一种菌肥及其制备方法
一种菌肥及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种农用生物菌肥，属于微生物培养领域，具体的说是一种菌肥及其制备方法。
【背景技术】
[0002]中国化学肥料的大量施用不仅致使土壤板结、土壤微生物区系发生变化、带来食品安全等问题，还造成大量的经济损失和严重的环境污染。在当前农业可持续发展形势下，开辟微生物肥料部分替代化肥日益受到重视。因此有必要对生物菌肥的发展现状与展望作一阐述。所谓生物菌肥，是指一类含有活的微生物，并通过微生物的特定作用给植物提供营养、调节植物生长的特定制品。用于农业生产中能够获得特定的肥料效应，可作为化学肥料的有益补充。
[0003]目前，中国生产应用的生物菌肥可分为固氮菌类、解磷菌类、解钾菌类、光合细菌类、菌根菌类、抗生菌类、复合菌类等。生物菌肥作为一种生物制剂与化学肥料相比具有以下特点:不破坏土壤结构、保护生态、不污染环境，对人、畜和植物无毒无害；肥效持久；提高作物产量和改进作物产品品质；成本低廉；有些种类的生物肥料对作物具有选择性；其效果往往受到土壤条件如养分、有机质、水分、酸碱度等和环境因素如温度、通气、光照等的制约；一般不能与杀虫剂、杀菌剂杀真菌或杀细菌混用；易受紫外线的影响，不能长期暴露于阳光下照射生物菌肥能改善土壤肥力各种自生、联合或共生的固氮生物肥料，都可以增加土壤中氮素的来源；有溶解磷钾作用的微生物，可分泌多种有机酸，有机酸通过螯合作用促使难溶性磷及封闭态钾的释放；根际微生物还可以分泌一些诱导物提高土壤酶活性，有利于根际土壤养分的转化便于植物对营养物质的吸收利用。生物菌肥中含有多种非病原微生物菌群，在微生物的生长繁殖过程中，具有竞争性抑制作用，并能分泌出多种抗生素、杀虫物质及植物生长激素，不但能抑制植物病原微生物的活动，起到防治植物病害的作用，而且能刺激作物生长，使其根系发达，促进叶绿素、蛋白质和核酸的合成，提高作物的抗逆性。有些微生物肥料如菌根真菌施入土壤后，在作物根部大量繁殖的菌丝除了有益于作物对营养元素的吸收外，还可增加对水分的吸收，从而提高作物的抗旱能力。目前已有的菌肥很多，在提高作物的产量上也都有一定的效果，但都不同程度的存在提高作物产量效果不够显著等缺陷。
【发明内容】
[0004]本发明旨在提供一种菌肥及其制备方法，克服现有技术的不足，进行固体和液体发酵生产嗜热乳杆菌菌剂的方法。
[0005]本发明所述的一种菌肥及其制备方法，其特征在于:将动物内脏加入水中粉碎，得内脏浸出液，并加入蛋白胨和氯化钠制的培养基，将嗜热乳杆菌菌剂菌株复苏、增菌后，制成种子液，发酵后得到嗜热乳杆菌菌剂纯化产品。
[0006]本发明所述的一种菌肥及其制备方法，其制备方法包括以下步骤:
[0007]—、将原料动物内脏加入I?2倍水中粉碎、过滤、得第一滤液和滤渣；
[0008]二、向所述的滤渣中加入I?2倍水，于90?95°C浸泡，过滤，得第二滤液和滤渣；
合并第一滤液和第二滤液得第三滤液；
[0009]三、将按照液体总重量计算的，向第三滤液中加入0.025?0.5g%蛋白胨，以及0.3?0.9g%氯化钠加入第三滤液，并向该滤液中加入0.5%的活性炭，将其pH调至7.2左右得一培养基；
[0010]四、将嗜热乳杆菌菌剂菌株复苏，增菌后制成种子液，使其细菌浓度达到15?17后经行接种，其接种量为0.02?0.2mL% ；
[0011]五、发酵时温度保持在28?38°C,pH为4.5?9.8,发酵约15?20小时后，得一培养物；
[0012]六、提取:将得到的培养物先用5?10倍量的0.1?0.15M的氯化钠液在4?10°C下搅拌抽提I?2小时后先粗预滤，除去大颗粒发酵基质，压滤或离心去除菌体，得到一提取物；
[0013]七、纯化:将得到的提取物经75%酒精沉淀或固体硫酸铵沉淀出来的沉淀物0.05MPH7.6磷酸缓冲液溶解，加入固体硫酸铵逐渐达80%饱和度，高速离心，收集沉淀物，沉淀物用0.05M pH6.5磷酸缓冲液溶解并透析，在离子交换柱上层析，收集活性组分，经超滤浓缩后经行冷冻干燥，得到嗜热乳杆菌菌剂的纯化产品。
[0014]本发明所述的一种菌肥及其制备方法，其有益效果在于:采用本发明所述的菌株明显地缩短了约1/5的发酵时间，种子培养液时间缩短了 2/3，减少了原料的使用量，工艺简单，容易控制，大大提高了产品的质量，降低了成本。
【具体实施方式】
[0015]实施例1
[0016]1.取动物内脏10kg，用清水洗净后，采用绞肉机，进行铰碎处理，加入15kg注射用水于90°C浸泡I小时，然后过滤出滤渣，得猪心滤液备用；
[0017]2.向上述的滤渣中加入注射用水10kg，90°C浸泡I小时，然后过滤，滤渣弃之，得滤液；
[0018]3.将得到的所有滤液合并；取合并后的猪心滤液200ml，加入蛋白胨10g，氯化钠120g，搅拌煮沸后使加入的物质使其完全溶解，再加入清水，并将其pH保持为8.5，然后4°C下放置过夜；向该滤液中加入活性碳lg，将所述滤液pH值从8.5逐步调整为7.2 ；
[0019]4.将得到的经过上述处理后的滤液后，分装载50ml的密封瓶瓶内，0.1Mpa的压力下，灭菌消毒20min,制得培养基40kg,总体积约为40000mL ；
[0020]5.将嗜热乳杆菌菌剂菌种在35V温度复苏24小时，然后在血平皿上增菌8小时，增菌温度为35°C，得种子液，该种子液的细菌浓度为15 ；
[0021]6.嗜热乳杆菌菌剂的纯化:经75%酒精沉淀或固体硫酸铵沉淀出来的沉淀物0.05M pH7.6磷酸缓冲液溶解，加入固体硫酸铵逐渐达80%饱和度；高速离心，收集沉淀物；沉淀物用0.05M pH6.5磷酸缓冲液溶解并透析，在离子交换柱上层析，收集活性组分，经超滤浓缩后经行冷冻干燥，得到嗜热乳杆菌菌剂的纯化产品。
【主权项】
1.一种菌肥及其制备方法，其特征在于:将动物内脏加入水中粉碎，得内脏浸出液，并加入蛋白胨和氯化钠制的培养基，将嗜热乳杆菌菌剂菌株复苏、增菌后，制成种子液，发酵后得到嗜热乳杆菌菌剂纯化产品。
2.—种菌肥及其制备方法，其制备方法包括以下步骤: ①将原料动物内脏加入I?2倍水中粉碎、过滤、得第一滤液和滤渣；向所述的滤渣中加入I?2倍水，于90?95°C浸泡,过滤,得第二滤液和滤洛；合并第一滤液和第二滤液得第三滤液； ②将按照液体总重量计算的，向第三滤液中加入0.025?0.5g%蛋白胨，以及0.3?.0.9g%氯化钠加入第三滤液，并向该滤液中加入0.5%的活性炭，将其pH调至7.2左右得一培养基； ③将嗜热乳杆菌菌剂菌株复苏，增菌后制成种子液，使其细菌浓度达到15?17后经行接种，其接种量为0.02?0.2mL% ； ④发酵时温度保持在28?38°C，pH为4.5?9.8，发酵约15?20小时后，得一培养物； ⑤将得到的培养物先用5?10倍量的0.1?0.15M的氯化钠液在4?10°C下搅拌抽提I?2小时后先粗预滤，除去大颗粒发酵基质，压滤或离心去除菌体，得到一提取物； ⑥将得到的提取物经75%酒精沉淀或固体硫酸铵沉淀出来的沉淀物0.05M pH7.6磷酸缓冲液溶解，加入固体硫酸铵逐渐达80%饱和度，高速离心，收集沉淀物，沉淀物用0.05MPH6.5磷酸缓冲液溶解并透析，在离子交换柱上层析，收集活性组分，经超滤浓缩后经行冷冻干燥，得到嗜热乳杆菌菌剂的纯化产品。
【专利摘要】本发明公开一种菌肥及其制备方法，涉及一种农用生物菌肥，属于微生物培养领域。其特征在于：将动物内脏加入水中粉碎，得内脏浸出液，并加入蛋白胨和氯化钠制的培养基，将嗜热乳杆菌菌剂菌株复苏、增菌后，制成种子液，发酵后得到嗜热乳杆菌菌剂纯化产品。其有益效果在于：采用本发明所述的菌株明显地缩短了约1/5的发酵时间，种子培养液时间缩短了2/3,减少了原料的使用量，工艺简单，容易控制，大大提高了产品的质量，降低了成本。
【IPC分类】C05F11-08
【公开号】CN104557164
【申请号】CN201310521828
【发明人】魏波
【申请人】魏波
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2013年10月29日
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种农用生物菌肥，属于微生物培养领域，具体的说是一种菌肥及其制备方法。
【背景技术】
[0002]中国化学肥料的大量施用不仅致使土壤板结、土壤微生物区系发生变化、带来食品安全等问题，还造成大量的经济损失和严重的环境污染。在当前农业可持续发展形势下，开辟微生物肥料部分替代化肥日益受到重视。因此有必要对生物菌肥的发展现状与展望作一阐述。所谓生物菌肥，是指一类含有活的微生物，并通过微生物的特定作用给植物提供营养、调节植物生长的特定制品。用于农业生产中能够获得特定的肥料效应，可作为化学肥料的有益补充。
[0003]目前，中国生产应用的生物菌肥可分为固氮菌类、解磷菌类、解钾菌类、光合细菌类、菌根菌类、抗生菌类、复合菌类等。生物菌肥作为一种生物制剂与化学肥料相比具有以下特点:不破坏土壤结构、保护生态、不污染环境，对人、畜和植物无毒无害；肥效持久；提高作物产量和改进作物产品品质；成本低廉；有些种类的生物肥料对作物具有选择性；其效果往往受到土壤条件如养分、有机质、水分、酸碱度等和环境因素如温度、通气、光照等的制约；一般不能与杀虫剂、杀菌剂杀真菌或杀细菌混用；易受紫外线的影响，不能长期暴露于阳光下照射生物菌肥能改善土壤肥力各种自生、联合或共生的固氮生物肥料，都可以增加土壤中氮素的来源；有溶解磷钾作用的微生物，可分泌多种有机酸，有机酸通过螯合作用促使难溶性磷及封闭态钾的释放；根际微生物还可以分泌一些诱导物提高土壤酶活性，有利于根际土壤养分的转化便于植物对营养物质的吸收利用。生物菌肥中含有多种非病原微生物菌群，在微生物的生长繁殖过程中，具有竞争性抑制作用，并能分泌出多种抗生素、杀虫物质及植物生长激素，不但能抑制植物病原微生物的活动，起到防治植物病害的作用，而且能刺激作物生长，使其根系发达，促进叶绿素、蛋白质和核酸的合成，提高作物的抗逆性。有些微生物肥料如菌根真菌施入土壤后，在作物根部大量繁殖的菌丝除了有益于作物对营养元素的吸收外，还可增加对水分的吸收，从而提高作物的抗旱能力。目前已有的菌肥很多，在提高作物的产量上也都有一定的效果，但都不同程度的存在提高作物产量效果不够显著等缺陷。
【发明内容】
[0004]本发明旨在提供一种菌肥及其制备方法，克服现有技术的不足，进行固体和液体发酵生产嗜热乳杆菌菌剂的方法。
[0005]本发明所述的一种菌肥及其制备方法，其特征在于:将动物内脏加入水中粉碎，得内脏浸出液，并加入蛋白胨和氯化钠制的培养基，将嗜热乳杆菌菌剂菌株复苏、增菌后，制成种子液，发酵后得到嗜热乳杆菌菌剂纯化产品。
[0006]本发明所述的一种菌肥及其制备方法，其制备方法包括以下步骤:
[0007]—、将原料动物内脏加入I?2倍水中粉碎、过滤、得第一滤液和滤渣；
[0008]二、向所述的滤渣中加入I?2倍水，于90?95°C浸泡，过滤，得第二滤液和滤渣；
合并第一滤液和第二滤液得第三滤液；
[0009]三、将按照液体总重量计算的，向第三滤液中加入0.025?0.5g%蛋白胨，以及0.3?0.9g%氯化钠加入第三滤液，并向该滤液中加入0.5%的活性炭，将其pH调至7.2左右得一培养基；
[0010]四、将嗜热乳杆菌菌剂菌株复苏，增菌后制成种子液，使其细菌浓度达到15?17后经行接种，其接种量为0.02?0.2mL% ；
[0011]五、发酵时温度保持在28?38°C,pH为4.5?9.8,发酵约15?20小时后，得一培养物；
[0012]六、提取:将得到的培养物先用5?10倍量的0.1?0.15M的氯化钠液在4?10°C下搅拌抽提I?2小时后先粗预滤，除去大颗粒发酵基质，压滤或离心去除菌体，得到一提取物；
[0013]七、纯化:将得到的提取物经75%酒精沉淀或固体硫酸铵沉淀出来的沉淀物0.05MPH7.6磷酸缓冲液溶解，加入固体硫酸铵逐渐达80%饱和度，高速离心，收集沉淀物，沉淀物用0.05M pH6.5磷酸缓冲液溶解并透析，在离子交换柱上层析，收集活性组分，经超滤浓缩后经行冷冻干燥，得到嗜热乳杆菌菌剂的纯化产品。
[0014]本发明所述的一种菌肥及其制备方法，其有益效果在于:采用本发明所述的菌株明显地缩短了约1/5的发酵时间，种子培养液时间缩短了 2/3，减少了原料的使用量，工艺简单，容易控制，大大提高了产品的质量，降低了成本。
【具体实施方式】
[0015]实施例1
[0016]1.取动物内脏10kg，用清水洗净后，采用绞肉机，进行铰碎处理，加入15kg注射用水于90°C浸泡I小时，然后过滤出滤渣，得猪心滤液备用；
[0017]2.向上述的滤渣中加入注射用水10kg，90°C浸泡I小时，然后过滤，滤渣弃之，得滤液；
[0018]3.将得到的所有滤液合并；取合并后的猪心滤液200ml，加入蛋白胨10g，氯化钠120g，搅拌煮沸后使加入的物质使其完全溶解，再加入清水，并将其pH保持为8.5，然后4°C下放置过夜；向该滤液中加入活性碳lg，将所述滤液pH值从8.5逐步调整为7.2 ；
[0019]4.将得到的经过上述处理后的滤液后，分装载50ml的密封瓶瓶内，0.1Mpa的压力下，灭菌消毒20min,制得培养基40kg,总体积约为40000mL ；
[0020]5.将嗜热乳杆菌菌剂菌种在35V温度复苏24小时，然后在血平皿上增菌8小时，增菌温度为35°C，得种子液，该种子液的细菌浓度为15 ；
[0021]6.嗜热乳杆菌菌剂的纯化:经75%酒精沉淀或固体硫酸铵沉淀出来的沉淀物0.05M pH7.6磷酸缓冲液溶解，加入固体硫酸铵逐渐达80%饱和度；高速离心，收集沉淀物；沉淀物用0.05M pH6.5磷酸缓冲液溶解并透析，在离子交换柱上层析，收集活性组分，经超滤浓缩后经行冷冻干燥，得到嗜热乳杆菌菌剂的纯化产品。
【主权项】
1.一种菌肥及其制备方法，其特征在于:将动物内脏加入水中粉碎，得内脏浸出液，并加入蛋白胨和氯化钠制的培养基，将嗜热乳杆菌菌剂菌株复苏、增菌后，制成种子液，发酵后得到嗜热乳杆菌菌剂纯化产品。
2.—种菌肥及其制备方法，其制备方法包括以下步骤: ①将原料动物内脏加入I?2倍水中粉碎、过滤、得第一滤液和滤渣；向所述的滤渣中加入I?2倍水，于90?95°C浸泡,过滤,得第二滤液和滤洛；合并第一滤液和第二滤液得第三滤液； ②将按照液体总重量计算的，向第三滤液中加入0.025?0.5g%蛋白胨，以及0.3?.0.9g%氯化钠加入第三滤液，并向该滤液中加入0.5%的活性炭，将其pH调至7.2左右得一培养基； ③将嗜热乳杆菌菌剂菌株复苏，增菌后制成种子液，使其细菌浓度达到15?17后经行接种，其接种量为0.02?0.2mL% ； ④发酵时温度保持在28?38°C，pH为4.5?9.8，发酵约15?20小时后，得一培养物； ⑤将得到的培养物先用5?10倍量的0.1?0.15M的氯化钠液在4?10°C下搅拌抽提I?2小时后先粗预滤，除去大颗粒发酵基质，压滤或离心去除菌体，得到一提取物； ⑥将得到的提取物经75%酒精沉淀或固体硫酸铵沉淀出来的沉淀物0.05M pH7.6磷酸缓冲液溶解，加入固体硫酸铵逐渐达80%饱和度，高速离心，收集沉淀物，沉淀物用0.05MPH6.5磷酸缓冲液溶解并透析，在离子交换柱上层析，收集活性组分，经超滤浓缩后经行冷冻干燥，得到嗜热乳杆菌菌剂的纯化产品。
【专利摘要】本发明公开一种菌肥及其制备方法，涉及一种农用生物菌肥，属于微生物培养领域。其特征在于：将动物内脏加入水中粉碎，得内脏浸出液，并加入蛋白胨和氯化钠制的培养基，将嗜热乳杆菌菌剂菌株复苏、增菌后，制成种子液，发酵后得到嗜热乳杆菌菌剂纯化产品。其有益效果在于：采用本发明所述的菌株明显地缩短了约1/5的发酵时间，种子培养液时间缩短了2/3,减少了原料的使用量，工艺简单，容易控制，大大提高了产品的质量，降低了成本。
【IPC分类】C05F11-08
【公开号】CN104557164
【申请号】CN201310521828
【发明人】魏波
【申请人】魏波
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2013年10月29日
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