壳－核双层微球的制备方法
专利名称：壳－核双层微球的制备方法
技术领域：
本发明涉及的是一种制药技术领域的制剂制备方法，尤其是一种壳-核双层微球
的制备方法。 制药行业从药物发现，到临床的应用，最后一个环节是药物制剂。其中有一部分 药物需要长期给药才能治愈；还有一部分需要靶向等局部给药。要达到这些目的，原料药 必须要制备成相应的剂型。例如需要长期给药但在体内的半衰期短的药物，宜制备成缓释 或控释剂型；对于一些肿瘤的治疗，需要一些药物靶向于病照，例如靶向于肿瘤血管的栓塞 微球制剂等；基因重组技术用于治疗蛋白的表达和生产的20多年以来，到目前为止，已有 30多个蛋白药物产品投入临床使用，近200个在审批和研发过程中，涌现出一批诸如安进 (Amgen)、基因技术(Genentech)等一批新的大型医药公司。相对于蛋白大分子药物本身的 快速发展，其剂型技术进展缓慢。 一方面，蛋白大分子药物口服不吸收、体内半衰期短，需要 注射给药；另一方面，许多何尔蒙、细胞因子类的蛋白药物治疗周期长，长期而频繁地注射 成为必须，也影响患者顺应性的主要原因。缓释蛋白药物的剂型的研发，由于在制备微粒过 程导致活性的损失诸如W/0/W法制备的微球易突释等缺点。发展制备具有活性保护的蛋白 微球又可以提高包封率和减少突释的方法势在必行。人们为了减少突释研究了制备双层微 球，但是到目前还是不能解决这一难题。 经对现有技术文献的检索发现，[Meng Shi， Yi-Yan Yang， Cheng-Shu Chaw，
Suat-Hong Goh， Shabbir M. Moochhala， Steve Ng， Jorge Heller， Double walledPLA/ PLGA microspheres -encapsulation of water—soluble and water—insolubl印roteins and their release priorities, Journal of Controlled Release 89(2003)167 77]， [Meng Shi， Yi_Yan Yang， Cheng_Shu Chaw， Suat_Hong Goh， Shabbir M. Moochhala， Steve
Ng， Jorge Heller，双层POE/PLGA微球包封水溶性和水不溶性蛋白和它们的释放特点，控 制释放杂志，89(2003) 167-177]Meng Shi等人在该文献报道了利用W/0/W方法把牛血清白 蛋白(BSA)和环孢霉素A(CyA)的包封在PLGA/PLA壳-核微球里。该文献利用W/0/W最 见的复乳法来制备双层微球，而复乳法的油水界面是公认的蛋白杀手，导致水溶性的蛋白 在该界面的聚集，同样致使包封率也不高，存在不完全释放和突释。[Morita T. ， Sakamura
Y. ， Horikiri Y. ， Suzuki T. ， Yoshino H. ， Proteinencapsulation into biodegradable microspheres by a novel S/0/W emulsion methodusing poly (ethylene glycol)as a protein micronization adjuvant,Journal ofControlled Release 69(2000)435 44]，
(Morita T.等人在该文献报道了利用新S/0/W乳化法制备载蛋白微球。只是改变了表面活 性剂以前报道较多的是用PVA，在这篇文献改用PEG。但是仍然不能克服包封率低，存在突 释和不完全释放的缺点。
背景技术：
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种壳_核双层微球的制备方 法。使其制备的微粒表面光滑圆整，均匀度好，颗粒规整无粘连；包封率高，突释小，载药量高。 本发明是通过以下技术方案实现的 本发明将药物颗粒分散在聚乳酸(PLA)和聚癸二酸酐(PSA)、聚乳酸(PLA)和聚 苯乙烯(PS)或聚乳酸(PLA)和聚[1，3_双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80) (P(CPP : SA20 : 80))的有机溶液中，或把亲水性的药物颗粒与PLA的有机溶液混和后，再 把PSA、PS或P(CPP : SA 20 : 80)的有机溶液混和；或把疏水性的药物颗粒与PSA、PS或
p(cpp : sa 20 : so)先混和，再把pla的有机溶液混和；并搅拌或漩涡等使之分散均匀形
成混悬液；然后将混悬液加到外油相，再搅拌或漩涡形成微球，最后把它转移到大水相中固 化1-4小时；然后离心收集微球，冻干保存。
本发明包括以下步骤 ①将药物颗粒加入到聚乳酸(PLA)和聚癸二酸酐(PSA)、聚乳酸(PLA)和聚苯 乙烯(PS)或聚乳酸(PLA)和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80) (P(CPP : SA20 : 80))微球方法的有机混合溶液、或把亲水性的药物颗粒与PLA的有机溶 液混和后，再把PSA、PS或P(CPP : SA 20 : 80)的有机溶液混和；或把疏水性的药物颗粒 与psa、ps或p(cpp : sa20 : 80)先混和，再把pla的有机溶液混和；并搅拌或漩涡等使之
分散均匀形成混悬液。即油相-l(O》中搅拌或漩涡等使之均匀分散形成均匀的混悬液；
②将完成步骤①形成微球的混悬液加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的氯化 钠溶液和重量百分比浓度为1-10% (w/w)表面活性剂乳化O. l-5min，然后把它转移到重量 百分比浓度为1-10% (w/w)的氯化钠溶液固化1-4小时；
③将完成步骤②的样品冻干的微球； 所述的药物颗粒，指的是亲水性的药物颗粒，或药物载入到辅料中制备的颗粒，或 疏水性的药物通过制剂的方法制备成不溶于有机溶剂的颗粒；
所述的药物包括小分子药物和大分子药物； 所述的小分子药物指的主要是化学药物，大分子药物主要是指生物大分子药物， 尤其指蛋白大分子药物、疫苗、抗体、核酸或脂质体药物； 所述的蛋白大分子药物为促红细胞生成素(EPO)、重组人粒细胞集落剌激因子 (G-CSF)、粒细胞_巨噬细胞集落剌激因子(GM-CSF)、疫苗、干扰素(IFN)、生长激素(GH)、表 皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、转化生长因子(TGF-P)、胰岛素样生长因 子(IGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血小板生长因子(PDGF)、内皮生长因子(EGF)、神 经生长因子(NGF)、骨衍生性生长因子(BDGF)、骨形成蛋白(BMP)、组织多肽抗原(TPA)、抗 体(antibody)、凝血因子VIII (VIII)、或凝血因子IX遗传因子； 所述的核酸为反义核苷酸(anti-RNA)、小分子RNA(RNAi)或基因(DNA);所述的 辅料指的主要是可以注射用级别，尤其是小糖类(蔗糖、海藻糖、葡萄糖、麦芽糖、或乳糖)、 及多羟基类化合物(甘露醇、山梨醇、甘油、l，2-丙二醇、赤鲜糖醇、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚 环氧乙烷、或聚吡咯烷酮)、多糖类化合物(葡聚糖、海藻酸钠、壳聚糖、淀粉、纤维素、或环 糊精物质)、氨基酸化合物(甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、谷氨酸或组氨酸)、或无机盐类物质(锌盐、f丐盐、铜盐、镁盐、或钼盐)的一种或任意组合； 所述的药物颗粒，其药物颗粒的粒径大小在0. 2-10 mm，以粒径为1_5 y mm为佳。
所述的药物颗粒，其重量百分比浓度为0. 2-50% (w/w)之间；以1-20% (w/w)为 佳。 所述的油相-l(O》为聚乳酸(PLA)和聚癸二酸酐(PSA)、聚乳酸(PLA)和聚 苯乙烯(PS)或聚乳酸(PLA)和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80)
(p(cpp : sa20 : 80))的有机溶液； 所述的聚乳酸(PLA)和聚癸二酸酐(PSA)、聚乳酸(PLA)和聚苯乙烯(PS)或聚乳 酸(PLA)和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80) (P(CPP : SA 20 : 80)) 的有机溶液为聚乳酸(PLA)和聚癸二酸酐(PSA)、聚乳酸(PLA)和聚苯乙烯(PS)或聚乳酸 (PLA)和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80)(P(CPP : SA 20 : 80)) 的有机溶液添加O. 1-20% (w/w)聚乙二醇(PEG)或泊洛沙姆(poloxmer) ;PLA和PSA的二 氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿、或丙酮有机溶液，以二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈或它们 的任意组合的有机溶液为佳； 所述的聚乳酸(PLA)和聚癸二酸酐(PSA)、聚乳酸(PLA)和聚苯乙烯(PS)或聚乳 酸(PLA)和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80) (P(CPP : SA 20 : 80)) 的有机溶液浓度为PLA的重量百分比浓度为0. 5-80% (w/w)，其中以5-30% (w/w)为佳； PSA、PS或P(CPP : SA 20 : 80)的重量百分比浓度为20-99. 5% (w/w)，其中以70-95%
(w/w)为佳； 所述的表面活性剂为聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、 泊洛沙姆(poloxmer)、聚三梨醇、乙基纤维素(EC)、或吐温； 所述的表面活性剂为PVA的重量百分比浓度为0. 5-10% (w/w)或含重量百分比 浓度为0.5-10% (w/w)氯化钠等盐溶液、PEG的重量百分比浓度为0.5-20% (w/w)或含重 量百分比浓度为0. 5-10% (w/w)氯化钠等盐溶液、PVP重量百分比浓度为浓度为0. 5-20% (w/w)或含重量百分比浓度为0.5-10% (w/w)氯化钠等盐溶液、泊洛沙姆重量百分比浓度 为0. 5-20%或含重量百分比浓度为0. 5-10% (w/w)氯化钠等盐溶液、或乙基纤维素重量百 分比浓度为为0.5-20% (w/w)或含重量百分比浓度为0.5-10% (w/w)氯化钠等盐溶液。
所述微球的粒径为1-500 ii m，以10-100 ii m为佳； 本发明选择了合适比例和浓度的聚乳酸(PLA)和聚癸二酸酐(PSA)、聚乳酸(PLA) 和聚苯乙烯(PS)或聚乳酸(PLA)和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80)
(p(cpp : sa 20 : so))的混合材料，使水溶性的药物颗粒或油溶性的药物通过制剂的方法 制备成油不溶的颗粒，避免用常规的w/o和w/o/w的包封率不高，及s/o/o的突释严重，造
成的环境污染的缺点；采用该方法制备微球，其粒径的大小可以根据不同需要，进行控制， 不污染环境；可以避免对药物的治疗的作用影响，尤其是那些物理化学性质不稳定的，对油 水界面敏感的药物，如生物大分子药物如蛋白质大分子药物、DNA、RNA或siRNA药物。微粒 的表面光滑圆整，颗粒规整无粘连，粒径可以根据需要进行调控从1 P m到500 m，其冻干 粉剂为白色细腻、疏松，不会塌陷、不粘连，再分散性良好。可以运用到各种药物缓释或控释 微球的制备及疫苗的佐剂。
具体实施例方式以下对本发明的实施例作详细说明以下实施例在以本发明技术方案为前提下进 行实施，给出了详细的实施方式和过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
以下实施例的实施条件
—、空白壳_核微球制备
1.制备油相-1 (0》 油相-i(o》的制备把PSA和PLA按照重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、 i : 6、6 : i、5 : i、4 : i、3 : 1、或2 : i混合溶于有机溶剂制备成浓度为1-50% (w/w)， 形成油相-1 (0》。
2.空白壳-核微球制备 油相-1(0》加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和重量百分比浓度为 1-10% (w/w)的表面活性剂水溶液并搅拌、超声或漩涡0. l-5分钟形成0/W，然后转入重量 百分比浓度为1-10% (w/w)的100-1000ml氯化钠溶液固化l-4小时，离心收集微球并冻干 或挥发除去有机溶剂得到干燥的微球。
二、制备载药物的微球 1.制备药物颗粒，对与小分子药物可以是常规的碾磨法、沉淀法、粉碎法或造粒 法；对于生物大分子药物可以是水相-水相乳液法、低温喷雾干燥法、相分离法、超临界法 或金属离子与生物大分子形成的复合物的方法；
2.制备混悬液 混悬液的制备把亲水性的药物颗粒与PLA的有机溶液混和后，再把PSA的有机溶 液混和(其中聚乳酸(PLA)和聚癸二酸酐(PSA)、聚乳酸(PLA)和聚苯乙烯(PS)或聚乳酸 (PLA)和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80)(P(CPP : SA 20 : 80)) 的浓度比例均按照空白油相制备)；或把疏水性的药物颗粒与聚癸二酸酐(PSA)、聚苯乙烯
(ps)或聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80)(p(cpp : sa 20 : so))先
混和，再把PLA的有机溶液混和(其中其中聚乳酸(PLA)和聚癸二酸酐(PSA)、聚乳酸(PLA) 和聚苯乙烯(PS)或聚乳酸(PLA)和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80)
(p(cpp : sa 20 : 80))的浓度比例均按照空白油相制备)；形成混悬液。 3.把药物颗粒与制备空白微球油相-1混匀形成均匀的混悬液； 4.把步骤2或步骤3的混悬液加到重量百分比浓度为1-10 % (w/w)氯化钠和
1-10% (w/w)的表面活性剂水溶液，并搅拌、漩涡或超声0. l-5分钟，形成复乳； 5.把步骤4的复乳，滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-1000ml氯化
钠溶液固化1-4小时，离心收集微球并洗涤3-5次，然后冻干得微球。 以下实施例克服了水溶性好的药物包封率不高、突释严重的缺点；对于生物大分 子药物来说，克服了油水界面、高剪切力、界面、和交联剂等，在温和的条件下把生物大分子 药物，如蛋白质、多肽、疫苗、DNA、 RNA、 SiRNA、病毒和脂质体载入微球中，能够长期保持活 性。大大的减少保存的费用和提高疗效。同时制备的双层的微球大大的减少突释。
实施例一 载有小分子药物颗粒PLA/PSA壳-核微球的制备 (1)按照亲水性小分子药物颗粒和PLA的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比
7为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、i : 10等比例搅拌、漩 涡或超声i-5分钟形成均匀得混悬液，再把psa的有机溶液加到上述混悬液中，再搅拌、漩
涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体(s/0》乳液；或按照疏水性的药物分子
颗粒和PLA的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比为i : i、i : 2、1 : 3、1 : 4、i : 5、 1 : 6、i : 7、1 : 8、i : 9、1 : 10等比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再
把PLGA的有机溶液加到上述混悬液中，再搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即
油包固体(s/0》乳液; (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-1000ml氯化 钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例二 载有生物大分子药物颗粒PLA/PSA壳_核微球的制备 (1)按照生物大分子药物颗粒和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或它们的混合溶
液重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、i : io等比例
搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把PSA的有机溶液加到上述混悬液中，再
搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(s/0》乳液； (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的1000ml氯化钠溶 液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例三 载有牛血清白蛋白(BSA)多糖微粒PLA/PSA壳-核微球的制备 (l)BSA多糖和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或它们的混合溶液重量比为
i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、i : 10等比例搅拌、漩涡或
超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把PSA的有机溶液加到上述混悬液中，再搅拌、漩涡或
超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(s/0》乳液； (2)把步骤(1)得乳液滴加到1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/w)的表面活性剂 水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳加到浓度为1-10% (w/w)的1000ml氯化钠溶液固化1-4 小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 实施例四 载有干扰素(ifn)多糖微粒PLA/PSA壳-核微球的制备 (1)载有干扰素(IFN)多糖微粒和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或它们的混合
溶液重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、i : io等比
例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把PSA的有机溶液加到上述混悬液中，再搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(s/0》乳液；
(2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-1000ml氯化 钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例五 促红细胞生成素(EPO)多糖微粒PLA/PSA壳-核微球的制备 (1)促红细胞生成素(EPO)多糖微粒和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或它们的
混合溶液重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、i : io
等比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把psa的有机溶液加到上述混悬液
中，再搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(S/0》乳液； (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-1000ml氯化 钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例六 粒细胞集落剌激因子(G-CSF)多糖微粒PLA/PSA壳-核微球的制备 (1)粒细胞集落剌激因子(G-CSF)多糖微粒和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或
它们的混合溶液重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、
1 : 10等比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把PSA的有机溶液加到上述 混悬液中，再搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(S/0》 乳液； (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-1000ml氯化 钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例七 粒细胞-巨噬细胞集落剌激因子(GM-CSF)多糖微粒PLA/PSA壳-核微球的制备
(1)粒细胞-巨噬细胞集落剌激因子(GM-CSF)多糖微粒和PLA的二氯甲烷、乙
腈、乙酸乙酯或它们的混合溶液重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、 i : 8、i : 9、i : 10等比例搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液，再把PSA的有机 溶液加到上述混悬液中，再搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油 包固体(s/0》乳液; (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-1000ml氯化钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例八 生长激素(GH)多糖微粒PLA/PS壳-核微球的制备 (1)生长激素(GH)多糖微粒和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或它们的混合溶液
重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、i : io等比例搅
拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把PSA的有机溶液加到上述混悬液中，再搅
拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(S/0》乳液； (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-lOOOml氯化 钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例九 生长激素(GH)多糖微粒P(CPP : SA 20 : 80)壳_核微球的制备 (1)生长激素(GH)多糖微粒和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或它们的混合溶液
重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、i : io等比例搅
拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把P(CPP : SA 20 : 80)的有机溶液加到上
述混悬液中，再搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(s/
0》乳液; (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-lOOOml氯化 钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例十 血管内皮细胞生长因子(VEGF)多糖微粒PLA/PSA壳-核微球的制备 (1)血管内皮细胞生长因子(VEGF)多糖微粒和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或
它们的混合溶液重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、
1 : 10等比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把PSA的有机溶液加到上述 混悬液中，再搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(S/0》 乳液； (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-1000ml氯化 钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例i^一 骨形成蛋白(BMP)多糖微粒PLA/PSA壳-核微球的制备
(1)骨形成蛋白(BMP)多糖微粒和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或它们的混合
溶液重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、i : io等比
例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把PSA的有机溶液加到上述混悬液中，
再搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(S/0》乳液； (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-lOOOml氯化 钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例十二 骨衍生性生长因子(BDGF)多糖微粒PLA/PSA壳-核微球的制备 (1)骨衍生性生长因子(BDGF)多糖微粒和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或它们
的混合溶液重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、i : io
等比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把PSA的有机溶液加到上述混悬液
中，再搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(S/0》乳液； (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； [ono] (3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-lOOOml氯化 钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
权利要求
一种壳-核双层微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤①混悬液的制备把药物颗粒分散在聚乳酸和聚癸二酸酐、聚乳酸和聚苯乙烯或聚乳酸和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20∶80)的有机溶液中，或把亲水性的药物颗粒与PLA的有机溶液混和后，在把聚癸二酸酐、聚苯乙烯或聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20∶80)的有机溶液混和；或把疏水性的药物颗粒与聚癸二酸酐、聚苯乙烯或聚[1，3双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20∶80)先混和，再把PLA的有机溶液混和；形成混悬液。②将混悬液加到重量百分比浓度为1-10％的氯化钠和重量百分比浓为度1-10％的表面活性剂水溶液，搅拌0.1-5min形成1-500μm的微球；③将完成步骤②的复加到重量百分比浓度为1-10％的100-1000mL氯化钠溶液固化1-4小时，离心收集微球并洗涤3-5次，然后冻干得微球；④将完成步骤③的样品冻干的微球。
2. 根据权利要求1所述的壳_核双层微球的制备方法，其特征是，所述的药物，包括疏 水的小分子药物、亲水性小分子药物或大分子药物；其重量百分比浓度为0. 2-50%，所述 的药物颗粒，其药物颗粒的粒径大小在0. 2-10 ii m。
3. 根据权利要求2所述的壳-核双层微球的制备方法，其特征是，所述的小分子药物指 化学药物，大分子药物是指蛋白大分子药物、疫苗、抗体、核酸或脂质体药物的生物大分子 药物。
4. 根据权利要求2所述的壳-核双层微球的制备方法，其特征是，所述的蛋白大分子药 物为促红细胞生成素、重组人粒细胞集落剌激因子、粒细胞_巨噬细胞集落剌激因子、疫 苗、干扰素、生长激素、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、转化生长因子、胰岛素样生长 因子、血管内皮细胞生长因子、血小板生长因子、内皮生长因子、神经生长因、骨衍生性生长 因子、骨形成蛋白、组织多肽抗原、抗体、凝血因子VIII或IX遗传因子。
5. 根据权利要求1所述的壳_核双层微球的制备方法，其特征是，所述的油相-1 (01) 为聚乳酸和聚癸二酸酐、聚乳酸和聚苯乙烯或聚乳酸和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙 烷-癸二酸](20 : 80)的有机溶液。
6. 根据权利要求5所述的壳-核双层微球的制备方法，其特征是，所述的有机溶液为 聚乳酸和聚癸二酸酐、聚乳酸和聚苯乙烯或聚乳酸和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸 二酸](20 : 80)的二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿、或丙酮有机溶液；所述的聚乳酸和聚癸二酸酐、聚乳酸和聚苯乙烯或聚乳酸和聚[1，3-双(对羧基苯氧 基)丙烷-癸二酸](20 : 80)的有机溶液其浓度为聚乳酸的重量百分比浓度为O. 5-80%; 聚癸二酸酐、聚苯乙烯或聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80)的重量百 分比浓度为20-99. 5%。
7. 根据权利要求1所述的壳_核双层微球的制备方法，其特征是，所述的表面活性剂 为PVA的重量百分比浓度为0. 5-10%或含重量百分比浓度为0. 5-10%氯化钠等盐溶液、 PEG的重量百分比浓度为0. 5-20%或含重量百分比浓度为0. 5-10%氯化钠等盐溶液、PVP 重量百分比浓度为0. 5-20%或含重量百分比浓度为0. 5-10%氯化钠等盐溶液、泊洛沙姆 重量百分比浓度为0. 5-20%或含重量百分比浓度为0. 5-10%氯化钠等盐溶液、或乙基纤 维素重量百分比浓度为0. 5-20%或含重量百分比浓度为0. 5-10%氯化钠等盐溶液。
8.根据权利要求l所述的壳-核双层微球的制备方法，其特征是，所述的微球的粒径为 1_500 li m。
全文摘要
本发明涉及的是一种制药技术领域的制剂制备方法，尤其是一种壳-核双层微球的制备方法。本发明将药物颗粒分散在PLA和PSA的有机溶液中，并搅拌或漩涡等使之分散均匀形成混悬液；然后将混悬液加到外油相，再搅拌或漩涡形成微球，最后把它转移到大水相中固化1-4小时；然后离心收集微球，冻干保存。本发明制备微球表面光滑圆整，颗粒规整无粘连，粒径可以根据需要进行调控从1μm到500μm，其冻干粉剂为白色细腻，疏松，不会塌陷，不粘连，再分散性良好。可以运用到各种药物缓释或控释微球的制备及疫苗的佐剂。
文档编号A61K9/19GK101773479SQ200910312550
公开日2010年7月14日 申请日期2009年12月30日 优先权日2009年12月30日
发明者任甜甜, 吴飞, 洪晓芸, 袁伟恩, 金拓 申请人:上海交通大学
技术领域：
本发明涉及的是一种制药技术领域的制剂制备方法，尤其是一种壳-核双层微球
的制备方法。 制药行业从药物发现，到临床的应用，最后一个环节是药物制剂。其中有一部分 药物需要长期给药才能治愈；还有一部分需要靶向等局部给药。要达到这些目的，原料药 必须要制备成相应的剂型。例如需要长期给药但在体内的半衰期短的药物，宜制备成缓释 或控释剂型；对于一些肿瘤的治疗，需要一些药物靶向于病照，例如靶向于肿瘤血管的栓塞 微球制剂等；基因重组技术用于治疗蛋白的表达和生产的20多年以来，到目前为止，已有 30多个蛋白药物产品投入临床使用，近200个在审批和研发过程中，涌现出一批诸如安进 (Amgen)、基因技术(Genentech)等一批新的大型医药公司。相对于蛋白大分子药物本身的 快速发展，其剂型技术进展缓慢。 一方面，蛋白大分子药物口服不吸收、体内半衰期短，需要 注射给药；另一方面，许多何尔蒙、细胞因子类的蛋白药物治疗周期长，长期而频繁地注射 成为必须，也影响患者顺应性的主要原因。缓释蛋白药物的剂型的研发，由于在制备微粒过 程导致活性的损失诸如W/0/W法制备的微球易突释等缺点。发展制备具有活性保护的蛋白 微球又可以提高包封率和减少突释的方法势在必行。人们为了减少突释研究了制备双层微 球，但是到目前还是不能解决这一难题。 经对现有技术文献的检索发现，[Meng Shi， Yi-Yan Yang， Cheng-Shu Chaw，
Suat-Hong Goh， Shabbir M. Moochhala， Steve Ng， Jorge Heller， Double walledPLA/ PLGA microspheres -encapsulation of water—soluble and water—insolubl印roteins and their release priorities, Journal of Controlled Release 89(2003)167 77]， [Meng Shi， Yi_Yan Yang， Cheng_Shu Chaw， Suat_Hong Goh， Shabbir M. Moochhala， Steve
Ng， Jorge Heller，双层POE/PLGA微球包封水溶性和水不溶性蛋白和它们的释放特点，控 制释放杂志，89(2003) 167-177]Meng Shi等人在该文献报道了利用W/0/W方法把牛血清白 蛋白(BSA)和环孢霉素A(CyA)的包封在PLGA/PLA壳-核微球里。该文献利用W/0/W最 见的复乳法来制备双层微球，而复乳法的油水界面是公认的蛋白杀手，导致水溶性的蛋白 在该界面的聚集，同样致使包封率也不高，存在不完全释放和突释。[Morita T. ， Sakamura
Y. ， Horikiri Y. ， Suzuki T. ， Yoshino H. ， Proteinencapsulation into biodegradable microspheres by a novel S/0/W emulsion methodusing poly (ethylene glycol)as a protein micronization adjuvant,Journal ofControlled Release 69(2000)435 44]，
(Morita T.等人在该文献报道了利用新S/0/W乳化法制备载蛋白微球。只是改变了表面活 性剂以前报道较多的是用PVA，在这篇文献改用PEG。但是仍然不能克服包封率低，存在突 释和不完全释放的缺点。
背景技术：
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种壳_核双层微球的制备方 法。使其制备的微粒表面光滑圆整，均匀度好，颗粒规整无粘连；包封率高，突释小，载药量高。 本发明是通过以下技术方案实现的 本发明将药物颗粒分散在聚乳酸(PLA)和聚癸二酸酐(PSA)、聚乳酸(PLA)和聚 苯乙烯(PS)或聚乳酸(PLA)和聚[1，3_双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80) (P(CPP : SA20 : 80))的有机溶液中，或把亲水性的药物颗粒与PLA的有机溶液混和后，再 把PSA、PS或P(CPP : SA 20 : 80)的有机溶液混和；或把疏水性的药物颗粒与PSA、PS或
p(cpp : sa 20 : so)先混和，再把pla的有机溶液混和；并搅拌或漩涡等使之分散均匀形
成混悬液；然后将混悬液加到外油相，再搅拌或漩涡形成微球，最后把它转移到大水相中固 化1-4小时；然后离心收集微球，冻干保存。
本发明包括以下步骤 ①将药物颗粒加入到聚乳酸(PLA)和聚癸二酸酐(PSA)、聚乳酸(PLA)和聚苯 乙烯(PS)或聚乳酸(PLA)和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80) (P(CPP : SA20 : 80))微球方法的有机混合溶液、或把亲水性的药物颗粒与PLA的有机溶 液混和后，再把PSA、PS或P(CPP : SA 20 : 80)的有机溶液混和；或把疏水性的药物颗粒 与psa、ps或p(cpp : sa20 : 80)先混和，再把pla的有机溶液混和；并搅拌或漩涡等使之
分散均匀形成混悬液。即油相-l(O》中搅拌或漩涡等使之均匀分散形成均匀的混悬液；
②将完成步骤①形成微球的混悬液加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的氯化 钠溶液和重量百分比浓度为1-10% (w/w)表面活性剂乳化O. l-5min，然后把它转移到重量 百分比浓度为1-10% (w/w)的氯化钠溶液固化1-4小时；
③将完成步骤②的样品冻干的微球； 所述的药物颗粒，指的是亲水性的药物颗粒，或药物载入到辅料中制备的颗粒，或 疏水性的药物通过制剂的方法制备成不溶于有机溶剂的颗粒；
所述的药物包括小分子药物和大分子药物； 所述的小分子药物指的主要是化学药物，大分子药物主要是指生物大分子药物， 尤其指蛋白大分子药物、疫苗、抗体、核酸或脂质体药物； 所述的蛋白大分子药物为促红细胞生成素(EPO)、重组人粒细胞集落剌激因子 (G-CSF)、粒细胞_巨噬细胞集落剌激因子(GM-CSF)、疫苗、干扰素(IFN)、生长激素(GH)、表 皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、转化生长因子(TGF-P)、胰岛素样生长因 子(IGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血小板生长因子(PDGF)、内皮生长因子(EGF)、神 经生长因子(NGF)、骨衍生性生长因子(BDGF)、骨形成蛋白(BMP)、组织多肽抗原(TPA)、抗 体(antibody)、凝血因子VIII (VIII)、或凝血因子IX遗传因子； 所述的核酸为反义核苷酸(anti-RNA)、小分子RNA(RNAi)或基因(DNA);所述的 辅料指的主要是可以注射用级别，尤其是小糖类(蔗糖、海藻糖、葡萄糖、麦芽糖、或乳糖)、 及多羟基类化合物(甘露醇、山梨醇、甘油、l，2-丙二醇、赤鲜糖醇、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚 环氧乙烷、或聚吡咯烷酮)、多糖类化合物(葡聚糖、海藻酸钠、壳聚糖、淀粉、纤维素、或环 糊精物质)、氨基酸化合物(甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、谷氨酸或组氨酸)、或无机盐类物质(锌盐、f丐盐、铜盐、镁盐、或钼盐)的一种或任意组合； 所述的药物颗粒，其药物颗粒的粒径大小在0. 2-10 mm，以粒径为1_5 y mm为佳。
所述的药物颗粒，其重量百分比浓度为0. 2-50% (w/w)之间；以1-20% (w/w)为 佳。 所述的油相-l(O》为聚乳酸(PLA)和聚癸二酸酐(PSA)、聚乳酸(PLA)和聚 苯乙烯(PS)或聚乳酸(PLA)和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80)
(p(cpp : sa20 : 80))的有机溶液； 所述的聚乳酸(PLA)和聚癸二酸酐(PSA)、聚乳酸(PLA)和聚苯乙烯(PS)或聚乳 酸(PLA)和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80) (P(CPP : SA 20 : 80)) 的有机溶液为聚乳酸(PLA)和聚癸二酸酐(PSA)、聚乳酸(PLA)和聚苯乙烯(PS)或聚乳酸 (PLA)和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80)(P(CPP : SA 20 : 80)) 的有机溶液添加O. 1-20% (w/w)聚乙二醇(PEG)或泊洛沙姆(poloxmer) ;PLA和PSA的二 氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿、或丙酮有机溶液，以二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈或它们 的任意组合的有机溶液为佳； 所述的聚乳酸(PLA)和聚癸二酸酐(PSA)、聚乳酸(PLA)和聚苯乙烯(PS)或聚乳 酸(PLA)和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80) (P(CPP : SA 20 : 80)) 的有机溶液浓度为PLA的重量百分比浓度为0. 5-80% (w/w)，其中以5-30% (w/w)为佳； PSA、PS或P(CPP : SA 20 : 80)的重量百分比浓度为20-99. 5% (w/w)，其中以70-95%
(w/w)为佳； 所述的表面活性剂为聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、 泊洛沙姆(poloxmer)、聚三梨醇、乙基纤维素(EC)、或吐温； 所述的表面活性剂为PVA的重量百分比浓度为0. 5-10% (w/w)或含重量百分比 浓度为0.5-10% (w/w)氯化钠等盐溶液、PEG的重量百分比浓度为0.5-20% (w/w)或含重 量百分比浓度为0. 5-10% (w/w)氯化钠等盐溶液、PVP重量百分比浓度为浓度为0. 5-20% (w/w)或含重量百分比浓度为0.5-10% (w/w)氯化钠等盐溶液、泊洛沙姆重量百分比浓度 为0. 5-20%或含重量百分比浓度为0. 5-10% (w/w)氯化钠等盐溶液、或乙基纤维素重量百 分比浓度为为0.5-20% (w/w)或含重量百分比浓度为0.5-10% (w/w)氯化钠等盐溶液。
所述微球的粒径为1-500 ii m，以10-100 ii m为佳； 本发明选择了合适比例和浓度的聚乳酸(PLA)和聚癸二酸酐(PSA)、聚乳酸(PLA) 和聚苯乙烯(PS)或聚乳酸(PLA)和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80)
(p(cpp : sa 20 : so))的混合材料，使水溶性的药物颗粒或油溶性的药物通过制剂的方法 制备成油不溶的颗粒，避免用常规的w/o和w/o/w的包封率不高，及s/o/o的突释严重，造
成的环境污染的缺点；采用该方法制备微球，其粒径的大小可以根据不同需要，进行控制， 不污染环境；可以避免对药物的治疗的作用影响，尤其是那些物理化学性质不稳定的，对油 水界面敏感的药物，如生物大分子药物如蛋白质大分子药物、DNA、RNA或siRNA药物。微粒 的表面光滑圆整，颗粒规整无粘连，粒径可以根据需要进行调控从1 P m到500 m，其冻干 粉剂为白色细腻、疏松，不会塌陷、不粘连，再分散性良好。可以运用到各种药物缓释或控释 微球的制备及疫苗的佐剂。
具体实施例方式以下对本发明的实施例作详细说明以下实施例在以本发明技术方案为前提下进 行实施，给出了详细的实施方式和过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
以下实施例的实施条件
—、空白壳_核微球制备
1.制备油相-1 (0》 油相-i(o》的制备把PSA和PLA按照重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、 i : 6、6 : i、5 : i、4 : i、3 : 1、或2 : i混合溶于有机溶剂制备成浓度为1-50% (w/w)， 形成油相-1 (0》。
2.空白壳-核微球制备 油相-1(0》加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和重量百分比浓度为 1-10% (w/w)的表面活性剂水溶液并搅拌、超声或漩涡0. l-5分钟形成0/W，然后转入重量 百分比浓度为1-10% (w/w)的100-1000ml氯化钠溶液固化l-4小时，离心收集微球并冻干 或挥发除去有机溶剂得到干燥的微球。
二、制备载药物的微球 1.制备药物颗粒，对与小分子药物可以是常规的碾磨法、沉淀法、粉碎法或造粒 法；对于生物大分子药物可以是水相-水相乳液法、低温喷雾干燥法、相分离法、超临界法 或金属离子与生物大分子形成的复合物的方法；
2.制备混悬液 混悬液的制备把亲水性的药物颗粒与PLA的有机溶液混和后，再把PSA的有机溶 液混和(其中聚乳酸(PLA)和聚癸二酸酐(PSA)、聚乳酸(PLA)和聚苯乙烯(PS)或聚乳酸 (PLA)和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80)(P(CPP : SA 20 : 80)) 的浓度比例均按照空白油相制备)；或把疏水性的药物颗粒与聚癸二酸酐(PSA)、聚苯乙烯
(ps)或聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80)(p(cpp : sa 20 : so))先
混和，再把PLA的有机溶液混和(其中其中聚乳酸(PLA)和聚癸二酸酐(PSA)、聚乳酸(PLA) 和聚苯乙烯(PS)或聚乳酸(PLA)和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80)
(p(cpp : sa 20 : 80))的浓度比例均按照空白油相制备)；形成混悬液。 3.把药物颗粒与制备空白微球油相-1混匀形成均匀的混悬液； 4.把步骤2或步骤3的混悬液加到重量百分比浓度为1-10 % (w/w)氯化钠和
1-10% (w/w)的表面活性剂水溶液，并搅拌、漩涡或超声0. l-5分钟，形成复乳； 5.把步骤4的复乳，滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-1000ml氯化
钠溶液固化1-4小时，离心收集微球并洗涤3-5次，然后冻干得微球。 以下实施例克服了水溶性好的药物包封率不高、突释严重的缺点；对于生物大分 子药物来说，克服了油水界面、高剪切力、界面、和交联剂等，在温和的条件下把生物大分子 药物，如蛋白质、多肽、疫苗、DNA、 RNA、 SiRNA、病毒和脂质体载入微球中，能够长期保持活 性。大大的减少保存的费用和提高疗效。同时制备的双层的微球大大的减少突释。
实施例一 载有小分子药物颗粒PLA/PSA壳-核微球的制备 (1)按照亲水性小分子药物颗粒和PLA的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比
7为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、i : 10等比例搅拌、漩 涡或超声i-5分钟形成均匀得混悬液，再把psa的有机溶液加到上述混悬液中，再搅拌、漩
涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体(s/0》乳液；或按照疏水性的药物分子
颗粒和PLA的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比为i : i、i : 2、1 : 3、1 : 4、i : 5、 1 : 6、i : 7、1 : 8、i : 9、1 : 10等比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再
把PLGA的有机溶液加到上述混悬液中，再搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即
油包固体(s/0》乳液; (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-1000ml氯化 钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例二 载有生物大分子药物颗粒PLA/PSA壳_核微球的制备 (1)按照生物大分子药物颗粒和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或它们的混合溶
液重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、i : io等比例
搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把PSA的有机溶液加到上述混悬液中，再
搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(s/0》乳液； (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的1000ml氯化钠溶 液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例三 载有牛血清白蛋白(BSA)多糖微粒PLA/PSA壳-核微球的制备 (l)BSA多糖和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或它们的混合溶液重量比为
i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、i : 10等比例搅拌、漩涡或
超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把PSA的有机溶液加到上述混悬液中，再搅拌、漩涡或
超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(s/0》乳液； (2)把步骤(1)得乳液滴加到1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/w)的表面活性剂 水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳加到浓度为1-10% (w/w)的1000ml氯化钠溶液固化1-4 小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。 实施例四 载有干扰素(ifn)多糖微粒PLA/PSA壳-核微球的制备 (1)载有干扰素(IFN)多糖微粒和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或它们的混合
溶液重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、i : io等比
例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把PSA的有机溶液加到上述混悬液中，再搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(s/0》乳液；
(2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-1000ml氯化 钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例五 促红细胞生成素(EPO)多糖微粒PLA/PSA壳-核微球的制备 (1)促红细胞生成素(EPO)多糖微粒和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或它们的
混合溶液重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、i : io
等比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把psa的有机溶液加到上述混悬液
中，再搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(S/0》乳液； (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-1000ml氯化 钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例六 粒细胞集落剌激因子(G-CSF)多糖微粒PLA/PSA壳-核微球的制备 (1)粒细胞集落剌激因子(G-CSF)多糖微粒和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或
它们的混合溶液重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、
1 : 10等比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把PSA的有机溶液加到上述 混悬液中，再搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(S/0》 乳液； (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-1000ml氯化 钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例七 粒细胞-巨噬细胞集落剌激因子(GM-CSF)多糖微粒PLA/PSA壳-核微球的制备
(1)粒细胞-巨噬细胞集落剌激因子(GM-CSF)多糖微粒和PLA的二氯甲烷、乙
腈、乙酸乙酯或它们的混合溶液重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、 i : 8、i : 9、i : 10等比例搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液，再把PSA的有机 溶液加到上述混悬液中，再搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油 包固体(s/0》乳液; (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-1000ml氯化钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例八 生长激素(GH)多糖微粒PLA/PS壳-核微球的制备 (1)生长激素(GH)多糖微粒和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或它们的混合溶液
重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、i : io等比例搅
拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把PSA的有机溶液加到上述混悬液中，再搅
拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(S/0》乳液； (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-lOOOml氯化 钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例九 生长激素(GH)多糖微粒P(CPP : SA 20 : 80)壳_核微球的制备 (1)生长激素(GH)多糖微粒和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或它们的混合溶液
重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、i : io等比例搅
拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把P(CPP : SA 20 : 80)的有机溶液加到上
述混悬液中，再搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(s/
0》乳液; (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-lOOOml氯化 钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例十 血管内皮细胞生长因子(VEGF)多糖微粒PLA/PSA壳-核微球的制备 (1)血管内皮细胞生长因子(VEGF)多糖微粒和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或
它们的混合溶液重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、
1 : 10等比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把PSA的有机溶液加到上述 混悬液中，再搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(S/0》 乳液； (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； (3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-1000ml氯化 钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例i^一 骨形成蛋白(BMP)多糖微粒PLA/PSA壳-核微球的制备
(1)骨形成蛋白(BMP)多糖微粒和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或它们的混合
溶液重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、i : io等比
例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把PSA的有机溶液加到上述混悬液中，
再搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(S/0》乳液； (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳；
(3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-lOOOml氯化 钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
实施例十二 骨衍生性生长因子(BDGF)多糖微粒PLA/PSA壳-核微球的制备 (1)骨衍生性生长因子(BDGF)多糖微粒和PLA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或它们
的混合溶液重量比为i : i、i : 2、i : 3、i : 4、i : 5、i : 6、i : 7、i : 8、i : 9、i : io
等比例搅拌、漩涡或超声1-5分钟形成均匀得混悬液，再把PSA的有机溶液加到上述混悬液
中，再搅拌、漩涡或超声l-5分钟形成均匀得混悬液，即油包固体即油包固体(S/0》乳液； (2)把步骤(1)得乳液滴加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)氯化钠和1-10% (w/V)的表面活性剂水溶液并搅拌、漩涡或超声0. 1-5分钟形成复乳； [ono] (3)把步骤(2)的复乳加到重量百分比浓度为1-10% (w/w)的100-lOOOml氯化 钠溶液固化1-4小时； (4)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3-5次，冻干后得到微球。
权利要求
一种壳-核双层微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤①混悬液的制备把药物颗粒分散在聚乳酸和聚癸二酸酐、聚乳酸和聚苯乙烯或聚乳酸和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20∶80)的有机溶液中，或把亲水性的药物颗粒与PLA的有机溶液混和后，在把聚癸二酸酐、聚苯乙烯或聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20∶80)的有机溶液混和；或把疏水性的药物颗粒与聚癸二酸酐、聚苯乙烯或聚[1，3双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20∶80)先混和，再把PLA的有机溶液混和；形成混悬液。②将混悬液加到重量百分比浓度为1-10％的氯化钠和重量百分比浓为度1-10％的表面活性剂水溶液，搅拌0.1-5min形成1-500μm的微球；③将完成步骤②的复加到重量百分比浓度为1-10％的100-1000mL氯化钠溶液固化1-4小时，离心收集微球并洗涤3-5次，然后冻干得微球；④将完成步骤③的样品冻干的微球。
2. 根据权利要求1所述的壳_核双层微球的制备方法，其特征是，所述的药物，包括疏 水的小分子药物、亲水性小分子药物或大分子药物；其重量百分比浓度为0. 2-50%，所述 的药物颗粒，其药物颗粒的粒径大小在0. 2-10 ii m。
3. 根据权利要求2所述的壳-核双层微球的制备方法，其特征是，所述的小分子药物指 化学药物，大分子药物是指蛋白大分子药物、疫苗、抗体、核酸或脂质体药物的生物大分子 药物。
4. 根据权利要求2所述的壳-核双层微球的制备方法，其特征是，所述的蛋白大分子药 物为促红细胞生成素、重组人粒细胞集落剌激因子、粒细胞_巨噬细胞集落剌激因子、疫 苗、干扰素、生长激素、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、转化生长因子、胰岛素样生长 因子、血管内皮细胞生长因子、血小板生长因子、内皮生长因子、神经生长因、骨衍生性生长 因子、骨形成蛋白、组织多肽抗原、抗体、凝血因子VIII或IX遗传因子。
5. 根据权利要求1所述的壳_核双层微球的制备方法，其特征是，所述的油相-1 (01) 为聚乳酸和聚癸二酸酐、聚乳酸和聚苯乙烯或聚乳酸和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙 烷-癸二酸](20 : 80)的有机溶液。
6. 根据权利要求5所述的壳-核双层微球的制备方法，其特征是，所述的有机溶液为 聚乳酸和聚癸二酸酐、聚乳酸和聚苯乙烯或聚乳酸和聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸 二酸](20 : 80)的二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿、或丙酮有机溶液；所述的聚乳酸和聚癸二酸酐、聚乳酸和聚苯乙烯或聚乳酸和聚[1，3-双(对羧基苯氧 基)丙烷-癸二酸](20 : 80)的有机溶液其浓度为聚乳酸的重量百分比浓度为O. 5-80%; 聚癸二酸酐、聚苯乙烯或聚[1，3-双(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸](20 : 80)的重量百 分比浓度为20-99. 5%。
7. 根据权利要求1所述的壳_核双层微球的制备方法，其特征是，所述的表面活性剂 为PVA的重量百分比浓度为0. 5-10%或含重量百分比浓度为0. 5-10%氯化钠等盐溶液、 PEG的重量百分比浓度为0. 5-20%或含重量百分比浓度为0. 5-10%氯化钠等盐溶液、PVP 重量百分比浓度为0. 5-20%或含重量百分比浓度为0. 5-10%氯化钠等盐溶液、泊洛沙姆 重量百分比浓度为0. 5-20%或含重量百分比浓度为0. 5-10%氯化钠等盐溶液、或乙基纤 维素重量百分比浓度为0. 5-20%或含重量百分比浓度为0. 5-10%氯化钠等盐溶液。
8.根据权利要求l所述的壳-核双层微球的制备方法，其特征是，所述的微球的粒径为 1_500 li m。
全文摘要
本发明涉及的是一种制药技术领域的制剂制备方法，尤其是一种壳-核双层微球的制备方法。本发明将药物颗粒分散在PLA和PSA的有机溶液中，并搅拌或漩涡等使之分散均匀形成混悬液；然后将混悬液加到外油相，再搅拌或漩涡形成微球，最后把它转移到大水相中固化1-4小时；然后离心收集微球，冻干保存。本发明制备微球表面光滑圆整，颗粒规整无粘连，粒径可以根据需要进行调控从1μm到500μm，其冻干粉剂为白色细腻，疏松，不会塌陷，不粘连，再分散性良好。可以运用到各种药物缓释或控释微球的制备及疫苗的佐剂。
文档编号A61K9/19GK101773479SQ200910312550
公开日2010年7月14日 申请日期2009年12月30日 优先权日2009年12月30日
发明者任甜甜, 吴飞, 洪晓芸, 袁伟恩, 金拓 申请人:上海交通大学
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