具有抑菌抗炎活性的瓜子金发酵口服液及制备方法
专利名称：具有抑菌抗炎活性的瓜子金发酵口服液及制备方法
技术领域：
本发明属于抑菌抗炎镇痛药物领域，涉及来源于瓜子金经发酵后产物的制剂。
背景技术：
瓜子金系远志科远志属植物(Polyagla j即onica HOUTT.)的全草，中医认为其具有祛痰止咳，散瘀止血，宁心安神，解热消肿等功效，主要用来治疗咳嗽多痰，骨关节结核，多发性脓肿，急性扁桃体炎，咽喉炎，心悸，失眠，泌尿系统结石，疔疮肿瘤等。《中国药用植物图鉴》中认为瓜子金"根为镇静、祛痰剂，能益智安神，散郁化痰，消痈肿。治疗支气管炎，肺炎，咳嗽多痰，惊悸，健忘，痈疽疮肿，喉痹。"现代研究证明瓜子金含有齐墩果烷型三贴皂苷是其主要的活性成分，具有治疗抑郁，益智，消炎镇痛，抗焦虑和催眠的作用(张东明，等.中草药，2005，36(12) :1767-1771 ;Zhang D， et al. Chem. Pharm. Bull. 1995，43 :115-120)。 药酒，古代同其它酒统称"醪醴"。我国最早的医书《黄帝内经》中就有"汤液醪醴论篇"。以白酒、黄酒和米酒浸泡或煎煮具有治疗和滋补性质的各种中药或食物，去掉药渣所得的口服酒剂，即为药酒。因为酒有"通血脉，行药势，温肠胃，御风寒"等作用，所以，药和酒配制可以增强药力，既可治疗疾病和预防疾病，又可用于病后的辅助治疗。随着人们生活水平的不断提高，药酒作为一种有效的防病祛病、养生健身的饮料或药物制剂而被广泛应用。 瓜子金经过甜酒曲发酵后，主要含有皂苷和糖苷，以及少量黄酮类化合物和氨基酸。目前，有关瓜子金发酵及其发酵后制备的口服液的研究未见报道，本发明报道了瓜子金发酵后制备的口服液具有明显的抑菌抗炎作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种新的具抑菌抗炎活性的瓜子金发酵口服液及制备方法。 本发明公开的具抑菌抗炎活性的瓜子金发酵口服液是以瓜子金为原料，以甜酒曲
为发酵菌种，采用固体发酵技术，过滤后提取加工，所得浸膏用蒸馏水溶解，加入甜味剂即
得而成。所得瓜子金发酵口服液，主要含有皂苷和糖苷，以及少量黄酮类化合物和氨基酸；
其pH值为4. 0 6. 0，具有抑菌抗炎的药物制剂的用途。 本发明的瓜子金发酵口服液的制备方法包括以下步骤 1.瓜子金发酵液的制备 (1)瓜子金的预处理将瓜子金洗净，在50°C 6(TC干燥12h，干燥完全后粉碎成粉末，备用； (2)糯米的预处理糯米筛选淘洗干净后，采用常规方法蒸熟，例如用足够量的净水浸润8 10h，捞出沥水，上笼蒸至熟而不糊、米粒饱满、无夹心、颗粒分开，手捏柔软有弹性且不粘手时，立即取出用凉开水冲凉至30 4(TC，静置至无大量水滤出，备用；
(3)瓜子金发酵培养基的制备由如下重量份原料构成的培养基
瓜子金 50 80
甜酒曲 5 10 将上述物品加到800 1200重量份预处理好的糯米中，在无菌条件下均匀混合，分装，纱布封口 ； (4)置2『C恒温培养箱中培养48 72h，收集发酵液备用； (5)将发酵液在41:条件下离心分离，收集上清液，然后以5%三氯乙酸、95%乙醇沉淀蛋白和多糖，再以正丁醇提取，蒸干正丁醇，即得瓜子金发酵浸膏，放入4°C的环境中保存； 2.瓜子金发酵口服液的制备 将上述瓜子金发酵浸膏与蒸馏水按1 : 3 8的比例混合，并加入5 10%的甜味剂，在配料容器中混合均匀而成口服液，利用现有的技术分装入瓶，消毒灭菌后于-20
4t:冰箱保存。 本发明的实验证明在体外抑菌试验中，瓜子金发酵制剂对金黄色葡萄球菌、大肠
杆菌、枯草芽孢杆菌、假单孢杆菌均有一定的抑菌效果，对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径达到24mm，其最低抑菌浓度(MIC)为25mg/ml，表明具有较强的抑制细菌生长的作用。在二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验中，对小鼠的肿胀抑制率为42. 52% ;在小鼠扭体法镇痛试验中，对小鼠的镇痛抑制率为58. 08%，表明具有较强的抗炎镇痛的作用。动物急性毒性实验证明无毒副作用，安全可靠。
具体实施例方式
下面结合实施例来对本发明进一步说明。
实施例1 :瓜子金发酵浸膏的制备 (1)瓜子金的预处理将瓜子金洗净，在6(TC以下干燥12h，干燥完全后粉碎成粉末，备用。 (2)糯米的预处理糯米筛选淘洗干净后，采用常规方法蒸熟，例如用足够量的净水浸润8 10h，捞出沥水，上笼蒸至熟而不糊、米粒饱满、无夹心、颗粒分开，手捏柔软有弹
性且不粘手时，立即取出用凉开水冲凉至35t:，静置至无大量水滤出，备用。
(3)瓜子金发酵培养基的制备由如下重量份原料构成的培养基
瓜子金 70
甜酒曲 7 将上述物品加到1000重量份预处理好的糯米中，在无菌条件下均匀混合后，分装后，纱布封口。
(4)置2『C培养箱中培养60h，收集发酵液备用。 (5)将发酵液在41:条件下离心，收集上清液，然后以5%三氯乙酸、95%乙醇沉淀蛋白和多糖，再以正丁醇提取，蒸干正丁醇，即得瓜子金发酵浸膏，放入4°C的环境中保存。
实施例2 :瓜子金发酵口服液的制备 (1)将上述瓜子金发酵浸膏与蒸馏水按照1 : 5的比例混合，同时加入6%木糖醇
即制成口服液，利用现有的技术分装入瓶，消毒灭菌后并于4t:冰箱保存。 (2)将上述瓜子金发酵浸膏与蒸馏水按照1 : 6的比例混合，同时加入6%的木糖醇即制成口服液，利用现有的技术分装入瓶，消毒灭菌后并于4t:冰箱保存。 (3)将上述瓜子金发酵浸膏与蒸馏水按照1 : 7的比例混合，同时加入6%的木糖
醇即制成口服液，利用现有的技术分装入瓶，消毒灭菌后并于4t:冰箱保存。 实施例3 :瓜子金发酵制剂体外抑菌试验 (1)菌种的选用金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、假单孢杆菌。
(2)琼脂平板扩散法(滤纸片法)测定上述实例2中瓜子金发酵制剂体外抑菌的活性将37t:培养24h的菌种与灭菌生理盐水混匀，使其菌含量达到105cfu/ml。用微量进样器取0. lml菌液均匀涂布在牛肉膏蛋白胨固体培养基上，用微量进样器取5iU经过0. 22ym微孔滤膜过滤除菌的瓜子金发酵制剂、无菌水浸湿直径为6mm的灭菌滤纸片，将含药滤纸片粘在涂菌培养基上，置37t:培养24h，观察抑菌圈的直径，从而初步确定上述样品的抗菌能力。 (3)琼脂平板连续稀释法测定上述实例2中瓜子金发酵制剂体外抑菌的最小抑菌浓度将37t:培养24h的菌种与灭菌生理盐水中混匀，使其菌含量达到104—5cfu/ml。抑菌浓度的配制将瓜子金发酵浸膏用蒸馏水配成一系列的浓度0. 5g/ml，0. 25g/ml，0. 125g/ml，0. 0625g/ml和0. 03125g/ml，然后经0. 22 P m微孔滤膜过滤除菌即得，取2ml —系列原液和18ml牛肉膏蛋白胨固体培养基混匀，待凝固后，用微量进样器取O. lml菌液均匀涂布在牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置37t:培养24h，观察培养基上菌种的生长情况确定瓜子金发酵制剂的最低抑菌浓度。 瓜子金发酵制剂体外抑菌试验数据如表-1所示。
实施例4 :瓜子金发酵制剂抗炎试验 (1)模型动物的选用昆明系小鼠若干只，体重20 25g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。 (2)抗炎动物模型的制备将50只雄性小鼠随机分成5组，各组灌胃给上述实例2
中瓜子金发酵制剂1次/d，连续5d，于末次给药lh后，将二甲苯0. 02ml涂于小鼠右耳正反
两面，lh后颈锥脱臼处死，用直径8mm打孔器在左右两耳廓相同部位打孔取样，及时称重，
以左右耳片重量之差为肿胀度，按下式计算抑制率，并与对照组进行比较。 肿胀抑制率=(1-实验组耳肿胀度/对照组耳肿胀度)X 100% 瓜子金发酵制剂抗炎试验数据如表-2所示。 实施例5 :瓜子金发酵制剂镇痛试验 (1)模型动物的选用昆明系小鼠若干只，体重20 25g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。 (2)镇痛动物模型的制备将50只雄性小鼠随机分成5组，各组灌胃给上述实例2中瓜子金发酵制剂1次/d，连续5d，于末次给药后lh，小鼠腹腔注射O. 6%醋酸溶液0. 2ml/只，观察并记录15分钟内小鼠扭体反应次数。按下式计算抑制率，并与对照组进行比较。
镇痛抑制率=(1-实验组扭体次数/对照组扭体次数)X 100 %
瓜子金发酵制剂镇痛试验数据如表_3所示。
实施例6 :动物急性毒性实验 (1)模型动物的选用昆明系小鼠若干只(雌雄各半)，体重20 25g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。
(2)取昆明小鼠60只，随机分成6组，雌雄各半，以最大耐受剂量法(MTD)进行试验，试验中所取剂量分别为7. 5、10、13. 3g/kg(以上剂量为瓜子金制剂中浸膏的重量与动物重量的比例)。动物经隔夜空腹后，一次性灌入上述实例2中瓜子金发酵制剂，连续观察7d，无死亡现象及不良反应，说明此剂无毒副作用，且小鼠最大耐受剂量为13. 3g/kg。
整个试验结果表明，瓜子金发酵口服液对细菌有直接的抑制作用，并具有明显的抗炎镇痛作用；并且无毒副作用，安全可靠。
表1瓜子金发酵制剂体外抑菌试验结果
菌种抑菌圈直径最小抑菌浓度(mg/ml)
金黄色葡萄球菌+++25
大肠杆菌++50
枯草芽孢杆菌+>50
假单孢杆菌++50 +细微抑菌效果，样品抑菌圈直径1_3皿>溶剂抑菌圈直径(溶剂指无菌水，下同) ++中等抑菌效果，样品抑菌圈直径3-4mm >溶剂抑菌圈直径 +++明显抑菌效果，样品抑菌圈直径4-10mm >溶剂抑菌圈直径 表2瓜子金发酵制制剂抗炎试验结果(n = 10)
组别剂量(g/kg)小鼠耳肿胀度(mg)肿胀抑制率(％)
模型组—15.875±3.482一
口服液组69.125±3.56342.52***
310.500±4.24333.86*
1.511.500±3.11727.56* 模型组指服用0.9 %生理盐水的动物；与模型组相比，*(p < 0.05)， **(p< 0. 01) ， ***(p < 0. 001)。 表3瓜子金发酵制制剂镇痛试验结果(n = 10)
剂量(g/kg)扭体次数(次)镇痛抑制率(％)
模型组-20.875±13.984-
口服液组68.750±13.823*5謹
314.125±13.51632.34
1.516.375±16.80921.56 模型组指服用0. 9%生理盐水的动物；与模型组相比，*(p < 0. 05)。
权利要求
一种瓜子金发酵口服液，其特征在于该发酵口服液是以瓜子金、糯米、甜酒曲为原料，经固体发酵、过滤后，沉淀提取成瓜子金发酵浸膏，然后将瓜子金发酵浸膏与蒸馏水按1∶3～8的比例混合，并加入适量甜味剂配制成口服液。
2. 如权利要求1的瓜子金发酵口服液，主要含有皂苷和糖苷，以及少量黄酮类化合物和氨基酸。
3. 如权利要求1或2的瓜子金发酵口服液，其pH值为4. 0 6. 0。
4. 如权利要求1所述的瓜子金发酵口服液的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤(1) 瓜子金的预处理将瓜子金洗净，在5(TC 6(TC干燥12h，干燥完全后粉碎成粉末，备用；(2) 糯米的预处理糯米按常规方法蒸熟后，立即取出用凉开水冲凉至30 4(TC，静置至无大量水滤出，备用；(3) 瓜子金发酵培养基的制备由如下重量份原料构成的培养基瓜子金 50 80甜酒曲 5 10将上述物品加到800 1200重量份预处理好的糯米中，在无菌条件下均匀混合，分装，纱布封口 ；(4) 置2『C恒温培养箱中培养48 72h，收集发酵液备用；(5) 将发酵液在41:条件下离心分离，收集上清液，然后以5%三氯乙酸、95%乙醇沉淀蛋白和多糖，再以正丁醇提取，蒸干正丁醇，即得瓜子金发酵浸膏，放入4°C的环境中保存；(6) 按瓜子金发酵浸膏与蒸馏水按1 : 3 8的比例混合，并加入适量甜味剂，在配料容器中混合均匀而成。
5. 如权利要求l的瓜子金发酵口服液作为抑菌抗炎的药物制剂的用途。
全文摘要
具有抑菌抗炎活性的瓜子金发酵口服液，是以瓜子金、糯米、甜酒曲为原料，经固体发酵后，除蛋白、多糖，正丁醇萃取后蒸干，所得浸膏用蒸馏水溶解，加入甜味剂即得而成。体外抑菌试验证明，瓜子金发酵口服液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、假单孢杆菌均有一定的抑制作用，其中对金黄色葡萄球菌的抑菌作用更强。抗炎实验二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验中对小鼠的肿胀抑制率为42.52％；镇痛实验小鼠扭体法镇痛试验中对小鼠的镇痛抑制率为58.08％，表明具有较强的抗炎镇痛的作用。在急性毒性实验中，小鼠最大耐受剂量为13.3g/kg，表明瓜子金发酵口服液对小鼠无毒副作用。
文档编号A61P29/00GK101700284SQ200910273040
公开日2010年5月5日 申请日期2009年11月30日 优先权日2009年11月30日
发明者刘明星, 朱婷, 童庆 申请人:湖北工业大学
技术领域：
本发明属于抑菌抗炎镇痛药物领域，涉及来源于瓜子金经发酵后产物的制剂。
背景技术：
瓜子金系远志科远志属植物(Polyagla j即onica HOUTT.)的全草，中医认为其具有祛痰止咳，散瘀止血，宁心安神，解热消肿等功效，主要用来治疗咳嗽多痰，骨关节结核，多发性脓肿，急性扁桃体炎，咽喉炎，心悸，失眠，泌尿系统结石，疔疮肿瘤等。《中国药用植物图鉴》中认为瓜子金"根为镇静、祛痰剂，能益智安神，散郁化痰，消痈肿。治疗支气管炎，肺炎，咳嗽多痰，惊悸，健忘，痈疽疮肿，喉痹。"现代研究证明瓜子金含有齐墩果烷型三贴皂苷是其主要的活性成分，具有治疗抑郁，益智，消炎镇痛，抗焦虑和催眠的作用(张东明，等.中草药，2005，36(12) :1767-1771 ;Zhang D， et al. Chem. Pharm. Bull. 1995，43 :115-120)。 药酒，古代同其它酒统称"醪醴"。我国最早的医书《黄帝内经》中就有"汤液醪醴论篇"。以白酒、黄酒和米酒浸泡或煎煮具有治疗和滋补性质的各种中药或食物，去掉药渣所得的口服酒剂，即为药酒。因为酒有"通血脉，行药势，温肠胃，御风寒"等作用，所以，药和酒配制可以增强药力，既可治疗疾病和预防疾病，又可用于病后的辅助治疗。随着人们生活水平的不断提高，药酒作为一种有效的防病祛病、养生健身的饮料或药物制剂而被广泛应用。 瓜子金经过甜酒曲发酵后，主要含有皂苷和糖苷，以及少量黄酮类化合物和氨基酸。目前，有关瓜子金发酵及其发酵后制备的口服液的研究未见报道，本发明报道了瓜子金发酵后制备的口服液具有明显的抑菌抗炎作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种新的具抑菌抗炎活性的瓜子金发酵口服液及制备方法。 本发明公开的具抑菌抗炎活性的瓜子金发酵口服液是以瓜子金为原料，以甜酒曲
为发酵菌种，采用固体发酵技术，过滤后提取加工，所得浸膏用蒸馏水溶解，加入甜味剂即
得而成。所得瓜子金发酵口服液，主要含有皂苷和糖苷，以及少量黄酮类化合物和氨基酸；
其pH值为4. 0 6. 0，具有抑菌抗炎的药物制剂的用途。 本发明的瓜子金发酵口服液的制备方法包括以下步骤 1.瓜子金发酵液的制备 (1)瓜子金的预处理将瓜子金洗净，在50°C 6(TC干燥12h，干燥完全后粉碎成粉末，备用； (2)糯米的预处理糯米筛选淘洗干净后，采用常规方法蒸熟，例如用足够量的净水浸润8 10h，捞出沥水，上笼蒸至熟而不糊、米粒饱满、无夹心、颗粒分开，手捏柔软有弹性且不粘手时，立即取出用凉开水冲凉至30 4(TC，静置至无大量水滤出，备用；
(3)瓜子金发酵培养基的制备由如下重量份原料构成的培养基
瓜子金 50 80
甜酒曲 5 10 将上述物品加到800 1200重量份预处理好的糯米中，在无菌条件下均匀混合，分装，纱布封口 ； (4)置2『C恒温培养箱中培养48 72h，收集发酵液备用； (5)将发酵液在41:条件下离心分离，收集上清液，然后以5%三氯乙酸、95%乙醇沉淀蛋白和多糖，再以正丁醇提取，蒸干正丁醇，即得瓜子金发酵浸膏，放入4°C的环境中保存； 2.瓜子金发酵口服液的制备 将上述瓜子金发酵浸膏与蒸馏水按1 : 3 8的比例混合，并加入5 10%的甜味剂，在配料容器中混合均匀而成口服液，利用现有的技术分装入瓶，消毒灭菌后于-20
4t:冰箱保存。 本发明的实验证明在体外抑菌试验中，瓜子金发酵制剂对金黄色葡萄球菌、大肠
杆菌、枯草芽孢杆菌、假单孢杆菌均有一定的抑菌效果，对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径达到24mm，其最低抑菌浓度(MIC)为25mg/ml，表明具有较强的抑制细菌生长的作用。在二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验中，对小鼠的肿胀抑制率为42. 52% ;在小鼠扭体法镇痛试验中，对小鼠的镇痛抑制率为58. 08%，表明具有较强的抗炎镇痛的作用。动物急性毒性实验证明无毒副作用，安全可靠。
具体实施例方式
下面结合实施例来对本发明进一步说明。
实施例1 :瓜子金发酵浸膏的制备 (1)瓜子金的预处理将瓜子金洗净，在6(TC以下干燥12h，干燥完全后粉碎成粉末，备用。 (2)糯米的预处理糯米筛选淘洗干净后，采用常规方法蒸熟，例如用足够量的净水浸润8 10h，捞出沥水，上笼蒸至熟而不糊、米粒饱满、无夹心、颗粒分开，手捏柔软有弹
性且不粘手时，立即取出用凉开水冲凉至35t:，静置至无大量水滤出，备用。
(3)瓜子金发酵培养基的制备由如下重量份原料构成的培养基
瓜子金 70
甜酒曲 7 将上述物品加到1000重量份预处理好的糯米中，在无菌条件下均匀混合后，分装后，纱布封口。
(4)置2『C培养箱中培养60h，收集发酵液备用。 (5)将发酵液在41:条件下离心，收集上清液，然后以5%三氯乙酸、95%乙醇沉淀蛋白和多糖，再以正丁醇提取，蒸干正丁醇，即得瓜子金发酵浸膏，放入4°C的环境中保存。
实施例2 :瓜子金发酵口服液的制备 (1)将上述瓜子金发酵浸膏与蒸馏水按照1 : 5的比例混合，同时加入6%木糖醇
即制成口服液，利用现有的技术分装入瓶，消毒灭菌后并于4t:冰箱保存。 (2)将上述瓜子金发酵浸膏与蒸馏水按照1 : 6的比例混合，同时加入6%的木糖醇即制成口服液，利用现有的技术分装入瓶，消毒灭菌后并于4t:冰箱保存。 (3)将上述瓜子金发酵浸膏与蒸馏水按照1 : 7的比例混合，同时加入6%的木糖
醇即制成口服液，利用现有的技术分装入瓶，消毒灭菌后并于4t:冰箱保存。 实施例3 :瓜子金发酵制剂体外抑菌试验 (1)菌种的选用金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、假单孢杆菌。
(2)琼脂平板扩散法(滤纸片法)测定上述实例2中瓜子金发酵制剂体外抑菌的活性将37t:培养24h的菌种与灭菌生理盐水混匀，使其菌含量达到105cfu/ml。用微量进样器取0. lml菌液均匀涂布在牛肉膏蛋白胨固体培养基上，用微量进样器取5iU经过0. 22ym微孔滤膜过滤除菌的瓜子金发酵制剂、无菌水浸湿直径为6mm的灭菌滤纸片，将含药滤纸片粘在涂菌培养基上，置37t:培养24h，观察抑菌圈的直径，从而初步确定上述样品的抗菌能力。 (3)琼脂平板连续稀释法测定上述实例2中瓜子金发酵制剂体外抑菌的最小抑菌浓度将37t:培养24h的菌种与灭菌生理盐水中混匀，使其菌含量达到104—5cfu/ml。抑菌浓度的配制将瓜子金发酵浸膏用蒸馏水配成一系列的浓度0. 5g/ml，0. 25g/ml，0. 125g/ml，0. 0625g/ml和0. 03125g/ml，然后经0. 22 P m微孔滤膜过滤除菌即得，取2ml —系列原液和18ml牛肉膏蛋白胨固体培养基混匀，待凝固后，用微量进样器取O. lml菌液均匀涂布在牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置37t:培养24h，观察培养基上菌种的生长情况确定瓜子金发酵制剂的最低抑菌浓度。 瓜子金发酵制剂体外抑菌试验数据如表-1所示。
实施例4 :瓜子金发酵制剂抗炎试验 (1)模型动物的选用昆明系小鼠若干只，体重20 25g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。 (2)抗炎动物模型的制备将50只雄性小鼠随机分成5组，各组灌胃给上述实例2
中瓜子金发酵制剂1次/d，连续5d，于末次给药lh后，将二甲苯0. 02ml涂于小鼠右耳正反
两面，lh后颈锥脱臼处死，用直径8mm打孔器在左右两耳廓相同部位打孔取样，及时称重，
以左右耳片重量之差为肿胀度，按下式计算抑制率，并与对照组进行比较。 肿胀抑制率=(1-实验组耳肿胀度/对照组耳肿胀度)X 100% 瓜子金发酵制剂抗炎试验数据如表-2所示。 实施例5 :瓜子金发酵制剂镇痛试验 (1)模型动物的选用昆明系小鼠若干只，体重20 25g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。 (2)镇痛动物模型的制备将50只雄性小鼠随机分成5组，各组灌胃给上述实例2中瓜子金发酵制剂1次/d，连续5d，于末次给药后lh，小鼠腹腔注射O. 6%醋酸溶液0. 2ml/只，观察并记录15分钟内小鼠扭体反应次数。按下式计算抑制率，并与对照组进行比较。
镇痛抑制率=(1-实验组扭体次数/对照组扭体次数)X 100 %
瓜子金发酵制剂镇痛试验数据如表_3所示。
实施例6 :动物急性毒性实验 (1)模型动物的选用昆明系小鼠若干只(雌雄各半)，体重20 25g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。
(2)取昆明小鼠60只，随机分成6组，雌雄各半，以最大耐受剂量法(MTD)进行试验，试验中所取剂量分别为7. 5、10、13. 3g/kg(以上剂量为瓜子金制剂中浸膏的重量与动物重量的比例)。动物经隔夜空腹后，一次性灌入上述实例2中瓜子金发酵制剂，连续观察7d，无死亡现象及不良反应，说明此剂无毒副作用，且小鼠最大耐受剂量为13. 3g/kg。
整个试验结果表明，瓜子金发酵口服液对细菌有直接的抑制作用，并具有明显的抗炎镇痛作用；并且无毒副作用，安全可靠。
表1瓜子金发酵制剂体外抑菌试验结果
菌种抑菌圈直径最小抑菌浓度(mg/ml)
金黄色葡萄球菌+++25
大肠杆菌++50
枯草芽孢杆菌+>50
假单孢杆菌++50 +细微抑菌效果，样品抑菌圈直径1_3皿>溶剂抑菌圈直径(溶剂指无菌水，下同) ++中等抑菌效果，样品抑菌圈直径3-4mm >溶剂抑菌圈直径 +++明显抑菌效果，样品抑菌圈直径4-10mm >溶剂抑菌圈直径 表2瓜子金发酵制制剂抗炎试验结果(n = 10)
组别剂量(g/kg)小鼠耳肿胀度(mg)肿胀抑制率(％)
模型组—15.875±3.482一
口服液组69.125±3.56342.52***
310.500±4.24333.86*
1.511.500±3.11727.56* 模型组指服用0.9 %生理盐水的动物；与模型组相比，*(p < 0.05)， **(p< 0. 01) ， ***(p < 0. 001)。 表3瓜子金发酵制制剂镇痛试验结果(n = 10)
剂量(g/kg)扭体次数(次)镇痛抑制率(％)
模型组-20.875±13.984-
口服液组68.750±13.823*5謹
314.125±13.51632.34
1.516.375±16.80921.56 模型组指服用0. 9%生理盐水的动物；与模型组相比，*(p < 0. 05)。
权利要求
一种瓜子金发酵口服液，其特征在于该发酵口服液是以瓜子金、糯米、甜酒曲为原料，经固体发酵、过滤后，沉淀提取成瓜子金发酵浸膏，然后将瓜子金发酵浸膏与蒸馏水按1∶3～8的比例混合，并加入适量甜味剂配制成口服液。
2. 如权利要求1的瓜子金发酵口服液，主要含有皂苷和糖苷，以及少量黄酮类化合物和氨基酸。
3. 如权利要求1或2的瓜子金发酵口服液，其pH值为4. 0 6. 0。
4. 如权利要求1所述的瓜子金发酵口服液的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤(1) 瓜子金的预处理将瓜子金洗净，在5(TC 6(TC干燥12h，干燥完全后粉碎成粉末，备用；(2) 糯米的预处理糯米按常规方法蒸熟后，立即取出用凉开水冲凉至30 4(TC，静置至无大量水滤出，备用；(3) 瓜子金发酵培养基的制备由如下重量份原料构成的培养基瓜子金 50 80甜酒曲 5 10将上述物品加到800 1200重量份预处理好的糯米中，在无菌条件下均匀混合，分装，纱布封口 ；(4) 置2『C恒温培养箱中培养48 72h，收集发酵液备用；(5) 将发酵液在41:条件下离心分离，收集上清液，然后以5%三氯乙酸、95%乙醇沉淀蛋白和多糖，再以正丁醇提取，蒸干正丁醇，即得瓜子金发酵浸膏，放入4°C的环境中保存；(6) 按瓜子金发酵浸膏与蒸馏水按1 : 3 8的比例混合，并加入适量甜味剂，在配料容器中混合均匀而成。
5. 如权利要求l的瓜子金发酵口服液作为抑菌抗炎的药物制剂的用途。
全文摘要
具有抑菌抗炎活性的瓜子金发酵口服液，是以瓜子金、糯米、甜酒曲为原料，经固体发酵后，除蛋白、多糖，正丁醇萃取后蒸干，所得浸膏用蒸馏水溶解，加入甜味剂即得而成。体外抑菌试验证明，瓜子金发酵口服液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、假单孢杆菌均有一定的抑制作用，其中对金黄色葡萄球菌的抑菌作用更强。抗炎实验二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验中对小鼠的肿胀抑制率为42.52％；镇痛实验小鼠扭体法镇痛试验中对小鼠的镇痛抑制率为58.08％，表明具有较强的抗炎镇痛的作用。在急性毒性实验中，小鼠最大耐受剂量为13.3g/kg，表明瓜子金发酵口服液对小鼠无毒副作用。
文档编号A61P29/00GK101700284SQ200910273040
公开日2010年5月5日 申请日期2009年11月30日 优先权日2009年11月30日
发明者刘明星, 朱婷, 童庆 申请人:湖北工业大学
最新回复(0)