吉祥草药材的质量检测方法

专利名称：：吉祥草药材的质量检测方法
技术领域：
：本发明涉及一种吉祥草药材的质量检测方法，属于对药材进行质量控制的
技术领域：
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背景技术：
：我国传统的中药及其制剂大多缺乏严密的质量标准和科学的检测手段，难以有效的控制其内在质量，不能保证用药的安全、有效，也不符合国际医药市场的要求，严重制约了我国中药行业的发展。加强中药材质量控制研究是中药规范化、标准化的关键问题。只有对中药材进行科学的质量控制，才能保证中药质量，实现中药的"安全、有效、稳定、可控"。吉祥草为百合科吉祥草属植物吉祥草Reineckiacarnea(Andr.)Kunth的干燥全草；喜温暖、湿润、半阴的环境，对土壤要求不严格，以排水良好肥沃壤土为宜；原产于中国长江流域以南各省及西南地区，日本也有分布。全年可采，洗净，鲜用或切段晒干。别名小青胆、小叶万年青、玉带草、观音草等。吉祥草为常用中药材，也是常用苗药。性味功能与主治甘，平；润肺止咳，祛风，接骨。用于肺结核，咳嗽咯血，慢性支气管炎，哮喘，风湿性关节炎；外用治跌打损伤，骨折等。以吉祥草作为君药的各种药剂在临床上已取得较好疗效。吉祥草药材成分复杂，主要包括以下几类糖类、皂苷、生物碱、木脂素、留类化合物、挥发油和有机酸类。近年来国内外有关于吉祥草化学成分研究的报道，但有关于吉祥草质量标准的研究文献报道很少，仅在《贵州省中药材、民族药材质量标准》2003年版中以吉祥草对照药材为对照进行了薄层色谱鉴别研究，另有其氯仿提取部位的薄层鉴别研究报道。因此，为了使吉祥草的临床应用更加安全、有效、科学、合理，必须加强其质量控制。
发明内容本发明的目的在于提供一种吉祥草药材的质量检测方法。本发明建立了以凯提皂苷元和剀提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷两个有效成分为对照的吉祥草薄层色谱鉴别方法和总皂苷的含量测定方法，完善了吉祥草药材的质量检测标准，弥补了现有质量检测技术的不足，使吉祥草药材的质量检测技术更为科学、合理。本发明所述质量检测方法包括性状、鉴别、含量测定项目中的部分或全部，所述鉴别是对凯提皂苷元和/或剀提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷的薄层色谱鉴别，含量测定是用紫外分光光度法对药材中所含总皂苷的含量测定。其中，凯提皂苷元的鉴别方法是以凯提皂苷元对照品为对照、以氯仿乙酸乙酯甲醇:水=12:35:2.53.o:o.8i.2为展开剂的薄层色谱法；剀提s-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷的鉴别方法是以剀提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品为对照、以氯仿乙酸乙酯甲醇水=13:35:23:ii.5的下层为展开剂的薄层色谱法。具体的鉴别方法为(1)将吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次0.51.5h，滤过，合并滤液，浓縮近干，用2040mL水溶解后，加入活性炭O.20.7g，加热，滤过，滤液转移至分液漏斗中，再用水饱和的正丁醇萃取24次，每次1530mL，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加25mL甲醇溶解，作为供试品溶液；精密称取凯提皂苷元对照品适量，加甲醇制成每lmL含0.51.0mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各25uL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和1030min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=12:35:2.53.0:0.81.2为展开剂，上行展开，展距812cm;取出，晾干，喷以2%8%硫酸乙醇溶液，105'C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试品溶液和凯提皂苷元对照品呈现相同颜色的斑点；(2)将吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次0.51.5h，滤过，合并滤液，浓縮近干，用2060mL水溶解，转移至分液漏斗中，用石油醚萃取25次，每次1020mL，弃去石油醚液，再用水饱和的正丁醇萃取25次，每次1020mL，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加l5mL甲醇溶解，作为供试品溶液；精密称取剀提5-0-{3-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品适量，加甲醇制成每lmL含O.51.Omg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各25yL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和1030min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=13:35:23:11.5的下层为展开剂，上行展开，展距812cm;取出，晾干，喷以3%6%硫酸乙醇溶液，105'C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试品溶液和剀提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品呈现相同颜色的斑点。总皂苷的含量测定方法是以凯提皂苷元对照品为对照的紫外分光光度法。具体的总皂苷含量测定方法为照《中国药典》一部附录VIE紫外分光光度法测定供试品溶液的制备取吉祥草药材，粉碎，过2060目筛，精密称取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入6090X乙醇2060mL水浴回流35次，每次l3h，合并提取液，滤过，挥干；加水1030mL溶解，用石油醚萃取35次，每次1030mL，弃去石油醚液，水层再用水饱和正丁醇萃取36次，每次1030mL，回收正丁醇液，挥干，用甲醇定容至2550mL，即得供试品溶液；对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的凯提皂苷元对照品适量，用甲醇溶解制成浓度为O.100.50mg/mL的溶液，即得；测定法分别精密量取凯提皂苷元对照品溶液O.5mL与供试品溶液5mL，置水浴中挥干溶剂，精密加入3%8%香草醛冰醋酸溶液0.100.50ml，高氯酸O.100.50ml，密塞，于608(TC水浴恒温加热1030分钟，取出后立即用冰水冷却5min，加冰醋酸48mL，摇匀，以甲醇同法制备空白作参比；按照分光光度法在440460nm波长处测定吸收光谱，空白溶液无干扰；用标准曲线法计算含量；吉祥草药材中总皂苷提取物的含量应不低于2%。本发明所述质量检测方法包括以下项目性状干燥全草呈黄褐色，根茎细长，节明显，节上有残留的膜质鳞叶，并有少数弯曲巻縮的须状根，叶皱縮；鉴别(1)将吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次O.51.5h，滤过，合并滤液，浓縮近干，用2040mL水溶解后，加入活性炭O.20.7g，加热，滤过，滤液转移至分液漏斗中，再用水饱和的正丁醇萃取24次，每次1530mL，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加25mL甲醇溶解，作为供试品溶液；精密称取凯提皂苷元对照品适量，加甲醇制成每lmL含0.51.0mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各25uL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和io30min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=12:35:2.53.0:0.81.2为展开剂，上行展开，展距812cm;取出，晾干，喷以2%8%硫酸乙醇溶液，105'C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试品溶液和凯提皂苷元对照品呈现相同颜色的斑点；(2)将吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次0.51.5h，滤过，合并滤液，浓縮近干，用2060mL水溶解，转移至分液漏斗中，用石油醚萃取25次，每次1020mL，弃去石油醚液，再用水饱和的正丁醇萃取25次，每次1020mL，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加l5mL甲醇溶解，作为供试品溶液；精密称取剀提5-0-{3-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品适量，加甲醇制成每lmL含O.51.Omg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各25yL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和1030min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=13:35:23:11.5的下层为展开剂，上行展开，展距812cm;取出，晾干9，喷以3%6%硫酸乙醇溶液，105'C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试品溶液和剀提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品呈现相同颜色的斑点；含量测定照《中国药典》一部附录VIE紫外分光光度法测定供试品溶液的制备取吉祥草药材，粉碎，过2060目筛，精密称取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入6090X乙醇2060mL水浴回流35次，每次l3h，合并提取液，滤过，挥干；加水1030mL溶解，用石油醚萃取35次，每次1030mL，弃去石油醚液，水层再用水饱和正丁醇萃取36次，每次1030mL，回收正丁醇液，挥干，用甲醇定容至2550mL，即得供试品溶液；对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的凯提皂苷元对照品适量，用甲醇溶解制成浓度为O.100.50mg/mL的溶液，即得；测定法分别精密量取凯提皂苷元对照品溶液O.5mL与供试品溶液5mL，置水浴中挥干溶剂，精密加入3%8%香草醛冰醋酸溶液0.100.50ml，高氯酸O.100.50ml，密塞，于608(TC水浴恒温加热1030分钟，取出后立即用冰水冷却5min，加冰醋酸48mL，摇匀，以甲醇同法制备空白作参比；按照分光光度法在440460nm波长处测定吸收光谱，空白溶液无干扰；用标准曲线法计算含量；吉祥草药材中总皂苷提取物的含量应不低于2%。优选的质量检测方法包括以下项目性状干燥全草呈黄褐色，根茎细长，节明显，节上有残留的膜质鳞叶，并有少数弯曲巻縮的须状根，叶皱縮；鉴别(1)将吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，滤过，合并滤液，浓縮近干，用40mL水溶解后，加入活性炭0.3g，加热，滤过，滤液转移至分液漏斗中，再用水饱和的正丁醇萃取3次，每次20ml，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加3mL甲醇溶解，作为供试品溶液；精密称取凯提皂苷元对照品适量，加甲醇制成每lmL含0.8mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各2uL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和15min后，以氯仿:乙酸乙酯甲醇水=1.5:4:2.7:i为展开剂，上行展开，展距iocm;取出，晾干，喷以5%硫酸乙醇溶液，105。C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试品溶液和凯提皂苷元对照品呈现相同颜色的斑点；(2)将吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，滤过，合并滤液，浓縮近干，用40mL水溶解，转移至分液漏斗中，用石油醚萃取3次，第l次20mL，第2、3次各10mL，弃去石油醚液，再用水饱和的正丁醇萃取3次，每次20ml，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加3mL甲醇溶解，作为供试品溶液；精密称取剀提5-0-6-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品适量，加甲醇制成每lmL含0.8mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各2uL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和i5min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=2:4:2.4:i.2的下层为展开剂，上行展开，展距10cm;取出，晾干，喷以5%硫酸乙醇溶液，105。C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试品溶液和剀提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品呈现相同颜色的斑点；含量测定照《中国药典》一部附录VIE紫外分光光度法测定供试品溶液的制备取吉祥草药材，粉碎，过40目筛，精密称取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入80X乙醇40mL水浴回流3次，每次2h，合并提取液，滤过，挥干；加水20mL溶解，用石油醚萃取3次，每次15mL，弃去石油醚液，水层再用水饱和正丁醇萃取4次，每次15mL，回收正丁醇液，挥干，用甲醇定容至25mL，即得供试品溶液；对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的凯提皂苷元对照品适量，用甲醇溶解制成浓度为O.13mg/mL的溶液，即得；测定法分别精密量取凯提皂苷元对照品溶液O.5mL与供试品溶液5mL，置水浴中挥干溶剂，精密加入5。/。香草醛冰醋酸溶液0.20ml，高氯酸O.lmL，密塞，于7(TC水浴恒温加热15分钟，取出后立即用冰水冷却5min，加冰醋酸5mL，摇匀，以甲醇同法制备空白作参比；按照分光光度法在453nm波长处测定吸收光谱，空白溶液无干扰；用标准曲线法计算含量；吉祥草药材中总皂苷提取物的含量应不低于2%。据文献报道，吉祥草的留体皂苷及留体皂苷元对环腺苷酸磷酸二酯酶的活性有抑制作用。因此，本发明人经过一系列的试验研究，采用凯提皂苷元和剀提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷两个有效成分作为指标，首次建立了以有效成分进行吉祥草薄层色谱鉴别的方法，并对io批来自不同产地的吉祥草药材进行了鉴别，具有很好的实际意义，为其质量标准的提升奠定了基础。以下是吉祥草薄层色谱鉴别的实验研究过程1.仪器与材料1.1仪器GF254自制硅胶板；赛多利斯BP211型电子天平(德国)；双巢展开缸1.2材料凯提皂苷元和剀提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷(自制)通过波谱解析技术(IR、4-NMR、13C-NMR、MS)分析，鉴定其结构；吉祥草药材(产地贵州扎佐、贵阳、平镇、六枝、孟关、牛郎关；广西；云南泽通；云南昆明)经贵州师范大学天然药物质量控制研究中心的陈华国老师鉴定为吉祥草(Reineckiacarnea(Andr.)kunth)的全草；氯仿、甲醇、乙酸乙酯为分析纯；水为蒸溜水；自制5%硫酸乙醇溶液。2.方法与结果2.1凯提皂苷元的鉴别将阴干后的吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次(各lh)，滤过，合并滤液，将滤液浓縮近干，用40mL水溶解后，加入活性炭0.3g，加热，滤过，滤液转移至分液漏斗中，再用水饱和的正丁醇萃取3次(各20ml)，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加3mL甲醇溶解，作为供试品溶液。精密称取凯提皂苷元对照品适量，加甲醇制成每lmL含O.8mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)实验，吸取上述两种溶液各2UL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和15min后，以氯仿-乙酸乙酉g-甲醇-水(1.5:4:2.7:1)为展开剂，上行展开，展距约10cm。取出，晾干，喷以5%硫酸乙醇溶液，105。C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试液和凯提皂苷元呈现相同颜色的斑点。2.2剀提5-0-{3-D-吡喃葡萄糖皂苷的鉴别将阴干后的吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，滤过，和并滤液，将滤液浓縮近干，用40mL水溶解，转移置分液漏斗中，用石油醚萃取3次(20mL，10mL，10mL)，弃去石油醚液，再用水饱和的正丁醇萃取3次(各20ml)，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加3mL甲醇溶解，作为供试品溶液。精密称取剀提5-0-6-D-吡口南葡萄糖皂苷对照品适量，加甲醇制成每lmL含0.8mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)实验，吸取上述两种溶液各2yL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和15min后，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(2:4:2.4:1.2)的下层为展开剂，上行展开，展距约10cm。取出，晾干，喷以5%硫酸乙醇溶液，105。C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试液和剀提5-o-e-D-吡口南葡萄糖皂苷呈现相同颜色的斑点。3.讨论3.1由于吉祥草中皂苷类化合物结构十分相似，在进行对照品薄层鉴别时，很难将所需化合物与其他杂质分开，干扰成分多，且硫酸显色的背景干扰大。因此对其薄层鉴别带来了很大的困难，本实验通过大量的薄层条件和样品的前处理方法的摸索试验，得出了薄层效果较好，重复性好的薄层条件，S卩样品的前处理方法分别考察了三种不同的提取条件(1)甲醇水浴回流提取后，先后用石油醚，水饱和的正丁醇萃取；(2)先用氯仿回流提取后，再用水饱和的正丁醇提取；(3)先用乙醇回流提取后，再先后用石油醚、水饱和的正丁醇萃取；试验结果表明方法(1)效果最佳。但由于吉祥草药材的色素较重，在考察凯提皂苷元的薄层鉴别时，干扰严重，所以在方法(1)的基础上，甲醇水浴回流提取，滤液挥干，用蒸馏水溶解后加入3%的活性碳脱色，其效果较好。同时考察了多种展开系统，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(2:4:2.4:1.2)下层和氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(i.5:4:2.7:i)为展开系统，分别鉴别吉祥草中的剀提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷和凯提皂苷元，薄层效果较好3.2实验对10批不同产地的吉祥草样品进行了鉴别，结果表明吉祥草药材因不同产地和不同时间采集导致其质量有所不同。3.3本法操作简便，方法稳定，专属性强，薄层色谱鉴别斑点清晰，可有效鉴别吉祥草药材并可作为其质量控制标准之一。为了验证吉祥草药材中总皂苷含量测定方法的合理性，发明人对该方法也进行了试验研究和筛选，具体如下1、对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的凯提皂苷元对照品适量，甲醇溶解制成浓度为0.13mg/mL的凯提皂苷元溶液，即得。2、检测波长的选择准确量取凯提皂苷元对照品溶液，精密加入5%香草醛冰醋酸溶液0.20ml，高氯酸O.lmL，密塞，于7(TC水浴恒温加热15分钟，取出后立即用冰水冷却5min，加冰醋酸5ml，摇匀，以甲醇同法制备空白作参比，按照分光光度法在400800nm波长内测定吸收光谱，由于其在453nm处有最大吸收，空白溶液无干扰，故选择453nm作为测定波长。3、供试品溶液的制备3.1提取方法的选择方法一取吉祥草药材粉末约1.0g，置100mL具塞三角瓶中，加入80X乙醇40mL水浴回流2h，滤过，挥干。加水20mL溶解，用石油醚萃取3次(15mL/次)，弃去石油醚液，水层再用水饱和正丁醇萃取4次(15mL/次)，回收正丁醇液，挥干，用甲醇定容至25mL，摇匀，即得供试品溶液一。方法二取吉祥草药材粉末约1.0g，置100mL具塞三角瓶中，加入正丁醇40mL水浴回流2h，滤过，挥干，用甲醇定容至25mL，摇匀，即得供试品溶液二。方法三取吉祥草药材粉末约1.0g，置100mL具塞三角瓶中，加入甲醇40mL水浴回流2h，滤过，挥干。加水20mL溶解，用石油醚萃取3次(15mL/次)，弃去石油醚液，水层再用水饱和正丁醇萃取4次(15mL/次)，回收正丁醇液，挥干，用甲醇定容至25mL，摇匀，即得供试品溶液三。方法四取吉祥草药材粉末约1.0g，置100mL具塞三角瓶中，加入甲醇40mL水浴回流2h，滤过，挥干。用2mol/L盐酸水溶液20mL溶解残渣，水浴回流4小时后，水层再用水饱和正丁醇萃取4次(15mL/次)，回收正丁醇液，挥干，用甲醇定容至25mL，摇匀，即得供试品溶液四。分别精密吸取上述供试品溶液一、二、三、四及参比溶液各50uL，分别置于10ml具塞反应瓶中，置水浴中挥干溶剂，精密加入5。/。香草醛冰醋酸溶液0.20ml，高氯酸O.lmL，密塞，于7(TC水浴恒温加热15分钟，取出后立即用冰水冷却5min，加冰醋酸5mL，摇匀。在453nm最大吸收处测定含量，结果见表l:表l各种提取方法试验结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由表1可知，采用80%乙醇作为提取溶剂(即方法一)的效果最好。3.2提取次数考察按4.l项下的方法一，取吉祥草药材3份(批号20040301)，每份lg，进行水浴回流提取，分别提取1次、2次、3次，每次2小时，结果见表2:表2提取次数考察结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由上表可知，提取3次便可完全提取出样品中的总皂苷。3.3提取时间考察按4.l项下的方法一，取吉祥草药材3份(批号20040301)，每份lg，进行水浴回流提取，提取时间分别为0.5小时、2小时、3小时，结果见表3:表3提取时间考察结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由上表可知，提取2小时即可完全提取出吉祥草药材中的总皂苷，故提取时间确定为2/、时。4、显色反应条件的选择4.l反应原理番草瞎~CH0+HO"4.2显色反应试剂的选择本实验对常用显色剂香草醛冰醋酸-硫酸、高氯酸和香草醛冰醋酸-高氯酸-冰醋酸进行了考察，发现高氯酸不能对其显色，只有加入香草醛的显色剂才能使其在波长400800nm范围内有吸收光谱。其中以香草醛冰醋酸-高氯酸-冰醋酸显色法测定吸光度时比色稳定性较好4.3显色反应条件(浓度、温度、时间)的选择吸光度随香草醛的浓度增加而增加，5%以下变化幅度较大，考虑到香草醛在空气中易被氧化，浓度不宜过大，故选5%作为合适浓度。高氯酸用量在O.lmL0.3mL之间较稳定，而后吸光度随高氯酸用量的增加而下降，高氯酸用量过多反而对显色反应不利，所以本实验选择高氯酸的用量为O.lmL。加热温度在607(TC间变化较小，加热到9(TC时吸光度突然降低，对照品结构在此温度下可能被破坏，从而导致其吸光度降低，所以选取加热温度为607(TC。吸光度随加热时间的增加而增加，在1525min间较稳定，所以选取加热时间为15min。5、线性关系考察精密吸取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、lml于具塞试管中，挥干溶剂，精密加入5%香草醛冰醋酸溶液0.20ml，高氯酸O.lml，密塞，于7(TC水浴恒温加热15分钟，取出后立即用冰水冷却5min，加冰醋酸5ml，摇匀，以甲醇同法制备空白，按照分光光度法在453nm波长内测定吸收光谱。以凯提皂苷元的质量为横坐标，吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。经回归分析，标准曲线的方程Y4.0027+0.0078x相关系数^0.9996，结果表明凯提皂苷元对照品在26136ug范围内与吸光度呈良好的线性关系。6、精密度试验6.1仪器精密度试验取浓度为O.13mg/mL的对照品溶液，按上述方法显色，于453nm波长处重复测定5次，吸光度平均值为O.574，RSD为0.3"/。，表明仪器精密度良好，结果如下表4精密度试验结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>结果表明凯提皂苷元对照品的吸光度相对标准偏差小于2%，说明本试验精密度良好6.2重复性试验分别精密称取吉祥草样品6份，按前法处理，制得供试品溶液，测定样品中总皂苷含量。平均总皂苷含量28.91mgg—、RSD=1.3%(n=6)，表明方法的重复性良好。测定结果如下表5重复性试验结果表取样量m/g1.0021.0021.0011.0021.0011.002平均值rr/呢RSD(%)总皂苷含量m/mg29.22428.6628.哪29.2441.3百分含量％2.9172.9112.8632.8832.m2.9192.咖结果表明吉祥草中总皂苷的含量相对标准偏差小于2%，说明本试验重现性良好。7、准确度试验准确称取一定量已知总皂苷含量的吉祥草样品6份，每份0.5g，加入一定量的凯提皂苷元对照品，按供试品溶液的制备和测定步骤进行，计算得回收率，求相对标准偏差。结果表明，此方法具有较好的加样回收率，准确度良好，结果见表6:表6回收率实验结果序号药材量药材中总皂苷含量加入量总测得量回收率平均值RSDm/gm/mgm/mgm/mg(%)(%)(%)10.则14.1417.00020.862100.120.则14.1417.00020.832犯.630.50214.1757.,20.83597.31.640.50214.17514.00027.66250.50314.18614.00027.87195.260.50014.m14.00027.35296.370.50114.14116.00030.62897.880.50014.m16.00030.32796.590.50014.m16.00030.51297.58、稳定性试验被测溶液的稳定性考察精密吸取供试品溶液50uL，按上述方法显色，于453nm波长处每隔5min测定其吸光度，结果表明样品溶液的RSD为1.2X，样品溶液显色后在30min内稳定性良好。测定结果如下表7溶液稳定性试验结果表显色吋间5min10min15min20min25min30minA0.4590.4570.4530.4520.柳0.4451.2结果表明吉祥草药材总皂苷吸光度相对偏差小于2%，说明显色后在室温下30分钟内测定具有良好的稳定性。与现有技术相比，本发明建立了以凯提皂苷元和剀提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷两个有效成分为对照的吉祥草薄层色谱鉴别方法和总皂苷的含量测定方法，完善了吉祥草药材的质16量检测标准，弥补了现有质量检测技术的不足，使吉祥草药材的质量检测技术更为科学、合理；本发明所述鉴别项目的可操作性强，简便易行，方法稳定，专属性强，薄层色谱斑点清晰；所述含量测定方法的精密度高，重现性好，稳定性好，测量结果准确；采用这些检测方法可有效控制吉祥草药材的质量，从而确保其临床应用的安全性和有效性。具体实施例方式以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。本发明的实施例l:吉祥草药材的质量检测方法包括以下项目性状干燥全草呈黄褐色，根茎细长，节明显，节上有残留的膜质鳞叶，并有少数弯曲巻縮的须状根，叶皱縮。鉴别(1)将吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，滤过，合并滤液，浓縮近干，用40mL水溶解后，加入活性炭0.3g，加热，滤过，滤液转移至分液漏斗中，再用水饱和的正丁醇萃取3次，每次20ml，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加3mL甲醇溶解，作为供试品溶液；精密称取凯提皂苷元对照品适量，加甲醇制成每lmL含O.8mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各2uL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和15min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=1.5:4:2.7:i为展开剂，上行展开，展距iocm;取出，晾干，喷以5%硫酸乙醇溶液，105。C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试品溶液和凯提皂苷元对照品呈现相同颜色的斑点。(2)将吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，滤过，合并滤液，浓縮近干，用40mL水溶解，转移至分液漏斗中，用石油醚萃取3次，第l次20mL，第2、3次各10mL，弃去石油醚液，再用水饱和的正丁醇萃取3次，每次20ml，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加3mL甲醇溶解，作为供试品溶液；精密称取剀提5-0-6-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品适量，加甲醇制成每lmL含0.8mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各2uL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和i5min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=2:4:2.4:i.2的下层为展开剂，上行展开，展距10cm;取出，晾干，喷以5%硫酸乙醇溶液，105。C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试品溶液和剀提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品呈现相同颜色的斑点。含量测定照《中国药典》一部附录VIE紫外分光光度法测定供试品溶液的制备取吉祥草药材，粉碎，过40目筛，精密称取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入80X乙醇40mL水浴回流3次，每次2h，合并提取液，滤过，挥干；加水20mL溶解，用石油醚萃取3次，每次15mL，弃去石油醚液，水层再用水饱和正丁醇萃取4次，每次15mL，回收正丁醇液，挥干，用甲醇定容至25mL，即得供试品溶液。对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的凯提皂苷元对照品适量，用甲醇溶解制成浓度为O.13mg/mL的溶液，即得。测定法分别精密量取凯提皂苷元对照品溶液O.5mL与供试品溶液5mL，置水浴中挥干溶剂，精密加入5。/。香草醛冰醋酸溶液0.20ml，高氯酸O.lmL，密塞，于7(TC水浴恒温加热15分钟，取出后立即用冰水冷却5min，加冰醋酸5mL，摇匀，以甲醇同法制备空白作参比；按照分光光度法在453nm波长处测定吸收光谱，空白溶液无干扰；用标准曲线法计算含量。吉祥草药材中总皂苷提取物的含量应不低于2%。本发明的实施例2:吉祥草药材的质量检测方法可以仅含以下项目鉴别将吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇50mL水浴回流3次，每次O.5h，滤过，合并滤液，浓縮近干，用30mL水溶解后，加入活性炭0.5g，加热，滤过，滤液转移至分液漏斗中，再用水饱和的正丁醇萃取2次，每次25ml，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加4mL甲醇溶解，作为供试品溶液；精密称取凯提皂苷元对照品适量，加甲醇制成每lmL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各5uL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和25min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=2:4.5:3:i为展开剂，上行展开，展距8cm;取出，晾干，喷以3%硫酸乙醇溶液，105'C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试品溶液和凯提皂苷元对照品呈现相同颜色的斑点。含量测定照《中国药典》一部附录VIE紫外分光光度法测定供试品溶液的制备取吉祥草药材，粉碎，过50目筛，精密称取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入70X乙醇50mL水浴回流4次，每次l.5h，合并提取液，滤过，挥干；加水25mL溶解，用石油醚萃取4次，每次20mL，弃去石油醚液，水层再用水饱和正丁醇萃取5次，每次20mL，回收正丁醇液，挥干，用甲醇定容至50mL，即得供试品溶液。对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的凯提皂苷元对照品适量，用甲醇溶解制成浓度为O.20mg/mL的溶液，即得。测定法分别精密量取凯提皂苷元对照品溶液O.5mL与供试品溶液5mL，置水浴中挥干溶剂，精密加入7。/。香草醛冰醋酸溶液0.40ml，高氯酸0.40mL，密塞，于75。C水浴恒温加热20分钟，取出后立即用冰水冷却5min，加冰醋酸7mL，摇匀，以甲醇同法制备空白作参比；按照分光光度法在460nm波长处测定吸收光谱，空白溶液无干扰；用标准曲线法计算含量。吉祥草药材中总皂苷提取物的含量应不低于2%。本发明的实施例3:吉祥草药材的质量检测方法可以仅含以下项目鉴别将吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇50mL水浴回流3次，每次O.5h，滤过，合并滤液，浓縮近干，用30mL水溶解，转移至分液漏斗中，用石油醚萃取4次，第l、2次各15mL，第3、4次各10mL，弃去石油醚液，再用水饱和的正丁醇萃取2次，每次15ml，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加2mL甲醇溶解，作为供试品溶液；精密称取剀提5-0-6-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品适量，加甲醇制成每lmL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各5yL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和20min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=1:3:2:i的下层为展开剂，上行展开，展距8cm;取出，晾干，喷以3%硫酸乙醇溶液，105。C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试品溶液和剀提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品呈现相同颜色的斑点。含量测定照《中国药典》一部附录VIE紫外分光光度法测定供试品溶液的制备取吉祥草药材，粉碎，过30目筛，精密称取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入90X乙醇30mL水浴回流5次，每次lh，合并提取液，滤过，挥干；加水15mL溶解，用石油醚萃取5次，每次10mL，弃去石油醚液，水层再用水饱和正丁醇萃取3次，每次25mL，回收正丁醇液，挥干，用甲醇定容至40mL，即得供试品溶液。对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的凯提皂苷元对照品适量，用甲醇溶解制成浓度为O.35mg/mL的溶液，即得。测定法分别精密量取凯提皂苷元对照品溶液O.5mL与供试品溶液5mL，置水浴中挥干溶剂，精密加入3%香草醛冰醋酸溶液0.30ml，高氯酸O.30mL，密塞，于65。C水浴恒温加热25分钟，取出后立即用冰水冷却5min，加冰醋酸4mL，摇匀，以甲醇同法制备空白作参比；按照分光光度法在440nm波长处测定吸收光谱，空白溶液无干扰；用标准曲线法计算含量。吉祥草药材中总皂苷提取物的含量应不低于2%。本发明的实施例4:吉祥草药材的质量检测方法可以含以下项目性状干燥全草呈黄褐色，根茎细长，节明显，节上有残留的膜质鳞叶，并有少数弯曲巻縮的须状根，叶皱縮。鉴别(1)将吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇70mL水浴回流1.5h，滤过，滤液浓縮近干，用20mL水溶解后，加入活性炭0.2g，加热，滤过，滤液转移至分液漏斗中，再用水饱和的正丁醇萃取4次，每次15ml，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加2mL甲醇溶解，作为供试品溶液；精密称取凯提皂苷元对照品适量，加甲醇制成每lmL含1.0mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各2yL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和20min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=1:3:2.5:0.8为展开剂，上行展开，展距12cm;取出，晾干，喷以6%硫酸乙醇溶液，105'C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试品溶液和凯提皂苷元对照品呈现相同颜色的斑点。(2)将吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇70mL水浴回流1.5h，滤过，滤液浓縮近干，用50mL水溶解，转移至分液漏斗中，用石油醚萃取2次，每次20mL，弃去石油醚液，再用水饱和的正丁醇萃取4次，每次10ml，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加4mL甲醇溶解，作为供试品溶液；精密称取剀提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品适量，加甲醇制成每lmL含1.0mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各2yL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和25min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=3:5:3:i.5的下层为展开剂，上行展开，展距i2cm;取出，晾干，喷以6%硫酸乙醇溶液，105'C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试品溶液和剀提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品呈现相同颜色的斑点。20权利要求1.一种吉祥草药材的质量检测方法，所述质量检测方法包括性状、鉴别、含量测定项目中的部分或全部，其特征在于所述鉴别是对凯提皂苷元和/或剀提5-O-β-D-吡喃葡萄糖皂苷的薄层色谱鉴别，含量测定是用紫外分光光度法对药材中所含总皂苷的含量测定。2.按照权利要求l所述吉祥草药材的质量检测方法，其特征在于凯提皂苷元的鉴别方法是以凯提皂苷元对照品为对照、以氯仿乙酸乙酯甲醇水=12:35:2.53.0:0.81.2为展开剂的薄层色谱法；剀提5-0-{3-D-吡喃葡萄糖皂苷的鉴别方法是以剀提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品为对照、以氯仿乙酸乙酯甲醇水=13:35:23:ii.5的下层为展开剂的薄层色谱法。3.按照权利要求1或2所述吉祥草药材的质量检测方法，其特征在于:具体的鉴别方法为(1)将吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次0.51.5h，滤过，合并滤液，浓縮近干，用2040mL水溶解后，加入活性炭O.20.7g，加热，滤过，滤液转移至分液漏斗中，再用水饱和的正丁醇萃取24次，每次1530mL，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加25mL甲醇溶解，作为供试品溶液；精密称取凯提皂苷元对照品适量，加甲醇制成每lmL含0.51.0mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各25yL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和1030min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=12:35:2.53.0:0.81.2为展开剂，上行展开，展距812cm;取出，晾干，喷以2%8%硫酸乙醇溶液，105'C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试品溶液和凯提皂苷元对照品呈现相同颜色的斑点；(2)将吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次0.51.5h，滤过，合并滤液，浓縮近干，用2060mL水溶解，转移至分液漏斗中，用石油醚萃取25次，每次1020mL，弃去石油醚液，再用水饱和的正丁醇萃取25次，每次1020mL，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加l5mL甲醇溶解，作为供试品溶液；精密称取剀提5-0-{3-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品适量，加甲醇制成每lmL含O.51.0mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各25yL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和1030min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=13:35:23:11.5的下层为展开剂，上行展开，展距812cm;取出，晾干，喷以3%6%硫酸乙醇溶液，105'C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试品溶液和剀提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品呈现相同颜色的斑点。4.按照权利要求l所述吉祥草药材的质量检测方法，其特征在于总皂苷的含量测定方法是以凯提皂苷元对照品为对照的紫外分光光度法。5.按照权利要求1或4所述吉祥草药材的质量检测方法，其特征在于:具体的总皂苷含量测定方法为照《中国药典》一部附录VIE紫外分光光度法测定供试品溶液的制备取吉祥草药材，粉碎，过2060目筛，精密称取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入6090X乙醇2060mL水浴回流35次，每次l3h，合并提取液，滤过，挥干；加水1030mL溶解，用石油醚萃取35次，每次1030mL，弃去石油醚液，水层再用水饱和正丁醇萃取36次，每次1030mL，回收正丁醇液，挥干，用甲醇定容至2550mL，即得供试品溶液；对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的凯提皂苷元对照品适量，用甲醇溶解制成浓度为O.100.50mg/mL的溶液，即得；测定法分别精密量取凯提皂苷元对照品溶液O.5mL与供试品溶液5mL，置水浴中挥干溶剂，精密加入3%8%香草醛冰醋酸溶液0.100.50ml，高氯酸O.100.50ml，密塞，于608(TC水浴恒温加热1030分钟，取出后立即用冰水冷却5min，加冰醋酸48mL，摇匀，以甲醇同法制备空白作参比；按照分光光度法在440460nm波长处测定吸收光谱，空白溶液无干扰；用标准曲线法计算含量；吉祥草药材中总皂苷提取物的含量应不低于2%。6.按照权利要求l、2或4所述吉祥草药材的质量检测方法，其特征在于所述质量检测方法包括以下项目性状干燥全草呈黄褐色，根茎细长，节明显，节上有残留的膜质鳞叶，并有少数弯曲巻縮的须状根，叶皱縮；鉴别(1)将吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次O.51.5h，滤过，合并滤液，浓縮近干，用2040mL水溶解后，加入活性炭O.20.7g，加热，滤过，滤液转移至分液漏斗中，再用水饱和的正丁醇萃取24次，每次1530mL，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加25mL甲醇溶解，作为供试品溶液；精密称取凯提皂苷元对照品适量，加甲醇制成每lmL含0.51.0mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各25yL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和1030min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=12:35:2.53.0:0.81.2为展开剂，上行展开，展距812cm;取出，晾干，喷以2%8%硫酸乙醇溶液，105'C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试品溶液和凯提皂苷元对照品呈现相同颜色的斑点；(2)将吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次0.51.5h，滤过，合并滤液，浓縮近干，用2060mL水溶解，转移至分液漏斗中，用石油醚萃取25次，每次1020mL，弃去石油醚液，再用水饱和的正丁醇萃取25次，每次1020mL，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加l5mL甲醇溶解，作为供试品溶液；精密称取剀提5-0-{3-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品适量，加甲醇制成每lmL含O.51.Omg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各25yL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和1030min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=13:35:23:11.5的下层为展开剂，上行展开，展距812cm;取出，晾干，喷以3%6%硫酸乙醇溶液，105'C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试品溶液和剀提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品呈现相同颜色的斑点；含量测定照《中国药典》一部附录VIE紫外分光光度法测定供试品溶液的制备取吉祥草药材，粉碎，过2060目筛，精密称取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入6090X乙醇2060mL水浴回流35次，每次l3h，合并提取液，滤过，挥干；加水1030mL溶解，用石油醚萃取35次，每次1030mL，弃去石油醚液，水层再用水饱和正丁醇萃取36次，每次1030mL，回收正丁醇液，挥干，用甲醇定容至2550mL，即得供试品溶液；对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的凯提皂苷元对照品适量，用甲醇溶解制成浓度为O.100.50mg/mL的溶液，即得；测定法分别精密量取凯提皂苷元对照品溶液O.5mL与供试品溶液5mL，置水浴中挥干溶剂，精密加入3%8%香草醛冰醋酸溶液0.100.50ml，高氯酸O.100.50ml，密塞，于608(TC水浴恒温加热1030分钟，取出后立即用冰水冷却5min，加冰醋酸48mL，摇匀，以甲醇同法制备空白作参比；按照分光光度法在440460nm波长处测定吸收光谱，空白溶液无干扰；用标准曲线法计算含量；吉祥草药材中总皂苷提取物的含量应不低于2%。7.按照权利要求6所述吉祥草药材的质量检测方法，其特征在于所述质量检测方法包括以下项目性状干燥全草呈黄褐色，根茎细长，节明显，节上有残留的膜质鳞叶，并有少数弯曲巻縮的须状根，叶皱縮；鉴别(1)将吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，滤过，合并滤液，浓縮近干，用40mL水溶解后，加入活性炭0.3g，加热，滤过，滤液转移至分液漏斗中，再用水饱和的正丁醇萃取3次，每次20ml，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加3mL甲醇溶解，作为供试品溶液；精密称取凯提皂苷元对照品适量，加甲醇制成每lmL含O.8mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各2uL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和15min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=1.5:4:2.7:i为展开剂，上行展开，展距iocm;取出，晾干，喷以5%硫酸乙醇溶液，105。C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试品溶液和凯提皂苷元对照品呈现相同颜色的斑点；(2)将吉祥草粉碎成粗粉，取药材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，滤过，合并滤液，浓縮近干，用40mL水溶解，转移至分液漏斗中，用石油醚萃取3次，第l次20mL，第2、3次各10mL，弃去石油醚液，再用水饱和的正丁醇萃取3次，每次20ml，分取正丁醇萃取液，挥去溶剂，残渣加3mL甲醇溶解，作为供试品溶液；精密称取剀提5-0-6-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品适量，加甲醇制成每lmL含0.8mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各2yL点样于预制硅胶GF254层析板上，将薄层板置展开缸中预饱和i5min后，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=2:4:2.4:i.2的下层为展开剂，上行展开，展距10cm;取出，晾干，喷以5%硫酸乙醇溶液，105。C加热至斑点显色清晰，于可见光下观察，在相同的比移值处吉祥草供试品溶液和剀提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷对照品呈现相同颜色的斑点；含量测定照《中国药典》一部附录VIE紫外分光光度法测定供试品溶液的制备取吉祥草药材，粉碎，过40目筛，精密称取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入80X乙醇40mL水浴回流3次，每次2h，合并提取液，滤过，挥干；加水20mL溶解，用石油醚萃取3次，每次15mL，弃去石油醚液，水层再用水饱和正丁醇萃取4次，每次15mL，回收正丁醇液，挥干，用甲醇定容至25mL，即得供试品溶液；对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的凯提皂苷元对照品适量，用甲醇溶解制成浓度为O.13mg/mL的溶液，即得；测定法分别精密量取凯提皂苷元对照品溶液O.5mL与供试品溶液5mL，置水浴中挥干溶剂，精密加入5y。香草醛冰醋酸溶液0.20ml，高氯酸O.lmL，密塞，于7(TC水浴恒温加热15分钟，取出后立即用冰水冷却5min，加冰醋酸5mL，摇匀，以甲醇同法制备空白作参比；按照分光光度法在453nm波长处测定吸收光谱，空白溶液无干扰；用标准曲线法计算含量；吉祥草药材中总皂苷提取物的含量应不低于2%。全文摘要本发明公开了一种吉祥草药材的质量检测方法，所述质量检测方法包括性状、鉴别、含量测定项目中的部分或全部，所述鉴别是对凯提皂苷元和/或剀提5-O-β-D-吡喃葡萄糖皂苷的薄层色谱鉴别，含量测定是用紫外分光光度法对药材中所含总皂苷的含量测定。与现有技术相比，本发明建立了以凯提皂苷元和剀提5-O-β-D-吡喃葡萄糖皂苷两个有效成分为对照的吉祥草薄层色谱鉴别方法和总皂苷的含量测定方法，完善了吉祥草药材的质量检测标准，弥补了现有质量检测技术的不足，使吉祥草药材的质量检测技术更为科学、合理；采用本发明所述检测方法可有效控制吉祥草药材的质量，从而确保其临床应用的安全性和有效性。文档编号A61P11/06GK101549084SQ20091030286公开日2009年10月7日申请日期2009年6月3日优先权日2009年6月3日发明者海刘,欣周,周婵媛,陈华国申请人:贵州师范大学