杠板归药材的质量检测方法

专利名称：：杠板归药材的质量检测方法
技术领域：
：本发明涉及一种杠板归药材的质量检测方法，属于对药材进行质量控制的
技术领域：
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背景技术：
：我国传统的中药及其制剂大多缺乏严密的质量标准和科学的检测手段，难以有效的控制其内在质量，不能保证用药的安全、有效，也不符合国际医药市场的要求，严重制约了我国中药行业的发展。加强中药材质量控制研究是中药规范化、标准化的关键问题。只有对中药材进行科学的质量控制，才能保证中药质量，实现中药的"安全、有效、稳定、可控"。杠板归为蓼科蓼属植物杠板归PolygonumperfoliatumLinn.的干燥全草；生于山谷、灌木丛中或水沟旁；主产于贵州、江苏、浙江、福建、江西、广东、广西、四川、湖南。夏季开花时采割，晒干。别名河白草、蛇倒退、梨头刺、蛇不过等。杠板归为常用中药材，也是常用苗药。性味功能与主治酸；苦；性平；有清热解毒；利湿消肿；散瘀止血之功效，常用于治疗疔疮痈肿；丹毒；瘫腮；乳腺炎；聘耳；喉蛾；感冒发热；肺热咳嗽；百日咳;瘰疬；痔疾；鱼口便毒；泻痢；黄疸；臌胀；水肿；淋浊；带下；疟疾；风火赤眼；跌打肿痛；吐血；便血；蛇虫咬伤。众所周知，杠板归药材成分复杂，主要包括以下几类生物碱、苦味素、苯并色原酮类、萜类、黄酮、香豆精、木脂素、留类化合物、挥发油和有机酸类。研究表明，杠板归的多种化学成分有各种具体的药理作用。但其质量控制方法文献报道很少，仅在《贵州省中药材、民族药材质量标准》2003年版中以咖啡酸为对照进行了薄层色谱鉴别研究。因此，为了使杠板归的临床应用更加安全、有效、科学、合理，必须加强其质量控制。
发明内容本发明的目的在于提供一种杠板归药材的质量检测方法。本发明通过对杠板归中槲皮素的含量进行定量研究并以槲皮素和槲皮素-3-o-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯为对照进行薄层色谱研究，完善了杠板归药材的质量检测标准，弥补了现有质量检测技术的不足，使杠板归药材的质量检测技术更为科学、合理。本发明所述质量检测方法包括性状、鉴别、检査、含量测定项目中的部分或全部，所述鉴别包括以槲皮素对照品为对照、以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=210:i3:o.5i.5:o.2o.7为展开剂的薄层色谱法和/或以槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品为对照、以甲醇甲酸水=711:o.2o.8:o.2o.6为展开剂的薄层色谱法；含量测定是对药材中所含槲皮素的含量测定，槲皮素的含量测定方法是以槲皮素对照品为对照、以有机相水相=1040:9060的高效液相色谱法。具体的薄层色谱鉴别方法为(1)取杠板归药材2g，用7090。/。乙醇回流提取l2h，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇12mL溶解，作为供试品溶液；精密称取槲皮素对照品适量，用甲醇制成0.10.5mgml—1的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和槲皮素对照品溶液各25uL，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=210:i3:o.51.5:o.2o.7为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%2%三氯化铝乙醇溶液，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与槲皮素对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点；(2)取杠板归药材2g，用70%90%乙醇回流提取1211，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇12mL溶解，作为供试品溶液；精密称取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品适量，用甲醇制成O.10.5mgml4的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和槲皮素-3-O-{3-0-葡萄糖醛酸正丁酯对照品溶液各25yL，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以甲醇甲酸水=711:o.2o.8:o.2o.6为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%2%三氯化铝乙醇溶液，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与槲皮素-3-o-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点。具体的槲皮素含量测定方法为照《中国药典》一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂；以有机相水相=1040:9060为流动相；柱温为2535。C;检测波长为340370nm;理论板数按槲皮素峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每lmL含O.010.05mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取杠板归药材中粉lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入37呢盐酸无水乙醇溶液2050mL，称定重量，加热回流提取36小时，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液l5mL，水浴挥干，残渣加甲醇溶解，定容至10mL，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各520uL，注入液相色谱仪，观使，即得；杠板归按干燥品计算，含槲皮素C巧Hw07重量不得少于0.20%。以上所述的有机相为乙腈或甲醇，所述的水相为质量浓度0.001%5%的甲酸、乙酸或磷酸水溶液。流动相中的有机相优选为乙腈，水相优选为质量浓度O.02%磷酸溶液，有机相与水相的体积比优选为30:70。本发明最全面的质量检测方法包括以下项目性状茎略呈方形，有棱角，多分枝，直径达0.2cm，表面紫红色、棕黄色或黄绿色，棱角上有倒钩刺，节略膨大，节间长26cm，断面纤维性，黄白色，有髓或中空；叶互生，有长柄，盾状着生；叶片多皱縮，展开后呈近等边三角形，灰绿色至红棕色，下表面叶脉及叶柄均有倒生钩刺；托叶鞘包于茎节上或脱落；短穗状花序顶生或生于上部叶腋，苞片圆形，花小，多萎縮或脱落；气微，茎味淡，叶味酸；鉴别(1)茎横切面表皮为一列厚壁细胞，内含红棕色物质；皮层薄，35列细胞;嫩茎中柱鞘纤维束连续成环层，老茎被射线割断成断续环层，细胞壁厚，木化；韧皮部老茎具韧皮纤维，壁厚木化，形成层明显；木质部导管大，单个或35个成群；髓部细胞大，有的中空；老茎在皮层、韧皮部、射线及髓部可见多数草酸钙簇晶，嫩茎则少见或无；(2)叶的表面观上表皮细胞不规则多角形，垂周壁近平直或微弯曲；其下有类圆形的分泌细胞，直径65um;腺毛少数，头部2-8细胞，柄短；下表皮细胞垂周壁波状弯曲；气孔平轴式或不等式，腺毛稍多；非腺毛多为单细胞；主脉和叶缘疏生由多列斜方形或长方形细胞组成的钩状刺；叶肉细胞含草酸钙簇晶，直径17-62um;(3)取杠板归药材2g，用7090。/。乙醇回流提取l2h，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇12mL溶解，作为供试品溶液；精密称取槲皮素对照品适量，用甲醇制成0.10.5mgml—1的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和槲皮素对照品溶液各25uL，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=210:i3:o.51.5:o.2o.7为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%2%三氯化铝乙醇溶液，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与槲皮素对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点；(4)取杠板归药材2g，用70%90%乙醇回流提取1211，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇12mL溶解，作为供试品溶液；精密称取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品适量，用甲醇制成O.10.5mgml—i的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和槲皮素-3-O-{3-0-葡萄糖醛酸正丁酯对照品溶液各25yL，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以甲醇甲酸水=711:o.2o.8:o.2o.6为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%2%三氯化铝乙醇溶液，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与槲皮素-3-o-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点检査(1)水分照《中国药典》一部附录IXH第一法水分测定法测定，不得超过14.0%;(2)总灰分照《中国药典》一部附录IXK测定，不得超过10.0%;(3)浸出物水溶性浸出物照《中国药典》一部附录XA水溶性浸出物测定法项下的冷浸法测定，不得少于13.0%;醇溶性浸出物照《中国药典》一部附录XA醇溶性浸出物测定法项下的冷浸法测定，乙醇作为溶剂，不得少于11.0%;含量测定照《中国药典》一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂；以有机相水相=1040:9060为流动相；柱温为2535。C;检测波长为340370nm;理论板数按槲皮素峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每lmL含O.010.05mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取杠板归药材中粉lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入37呢盐酸无水乙醇溶液2050mL，称定重量，加热回流提取36小时，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液l5mL，水浴挥干，残渣加甲醇溶解，定容至10mL，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各520uL，注入液相色谱仪，观使，即得；杠板归按干燥品计算，含槲皮素C巧Hw07重量不得少于0.20%。优选的质量检测方法包括以下项目性状茎略呈方形，有棱角，多分枝，直径达0.2cm，表面紫红色、棕黄色或黄绿色，棱角上有倒钩刺，节略膨大，节间长26cm，断面纤维性，黄白色，有髓或中空；叶互生，有长柄，盾状着生；叶片多皱縮，展开后呈近等边三角形，灰绿色至红棕色，下表面叶脉及叶柄均有倒生钩刺；托叶鞘包于茎节上或脱落；短穗状花序顶生或生于上部叶腋，苞片圆形，花小，多萎縮或脱落；气微，茎味淡，叶味酸；鉴别(1)茎横切面表皮为一列厚壁细胞，内含红棕色物质；皮层薄，35列细胞;嫩茎中柱鞘纤维束连续成环层，老茎被射线割断成断续环层，细胞壁厚，木化；韧皮部老茎具韧皮纤维，壁厚木化，形成层明显；木质部导管大，单个或35个成群；髓部细胞大，有的中空；老茎在皮层、韧皮部、射线及髓部可见多数草酸钙簇晶，嫩茎则少见或无；(2)叶的表面观上表皮细胞不规则多角形，垂周壁近平直或微弯曲；其下有类圆形的分泌细胞，直径65um;腺毛少数，头部2-8细胞，柄短；下表皮细胞垂周壁波状弯曲；气孔平轴式或不等式，腺毛稍多；非腺毛多为单细胞；主脉和叶缘疏生由多列斜方形或长方形细胞组成的钩状刺；叶肉细胞含草酸钙簇晶，直径17-62um;(3)取杠板归药材2g，用90。/。乙醇回流提取2h，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇lmL溶解，作为供试品溶液；精密称取槲皮素对照品适量，用甲醇制成0.lmgml4的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和槲皮素对照品溶液各5uL，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=8:2:l:0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与槲皮素对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点；(4)取杠板归药材2g，用90。/。乙醇回流提取2h，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇lmL溶解，作为供试品溶液；精密称取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品适量，用甲醇制成0.lmgml4的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯对照品溶液各5yL，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以甲醇甲酸水=9:0.5:0.4为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与槲皮素-3-O-P-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点；检査(1)水分照《中国药典》一部附录IXH第一法水分测定法测定，不得超过14.0%;(2)总灰分照《中国药典》一部附录IXK测定，不得超过10.0%;(3)浸出物水溶性浸出物照《中国药典》一部附录XA水溶性浸出物测定法项下的冷浸法测定，不得少于13.0%;醇溶性浸出物照《中国药典》一部附录XA醇溶性浸出物测定法项下的冷浸法测定，乙醇作为溶剂，不得少于11.0%;含量测定照《中国药典》一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈0.02%磷酸溶液=30:70为流动相；柱温为25'C;检测波长为370nm;理论板数按槲皮素峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每lmL含O.02mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取杠板归药材中粉lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入5%盐酸无水乙醇溶液25mL，称定重量，加热回流提取4小时，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液2mL，水浴挥干，残渣加甲醇溶解，定容至10mL，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20uL，注入液相色谱仪，测定，即得；杠板归按干燥品计算，含槲皮素C巧Hw07重量不得少于0.20%。杠板归(Polygo皿mperfoliatumL.)药材收载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》2003年版，该标准对杠板归的性状、茎叶的显微鉴别进行了描述，同时采用咖啡酸为对照品，建立了杠板归的薄层色谱鉴别方法。这些方法均是从定性的角度建立的，已经不能满足杠板归应用发展的需要，为此，本发明人对其质量标准进行了提升研究。通过査阅国内外文献资料发现杠板归的化学成分研究报道很少，活性成分不明确，为此，发明人对杠板归的化学成分进行了系统的研究，研究结果表明黄酮类化合物是其主要化学成分。黄酮类化合物具有抗氧化、清除氧自由基作用；调节心血管系统作用；抗炎免疫及抗衰老等作用。为了更有效的控制药材质量，根据杠板归所含的主要成分之一槲皮素的特点，采用高效液相色谱法进行了含量测定，并对含量测定进行了方法学研究。以下是本发明人对杠板归的质量检测方法进行实验研究并优选的过程一、检査项目l.水分照水分测定法(《中国药典》一部附录IXH第一法)测定。发明人测定了20个不同产地的杠板归药材中水分的含量，结果见表l:表l不同产地杠板归药<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>各产地杠板归药材的水分含量平均值为11.9%，最高值为13.5%。由于不同产地的地域差异性，暂定水分含量不得超过14.0%，将其列入质量检测标准。2.灰分照灰分测定法《中国药典》一部附录IXK测定，发明人测定了20个不同产地的杠板归药材中灰分的含量，结果见表2:表2不同产地杠板归药j<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>各产地杠板归药材的灰分含量平均值为8.06%，最高值为8.8%。由于不同产地的地域差异性，暂定灰分含量不得超过IO.0%，将其列入质量检测标准。3.浸出物按照浸出物测定法项下的冷浸法(《中国药典》一部附录XA)分别对杠板归的水溶性浸出物和醇溶性浸出物进行了测定，测定结果如下(1)水溶性浸出物照水溶性浸出物测定法项下的冷浸法(《中国药典》一部附录XA)分别测定了20个不同产地的杠板归药材，测定结果见表3:表3不同产J也杠板归药材水溶性浸出物测定结果表(n=3)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>各产地杠板归药材的水溶性浸出物含量平均值为16.61%，由于不同产地的地域差异性，按平均值下浮20%作为水溶性浸出物的最低限，g卩16.61%X(1-20%)=13.29%^13.0%，将其列入质量检测标准。(2)醇溶性浸出物照醇溶性浸出物测定法项下的冷浸法(《中国药典》一部附录XA)，以乙醇作为溶剂，分别测定了20个不同产地的杠板归药材，测定结果见表4:表4不同产地杠板归药材醇溶性浸出物测定结果表(n=3)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>各产地杠板归药材的醇溶性浸出物含量平均值为13.56%，由于不同产地的地域差异性，按平均值下浮20%作为醇溶性浸出物的最低限，g卩13.56%X(1-20%)=10.85%^11.0%，将其列入质量检测标准。二、薄层色谱鉴别方法的建立l.试药薄层层析硅胶G254，分析纯(青岛海洋化工厂)；聚酰胺薄层层析板(安徽皖西硅源材料厂);定量毛细管(DrummondScientificCo.USA.);槲皮素和槲皮素-3-0-P-D-葡萄糖醛酸正丁酯(自制)通过波谱解析技术(IR、"H-NMR、"C-NMR、MS)分析，鉴定其结构；甲醇、氯仿、醋酸乙酯等均为分析纯。2.实验材料共收集了20批样品，来自贵州花溪、牛郎关大兴田、贵州沿河、贵州贞丰、河南省光山县文殊乡、湖南辰溪等地，经贵阳中医学院何顺志研究员鉴定为Polygo皿mperfoliatumL.。3.方法与结果3.1方法取杠板归药材(三号筛)2g，用90。/。乙醇回流提取2h，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇lmL溶解，作为供试品溶液。另分别精密称取槲皮素和槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品适量，分别用甲醇制成O.lmgml4的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液和槲皮素对照品溶液各5uL，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酉^甲醇-甲酸(8:2:1:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置紫外灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与槲皮素对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液和槲皮素-3-0-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯对照品溶液各5yL，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以甲醇-甲酸-水(9:0.5:0.4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置紫外灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与槲皮素-3-O-{3-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点。3.2结果供试品色谱在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点。同时不同产地的杠板归药材在薄层色谱上有所区别。三、槲皮素含量测定方法的建立1.仪器与试药高效液相色谱仪AglientIIOO高效液相色谱仪(四元泵，DAD检测器，自动进样器);CT0-10Asvp柱温箱(美国)；十万分之一天平(梅特勒托利多)。色谱乙腈(天津市科密欧化学试剂开发中心)；水(重蒸水，临用前制备)；盐酸、磷酸等(分析醇)；槲皮素对照品(中国生物制品鉴定所，批号110257-200201);杠板归药材(20个不同产地)。2.色谱条件色谱柱HypersilODS(4.6X250mm)柱，乙腈-0.02%磷酸(30:70)为流动相，流速为lmlmin—\检测波长370nm，柱温25。C。3.提取条件的选择(1)提取溶剂的选择取同一批杠板归(贵州黔西县)药材3份，每份lg，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，分别精密加入无水乙醇(含5%盐酸)、50%甲醇(含5%盐酸)、甲醇(含5%盐酸)各25mL，称定重量，超声提取30min，分别用所加溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液2mL，水浴挥干，残渣加甲醇溶解，定容至10mL，摇匀，滤过，即得。按上述含量测定方法测定，计算，结果见表5。表5提取溶剂的选择<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>由表5可知，各种不同溶剂的提取效果相比较，无水乙醇效果最好，甲醇次之，50%甲醇最差，故选择无水乙醇作为提取溶剂。(2)提取方法考査方法一超声提取取同一批杠板归(贵州黔西县)药材lg，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇(含5%盐酸)25mL，称定重量，超声提取2次，每次30min，滤过，合并滤液，浓縮，用无水乙醇定容至25mL，摇匀，滤过，取续滤液2mL，水浴挥干，残渣加甲醇溶解，定容至10mL，摇匀，滤过，即得。方法二回流提取取同一批杠板归(贵州黔西县)药材lg，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇(含5%盐酸)25mL，称定重量，回流提取3小时，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液2mL，水浴挥干，残渣加甲醇溶解，定容至10mL，摇匀，滤过，即得。按上述含量测定方法测定，计算，结果见表6。表6提取方法白<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>由表6可知，回流提取效果明显优于超声提取，故采用回流提取作为提取方法。(3)回流时间的考査取同一批杠板归(贵州黔西县)药材5份，每份lg，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇(含5%盐酸)25mL，称定重量，分别回流提取2、3、4、5、6小时，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液2mL，水浴挥干，残渣加甲醇溶解，定容至10mL，摇匀，滤过，即得。按上述含量测定方法测定，计算，结果见表7。表7回流时间考査结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>由表7可知，回流提取4小时即可将杠板归中的槲皮素提取完全。(4)提取溶剂酸度考査取同一批杠板归(贵州黔西县)药材4份，每份lg，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，分别精密加入无水乙醇25mL(无水乙醇中含盐酸的浓度分别为4%、5%、6%、7%)，称定重量，回流提取4小时，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液2mL，水浴挥干，残渣加甲醇溶解，定容至10mL，摇匀，滤过，即得。按上述含量测定方法测定，计算，结果见表8。表8提取溶剂酸度考査结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>由表8结果可知，选择5.0%的盐酸无水乙醇作为提取溶剂，提取效果与6.0%及7.0%的盐酸无水乙醇相似，没有明显差异，考虑到实际情况，选择5.0%的盐酸无水乙醇作为提取溶剂(5)药材粒度的考察取同一批杠板归(贵州黔西县)药材4份，分别粉碎成粗粉、中粉、细粉、最细粉，称取各种规格的药粉约lg，分别精密加入无水乙醇(含5%盐酸)25mL，称定重量，回流提取4小时，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液2mL，水浴挥干，残渣加甲醇溶解，定容至10mL，摇匀，滤过，制备成供试品溶液，按照本发明所述的色谱条件测定槲皮素的含量，结果表明，把杠板归药材粉碎成中粉后测定其中槲皮素的含量最为适宜，试验结果见<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>4.系统适应性试验分别精密吸取槲皮素对照品溶液、杠板归药材供试品溶液和试剂空白溶液各20uL，注入液相色谱仪，测定，槲皮素的保留时间约为11.7分钟，本试验条件下槲皮素与其他组分峰的分离度大于1.5，阴性无干扰，理论板数按槲皮素峰计均高于3000，故规定理论板数按槲皮素峰计不低于3000。5.检测波长的选择在液相色谱仪上，于200400nm范围内进行全波扫描，结果显示槲皮素的最大吸收波长为370nm，故选定370nm为杠板归中槲皮素的检测波长。6.槲皮素的纯度检査经过面积归一化法计算，其纯度为99.78%。7.线性关系的考察精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的槲皮素对照品IO.26mg置100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每lmL含槲皮素O.1026mg的对照品贮备液。分别精密吸取该对照品贮备液O.5mL、l.OmL、1.5mL、2.OmL、2.5mL、3.OmL、3.5mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成系列对照品溶液。分别精密吸取该对照品系列溶液各20uL，注入高效液相色谱仪，按本发明所述色谱条件测定峰面积，记录色谱图，结果见表IO，并以对照品的进样量X(yg)为横坐标，峰面积值Y为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明，槲皮素在O.10260.7182yg范围内线性关系良好。表IO槲皮素线性关系考査结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>回归方程y=3817.60x-110.86，g=0.9998。经拟合过原点的方程为y=3601.50x，相关系数g4.9997。将一样品的峰面积代入上两式，结果相对偏差为0.14%，可认为截距为零，可用外标一点法计算含量，槲皮素在O.10260.7182yg范围内有良好的线性关系。8.精密度试验精密量取槲皮素对照品溶液(浓度0.4104mg/mL)20uL，重复进样6次，记录色谱图，结果列于表ll，其RSD为0.05y。，说明该方法具有良好的精密度。表ll槲皮素精密度实验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>9.重复性试验取同一批杠板归(贵州黔西县)药材中粉各lg，共6份，按本发明所述含量测定方法中供试品溶液的制备方法制备供试液。精密吸取供试品溶液各20yL，注入高效液相色谱仪，按本发明所述色谱条件测定槲皮素峰面积积分值，计算含量，求相对标准偏差。结果表明，此方法测定槲皮素的重现性良好，RSD=1.89%。结果见表12。表12重现性试验结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>io.稳定性试验取同一批杠板归(贵州黔西县)药材中粉lg，按本发明所述含量测定方法中供试品溶液的制备方法制备供试液，在室温下按表13规定时间进样，测定槲皮素峰面积，求相对标准偏差。结果表明，槲皮素至少在36小时内基本稳定，RSD=1.2%。结果见表13。表13槲皮素稳定性实验结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>ll.准确度试验采用加样回收试验，取已知含量的重复性试验的同一批样品(贵州黔西县，槲皮素平均含量为O.264%，g卩2.64mg/g)9份，精密称取各约O.5g，13份分别加入槲皮素对照品溶液(0.50mg/mL)2.OmL，46份分别加入槲皮素对照品溶液(0.50mg/mL)2.6mL，79份分别加入槲皮素对照品溶液(0.50mg/mL)3.2mL，按供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液，照上述色谱条件，进样、测定，记录色谱图，计算含量，求相对标准偏差。结果表明，此方法具有较好的加样回收率，结果见表14。表14回收率试验结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>12.耐用性试验取同一批杠板归(贵州黔西县)药材中粉lg，共3份，按本发明所述方法处理样品，得供试品溶液，备用，进行以下色谱条件的对比考査研究流动相组成及比例变化、不同色谱柱比较、不同柱温比较、不同流速比较、不同检测波长比较，考査结果见表15-19。表15流动相组成及比例变化考査结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>表18不同流速比较考査结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>13.样品测定按本发明所述方法制备供试品和对照品溶液，分别进样，记录色谱图，计算槲皮素的含量，结果见表20。表2020批药材中槲皮素含量测定结果表(n=2)<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>与现有技术相比，本发明通过建立杠板归药材中槲皮素的含量测定方法和以槲皮素及槲皮素-3-o-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯为对照的薄层色谱鉴别方法，完善了杠板归药材的质量检测标准，弥补了现有质量检测技术的不足，使杠板归药材的质量检测技术更为科学、合理；本发明所述质量检测方法的精密度高，重现性好，稳定性好，回收率高，测量结果准确，可有效控制杠板归药材的质量，从而确保其临床应用的安全性和有效性。具体实施例方式以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。本发明的实施例l:杠板归药材的质量检测方法包括以下项目性状茎略呈方形，有棱角，多分枝，直径达0.2cm，表面紫红色、棕黄色或黄绿色，棱角上有倒钩刺，节略膨大，节间长26cm，断面纤维性，黄白色，有髓或中空；叶互生，有长柄，盾状着生；叶片多皱縮，展开后呈近等边三角形，灰绿色至红棕色，下表面叶脉及叶柄均有倒生钩刺；托叶鞘包于茎节上或脱落；短穗状花序顶生或生于上部叶腋，苞片圆形，花小，多萎縮或脱落；气微，茎味淡，叶味酸。鉴别(1)茎横切面表皮为一列厚壁细胞，内含红棕色物质；皮层薄，35列细胞;嫩茎中柱鞘纤维束连续成环层，老茎被射线割断成断续环层，细胞壁厚，木化；韧皮部老茎具韧皮纤维，壁厚木化，形成层明显；木质部导管大，单个或35个成群；髓部细胞大，有的中空；老茎在皮层、韧皮部、射线及髓部可见多数草酸钙簇晶，嫩茎则少见或无。(2)叶的表面观上表皮细胞不规则多角形，垂周壁近平直或微弯曲；其下有类圆形的分泌细胞，直径65um;腺毛少数，头部2-8细胞，柄短；下表皮细胞垂周壁波状弯曲；气孔平轴式或不等式，腺毛稍多；非腺毛多为单细胞；主脉和叶缘疏生由多列斜方形或长方形细胞组成的钩状刺；叶肉细胞含草酸钙簇晶，直径17-62um。(3)取杠板归药材2g，用90。/。乙醇回流提取2h，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇lmL溶解，作为供试品溶液；精密称取槲皮素对照品适量，用甲醇制成0.lmgml4的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和槲皮素对照品溶液各5uL，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=8:2:1:0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与槲皮素对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点。(4)取杠板归药材2g，用90。/。乙醇回流提取2h，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇lmL溶解，作为供试品溶液；精密称取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品适量，用甲醇制成0.lmgml4的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯对照品溶液各5yL，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以甲醇甲酸水=9:0.5:0.4为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与槲皮素-3-O-P-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点。检査(1)水分照《中国药典》一部附录IXH第一法水分测定法测定，不得超过14.0%。(2)总灰分照《中国药典》一部附录IXK测定，不得超过10.0%。(3)浸出物水溶性浸出物照《中国药典》一部附录XA水溶性浸出物测定法项下的冷浸法测定，不得少于13.0%;醇溶性浸出物照《中国药典》一部附录XA醇溶性浸出物测定法项下的冷浸法测定，乙醇作为溶剂，不得少于11.0%。含量测定照《中国药典》2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈0.02%(质量浓度)磷酸溶液=30:70为流动相；柱温为25。C;检测波长为370nm;理论板数按槲皮素峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每lmL含O.02mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取杠板归药材中粉lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入5%盐酸无水乙醇溶液25mL，称定重量，加热回流提取4小时，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液2mL，水浴挥干，残渣加甲醇溶解，定容至10mL，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20uL，注入液相色谱仪，测定，即得。杠板归按干燥品计算，含槲皮素(C15H1907)重量不得少于0.20%。本发明的实施例2:杠板归药材的质量检测方法可以仅含以下项目鉴别(1)茎横切面表皮为一列厚壁细胞，内含红棕色物质；皮层薄，35列细胞;嫩茎中柱鞘纤维束连续成环层，老茎被射线割断成断续环层，细胞壁厚，木化；韧皮部老茎具韧皮纤维，壁厚木化，形成层明显；木质部导管大，单个或35个成群；髓部细胞大，有的中空；老茎在皮层、韧皮部、射线及髓部可见多数草酸钙簇晶，嫩茎则少见或无。(2)取杠板归药材2g，用80。/。乙醇回流提取lh，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇2mL溶解，作为供试品溶液；精密称取槲皮素对照品适量，用甲醇制成0.3mgml4的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和槲皮素对照品溶液各2uL，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=10:3:1.5:0.7为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝乙醇溶液，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与槲皮素对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点。检査(1)水分照《中国药典》一部附录IXH第一法水分测定法测定，不得超过14.0%。(2)浸出物水溶性浸出物照《中国药典》一部附录XA水溶性浸出物测定法项下的冷浸法测定，不得少于13.0%;醇溶性浸出物照《中国药典》一部附录XA醇溶性浸出物测定法项下的冷浸法测定，乙醇作为溶剂，不得少于11.0%。含量测定照《中国药典》2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈0.01%(质量浓度)乙酸溶液=35:65为流动相；柱温为3(TC;检测波长为350nm;理论板数按槲皮素峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每lmL含O.Olmg的溶液，即得。供试品溶液的制备取杠板归药材中粉lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入4%盐酸无水乙醇溶液35mL，称定重量，加热回流提取3小时，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液3mL，水浴挥干，残渣加甲醇溶解，定容至10mL，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各8uL，注入液相色谱仪，观使，即得杠板归按干燥品计算，含槲皮素(C15H1907)重量不得少于0.20%。本发明的实施例3:杠板归药材的质量检测方法可以仅含以下项目鉴别(1)叶的表面观上表皮细胞不规则多角形，垂周壁近平直或微弯曲；其下有类圆形的分泌细胞，直径65um;腺毛少数，头部2-8细胞，柄短；下表皮细胞垂周壁波状弯曲；气孔平轴式或不等式，腺毛稍多；非腺毛多为单细胞；主脉和叶缘疏生由多列斜方形或长方形细胞组成的钩状刺；叶肉细胞含草酸钙簇晶，直径17-62ym。(2)取杠板归药材2g，用80。/。乙醇回流提取lh，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇2mL溶解，作为供试品溶液；精密称取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品适量，用甲醇制成0.3mgml4的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯对照品溶液各2yL，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以甲醇甲酸水=11:0.8:o.e为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝乙醇溶液，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与槲皮素-3-O-P-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点。检査(1)水分照《中国药典》一部附录IXH第一法水分测定法测定，不得超过14.0%。(2)总灰分照《中国药典》一部附录IXK测定，不得超过10.0%。含量测定照《中国药典》2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇0.03%(质量浓度)甲酸溶液=20:80为流动相；柱温为35。C;检测波长为360nm;理论板数按槲皮素峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每lmL含O.03mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取杠板归药材中粉lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入6%盐酸无水乙醇溶液45mL，称定重量，加热回流提取5小时，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液4mL，水浴挥干，残渣加甲醇溶解，定容至10mL，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15uL，注入液相色谱仪，测定，即得。杠板归按干燥品计算，含槲皮素(C15H1907)重量不得少于0.20%。本发明的实施例4:杠板归药材的质量检测方法可以含以下项目性状茎略呈方形，有棱角，多分枝，直径达0.2cm，表面紫红色、棕黄色或黄绿色，棱角上有倒钩刺，节略膨大，节间长26cm，断面纤维性，黄白色，有髓或中空；叶互生，有长柄，盾状着生；叶片多皱縮，展开后呈近等边三角形，灰绿色至红棕色，下表面叶脉及叶柄均有倒生钩刺；托叶鞘包于茎节上或脱落；短穗状花序顶生或生于上部叶腋，苞片圆形，花小，多萎縮或脱落；气微，茎味淡，叶味酸。鉴别(1)取杠板归药材2g，用70。/。乙醇回流提取1.5h，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇1.5mL溶解，作为供试品溶液；精密称取槲皮素对照品适量，用甲醇制成0.5mgml4的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和槲皮素对照品溶液各5uL，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=3:1:0.5:0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与槲皮素对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点。(2)取杠板归药材2g，用70。/。乙醇回流提取1.5h，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇1.5mL溶解，作为供试品溶液；精密称取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品适量，用甲醇制成0.5mgml4的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯对照品溶液各5yL，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以甲醇甲酸水=7:0.2:0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与槲皮素-3-O-P-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点。检査浸出物水溶性浸出物照《中国药典》一部附录XA水溶性浸出物测定法项下的冷浸法测定，不得少于13.0%;醇溶性浸出物照《中国药典》一部附录XA醇溶性浸出物测定法项下的冷浸法测定，乙醇作为溶剂，不得少于11.0%。含量测定照《中国药典》一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈0.05%(质量浓度)磷酸溶液=25:75为流动相；柱温为25。C;检测波长为340nm;理论板数按槲皮素峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每lmL含O.05mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取杠板归药材中粉lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入3%盐酸无水乙醇溶液30mL，称定重量，加热回流提取6小时，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5mL，水浴挥干，残渣加甲醇溶解，定容至10mL，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10uL，注入液相色谱仪，测定，即得。杠板归按干燥品计算，含槲皮素(C15H1907)重量不得少于0.20%。权利要求1.一种杠板归药材的质量检测方法，所述质量检测方法包括性状、鉴别、检查、含量测定项目中的部分或全部，其特征在于所述鉴别包括以槲皮素对照品为对照、以三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸＝2～10∶1～3∶0.5～1.5∶0.2～0.7为展开剂的薄层色谱法和/或以槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品为对照、以甲醇∶甲酸∶水＝7～11∶0.2～0.8∶0.2～0.6为展开剂的薄层色谱法；含量测定是对药材中所含槲皮素的含量测定，槲皮素的含量测定方法是以槲皮素对照品为对照、以有机相∶水相＝10～40∶90～60的高效液相色谱法。2.按照权利要求l所述杠板归药材的质量检测方法，其特征在于具体的薄层色谱鉴别方法为(1)取杠板归药材2g，用7090。/。乙醇回流提取l2h，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇12mL溶解，作为供试品溶液；精密称取槲皮素对照品适量，用甲醇制成0.10.5mgml-l的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和槲皮素对照品溶液各25uL，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=210:i3:o.51.5:o.2o.7为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%2%三氯化铝乙醇溶液，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与槲皮素对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点；(2)取杠板归药材2g，用70%90%乙醇回流提取1211，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇l2mL溶解，作为供试品溶液；精密称取槲皮素-3-O-6-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品适量，用甲醇制成O.10.5mgml-l的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯对照品溶液各25yL，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以甲醇甲酸水=711:o.2o.8:o.2o.6为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%2%三氯化铝乙醇溶液，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与槲皮素-3-o-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点。3.按照权利要求l所述杠板归药材的质量检测方法，其特征在于具体的槲皮素含量测定方法为照《中国药典》一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂；以有机相水相=1040:9060为流动相；柱温为2535。C;检测波长为340370nm;理论板数按槲皮素峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每lmL含O.010.05mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取杠板归药材中粉lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入37呢盐酸无水乙醇溶液2050mL，称定重量，加热回流提取36小时，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液l5mL，水浴挥干，残渣加甲醇溶解，定容至10mL，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各520uL，注入液相色谱仪，测定，即得；杠板归按干燥品计算，含槲皮素C15H1907重量不得少于0.20%。4按照权利要求3所述杠板归药材的质量检测方法，其特征在于所述的有机相为乙腈或甲醇，所述的水相为质量浓度O.001%5%的甲酸、乙酸或磷酸水溶液。5按照权利要求3或4所述杠板归药材的质量检测方法，其特征在于:流动相中的有机相为乙腈，水相为质量浓度O.02%磷酸溶液，有机相与水相的体积比为30二706按照权利要求l、2或3所述杠板归药材的质量检测方法，其特征在于所述质量检测方法包括以下项目性状茎略呈方形，有棱角，多分枝，直径达0.2cm，表面紫红色、棕黄色或黄绿色，棱角上有倒钩刺，节略膨大，节间长26cm，断面纤维性，黄白色，有髓或中空；叶互生，有长柄，盾状着生；叶片多皱縮，展开后呈近等边三角形，灰绿色至红棕色，下表面叶脉及叶柄均有倒生钩刺；托叶鞘包于茎节上或脱落；短穗状花序顶生或生于上部叶腋，苞片圆形，花小，多萎縮或脱落；气微，茎味淡，叶味酸；鉴别(1)茎横切面表皮为一列厚壁细胞，内含红棕色物质；皮层薄，35列细胞;嫩茎中柱鞘纤维束连续成环层，老茎被射线割断成断续环层，细胞壁厚，木化；韧皮部老茎具韧皮纤维，壁厚木化，形成层明显；木质部导管大，单个或35个成群；髓部细胞大，有的中空；老茎在皮层、韧皮部、射线及髓部可见多数草酸钙簇晶，嫩茎则少见或无；(2)叶的表面观上表皮细胞不规则多角形，垂周壁近平直或微弯曲；其下有类圆形的分泌细胞，直径65ym;腺毛少数，头部2-8细胞，柄短；下表皮细胞垂周壁波状弯曲；气孔平轴式或不等式，腺毛稍多；非腺毛多为单细胞；主脉和叶缘疏生由多列斜方形或长方形细胞组成的钩状刺；叶肉细胞含草酸钙簇晶，直径17-62um;(3)取杠板归药材2g，用7090。/。乙醇回流提取l2h，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇12mL溶解，作为供试品溶液；精密称取槲皮素对照品适量，用甲醇制成0.10.5mgml-l的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和槲皮素对照品溶液各25uL，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=210:i3:o.51.5:o.2o.7为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%2%三氯化铝乙醇溶液，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与槲皮素对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点；(4)取杠板归药材2g，用70%90%乙醇回流提取1211，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇l2mL溶解，作为供试品溶液；精密称取槲皮素-3-O-6-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品适量，用甲醇制成O.10.5mgml-l的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯对照品溶液各25yL，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以甲醇甲酸水=711:o.2o.8:o.2o.6为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%2%三氯化铝乙醇溶液，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与槲皮素-3-o-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点；检査(1)水分照《中国药典》一部附录IXH第一法水分测定法测定，不得超过14.0%;(2)总灰分照《中国药典》一部附录IXK测定，不得超过10.0%;(3)浸出物水溶性浸出物照《中国药典》一部附录XA水溶性浸出物测定法项下的冷浸法测定，不得少于13.0%;醇溶性浸出物照《中国药典》一部附录XA醇溶性浸出物测定法项下的冷浸法测定，乙醇作为溶剂，不得少于11.0%;含量测定照《中国药典》一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂；以有机相水相=1040:9060为流动相；柱温为2535。C;检测波长为340370nm;理论板数按槲皮素峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每lmL含O.010.05mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取杠板归药材中粉lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入37呢盐酸无水乙醇溶液2050mL，称定重量，加热回流提取36小时，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液l5mL，水浴挥干，残渣加甲醇溶解，定容至10mL，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各520uL，注入液相色谱仪，测定，即得；杠板归按干燥品计算，含槲皮素C15H1907重量不得少于0.20%。7.按照权利要求6所述杠板归药材的质量检测方法，其特征在于所述质量检测方法包括以下项目性状茎略呈方形，有棱角，多分枝，直径达0.2cm，表面紫红色、棕黄色或黄绿色，棱角上有倒钩刺，节略膨大，节间长26cm，断面纤维性，黄白色，有髓或中空；叶互生，有长柄，盾状着生；叶片多皱縮，展开后呈近等边三角形，灰绿色至红棕色，下表面叶脉及叶柄均有倒生钩刺；托叶鞘包于茎节上或脱落；短穗状花序顶生或生于上部叶腋，苞片圆形，花小，多萎縮或脱落；气微，茎味淡，叶味酸；鉴别(1)茎横切面表皮为一列厚壁细胞，内含红棕色物质；皮层薄，35列细胞;嫩茎中柱鞘纤维束连续成环层，老茎被射线割断成断续环层，细胞壁厚，木化；韧皮部老茎具韧皮纤维，壁厚木化，形成层明显；木质部导管大，单个或35个成群；髓部细胞大，有的中空；老茎在皮层、韧皮部、射线及髓部可见多数草酸钙簇晶，嫩茎则少见或无；(2)叶的表面观上表皮细胞不规则多角形，垂周壁近平直或微弯曲；其下有类圆形的分泌细胞，直径65um;腺毛少数，头部2-8细胞，柄短；下表皮细胞垂周壁波状弯曲；气孔平轴式或不等式，腺毛稍多；非腺毛多为单细胞；主脉和叶缘疏生由多列斜方形或长方形细胞组成的钩状刺；叶肉细胞含草酸钙簇晶，直径17-62um;(3)取杠板归药材2g，用90。/。乙醇回流提取2h，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇lmL溶解，作为供试品溶液；精密称取槲皮素对照品适量，用甲醇制成0.lmgml-l的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和槲皮素对照品溶液各5uL，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=8:2:l:0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与槲皮素对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点；(4)取杠板归药材2g，用90。/。乙醇回流提取2h，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇lmL溶解，作为供试品溶液；精密称取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品适量，用甲醇制成0.lmgml-l的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯对照品溶液各5yL，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以甲醇甲酸水=9:0.5:0.4为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与槲皮素-3-O-P-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点；检査(1)水分照《中国药典》一部附录IXH第一法水分测定法测定，不得超过14.0%;(2)总灰分照《中国药典》一部附录IXK测定，不得超过10.0%;(3)浸出物水溶性浸出物照《中国药典》一部附录XA水溶性浸出物测定法项下的冷浸法测定，不得少于13.0%;醇溶性浸出物照《中国药典》一部附录XA醇溶性浸出物测定法项下的冷浸法测定，乙醇作为溶剂，不得少于11.0%;含量测定照《中国药典》一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈0.02%磷酸溶液=30:70为流动相；柱温为25'C;检测波长为370nm;理论板数按槲皮素峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每lmL含O.02mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取杠板归药材中粉lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入5%盐酸无水乙醇溶液25mL，称定重量，加热回流提取4小时，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液2mL，水浴挥干，残渣加甲醇溶解，定容至10mL，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20uL，注入液相色谱仪，测定，即得；杠板归按干燥品计算，含槲皮素C15H1907重量不得少于0.20%。全文摘要本发明公开了一种杠板归药材的质量检测方法，所述质量检测方法包括性状、鉴别、检查、含量测定项目中的部分或全部，所述鉴别包括以槲皮素对照品和/或以槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸正丁酯对照品为对照的薄层色谱法；含量测定是对药材中所含槲皮素的含量测定，槲皮素的含量测定方法是以槲皮素对照品为对照、以有机相∶水相＝10～40∶90～60的高效液相色谱法。与现有技术相比，本发明通过建立杠板归中槲皮素的含量测定方法和以槲皮素及槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸正丁酯为对照的薄层色谱鉴别方法，完善了杠板归药材的质量检测标准，弥补了现有质量检测技术的不足，使杠板归药材的质量检测技术更为科学、合理，可有效确保其临床应用的安全性和有效性。文档编号A61P7/10GK101549021SQ20091030286公开日2009年10月7日申请日期2009年6月3日优先权日2009年6月3日发明者欣周,超赵,赵鸿宾,陈华国申请人:贵州师范大学