或自身免疫性疾病。例如，可以将这些化合物与下列物质联合使用环胞菌素或子囊霉素或它们的免疫抑制性类似物或衍生物，例如环胞菌素A、环胞菌素G、FK-506、ABT-281、ASM981；mTOR抑制剂，如雷帕霉素、40-O-(2-羟基)乙基-雷帕霉素等；皮质类固醇；环磷酰胺；硫唑嘌呤；甲氨蝶呤；加速淋巴细胞归巢的药剂，如FTY 720；来氟米特或其类似物；咪唑立宾；霉酚酸；霉酚酸莫非替克；15-脱氧精胍菌素或其类似物；免疫抑制性单克隆抗体，如白细胞受体，诸如MHC、CD2、CD3、CD4、CD11a/CD18、CD7、CD25、CD27、B7、CD40、CD45、CD58、CD137、ICOS、CD150(SLAM)、OX40、4-1BB或它们的配体，如CD154的单克隆抗体；或其他的免疫调节化合物，如至少具有CTLA4或其突变体的胞外域部分的重组结合分子，如与非-CTLA4蛋白序列相联的至少CTLA4或其突变体的胞外域部分，如CTLA4Ig(如指定为ATCC 68629)或其突变体，如LEA29Y，或其他粘附分子抑制剂，如mAbs或低分子量抑制剂，包括LFA-1拮抗剂、选择蛋白拮抗剂和VLA-4拮抗剂。也可以将式I化合物与抗增生剂(如化疗药物)一起给予例如用于治疗癌症，或者与抗糖尿病的药物一起给予用于治疗糖尿病。
根据上述，本发明还提供5.前述的方法，包括共同(如同时或顺序)给予治疗有效量的PKC和T-细胞激活和增殖的抑制剂(如游离形式或药学上可接受的盐形式的式I化合物)和第二种药物，所述第二种药物为免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、抗增生药物或抗糖尿病的药物，如上面所述的那些。
6.治疗联合物，如药剂盒，包括a)PKC和T-细胞激活和增殖的抑制剂，如游离形式或药学上可接受的盐形式的式I化合物，和b)至少一种选自下列的其它药物免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、抗增生药物或抗糖尿病的药物。组分a)和组分b)可以同时给予，也可以顺序给予。该药剂盒可以包括给药说明。
当如上所述将PKC和T-细胞激活和增殖的抑制剂(如式I化合物)与其他的免疫抑制剂/免疫调节剂、抗炎药物、抗增生药物或抗糖尿病的药物联合给药用于预防或治疗急性或慢性移植物排斥反应或炎性疾病或自身免疫性疾病时，联合给药的免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、抗增生药物或抗糖尿病的药物的剂量应该随采用的联合给药的药物类型(如该药物是类固醇还是环胞菌素)、采用的具体药物以及所治疗的疾病等而发生变化。
根据本发明的优选化合物为如实施例56的化合物。
权利要求
1.式I化合物或其盐 其中Ra为H；C1-4烷基；或被下列基团取代的C1-4烷基OH、NH2、NHC1-4烷基或N(二-C1-4烷基)2；Rb为H；或C1-4烷基；R为式(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的基团 其中R1、R4、R7、R8、R11和R14各自为OH；SH；杂环基；NR16R17，其中R16和R17各自独立地为H或C1-4烷基，或者R16和R17与它们所连接的氮原子一起形成杂环基；或者为式α的基团-X-Rc-Y(α)其中X直接为键、或为O、S或NR18，在此R18为H或C1-4烷基，Rc为C1-4亚烷基或其中一个CH2被CRxRy替代的C1-4亚烷基，其中Rx和Ry之一为H而另一个为CH3，Rx和Ry分别为CH3，或者Rx和Ry一起形成-CH2-CH2-，且Y与末端碳原子相连，并选自OH、杂环基和-NR19R20，其中R19和R20分别独立地为H、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-4烷基、芳基-C1-4烷基或任选在末端碳原子上被OH取代的C1-4烷基，或者R19和R20与它们所连接的氮原子一起形成杂环基；R2、R3、R5、R6、R9、R10、R12、R13、R15和R’15分别独立地为H、卤素、C1-4烷基、CF3、OH、SH、NH2、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、NHC1-4烷基、N(二-C1-4烷基)2或CN；E为-N＝而G为-CH＝，或者E为-CH＝而G为-N＝；且环A任选被取代。
2.权利要求1的化合物，其中由R1、R4、R7、R8、R11、R14或Y表示的或分别由NR16R17或NR19R20形成的杂环基是3-8元饱和、不饱和或芳族杂环，该杂环包括1或2个杂原子，并任选在一个或多个环碳原子和/或存在的环氮原子上被取代。
3.权利要求2的化合物，其中由R1、R4、R7、R8、R11、R14或Y表示的或分别由NR16R17或NR19R20形成的杂环基为式(γ)的基团 其中环D为5、6或7元饱和、不饱和或芳族环；Xb为-N-、-C＝或-CH-；Xc为-N＝、-NRf-、-CRf′＝或-CHRf′-，其中Rf为环氮原子上的取代基并选自C1-6烷基、酰基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-4烷基、苯基、苯基-C1-4烷基、杂环基和式(β)的基团-R21-Y′ (β)，其中R21为C1-4亚烷基或被O间隔的C2-4亚烷基，Y′为OH、NH2、NH(C1-4烷基)或N(C1-4烷基)2；而Rf′为环碳原子上的取代基并选自C1-4烷基、任选被C1-4烷基进一步取代的C3-6环烷基、其中p为1、2或3的 CF3、卤素、OH、NH2、-CH2-NH2、-CH2-OH、哌啶-1-基和吡咯烷基；C1和C2之间的键为饱和的或不饱和的；C1和C2分别独立地为碳原子，任选被一个或两个选自上述环碳原子上的取代基的取代基取代；且C3和Xb以及C1和Xb之间的连线分别代表形成5、6或7元环D所需的碳原子数目。
4.权利要求3的化合物，其中D为任选地按权利要求3中所述被C-取代的和/或N-取代的哌嗪基环。
5.前述权利要求中任何一项的化合物，其中R为式(d)、(e)或(f)的基团。
6.权利要求1的化合物或其盐，该化合物选自3-(1，H-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮，3-(1，H-1-甲基-吲哚-3-基)-4-[2-(4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基)-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮，3-(1，H-吲哚-3-基)-4-[2-(4-乙基-哌嗪-1-基)-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮，3-(1，H-1-甲基-吲哚-3-基)-4-[2-(4-乙基-哌嗪-1-基)-6-氯-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮，3-(1，H-7-甲基-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-6-氯-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮，3-(1，H-1-甲基-吲哚-3-基)-4-[2-(3(S)-甲基-哌嗪-1-基)-6-氯-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮，3-(1，H-1-甲基-吲哚-3-基)-4-[2-(3(R)-甲基-哌嗪-1-基)-6-氯-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮，和3-(1，H-吲哚-3-基)-4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-异喹啉-1-基]-吡咯-2，5-二酮。
7.制备权利要求1的式I化合物的方法，该方法包括a)使式II化合物 其中Ra、Rb和环A如权利要求1中的定义，与式III化合物反应R-CH2-CO-NH2(III)，其中R如权利要求1中的定义，b)使式IV化合物 其中Ra、Rb和环A如权利要求1中的定义，与式V的化合物反应R-CO-CO-OCH3(V)，其中R如权利要求1中的定义；或c)将式I化合物中的取代基R1、R4、R7、48、R11或R14转化为另一种取代基R1、R4、R7、R8、R11或R14，并且在需要时，将获得的游离形式的式I化合物转化为盐形式，或适合时，反之亦然。
8.用作药物的权利要求1的化合物。
9.药物组合物，该组合物包含游离形式或药学上可接受的盐形式的权利要求1的式I化合物和药学上可接受的稀释剂或载体。
10.联合物，其包含a)PKC和T-细胞活化和增殖的抑制剂，和b)至少一种选自下列的其它药物免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎剂、抗增生剂或抗糖尿病的药物。
11.预防或治疗T淋巴细胞和/或PKC介导的紊乱或疾病的方法，该方法包括给予需要此类治疗的对象有效量的权利要求1的式I化合物或其药学上可接受的盐。
全文摘要
本发明公开其中包含取代的苯基、萘基、四氢萘基、喹唑啉基、喹啉基、异喹啉基或嘧啶基的吲哚基马来酰亚胺衍生物，这些衍生物具有有用的药学活性如可以用于治疗和/或预防T－细胞介导的急性或慢性炎性疾病或紊乱、自身免疫性疾病、移植物排斥反应或癌症。
文档编号A61P9/00GK1478087SQ01819992
公开日2004年2月25日 申请日期2001年11月5日 优先权日2000年11月7日
发明者R·阿尔贝特, N·G·库克, S·科滕斯, C·埃尔哈特, J-P·埃弗努, R·塞德拉尼, P·冯马特, J·韦格纳, G·森克, ８ヅ, R 阿尔贝特, 吕, 库克, 硖, 衲 申请人:诺瓦提斯公司
技术领域：
本发明涉及吲哚基马来酰亚胺衍生物、其制备方法和含有它们的药用组合物。
更具体地讲，本发明提供式I化合物 其中Ra为H；C1-4烷基；或被下列基团取代的C1-4烷基OH、NH2、NHC1-4烷基或N(二-C1-4烷基)2；Rb为H；或C1-4烷基；R为式(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的基团 其中R1、R4、R7、R8、R11和R14各自为OH；SH；杂环基；NR16R17，其中R16和R17各自独立地为H或C1-4烷基，或者R16和R17与它们所连接的氮原子一起形成杂环基；或者为式α的基团，
-X-Rc-Y (α)在该式中X直接为键、或为O、S或NR18，其中R18为H或C1-4烷基，Rc为C1-4亚烷基或其中一个CH2被CRxRy替代的C1-4亚烷基，在此Rx和Ry之一为H且另一个为CH3，Rx和Ry分别为CH3，或者Rx和Ry一起形成-CH2-CH2-，且Y与末端碳原子相连，并选自OH、杂环基和-NR19R20，其中R19和R20分别独立地为H、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-4烷基、芳基-C1-4烷基或任选在末端碳原子上被OH取代的C1-4烷基，或者R19和R20与它们所连接的氮原子一起形成杂环基；R2、R3、R5、R6、R9、R10、R12、R13、R15和R’15分别独立地为H、卤素、C1-4烷基、CF3、OH、SH、NH2、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、NHC1-4烷基、N(二-C1-4烷基)2或CN；E为-N＝，而G为-CH＝，或者E为-CH＝，而G为-N＝；且环A任选被取代。
任何烷基或诸如烷氧基中的烷基部分均可以是直链的，也可以是分支的。卤素可以为F、Cl、Br或I，优选F或Cl。任何芳基都可以为苯基或萘基，优选苯基。
由R1、R4、R7、R8、R11、R14或Y表示或分别由NR16R17或NR19R20形成的杂环基是指3-8元、优选5-8元饱和、不饱和或芳族杂环，该杂环可包括1或2个优选选自N、O和S的杂原子，并任选被取代。适当的示例包括如吡啶基，如3-吡啶基或4-吡啶基；哌啶基，如哌啶-1-基、3-哌啶基或4-哌啶基、高哌啶基、哌嗪基、高哌嗪基、吗啉-4-基、咪唑基、咪唑烷基、吡咯基或吡咯烷基，这些基团任选被取代，如单-取代或多取代。当所述杂环基为取代的杂环基时，该取代可以在一个或多个环碳原子上和/或，当存在环氮原子时，在环氮原子上。环碳原子上的取代基的示例包括诸如C1-4烷基(如CH3)；C3-6环烷基(诸如环丙基)，任选进一步被C1-4烷基取代； ，其中p为1、2或3，优选1；CF3；卤素；OH；NH2；-CH2-NH2；-CH2-OH；哌啶-1-基；或吡咯烷基。环氮原子上的取代基的示例为诸如C1-6烷基；酰基，如R’x-CO，其中R’x为H、C1-6烷基或任选被C1-4烷基、C1-4烷氧基或氨基取代的苯基，如甲酰基；C3-6环烷基；C3-6环烷基-C1-4烷基；苯基；苯基-C1-4烷基，如苄基；杂环基，如上面公开的那些，诸如含有1或2个氮原子的芳族杂环基；或式β的基团-R21-Y′ (β)，其中R21为C1-4亚烷基或被O间隔的C2-4亚烷基，Y′为OH、NH2、NH(C1-4烷基)或N(C1-4烷基)2。
被O间隔的C2-4亚烷基可以为如-CH2-CH2-O-CH2-CH2-。
当环氮上的取代基为杂环基时，它可以为5元或6元饱和、不饱和或芳族杂环，该杂环包括1或2个优选选自N、O和S的杂原子。其示例包括如3-吡啶基或4-吡啶基；哌啶基，诸如哌啶-1-基、3-哌啶基或4-哌啶基、高哌啶基、哌嗪基、高哌嗪基、嘧啶基、吗啉-4-基、咪唑基、咪唑烷基、吡咯基或吡咯烷基。
当Ra为取代的C1-4烷基时，该取代基优选位于末端碳原子上。
当环A为取代的时，它可以为单取代的，也可以为多取代的，优选为单取代的，所述取代基选自如卤素、OH、C1-4烷氧基(诸如OCH3)，C1-4烷基(诸如CH3)、NO2、CF3、NH2、NHC1-4烷基、N(二-C1-4烷基)2和CN。例如，环A可以为下式的基团 其中Rd为H、C1-4烷基或卤素；Re为OH、NO2、NH2、NHC1-4烷基或N(二-C1-4烷基)2。优选Rd位于1位；优选Re位于3位。
当Rc中有一个CH2被CRxRy替代时，优选所述CH2上带有Y。
由R1、R4、R7、R8、R11、R14或Y表示的或分别由NR16R17或NR19R20形成的杂环基包括如式(γ)的基团 其中环D为5、6或7元饱和、不饱和或芳族环；Xb为-N-、-C＝或-CH-；Xc为-N＝、-NRf-、-CRf′＝或-CHRf′-，其中Rf为上述指定的环氮原子上的取代基，Rf′为上述指定的环碳原子上的取代基；C1和C2之间的键为饱和的或不饱和的；C1和C2分别独立地为碳原子，任选被一个或两个选自上述指定的环碳原子上的取代基的取代基取代；且C3和Xb以及C1和Xb之间的连线分别代表形成5、6或7元环D所需的碳原子数。
优选的式(γ)的基团为这样的基团，其中环D形成任选地按如上所述在C-和/或N-上被取代的1，4-哌嗪基环。
式(γ)基团的代表性示例为如3-吡啶基或4-吡啶基；哌啶-1-基；1-N-(C1-4烷基)-或-(ω-羟基-C1-4烷基)-3-哌啶基；吗啉-4-基；咪唑基；吡咯烷基；1-哌嗪基；2-C1-4烷基-或-C3-6环烷基-1-哌嗪基；3-C1-4烷基-或-C3-6环烷基-1-哌嗪基；2，2-、3，5-、2，5-或2，6-二(C1-4烷基)-1-哌嗪基；3，4，5-三-(C1-4烷基)-1-哌嗪基；4-N-(C1-4烷基)-、-(ω-羟基-C1-4烷基)-或-(ω-二甲基氨基-C1-4烷基)-1-哌嗪基；4-N-吡啶-4-基-1-哌嗪基；4-N-苯基-或-C3-6环烷基-1-哌嗪基；4-N-(C1-4烷基)-或-(ω-羟基-C1-4烷基)-3-C1-4烷基-或-3，3-二(C1-4烷基)-1-哌嗪基；4-N-(1-C1-4烷基-C3-6环烷基)-1-哌嗪基；4-N-甲酰基-1-哌嗪基；4-N-嘧啶-2-基-1-哌嗪基；或4-N-C1-4烷基-1-高哌嗪基。
式I化合物可以以游离形式存在，也可以以盐形式存在，如，当R1、R4、R7、R8、R11或R14和/或R2、R3、R5、R6、R9、R10、R11、R13或R15包括可以形成酸加成盐的任选取代的氨基或杂环基时，式I化合物可以采取与诸如有机酸或无机酸(如盐酸、乙酸)的加成盐的形式存在。
可以理解，式I化合物可以以旋光异构体、外消旋物或非对映异构体的形式存在。例如，由R1、R4、R7、R8、R11、R14或Y表示的或分别由NR16R17或NR19R20形成的杂环基的环碳原子上具有取代基时，该碳原子为不对称碳原子，因此可以为D-或L-构型。可以理解，本发明包括所有这些对映体以及它们的混合物。类似的考虑也适用于具有不对称碳原子的原料。
在式I化合物中，优选下列各定义以及它们的任何组合1.Ra为H或CH3；2.Rb为H；3.环A为未取代的或为7位被甲基取代的；4.由NR16R17形成的杂环基优选为如哌嗪-1-基，任选为N取代的，诸如由C1-4烷基、ω-羟基-C1-4烷基、ω-二甲基氨基-C1-4烷基、C5-6环烷基、C1-4烷基-C5-6环烷基、包括1个或2个氮原子的芳族杂环基(诸如吡啶基或嘧啶-2-基)或者上面定义的式β的基团取代，和/或任选为C-取代的，诸如由CH3，如在2位，和/或3位和/或5位和/或6位和/或2，2或3，3位取代，或者由 ，如在2位或3位取代；哌啶-1-基，任选为C取代的，诸如在4位被NH2、-CH2-NH2或哌啶-1-基取代，或者在3位被如OH或NH2取代；或者吡咯烷基，任选为C-取代的，在3位被OH或NH2取代；5.R18为H或CH3；6.Rc为C1-4亚烷基或末端CH2被CRxRy替代的C1-4亚烷基，其中Rx和Ry一起形成-CH2-CH2-；7.X为O；8.式(α)的基团为-O-CH2-CH2-Y；9.R19和R20分别为H、C1-4烷基(如甲基)、在末端碳原子上由OH取代的C1-4烷基(如-CH2-CH2-OH)或环丙基；10.由NR19R20形成的杂环基优选为如哌嗪-1-基，任选由C1-4烷基或式β的基团进行N-取代；哌啶-1-基；1-(C1-4烷基)-哌啶-3-基；3-吡啶基或4-吡啶基；咪唑基；吡咯烷基；或吗啉-4-基；
11.R1、R4、R7、R8、R11或R14各自独立地为1-N-甲基-哌啶-4-基；4-甲基-哌嗪-1-基；4-甲基-1-高哌嗪基；4-(2-羟基乙基)-哌嗪-1-基；或-X′-C1、 2或3-亚烷基-NR19R20，其中X′直接为键、或为O或NH；12.在式(a)基团中，R2和R3分别为H，或者R2和R3之一为H而另一个为F、Cl、CH3、OH、OCH3或CF3；13.在式(a)基团中，R2为OH；14.在式(b)基团中，或者R5和R6分别为H，或者R5和R6之一为H而另一个为F、Cl、CH3、OCH3或CF3；15.在式(b)基团中，R4为式(α)基团或NR16R17；16.在式(d)基团中，或者R9和R10分别为H，或者R9和R10之一为H而另一个为F、Cl、CH3、OCH3或CF3；优选R10为H而R9位于5、6、7或8位，优选位于6位；17.在式(e)基团中，R12和R13分别为H；18.在式(e)基团中，R12和R13之一为H，另一个为F、Cl、CH3、OCH3或CF3；当E为-N＝、G为-CH＝时，优选R13为H，R12位于6或7位；当E为-CH＝、G为-N＝时，优选R13为H，R12位于7位；19.在式(f)基团中，R15为H、CH3或Cl，如位于5位或6位；20.在式(f)基团中，R15为H或CH3，如位于5位，优选为H；21.R为式(d)、(e)或(f)的基团。
本发明还包括制备式I化合物的方法，该方法包括a)使式II化合物 其中Ra、Rb和环A如上所定义，与式III化合物R-CH2-CO-NH2(III)
反应，其中R如上所定义，b)使式IV化合物 其中Ra、Rb和环A如上所定义，与式V的化合物R-CO-CO-OCH3(V)反应，其中R如上所定义；或c)将式I化合物中的取代基R1、R4、R7、R8、R11或R14转化为另一种取代基R1、R4、R7、R8、R11或R14，并且在需要时，将获得的游离形式的式I化合物转化为盐形式，适合时，反之亦然。
步骤a)和(b)可以方便地在强碱如t-BuOK存在下进行。当式III或V化合物包括不应发生反应的OH基团时，此类OH基团可以为保护的形式。可以根据本领域已知的方法，在缩合步骤a)或b)结束时，脱除OH-保护基团。步骤c)可以根据已知的方法进行例如，当R1、R4、R7、R8、R11或R14包括最终OH基团时，该OH基团可以被所需的-NR16R17或-NR19R20替代。
式II可以通过使相应的吲哚化合物在碱性条件下与草酰卤(如草酰氯)反应或者与单烷基草酰氯反应制备，如实施例28中所公开的。
可以根据已知的方法，如通过向式III′化合物或式V′化合物中分别引入所需的取代基R1、R4、R7、R8、R11或R14来制备用作原料的式III化合物或式V化合物，其中式III′和式V′化合物如下所示R′-CH2-CO-NH2(III′)R″-CO-CO-OCH3(V′)其中R′和R″分别为其中均包含了替代R1、R4、R7、R8、R11或R14的离去基团(如卤素)的式(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的基团。
另外，还可以根据已知的方法，通过使式III′的化合物(其中R′为式(a)、(b)或(c)的基团，它们均包括替代R1、R4或R7的OH)与式Xa-X-Rc-Y化合物(其中Xa为离去基团，如Cl，且X、Rc或Y如上所定义)反应来制备其中R为式(a)、(b)或(c)的基团且R1、R4或R7为式(α)的基团的式III化合物。
也可以通过使上述定义的式II化合物与其中R′为式(e’)基团的式III′化合物及式VI化合物一起反应，制备式I化合物，其中R为式(e)的基团，在该式中，E为-N＝，G为-CH＝，R11为-O-Rc-Y或-S-Rc-Y，而上述式(e’)化合物为 其中R12和R13与上述定义相同，Xa为离去基团(如卤素)，上述式VI化合物为R′11H (VI)，其中R′11为-O-Rc-Y或-S-Rc-Y。该反应可以根据已知的方法，如根据在下面的实施例28中公开的方法进行。
式I化合物(其中R为式(d)或(f)的基团，其中R8或R14为-O-Rc-Y或-S-Rc-Y)也可以通过使上述定义的式II化合物与式III′化合物及式VI’化合物一起反应制备；在式III′化合物中，R″为式(d′)或(f′)的基团 或 其中R9、R10、R15和R’15与上述定义相同，Xa为离去基团，如卤素；上述式VI’化合物为A-H (VI)，其中A为-O-Rc-Y或-S-Rc-Y。该反应可以根据已知的方法进行。
本申请没有对原料的生产方法进行具体的描述，这是因为这些化合物或者是已知的化合物，或者可以采用与本领域已知方法或此后所述方法相类似的方法制备。
下列实施例用于举例说明本发明。
RT＝室温THF＝四氢呋喃FCC＝急骤柱层析TBAF＝氟化四丁基铵BINAP＝2，2′-双(二苯基膦基)-1，1′-联萘实施例13-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-二甲氨基-乙氧基)-5-羟基-苯基]-吡咯-2，5-二酮 于室温下，将400mg(0.58mmol)3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-甲磺酰氧基-乙氧基)-5-三苯基甲氧基-苯基]-吡咯-2，5-二酮的5mL 33％二甲胺(于乙醇中)溶液搅拌过夜。用乙酸乙酯稀释反应混合物，产生的混合物用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，分离各层，水层用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机溶液用饱和的盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱过滤残留物(70∶30乙酸乙酯/甲醇)，得到3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-二甲氨基-乙氧基)-5-三苯基甲氧基-苯基]-吡咯-2，5-二酮，将该产物不经进一步纯化立即用于下一步骤。
向370mg(0.58mmol)3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-二甲氨基-乙氧基)-5-三苯基甲氧基-苯基]-吡咯-2，5-二酮的5mL甲醇溶液中加入251mg(1.46mmol)对-甲苯磺酸。于室温下搅拌2小时后，用乙酸乙酯稀释混合物，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。用乙酸乙酯萃取水层三次。以饱和的盐水洗涤合并的有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残留物(7∶3乙酸乙酯/甲醇)，得到标题化合物，为橙色泡沫状物。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.89(s，1H)，11.00(s，1H)，9.45(s，1H)，7.98(s，1H)，7.43(d，J＝8.0Hz，1H)，7.08(t，J＝7.4Hz，1H)，6.78(t，J＝7.4Hz，1H)，6.50(m，2H)，6.34(s，1H)，6.30(s，1H)，3.69(t，J＝5.9Hz，2H)，2.35(t，J＝5.9Hz，2H)，2.06(s，6H)；MS(EI，负电离)m/z 390[M-H]-，(EI，正电离)m/z 392[M+H]+可以根据如下方法制备用作原料的3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-甲磺酰氧基-乙氧基)-5-羟基-苯基]-吡咯-2，5-二酮a)[3-(2-三异丙基甲硅烷氧基-乙氧基)-5-羟基-苯基]-乙酸甲酯于室温下，将9.39g(51.5mmol)(3，5-二羟基-苯基)-乙酸甲酯(根据U.Eder，G.Sauer，G.Haffer，G.Neef，R.Wiechert，US 4,066,674中所述方法制备)、11.38g(61.8mmol)1-溴-2-三异丙基甲硅烷氧基乙烷和14.50g(51.5mmol)碳酸铯的混合物搅拌1小时，再于60℃搅拌1小时。然后用饱和碳酸钠水溶液处理反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。分离各层，用饱和碳酸钠水溶液洗涤有机层三次。合并水层并用乙酸乙酯萃取三次，然后用饱和盐水洗涤合并的有机溶液，干燥，过滤并减压浓缩，通过硅胶柱色谱纯化残留物(用85∶15己烷/乙酸乙酯、然后用70∶30己烷/乙酸乙酯、最后用纯乙酸乙酯洗脱)，得到上述标题化合物，为黄色油状物。
MS(EI，负电离)m/z 381[M-H]-，(EI，正电离)m/z 405[M+Na]+b)2-[3-(2-三异丙基甲硅烷氧基-乙氧基)-5-羟基-苯基]-乙酰胺于室温下，将3.9g(10.2mmol)步骤a)的化合物和40mL浓氨水溶液的混合物搅拌2天并减压去除溶剂。将残留物溶于乙酸乙酯并通过硅胶柱过滤。减压浓缩滤液，将残留物溶于最少量的乙酸乙酯中，加入正己烷使所需产物结晶，过滤并干燥后，得到上述标题化合物。
MS(EI，负电离)m/z 366[M-H]-，(EI，正电离)m/z 390[M+Na]+c)2-[3-(2-三异丙基甲硅烷氧基-乙氧基)-5-三苯基甲氧基-苯基]-乙酰胺于室温下，将1.6g(4.38mm0l)步骤b)的化合物、3.7g(13.27mmol)三苯基氯甲烷、3.7mL(26.69mmol)三乙胺和535mg(4.38mmol)二甲氨基吡啶的50mL二氯甲烷溶液搅拌2小时，加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取混合物三次，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤合并的有机层两次，用饱和的盐水洗涤一次，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残留物(1∶2正己烷/乙酸乙酯，然后为100％乙酸乙酯)，得到标题化合物c)，为白色泡沫状物。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.46-7.20(m，16H)，6.81(s，1H)，6.38(s，1H)，6.28(s，1H)，5.92(s，1H)，3.81(dd，J＝4.5，4.7Hz，2H)，3.68(dd，J＝4.5，4.7Hz，2H)，3.13(s，2H)，1.11-0.91(m，21H)；MS(EI，负电离)m/z 608[M-H]-，(EI，正电离)m/z 632[M+Na]+d)3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-三异丙基甲硅烷氧基-乙氧基)-5-三苯基甲氧基-苯基]-吡咯-2，5-二酮于室温下，向搅拌中的2.5g(4.12mmol)化合物c)和1.3g(6.40mmol)(1.H.-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯的18mL THF溶液中加入20.6mL(20.6mmol)1M的t-BuOK的THF溶液。将反应混合物加热至60℃45分钟，然后冷却至室温。加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯稀释产生的混合物。分离各层，用乙酸乙酯萃取水层三次，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤合并的有机溶液两次，用饱和的盐水洗涤一次，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩.通过硅胶柱色谱纯化残留物(2∶1正己烷/乙酸乙酯，然后为100％乙酸乙酯)，得到标题化合物d)，为橙色泡沫状物。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.90(s，1H)，10.95(s，1H)，7.93(s，1H)，7.43(d，J＝8.0Hz，1H)，7.37-7.20(m，15H)，7.11(dd，J＝7.4，7.6Hz，1H)，6.74(t，J＝7.6Hz，1H)， 6.56(s，1H)，6.33(s，1H)，6.16(d，J＝8.0Hz，1H)，6.07(t，J＝2.1Hz，1H)，3.65(dd，J＝4.1，5.1Hz，2H)，3.39(m，2H)，1.04-0.87(m，21H)；MS(EI，负电离)m/z 761[M-H]-，518[M-Ph3C]-，(EI，正电离)m/z785[M+Na]+e)3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-羟基-乙氧基)-5-三苯基甲氧基-苯基]-吡咯-2，5-二酮向搅拌并冷却至0℃的1.8化合物d)的15mL THF溶液中加入7.1mL(7.1mmol)1M TBAF的THF溶液。45分钟后，加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯稀释产生的混合物，分离各层，用乙酸乙酯萃取水层三次。用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤合并的有机层两次，用饱和的盐水洗涤一次，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩.通过硅胶柱色谱纯化残留物(1∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到标题化合物e)，为橙色泡沫状物。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.89(s，1H)，10.95(s，1H)，7.91(d，J＝2.1Hz，1H)，7.45(d，J＝8.0Hz，1H)，7.40-7.20(m，15H)，7.13(dd，J＝7.4，7.6Hz，1H)，6.77(dd，J＝7.2，7.8Hz，1H)，6.51(s，1H)，6.34(s，1H)，6.20(d，J＝8.0Hz，1H)，6.08(t，J＝2.1Hz，1H)，4.66(s，1H)，3.37(s，4H)；MS(EI，负电离)m/z 605[M-H]-，362[M-Ph3C]-，(EI，正电离)m/z629[M+Na]+，645[M+K]+f)3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-甲磺酰氧基-乙氧基)-5-三苯基甲氧基-苯基]-吡咯-2，5-二酮于室温下，将化合物e)、1.0g(5.74mmol)甲磺酸酐和0.76mL(9.42mmol)吡啶于20mL THF中的混合物搅拌1小时，加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯稀释产生的混合物，分离各层，用乙酸乙酯萃取水层三次，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤合并的有机层两次，用饱和的盐水洗涤一次，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩.通过硅胶柱色谱纯化残留物(1∶2正己烷/乙酸乙酯，随后为100％乙酸乙酯)，得到标题化合物f)，为橙色油状物。
根据实施例1的方法，但是采用适当的原料可以制备式X1化合物 其中R1和R2如表1中所定义。不经过实施例1中所述的保护步骤，可以制备不含有OH取代基的原料化合物。
表1
实施例283-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-二甲氨基-乙氧基)-萘-1-基]吡咯-2，5-二酮 于室温下，将2.10g(4.41mmol)3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-甲磺酰氧基-乙氧基)-萘-1-基]-吡咯-2，5-二酮在20mL 33％二甲胺的乙醇溶液中的悬浮液搅拌过夜，减压去除溶剂。使产物从1∶1乙腈/水中结晶，过滤并用1∶1乙腈/水、乙醚和正己烷洗涤。由此得到标题化合物，为红橙色结晶固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.84(s，1H)，11.13(s，1H)，7.97(s，1H)，7.84(d，J＝8.2Hz，1H)，7.62(d，J＝8.4Hz，1H)，7.47(s，1H)，7.39(t，J＝7.4Hz，1H)，7.31(d，J＝8.2Hz，1H)，7.16(t，J＝7.4Hz，1H)，7.12(s，1H)，6.92(dd，J＝7.4，7.6Hz，1H)，6.46(dd，J＝7.4，7.6Hz，1H)，6.25(d，J＝8.2Hz，1H)，4.16(m，2H)，2.63(dd，J＝5.5，5.7Hz，2H)，2.20(s，6H)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)δ173.3，173.2，156.3，137.1，136.6，135.3，132.2，131.6，128.6，128.1，127.7，127.3，126.4，125.6，124.7，122.8，121.9，121.3，120.7，112.9，109.2，105.9，66.8，58.4，46.4；IR(KBr)3244，1698，1629，1597，1220，1039.
可以根据如下方法制备用作原料的3-(I.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-甲磺酰氧基-乙氧基)-萘-1-基]-吡咯-2，5-二酮a)1-溴-3-(2-三异丙基甲硅烷氧基-乙氧基)-萘将4.38g(19.6mmol)1-溴-萘-3-酚(根据M.S.Newman，V.Sankaran，D.R.Olson，J.Am.Chem.Soc.1976，98，3237-3242中所述方法制备)、5.52g(19.6mmol)1-溴-2-三异丙基甲硅烷氧基-乙烷、13.56g(98.1mmol)碳酸钾和1.45g(3.9mmol)碘化四丁基铵在50mL二甲基甲酰胺中的搅拌混合物加热至60℃ 4小时。然后再加入0.55g(2.0mmol)1-溴-2-三异丙基甲硅烷氧基-乙烷，于60℃继续搅拌1小时，此后经TLC分析表明1-溴-萘-3-酚消耗完毕。使该混合物冷却至室温，加入盐水。用乙酸乙酯萃取形成的溶液，用盐水洗涤有机溶液两次，再用乙酸乙酯萃取合并的水层。合并有机层，干燥，过滤并减压浓缩。油状棕色残留物经硅胶柱层析纯化(97.5∶2.5正己烷/乙醚)，得到上述标题化合物，为棕色固体。
b)氧代-[3-(2-三异丙基甲硅烷氧基-乙氧基)-萘-1-基]-乙酸甲酯向搅拌、冷却(-78℃)的1.59g步骤a)的化合物的15mL THF溶液中加入2.6mL(4.13mmol)1.6M n-BuLi的正己烷溶液。搅拌产生的混合物1小时，滴加886mg(7.50mmmol)草酸二甲酯的5mL THF溶液。于-78℃搅拌反应混合物30分钟后，使其温热至0℃，再于此温度下继续搅拌3小时，然后再加入132mg(1.12mmol)草酸二甲酯的1mL THF溶液。于0℃搅拌1小时，加入饱和的氯化铵水溶液使反应终止，加入乙酸乙酯，分离各层，用饱和的盐水洗涤有机层两次。合并水层，再用乙酸乙酯萃取一次以上，干燥合并的有机溶液，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残留物(95∶5正己烷/乙醚)，得到上述标题化合物，为黄色油状物。
c)3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-三异丙基甲硅烷氧基-乙氧基)-萘-1-基]-吡咯-2，5-二酮于室温下，向1.070g步骤b)的化合物和0.436g(2.50mmol)2-(1.H.-吲哚-3-基)-乙酰胺的10mL THF溶液中加入12.5mL(12.5mmol)1MtBuOK的THF溶液，加入完毕后，将混合物加热至60℃ 4小时，然后冷却至室温，加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取产生的混合物，用饱和的盐水洗涤有机层两次。合并水层并用乙酸乙酯萃取。干燥合并的有机萃取物，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残留物(60∶40正己烷/乙酸乙酯)，得到上述标题化合物，为红橙色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.85(s，1H)，11.15(s，1H)，7.98(s，1H)，7.83(d，J＝8.2Hz，1H)，7.60(d，J＝8.4Hz，1H)，7.47(s，1H)，7.39(dd，J＝7.4，7.6Hz，1H)，7.31(d，J＝8.0Hz，1H)，7.15(m，2H)，6.92(dd，J＝7.4，7.6Hz，1H)，6.44(dd，J＝7.4，7.8Hz，1H)，6.26(d，J＝8.0Hz，1H)，4.18(m，2H)，4.03(dd，J＝4.3，4.5Hz，2H)，1.16-0.92(m，21H)；IR(KBr)3346，1710cm-1；MS(EI，负电离)m/z 553[M-H]-，(EI，正电离)m/z 574[2M+K+H]2+，577[M+Na]+d)3-(I.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-羟基-乙氧基)-萘-1-基]-吡咯-2，5-二酮向搅拌、冷却(0℃)的807mg(1.45mmol)步骤c)的化合物的10mLTHF溶液中加入4.4mL(4.40mmol)1M TBAF的THF溶液。1小时后，加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取产生的混合物，用饱和的盐水洗涤有机层两次，合并水层并用乙酸乙酯萃取。干燥合并的乙酸乙酯溶液，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残留物(乙酸乙酯)，得到上述标题化合物，为红橙色固体。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.85(s，1H)，11.15(s，1H)，7.97(s，1H)，7.84(d，J＝8.2Hz，1H)，7.60(d，J＝8.4Hz，1H)，7.45(d，J＝1.8Hz，1H)，7.38(dd，J＝7.2，7.6Hz，1H)，7.31(d，J＝8.0Hz，1H)，7.15(m，2H)，6.92(dd，J＝7.4，7.6Hz，1H)，6.47(dd，J＝7.4，7.8Hz，1H)，6.29(d，J＝8.2Hz，1H)，4.92(t，J＝5.5Hz，1H)，4.11(m，2H)，3.76(m，2H)；IR(KBr)1705cm-1；MS(EI，负电离)m/z 397[M-H]-，(EI，正电离)m/z 418[2M+K+H]2+，421[M+Na]+e)3-(1-H.-吲哚-3-基)-4-[3-(2-甲磺酰氧基-乙氧基)-萘-1-基]-吡咯-2，5-二酮将1.99g(5.00mmol)步骤d)的化合物、2.18g(12.50mmol)甲磺酸酐和1.6mL(19.80mmol)吡啶在25mL THF中的混合物加热至60℃ 1小时。冷却反应混合物至室温并过滤。减压浓缩滤液。然后使产物从乙醚中结晶，过滤并用乙醚洗涤一次，用水洗涤两次，再用乙醚洗涤一次。该方法得到上述标题化合物，为红橙色结晶。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.83(s，1H)，11.14(s，1H)，7.96(d，J＝2.5Hz，1H)，7.84(d，J＝8.2Hz，1H)，7.61(d，J＝8.2Hz，1H)，7.50(d，J＝2.1Hz，1H)，7.40(dd，J＝7.4，7.6Hz，1H)，7.30(d，J＝8.2Hz，1H)，7.16(m，2H)，6.92(dd，J＝7.4，7.8Hz，1H)，6.46(t，J＝7.6Hz，1H)，6.28(d，J＝8.2Hz，1H)，4.57(dd，J＝3.9，4.1Hz，2H)，4.39(m，2H)，3.21(s，3H)；MS(EI，负电离)m/z 475[M-H]-，(EI，正电离)m/z 499[M+Na]+根据实施例28的方法，但是采用适当的原料，可以制备其中R3如表2中所定义的式X2化合物
表2
实施例48和52的化合物为外消旋物，采用相应的顺式或反式化合物原料时，也可以以纯顺式或反式对映异构体形式制备。这同样适用于实施例50的顺式异构体其也可以以外消旋物形式或以纯反式形式制备。
实施例533-[3-(2-羟基-乙氧基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-4-(1.H.-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮
于室温下，用TFA/H2O(5ml，95/5)将3-[3-(2-叔丁氧基-乙氧基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-4-(1.H.-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮处理15分钟。将反应混合物倾至冰冷饱和的碳酸氢钠水溶液中，用乙酸乙酯萃取形成的悬浮液。经硅胶纯化(用环己烷/乙酸乙酯(2/1)作流动相)，得到为橙色粉末的标题化合物纯品。MH+403(ES+)1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δ11.84(bs，1H)，10.96(s，1H)，7.95(d，1H，J＝1.47Hz)，7.37(d，1H，J＝8.32Hz)，7.03(t，1H，J＝7.34Hz)，6.72(d，1H，J＝2.44Hz)，6.67(t，1H，J＝7.33Hz)，6，62(d，1H，J＝2.69Hz)，6.45(d，1H，J＝8.07Hz)，4.77(t，1H，J＝5.38Hz)，3.87(m，2H)，3.62(q，2H，J＝5.38Hz)，2.67(m，2H)，2.34(m，1H)，2.06(m，1H)，1.59(m，1H)，1.49(m，1H)，1.36(m，2H)根据下面的方法可以制备用作原料的3-[3-(2-叔丁氧基-乙氧基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-4-(l.H.-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮a)8-溴-6-乙酰基四氢化萘于室温、机械搅拌下，向AlCl3(9.9g，75mmol)中滴加6-乙酰基四氢化萘(5.25g，30mmol)。于70℃下20分钟后，将反应物冷却至室温，分小份用Br2(5.76g[＝1.86ml]，36mmol)处理30分钟。于85℃再搅拌混合物60分钟。冷却至室温后，加入冰-水(450ml)，用二氯甲烷萃取化合物，经硅胶纯化，用环己烷/乙酸乙酯2/1至1/1混合物洗脱，得到产物，为淡黄色固体。
b)乙酸8-溴-四氢化萘-6-基酯将步骤a)的化合物(7.28g，28.75mmol)溶于CH2Cl2(60ml)中。于室温下，加入2当量的间氯苯甲酸(11.7g，FLUKA25800，70％)，加入硫酸钠(5g)后，用三氟甲磺酸(250ml，2.88mmol)处理反应混合物。将反应物保持于室温下16小时。薄层监测反应后，向反应物中加入间氯苯甲酸(2.25g，11mmol)、硫酸钠(2g)和三氟甲磺酸(50μl，0.57mmol)(6小时内2次)。过滤有机层，用硫代亚硫酸钠水溶液洗涤三次。经硅胶纯化化合物，用环-己烷/乙酸乙酯2/1至1/1混合物洗脱，得到为无色油状物的产物。
c)5，6，7，8-四氢-4-溴-2-萘酚于室温下，将步骤b)的化合物(6.1g，22.66mmol)加至MeOH(200ml)中，将1N甲醇钠的甲醇(22.7ml)溶液搅拌15分钟，向混合物中加入amberlite IR-120(H+-形式)至反应混合物呈中性。滤除离子交换剂，蒸发溶剂，分离粗品产物，不经进一步纯化，为淡黄色固体。
d)2-(2-叔丁氧基-乙氧基)-4-溴-5，6，7，8-四氢-萘于室温下，将步骤c)的化合物(2.8g，12.33mmol)加至THF(100ml)中，加入三苯膦(16.82g，64.13mmol)，10分钟后加入偶氮二甲酸二异丙酯(11.66ml，59.2mmol)，将混合物搅拌14小时。去除溶剂，硅胶上纯化残留物，用环己烷(100％)至环己烷/二氯甲烷(1/1)作为流动相，得到产物，为淡黄色固体。
e)3-(2-叔丁氧基-乙氧基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基-氧代-乙酸甲酯于室温下，将步骤d)的化合物(2.61g，7.96mmol)溶于无水THF(70ml)中，冷却至-70℃。于惰性环境(氩气环境)下，向反应混合物中滴加丁基锂(5.5ml，8.76mmol，1.6M于己烷中的溶液)，再向反应混合物中加入草酸二甲酯(1.9g，15.92mmol)的5ml无水THF溶液，使反应物温热至室温。将反应混合物倾至Titrisol缓冲液(pH7)中并用乙酸乙酯萃取。干燥有机层，经硅胶纯化，用环己烷/二氯甲烷1/2作为流动相，得到为白色固体的产物。
f)3-[3-(2-叔丁氧基-乙氧基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-4-(1.H.-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮将步骤e)的化合物(1g，2.99mmol)和吲哚-3-乙酰胺(270mg，1.49mmol)加至THF(10ml)中，加热至回流。于氩气下滴加t-BuOK(6ml，6mmol，1M于THF中的溶液)，于回流下保持反应物1小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物，用饱和的碳酸氢钠水溶液萃取。干燥有机层，去除溶剂后，分离得到为橙色固体的化合物，该化合物不需经进一步纯化。
实施例543-[3-(2-二甲氨基-乙氧基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-4-(1.H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮 将实施例53的化合物(380mg，0.94mmol)悬浮于含有225μl吡啶(2.8mmol)的二氯甲烷(20ml)中。加入甲磺酸酐(393mg，2.26mmol)后，于室温下，保持反应混合物14小时。用1N HCl水溶液萃取反应物，经硫酸钠干燥有机层，减压去除溶剂。将残留物溶于THF中，然后用二甲胺水溶液(2.5ml)处理。96小时后，去除溶剂，经硅胶层析(甲醇/乙酸乙酯1/1作为流动相)，分离得到为橙色粉末的标题化合物纯品。MH+430(ES+)1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.87(bs，1H)，10.99(s，1H)，7.98(t，1H，J＝0.40Hz)，7.39(d，1H，J＝8.07Hz)，7.05(t，1H，J＝7.34Hz)，6.75(d，1H，J＝2.44Hz)，6.68(t，1H，J＝7.33Hz)，6，63(d，1H，J＝2.69Hz)，6.44(d，1H，J＝8.07Hz)，3.98(m，2H)，2.70(m，2H)，2.63(m，2H)，2.40(m，1H)，2.23(s，6H)，2.12(m，1H)，1.63(m，1H)，1.53(m，1H)，1.41(m，2H)
实施例55A3-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5，6，7，8-四氢萘-1-基]-吡咯-2，5-二酮采用与实施例53(步骤f)类似的方法，通过使2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5，6，7，8四氢-萘-1-基]-乙酰胺与(1.H.-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯缩合，制备标题化合物。MH+441(ES+)实施例55B3-(1-甲基-1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-吡咯-2，5-二酮采用与实施例53(步骤f)类似的方法，通过使2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-乙酰胺与(1-甲基-1.H.-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯缩合，制备标题化合物。MH+455(ES)+ 实施例55A 实施例55B根据下面的方法可以制备用作原料的2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-乙酰胺a)5-溴-7-甲氧基-1，2，3，4-四氢-萘将5，6，7，8-四氢-4-溴-2-萘酚(7g，30.8mmol；实施例29的步骤c)溶于无水丙酮(100ml)，并用K2CO3(15g，0.11mol)和甲基碘(7.25ml，0.13mmol)处理。于室温下，将反应混合物保持过夜。过滤并去除溶剂后，残留物经硅胶纯化(二氯甲烷/环己烷1/1)，得到所述化合物，为白色固体。
b)(3-甲氧基-5，6，7，8-四氢-萘-1-基)-乙酸乙酯向步骤a)的化合物(2.75g，11.4mmol)在DMF(110ml)、ZnBr2(3.4g，14.8mmol)中在溶液中，加入α-(三丁基甲锡烷基)乙酸酯(5.5g，14.8mmol)和二氯双(三邻甲苯基膦)-钯。于80℃、氩气环境下将反应物保持过夜。减压去除DMF，将粗品残留物溶于乙酸乙酯中，用NaHCO3水溶液(6％)萃取。干燥有机层，浓缩并经硅胶纯化(二氯甲烷/环己烷1/1)，得到化合物纯品。
c)(3-羟基-5，6，7，8-四氢-萘-1-基)-乙酸乙酯将DL-甲硫氨酸(1.11g，7.5mmol)和步骤b)的化合物溶于甲磺酸(9ml)中，于室温下保持过夜。将反应物倾至冰冷的饱和氯化钠溶液中，用二氯甲烷萃取3次，干燥有机层，浓缩并经硅胶纯化(二氯甲烷/甲醇95/5)，得到化合物纯品。
d)(3-三氟甲磺酰氧基-5，6，7，8-四氢-萘-1-基)-乙酸乙酯于0℃，向步骤c)的化合物(940mg，4mmol)的吡啶(2ml)溶液中加入三氟甲磺酸酐(720μl，4.4mmol)。将反应混合物保持于室温下过夜，然后将反应物倾至冰冷的水中，用乙醚萃取3次。干燥有机层，浓缩并经硅胶纯化(用二氯甲烷洗脱)，得到所述化合物。
e)[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-乙酸乙酯 于氩气环境下，向步骤d)的化合物(0.5g，1.36mmol)的无水THF(10ml)溶液中加入K3PO4(405mg，1.90mmol)、N-甲基哌嗪(180μl，163mmol)、三(二亚苄基丙酮丙酮)-二钯(O)(60mg，0.07mmol)和2-(二-叔丁基膦基)联苯(21mg，0.07mmol)。将反应物保持于80℃、氩气环境下24小时。过滤后，减压去除DMF，粗品残留物经硅胶纯化(二氯甲烷/甲醇95/5)，得到化合物纯品。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.68(d，1H，J＝2.44Hz)，6.59(d，1H，J＝2.20Hz)，4.15(q，2H，J＝7.34Hz)，3.55(s，2H)，3.17(t，4H，J＝5.13Hz)，2.75(t，2H，J＝5.87Hz)，2.60(t，2H，J＝6.11Hz)，2.57(t，4H，J＝4.90Hz)，2.35(s，3H)，1.77(m，4H)，1.25(t，3H，J＝7.10Hz)f)2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5，6，7，8-四氢-萘-1-基]-乙酰胺将步骤e)的化合物(394mg，1.2mmol)的甲醇/NH3(4mol)溶液转移至高压釜中并于120℃保持48小时。冷却后，浓缩反应物，粗品残留物经硅胶纯化(二氯甲烷/甲醇90/105)，得到标题化合物纯品。
实施例563-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮 将2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹唑啉-4-基]-乙酰胺(213mg，0.75mmol)和3-吲哚乙醛酸甲酯(167mg，1.1当量)溶于THF(15mL)中。于0℃，向形成的悬浮液中滴加t-BuOK 1.0M的THF溶液(2.25mL，3.0当量)。于室温下搅拌混合物过夜。加入第二部分乙醛酸酯(30mg，0.2当量)和t-BuOK(0.5mL)，于室温下搅拌化合物24小时。加入AcOEt，用1.0M NaHCO3水溶液和盐水洗涤有机相。经Na2SO4干燥有机相并蒸发。残留物经FCC(Et2O/MeOH/NH4OH水溶液，90∶10∶1)纯化，得到标题化合物，为橙红色粉末。ESI-MS437[M-H]+；1H NMR(DMSO，400MHz)δ2.13(s，3H)，2.16(m，4H)，3.69(m，4H)，6.35(d，J＝8.0Hz，1H)，6.64(dd，J＝7.8，7.4Hz，1H)，7.02(dd，J＝7.6，7.4Hz，1H)，7.10(dd，J＝7.8，7.2Hz，1H)，7.38(d，J＝8.2Hz，1H)，7.53(d，J＝8.4Hz，1H)，7.63-7.73(m，2H)，8.13(s，1H)，11.29(br s，1H)，12.01(br s，1H).
将产生的化合物溶于乙醇中，加入1.2当量的乙酸。减压去除溶剂，得到乙酸盐。
可以根据如下方法制备用作原料的2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹唑啉-4-基]-乙酰胺 a)向1H，3H-喹唑啉-2，4-二酮(10.0g，61.7mmol)在POCl3(37.0mL)中的悬浮液中滴加N，N-二甲基苯胺(7.8mL，1.0当量)。将混合物加热至110℃，于回流下保持35小时。将溶液冷却至室温，倾至冰水混合物中。滤除沉淀，用H2O洗涤。将固体再溶于AcOEt中，用H2O和盐水洗涤。经Na2SO4干燥有机相并蒸发，得到粗品2，4-二氯喹唑啉，使其从甲苯/戊烷中结晶。EI-MS198[M-H]+，163[M-Cl]+；b)于0℃，将溶于THF(25mL)中的乙酰乙酸乙酯(5.08mL，2.0当量)滴加至NaH(60％，1.04g，1.3当量)的THF(25mL)悬浮液中，于0℃搅拌形成的溶液30分钟，蒸发溶剂。将残留物再溶于甲苯(125mL)中，加入2，4-二氯-喹唑啉(4.0g，20.0mmol)。于回流下将混合物搅拌30分钟，蒸发甲苯。将油状残留物再溶于NH4OH 25％水溶液(80mL)中，于室温下搅拌过夜。蒸发所有挥发性物质，将残留物溶于AcOEt(80mL)中。于回流下加热形成的悬浮液15分钟，冷却至0℃，过滤后得到为白色固体的2-(2-氯-喹唑啉-4-基)-乙酰胺。EI-MS221[M]+178；IR(KBr)νmax3302，3138，1681，1542，1388，1287，948，771；1H NMR(DMSO，400MHz)δ 4.21(s，2H)，7.24(br s，1H)，7.75-7.84(m，2H)，7.97(d，J＝8.4 Hz，1H)，8.08(dd，J＝8.4，7.5Hz，1H)，8.34(d，J＝8.4Hz，1H)c)将2-(2-氯-喹唑啉-4-基)-乙酰胺(221mg，1.0mmol)溶于1-甲基-2-吡咯烷酮(2.0mL)中，加入N-甲基哌嗪(555μl，5.0当量)。于50℃加热形成的混合物45分钟。加入AcOEt，过滤悬浮液后得到为白色固体的2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹唑啉-4-基]-乙酰胺。ESI-MS284[M-H]+，241；1H NMR(DMSO，400MHz)δ2.24(s，3H)，2.40(m，4H)，3.86(m，4H)，3.98(s，2H)，7.12(br s，1H)，7.24(dd，J＝8.2，7.5Hz，1H)，7.49(d，J＝8.4Hz，1H)，7.63-7.72(m，2H)，7.95(d，J＝8.2Hz，1H)；
根据实施例56的方法，采用适当的原料，可以制备其中R1、R5、R6和R7如表3所定义的下面式X3的化合物。适当时，也可以根据实施例56中公开的化合物的转化方法，将这些化合物转化为乙酸盐。
表3
采用相应的顺式或反式化合物原料，也可以以纯顺式或反式对映体形式制备为外消旋物的实施例77的化合物。这同样适用于实施例75和89-92的顺式异构体以及实施例81的反式异构体使用相应原料，它们也可以以外消旋物形式或以纯反式或顺式形式制备。实施例116和117的化合物也可以以外消旋物形式或以相应的S或R异构体形式制备。
根据实施例56的方法，采用适当取代的(1.H.-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯作为原料，可以制备其中R、R1和R2如下面表4所定义的式X4的化合物。
表4
实施例149A和149B根据实施例56的方法，采用适当取代的(1.H.-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯，可以制备这些化合物。
实施例149A 实施例149BM+486 M+500可以根据如下方法制备用作原料的(7-氟-1.H.-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯将7-氟吲哚(0.147g，1.09mmol)溶于无水THF(5ml)中，冷却形成的溶液至0℃。加入2M草酰氯的二氯甲烷溶液(0.65mL，1.31mmol)，于0℃再搅拌该混合物10分钟，于室温下搅拌4小时。冷却混合物至0℃，加入甲醇(10ml)，再于室温下搅拌该混合物18小时。减压蒸发混合物至干，用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)混和液洗涤固体残留物并在高空下干燥，得到(7-氟-1.H.-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯。该产物可不经进一步纯化使用。
ESI-MS220[M-H]+根据类似的方法，由相应的吲哚化合物制备在实施例123-148制备中用作原料的相应取代的(1.H.-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯。
根据实施例56的方法，采用适当取代的(1.H.-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯作为原料，可以制备其中R、R1和R2如下面表5所定义的式X5的化合物。
表5
实施例1623-[2-(2-二甲氨基-乙氧基)-喹啉-4-基]-4-(1.H.-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮 于0℃，将2-(2-氯-喹啉-4-基)-乙酰胺(110mg，0.5mmol)、3-吲哚乙醛酸甲酯(102mg，0.5mmol)和N，N-二甲氨基乙醇(508μL，10当量)溶于无水THF(5.0mL)中，加入1.0M t-BuOK(2.5mL，5当量)，于80℃搅拌反应物过夜，使混合物冷却至室温，用AcOEt(20mL)稀释，用H2O(10mL)和盐水(5mL)洗涤。经Na2SO4干燥有机相并蒸发。残留物经FCC纯化(AcOEt/EtOH/28％ NH4OH 90∶9∶1)，得到红色粉末，使其从CH2Cl2/Et2O中结晶，得到标题化合物纯品。1H NMR(DMSO，400MHz)δ2.20(s，6H)，2.67(m，2H)，4.51(m，2H)，6.38(d，J＝8.4Hz，1H)，6.53(dd，J＝8.4，7.5Hz，1H)，6.95(m，2H)，7.21(dd，J＝8.4，7.5Hz，1H)，7.34(d，J＝8.4Hz，1H)，7.57(dd，J＝8.4，7.5Hz，1H)，7.64(d，J＝8.4Hz，1H)，7.78(d，J＝8.4Hz，1H)，8.00(s，1H)，11.20(br s，1H)，11.92(br s，1H)；ES-MS427[M+H]+可以根据如下方法制备用作原料的2-(2-氯-喹啉-4-基)-乙酰胺 a)可以根据EP A1-0 364 327和Indian J.Chem.1994，33B，747-751中公开的方法制备2-(2-氯-喹啉-4-基)-乙酸甲酯。
b)将2-(2-氯-喹啉-4-基)-乙酸甲酯(100mg，0.42mmol)悬浮于28％NH4OH(2.0mL)中。于室温下搅拌混合物过夜。蒸发溶剂，得到为固体的2-(2-氯-喹啉-4-基)-乙酰胺。1H NMR(DMSO，300MHz)d 3.88(s，2H)，7.16(br s，1H)，7.30(s，1H)，7.65(dd，J＝8.4，7.5Hz，1H)，7.70(br s，1H)，7.80(dd，J＝8.4，7.5Hz，1H)，7.93(d，J＝8.4Hz，1H)，8.12(d，J＝8.4Hz，1H)实施例1633-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮 于0℃，将2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹啉-4-基]-乙酰胺(200mg，0.70mmol)和3-吲哚乙醛酸甲酯(143mg，0.70mmol)溶于DMF(7.0mL)中，加入1.0M t-BuOK(3.52mL，5当量)，于80℃搅拌反应物过夜，使混合物冷却至室温，用CH2Cl2(40mL)稀释，用水(2×10mL)和盐水(5mL)洗涤。经Na2SO4干燥有机相并蒸发。残留物经FCC纯化((AcOEt/H2O/AcOH 7∶1∶1)，得到乙酸盐。将该盐再溶于AcOEt(20mL)中，用饱和NaHCO3水溶液(2×10mL)洗涤。有机相经Na2SO4干燥并蒸发，得到为红色粉末的标题化合物。1H NMR(DMSO，400MHz)δ2.22(s，3H)，2.37(m，4H)，3.62(m，4H)，6.63(dd，J＝8.4，7.5Hz，1H)，6.74(d，J＝8.4Hz，1H)，6.95-7.05(m，2H)，7.10(s，1H)，7.34(d，J＝8.4Hz，1H)，7.41-7.50(m，2H)，7.60(d，J＝8.4Hz，1H)，7.85(s，1H)，10.77(br s，1H)，11.48(br s，1H)；ES-MS438[M+H]+可以根据如下方法制备用作原料的2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹啉-4-基]-乙酰胺
将2-(2-氯-喹啉-4-基)-乙酰胺(500mg，2.27mmol)溶于1-甲基-2吡咯烷酮(3.0mL)中，加入N-甲基哌嗪(1.3mL，5当量)，于80℃搅拌反应物48小时。加入AcOEt(20mL)，沉淀经FCC纯化(AcOEt/EtOH/28％NH4OH80∶18∶1)，得到为固体的2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹啉-4-基]-乙酰胺。1H NMR(DMSO，400MHz)δ2.25(s，3H)，2.47(m，4H)，3.67(m，4H)，3.77(s，2H)，7.00(brs，1H)，7.16(s，1H)，7.22(dd，J＝8.4，7.5Hz，1H)，7.50(dd，J＝8.4，7.5Hz，1H)，7.56(m，2H)，7.85(d，J＝8.4Hz，1H)；ES-MS285[M+H]+根据实施例162或163的方法，采用适当的原料，可以制备其中R8和R9如下面表6中定义的式X6化合物。
表6
实施例1813-(1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-异喹啉-1-基]-吡咯-2，5-二酮
将3-(3-氯-异喹啉-1-基)-4-(1.H.-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(110mg，0.30mmol)悬浮于N-甲基哌嗪(2.5ml)中，于130℃保持24小时。于60℃、高真空下去除过量的N-甲基哌嗪，将残留物溶于乙酸乙酯中，用0.5N H2O水溶液萃取。用1N NaOH将深橙色水相的pH调至9并用乙酸乙酯萃取，分离有机相，经Na2SO4干燥，浓缩并经硅胶纯化，用二氯甲烷/甲醇/乙酸50％(9/1/0.25)作为流动相。收集含有标题化合物的级分，用NaHCO3水溶液(6％)萃取。分离有机相，经Na2SO4干燥，浓缩后得到为橙色粉末的标题化合物纯品。
MH+438(ES+)1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.88(s，1H)，11.14(broad，1H)，8.04(s，1H)，7.68(d，1H，J＝8.56Hz)，7.65(d，1H，J＝9.05Hz)，7.45(t，1H，J＝8.07Hz)，7.31(d，1H，J＝8.07Hz)，7.08(s，1H，J＝8.33Hz)，7.08(t，1H，J＝8.31Hz)，6,94(t，1H，J＝8.07Hz)，6.50(t，1H，J＝7.34Hz)，6.16(d，1H，J＝8.07Hz)，3.53(m，4H)，2.30(m，4H)，2.14(s，3H)可以根据如下方法制备用作原料的3-(3-氯-异喹啉-1-基)-4-(1.H.-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮
a)根据T.Kametani等在Chem.Pharm.Bull.，15(5)，704(1967)中公开的方法制备(3-氯-异喹啉-1-基)乙酸乙酯b)将(3-氯-异喹啉-1-基)-乙酸乙酯(2.5g，10mmol)溶于4N NH3/MeOH(50ml)中，然后将形成的溶液转移至高压釜中，于120℃保持48小时，冷却至室温后，去除溶剂，形成的粗品经硅胶纯化，用二氯甲烷(100％)→二氯甲烷/甲醇(95/5)作为洗脱剂，得到为淡黄色固体的2-(3-氯-异喹啉-1-基)-乙酰胺。
c)将2-(3-氯-异喹啉-1-基)-乙酰胺(440mg，2.5mmol)和3-吲哚乙醛酸甲酯(1.0g，5mmol)加至THF(10ml)中，加热至回流。于氩气环境下滴加t-BuOK(10ml，10mmol，1M于THF中的溶液)，于回流下保持反应物1小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物，用饱和的碳酸氢钠水溶液萃取。经硫酸钠干燥有机层，用乙醚处理并过滤后，得到为橙色固体的化合物。MH+375(ES+)1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.04(s，1H)，11.30(s，1H)，8.14(s，1H)，8.11(s，1H)，7.99(d，1H，J＝8.32Hz)，7.95(d，1H，J＝8.56Hz)，7.75(t，1H，J＝8.33Hz)，7.50(t，1H，J＝8.33Hz)，7.32(d，1H，J＝8.07Hz)，6，92(t，1H，J＝8.07Hz)，6.48(t，1H，J＝7.33Hz)，5.96(d，1H，J＝8.07Hz)实施例1823-(1-甲基-1.H.-吲哚-3-基)-4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-异喹啉-1-基]-吡咯-2，5-二酮 根据上述实施例181c)所述方法，在回流下，使2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-异喹啉-1-基]-乙酰胺(710mg，2.5mmol)和(1-甲基吲哚基)-3-乙醛酸甲酯(1.1g，5mmol)在THF中、于t-BuOK存在下发生反应。按实施例181c)公开方法分离标题化合物。MH+452(ES+)
可以根据如下方法制备用作原料的2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-异喹啉-1-基]-乙酰胺a)于氩气环境下，将(3-氯-异喹啉-1-基)-乙酸乙酯(13g，50mmol)溶于二氧杂环己烷(150ml)中，再于氩气环境下向该溶液中加入BINAP(1.3g，2mmol)、乙酸钯(II)(1.3g，4mmol)、N-甲基哌嗪(11ml，0.1mol)和t-BuONa(5.4g，55mmol)，将反应物保持于回流下30分钟。冷却后，用二氯甲烷(300ml)稀释，用0.5N HCl水溶液(300ml)萃取。过滤后，用固体碳酸氢钠将水相的pH调至8.5，用二氯甲烷萃取(3x)。干燥(Na2SO4)合并的有机相并浓缩。粗品经硅胶纯化，用二氯甲烷(100％)→二氯甲烷/甲醇(90/10)作为洗脱剂，得到为淡黄色固体的产物。
b)于氩气环境下，向[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-异喹啉-1-基]-乙酸乙酯(1.7g，5.4mmol)的DMF溶液中加入甲酰胺(0.72ml，18.1mmol)，加热至100℃后，用45分钟、分10份(每份0.1ml)加入5.4N MeONa的甲醇溶液(1ml)。于100℃、60分钟后，使反应物冷却至室温，用异丙醇(100ml)稀释，减压去除溶剂，将残留物溶于乙酸乙酯中，用碳酸氢钠水溶液(5％)萃取。干燥有机相(Na2SO4)并浓缩。经硅胶纯化粗品，用二氯甲烷/甲醇(90/10→80/20)作为洗脱剂，得到为白色固体的产物。
根据实施例181的方法，采用适当的原料，制备其中Ra、Re、R8和R9如下面表7中定义的式X7化合物。
表7
如下面的体外和体内测定中所示，游离形式或药学上可接受的盐形式的式I化合物显示出有价值的药理活性，如可以抑制蛋白激酶C(PKC)(诸如PKC同种型，像α、β、δ、ε、η或θ的活性)、抑制T-细胞活化和增殖(如通过抑制T-细胞或细胞因子如IL-2产生、通过抑制T-细胞对细胞因子如IL-2的增殖性应答)，所以这些化合物可以用于治疗中。
A.体外1.蛋白激酶C测定根据公开的方法(D.Geiges等，Biochem.Pharmacol.1997；53865-875)，测定式I化合物对各种PKC同种型的活性。该测定在96空聚丙烯微量滴定板(Costar 3794)上进行，所述滴定板预先用Sigmacote(SigmaSL-2)进行硅化。反应混合物(50μl)中含有10μl相关的PKC同工酶、25μl受试化合物和15μl混和液，所述混和液在20mM Tris-缓冲液(pH7.4，并含有0.1％BSA)中含有200μg/ml硫酸鱼精蛋白、10mM Mg(NO3)2、10μM ATP(Boehringer 519987)和3750 Bq的33P-ATP(Hartmann AnalyticSFC301，110TBq/mmol)。在32℃下、于微量滴定板振荡培养箱(BiolaboScientific Instruments)中孵育15分钟。加入10μl 0.5M Na2EDTA(pH7.4)终止反应。在轻微压力下将50μl混和液移液至预湿的磷酸纤维素滤纸上(Whatmann 3698-915)。用100μl双蒸水洗去未掺入的ATP。用0.5％H3PO4洗涤纸两次，共15分钟，接着用EtOH洗涤5分钟。此后，干燥滤纸并置于omnifilter(Packard 6005219)上，以10μl/孔Microscint-O(Packard6013611)覆盖，然后采用Topcount放射活性计数器(Packard)进行计数。根据前面描述的方法，通过与1-1000μM浓度范围内的抑制剂系列稀释液一起孵育常规进行IC50测定。由S形曲线拟合图计算IC50值。
2.蛋白激酶Cθ测定根据上述描述的测定条件，采用人重组PKCθ进行。在该测定中，式I化合物可以抑制PKCθ，其IC50≤1μM。实施例56的化合物在该测定中可以抑制PKCθ，其IC50＜10n.M。
3.蛋白激酶Cα测定由Oxford Biomedical Research获得人重组PKCα，在上述A.1部分描述的测定条件下进行测定实施例100的化合物在该测定中可以抑制PKCα，其IC50为39±15nM。
4.蛋白激酶Cβ1测定由Oxford Biomedical Research获得人重组PKC β1，在上述A.1部分描述的测定条件下进行测定实施例163的化合物在该测定中可以抑制PKCβ1，其IC50为8±2nM。
5.蛋白激酶Cδ测定由Oxford Biomedical Research获得人重组PKCδ，在上述A.1部分描述的测定条件下进行测定实施例181的化合物在该测定中可以抑制PKCδ，其IC50为18±8nM。
6.蛋白激酶Cε测定由Oxford Biomedical Research获得人重组PKCε，在上述A.1部分描述的测定条件下进行测定实施例139的化合物在该测定中可以抑制PKCε，其IC50为20±7nM。
7.蛋白激酶Cη测定由PanVera获得人重组PKCη，在上述A.1部分描述的测定条件下进行测定实施例85的化合物在该测定中可以抑制PKCη，其IC50为50±9nM。
8.CD28共刺激测定该测定采用用人白细胞介素-2启动子/报道基因构建物转染的Jurkat细胞进行，所述构建物根据Baumann G等在Transplant.Proc.1992；2443-8中描述的方法构建，其中β-半乳糖苷酶报道基因被萤光素酶基因(deWet J.等，Mol.Cell Biol.1987，7(2)，725-737)取代。根据下述方法，采用固相偶联的抗体或乙酸肉豆蔻佛波醇(PMA)和Ca++离子载体离子霉素刺激细胞。对于抗体介导的刺激反应，首先于室温下，每孔用3μg/ml山羊抗小鼠IgG Fc抗体(Jackson)(在55μl磷酸盐缓冲液(PBS)中)将Microlite TM1微量滴定板(Dynatech)包被3小时。除去抗体后，于室温下，与2％牛血清白蛋白(BSA)一起在PBS(300μl/孔)中孵育2小时封闭滴定板。每孔用300μlPBS洗涤三次，加入在50μl 2％BSA/PBS中的10ng/ml抗T细胞受体抗体(WT31，Becton&Dickinson)和300ng/ml抗-CD28抗体(15E8)作为刺激抗体，于4℃孵育过夜。最后，每孔用300μl PBS洗涤三次。在不同的滴定板上以复份制备受试化合物的7个于测定培养液中的三倍系列稀释液，所述培养液为RPMI 1640/10％胎牛血清(FCS)，含有50μM 2-巯基乙醇、100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素，将受试化合物与转染的Jurkat细胞(克隆K22 290-H23)混合并于37℃、5％CO2下孵育30分钟。然后将含有1×105个细胞的100μl混合物转移至抗体包被的测试滴定板上。对于平行试验，则将100μ1混合物和40ng/ml PMA以及2μM离子霉素一起孵育。于37℃、5％CO2下孵育5.5小时后，经生物萤光法测定萤光素酶的水平。于500g将滴定板离心10分钟，轻弹去除上清液，加入含有25mMTris-磷酸盐(pH7.8)、2mM DTT、2mM 1，2-二氨基环己烷-N，N，N′，N-四乙酸、10％(v/v)甘油和1％(v/v)Triton X-100的裂解缓冲液(20μl/孔)。于室温、持继震摇下将滴定板孵育10分钟。在每孔中自动加入50μl萤光素酶反应缓冲液后，用生物萤光读板仪(Labsystem，Helsinlki，Finland)测定萤光素酶活性，所述反应缓冲液含有20mM Tricine、1.07mM(MgCO3)4Mg(OH)2x5H2O、2.67mM MgSO4、0.1mM EDTA、33.3mMDTT、270μM辅酶A、470μM萤光素(Chemie Brunschwig AG)、530μMATP(pH7.8)。滞后时间为0.5秒，总测定时间为1或2秒。低对照值为从抗T-细胞受体或PMA-刺激的细胞获得的光单位，高对照值为不加入受试样品时由抗-T细胞受体/抗CD28-或PMA/离子霉素刺激的细胞获得的光单位。由所有值中减去低对照值。受试化合物产生的抑制作用以高对照值的抑制百分比计算。由剂量曲线获得产生50％抑制时受试化合物的浓度(IC50)。在该测定中，式I化合物可以抑制抗-T细胞受体/抗-CD28和PMA/离子霉素刺激的Jurkat细胞，其IC50≤1μM。在该测定中，实施例56的化合物的IC50为42±12nM。
9.异源混合的淋巴细胞反应(MLR)根据标准方法进行双向MLR(J.Immunol. Methods，1973，2，279和Meo T.等，Immunological Methods，New York，Academic Press，1979，227-39)。简言之，由CBA和BALB/c小鼠获得的脾细胞(在平底组织培养微量滴定板中，每孔每株1.6×105个细胞，总共3.2×105个细胞)在RPMI培养液中孵育，培养液中含有10％FCS、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素(Gibco BRL，Basel，Switzerland)、50μM 2-巯基乙醇(Fluka，Buchs，Switzerland)和系列稀释的化合物。每种受试化合物平行两次进行7个三倍稀释步骤。孵育4天后，加入1μCi3H-胸苷。再孵育5小时后，收获细胞，采用标准方法测定掺入的3H-胸苷。MLR的背景值(低对照值)为单独的BALB/c细胞的增殖值。由所有值中减去低对照值。不含样品的高对照值作为100％增殖。计算样品的抑制百分比，测定50％抑制所需的浓度(IC50值)。在该测定中，实施例56的化合物的IC50为168±20nM。
B.体内测定大鼠心脏移植采用的组合株系为雄性Lewis大鼠(RT1单元型)和BN大鼠(RT1单元型)。吸入异氟醚使动物麻醉。通过供体大鼠的腹下腔静脉进行血液肝素化，同时通过主动脉放血，之后打开胸腔，快速冷却心脏。于第一分支远端结扎并分开主动脉，在第一个分杈点将头臂动脉干分开。结扎并分开左肺动脉，分开右侧肺动脉但保留开放。解剖所有其他血管使之游离、结扎并分离，将供体心脏取出置于冰冷的盐水中。
解剖并将肾下腹部主动脉和腔静脉交叉夹住以制备受体。用10/0单丝缝合线以端-侧吻合术植入移植物，供体的头臂动脉干与受体的主动脉相连，供体的右肺动脉与受体的腔静脉相连。去除夹子，移植物束于腹后，用温盐水洗涤腹内容物，缝合动脉胸腔，使动物在加热灯下恢复。每日透过腹壁对跳动的供体心脏触诊来监测移植物的存活。当心跳停止时，认为完全排斥。以1-30mg/kg的剂量每日经口给予式I化合物来处理动物，可以使移植物的存活期延长。以1-30mg/kg的剂量给予实施例100的化合物时，可以显著延长移植物的存活期，因此，式I化合物可以用于治疗和/或预防T淋巴细胞和/或PKC介导的疾病或紊乱，如急性或慢性器官或组织同种移植物或异种移植物的排斥反应、动脉粥样硬化、由于血管损伤如血管成形术引起的血管栓塞、再狭窄、高血压、心力衰竭、慢性阻塞性肺疾病、CNS疾病如阿尔茨海默氏病或肌萎缩性侧索硬化症、癌症、感染性疾病如AIDS、脓毒性休克或成人呼吸窘迫综合征、局部缺血/再灌注损伤如心肌梗死、中风、消化道缺血、肾衰竭或出血性休克或创伤性休克。式I化合物也可以用于治疗和/或预防T-细胞介导的急性或慢性炎性疾病或自身免疫病，如类风湿性关节炎、骨关节炎、系统性红斑狼疮、桥本甲状腺炎、多发性硬化、重症肌无力、I型糖尿病或II型糖尿病及与其相关的疾病、呼吸道疾病如哮喘、或炎性肺损伤、炎性肝损伤、炎性肾小球损伤、免疫性疾病的皮肤表现、炎性和过度增生性皮肤疾病(如牛皮癣、特应性皮炎、变应性接触性皮炎、刺激性接触性皮炎和其他的湿疹性皮炎、脂溢性皮炎)、炎性眼疾病，如斯耶格伦综合征、角结膜炎或眼色素层炎、炎性肠疾病、局限性回肠炎或溃疡性结肠炎。在用于上述用途时，所需的剂量应该随给药方式、所治疗的具体疾病以及所需产生的作用而发生变化。一般而言，以约0.1-100mg/kg体重日剂量全身给药时，显示可获得令人满意的效果。在体积较大的哺乳动物如人中，所需的日剂量约为0.5mg-2000mg，适宜如以多至4次/天的分剂量或以延迟形式给药。
可以以任何方便的途径给予式I化合物，这些途径具体有例如以如片剂或胶囊剂形式给予的经肠途径如口服，或者以如注射溶液或悬浮液形式给予的胃肠外途径，以洗剂、胶凝剂、膏剂或霜剂形式或以鼻用形式或栓剂形式给予的局部给药途径。可以根据常规的方法，通过将游离或药学上可接受的盐形式的式I化合物与药学上可接受的载体或稀释剂混合，制备含有游离或药学上可接受的盐形式的式I化合物与至少一种药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。用于口服给药的单位剂型含有如约0.1mg-500mg活性组分。
局部给药包括如皮肤给药。另外，局部给药的形式也包括眼部给药。
可以以游离形式或以药学上可接受的盐形式给予上述式I化合物，如上所述。此类盐可以以常规方法制备并具有与游离化合物相同数量级的活性。
根据前述，本发明还提供1.1在需要此类治疗的对象中，预防或治疗T淋巴细胞和/或PKC介导的紊乱或疾病(如上面所述的那些紊乱或疾病)的方法，该方法包括给予所述对象有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐；1.2在需要此类治疗的对象中，预防或治疗急性或慢性移植物排斥反应或T淋巴细胞介导的炎性或自身免疫性疾病(如上面所述的那些疾病)的方法，该方法包括给予所述对象有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐；2.游离形式或药学上可接受的盐形式的式I化合物用作药物，如在上述1.1和1.2所述的方法中用作药物；3.用于上述1.1和1.2所述的方法中的药物组合物，包括游离形式或药学上可接受的盐形式的式I化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
4.式I化合物或其药学上可接受的盐用于制备在上述1.1和1.2所述的方法中采用的药物组合物。
可以将式I化合物作为单一活性组分给予，也可以将其与免疫调节疗法中的其它药物或其它抗炎药物一起给予，如用于治疗或预防同种或异种移植的急性或慢性排斥反应、或炎性或自身免疫性疾病。例如，可以将这些化合物与下列物质联合使用环胞菌素或子囊霉素或它们的免疫抑制性类似物或衍生物，例如环胞菌素A、环胞菌素G、FK-506、ABT-281、ASM981；mTOR抑制剂，如雷帕霉素、40-O-(2-羟基)乙基-雷帕霉素等；皮质类固醇；环磷酰胺；硫唑嘌呤；甲氨蝶呤；加速淋巴细胞归巢的药剂，如FTY 720；来氟米特或其类似物；咪唑立宾；霉酚酸；霉酚酸莫非替克；15-脱氧精胍菌素或其类似物；免疫抑制性单克隆抗体，如白细胞受体，诸如MHC、CD2、CD3、CD4、CD11a/CD18、CD7、CD25、CD27、B7、CD40、CD45、CD58、CD137、ICOS、CD150(SLAM)、OX40、4-1BB或它们的配体，如CD154的单克隆抗体；或其他的免疫调节化合物，如至少具有CTLA4或其突变体的胞外域部分的重组结合分子，如与非-CTLA4蛋白序列相联的至少CTLA4或其突变体的胞外域部分，如CTLA4Ig(如指定为ATCC 68629)或其突变体，如LEA29Y，或其他粘附分子抑制剂，如mAbs或低分子量抑制剂，包括LFA-1拮抗剂、选择蛋白拮抗剂和VLA-4拮抗剂。也可以将式I化合物与抗增生剂(如化疗药物)一起给予例如用于治疗癌症，或者与抗糖尿病的药物一起给予用于治疗糖尿病。
根据上述，本发明还提供5.前述的方法，包括共同(如同时或顺序)给予治疗有效量的PKC和T-细胞激活和增殖的抑制剂(如游离形式或药学上可接受的盐形式的式I化合物)和第二种药物，所述第二种药物为免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、抗增生药物或抗糖尿病的药物，如上面所述的那些。
6.治疗联合物，如药剂盒，包括a)PKC和T-细胞激活和增殖的抑制剂，如游离形式或药学上可接受的盐形式的式I化合物，和b)至少一种选自下列的其它药物免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、抗增生药物或抗糖尿病的药物。组分a)和组分b)可以同时给予，也可以顺序给予。该药剂盒可以包括给药说明。
当如上所述将PKC和T-细胞激活和增殖的抑制剂(如式I化合物)与其他的免疫抑制剂/免疫调节剂、抗炎药物、抗增生药物或抗糖尿病的药物联合给药用于预防或治疗急性或慢性移植物排斥反应或炎性疾病或自身免疫性疾病时，联合给药的免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、抗增生药物或抗糖尿病的药物的剂量应该随采用的联合给药的药物类型(如该药物是类固醇还是环胞菌素)、采用的具体药物以及所治疗的疾病等而发生变化。
根据本发明的优选化合物为如实施例56的化合物。
权利要求
1.式I化合物或其盐 其中Ra为H；C1-4烷基；或被下列基团取代的C1-4烷基OH、NH2、NHC1-4烷基或N(二-C1-4烷基)2；Rb为H；或C1-4烷基；R为式(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的基团 其中R1、R4、R7、R8、R11和R14各自为OH；SH；杂环基；NR16R17，其中R16和R17各自独立地为H或C1-4烷基，或者R16和R17与它们所连接的氮原子一起形成杂环基；或者为式α的基团-X-Rc-Y(α)其中X直接为键、或为O、S或NR18，在此R18为H或C1-4烷基，Rc为C1-4亚烷基或其中一个CH2被CRxRy替代的C1-4亚烷基，其中Rx和Ry之一为H而另一个为CH3，Rx和Ry分别为CH3，或者Rx和Ry一起形成-CH2-CH2-，且Y与末端碳原子相连，并选自OH、杂环基和-NR19R20，其中R19和R20分别独立地为H、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-4烷基、芳基-C1-4烷基或任选在末端碳原子上被OH取代的C1-4烷基，或者R19和R20与它们所连接的氮原子一起形成杂环基；R2、R3、R5、R6、R9、R10、R12、R13、R15和R’15分别独立地为H、卤素、C1-4烷基、CF3、OH、SH、NH2、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、NHC1-4烷基、N(二-C1-4烷基)2或CN；E为-N＝而G为-CH＝，或者E为-CH＝而G为-N＝；且环A任选被取代。
2.权利要求1的化合物，其中由R1、R4、R7、R8、R11、R14或Y表示的或分别由NR16R17或NR19R20形成的杂环基是3-8元饱和、不饱和或芳族杂环，该杂环包括1或2个杂原子，并任选在一个或多个环碳原子和/或存在的环氮原子上被取代。
3.权利要求2的化合物，其中由R1、R4、R7、R8、R11、R14或Y表示的或分别由NR16R17或NR19R20形成的杂环基为式(γ)的基团 其中环D为5、6或7元饱和、不饱和或芳族环；Xb为-N-、-C＝或-CH-；Xc为-N＝、-NRf-、-CRf′＝或-CHRf′-，其中Rf为环氮原子上的取代基并选自C1-6烷基、酰基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-4烷基、苯基、苯基-C1-4烷基、杂环基和式(β)的基团-R21-Y′ (β)，其中R21为C1-4亚烷基或被O间隔的C2-4亚烷基，Y′为OH、NH2、NH(C1-4烷基)或N(C1-4烷基)2；而Rf′为环碳原子上的取代基并选自C1-4烷基、任选被C1-4烷基进一步取代的C3-6环烷基、其中p为1、2或3的 CF3、卤素、OH、NH2、-CH2-NH2、-CH2-OH、哌啶-1-基和吡咯烷基；C1和C2之间的键为饱和的或不饱和的；C1和C2分别独立地为碳原子，任选被一个或两个选自上述环碳原子上的取代基的取代基取代；且C3和Xb以及C1和Xb之间的连线分别代表形成5、6或7元环D所需的碳原子数目。
4.权利要求3的化合物，其中D为任选地按权利要求3中所述被C-取代的和/或N-取代的哌嗪基环。
5.前述权利要求中任何一项的化合物，其中R为式(d)、(e)或(f)的基团。
6.权利要求1的化合物或其盐，该化合物选自3-(1，H-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮，3-(1，H-1-甲基-吲哚-3-基)-4-[2-(4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基)-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮，3-(1，H-吲哚-3-基)-4-[2-(4-乙基-哌嗪-1-基)-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮，3-(1，H-1-甲基-吲哚-3-基)-4-[2-(4-乙基-哌嗪-1-基)-6-氯-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮，3-(1，H-7-甲基-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-6-氯-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮，3-(1，H-1-甲基-吲哚-3-基)-4-[2-(3(S)-甲基-哌嗪-1-基)-6-氯-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮，3-(1，H-1-甲基-吲哚-3-基)-4-[2-(3(R)-甲基-哌嗪-1-基)-6-氯-喹唑啉-4-基]-吡咯-2，5-二酮，和3-(1，H-吲哚-3-基)-4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-异喹啉-1-基]-吡咯-2，5-二酮。
7.制备权利要求1的式I化合物的方法，该方法包括a)使式II化合物 其中Ra、Rb和环A如权利要求1中的定义，与式III化合物反应R-CH2-CO-NH2(III)，其中R如权利要求1中的定义，b)使式IV化合物 其中Ra、Rb和环A如权利要求1中的定义，与式V的化合物反应R-CO-CO-OCH3(V)，其中R如权利要求1中的定义；或c)将式I化合物中的取代基R1、R4、R7、48、R11或R14转化为另一种取代基R1、R4、R7、R8、R11或R14，并且在需要时，将获得的游离形式的式I化合物转化为盐形式，或适合时，反之亦然。
8.用作药物的权利要求1的化合物。
9.药物组合物，该组合物包含游离形式或药学上可接受的盐形式的权利要求1的式I化合物和药学上可接受的稀释剂或载体。
10.联合物，其包含a)PKC和T-细胞活化和增殖的抑制剂，和b)至少一种选自下列的其它药物免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎剂、抗增生剂或抗糖尿病的药物。
11.预防或治疗T淋巴细胞和/或PKC介导的紊乱或疾病的方法，该方法包括给予需要此类治疗的对象有效量的权利要求1的式I化合物或其药学上可接受的盐。
全文摘要
本发明公开其中包含取代的苯基、萘基、四氢萘基、喹唑啉基、喹啉基、异喹啉基或嘧啶基的吲哚基马来酰亚胺衍生物，这些衍生物具有有用的药学活性如可以用于治疗和/或预防T－细胞介导的急性或慢性炎性疾病或紊乱、自身免疫性疾病、移植物排斥反应或癌症。
文档编号A61P9/00GK1478087SQ01819992
公开日2004年2月25日 申请日期2001年11月5日 优先权日2000年11月7日
发明者R·阿尔贝特, N·G·库克, S·科滕斯, C·埃尔哈特, J-P·埃弗努, R·塞德拉尼, P·冯马特, J·韦格纳, G·森克, ８ヅ, R 阿尔贝特, 吕, 库克, 硖, 衲 申请人:诺瓦提斯公司
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