含有非活的药用物质的乳剂的制作方法

含有非活的药用物质的乳剂的制作方法
【专利说明】含有非活的药用物质的乳剂
[0001] 发明背景
[0002] 本发明涉及一种包含水相和油相的乳剂，所述水相含有非活的（non-live)药用 物质。本发明还涉及一种防止（shield)用油相乳化的水相中存在的药用物质与油相相互 作用的方法，以及涉及包含作为抗原的杀灭的微生物或微生物亚单位的疫苗，所述抗原存 在于所述乳剂的水相中。
[0003] 含有非活的药用物质的水性组合物是药物领域中通常已知的。它们可以原样使 用，例如呈喷雾剂或口服给药制剂。当与活的药用物质比如活的微生物相比时，该药用物质 的稳定性在大多数情况下不是问题。一般而言，对于大多数非活的物质而言在水中的化学 腐解作用易于控制，例如通过将组合物贮存在低温（2_8°C)下和遮盖以避免UV辐射的影响 (通常通过将组合物贮存在普通的（regular)冰箱中）。而且，一般而言，水性制剂不具有 与载体流体有关的安全问题，因为在局部（例如经由口）或系统（例如肌内或经由局部施 用）给药后水不会引起任何不良反应。然而，对于某些应用，油相的存在是优选的，例如为 了刺激药用物质的功效（例如，在药用物质是抗原的情形下使用佐剂油）或为了产生更好 的生物利用度（例如使用油以产生更有效的局部施用）。因此，本领域通常制备含有药用物 质的水相和油相的乳剂。
[0004] 发明简述
[0005]申请人认识到使用这样的乳剂对于水相中存在的药用物质的功效可能是不利的。 在这样的乳剂中，即，存在其中水相和油相或其组分可以相互作用的巨大表面，这可能降低 药用物质的功效。特别地，当使用可能与非惰性油比如可代谢的油一起的非惰性药用物质 比如生物分子或灭活的（杀灭的）微生物时，油的存在的不利影响可能是显著的。而且当 使用惰性油时，油的存在可能是不利的，例如因为药用药物可倾向于集中在两相之间的表 面处，或者漏入油相中，或者与油相中的添加剂相互作用等。
[0006] 本发明的一个目的是提供一种改善的乳剂，其至少减轻由于药用物质与油相的相 互作用可引起的问题。为此目的，已经发明了根据前文的乳剂，其中水相包含至少30% w/ w的糖。令人惊奇地，已经表明通过加入大量的糖，可以减少或者甚至防止药用物质和油相 组分之间的可能的相互作用。先前预期通过向水相中加入糖（该过程固有地降低水相的极 性），水相和油相之间的相互作用应当增加。然而，与预期相反，似乎可以防止由药用物质 与油相（中存在的组分）相互作用导致的不利影响。此外，令人惊奇地观察到用该新乳剂 不存在安全问题（甚至是在肌内给药后），尽管存在非常高浓度的潜在的免疫原性糖。本 发明在非活的疫苗（典型地含有灭活的微生物或微生物亚单位作为抗原）的领域中是高度 有利的，其中疫苗的功效通常依赖于作为佐剂的油相的存在。典型的佐剂油是脂肪酸乙酯 (FAEE)、Drakeol6(可得自 Calumet Penreco, USA)、棉籽油、ISA763A 和 ISA50(都可得自 Seppic，France)、角藍烧、角藍稀、Marc〇l?52(可得自 Exxon Chemicals，USA)、a 生育酷 醋酸醋、Miglyol 840(Huls，Germany)。本发明可以通过防止抗原与油相相互作用来改善疫 苗的稳定性。一般而言，可以通过使用本领域已知的方法制备疫苗，所述方法基本上包括混 合抗原（或含有抗原的组合物）与可药用载体例如液体载体比如（任选地缓冲的）水。根 据疫苗的预期用途或所需性质，加入任选的其它物质比如保护剂、粘度调节剂或其它组分。
[0007] 注意到对于活的药用物质比如活的减毒的细菌或病毒，糖通常被称为产生其中微 生物具有比不存在稳定剂下更高存活率的环境的稳定剂。然而，活的微生物的稳定化是一 种与防止非活的物质与油相相互作用相比完全不同的方法。当非活的药用物质与所述物质 的水性载体和油相的乳剂中的油相相互作用时可能出现的问题，甚至与产生其中活的微生 物存活的环境的问题无关。
[0008] 定义
[0009] 乳剂：两种不溶混液体相的分散系统，其中存在稳定液-液界面的乳化剂。典型 地，分散相包含在0.05至IOOym之间的微滴。乳化剂典型地为表面活性试剂（通常是洗 涤剂或表面活性剂），但是也可以是包含胶体微粒的化合物。而且，微型气泡已经被描述为 乳化剂。
[0010] 非活的药用物质：不能通过基本的生物学过程（自我）复制，且可用于预防、治疗 或治愈活体动物（特别是人类或非人类动物）的疾病或病症的物质。典型的非活的药用物 质为小分子、生物分子比如抗体、蛋白质、多糖和灭活的微生物（典型地为杀灭的细菌或病 毒）。
[0011] 水性：在室温下能与水自由地混溶，即可混溶，从而可以形成稳定的均相。
[0012] 油：在室温和大气压下为液体的物质，该液体不能与水自由地混溶。
[0013] 水相：基本上基于水（作为载体介质）或另外的水性溶剂、或水和一种或多种水性 溶剂的混合物的相。
[0014] 油相：基本上基于油或油的混合物作为载体介质的相。
[0015] 糖：相对低分子量且典型地具有甜味的水溶性碳水化合物的组中的任一种。术语 "糖"包括还原糖（比如果糖和麦芽糖）、非还原糖（比如蔗糖和海藻糖）、糖醇（比如木糖 醇和山梨醇）、糖酸（比如葡糖酸和酒石酸）及其混合物。
[0016] 惰性的：在常规条件（即正常压力和室温）下基本上没有化学反应性，从而不会任 何实质性地参与化学反应。典型地，需要大量（活化）能量来驱动这样的反应，通常为热、 压力、辐射等形式，经常由催化剂来辅助反应。
[0017] 非聚合糖：单糖、二糖、三糖和寡聚糖分子，包含至多六个单体糖分子。
[0018] 生物学活性蛋白质：具有三维结构的任何蛋白质，使得所述蛋白质能够在活生物 体中诱导或干扰生理过程（比如代谢过程或免疫过程）。术语生物学活性蛋白质可以表示 全长蛋白质或其片段。生物学活性蛋白质的实例为酶、毒素、类毒素、任何（其它）免疫蛋 白质（例如微生物的表面蛋白或其片段）、抗体或其片段等。疫苗典型地含有一种或多种生 物学活性蛋白质，其呈活的或杀灭的微生物的一部分、或呈这种微生物的分离的或重组表 达的亚单位。
[0019] 可代谢的：是在给药至动物之后可被动物降解的（实质上利用一种或多种其代谢 过程）。
[0020] % w/w :相对于总质量的质量百分比。
[0021] 疫苗：适于应用于动物的组成物（constitution)，其包含免疫有效量的（即，能够 刺激目标动物的免疫系统，足以至少降低野生型微生物的攻击的不利作用）一种或多种抗 原，其在给药至动物后诱发免疫应答以治疗疾病或病症，即有助于预防、改善或治愈疾病或 病症。
[0022] 本发明的实施方案
[0023] 在第一个实施方案中，药用物质包含生物学活性蛋白质。尽管由于生物学活性蛋 白质是非活的，本领域通常推测其是相当稳定的，但是申请人认识到当存在于与油相构成 乳剂的一部分的水相中时，可能出现对蛋白质功效的不利影响。本发明似乎特别适于防止 生物学活性蛋白质受到这样的不利影响，因而改善了这些药用物质的使用的自由度。例如， 它们可以长时期贮存，或者储存在较高温度下，或者带到其中存在对其功效的可能影响的 任何其它环境中，而不会显著地损失其功效，或者在与其中水相不包含至少30% w/w的糖 的制剂相比时至少实质上更好地保持功效。
[0024] 在另一个实施方案中，药用物质包括杀灭的微生物。因为杀灭的微生物实际上是 包含多种生物学活性蛋白质的组成物，申请人认识到本发明可以有利地用于这类药用物 质。特别地，申请人发现本发明可以实质上影响其中杀灭的微生物是灭活的包膜病毒（特 别是有传染性的支气管炎（bronchitus)病毒或新城疫病毒）的组成物的功效。
[0025] 在仍然另一个实施方案中，水相分散在油相中。例如，乳剂具有W/0( "油包水"） 型。油包水型乳剂有能够具有低粘度的优点 ，尽管水相含有非常高量的糖（该糖固有地使 水相本身呈（非常）糖浆状）。
[0026] 在一个实施方案中，油相含有非惰性油。非惰性油（尽管原则上没有惰性油稳定 并且因此可以与乳剂中存在的其它组分反应）可以有利地用于根据本发明的乳剂中，因为 需要非惰性的潜在不利影响对于药用物质的功效没有实质性影响。这极大地提高了使用惰 性油以外的其它油的自由度（即使当药用物质在所述油的影响下易于化学降解时）。
[0027] 在另一个实施方案中，油相含有可代谢的油，比如例如脂肪酸乙酯油（FAEE)、棉籽 油、桐油、角鲨烷、角鲨烯、α生育酚醋酸酯和Miglyol。可代谢的油具有可被给药乳剂的动 物生物学降解的固有优点。然而，可代谢的油也具有本身具有化学反应性的缺点。因此，尽 管文献中一般性提及了几十年，但是这种油在用于向动物给药的含有非活的药用物质的乳 剂中的实际应用并不普遍。就药用物质的潜在的不利影响而言，本发明克服了使用这种可 代谢的油的不利方面。在一个实施方案中，油相含有酯油，即其中构成分子为酯分子的油。 典型的酯油为脂肪酸的乙酯和甘油三酯。
[0028] 在仍然另一个实施方案中，糖含有非聚合糖。非聚合糖被认为能够与非活的药用 物质直接相互作用（特别是当该物质包含生物学活性蛋白质时），以提供隔离油之外的额 外的作用。
[0029] 在一个实施方案中，所述糖选自鹿二糖（sucrose)、鹿糖（saccharose)、山梨醇、 甘露醇、海藻糖、麦芽糖、麦芽糖糊精和/或其混合物。
[0030] 据信甚至高于30% w/w的糖含量对于应用在本发明的乳剂中是更好的。因此，优 选地水相包含至少40% w/w的糖，优选地至少50% w/w的糖，更优选地至少60% w/w的糖。
[0031] 本发明特别地描述了 IB或ND灭活的病毒在通过存在山梨醇而稳定的乳剂中的用 途。 实施例
[0032] 制备具有水相的乳剂，所述水相分散在油相中且用表面活性剂稳定。水相含有灭 活的病毒作为非活的药用物质。从鸡蛋的尿囊液采集病毒。得到的水相通常含有约40-50% 的尿囊液（除了水（WFI)以外）。使用各种病毒，有传染性的支气管炎病毒株m41 (IB-I)、 有传染性的支气管炎病毒株D274(IB-2)和新城疫病毒克隆30(ND)。这些是与在产品 "Nobilis IB multi+ND"（可得自MSD Animal Health)中存在的抗原相同的抗原。
[0033] 第一种类型的乳剂是基于矿物油Marcol? 52(可得自ExxonMobil)和表面活 性剂吐温? 80和司盘? 80 (两者都可得自Sigma Aldrich)。水相和油相之间的比例为 1 : 1。这类乳剂一般用于市售可获得的疫苗比如Nobilis IB+ND(如可得自MSD Animal Health)中。第二种类型的乳剂是基于可代谢的酯油α生育酚醋酸酯和油酸乙酯（质量比 1 : 6.33)和表面活性剂Cithrol DPHS (可得自Croda International)。水相和油相之间 的比例为1 : 1.5。下述制剂是使用常用的Ultra-turrax?搅拌器乳化如下组分的混合物制 备的：
[0034] 表1乳剂类型
[0035]
[0036] 制剂7和8在水相中含有30. 6%的山梨醇w/w，即该相含有每100克总共30. 6克 的山梨醇。为了能够且达到较高的糖浓度，可以浓缩尿囊液以获得至多例如10倍的抗原浓 度升高。如此，水相可以通过使用约95%的水和5%的尿囊液构成，水用作加入糖的载体。 如此，糖的质量百分比可以达到至多约70-75%，这取决于糖的类型。
[0037] 在第一组实验中，测试在2_8°C下贮存0、6或12个月之后，制剂1至6在SPF鸡 中的免疫原性功效。为此，将3-4周龄White Leghorn鸡分配成几组，每组10只鸡。对于 IB疫苗，鸡接受0. 5ml的疫苗，经由肌内途径在大腿肌肉给药。对于ND疫苗，选择同样的途 径，但是剂量为0.01ml。
[0038] 在疫苗接种后六周时，从每只鸡的翅静脉采集血样。测定每个样品的针对抗原的 滴度。确定每组之内滴度的平均值。基于Marcol?的乳剂的结果显示在表2中。酯油乳 剂的结果显不在表3中。
[0039] 表2在贮存之后基于Marcol?的乳剂中针对抗原的滴度 [0040]
[0041] 表3在贮存之后基于酯油的乳剂中针对抗原的滴度
[0042]
[0043] 如可以看到的，对于所有三种类型的抗原，基于酯油的乳剂中的滴度受到贮存的 不利影响。为了至少减轻该不利影响，测定了与制剂4和6相同的乳剂类型，但是在水相中 含有30. 6%的山梨醇，即制剂7和8。制备这些制剂，目标是对于两种抗原在0. 5ml的完全 剂量下起始滴度在8. 0至9. 0之间。将这些疫苗贮存17个月时期，定期如上所述进行测试， 但是在所有情况下，使用0. 5ml的制剂是足够的，并且比较该数据与对于0. 5ml的完全剂量 而言在8. 0至9. 0之间的起始值。所述乳剂似乎没有诱发安全问题，且具有能够使用标准 手工操作的注射器给药的粘度。滴度的结果显示在表4中。
[0044] 表4在水相中含有30. 6%山梨醇的基于酯油的乳剂中的滴度
[0045]
[0046] 如可以看到的，在水相中糖的存在完全地克服了贮存期间酯油的不利影响。滴度 保持在制剂的水平达至少17个月。
【主权项】
1. 一种包含水相和油相的乳剂，所述水相含有非活的药用物质，其中所述水相包含至 少30% w/w的糖。2. 根据权利要求1的乳剂，特征在于所述药用物质包含生物学活性蛋白质。3. 根据前述权利要求中任一项的乳剂，特征在于所述药用物质包含灭活的微生物。4. 根据权利要求3的乳剂，特征在于所述杀灭的微生物是灭活的包膜病毒。5. 根据权利要求4的乳剂，特征在于所述包膜病毒为有传染性的支气管炎病毒或新城 疫病毒。6. 根据前述权利要求中任一项的乳剂，特征在于所述水相分散在所述油相中。7. 根据前述权利要求中任一项的乳剂，特征在于所述乳剂是W/0型的。8. 根据前述权利要求中任一项的乳剂，特征在于所述油相含有非惰性油。9. 根据前述权利要求中任一项的乳剂，特征在于所述油相含有可代谢的油。10. 根据前述权利要求中任一项的乳剂，特征在于所述油相含有酯油。11. 根据前述权利要求中任一项的乳剂，特征在于所述糖含有非聚合糖。12. 根据前述权利要求中任一项的乳剂，特征在于所述糖选自蔗二糖、蔗糖、山梨醇、甘 露醇、海藻糖、麦芽糖和麦芽糖糊精或其混合物。13. 根据前述权利要求中任一项的乳剂，特征在于所述水相包含至少40% w/w的糖，优 选地至少50% w/w的糖，更优选地至少60% w/w的糖。14. 疫苗，其包含根据前述权利要求中任一项的乳剂，其中所述非活的药用物质为灭活 的微生物或微生物亚单位。15. 通过配制含有至少30% w/w的糖的水相来防止用油相乳化的水相中存在的药用物 质与油相相互作用的方法。
【专利摘要】本发明涉及一种包含水相和油相的乳剂，所述水相含有非活的药用物质，其中所述水相包含至少30％w/w的糖。本发明还涉及一种防止用油相乳化的水相中存在的药用物质与油相相互作用的方法，以及涉及包含作为抗原的杀灭的微生物或微生物亚单位的疫苗，所述抗原存在于分散在油相中的水相中，其中所述水相包含至少30％w/w的糖。
【IPC分类】A61K9/00, A61K9/107
【公开号】CN104884042
【申请号】CN201380065441
【发明人】E·莫姆巴格, T·詹森, H·J·M·贾格特
【申请人】英特维特国际股份有限公司
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2013年12月13日
【公告号】EP2931256A1, US20140170185, WO2014090975A1