N端b型排尿利钠肽快速检测试剂盒的制作方法

N端b型排尿利钠肽快速检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本实用新型设及体外诊断技术领域，特别设及免疫测定，具体是指一种N端B型排 尿利钢肤快速检测试剂盒。
【背景技术】
[0002] NT-proBNP全名氨基末端脑钢肤前体，有研究显示：屯、室功能障碍患者的 NT-proBNP含量会升高，而且含量与屯、衰的严重程度直接相关（NYHA，纽约屯、脏协会分级）。
[0003] 屯、脏不仅具有累血功能，而且还是一个内分泌腺。目前为止，已经确认有两种多肤 由屯、脏分泌通过屯、肌细胞拉伸进入血液循环，它们分别是屯、房利钢肤（AN巧和B型利钢肤 炬NP)。ANP主要由屯、房分泌，而BNP由屯、室分泌的。在屯、衰患者中，由于屯、容量超负荷、屯、 压升高会使血浆利钢肤水平升高。由于BNP主要由屯、室分泌，因此在诊断屯、室功能障碍时， 相对ANP而言是个更为直接的标志物。
[0004]BNP是作为激素原合成的，称之为proBNP炬NP前体）。在受到屯、肌细胞的刺激后 (例如，屯、肌细胞拉伸），proBNP在蛋白酶作用下列解为NT-proBNP(氨基末端-proBNP或 N端-proBN巧和生物活性激素BNP。两种多肤都释放进入血循环。NT-BNP生物半衰期是 60-120分钟，相比生物半衰期仅为20分钟的BNP要长的多，因此检测NT-proBNP更有利于 实验室操作。
[0005] NT-proBNP在临床应用领域较为广泛。其在医学上的价值正得到广泛验正和承认。 现将其临床意义综述如下：
[0006] 1、用于诊断各种类型屯、衰
[0007] 从2005年开始ESC/AHA屯、衰防治指南将NT-proBNP加入作为诊治屯、衰标准之一。 首先NT-proBNP<300pg/ml可W排除急性屯、衰的诊断，用于鉴别诊断急性呼吸困难的患者、 急性屯、衰和肺部疾病。同时NT-proBNP与NYHA分级呈正相关，NYHA分级越高，NT-proBNP 血浆值越高。但是在临床应用时，还需将年龄、性别、检测方法等影响NT-proBNP的因素考 虑在内。NT-proBNP还可辅助筛选无症状的左室功能障碍患者，尤其是对那些存在发生左室 功能障碍高危因素的患者，如糖尿病、新发屯、梗、终末期肾功能不全、使用葱环类化疗药物 的患者。包括主动脉狭窄，肥厚型屯、肌病，限制型屯、肌病等引起的舒张性屯、功能不全也会使 NT-proBNP值升高。右室功能障碍的疾病如原发性肺动脉高压，肺源性屯、脏病，肺栓塞等也 导致NT-proBNP值升高，但是其升高的程度不及左室功能障碍的疾病。
[0008]NT-proBNP排除/诊断屯、衰的标准年龄<50岁，NT-proBNP值<450pg/ml屯、衰可 能性高，300-450pg/ml时屯、衰可能性较低需结合其他临床表现诊断，<300pg/ml时可W排 除屯、衰可能；年龄在50-75岁，NT-proBNP值<900pg/ml时屯、衰可能性高，300-900pg/ml时 屯、衰可能性较低需结合其他临床表现诊断，<300pg/ml时可排除屯、衰可能；年龄八5岁， NT-proBNP值<1800pg/ml时屯、衰可能性高，300-1800pg/ml时屯、衰可能性较低需结合其他 临床表现诊断，<300pg/ml时可排除屯、衰可能。当NT-proBNP值处于过度区时可结合其他 临床表现，诊断屯、衰；无咳嗽症状；就诊期间服用髓伴利尿剂；阵发性夜间呼吸困难；颈静 脉扩张。
[000引 2、指导屯、衰的治疗
[0010]NT-proBNP能帮助临床医生选择恰当地治疗屯、衰的药物和剂量。NT-proBNP升高 的患者对ACEI更敏感有效，强剂量的ACEI可明显降低NT-proBNP值，改善预后。除此之外 NT-proBNP也有助于判断某些屯、衰病人是否要选择手术治疗，如植入除颤器，屯、脏移植等。
[0011] 3、判断屯、衰和屯、梗后新发屯、衰患者的预后
[0012] 在慢性屯、衰的患者中，NT-proBNP值越高，预示预后发生各种原因死亡可能性大。 急性屯、梗后，NT-proBNP升高高度提示左室发生重构，左室功能障碍，预后发生屯、衰、死亡等 不良事件可能性大。且该些预测能力独立于年龄、NYHA屯、功能分级、及左室射血分数等其 他因素。
[001引 4、NT-proBNP在治疗ACS中的应用，可用于冠屯、病的诊断。
[0014]NT-proBNP可W由屯、肌梗死区周围的未死亡屯、肌细胞甚至未发生缺血的屯、肌细胞 分泌，因此可W早期敏感地预测屯、肌缺血的发生，尤其对于非ST段抬高屯、肌梗死（NSEMI) 的患者，发生梗塞的血管越重要（如前降支等），缺血程度越严重，NT-proBNP血浆值越高。 但是由于NT-proBNP受到多种生理、病理因素的影响，诊断冠屯、病的特异性较差。
[0015] 5、用于预测ACS预后
[0016] 越来越多的临床随访发现，急性冠脉综合症的患者入院时NT-proBNP血浆水平升 高与短期及长期预后转归均有密切的关系。包括STEM、NSTEMI、UA在内的ACS患者中，入院 时NT-proBNP血浆值升高，4个月、6个月、1年、2年的新发屯、衰率，死亡率显著升高。并且 NT-proBNP血浆值越高，ACS患者预后发生各种不良事件的机率越大。ACS症状出现至采集 血样化至7化左右之内的NT-proBNP值均能很好的预测1年死亡率。
[0017] 6、用于指导ACS治疗
[0018] 目前ACS治疗方法分为保守治疗和手术治疗。保守治疗包括抗血小板，稳定斑块， 静脉溶栓，抗凝治疗等。而手术治疗主要包括PCI术和CABG术。目前研究认为对于高危 ACS患者，早期手术治疗能明显改善预后，并且患者危险分级越高，手术治疗的有效性越显 著。但由于手术治疗本身是一种侵入性的操作，因此对于低危ACS患者，手术将会增加治 疗风险。
[0019]NT-proBNP可对ACS患者进行有效的危险分层，从而帮助临床医生选择最恰当的 治疗方法，更好地降低预后不良事件发生率。研究将ACS患者根据NT-proBNP血浆值由低 到高分为四组。NT-proBNP数值处于最高组的患者进行早期的手术治疗后，其预后死亡率 明显下降；NT-proBNP数值处于中间两组的患者，是否行手术治疗其死亡率没有明显变化； NT-proBNP数值最低组中，进行手术治疗的患者较非手术治疗的患者死亡率增加。
[0020] 7、用于判断ACS治疗的效果
[0021]NT-proBNP血浆水平会随着ACS患者预后危险性的下降而下降。有效的治疗后 NT-proBNP血浆水平下降，预后不良事件发生率下降。如果PCI术后NT-proBNP值持续不降 或持续升高可预示患者预后不佳。
[0022] NT-proBNP的检测方法市面上常见为电化学发光免疫分析法巧化IA法）、酶免疫 测定法巧IA法）和放射免疫分析法巧IA法），近些年已有部分厂商引入了部分更为先进的 检测方法，现有的方法存在着检测灵敏度低、精密性差等局限性。
[0023] 所W需要提供一种新的NT-proBNP检测方法和试剂盒，W解决现有技术中的存在 的问题。 【实用新型内容】
[0024] 本实用新型的目的是为了克服上述现有技术中的缺点，提供一种检测结果稳定， 准确率高、成本低，灵敏度高，精密性好，检测范围宽、适用临床推广的N端B型排尿利钢肤 快速检测试剂盒。
[0025] 为了实现上述目的，本实用新型提供了一种N端B型排尿利钢肤快速检测试剂盒， 其特点在于，其包括盒盖、盒体、第一试剂单元、第二试剂单元、第=试剂单元，其中，
[0026] 所述的第一试剂单元、所述的第二试剂单元、所述的第=试剂单元都由可密封的 试剂瓶组成，所述的盒盖和所述的盒体连接，所述的第一试剂单元、所述的第二试剂单元、 所述的第=试剂单元都按顺序放置于所述的盒体中。
[0027] 较佳地，所述的盒体的形状为长方体形状。
[0028] 较佳地，所述的第一试剂单元为装有包被有活性分子的发光微球的试剂瓶，所述 的第二试剂单元为装有已标记生物素的活性分子的试剂瓶，所述的第=试剂单元为装有内 部带有染料的纳米级感光微球的试剂瓶。
[0029] 采用本实用新型的N端B型排尿利钢肤快速检测试剂盒，在均相条件下，将内部带 有染料的感光微球（纳米级）、标记生物素的活性分子W及包被有活性分子并且内部带有 发光化合物的发光微球（纳米级）的混合物作为试剂和检测样品混合。此时纳米感光微 球与标记生物素的活性分子形成连接物再和包被有活性分子的纳米发光微球可迅速有效 地捕捉待测样本中的祀分子，在近距离内，立者形成免疫夹屯、复合物。激发光照射后，纳米 感光微球中的染料（光敏氯基化合物）被诱导激活，并释放高能态的活性氧离子（单线态 氧）。该高能态的活性氧离子被近距离的纳米发光微球俘获，从而传递能量W激活所述发光 微球中的发光化合物（稀±馨合物）。数微秒后，发光微球中的发光化合物将释放出高能级 红光。用光子计数器测定该些高能级光子，并通过电脑将光子数换算为目标分子浓度，光子 数的多少即精确地反映了目标分子的浓度。而当样本不含祀分子时，无法在近距离形成免 疫夹屯、复合物，活性氧离子也无法传递至发光微球表面。活性氧离子在液相中迅速衰减，检 测时则无光能级红光产生。其采用全液相的反应模式，液态均相的模式使各测试间的一致 性更好，使产品具有更好的重复性与一致性。且免冲洗，避免反应中引入不必要的干扰物及 其它不确定因素，使得检测结果更为稳定。可W快速诊断领域引入独特的化学发光技术，使 整体检测性能更优。
【附图说明】
[0030] 图1为本实用新型N端B型排尿利钢肤快速检测试剂盒的结构示意图。
[0031] 图2为本实用新型N端B型排尿利钢肤快速检测试剂盒微球结合形成二聚体的原 理图。
[0032] 图3为本实用新型N端B型排尿利钢肤快速检测试剂盒微球微粒未结合时的原理 图。
[0033] 图4为本实用新型N端B型排尿利钢肤快速检测试剂盒单线态氧随微粒距离衰减 时的曲线图。
[0034] 图5为本实用新型实施例的的检测结果与进口NT-proBNP试剂盒检测结果的平行 比较图。
【具体实施方式】
[00巧]为了能够更清楚地理解本实用新型的技术内容，下面对本实用新型的具体实施方 法作进一步说明。
[0036] 如图1所示的一种N端B型排尿利钢肤快速检测的试剂盒，其包括盒盖1、盒体2、 第一试剂单元3、第二试剂单元4、第=试剂单元5,其中，
[0037] 第一试剂单元3、第二试剂单元4、第S试剂单元5都由可密封的试剂瓶组成，盒盖 1和盒体2连接，第一试剂单元3、第二试剂单元4、第=试剂单元5都按顺序放置于盒体中。
[0038] 盒体2的形状为长方体形状。
[0039] 第一试剂单元3为装有包被有活性分子的发光微球的试剂瓶，第二试剂单元4为 装有已标记生物素的活性分子的试剂瓶，第=试剂单元5为装有内部带有染料的纳米级感 光微球的试剂瓶。活性分子为NT-proBNP抗体。
[0040] 其检测原理如图2~图3所示。其单线态样随微粒举例衰减时的曲线图如图4所 /J、- 〇
[0041] 在下述实施例中使用的原料、试剂、仪器来源如下：
[0042]
【主权项】
1. 一种N端B型排尿利钠肽快速检测试剂盒，其特征在于，其包括盒盖、盒体、第一试剂 单元、第二试剂单元、和第三试剂单元，其中， 所述的第一试剂单元、所述的第二试剂单元、和所述的第三试剂单元都由可密封的试 剂瓶组成，所述的盒盖和所述的盒体连接，所述的第一试剂单元、所述的第二试剂单元、和 所述的第三试剂单元都按顺序放置于所述的盒体中； 第一试剂单元3为装有包被有活性分子的发光微球的试剂瓶，第二试剂单元4为装有 已标记生物素的活性分子的试剂瓶，第三试剂单元5为装有内部带有染料的纳米级感光微 球的试剂瓶，活性分子为NT-proBNP抗体。
2. 根据权利要求1所述的N端B型排尿利钠肽快速检测试剂盒，其特征在于，所述的盒 体的形状为长方体形状。
【专利摘要】本实用新型涉及一种N端B型排尿利钠肽快速检测的试剂盒，其特征在于，其包括盒盖、盒体、第一试剂单元、第二试剂单元、和第三试剂单元，其中，第一试剂单元、第二试剂单元、和第三试剂单元都由可密封的试剂瓶组成，盒盖和盒体连接，第一试剂单元、第二试剂单元、和第三试剂单元都按顺序放置于盒体中。采用本实用新型的N端B型排尿利钠肽快速检测试剂盒，检测结果稳定，准确率高、成本低，灵敏度高，精密性好，检测范围宽、适用临床推广。
【IPC分类】G01N33-543, G01N21-63
【公开号】CN204613105
【申请号】CN201520079557
【发明人】张伟, 卫君超, 郑东, 葛望舒
【申请人】上海丰汇医学科技股份有限公司
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年2月4日