超临界萃取蟾皮的方法、由此得到的产品和应用的制作方法
专利名称：超临界萃取蟾皮的方法、由此得到的产品和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及用超临界流体萃取蟾皮的方法以及由此得到的产品。另外，本发明还 涉及包含上述蟾皮萃取物的药物组合物、制剂以及它们的应用。
背景技术：
早在二十世纪80年代，人们就已开始研究蟾皮的化学成分和药理作用。蟾 皮的水萃取物主要含有吲哚生物碱类，包括蟾蜍色胺(bufotenine)、蟾毒色胺内盐 (bufotenidine)、去羟基蟾毒色胺(dehydrobufotenine)等；以及其他生物碱、喋啶类。另 外，蟾皮水萃取物还包含少量的脂溶性留族强心甙元，包括蟾蜍灵(bufalin)、脂蟾蜍配 基(resibufogenin)、华￠1 虫余素(cinobufagin)、海￠1 虫余毒素(marinobufagin)、￠1 虫余他灵 (bufotalin)等。已有文献表明蟾酥抗肿瘤作用主要是其脂溶性部分的蟾毒配基类物质，即 蟾毒内酯，如蟾蜍灵、华蟾蜍素。已发现蟾皮中的强心甙元类物质如蟾蜍灵、脂蟾蜍配基和华蟾蜍素等可通过对 Na+/K+-ATP酶、拓扑异构酶II、PKC同功酶活性以及ERK信号通路等的影响，促进细胞凋亡， 从而抑制肿瘤细胞的增殖(Weidemann H.，Na+/K+-ATPase，endogenous digitalis like compounds and cancer development-a hypothesis. Front Biosci,2005,1(10) :2165-76; Hashimoto S, Jing Y, KawazoeN et al·, Bufalin reduces the level of topoisomerase II in human leukemia cellsand affects and cytotoxicity of anticancer drugs, Leuk Res. ,1997,21 (9) :875-83 ；Masahiro Kurosawa et al. , Distinct PKC isozymes regulate bufalin-induceddifferentiation and apoptosis in human monocytic cells, Am. J. Physiol. CellPhysiol.，2001，280 :C459_C464 ；Masahiro Kurosawa et al.， ERK signalingmediates the induction of inflammatory cytokines by bufalin in humanmonocytic cells, Am. J. Physiol.Cell Physiol. ,200,278 :C500-C508 ； NumazawaS. et al. , A cardiotonic steroid bufalin-induced differentiation of THP-I cells, Involvement of Na./K.-ATPase inhibition in the early changes in proto-oncogeneexpression, Biochem. Pharmacol. ,1996,52(2) :321-9)。由于蟾皮水萃取物中脂溶性物质的含量非常小，其抗肿瘤效果一般。目前采取有 机溶剂如乙酸乙酯来萃取蟾皮的方法，虽然脂溶性物质的含量较高，但存在溶剂残留量高、 不易与活性成分分离等缺陷。因此，仍需要开发出一种能够克服现有技术中的缺陷，提高萃 取物中脂溶性成分含量并能实际工业应用的蟾皮萃取方法。
发明内容
根据本发明的一个方面，其提供一种用超临界流体萃取蟾皮的方法，其中在 15-40MPa的压力、30_60°C的温度和15_40L/h的流速下用超临界流体对粒度为10-100目的 蟾皮粉末进行萃取。根据另一个方面，本发明提供根据本发明的方法制备的蟾皮萃取物、以及包含该
3蟾皮萃取物以及药物学上可接受的赋形剂或载体的药物组合物。根据再一个方面，本发明提供根据本发明的方法制备的蟾皮萃取物在制备用于治 疗癌症的药物中的应用。根据另一个方面，本发明提供在包括人的哺乳动物中治疗癌症的方法，其包括向 需要此等治疗的患者给药治疗有效量的根据本发明的方法制备的蟾皮萃取物。
具体实施方案超临界流体萃取分离过程是利用超临界流体的溶解能力与其密度的关系，即利用 压力和温度对超临界流体溶解能力的影响而进行的。当处于超临界状态时，气体成为性质 介于液体和气体之间的单一相态，具有和液体相近的密度，粘度虽高于气体但明显低于液 体，但扩散系数为液体的10 100倍，因此对物料有较好的渗透性和较强的溶解能力，能够 将物料中某些成分提取出来。在根据本申请的方法中，可用作超临界流体的气体很多，包括但不限于二氧化碳、 乙烯、二氯二氟甲烷、甲苯、丙烷和丙烯等。根据本发明的一个实施方案，使用二氧化碳作为 超临界萃取剂，主要是因为二氧化碳无毒、无害、不易燃易爆、粘度低、表面张力低、沸点低、 不易造成环境污染，而且方法流程简单、操作方便、节省劳动力和大量有机溶剂，减小了产 生废水和废气污染的可能性。在根据本发明的方法中，待进行超临界萃取的原料是通过粉碎干燥的蟾蜍全皮而 得到的蟾皮粉末。原料颗粒度的大小决定了超临界流体与被萃取物接触面积大小。通常而 言，颗粒度越小，接触的面积越大，萃取效果越好。反之，则萃取率低。在根据本发明的方法 中，所用蟾皮粉末的粒度为10-100目(约1900-150微米)，优选为20-60目(约840-250 微米)，更优选为20-30目(约840-590微米)。通常情况下，提高萃取压力时，超临界流体的萃取效率也随之提高，这是因为随着 萃取压力的增大，超临界流体的密度相应增大，其溶解能力也相应提高，萃取率升高。但萃 取压力过大时，不但会使设备投资增加，同时也可能导致萃取物中色素含量增加，影响萃取 物的品质。在根据本发明的方法中，萃取压力可在15-50MPa的范围内，优选为20_40MPa。萃取温度对于本发明的方法也是一个重要的参数。一般而言，萃取温度对溶质的 萃取率的影响分为两个方面一方面，由于温度的升高导致溶质热运动加快，蒸汽压上升， 萃取率提高；另一方面，由于温度的升高，引起超临界流体的密度变小，而密度的大小决定 其对溶质的溶解能力，故温度升高的同时又使溶解能力下降。对于根据本发明的方法，萃取 温度可设定在30-60°C的范围内，优选为40-50°C。超临界流体的流速对根据本发明的超临界萃取方法没有太大的影响，可设定在 15-40L/h，优选为为 20-30L/h。在根据本发明的方法中，所述超临界流体还可包含合适量的夹带剂。夹带剂可明 显提高超临界流体对被萃取组分的选择性和溶解度，以提高萃取效率，这有可能是因为夹 带剂的加入改变了溶剂密度或内部分子间的相互作用所致。对于夹带剂的选择，本领域技 术人员可容易地根据以下几个因素来进行夹带剂的加入应能使溶质的溶解度较大幅度提 高；在溶质分离阶段，夹带剂应易于与溶质分离；以及夹带剂应尽量避免毒性问题。在本发 明的方法中，该夹带剂可以是醚、酯或醇类物质，例如石油醚、乙醚、乙酸乙酯、含有1-4个碳原子的醇，优选为乙醇。该夹带剂与超临界流体的体积比可以在5-10 95-90的范围内， 优选为3-7 97-93。如果使用夹带剂，可在后续步骤中通过常规的方法将其除去，例如蒸 发等，以得到不含夹带剂的蟾皮萃取物。根据本发明的方法具有以下优点操作方便；不仅萃取效率高，而且能耗较少，节 约成本。由于使用了诸如二氧化碳的超临界流体进行超临界萃取，根据本发明的方法得到 的蟾皮超临界萃取物主要包含脂溶性留族强心甙元，例如蟾蜍灵、脂蟾蜍配基、华蟾蜍素、 海蟾蜍毒素和蟾蜍他灵等。因此，根据本发明的方法得到的萃取物可用作治疗癌症的药物。根据另一个实施方案，本发明还涉及包含上述萃取物以及药物学可接受的赋形剂 或载体的药物组合物。根据本发明的组合物所采用的给药方式可选择通过口、鼻内、直肠、透皮或注射给 药方式，其形式为固体、半固体、冻干粉或液体药剂形式给药，例如，片剂、栓剂、丸剂、软和 硬明胶胶囊剂、散剂、溶液剂、混悬剂或气雾剂等，优选采用适用于精确剂量的简单给药的 单元剂量形式。组合物可包含常规药用载体或赋形剂和作为活性成分(一种或多种)的根 据本发明的方法得到的萃取物，此外，还可包含其它药剂、赋形剂、载体、辅剂等。通常，根据所需给药方式，药学上可接受的组合物将包含约1至约99重量％的根 据本发明的方法得到的蟾皮超临界萃取物、以及99至1重量％的适宜的药用赋形剂。优选 组合物包含约5至75重量％的根据本发明的方法得到的蟾皮超临界萃取物，其余为适宜的 药用赋形剂。优选的给药途径是注射给药，采用常规日剂量方案，该方案可根据疾病的严重程 度进行调整。本发明的结合物或其药学上可接受的盐也可配制成注射用剂，例如使用约0. 5 至约50%的活性成分分散于可采用液体形式给药的药用辅剂中，实例为水、盐水、含水葡萄 糖、甘油、乙醇等，从而形成溶液剂或混悬剂。可采用液体形式给药的药物组合物例如可通过溶解、分散等手段将本发明的结合 物(约0. 5至约20% )和选择性存在的药用辅剂溶解、分散于载体中，载体的实例为水、盐 水、含水葡萄糖、甘油、乙醇等，从而形成溶液剂或混悬剂。如果需要的话，本发明的药物组合物还可包含少量的辅助物质，如润湿剂或乳化 剂、PH缓冲剂、抗氧化剂等，例如柠檬酸、脱水山梨醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、丁基
化羟基甲苯等。药物学可接受的赋形剂或载体是指药学领域常规的赋形剂或载体，例如稀释剂、 赋形剂如水等；粘合剂如纤维素衍生物、明胶、聚乙烯吡咯烷酮等；填充剂如淀粉等；崩裂 剂如碳酸钙、碳酸氢钠；润滑剂如硬脂酸钙或硬脂酸镁等。另外，还可以在组合物中加入其 他辅助剂如香味剂和甜味剂。该类剂型的实际制备方法是本领域的技术人员公知的或者显而易见的，例如可参 见Remington' s Pharmaceutical Sciences,第18版，(Mack PublishingCompany,Easton, Pennsylvania, 1990)。无论如何，按照本发明的技术，所使用的组合物将含有治疗有效量的 根据本发明的方法得到的蟾皮超临界萃取物，以用于治疗相应的疾病。根据本发明的方法得到的蟾皮超临界萃取物以及包含该萃取物的药物组合物可 用于治疗多种癌症，包括但不限于胰腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、食管癌、结肠癌或白血病。
根据另一个方面，本发明提供在包括人的哺乳动物中治疗癌症的方法，其包括向 需要此等治疗的患者给药治疗有效量的根据本发明的方法得到的蟾皮超临界萃取物。在本发明中，术语“患者”包括人和其他动物(特别是哺乳动物)以及其他生物体。 因此，本发明的方法可应用于人的治疗和兽医领域中。在优选的实施方案中，患者是哺乳动 物，而在最优选的实施方案中，患者是人。在一个实施方案中，根据本发明的方法得到的蟾皮超临界萃取物还可与其他的抗 肿瘤药物联合使用，以产生更佳的药物协同作用。这些其他的抗肿瘤药物例如是阿霉素、顺 钼、紫杉醇、卡钼、氟脲嘧啶、环磷酰胺、异环磷酰胺、雷莫司汀、福莫司汀、丝裂霉素、柔红霉 素、表阿霉素、甲氨喋呤、平阳霉素等，或者是它们的组合。根据本发明的方法得到的蟾皮超临界萃取物的精确剂量取决于治疗目的，而且可 由本领域技术人员通过已知的方法来确定。本领域众所周知的是，必需根据全身与局部给 药、年龄、体重、总的健康状况、性别、饮食、给药时间、药物的相互作用以及疾病的严重程 度，对给药剂量进行调整，而且可由本领域技术人员用常规的实验来确定。通常情况下， 根据本发明的方法得到的蟾皮超临界萃取物的每日剂量可为0.01-lmg/kg体重，优选为 0. 1-0. 5mg/kg体重。该剂量可一次性给药，也可分为多个剂量给药。以下将参考具体的实施例对本发明进行阐述，但应理解的是，这些实施例仅是用 于说明本发明，而绝非是对本发明范围的限定。实施例1-3取200g粒度为20目的蟾皮原料，在50°C的萃取温度下用二氧化碳作为超临界 流体以30L/h的流速对该蟾皮原料进行超临界萃取3小时，其中萃取压力分别为20、30和 40MPa。最终的超临界萃取率的结果如以下表1所示。表 权利要求
1.超临界萃取蟾皮的方法，其中在15-50ΜΙ^的压力和30-60°C的温度下用超临界流体 对粒度为10-100目的蟾皮粉末进行萃取。
2.根据权利要求1的方法，其中所述压力为20-40MPa。
3.根据权利要求1的方法，其中所述温度为40-50°C。
4.根据权利要求1的方法，其中所述蟾皮粉末的粒度为20-60目，优选为20-30目。
5.根据权利要求1的方法，其中所述超临界流体的流速为15-40L/h，优选为20-30L/h。
6.根据权利要求1-5之一的方法，其中在所述超临界流体中还可添加夹带剂，该夹带 剂优选为甲醇或乙醇，其与超临界流体的体积比为1-10 99-90，优选为3-7 97-93。
7.根据权利要求1-6之一的方法制备的蟾皮萃取物。
8.—种药物组合物，其包含根据权利要求7的蟾皮萃取物以及药物学可接受的载体或 赋形剂。
9.根据权利要求7的蟾皮萃取物在制备用于治疗癌症的药物中的应用。
10.根据权利要求9的应用，其中所述癌症为胰腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、食管癌、结肠癌 或白血病。
11.根据权利要求9的方法，其中所述药物为片剂、胶囊剂、散剂、溶液剂、混悬剂或气 雾剂的剂型。
12.—种在包括人的哺乳动物中治疗癌症的方法，其包括向需要此等治疗的患者给药 治疗有效量的根据权利要求7的蟾皮萃取物。
13.根据权利要求12的方法，其中所述癌症为胰腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、食管癌、结肠 癌或白血病。
全文摘要
本发明涉及一种用超临界流体萃取蟾皮的方法，其中在15-40MPa的压力、30-60℃的温度和15-40L/h的流速下用超临界流体对粒度为10-100目的蟾皮粉末进行萃取。本发明还涉及由该方法制备的蟾皮萃取物、包含该蟾皮萃取物的药物组合物及其应用。
文档编号A61P35/00GK102114045SQ20091026372
公开日2011年7月6日 申请日期2009年12月30日 优先权日2009年12月30日
发明者张效蓬, 高波 申请人:安徽金蟾生化股份有限公司
技术领域：
本发明涉及用超临界流体萃取蟾皮的方法以及由此得到的产品。另外，本发明还 涉及包含上述蟾皮萃取物的药物组合物、制剂以及它们的应用。
背景技术：
早在二十世纪80年代，人们就已开始研究蟾皮的化学成分和药理作用。蟾 皮的水萃取物主要含有吲哚生物碱类，包括蟾蜍色胺(bufotenine)、蟾毒色胺内盐 (bufotenidine)、去羟基蟾毒色胺(dehydrobufotenine)等；以及其他生物碱、喋啶类。另 外，蟾皮水萃取物还包含少量的脂溶性留族强心甙元，包括蟾蜍灵(bufalin)、脂蟾蜍配 基(resibufogenin)、华￠1 虫余素(cinobufagin)、海￠1 虫余毒素(marinobufagin)、￠1 虫余他灵 (bufotalin)等。已有文献表明蟾酥抗肿瘤作用主要是其脂溶性部分的蟾毒配基类物质，即 蟾毒内酯，如蟾蜍灵、华蟾蜍素。已发现蟾皮中的强心甙元类物质如蟾蜍灵、脂蟾蜍配基和华蟾蜍素等可通过对 Na+/K+-ATP酶、拓扑异构酶II、PKC同功酶活性以及ERK信号通路等的影响，促进细胞凋亡， 从而抑制肿瘤细胞的增殖(Weidemann H.，Na+/K+-ATPase，endogenous digitalis like compounds and cancer development-a hypothesis. Front Biosci,2005,1(10) :2165-76; Hashimoto S, Jing Y, KawazoeN et al·, Bufalin reduces the level of topoisomerase II in human leukemia cellsand affects and cytotoxicity of anticancer drugs, Leuk Res. ,1997,21 (9) :875-83 ；Masahiro Kurosawa et al. , Distinct PKC isozymes regulate bufalin-induceddifferentiation and apoptosis in human monocytic cells, Am. J. Physiol. CellPhysiol.，2001，280 :C459_C464 ；Masahiro Kurosawa et al.， ERK signalingmediates the induction of inflammatory cytokines by bufalin in humanmonocytic cells, Am. J. Physiol.Cell Physiol. ,200,278 :C500-C508 ； NumazawaS. et al. , A cardiotonic steroid bufalin-induced differentiation of THP-I cells, Involvement of Na./K.-ATPase inhibition in the early changes in proto-oncogeneexpression, Biochem. Pharmacol. ,1996,52(2) :321-9)。由于蟾皮水萃取物中脂溶性物质的含量非常小，其抗肿瘤效果一般。目前采取有 机溶剂如乙酸乙酯来萃取蟾皮的方法，虽然脂溶性物质的含量较高，但存在溶剂残留量高、 不易与活性成分分离等缺陷。因此，仍需要开发出一种能够克服现有技术中的缺陷，提高萃 取物中脂溶性成分含量并能实际工业应用的蟾皮萃取方法。
发明内容
根据本发明的一个方面，其提供一种用超临界流体萃取蟾皮的方法，其中在 15-40MPa的压力、30_60°C的温度和15_40L/h的流速下用超临界流体对粒度为10-100目的 蟾皮粉末进行萃取。根据另一个方面，本发明提供根据本发明的方法制备的蟾皮萃取物、以及包含该
3蟾皮萃取物以及药物学上可接受的赋形剂或载体的药物组合物。根据再一个方面，本发明提供根据本发明的方法制备的蟾皮萃取物在制备用于治 疗癌症的药物中的应用。根据另一个方面，本发明提供在包括人的哺乳动物中治疗癌症的方法，其包括向 需要此等治疗的患者给药治疗有效量的根据本发明的方法制备的蟾皮萃取物。
具体实施方案超临界流体萃取分离过程是利用超临界流体的溶解能力与其密度的关系，即利用 压力和温度对超临界流体溶解能力的影响而进行的。当处于超临界状态时，气体成为性质 介于液体和气体之间的单一相态，具有和液体相近的密度，粘度虽高于气体但明显低于液 体，但扩散系数为液体的10 100倍，因此对物料有较好的渗透性和较强的溶解能力，能够 将物料中某些成分提取出来。在根据本申请的方法中，可用作超临界流体的气体很多，包括但不限于二氧化碳、 乙烯、二氯二氟甲烷、甲苯、丙烷和丙烯等。根据本发明的一个实施方案，使用二氧化碳作为 超临界萃取剂，主要是因为二氧化碳无毒、无害、不易燃易爆、粘度低、表面张力低、沸点低、 不易造成环境污染，而且方法流程简单、操作方便、节省劳动力和大量有机溶剂，减小了产 生废水和废气污染的可能性。在根据本发明的方法中，待进行超临界萃取的原料是通过粉碎干燥的蟾蜍全皮而 得到的蟾皮粉末。原料颗粒度的大小决定了超临界流体与被萃取物接触面积大小。通常而 言，颗粒度越小，接触的面积越大，萃取效果越好。反之，则萃取率低。在根据本发明的方法 中，所用蟾皮粉末的粒度为10-100目(约1900-150微米)，优选为20-60目(约840-250 微米)，更优选为20-30目(约840-590微米)。通常情况下，提高萃取压力时，超临界流体的萃取效率也随之提高，这是因为随着 萃取压力的增大，超临界流体的密度相应增大，其溶解能力也相应提高，萃取率升高。但萃 取压力过大时，不但会使设备投资增加，同时也可能导致萃取物中色素含量增加，影响萃取 物的品质。在根据本发明的方法中，萃取压力可在15-50MPa的范围内，优选为20_40MPa。萃取温度对于本发明的方法也是一个重要的参数。一般而言，萃取温度对溶质的 萃取率的影响分为两个方面一方面，由于温度的升高导致溶质热运动加快，蒸汽压上升， 萃取率提高；另一方面，由于温度的升高，引起超临界流体的密度变小，而密度的大小决定 其对溶质的溶解能力，故温度升高的同时又使溶解能力下降。对于根据本发明的方法，萃取 温度可设定在30-60°C的范围内，优选为40-50°C。超临界流体的流速对根据本发明的超临界萃取方法没有太大的影响，可设定在 15-40L/h，优选为为 20-30L/h。在根据本发明的方法中，所述超临界流体还可包含合适量的夹带剂。夹带剂可明 显提高超临界流体对被萃取组分的选择性和溶解度，以提高萃取效率，这有可能是因为夹 带剂的加入改变了溶剂密度或内部分子间的相互作用所致。对于夹带剂的选择，本领域技 术人员可容易地根据以下几个因素来进行夹带剂的加入应能使溶质的溶解度较大幅度提 高；在溶质分离阶段，夹带剂应易于与溶质分离；以及夹带剂应尽量避免毒性问题。在本发 明的方法中，该夹带剂可以是醚、酯或醇类物质，例如石油醚、乙醚、乙酸乙酯、含有1-4个碳原子的醇，优选为乙醇。该夹带剂与超临界流体的体积比可以在5-10 95-90的范围内， 优选为3-7 97-93。如果使用夹带剂，可在后续步骤中通过常规的方法将其除去，例如蒸 发等，以得到不含夹带剂的蟾皮萃取物。根据本发明的方法具有以下优点操作方便；不仅萃取效率高，而且能耗较少，节 约成本。由于使用了诸如二氧化碳的超临界流体进行超临界萃取，根据本发明的方法得到 的蟾皮超临界萃取物主要包含脂溶性留族强心甙元，例如蟾蜍灵、脂蟾蜍配基、华蟾蜍素、 海蟾蜍毒素和蟾蜍他灵等。因此，根据本发明的方法得到的萃取物可用作治疗癌症的药物。根据另一个实施方案，本发明还涉及包含上述萃取物以及药物学可接受的赋形剂 或载体的药物组合物。根据本发明的组合物所采用的给药方式可选择通过口、鼻内、直肠、透皮或注射给 药方式，其形式为固体、半固体、冻干粉或液体药剂形式给药，例如，片剂、栓剂、丸剂、软和 硬明胶胶囊剂、散剂、溶液剂、混悬剂或气雾剂等，优选采用适用于精确剂量的简单给药的 单元剂量形式。组合物可包含常规药用载体或赋形剂和作为活性成分(一种或多种)的根 据本发明的方法得到的萃取物，此外，还可包含其它药剂、赋形剂、载体、辅剂等。通常，根据所需给药方式，药学上可接受的组合物将包含约1至约99重量％的根 据本发明的方法得到的蟾皮超临界萃取物、以及99至1重量％的适宜的药用赋形剂。优选 组合物包含约5至75重量％的根据本发明的方法得到的蟾皮超临界萃取物，其余为适宜的 药用赋形剂。优选的给药途径是注射给药，采用常规日剂量方案，该方案可根据疾病的严重程 度进行调整。本发明的结合物或其药学上可接受的盐也可配制成注射用剂，例如使用约0. 5 至约50%的活性成分分散于可采用液体形式给药的药用辅剂中，实例为水、盐水、含水葡萄 糖、甘油、乙醇等，从而形成溶液剂或混悬剂。可采用液体形式给药的药物组合物例如可通过溶解、分散等手段将本发明的结合 物(约0. 5至约20% )和选择性存在的药用辅剂溶解、分散于载体中，载体的实例为水、盐 水、含水葡萄糖、甘油、乙醇等，从而形成溶液剂或混悬剂。如果需要的话，本发明的药物组合物还可包含少量的辅助物质，如润湿剂或乳化 剂、PH缓冲剂、抗氧化剂等，例如柠檬酸、脱水山梨醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、丁基
化羟基甲苯等。药物学可接受的赋形剂或载体是指药学领域常规的赋形剂或载体，例如稀释剂、 赋形剂如水等；粘合剂如纤维素衍生物、明胶、聚乙烯吡咯烷酮等；填充剂如淀粉等；崩裂 剂如碳酸钙、碳酸氢钠；润滑剂如硬脂酸钙或硬脂酸镁等。另外，还可以在组合物中加入其 他辅助剂如香味剂和甜味剂。该类剂型的实际制备方法是本领域的技术人员公知的或者显而易见的，例如可参 见Remington' s Pharmaceutical Sciences,第18版，(Mack PublishingCompany,Easton, Pennsylvania, 1990)。无论如何，按照本发明的技术，所使用的组合物将含有治疗有效量的 根据本发明的方法得到的蟾皮超临界萃取物，以用于治疗相应的疾病。根据本发明的方法得到的蟾皮超临界萃取物以及包含该萃取物的药物组合物可 用于治疗多种癌症，包括但不限于胰腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、食管癌、结肠癌或白血病。
根据另一个方面，本发明提供在包括人的哺乳动物中治疗癌症的方法，其包括向 需要此等治疗的患者给药治疗有效量的根据本发明的方法得到的蟾皮超临界萃取物。在本发明中，术语“患者”包括人和其他动物(特别是哺乳动物)以及其他生物体。 因此，本发明的方法可应用于人的治疗和兽医领域中。在优选的实施方案中，患者是哺乳动 物，而在最优选的实施方案中，患者是人。在一个实施方案中，根据本发明的方法得到的蟾皮超临界萃取物还可与其他的抗 肿瘤药物联合使用，以产生更佳的药物协同作用。这些其他的抗肿瘤药物例如是阿霉素、顺 钼、紫杉醇、卡钼、氟脲嘧啶、环磷酰胺、异环磷酰胺、雷莫司汀、福莫司汀、丝裂霉素、柔红霉 素、表阿霉素、甲氨喋呤、平阳霉素等，或者是它们的组合。根据本发明的方法得到的蟾皮超临界萃取物的精确剂量取决于治疗目的，而且可 由本领域技术人员通过已知的方法来确定。本领域众所周知的是，必需根据全身与局部给 药、年龄、体重、总的健康状况、性别、饮食、给药时间、药物的相互作用以及疾病的严重程 度，对给药剂量进行调整，而且可由本领域技术人员用常规的实验来确定。通常情况下， 根据本发明的方法得到的蟾皮超临界萃取物的每日剂量可为0.01-lmg/kg体重，优选为 0. 1-0. 5mg/kg体重。该剂量可一次性给药，也可分为多个剂量给药。以下将参考具体的实施例对本发明进行阐述，但应理解的是，这些实施例仅是用 于说明本发明，而绝非是对本发明范围的限定。实施例1-3取200g粒度为20目的蟾皮原料，在50°C的萃取温度下用二氧化碳作为超临界 流体以30L/h的流速对该蟾皮原料进行超临界萃取3小时，其中萃取压力分别为20、30和 40MPa。最终的超临界萃取率的结果如以下表1所示。表 权利要求
1.超临界萃取蟾皮的方法，其中在15-50ΜΙ^的压力和30-60°C的温度下用超临界流体 对粒度为10-100目的蟾皮粉末进行萃取。
2.根据权利要求1的方法，其中所述压力为20-40MPa。
3.根据权利要求1的方法，其中所述温度为40-50°C。
4.根据权利要求1的方法，其中所述蟾皮粉末的粒度为20-60目，优选为20-30目。
5.根据权利要求1的方法，其中所述超临界流体的流速为15-40L/h，优选为20-30L/h。
6.根据权利要求1-5之一的方法，其中在所述超临界流体中还可添加夹带剂，该夹带 剂优选为甲醇或乙醇，其与超临界流体的体积比为1-10 99-90，优选为3-7 97-93。
7.根据权利要求1-6之一的方法制备的蟾皮萃取物。
8.—种药物组合物，其包含根据权利要求7的蟾皮萃取物以及药物学可接受的载体或 赋形剂。
9.根据权利要求7的蟾皮萃取物在制备用于治疗癌症的药物中的应用。
10.根据权利要求9的应用，其中所述癌症为胰腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、食管癌、结肠癌 或白血病。
11.根据权利要求9的方法，其中所述药物为片剂、胶囊剂、散剂、溶液剂、混悬剂或气 雾剂的剂型。
12.—种在包括人的哺乳动物中治疗癌症的方法，其包括向需要此等治疗的患者给药 治疗有效量的根据权利要求7的蟾皮萃取物。
13.根据权利要求12的方法，其中所述癌症为胰腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、食管癌、结肠 癌或白血病。
全文摘要
本发明涉及一种用超临界流体萃取蟾皮的方法，其中在15-40MPa的压力、30-60℃的温度和15-40L/h的流速下用超临界流体对粒度为10-100目的蟾皮粉末进行萃取。本发明还涉及由该方法制备的蟾皮萃取物、包含该蟾皮萃取物的药物组合物及其应用。
文档编号A61P35/00GK102114045SQ20091026372
公开日2011年7月6日 申请日期2009年12月30日 优先权日2009年12月30日
发明者张效蓬, 高波 申请人:安徽金蟾生化股份有限公司
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