包含乳过氧化物酶体系的协同杀真菌组合物的制作方法

包含乳过氧化物酶体系的协同杀真菌组合物的制作方法
【专利说明】包含乳过氧化物酶体系的协同杀真菌组合物 发明领域
[0001] 本发明公开了控制植物疾病和预防作物的微生物腐败（spoilage)的新的抗微生 物组合物。
[0002] 发明背景
[0003] 据估计世界作物产量的约25%由于微生物疾病而损失，其中真菌导致的疾病是迄 今为止最严重的原因。从经济学观点以及人道主义观点来看，预防食品腐败都非常重要。毕 竟世界上许多地方的人在遭受饥饿。
[0004] 在抵抗植物疾病以及减轻它们对产量和质量造成的损伤方面的成功大幅取决于 杀真菌剂的及时应用。由于抗性现象的发展，许多杀真菌剂（例如苯并咪唑）的长期和频 繁使用促成了它们有效性的降低。对于一些作物和疾病目前已观察到了对许多杀真菌剂的 抗性（参见Brent等人，2007)。
[0005] 几十年来，多烯大环内酯抗霉菌那他霉素已被用于预防食品产品（例如乳酪和香 肠）上的真菌生长。通过使用Streptomyces natalensis发酵生产的这种天然防腐剂在全 世界被广泛用作食品防腐剂，并且在食品工业中具有安全使用的悠久历史。其针对所有已 知的食品腐败真菌都非常有效。尽管那他霉素已在例如乳酪工业中被应用多年，但是迄今 为止从未观察到抗性真菌物种的发展。
[0006] 因此可以得出结论：存在对用于处理植物和作物中的真菌生长和植物和作物上的 真菌生长的更有效抗微生物组合物（例如抗真菌组合物）的严重需求。

【发明内容】

[0007] 本发明通过提供包含多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系的新的协同抗微生 物（例如抗真菌）组合物，解决了上述问题。当在本文中使用时，术语"协同的"表示：组合 使用时，抗真菌组分的组合效果大于它们各自使用时的效果之和。
[0008] 通常，可以如下计算协同作用：可以通过计算与用对照组合物处理的产品上的霉 菌生长相比，用活性成分处理的产品上观察到的霉菌生长的减少，来测定个体活性成分的 抗真菌活性（以％计）。可以根据Colby方程（Colby，1967)计算包含两种活性成分的组合 抗真菌组合物的预期抗真菌活性出，以％计）：Ε = Χ+Υ- [(Χ·Υ)/100]，其中X和Y分别是 个体活性成分X和Y的观察到的抗真菌活性（以％计）。如果组合的观察到的抗真菌活性 (〇，以％计）超出组合的预期抗真菌活性出，以％计）并且因而协同因子0/Ε>1.0,那么活 性成分的组合应用导致协同的抗真菌效应。乳过氧化物酶体系可以为粉末形式或者可以为 液体形式。在一个实施方式中，乳过氧化物酶体系包含几种组分。根据本发明的合适乳过 氧化物酶体系可在WO 99/022597、W0 91/11105和WO 97/26908中找到，其通过引用被并入 本文。
[0009] 第一，所述体系包含乳过氧化物酶（LP ;EC 1. 11. 1. 7)。在一个实施方式中，乳过 氧化物酶以0. l-l〇〇〇〇mg/l，优选地10-100mg/l范围内的量存在。乳过氧化物酶是天然存 在于乳中的酶。所述体系中的乳过氧化物酶可以是乳衍生乳过氧化物酶。乳过氧化物酶可 例如为牛、水牛、山羊、绵羊或骆驼来源。从乳中分离乳过氧化物酶的方法是已知的。或者， 可通过重组生物技术方法（例如通过在宿主细胞例如酵母或细菌中产生酶）来制造乳过氧 化物酶。
[0010] 第二，所述体系可包含卤化物，所述卤化物选自由碘化物（Γ)或溴化物（BiO或其 盐（例如碘化钾、碘化钠、溴化钾、溴化钠）或它们的组合组成的组。在一个实施方式中，卤 化物以〇· l-l〇〇〇〇mg/l，优选地25-200mg/l范围内的量存在。
[0011] 此外，所述体系可包含硫氰酸根化合物（SCN0。在一个实施方式中，硫氰酸根化合 物以0. l-10000mg/l，优选地5-50mg/l范围内的量存在。硫氰酸根化合物可以以盐例如硫 氰酸钠、硫氰酸钾、硫氰酸铵、硫氰酸铜、硫氰酸铁或者它们的组合的形式存在。在优选的实 施方式中，所述体系包含如上所述的卤化物和如上所述的硫氰酸根化合物两者。
[0012] 第三，所述体系包含过氧化氢。在一个实施方式中，过氧化氢以0. l-10000mg/l，优 选地l-500mg/l范围内的量存在。过氧化氢可以以其本身（例如，稳定的过氧化氢）存在。 或者，可以存在过氧化氢供体体系。合适的过氧化氢供体体系包括但不限于，碱金属过碳酸 盐（例如，2Na2C03*3H202);碱土金属过氧化物（例如，过氧化镁）和其他固体过氧化物（例 如，过氧化脲）；其中通过抗坏血酸的氧化产生过氧化物的体系；其中通过利用葡萄糖氧化 酶（E. C. I. 1. 3. 4)氧化葡萄糖产生过氧化氢的体系；其中通过利用黄嘌呤氧化酶氧化次黄 嘌呤产生过氧化氢的体系；其中通过利用过氧化酶作用氧化还原的吡啶核苷酸产生过氧化 氢的体系；或上述过氧化氢供体体系的任意组合。
[0013] 在一个实施方式中，本发明中使用的乳过氧化物酶体系包含葡萄糖、葡萄糖氧化 酶和过碳酸盐（例如，过碳酸钠）作为过氧化氢供体体系。在一个实施方式中，葡萄糖 以0. l-10000g/l，优选地l-10g/l范围内的量存在。在一个实施方式中，葡萄糖氧化酶以 0. 1-10000IU/1，优选地50-1000IU/1范围内的量存在。在一个实施方式中，过碳酸盐以 0· l-10000mg/l，优选地l-500mg/l范围内的量存在。
[0014] 在一个实施方式中，本发明中使用的乳过氧化物酶体系可还含有两种或更多种不 同的乳过氧化物酶、硫氰酸根化合物、卤化物、过氧化氢源或它们的任意组合。商业乳过氧 化物酶体系的实例是名称为Enzicur (Koppert B.V.,荷兰）的产品。所述商业产品可被并 入本发明中。
[0015] 使用之前，可稀释根据本发明的组合物。可利用水性制剂进行稀释。用于稀释的 制剂可额外包含少量油，例如0.01和2% (v/v)之间的油。当制剂包含油时，优选地，存在 用于乳化水性溶液中的油的乳化剂以形成水包油乳剂。油选自由矿物油、植物油、动物油及 其混合物组成的组。植物油例如菜籽油是优选的。
[0016] 用于稀释的水性制剂可还包含少量分散剂，例如0. 01和0. 2% (v/v)之间的分散 剂。分散剂、油和/或乳化剂可存在于一种稀释制剂中，但也可以存在于在根据本发明的组 合物稀释之前或稀释期间被混合在一起的独立的制剂中。
[0017] 在一个实施方式中，多烯抗真菌化合物选自由以下化合物组成的组：那他霉素、制 霉菌素（nystatin)、两性霉素 B、三稀菌素（trienin)、意北霉素（etruscomycin)、菲律宾菌 素（filipin)、钦氏菌素（chainin)、制皮菌素（dermostatin)、lymphosarcin、杀念珠菌素 (candicidin)、金色制霉素（aureofungin) A、金色制霉素 B、哈霉素（hamycin) A、哈霉素 B和 鲁斯霉素（Iucensomycin)。在一个优选的实施方案中，多稀抗真菌化合物是那他霉素。在 一个实施方案中，组合物也可含有两种或更多种不同的多烯抗真菌化合物。应当理解，多烯 抗真菌化合物的衍生物（包括但不限于多烯抗真菌化合物的盐或溶剂合物）或经修饰形式 的多烯抗真菌化合物也可以在本发明的组合物中应用。含有那他霉素的商业产品的一个例 子是商品名为Delvocid?的产品。所述产品由DSM Food Specialties(荷兰）生产，并且 可以是含有例如50% (w/w)那他霉素的固体或是含有例如2-50% (w/v)那他霉素的液体。 所述商业产品可以被并入本发明的组合物中。
[0018] 本发明的组合物通常包含从约0. 005g/l到约100g/l和优选地从约0.0 lg/Ι到约 50g/l的多烯抗真菌化合物。优选地，所述量为0.0 lg/Ι到3g/l。
[0019] 在一个实施方式中，本发明的组合物还包含至少一种选自下组的额外化合物，所 述组由粘着剂（sticking agent)、载剂、着色剂、保护性胶体、粘合剂（adhesive)、除草剂、 肥料、增稠剂、掩蔽剂、触变剂、表面活性剂、其他抗微生物化合物、洗涤剂、防腐剂、铺展剂、 填充剂、喷雾油、流动添加剂、矿物质、溶剂、分散剂、乳化剂、湿润剂、稳定剂、消泡剂、缓冲 剂、UV-吸收剂和抗氧化剂组成。其他抗微生物化合物可以是抗真菌化合物（例如抑霉唑）， 或抵抗昆虫、线虫、螨虫和/或细菌的化合物。当然，根据本发明的组合物也可以包含两种 或更多种任何上述额外的化合物。在抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系被分别应用的情况 下，任何上述额外的化合物也可以与多烯抗真菌化合物和/或乳过氧化物酶体系组合。在 一个实施方式中，额外的化合物是特定用途（例如食品、饲料、药品、化妆品或农业）可接受 的添加剂。适用于食品、饲料、药品、化妆品或农业的额外的化合物是本领域技术人员已知 的。
[0020] 在一个特定的实施方式中，其他抗微生物化合物是属于亚磷酸盐类的 天然作物保 护化合物，例如腿#03或K2HPO3或这两种亚磷酸盐的混合物。在本文中使用时，含亚磷酸 根的化合物表示包含亚磷酸根即PO3 (以例如H2PO3' HPO32-或PO广的形式）的化合物，或 允许释放亚磷酸根离子的任何化合物，包括化合物例如亚磷酸和膦酸及其衍生物如酯和/ 或碱金属盐或碱土金属盐。在本发明的组合物包含多烯抗真菌化合物（例如那他霉素） 和至少一种含亚磷酸根的化合物的情况下，相对于每克多烯抗真菌化合物，它们优选地包 含〇. Ig或更少的木素磺酸盐（Iignosulphonate)，更优选地0.1 g或更少的多酷。优选地， 相对于每克多烯抗真菌化合物，它们包含〇. Olg或更少的木素磺酸盐，更优选地〇. Olg或 更少的多酚。具体地，它们不含木素磺酸盐，并优选地不含多酚。含亚磷酸根的化合物的 合适例子是亚磷酸及其（碱金属或碱土金属）盐，例如亚磷酸钾盐例如KH2POjP K 2ΗΡ03， 亚磷酸钠盐和亚磷酸铵盐，和亚磷酸的（C1-C4)烷基酯及其盐，例如乙基亚磷酸铝（乙膦铝 (fosetyl-Al))、乙基亚磷酸钙、异丙基亚磷酸镁、异丁基亚磷酸镁、仲丁基亚磷酸镁和正丁 基亚磷酸铝。当然，含亚磷酸根的化合物的混合物也包括在内。例如KH2POjP 1(2即03的混合 物可以通过例如向KH2PO3溶液中添加 KOH或K 20)3至5. 0 - 6. 0的终pH来容易地获得。如 上文所指出的，作物或植物中被代谢成为亚磷酸盐/酯化合物的前体-型化合物也可以包 括在本发明的组合物中。其例子是膦酸酯，例如乙膦铝复合物。在例如作物或植物中，该分 子的膦酸乙基酯部分被代谢成为亚磷酸盐/醋。这类化合物的一个例子是被称作Aliette? (Bayer，德国）的商业膦酸氢乙基醋（ethyl hydrogen phosphonate)。组合物中亚磷酸 盐/酯与那他霉素的比例（以重量计）一般在2:1到500:l(w/w)之间，优选地在3:1到 300:1 (w/w)之间，更优选地在5:1到200:1 (w/w)之间。
[0021] 根据本发明的组合物可具有从1到10、优选地从2到9、更优选地从3到8、最优 选地从4到7的pH。它们可以是固体例如粉末组合物，或者可以是液体。本发明的组合 物可以是水性或非水性的即用型组合物，但是也可以是水性或非水性的浓缩组合物/悬浮 液，或在使用前必须用合适的稀释剂例如水或缓冲体系稀释的储存组合物、悬浮液和/或 溶液。或者，本发明的组合物也可以被用于制备涂层乳液。本发明的组合物也可以具有浓 缩干产品（例如粉末、颗粒和片剂）的形式。它们可以被用于制备用于对产品进行浸没或 喷雾的组合物，所述产品例如是农产品，包括植物、作物、蔬菜和/或水果。当然，当多烯抗 真菌化合物和乳过氧化物酶体系作为独立的组合物被施用时，以上也适用。
[0022] 在另一方面中，本发明涉及包含多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系的试剂 盒。多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系可存在于至少两个独立的包装（例如容器） 中。优选地，试剂盒包含其中乳过氧化物酶的活性被尽可能延长的形式，因为这增加了产品 的保质期。过氧化氢或过氧化氢供体一出现，乳过氧化物酶的活性就启动。因此，推荐与乳 过氧化物酶分开提供过氧化氢或过氧化氢生成体系。此外，如果期望，油、乳化剂和分散剂 也可以独立包装。因此，在特定实施方式中，本发明涉及包含下述容器的试剂盒：包含那他 霉素（和任选地添加剂）的容器、包含乳过氧化物酶（和任选地添加剂）的容器、包含过氧 化氢和/或过氧化氢供体体系（例如葡萄糖氧化酶、葡萄糖和和任选地添加剂）的容器、包 含硫氰酸根化合物和/或卤化物（例如碘化物）（和任选地添加剂）的容器。如果期望，硫 氰酸根化合物和/或卤化物（例如碘化物）可存在于两个单独的容器中。优选地，硫氰酸 根化合物和/或卤化物（例如碘化物）可存在于包含乳过氧化物酶的容器中。此外，试剂 盒可包含含有油、乳化剂和/或分散剂（和任选地添加剂）的容器。试剂盒的组分在容器 中可以为干燥形式或是液体形式。如果需要，试剂盒可包含用于溶解化合物的说明书。此 外，试剂盒可含有用于应用化合物的说明书。本发明的试剂盒通常包含从约〇. 〇〇5g/l至约 500g/l的每种个体成分。当组分以固体形式（例如，作为粉末）存在于试剂盒中时，它可以 从1_100%存在。
[0023] 在另一方面，本发明涉及通过用多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系处理产品 来保护产品抵抗真菌的方法。另外，可以在用多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系处理 产品之前、同时或之后，用其他抗真菌和/或抗微生物化合物处理产品。可以通过多烯抗真 菌化合物和乳过氧化物酶体系的顺次应用来处理产品，或反之亦然。或者，可以通过多烯 抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系的同时应用来处理产品。在同时应用的情况下，多烯抗 真菌化合物和乳过氧化物酶体系可存在于被同时应用的不同的组合物中，或多烯抗真菌化 合物和乳过氧化物酶体系可存在于单一组合物中。还在另一实施方式中，可以通过应用多 烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系的单独模式或交替模式来处理产品。在一个实施方 式中，本发明涉及通过对产品应用多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系来处理产品的方 法。通过应用多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系，能够预防产品上或产品中的真菌生 长。也就是说，多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系保护产品抵抗真菌生长和/或抵抗 真菌感染和/或抵抗真菌腐败。多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系也可以被用于处理 已经感染真菌的产品。通过应用多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系，归因于这些产品 上或产品中真菌的疾病发生可以被减缓、停止，或产品甚至可以从疾病中痊愈。在本发明的 一个实施方式中，用根据本发明的组合物或试剂盒处理产品。在一个实施方式中，产品是食 品产品、饲料产品、药物产品、化妆品产品或农产品。在一个优选的实施方式中，产品是农产 品D
[0024] 多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系、根据本发明的组合物和根据本发明的试 剂盒可以通过喷雾被应用至产品。适用于将多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系、所述 组合物和所述试剂盒以液体形式应用至产品的其他方法也是本发明的一部分。这些方法包 括但不限于，浸渍（dipping)、烧水、浸透（drenching)、引入接收器（dump tank)中、蒸发、 雾化（atomizing)、成雾（fogging)、熏蒸、涂抹、刷抹（brushing)、薄雾化（misting)、粉化 (dusting)、起泡、铺展、包装和涂覆（例如借助于蜡或静电）。另外，也可以将多烯抗真菌化 合物和乳过氧化物酶体系注射进土壤中。使用自动化系统的喷雾应用已知降低人力成本并 且是成本有效的。为此目的可使用本领域技术人员公知的方法和设备。感染风险较高时， 多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系也可以定期喷雾。感染风险较低时，喷雾间隔可以 更长。取决于应用的类型，应用的多稀抗真菌化合物的用量可以从5ppm到lOOOOppm、优选 地从IOppm到5000ppm和最优选地从20到1000 ppm变化D
[0025] 多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系可被用来治疗例如由下述真菌引起的 真菌疾病：Blumeria spp.，例如 Blumeria graminis ；Uncinula spp.，例如 Uncinula necator ；Leveillula spp.，例 如 Leveillula taurica ；Podosphaera spp.，例 如 Podosphaera leucotricha> Podosphaera fuscaλ Podosphaera aphanisλ Podosphaera xanthii ；Microsphaera spp.，例如 Microsphaera syringae ；Sawadaea spp.，例如 Sawadaea tulasnei ；Mycosphaerella spp.，例如Mycosphaerella musae、Mycosphaerella fragariae、Mycosphaerella citri ；Mucor spp.，例如 Mucor piriformis ；Monilinia spp.，例 如 Monilinia fructigena、Monilinia Iaxa ；0idium spp.，例 如 Oidium neolycopersici ；Phomopsis spp.，例如 Phomopsis natalensis ；Colletotrichum spp.， 例 如 Colletotrichum musae、Colletotrichum gloeosporioides、Colletotrichum coccodes ；Verticillium spp.， 例 如 Verticillium theobromae ；Nigrospora spp.； Botrytis spp.，例如 Botrytis cinerea ；Diplodia spp.，例如 Diplodia citri ;Pezicula spp. ；Alternaria spp.，例如 Alternaria citri、A lternaria alternata ;Septoria spp·， 例如 Septoria depressa ;Venturia spp.，例如 Venturia inaequalis、Venturia pyrina ; Rhizopus spp.，例如 Rhizopus stolonifer、Rhizopus oryzae ；Glomerella spp.，例如 Glomerella cingulata ；Sclerotinia spp.，例如 Sclerotinia fruiticola ;Ceratocystis spp.，例如 Ceratocystis paradoxa ；Fusarium spp.，例如 Fusarium semitectum、 Fusarium moniliforme、Fusarium solani、Fusarium oxysporum ;Cladosporium spp.，例 如 Cladosporium fulvum、Cladosporium cladosporioides、Cladosporium cucumerinum、 Cladosporium musae ；Penicillium spp.，例如 Penicillium funiculosum、Penicillium expansum、Penicillium digitatum、Penicillium italicum ；Phytophthora spp.， 例 如 Phytophthora citrophthora、Phytophthora fragariae、Phytophthora cactorum、 Phytophthora parasitica ；Phacydiopycnis spp·， 例 如 Phacydiopycnis malirum ； Plasmapara spp.，例如 Plasmopara viticola ；Peronospora spp.，例如 Peronospora parasitica ；Sclerospora spp.， 例 如 Sclerospora graminicola、Sclerospora mischanthi ；Puccunia spp. ；Venturia spp. ，Venturia inaequalis ；Gloeosporium spp.， 例 如 Gloeosporium album、Gloeosporium perennans、Gloeosporium fructigenum、 Gloeosporium singulata ；Geotrichum spp.，例如 Geotrichum candidum ；Phlyctaena spp.，例如 Phlyctaena vagabunda ；Cylindrocarpon spp.，例如 Cylindrocarpon mali ； Stemphyllium spp.，例如 Stemphyllium vesicarium ；Thielaviopsis spp.，例如 Thielaviopsis paradoxy ；Aspergillus spp.，例如 Aspergillus niger、Aspergillus carbonarius ；Nectria spp.，例如Nectria galligena ;Ce;rcospo;ra spp.，例如Cercospora angreci、Cercospora apii、Cercospora atrofiliformis、Cercospora musae、Cercospora zeae-maydis〇
[0026] 本发明的另一方面涉及多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系保护产品抵抗真 菌的用途。如上文所述，多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系可以顺次或同时使用（例 如应用）。在一个实施方式中，本发明涉及一种用途，其中根据本发明的组合物或试剂盒被 应用至产品。在一个实施方式中，产品是食品产品、饲料产品、药物产品、化妆品产品或农产 品。在一个优选的实施方式中，产品是农产品，例如植物。
[0027] 在一个特定的实施方式中，多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系可被用于药品 中例如来治疗和/或预防真菌疾病。多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系可例如以药物 组合物的形式被使用。组合物可还包含药学上可接受的赋形剂。多烯抗真菌化合物和乳过 氧化物酶体系可口服施用或肠胃外施用。组合物的类型取决于施用途径。
[0028] 本发明的另一个方面涉及用多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系处理的产品。 在一个实施方式中，用根据本发明的组合物或试剂盒处理产品。本发明因此涉及包含多烯 抗真菌化合物和乳过氧化物酶的产品。经处理的产品的表面上和/或产品内可包含多烯 抗真菌化合物和乳过氧化物酶。或者，经处理的产品可包含涂层，所述涂层包含多烯抗真 菌化合物和乳过氧化物酶。在一个实施方式中，经处理的产品表面上包含从〇. 000001到 200mg/dm2、优选地0· 00001到100mg/dm2、更优选地从0· 00005到10mg/dm2的多稀抗真菌化 合物。在另一个实施方式中，它们在表面上包含从〇. 000001到200mg/dm2、优选地0. 00001 到100mg/dm2、更优选地从0. 00005到10mg/dm2的乳过氧化物酶。在一个实施方式中，产品 可还包含乳过氧化物酶体系的至少一种其他组分。除了多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶 之外，产品可包含硫氰酸根化合物或其盐，和/或卤化物或其盐，和/或过氧化氢和/或过 氧化氢供体体系的组分例如葡萄糖、葡萄糖氧化酶和过碳酸盐。此外，产品可包含存在于乳 过氧化物酶体系中的油和/或乳化剂和/或分散剂。此外，产品可包含由乳过氧化物酶体 系产生的任何氧化产品。在一个实施方式中，产品是食品产品、饲料产品、药物产品、化妆品 产品或农产品。在优选的实施方式中，产品是农产品例如植物。
[0029] 在本文中使用时，术语"食品"应当被非常广义地理解，包括但不限于，乳酪、奶油 乳酪、碎乳酪、松软干酪（cottage cheese)、经加工的乳酪、酸奶油、干燥的经发酵的肉制 品，包括萨拉米香肠和其他香肠、葡萄酒、啤酒、酸乳、果汁和其他饮料、沙拉酱、松软干酪酱 (cottage cheese dressing)、蘸料、烘焙制品和烘焙填料、表面釉（surface glaze)和糖 霜、涂抹酱、披萨饼馅料、糕饼和糕饼填料、橄榄、橄榄卤水（olive brine)、橄榄油、果汁、番 茄泥和番茄糊、作料、和水果浆和其他类似的食品。
[0030] 在本文中使用时，术语"饲料产品"也应当非常广义地理解，包括但不限于宠物食 品、肉鸡饲料等等。
[0031] 在本文中使用时，术语"药物产品"也应当非常广义地理解，包括包含活性分子例 如药、药剂或药物化合物和任选地包含药物可接受的赋形剂的产品，所述赋形剂即与活性 分子组合用于制备合适或便利的剂型的任何惰性物质。
[0032] 在本文中使用时，术语"化妆品产品"也应当非常广义地理解，包括下述产品，所述 产品被用于通过防止水分的蒸腾来保护或治疗角质组织如皮肤和唇、头发和指甲的干燥， 并且护理组织以及给予这些组织良好的外观。术语"化妆品组合物"涉及的产品包括但不 限于保湿霜、个人清洁产品、闭合的药物递送贴片、指甲油、粉、擦拭片、护发素、皮肤处理乳 液、剃须霜等等。
[0033] 当在本文中使用时，术语"农产品"也应被非常广义地理解，其包括但不限于谷物， 例如小麦、大麦、裸麦、燕麦、水稻、高粱等等；甜菜，例如糖用甜菜（sugar beet)和饲用甜 菜（fodder beet);梨果和核果和浆果，例如苹果、梨、李子、杏、桃、杏仁、樱桃、草莓、覆盆 子和黑莓；豆科植物，例如豆子、扁豆、豌豆、大豆；油料植物，例如油菜、芥末、罂粟、橄榄、 向日葵、椰子、蓖麻植物、可可、花生；萌芦科，例如南瓜、小黄瓜（gherkins)、甜瓜、黄瓜、倭 瓜、前子；纤维植物，例如棉花、亚麻、大麻、黄麻；柑橘水果，例如橙、梓檬、葡萄柚、蜜桔、枸 橼；热带水果，例如木瓜、百香果、芒果、杨桃、菠萝、香蕉、奇异果；蔬菜，例如菠菜、莴苣、芦 笋、十字花科如卷心菜和芜菁、胡萝卜、洋葱、番茄、马铃薯、马铃薯种子（seed-potatoe)、 尖辣椒（hot pepper)和甜椒；月桂样植物，例如酪梨、肉桂、樟脑树；或产品如玉米、烟草、 坚果（例如开心果、花生和腰果）、咖啡豆、甘蔗、茶、葡萄藤、酒花、橡胶植物以及观赏植物 例如切花、玫瑰、郁金香、百合、水仙花、藏红花、风信子、大丽花、大丁草、康乃馨、倒挂金钟 (fuchsias)、菊花和球根花丼（flower bulbs)、灌木、落叶树和常绿树例如松柏植物、温室 植物和树木。其包括但不限于植物及其部分、果实、种子、插条（cuttings)、栽培种、移植物、 鳞茎、块茎、根-块茎、根茎、切花和蔬菜。
[0034] 用于制备本文所述的组合物的方法是本发明的另一个方面。方法包括向乳过氧化 物酶体系或至少向乳过氧化物酶体系的组分的一种添加多烯抗真菌化合物。所述多烯抗真 菌 化合物和所述乳过氧化物酶体系的组分可例如被单独地添加至水性组合物并混合，需要 时随后调节PH、粘度等等。如果单独添加，则单独的组分中的一些或全部可以是粉末形式， 但是替代性地，一些或全部也可以是液体形式。多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系的 组分也可例如以粉末形式被彼此添加并混合，以获得粉末状的组合物。粉末状的组合物可 随后被添加至水性组合物。 实施例
[0035] 实施例1
[0036] 处理番茄植物抵抗霉菌疾病
[0037] 使用众所周知的方法，使番茄植物在温室中生长。种植后25天，用粉霉孢子 (Oidium neolycopersici的孢子）接种番前植物。
[0038] 用孢子接种番茄植物后14天，用下述组合物处理植物：
[0039] a)包含那他霉素（1500ppm)的组合物，
[0040] b)包含乳过氧化物酶体系的组合物，或
[0041] c)包含那他霉素（1500ppm)和乳过氧化物酶体系的组合物（在应用至番茄植物之 前，混合那他霉素和乳过氧化物酶体系）。
[0042] 使用未处理的番茄植物作为对照。
[0043] 包含那他霉素的所有组合物包含甘油（2. 5ml/l)和聚醚三硅氧烷 (BREAK-TRU?; 0.25ml/l)。乳过氧化物酶体系包含乳过氧化物酶、碘化钾、硫氰酸钾 和过氧化氢源。当单独使用乳过氧化物酶体系时，向乳过氧化物酶体系中加入ADDIT，基于 菜籽油的佐剂。
[0044] 每公顷用20001各自的组合物喷洒番茄植物，相当于每株植物约130ml各自的组 合物的比率。试验在4块地上进行，其中每块地含有5株马铃薯植物。
[0045] 以双重方式评估粉霉生长：（i)计算每株番茄植物的2片有标记叶上的可见菌落 数；和（ii)通过计算与用对照组合物处理的番茄植物的有标记叶上的霉菌生长相比，用抗 真菌组合物处理的番茄植物的有标记叶上观察到的霉菌生长的减少，来测定个体和组合的 活性成分的抗真菌活性（以％计）。根据Colby方程（Colby，1967)计算包含两种活性成分 的组合抗真菌组合物的预期抗真菌活性出，以％计）：
[0046] E = X+Y - [(X · Y)/100]
[0047] 其中X和Y分别是个体活性成分X和Y的观察到的抗真菌活性（以％计）。
[0048] 如果组合的观察到的抗真菌活性（0,以％计）超过组合的预期抗真菌活性（Ε， 以％计）且因此协同因子0/Ε > 1.0,那么活性成分的组合应用导致协同抗真菌效果。
[0049] 表1中的结果（每株番茄植物的2片有标记叶上的可见菌落数）清楚证明：与单 独的那他霉素或乳过氧化物酶体系相比，包含那他霉素和乳过氧化物酶体系二者的抗真菌 组合物具有强得多的抗真菌效果。
[0050] 在应用各自的组合物后9天，不处理（对照）、用单独的那他霉素处理或者用单独 的乳过氧化物酶体系处理的番茄植物显示出可见真菌菌落增加。然而，当那他霉素与乳过 氧化物酶体系组合使用时，应用组合物后9天，观察到可见真菌菌落减少。
[0051] 此外，根据Colby方程计算出的协同因子0/Ε超过1，这意味着：那他霉素与乳过 氧化物酶体系的组合应用导致协同抗真菌效果。
[0052] 表1 :每片番茄叶的真菌菌落的平均数
[0053]
[0054] 第-1天* =应用组合物前1天
[0055] **正数表示：可见真菌菌落的平均数从第-1天至第9天增加，而负数表示：可见 真菌菌落的平均数从第-1天至第9天减少。
[0056] 总之，结果清楚证明：包含那他霉素和乳过氧化物酶体系的组合物保护番茄植物 抵抗粉霉生长，还显示了：与各自应用的活性化合物的活性相比，本发明的组合物显示出协 同增强的活性。
[0057] 实施例2
[0058] 处理番茄植物抵抗霉菌疾病
[0059] 如实施例1中所述进行该实验，附带条件是：首先将乳过氧化物酶体系应用至番 茄植物，1小时后（当番茄植物再次干燥时）应用那他霉素组合物。结果展示于表2中。
[0060] 表2 :每片番茄叶的真菌菌落的平均数
[0061]
[0062] 第-1天* =应用组合物前1天
[0063] **正数表示：可见真菌菌落的平均数从第-1天至第9天增加，而负数表示：可见 真菌菌落的平均数从第-1天至第9天减少。
[0064] 在应用各自的组合物后9天，不处理（对照）、用单独的那他霉素处理或者用单独 的乳过氧化物酶体系处理的番茄植物显示出可见真菌菌落增加。然而，当那他霉素与乳过 氧化物酶体系组合使用时，应用组合物后9天，观察到可见真菌菌落减少。
[0065] 此外，根据Colby方程计算出的协同因子Ο/E超过1，这意味着：当那他霉素与乳 过氧化物酶体系的组合应用导致协同抗真菌效果。
[0066] 结果清楚证明：应用那他霉素和乳过氧化物酶体系的组合物保护番茄植物抵抗粉 霉生长，还显示了：与各自应用的活性化合物的活性相比，应用乳过氧化物酶体系之后应用 那他霉素显示出协同增强的活性。
[0067] 参考文献
[0068] Brent KJ and Hollomon Dff (2007), Fungicide resistance in crop pathogens:How can it be managed ? Second revised edition. Published by the Fungicide Resistance Action Committee. FRAC Monograph No. I, pages 1-60.
[0069] Colby SR(1967)，Calculating synergistic and antagonistic responses of herbicide combination. Weeds 15:20-22.
【主权项】
1. 组合物，其包含： a) 多烯抗真菌化合物，和 b) 乳过氧化物酶体系。2. 根据权利要求1的组合物，其中所述乳过氧化物酶体系包含： a) 乳过氧化物酶， b) 硫氰酸根化合物、卤化物或二者，和 c) 过氧化氢和/或过氧化氢供体体系。3. 根据权利要求1或2的组合物，其中所述多烯抗真菌化合物是那他霉素。4. 根据权利要求1-3中任一项的组合物，其中所述组合物还包含至少一种额外化合 物，所述额外化合物选自由粘着剂、载剂、着色剂、保护性胶体、粘合剂、肥料、增稠剂、掩蔽 剂、触变剂、表面活性剂、其他抗微生物化合物、洗涤剂、防腐剂、铺展剂、填充剂、喷雾油、流 动添加剂、矿物质、溶剂、分散剂、乳化剂、湿润剂、稳定剂、消泡剂、缓冲剂、UV-吸收剂和抗 氧化剂组成的组。5. 根据权利要求1-4中任一项的组合物，其中所述多烯抗真菌化合物的量在0. 005g/l 至约l〇〇g/l的范围内。6. 试剂盒，其包含多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系。7. 通过用多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系处理产品来保护所述产品抵抗真菌 的方法。8. 根据权利要求7的方法，其中用根据权利要求1-5中任一项的组合物或根据权利要 求6的试剂盒处理所述产品。9. 根据权利要求7或8的方法，其中所述产品选自由食品产品、饲料产品、药物产品、化 妆品产品和农产品组成的组。10. 包含多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶的产品。11. 根据权利要求10的产品，其还包含： a) 硫氰酸根化合物或其盐，和/或 b) 卤化物或其盐，和/或 c) 过氧化氢和/或过氧化氢供体体系。12. 根据权利要求10或11的产品，其中所述过氧化氢供体体系包含葡萄糖、葡萄糖氧 化酶和过碳酸盐。13. 根据权利要求10-12中任一项的产品，其中所述产品选自由食品产品、饲料产品、 药物产品、化妆品产品和农产品组成的组。14. 根据权利要求10-13中任一项的产品，其中所述产品是植物。15. 多烯抗真菌化合物和乳过氧化物酶体系用于保护产品抵抗真菌的用途。
【专利摘要】本发明涉及协同杀真菌组合物，其含有：a)多烯杀真菌剂(优选地那他霉素)和b)乳过氧化物酶体系。本发明还涉及含有所述组合物的试剂盒和产品，以及用所述组合物保护食品产品、饲料产品、药物产品、化妆品产品和农产品的方法。
【IPC分类】A01N43/90, A61L2/18, A01P3/00, A23L3/3571, A01N63/04
【公开号】CN104883912
【申请号】CN201380062257
【发明人】贾克布斯·斯达科, 威廉·贾克布斯·拉文斯贝格, 弗朗西斯·约翰内斯·韦伯
【申请人】帝斯曼知识产权资产管理有限公司
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2013年11月27日
【公告号】EP2925167A1, US20150282489, WO2014083048A1