1′-硫代靛玉红类化合物、用途及其制备方法

专利名称：：1′-硫代靛玉红类化合物、用途及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种医药
技术领域：
的化合物、用途及其制备方法，具体是一种l'-硫代靛玉红类化合物、用途及其制备方法。
背景技术：
：靛玉红在临床上用于治疗慢性粒细胞白血病，但是其溶解度较差，会对胃肠道产生副作用，在临床应用的过程中有些病人因此不得不因此而停止服药。经对现有技术的文献检索发现，Polychronopoulos，P.等在《JournalofMedicinalChemistry》(药物化学杂志)2004年第47期935946页中发表了题为《Structuralbasisforthesynthesisofindirubinsaspotentandselectiveinhibitorsofglycogensynthasekinase_3andeye1in-d印endentkinases》(青定玉红衍生物有效的选择性抑制糖元合成激酶_3和周期蛋白依赖激酶的结构基础)一文，文中评述，靛玉红衍生物可以有效抑制糖元合成激酶_3和细胞周期蛋白依赖性激酶，因而可以治疗因细胞生长紊乱所致的各种疾病，其中包括恶性肿瘤，但是在该文中，对靛玉红的结构修饰是在保留靛玉红母核结构的基础上，只针对不同位置的取代基进行了简单的改变，这不能够从根本上改变靛玉红类化合物溶解度差，从而导致的生物利用度低的缺点。为了提高与靛玉红结构类似的化合物的抗肿瘤活性，有必要在靛玉红结构式中引入新类型取代基及对靛玉红母核结构进行改变。
发明内容本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种1'_硫代靛玉红类化合物、用途及其制备方法。本发明的化合物能抑制或杀灭肿瘤细胞，具有抗肿瘤活性的特性，可用来制备治疗肿瘤的药物。本发明涉及一种1'_硫代靛玉红类化合物，结构式如下其中R、R1、R2、R3选择以下组合中一种R=0，R丄=Cl，R2=H，R3=H;R=0，R丄=Br，R2=H，R3=H;R=0，R丄=CF3，R2=H，R3=H;R=0，=N02，R2=H，R3=H;R=0，R丄=H，R2=F，R3=H;R=0，R丄=H，R2=C1，R3==H;R=0，R丄=H，R2=Br，R3==H;R=0，R丄=H，R2=H，R3=F;R=0，R丄=H，R2=F，R3=F;R=0，R丄=H，R2=C1，R3==F;R=■，R丄=H，R2=F，R3=H;R=■，R丄=H，R2=Cl，R:S=H;R=■，=H，R2=Br，R:S=H。所述l'-硫代靛玉红类化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。所述肿瘤为宫颈癌、胃癌、肝癌或肺癌。本发明还涉及一种1'_硫代靛玉红类化合物的制备方法，包括如下步骤步骤一，在酸性条件下，将4-取代靛红或6-取代靛红分别与苯并[b]噻吩_3(2H)-酮或3-取代苯并[b]噻吩-3(2H)-酮縮合，得到R=0的1'-硫代靛玉红类化合物；步骤二，将步骤一得到的R=0的1'-硫代靛玉红类化合物与羟胺反应，得到R=NOH的1'-硫代靛玉红类化合物。本发明在具有抗肿瘤作用的化合物靛玉红母核结构基础上，将1'位的氮原子替换为硫原子，同时在4位或6位引入取代基，合成了一系列全新的化合物，得到具有抗肿瘤活性的全新的4-取代-i'-硫代靛玉红类化合物及e-取代-i'-硫代靛玉红类化合物。与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果本发明的1'-硫代靛玉红类化合物具有抑制或杀灭肿瘤细胞的作用，可以用于制备抗肿瘤的药物。具体实施例方式本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例14-氯-l'-硫代靛玉红在100mL单口烧瓶中依次加入40mL冰醋酸、4-氯靛红(147mg，0.62mmol)、苯并[b]噻吩-3(2H)-酮(105mg，0.70mmo1)，搅拌溶解，加入浓盐酸2mL，氮气保护下回流30min。冷却至室温，减压蒸去冰醋酸得深红色黏稠物。经硅胶柱色谱分离两次(洗脱剂分别为二氯甲烷、环己烷-丙酮(6:1))，得暗红色固体13mg，收率6.7X，mp〉300°C。'H-NMR(300MHz，DMSO，Sppm):11.12(s，1H，N—H)，7.79(d，1H，J=7.8Hz，H—4')，7.65-7.70(m，2H，H-6'，7')，7.34(t，1H，J=7.2Hz，H-5)，7.18-7.20(m，2H，H_6，5')，6.86(dd，1H，J=3.3Hz，5.4Hz，H-7)。IR(cm—、KBr):3186，1704，1680，1614，1592，1452，1432，1314，1284，1249，1165，1034，1007，875，775，740，727。ESI—MSm/z:314.11，316.13[M+H]+。实施例24-溴-l'-硫代靛玉红由4-溴靛红和苯并[b]噻吩-3(2H)-酮反应制得。方法同实施例l。暗红色固体，收率13.7%，mp>300°C。'H-NMR(300MHz，DMS0，S卯m):11.23(s，1H，N-H)，7.89(d，1H，J=7.8Hz，H-4')，7.75-7.80(m，2H，H-6'，7')，7.44(t，1H，J=7.2Hz，H-5)，7.28-7.30(m，2H，H-6，5')，6.96(dd，1H，J=3.3Hz，5.4Hz，H-7)。IR(cm—、KBr):3184，1703，1678，1612，1563，1451，1428，1311，1284，1249，1034，1003，874，773，738，725。EI-MSm/z:358.10，360.07[M+H]+。实施例34-三氟甲基-l'-硫代靛玉红由4-三氟甲基靛红和苯并[b]噻吩-3(2H)-酮反应制得。方法同实施例l。暗红色固体，收率37.0%，mp237-238°C。^-NMR(300MHz，DMS0，Sppm):11.30(s，1H，N-H)，7.72-7.83(m，3H，H-4'，6'，7')，7.55(t，1H，J=7.8Hz，H—6)，7.37—7.43(m，1H，H-5')，7.31(d，lH，J=7.8Hz，H—5)，7.16(d，lH，J=8.1Hz，H—7)。IR(cm—、KBr):3174，1684，1661，1614，1585，1452，1439，1324，1281，1252，1223，1169，1125，1111，1081，1038，1001，878，778，740，698。ESI-MSm/z:348.17[M+H]+。实施例44-硝基-l'-硫代靛玉红由4-硝基靛红和苯并[b]噻吩-3(2H)-酮反应制得。方法同实施例l。亮紫黑色固体，收率50.2%，mp>300°C。'H-NMR(300MHz，DMSO，Sppm):11.54(s，1H，N-H)，7.73-7.82(m，3H，H-4'，6'，7')，7.55—7.62(m，2H，H_5，6)，7.41(t，1H，J=7.2Hz，H-5')，7.26-7.33(m，1H，H-7)。IR(cm—、KBr):3337，1712，1675，1615，1590，1578，1537，1451，1354，1308，1282，1224，1202，1040，1005，975，878，847，773，724，711。ESI-MSm/z:325.11[M+H]+。实施例56-氟-l'-硫代靛玉红在25mL单口烧瓶中依次加入15mL冰醋酸、6_氟靛红(56mg，0.34mmo1)、苯并[b]噻吩-3(2H)-酮(60mg，0.40mmo1)，搅拌溶解，加入浓盐酸lmL，氮气保护下回流30min，逐渐析出红色絮状沉淀。热过滤，滤饼用热水洗涤，干燥，得红色丝状固体87mg，收率86.3%，mp>300°C。'H-NMR(300MHz，DMSO，S卯m):11.27(s，1H，N-H)，9.06(dd，1H，J=6.3Hz，8.7Hz，H-4)，7.84(d，1H，J=7.5Hz，H-4')，7.71-7.74(m，2H，H-6'，7')，7.36-7.42(m，1H，H-5')，6.88(t，1H，J=9.3Hz，H-5)，6.74(dd，1H，J=3.0Hz，9.3Hz，H-7)。IR(cm—、KBr):3163，1699，1677，1653，1629，1588，1498，1451，1341，1283，1146，1048，1002，966，870，743。ESI-MSm/z:298.14[M+H]+。实施例66-氯-l'-硫代靛玉红由6-氯靛红和苯并[b]噻吩-3(2H)-酮反应制得。方法同实施例5。亮红色絮状固体，收率55.7%，mp>300°C。力-NMR(300MHz，DMS0，S卯m):11.23(s，1H，N-H)，8.97(d，1H，J=8.4Hz，H_4)，7.83(d，1H，J=7.5Hz，H_4')，7.71-7.73(m，2H，H-6'，7')，7.36-7.42(m，1H，H_5')，7.10(dd，1H，J=1.8Hz，8.4Hz，H-5)，6.93(d，1H，J=1.8Hz，H-7)。IR(cm—、KBr):3163，1706，1678，1615，1589，1450，1337，1297，1282，1092，1001，922，875，741。ESI-MSm/z:314.11,316.10[M+H]+。实施例76-溴-l'-硫代靛玉红由6-溴靛红和苯并[b]噻吩-3(2H)-酮反应制得。方法同实施例5。亮红色絮状固体，收率70.2%，mp>300°C。力-NMR(300MHz，DMS0，S卯m):11.24(s，1H，N-H)，8.92(d，1H，J=8.4Hz，H_4)，7.85(d，1H，J=7.8Hz，H_4')，7.72-7.75(m，2H，H-6'，7')，7.38-7.44(m，1H，H_5')，7.28(dd，1H，J=1.5Hz，8.4Hz，H-5)，7.09(d，1H，J=1.5Hz，H-7)。IR(cm—、KBr):3158，1704，1676，1610，1587，1449，1336，1296，1281，1227，1041，1001，911，874，739。ESI-MSm/z:356.1，358.l[M_H]+。实施例85'-氟-l'-硫代靛玉红由靛红和5-氟苯并[b]噻吩-3(2H)-酮反应制得。方法同实施例5。暗红色丝状固体，收率76.0%，mp>300°C。力-NMR(300MHz，DMS0，S卯m):11.14(s，1H，N-H)，8.94(d，1H，J=7.2Hz，H_4)，7.79-7.84(m，1H，H-4')，7.60-7.67(m，2H，H-6'，7')，7.42(t，1H，J=7.8Hz，H_6)，7.06(t，1H，J=7.8Hz，H_5)，6.93(d，1H，J=8.lHz，H-7)。IR(cm—、KBr):3173，1706，1671，1618，1468，1340，1307，1268，1233，1055，922，889，827，773，746。ESI-MSm/z:296.2[M_H]+。实施例95'，6-二氟-l'-硫代靛玉红由6-氟靛红和5-氟苯并[b]噻吩-3(2H)-酮反应制得。方法同实施例5。红棕色絮状固体，收率92.2%，mp>300°C。力-NMR(300MHz，DMS0，S卯m):H.31(brs，IH，N-H)，9.03-9.10(m，lH，H-4)，7.82(m，1H，H-4')，7.62-7.69(m，2H，H_6'，7')，6.91(t，1H，J=9.3Hz，H_5)，6.78(dd，1H，J=2.4Hz，9.OHz，H_7)。IR(cm—、KBr):3228，1707，1673，1629，1595，1469，1449，1343，1307，1267，1055，918，846，816。ESI-MSm/z:314.2[M-H]+。实施例105'-氟_6-氯-1'-硫代靛玉红由6-氯靛红和5-氟苯并[b]噻吩-3(2H)-酮反应制得。方法同实施例5。红棕色絮状固体，收率83.9%，mp>300°C。力-NMR(300MHz，DMS0，S卯m):11.29(s，1H，N-H)，8.97(d，1H，J=8.7Hz，H_4)，7.83-7.85(m，1H，H-4')，7.62-7.69(m，2H，H-6'，7')，7.14(dd，lH，J=2.lHz，8.7Hz，H_5)，6.96(d，1H，J=2.1Hz，H-7)。IR(cm—、KBr):3182，1704，1673，1614，1471，1440，1340，1305，1267，1050,912,812。ESI-MSm/z:330.2，332.2[M-H]+。实施例116-氟-l'-硫代靛玉红_3'-肟在25mL单口烧瓶中依次加入7.5mL吡啶、6_氟_1'-硫代靛玉红(59mg，0.20mmo1)、盐酸羟胺(140mg，2.Olmmol)，回流搅拌6h。冷却至室温，减压蒸去吡啶得深红色黏稠物。经硅胶柱色谱分离两次[洗脱剂二氯甲烷、环己烷-乙酸乙酯(5:l)]，得棕红色固体37mg，收率59.7%，mp260-261°C。'H-NMR(300MHz，DMSO，Sppm):13.59(s，1H，N-OH)，11.08(s，1H，N-H)，8.88-8.94(m，1H，H-4)，8.66(d，1H，J=8.4Hz，H-4')，7.67(d，1H，J=7.5Hz，H-7')，7.52(t，1H，J=7.5Hz，H-6')，7.34(t，1H，J=7.5Hz，H-5')，6.71-6.82(m，2H，H_5，7)。IR(cm—、KBr):3293,2924，1656，1626，1596，1515，1496，1449，1433，1341，1263，1250，1144，1114，1081，998，854，754，730。ESI-MSm/z:313.14[M+H]+。实施例126-氯-l'-硫代靛玉红_3'-肟由6-氯-1'-硫代靛玉红与盐酸羟胺反应制得。方法同实施例ll。暗红色固体，收率50.9%，mp259-260°C。'H-NMR(300MHz，DMSO，Sppm):13.68(s，1H，N-0H)，11.08(s，1H，N-H)，8.86(d，1H，J=8.7Hz，H-4)，8.66(d，1H，J=7.8Hz，H-4')，7.68(d，1H，J=7.5Hz，H-7')，7.53(t，1H，J=7.8Hz，H-6')，7.35(t，1H，J=7.8Hz，H-5')，7.01(dd，lH，J=2.1Hz，8.4Hz，H-5)，6.94(d，lH，J=2.4Hz，H-7)。IR(cm—、KBr):3240,2921,2850，1692，1677，1613，1583，1524，1477，1428，1335，1289，1252，1211，1190，1125，1069，974，848，801，760，729。ESI-MSm/z:329.10，331.12[M+H]+。实施例136-溴-l'-硫代靛玉红_3'-肟由6-溴-1'_硫代靛玉红与盐酸羟胺反应制得。方法同实施例ll。暗红色固体，收率48.0%，mp262-263°C。力-NMR(300MHz，DMSO，Sppm):13.68(s，1H，N-0H)，11.07(s，1H，N-H)，8.79(d，1H，J=8.7Hz，H-4)，8.65(d，1H，J=8.1Hz，H—4')，7.68(d，1H，J=7.8Hz，H-7')，7.52(t，1H，J=7.8Hz，H-6')，7.35(t，1H，J=7.5Hz，H-5')，7.14(dd，1H，J=2.lHz，9.0Hz，H-5)，7.07(d，1H，J=2.1Hz，H-7)。IR(cm—、KBr):3112,2921,2850，1674，1608，1579，1527，1475，1428，1334，1209，1250，1126，1063,984，849，801，752，729。ESI-MSm/z:373.08，375.06[M+H]+。抗肿瘤活性测试—、材料与仪器(1)细胞株人肝癌细胞QGY-7701、人肺癌细胞A-549、人宫颈癌细胞HELA、人胃癌细胞SGC-7901。(2)试剂[OO94]RPMI.1640培养液(吉诺生物医药技术有限公司)、DMEM高糖培养液(吉诺生物医药技术有限公司)、胎牛血清(FBS)(杭州四季青工程公司)、青-链霉素溶液(100X)(Biowest公司)、磷酸盐缓冲溶液(PBS)(北京Solarbio技术有限公司)、0.25%胰酶溶液+0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)(吉诺生物医药技术有限公司)、磺酰罗丹明B(SRB)(Sigma公司)、二甲基亚砜(DMS0)(上海钰森生物技术有限公司)、三氯乙酸(TCA)(国药集团化学试剂有限公司)、Tris碱(Sigma公司)和冰醋酸(国药集团化学试剂有限公司)。(3)对照品靛玉红，自制，经结构鉴定。(4)试剂的配制以冰醋酸与双重蒸馏水配制成1%醋酸溶液；以1%醋酸溶液与SRB配制成0.4%SRB溶液，避光，4t:保存；以TCA与双重蒸馏水配制成50%TCA溶液；以Tris碱与双重蒸馏水配制成10mmol/LTris碱溶液，用氢氧化钠溶液调至pH=10.0;以被测样品(实施例1-13所述化合物)、对照品用匿SO配制成2mg/mL的原始溶液保存，实验时用培养基配制成所需浓度。(5)主要仪器C02培养箱(ThermoFormaSeriesII)、净化工作台(上海新苗医疗器械制造有限公司)、酶联免疫监测仪(ThermoMK3)、倒置生物显微镜(OlympusIX71)、电子天平(MettlerToledoAL204)和离心机(飞鹆TDL80-23)。二、方法与结果步骤一，细胞培养细胞接种于含有10%FBS、lX青-链霉素溶液的培养基中，置于37t:、5XC02培养箱中，每2-3天传代一次，实验时取对数生长期细胞。步骤二，SRB法测定IC5。值取对数生长期细胞，以配制好的新鲜培养基调节细胞悬液浓度至5X104个/mL，接种到96孔板中，每孔190iiL，设药物处理组、平行对照组、空白对照组。在37°C、5%C02培养箱中培养12h后，加入lOyL不同浓度的被测样品溶液和对照品溶液，实验设置双复孔。平行对照组培养30min、药物处理组培养48h后，加入50XTCA50yL固定细胞，静置5min后将96孔板置于4。C下30min。弃去固定液，水洗5次，空气干燥。每孔加入0.4%SRB溶液100iiL，室温放置lh。弃去SRB溶液，用1%醋酸溶液洗涤5遍，空气干燥。每孔加入200iiL10mmol/LTris碱溶液(pH=10.0)，在570nm波长下用酶联免疫监测仪测定光密度(0D)值，运用非线性回归分析计算ICs。值(表l)。通过实验结果可知，实施例制备的1'_硫代靛玉红类化合物可以抑制或杀灭肿瘤细胞，具有抗肿瘤活性。表l1'-硫代靛玉红类化合物的抗肿瘤活性<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>权利要求一种1′-硫代靛玉红类化合物，其特征在于，结构式如下其中R、R1、R2、R3选自以下组合中一种R＝O，R1＝Cl，R2＝H，R3＝H；R＝O，R1＝Br，R2＝H，R3＝H；R＝O，R1＝CF3，R2＝H，R3＝H；R＝O，R1＝NO2，R2＝H，R3＝H；R＝O，R1＝H，R2＝F，R3＝H；R＝O，R1＝H，R2＝Cl，R3＝H；R＝O，R1＝H，R2＝Br，R3＝H；R＝O，R1＝H，R2＝H，R3＝F；R＝O，R1＝H，R2＝F，R3＝F；R＝O，R1＝H，R2＝Cl，R3＝F；R＝NOH，R1＝H，R2＝F，R3＝H；R＝NOH，R1＝H，R2＝Cl，R3＝H；F2009103103831C0000011.tif2.—种根据权利要求l所述的l'-硫代靛玉红类化合物的用途，其特征在于，是在制备抗肿瘤药物中的用途。3.根据权利要求2所述的用途，其特征是，所述肿瘤为宫颈癌、胃癌、肝癌或肺癌。4.一种根据权利要求l所述的l'-硫代靛玉红类化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤步骤一，在酸性条件下，将4-取代靛红或6-取代靛红分别与苯并[b]噻吩-3(2H)-酮或3-取代苯并[b]噻吩-3(2H)-酮縮合，得到R=0的1'-硫代靛玉红类化合物；步骤二，将步骤一得到的R=0的1'-硫代靛玉红类化合物与羟胺反应，得到R=NOH的l'-硫代靛玉红类化合物。全文摘要一种医药
技术领域：
的1′-硫代靛玉红类化合物，结构式见下式。本发明还涉及1′-硫代靛玉红类化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。本发明还涉及1′-硫代靛玉红类化合物的制备方法，包括如下步骤步骤一，在催化剂的存在下，将4-取代靛红或6-取代靛红与苯并[b]噻吩-3(2H)-酮衍生物缩合，得到R＝O的4-取代-1′-硫代靛玉红类化合物或6-取代-1′-硫代靛玉红类化合物；步骤二，步骤一得到的化合物与与羟胺反应，得到1′-硫代靛玉红类化合物。文档编号A61P35/00GK101704813SQ20091031038公开日2010年5月12日申请日期2009年11月25日优先权日2009年11月25日发明者俞鸣烽,张爱英,毛振民申请人:上海交通大学