一种多舌飞蓬的总咖啡酸酯提取物的制作方法
一种多舌飞蓬的总咖啡酸酯提取物的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种多舌飞蓬的总咖啡酸酯提取物。
【背景技术】
[0002]多舌飞蓬Erigeron mutiradiatus (Lindl)Benth.，为菊科飞蓬属多年生草本植物，主要分布于我国西藏、四川西部和云南西北部高原地区，资源丰富，在藏医药中以全草入药，多用于跌打损伤、风湿疼痛、牙痛、胃痛、感冒等症，具有发表散寒、消炎止痛、活血化瘀等功效。
[0003]关于多舌飞蓬的提取方法、化学成分、药理等研宄较多，如多舌飞蓬的生药学研宄，公开了药材采用甲醇水超声提取，并对提取液进行定性定量分析(中草药.2004年，35卷3期)。多舌飞蓬黄酮成分的研宄，公开了多舌飞蓬全草永95%乙醇提取后，依次永氯仿、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，再分别经柱层析得到了芹菜素、灯盏甲素、槲皮素等黄酮类成分(中草药，1998年，29卷12期)。
[0004]专利:200810302378.1，还提供了一种多舌飞蓬提取物，其中灯盏甲素含量为
6.7?24.8%，灯盏乙素的含量为7.6?26.4% ;该提取物的制备方法为:取多舌飞蓬用水、甲醇水溶液或乙醇水溶液提取后，提取液调节pH至3?5后，上大孔吸附树脂，水清洗后采用20?70%乙醇，以0.5?2.5BV/hr的流速洗脱，洗脱液浓缩后，干燥即得提取物；该提取物对脑缺血有保护作用，对炎症有抑制作用。该专利中还指出，“多舌飞蓬提取物中总黄酮含量可达20?90%，其中含有芹菜素、槲皮素、木刺草素、灯盏甲素、异槲皮素、灯盏乙素、汉黄芩素的一种或多种。该制备方法能有效地富集灯盏甲素和灯盏乙素，去除了无药理作用的杂质成分”(说明书第11段)，由此不难看出，该专利给出了如下启示:上述多舌飞蓬提取物的主要活性成分为黄酮类，尤其以灯盏甲素和灯盏乙素为主。
[0005]对多舌飞蓬的现有技术进行分析，可以看出，目前对多舌飞蓬化学成分的研宄主要集中于黄酮类，其他种类的化学成分还鲜有报道。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于提供一种多舌飞蓬的总咖啡酸酯提取物，本发明的另一目的在于提供该提取物的制备方法和用途。
[0007]具体地，本发明提供了一种多舌飞蓬的总咖啡酸酯提取物，按干燥品计算，该提取物中，咖啡酸酯类化合物的含量为60?90% w/w，进一步为80-90% w/w ;灯盏乙素含量低于5% w/w，更进一步地，其含量低于1% w/w。
[0008]本发明一个【具体实施方式】中，所得提取物中咖啡酸酯类化合物的含量高达81%?82%，而灯盏乙素含量仅为0.01?0.03%，更是低于0.1% w/w。
[0009]从含量测定结果可知，本发明提供的提取物中，主要含有咖啡酸酯类化合物，而如灯盏乙素一类的总黄酮成分含量极低，可能与本发明大孔吸附树脂的梯度洗脱程序以及萃取工艺有关:黄酮类成分随40% v/v乙醇被大量洗脱除去，使得60% v/v乙醇洗脱部位中的黄酮类成分含量极低；同时，灯盏乙素不易溶于乙酸乙酯，经萃取后，乙酸乙酯部位中灯盏乙素的含量更低。
[0010]另外，本发明虽然未测定灯盏甲素含量，但是，灯盏甲素与灯盏乙素的极性较为相似，现有技术对灯盏花素进行分离纯化时，多是得到灯盏甲素和灯盏乙素的混合物，因此，根据现有技术不难看出，本发明最终选择的乙酸乙酯部位中灯盏甲素的含量同样很低。
[0011]其中，所述咖啡酸酯类化合物包括1，3- 二咖啡酰奎宁酸、3，4- 二咖啡酰奎宁酸、3，5- 二咖啡酰奎宁酸、4，5—二咖啡酰奎宁酸、3，4，5- 二咖啡酰奎宁酸、飞蓬酯乙。
[0012]进一步地，按干燥品计算，所述提取物中，各咖啡酸酯类化合物的含量分别为:
1.3- 二咖啡酰奎宁酸为0.4-1.5% w/w,优选为0.5-1.0% w/w ;3，4- 二咖啡酰奎宁酸为
2.5 ?5.8% w/w，优选为 3.0-4.0 % w/w ;3，5- 二咖啡酰奎宁酸为 7.0 ?14.0 % w/w，优选为 10.0-11.0% w/w ;4，5—二咖啡酰奎宁酸为 1.5 ?3.0% w/w，优选为 1.7-2.5% w/w ；3，4，5- 二咖啡酰奎宁酸为5.0?10.5% w/w,优选为6.5-8.0% w/w ;飞蓬酯乙为2.0?
3.8% w/w，优选为 2.5-3.0% w/w。
[0013]本发明一个【具体实施方式】中，所述提取物中，各咖啡酸酯类化合物的含量分别为(按干燥品计算):1，3- 二咖啡酰奎宁酸为0.7% w/w ；3, 4- 二咖啡酰奎宁酸为3.5% w/w ；3，5- 二咖啡酰奎宁酸为10.5% w/w ;4，5—二咖啡酰奎宁酸为2.1% w/w ;3，4，5- 二咖啡酰奎宁酸为7.2% w/w ;飞蓬醋乙为2.7% w/w。
[0014]本发明还提供了上述总咖啡酸酯提取物的制备方法，它包括如下操作步骤:
[0015](I)取干燥的多舌飞蓬全草，以水或乙醇水溶液提取；
[0016](2)收集醇提液，上大孔吸附树脂柱，依次用水、30-40% v/v,50-60% v/v乙醇进行洗脱，收集60% v/v乙醇洗脱液，减压浓缩除去乙醇后，剩余溶液用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯萃取部位，回收溶剂，即得多舌飞蓬的总咖啡酸酯提取物。
[0017]进一步地，步骤⑴中，提取溶剂优选使用乙醇水溶液，尤其是50?95% v/v乙醇。
[0018]本发明一个【具体实施方式】中，提取用乙醇浓度为75% v/v，基于对误差等因素的考虑，该乙醇浓度亦可选择70-80% ν/νο
[0019]进一步地，步骤(2)中，依次用水、35-40 % v/v、55_60% v/v乙醇洗脱，收集55-60% v/v乙醇洗脱液。
[0020]本发明一个【具体实施方式】中，依次用水、40 % v/v、60 % v/v乙醇洗脱，收集60 % v/V乙醇洗脱液。
[0021]提取方法可以选择回流、温浸、超声、渗漉等不同方法。
[0022]其中，所述大孔吸附树脂选自弱极性或非极性大孔吸附树脂。
[0023]本发明所述非极性大孔吸附树脂是以HPD-100、HPD-300、D-1Ol、X-5、H103为代表的一类树脂，弱极性大孔吸附树脂则是以AB-8、DA-201、HPD-400为代表的另一类。
[0024]进一步地，所述大孔吸附树脂为D101、HPD100, HPD400或AB-8型大孔吸附树脂。本发明一个【具体实施方式】中使用了 DlOl型大孔吸附树脂。
[0025]步骤(I)中，在对多舌飞蓬进行提取前，可以使用本领域常用的粉碎处理方法，用以增加被提取物的比表面积，有利于成分的提取。在实际生产过程中，可根据自身需要，选择对多舌飞蓬全草进行粉碎或不粉碎。
[0026]本发明还提供了上述总咖啡酸酯提取物在制备抗心肌缺血的药物或保健品中的用途。
[0027]进一步地，所述药物或保健品是治疗或/和预防心肌梗死的药物或保健品。
[0028]更进一步地，所述药物或保健品是减少缺血性心肌梗死面积、抑制ST段下降或/和抑制血清CK-MB和LDH升高的药物或保健品。
[0029]本发明还提供了一种药物组合物，它是以上述多舌飞蓬的总咖啡酸酯提取物为活性成分制备而成的制剂。
[0030]制剂中可以根据具体需，需求添加相应的辅料或辅助性成分。
[0031]本发明可以采用本领域常规的制剂技术手段或制药方法，将本发明提取物制备成适当的药剂形式，包含:片剂，注射剂，酊剂，栓剂，胶囊剂，膏剂(软膏剂、乳膏剂)，丸剂，植入剂，糖浆剂，雾剂(气雾剂、粉雾剂、喷雾剂)，膜剂，颗粒剂，口服溶液剂(口服混悬剂、口服乳剂)，散剂，洗剂(冲洗剂、灌肠剂)，搽剂(涂剂、涂膜剂)，凝胶剂，贴剂等；优选为片剂，胶囊剂，眼用制剂。其中，所述片剂选自含片、舌下片、口腔贴片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡腾片、缓释片、控释片、肠溶片等 ；所述注射剂选自针剂、输液、冻干粉针、乳液、植入体、微球制剂、微丸制剂等；所述胶囊剂选自硬胶囊、软胶囊、缓释胶囊、控释胶囊和肠溶胶囊等；所述丸剂选自滴丸、糖丸等；所述颗粒剂选自混悬颗粒、泡腾颗粒、肠溶颗粒、缓释颗粒、控释颗粒等。
[0032]本发明一个【具体实施方式】中，采用了静脉给药，即可将提取物制备成注射制剂。
[0033]本发明所述药学上可接受的辅料，是指除活性成分以外包含在剂型中的物质，包括但不仅限于填充剂(稀释剂)、润滑剂(助流剂或抗粘着剂)、分散剂、湿润剂、粘合剂、调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、崩解剂等。粘合剂包含糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、纤维素及其衍生物(如微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素或羟丙甲基纤维素等)、明胶浆、糖浆、淀粉浆或聚乙烯吡咯烷酮等；填充剂包含乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纤维素及其衍生物、无机钙盐(如硫酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、沉降碳酸钙等)、山梨醇或甘氨酸等；润滑剂包含微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉、氢氧化铝、硼酸、氢化植物油、聚乙二醇等；崩解剂包含淀粉及其衍生物(如羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉等)、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纤维素等；湿润剂包含十二烷基硫酸钠、水或醇等；抗氧剂包含亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、二丁基苯酸等；抑菌剂包含0.5%苯酚、0.3%甲酚、0.5%三氯叔丁醇等；调节剂包含盐酸、枸橼酸、氢氧化钾(钠)、枸橼酸钠及缓冲剂(包括磷酸二氧钠和磷酸氢二钠)等；乳化剂包含聚山梨酯-80、脂肪酸山梨坦、普流罗尼克F-68，卵磷酯、豆磷脂等；增溶剂包含吐温-80、胆汁、甘油等。
[0034]所述药学上可接受的辅助性成分，它具有一定生理活性，但该成分的加入不会改变上述提取物在疾病治疗过程中的主导地位，而仅仅发挥辅助功效，这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用，是医药领域惯用的辅助治疗方式。若将上述辅助性成分与本发明提取物配合使用，仍然应属于本发明保护的范围。
[0035]将本发明与现有技术(专利:200810302378.1)进行比较，可以得出如下分析结论:
[0036](I)本发明提取物与专利:200810302378.1的组成成分不同:
[0037]专利:200810302378.1所得提取物中主要含有黄酮类成分，黄酮含量为20?90%，其中灯盏甲素含量为6.7?24.8%，灯盏乙素的含量为7.6?26.4%。与之不同的是，本发明提取物中主要含有咖啡酸酯类化合物，该类化合物的含量为60?90% w/w，而灯盏乙素含量则低于5% w/w(甚至更低)。
[0038]虽然本发明未测定灯盏甲素含量，但是，灯盏甲素与灯盏乙素的极性较为相似。根据现有技术不难看出，本发明最终选择的乙酸乙酯部位中灯盏甲素的含量同样很低。
[0039](2)本发明提取物的制备方法与专利:200810302378.1不同:
[0040]专利:200810302378.1中，是将多舌飞蓬水、甲醇水或乙醇水提取液，调节pH至3?5后，上大孔吸附树脂，水清洗后采用20?70%乙醇洗脱。其中，乙醇洗脱步骤采用的是单一的乙醇浓度，而非梯度洗脱；洗脱液直接除去溶剂即得到提取物。
[0041]与之不同的是，本发明中不调节pH ;在大孔树脂洗脱时，分别采用30-40% v/v、50-60% v/v乙醇进行梯度洗脱；洗脱液还采用乙酸乙酯进行萃取，而灯盏乙素、灯盏甲素不易溶于乙酸乙酯。
[0042]本发明纯化方法的不同，是导致灯盏乙素等黄酮类成分含量低的直接原因。
[0043](3)本发明提取物的医药用途与专利:200810302378.1没有直接关联:
[0044]专利:200810302378.1中，其提取物是对脑缺血有保护作用，对炎症有抑制作用。本发明提取物的作用是抗心肌缺血，可预防或治疗心肌梗死。脑部和心脏属于完全不同、不接近的人体组织，两者之间没有必然关联性，脑缺血和心肌缺血可以独立发作；由此可见，本发明提取物的医药用途与专利:200810302378.1没有直接和必然联系。
[0045]另外，根据本发明【背景技术】分析可知，专利:200810302378.1中给出的技术启示是:多舌飞蓬提取物的主要活性成分为黄酮类，尤其以灯盏甲素和灯盏乙素为主。本发明提取物中黄酮类成分含量较低，尤其是专利:200810302378.1中指出的主要成分一一灯盏乙素等，显然，若按照专利:200810302378.1中主要活性成分启示来看，本发明提取物中的有效成分可能无法达到起效剂量。因此，从成分含量来看，专利:200810302378.1与本发明提取物的药效作用也是没有直接关联性的。
[0046]综合本发明实验以及上述分析可知，本发明实际是提供了一种全新的多舌飞蓬提取物，该提取物与现有技术不同，主要是含有咖啡酸酯类化合物，灯盏乙素等黄酮类化合物含量较低，本发明研宄发现，该提取物能够有效对抗心肌缺血，减少缺血性心肌梗死面积、抑制ST段下降、抑制血清CK-MB和LDH升高，可有效预防或治疗心肌梗死，为多舌飞蓬的进一步开发提供了可能。
【附图说明】
[0047]图1:提取物AE对實驗大鼠缺血再灌注后心肌梗死面积的影响；深度染红的区域表示正常组织，未被染色的白色部位为梗死组织(A);实验方法(B)不同剂量的提取物AE(10, 20或40mg/kg),阳性药CAPE 5mg/kg或生理盐水组(lml/kg)的梗死面积(C).**Ρ〈0.01，与假手术组比较;#Ρ〈0.05，与I/R模型组相比较
[0048]图2.提取物AE对ST段电位改变(A)和心率的影响(B).*Ρ〈0.05，**Ρ〈0.01，与假手术组相比较；#p〈0.05, ##Ρ〈0.01，与模型组相比较。
[0049]图3.提取物AE对I/R大鼠血清CK-MB和LDH活性的影响.林Ρ〈0.01，与假手术组相比较；#p〈0.05, ##Ρ〈0.01，与模型组相比较。
【具体实施方式】
[0050]实施例1本发明提取物制备
[0051]将干燥的多舌飞蓬全草研成粉末用75%的乙醇提取3次(每次使用乙醇12L，回流提取2h)，提取液回收乙醇后，上DlOl大孔吸附树脂柱，用水、40%乙醇和60%乙醇依次洗脱，收集用60 %乙醇洗脱的溶液，浓缩至无醇味，剩下的溶液用乙酸乙酯萃取3次，收集该溶液，并干燥，得到总咖啡酸酯提取物(简称AE)。
[0052]实施例2本发明提取物制备
[0053]将干燥的多舌飞蓬全草研成粉末用75%的乙醇提取(每次使用乙醇12L，超声2次，每次30min，提取液回收乙醇后，上DlOl大孔吸附树脂柱，用水、40%乙醇和60%乙醇依次洗脱，收集用60%乙醇洗脱的溶液，浓缩至无醇味，剩下的溶液用乙酸乙酯萃取3次，收集该溶液，并干燥，得到总咖啡酸酯提取物(AE)。
[0054]实施例3本发明提取物制备
[0055]将干燥的多舌飞蓬全草研成粉末用80%的乙醇提取3次(每次使用乙醇12L，回流提取2h)，提取液回收乙醇后，上AB-8大孔吸附树脂柱，用水、30%乙醇和50%乙醇依次洗脱，收集用50 %乙醇洗脱的溶液，浓缩至无醇味，剩下的溶液用乙酸乙酯萃取3次，收集该溶液，并干燥，得到总咖啡酸酯提取物(简称AE)。
[0056]实施例4本发明提取物制备
[0057]将干燥的多舌飞蓬全草研成粉末用70%的乙醇提取(每次使用乙醇12L，超声2次，每次30min，提取液回收乙醇后，上HPD-400大孔吸附树脂柱，用水、35%乙醇和55%乙醇依次洗脱，收集用55%乙醇洗脱的溶液，浓缩至无醇味，剩下的溶液用乙酸乙酯萃取3次，收集该溶液，并干燥，得到总咖啡酸酯提取物(AE)。
[0058]提取物中的化学成分分析:
[0059](I)中国药典规定了提取物中咖啡酸类物质的含量测定的方法。用紫外分光光度计在石英中测得其在305nm处有良好吸收，以1，3 二咖啡酰奎宁酸为对照品，在10?2(^8/11^范 围内的校正公式为7 = 8.6942x+0.02318，R2= 0.9992。
[0060](2)用二极管阵列监测器在安捷伦1200高效液相色谱系统中完成色谱分析实验。用安捷伦C18柱(150mmX4.6mm, 5 μπι)分离化合物，以1.0ml/min的流速完成梯度洗脱，波长为305nm，柱温控制在25°C，流动相由0.1 %醋酸水溶液和乙腈组成，进样体积为 10uL。梯度洗脱条件为:0-40min，13-25% 乙腈；40 - 50min，25 - 40 % 乙腈；50_55%min40 - 50% 乙腈。
[0061]另外，除检测波长为335nm以外，其他测定条件相同的情况下，检测灯盏乙素的含量。
[0062](3)分析结果:
[0063]用紫外分光光度计测定提取物中全部咖啡酸类物质的含量为81.7%，HPLC的分析结果表明，提取物的主要成分分别为1，3- 二咖啡酰奎宁酸(0.7% ),3, 4- 二咖啡酰奎宁酸(3.8% )，3，5-二咖啡酰奎宁酸(10.4% )，4，5—二咖啡酰奎宁酸(2.1 % ),3,4, 5-二咖啡酰奎宁酸(7.2% )和飞蓬酯乙(2.7% )。
[0064]经测定，提取物中灯盏乙素含量约0.01?0.03%。
[0065]实施例5本发明提取物(AE)抗心肌缺血研宄
[0066](I)提取物(AE)可减少缺血性再灌注后的心肌梗死面积
[0067]大鼠缺血性再灌注模型(I/R): (I/R)模型参考文献制备，将60只SD大鼠随机分成6组，假手术组(I)給予生理盐水；(II) I/R组給予生理盐水，(III) I/R组給予提取物AE10mg/kg，(IV) I/R 給予提取物 AE20mg/kg，(V) I/R 給予提取物 AE40mg/kg，(VI) I/R 给予咖啡酸苯乙醋(CAPE) 5mg/kgo
[0068]SD大鼠LAD結扎后行假手術或心肌缺血30min，不同剂量的AE提取物、阳性药和生理盐水與再灌注前Imin通过尾静脉注射，再灌注24小时后處死動物。与对照组(15.2 ± 1.4 % )相比较，提取物AE在20、40mg/kg治疗组使心肌梗死面积(5.4±1.3%，4.9±1.1% )显著减少(ρ〈0.05)(见图1)，提取物 AE10mg/kg 的提取物同样可以减少心肌梗死面积，但未达统计學显著性差異。CAPE给药組心肌梗死面积是
7.9±0.9%。结果表明提取物AE可以在缺血再灌注后减少心肌梗死面积，其减少作用与剂量相关。
[0069](2)提取物(AE)抑制缺血性再灌注诱导的ST段压低
[0070]记录ST段的波幅，并将其作为缺血性心电图仪变化的一个指标，如图2所示(见图2)，再灌注之后的麻醉大鼠ST段下降的总电位数约为0.2mV,与假手术组相比，提取物AE20、40mg/kg组显著抑制再灌注诱导的ST段压低。CAPE對再灌注诱导的ST段压低也表现出了明显的保护作用。相比于假手术组，对照组在再灌注24h之后，通过持续记录15分钟，心率降低。与ST段压低的情况相似，提取物AE40mg/kg组，可以显著改善心率降低。
[0071](3)提取物(AE)减弱缺血再灌注诱导的心肌坏死
[0072]血清水平CK-MB和LDH作为心肌坏死的两个指标，在缺血再灌注之后的对照组明显提高。同CAPE的治疗相同，提取物AE 20mg/kg给药组，其CK-MB为975±26.6U/L，与阳性药组(1375±56.8U/L)相比较，有显著性差异(P〈0.05);其LDH为306± 14.7，与阳性药组(465±15.6U/L)相比较，有显著性差异(P〈0.05) ;40mg/kg给药组，其CK-MB为841±31.2U/L，LDH 为 246±23.5，血清水平 CK-MB 和 LDH 有了明显下降(P〈0.01)。(见图3)。
【主权项】
1.一种多舌飞蓬的总咖啡酸酯提取物，其特征在于:按干燥品计算，该提取物中，咖啡酸醋类化合物的含量为60?90% w/w，进一步为80-90% w/w ;灯盏乙素含量低于5% w/w，更进一步地，其含量低于1% w/w。2.根据权利要求1所述的总咖啡酸酯提取物，其特征在于:盏乙素含量低于0.1% w/Wo3.根据权利要求1或2所述的总咖啡酸酯提取物，其特征在于:所述咖啡酸酯类化合物包括1，3- 二咖啡酰奎宁酸、3，4- 二咖啡酰奎宁酸、3，5- 二咖啡酰奎宁酸、4，5—二咖啡酰奎宁酸、3，4，5- 二咖啡酰奎宁酸、飞蓬酯乙。4.根据权利要求3所述的总咖啡酸酯提取物，其特征在于:按干燥品计算，所述提取物中，各咖啡酸酯类化合物的含量分别为:1，3- 二咖啡酰奎宁酸为0.4-1.5% w/w，优选为0.5-1.0% w/w ;3，4-二咖啡酰奎宁酸为 2.5 ?5.8% w/w，优选为 3.0-4.0% w/w ;3，5-二咖啡酰奎宁酸为7.0?14.0% w/w，优选为10.0-11.0% w/w ;4，5—二咖啡酰奎宁酸为1.5?3.0% w/w，优选为1.7-2.5 % w/w ;3，4，5- 二咖啡酰奎宁酸为5.0?10.5% w/w，优选为6.5-8.0% w/w ;飞蓬醋乙为 2.0 ?3.8% w/w，优选为 2.5-3.0% w/w。5.权利要求1所述总咖啡酸酯提取物的制备方法，其特征在于:它包括如下操作步骤: (1)取干燥的多舌飞蓬全草，以水或乙醇水溶液提取，优选为50?95%v/v乙醇； (2)收集醇提液，上大孔吸附树脂柱，依次用水、30-40%v/v>50-60% v/v乙醇进行洗脱，收集50-60% v/v乙醇洗脱液，减压浓缩除去乙醇后，剩余溶液用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯萃取部位，回收溶剂，即得多舌飞蓬的总咖啡酸酯提取物。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于:步骤(2)中，依次用水、35-40%v/v、55-60% v/v乙醇洗脱，收集55-60% v/v乙醇洗脱液；优选地，依次用水、40% v/v,60% v/V乙醇洗脱，收集60% v/v乙醇洗脱液。7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于:所述大孔吸附树脂选自弱极性或非极性大孔吸附树脂；进一步地，所述大孔吸附树脂为D101、HPD100, HPD400或AB-8型大孔吸附树脂。8.权利要求1?4任意一项所述总咖啡酸酯提取物在制备抗心肌缺血的药物或保健品中的用途。9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于:所述药物或保健品是治疗或/和预防心肌梗死的药物或保健品；进一步地，所述药物或保健品是减少缺血性心肌梗死面积、抑制ST段下降或/和抑制血清CK-MB和LDH升高的药物或保健品。10.一种药物组合物，其特征在于:它是以权利要求1?4任意一项所述多舌飞蓬的总咖啡酸酯提取物为活性成分制备而成的制剂。
【专利摘要】本发明提供了一种多舌飞蓬的咖啡酸酯类提取物，按干燥品计算，该提取物中，咖啡酸酯类化合物的含量为60～90％w/w，进一步为80-90％w/w；灯盏乙素含量低于5％w/w，更进一步地，其含量低于1％w/w。本发明还提供了该提取物的制备方法和用途。本发明实际是提供了一种全新的多舌飞蓬提取物，该提取物与现有技术不同，主要是含有咖啡酸酯类化合物，灯盏乙素等黄酮类化合物含量较低，本发明研究发现，该提取物能够有效对抗心肌缺血，縮小缺血再灌注心肌梗死面积、抑制ST段壓低、減少血清CK-MB和LDH升高，可有效预防或治疗心肌梗死，为多舌飞蓬的进一步开发提供了可能。
【IPC分类】C07C67/48, A61K31/35, C07D493/08, C07C69/732, C07C67/58, A61K36/28, C07C67/56, A61K31/216, A61P9/10
【公开号】CN104892419
【申请号】CN201510240634
【发明人】张志锋, 张 浩, 罗培
【申请人】西南民族大学, 张志锋
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月13日
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种多舌飞蓬的总咖啡酸酯提取物。
【背景技术】
[0002]多舌飞蓬Erigeron mutiradiatus (Lindl)Benth.，为菊科飞蓬属多年生草本植物，主要分布于我国西藏、四川西部和云南西北部高原地区，资源丰富，在藏医药中以全草入药，多用于跌打损伤、风湿疼痛、牙痛、胃痛、感冒等症，具有发表散寒、消炎止痛、活血化瘀等功效。
[0003]关于多舌飞蓬的提取方法、化学成分、药理等研宄较多，如多舌飞蓬的生药学研宄，公开了药材采用甲醇水超声提取，并对提取液进行定性定量分析(中草药.2004年，35卷3期)。多舌飞蓬黄酮成分的研宄，公开了多舌飞蓬全草永95%乙醇提取后，依次永氯仿、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，再分别经柱层析得到了芹菜素、灯盏甲素、槲皮素等黄酮类成分(中草药，1998年，29卷12期)。
[0004]专利:200810302378.1，还提供了一种多舌飞蓬提取物，其中灯盏甲素含量为
6.7?24.8%，灯盏乙素的含量为7.6?26.4% ;该提取物的制备方法为:取多舌飞蓬用水、甲醇水溶液或乙醇水溶液提取后，提取液调节pH至3?5后，上大孔吸附树脂，水清洗后采用20?70%乙醇，以0.5?2.5BV/hr的流速洗脱，洗脱液浓缩后，干燥即得提取物；该提取物对脑缺血有保护作用，对炎症有抑制作用。该专利中还指出，“多舌飞蓬提取物中总黄酮含量可达20?90%，其中含有芹菜素、槲皮素、木刺草素、灯盏甲素、异槲皮素、灯盏乙素、汉黄芩素的一种或多种。该制备方法能有效地富集灯盏甲素和灯盏乙素，去除了无药理作用的杂质成分”(说明书第11段)，由此不难看出，该专利给出了如下启示:上述多舌飞蓬提取物的主要活性成分为黄酮类，尤其以灯盏甲素和灯盏乙素为主。
[0005]对多舌飞蓬的现有技术进行分析，可以看出，目前对多舌飞蓬化学成分的研宄主要集中于黄酮类，其他种类的化学成分还鲜有报道。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于提供一种多舌飞蓬的总咖啡酸酯提取物，本发明的另一目的在于提供该提取物的制备方法和用途。
[0007]具体地，本发明提供了一种多舌飞蓬的总咖啡酸酯提取物，按干燥品计算，该提取物中，咖啡酸酯类化合物的含量为60?90% w/w，进一步为80-90% w/w ;灯盏乙素含量低于5% w/w，更进一步地，其含量低于1% w/w。
[0008]本发明一个【具体实施方式】中，所得提取物中咖啡酸酯类化合物的含量高达81%?82%，而灯盏乙素含量仅为0.01?0.03%，更是低于0.1% w/w。
[0009]从含量测定结果可知，本发明提供的提取物中，主要含有咖啡酸酯类化合物，而如灯盏乙素一类的总黄酮成分含量极低，可能与本发明大孔吸附树脂的梯度洗脱程序以及萃取工艺有关:黄酮类成分随40% v/v乙醇被大量洗脱除去，使得60% v/v乙醇洗脱部位中的黄酮类成分含量极低；同时，灯盏乙素不易溶于乙酸乙酯，经萃取后，乙酸乙酯部位中灯盏乙素的含量更低。
[0010]另外，本发明虽然未测定灯盏甲素含量，但是，灯盏甲素与灯盏乙素的极性较为相似，现有技术对灯盏花素进行分离纯化时，多是得到灯盏甲素和灯盏乙素的混合物，因此，根据现有技术不难看出，本发明最终选择的乙酸乙酯部位中灯盏甲素的含量同样很低。
[0011]其中，所述咖啡酸酯类化合物包括1，3- 二咖啡酰奎宁酸、3，4- 二咖啡酰奎宁酸、3，5- 二咖啡酰奎宁酸、4，5—二咖啡酰奎宁酸、3，4，5- 二咖啡酰奎宁酸、飞蓬酯乙。
[0012]进一步地，按干燥品计算，所述提取物中，各咖啡酸酯类化合物的含量分别为:
1.3- 二咖啡酰奎宁酸为0.4-1.5% w/w,优选为0.5-1.0% w/w ;3，4- 二咖啡酰奎宁酸为
2.5 ?5.8% w/w，优选为 3.0-4.0 % w/w ;3，5- 二咖啡酰奎宁酸为 7.0 ?14.0 % w/w，优选为 10.0-11.0% w/w ;4，5—二咖啡酰奎宁酸为 1.5 ?3.0% w/w，优选为 1.7-2.5% w/w ；3，4，5- 二咖啡酰奎宁酸为5.0?10.5% w/w,优选为6.5-8.0% w/w ;飞蓬酯乙为2.0?
3.8% w/w，优选为 2.5-3.0% w/w。
[0013]本发明一个【具体实施方式】中，所述提取物中，各咖啡酸酯类化合物的含量分别为(按干燥品计算):1，3- 二咖啡酰奎宁酸为0.7% w/w ；3, 4- 二咖啡酰奎宁酸为3.5% w/w ；3，5- 二咖啡酰奎宁酸为10.5% w/w ;4，5—二咖啡酰奎宁酸为2.1% w/w ;3，4，5- 二咖啡酰奎宁酸为7.2% w/w ;飞蓬醋乙为2.7% w/w。
[0014]本发明还提供了上述总咖啡酸酯提取物的制备方法，它包括如下操作步骤:
[0015](I)取干燥的多舌飞蓬全草，以水或乙醇水溶液提取；
[0016](2)收集醇提液，上大孔吸附树脂柱，依次用水、30-40% v/v,50-60% v/v乙醇进行洗脱，收集60% v/v乙醇洗脱液，减压浓缩除去乙醇后，剩余溶液用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯萃取部位，回收溶剂，即得多舌飞蓬的总咖啡酸酯提取物。
[0017]进一步地，步骤⑴中，提取溶剂优选使用乙醇水溶液，尤其是50?95% v/v乙醇。
[0018]本发明一个【具体实施方式】中，提取用乙醇浓度为75% v/v，基于对误差等因素的考虑，该乙醇浓度亦可选择70-80% ν/νο
[0019]进一步地，步骤(2)中，依次用水、35-40 % v/v、55_60% v/v乙醇洗脱，收集55-60% v/v乙醇洗脱液。
[0020]本发明一个【具体实施方式】中，依次用水、40 % v/v、60 % v/v乙醇洗脱，收集60 % v/V乙醇洗脱液。
[0021]提取方法可以选择回流、温浸、超声、渗漉等不同方法。
[0022]其中，所述大孔吸附树脂选自弱极性或非极性大孔吸附树脂。
[0023]本发明所述非极性大孔吸附树脂是以HPD-100、HPD-300、D-1Ol、X-5、H103为代表的一类树脂，弱极性大孔吸附树脂则是以AB-8、DA-201、HPD-400为代表的另一类。
[0024]进一步地，所述大孔吸附树脂为D101、HPD100, HPD400或AB-8型大孔吸附树脂。本发明一个【具体实施方式】中使用了 DlOl型大孔吸附树脂。
[0025]步骤(I)中，在对多舌飞蓬进行提取前，可以使用本领域常用的粉碎处理方法，用以增加被提取物的比表面积，有利于成分的提取。在实际生产过程中，可根据自身需要，选择对多舌飞蓬全草进行粉碎或不粉碎。
[0026]本发明还提供了上述总咖啡酸酯提取物在制备抗心肌缺血的药物或保健品中的用途。
[0027]进一步地，所述药物或保健品是治疗或/和预防心肌梗死的药物或保健品。
[0028]更进一步地，所述药物或保健品是减少缺血性心肌梗死面积、抑制ST段下降或/和抑制血清CK-MB和LDH升高的药物或保健品。
[0029]本发明还提供了一种药物组合物，它是以上述多舌飞蓬的总咖啡酸酯提取物为活性成分制备而成的制剂。
[0030]制剂中可以根据具体需，需求添加相应的辅料或辅助性成分。
[0031]本发明可以采用本领域常规的制剂技术手段或制药方法，将本发明提取物制备成适当的药剂形式，包含:片剂，注射剂，酊剂，栓剂，胶囊剂，膏剂(软膏剂、乳膏剂)，丸剂，植入剂，糖浆剂，雾剂(气雾剂、粉雾剂、喷雾剂)，膜剂，颗粒剂，口服溶液剂(口服混悬剂、口服乳剂)，散剂，洗剂(冲洗剂、灌肠剂)，搽剂(涂剂、涂膜剂)，凝胶剂，贴剂等；优选为片剂，胶囊剂，眼用制剂。其中，所述片剂选自含片、舌下片、口腔贴片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡腾片、缓释片、控释片、肠溶片等 ；所述注射剂选自针剂、输液、冻干粉针、乳液、植入体、微球制剂、微丸制剂等；所述胶囊剂选自硬胶囊、软胶囊、缓释胶囊、控释胶囊和肠溶胶囊等；所述丸剂选自滴丸、糖丸等；所述颗粒剂选自混悬颗粒、泡腾颗粒、肠溶颗粒、缓释颗粒、控释颗粒等。
[0032]本发明一个【具体实施方式】中，采用了静脉给药，即可将提取物制备成注射制剂。
[0033]本发明所述药学上可接受的辅料，是指除活性成分以外包含在剂型中的物质，包括但不仅限于填充剂(稀释剂)、润滑剂(助流剂或抗粘着剂)、分散剂、湿润剂、粘合剂、调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、崩解剂等。粘合剂包含糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、纤维素及其衍生物(如微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素或羟丙甲基纤维素等)、明胶浆、糖浆、淀粉浆或聚乙烯吡咯烷酮等；填充剂包含乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纤维素及其衍生物、无机钙盐(如硫酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、沉降碳酸钙等)、山梨醇或甘氨酸等；润滑剂包含微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉、氢氧化铝、硼酸、氢化植物油、聚乙二醇等；崩解剂包含淀粉及其衍生物(如羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉等)、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纤维素等；湿润剂包含十二烷基硫酸钠、水或醇等；抗氧剂包含亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、二丁基苯酸等；抑菌剂包含0.5%苯酚、0.3%甲酚、0.5%三氯叔丁醇等；调节剂包含盐酸、枸橼酸、氢氧化钾(钠)、枸橼酸钠及缓冲剂(包括磷酸二氧钠和磷酸氢二钠)等；乳化剂包含聚山梨酯-80、脂肪酸山梨坦、普流罗尼克F-68，卵磷酯、豆磷脂等；增溶剂包含吐温-80、胆汁、甘油等。
[0034]所述药学上可接受的辅助性成分，它具有一定生理活性，但该成分的加入不会改变上述提取物在疾病治疗过程中的主导地位，而仅仅发挥辅助功效，这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用，是医药领域惯用的辅助治疗方式。若将上述辅助性成分与本发明提取物配合使用，仍然应属于本发明保护的范围。
[0035]将本发明与现有技术(专利:200810302378.1)进行比较，可以得出如下分析结论:
[0036](I)本发明提取物与专利:200810302378.1的组成成分不同:
[0037]专利:200810302378.1所得提取物中主要含有黄酮类成分，黄酮含量为20?90%，其中灯盏甲素含量为6.7?24.8%，灯盏乙素的含量为7.6?26.4%。与之不同的是，本发明提取物中主要含有咖啡酸酯类化合物，该类化合物的含量为60?90% w/w，而灯盏乙素含量则低于5% w/w(甚至更低)。
[0038]虽然本发明未测定灯盏甲素含量，但是，灯盏甲素与灯盏乙素的极性较为相似。根据现有技术不难看出，本发明最终选择的乙酸乙酯部位中灯盏甲素的含量同样很低。
[0039](2)本发明提取物的制备方法与专利:200810302378.1不同:
[0040]专利:200810302378.1中，是将多舌飞蓬水、甲醇水或乙醇水提取液，调节pH至3?5后，上大孔吸附树脂，水清洗后采用20?70%乙醇洗脱。其中，乙醇洗脱步骤采用的是单一的乙醇浓度，而非梯度洗脱；洗脱液直接除去溶剂即得到提取物。
[0041]与之不同的是，本发明中不调节pH ;在大孔树脂洗脱时，分别采用30-40% v/v、50-60% v/v乙醇进行梯度洗脱；洗脱液还采用乙酸乙酯进行萃取，而灯盏乙素、灯盏甲素不易溶于乙酸乙酯。
[0042]本发明纯化方法的不同，是导致灯盏乙素等黄酮类成分含量低的直接原因。
[0043](3)本发明提取物的医药用途与专利:200810302378.1没有直接关联:
[0044]专利:200810302378.1中，其提取物是对脑缺血有保护作用，对炎症有抑制作用。本发明提取物的作用是抗心肌缺血，可预防或治疗心肌梗死。脑部和心脏属于完全不同、不接近的人体组织，两者之间没有必然关联性，脑缺血和心肌缺血可以独立发作；由此可见，本发明提取物的医药用途与专利:200810302378.1没有直接和必然联系。
[0045]另外，根据本发明【背景技术】分析可知，专利:200810302378.1中给出的技术启示是:多舌飞蓬提取物的主要活性成分为黄酮类，尤其以灯盏甲素和灯盏乙素为主。本发明提取物中黄酮类成分含量较低，尤其是专利:200810302378.1中指出的主要成分一一灯盏乙素等，显然，若按照专利:200810302378.1中主要活性成分启示来看，本发明提取物中的有效成分可能无法达到起效剂量。因此，从成分含量来看，专利:200810302378.1与本发明提取物的药效作用也是没有直接关联性的。
[0046]综合本发明实验以及上述分析可知，本发明实际是提供了一种全新的多舌飞蓬提取物，该提取物与现有技术不同，主要是含有咖啡酸酯类化合物，灯盏乙素等黄酮类化合物含量较低，本发明研宄发现，该提取物能够有效对抗心肌缺血，减少缺血性心肌梗死面积、抑制ST段下降、抑制血清CK-MB和LDH升高，可有效预防或治疗心肌梗死，为多舌飞蓬的进一步开发提供了可能。
【附图说明】
[0047]图1:提取物AE对實驗大鼠缺血再灌注后心肌梗死面积的影响；深度染红的区域表示正常组织，未被染色的白色部位为梗死组织(A);实验方法(B)不同剂量的提取物AE(10, 20或40mg/kg),阳性药CAPE 5mg/kg或生理盐水组(lml/kg)的梗死面积(C).**Ρ〈0.01，与假手术组比较;#Ρ〈0.05，与I/R模型组相比较
[0048]图2.提取物AE对ST段电位改变(A)和心率的影响(B).*Ρ〈0.05，**Ρ〈0.01，与假手术组相比较；#p〈0.05, ##Ρ〈0.01，与模型组相比较。
[0049]图3.提取物AE对I/R大鼠血清CK-MB和LDH活性的影响.林Ρ〈0.01，与假手术组相比较；#p〈0.05, ##Ρ〈0.01，与模型组相比较。
【具体实施方式】
[0050]实施例1本发明提取物制备
[0051]将干燥的多舌飞蓬全草研成粉末用75%的乙醇提取3次(每次使用乙醇12L，回流提取2h)，提取液回收乙醇后，上DlOl大孔吸附树脂柱，用水、40%乙醇和60%乙醇依次洗脱，收集用60 %乙醇洗脱的溶液，浓缩至无醇味，剩下的溶液用乙酸乙酯萃取3次，收集该溶液，并干燥，得到总咖啡酸酯提取物(简称AE)。
[0052]实施例2本发明提取物制备
[0053]将干燥的多舌飞蓬全草研成粉末用75%的乙醇提取(每次使用乙醇12L，超声2次，每次30min，提取液回收乙醇后，上DlOl大孔吸附树脂柱，用水、40%乙醇和60%乙醇依次洗脱，收集用60%乙醇洗脱的溶液，浓缩至无醇味，剩下的溶液用乙酸乙酯萃取3次，收集该溶液，并干燥，得到总咖啡酸酯提取物(AE)。
[0054]实施例3本发明提取物制备
[0055]将干燥的多舌飞蓬全草研成粉末用80%的乙醇提取3次(每次使用乙醇12L，回流提取2h)，提取液回收乙醇后，上AB-8大孔吸附树脂柱，用水、30%乙醇和50%乙醇依次洗脱，收集用50 %乙醇洗脱的溶液，浓缩至无醇味，剩下的溶液用乙酸乙酯萃取3次，收集该溶液，并干燥，得到总咖啡酸酯提取物(简称AE)。
[0056]实施例4本发明提取物制备
[0057]将干燥的多舌飞蓬全草研成粉末用70%的乙醇提取(每次使用乙醇12L，超声2次，每次30min，提取液回收乙醇后，上HPD-400大孔吸附树脂柱，用水、35%乙醇和55%乙醇依次洗脱，收集用55%乙醇洗脱的溶液，浓缩至无醇味，剩下的溶液用乙酸乙酯萃取3次，收集该溶液，并干燥，得到总咖啡酸酯提取物(AE)。
[0058]提取物中的化学成分分析:
[0059](I)中国药典规定了提取物中咖啡酸类物质的含量测定的方法。用紫外分光光度计在石英中测得其在305nm处有良好吸收，以1，3 二咖啡酰奎宁酸为对照品，在10?2(^8/11^范 围内的校正公式为7 = 8.6942x+0.02318，R2= 0.9992。
[0060](2)用二极管阵列监测器在安捷伦1200高效液相色谱系统中完成色谱分析实验。用安捷伦C18柱(150mmX4.6mm, 5 μπι)分离化合物，以1.0ml/min的流速完成梯度洗脱，波长为305nm，柱温控制在25°C，流动相由0.1 %醋酸水溶液和乙腈组成，进样体积为 10uL。梯度洗脱条件为:0-40min，13-25% 乙腈；40 - 50min，25 - 40 % 乙腈；50_55%min40 - 50% 乙腈。
[0061]另外，除检测波长为335nm以外，其他测定条件相同的情况下，检测灯盏乙素的含量。
[0062](3)分析结果:
[0063]用紫外分光光度计测定提取物中全部咖啡酸类物质的含量为81.7%，HPLC的分析结果表明，提取物的主要成分分别为1，3- 二咖啡酰奎宁酸(0.7% ),3, 4- 二咖啡酰奎宁酸(3.8% )，3，5-二咖啡酰奎宁酸(10.4% )，4，5—二咖啡酰奎宁酸(2.1 % ),3,4, 5-二咖啡酰奎宁酸(7.2% )和飞蓬酯乙(2.7% )。
[0064]经测定，提取物中灯盏乙素含量约0.01?0.03%。
[0065]实施例5本发明提取物(AE)抗心肌缺血研宄
[0066](I)提取物(AE)可减少缺血性再灌注后的心肌梗死面积
[0067]大鼠缺血性再灌注模型(I/R): (I/R)模型参考文献制备，将60只SD大鼠随机分成6组，假手术组(I)給予生理盐水；(II) I/R组給予生理盐水，(III) I/R组給予提取物AE10mg/kg，(IV) I/R 給予提取物 AE20mg/kg，(V) I/R 給予提取物 AE40mg/kg，(VI) I/R 给予咖啡酸苯乙醋(CAPE) 5mg/kgo
[0068]SD大鼠LAD結扎后行假手術或心肌缺血30min，不同剂量的AE提取物、阳性药和生理盐水與再灌注前Imin通过尾静脉注射，再灌注24小时后處死動物。与对照组(15.2 ± 1.4 % )相比较，提取物AE在20、40mg/kg治疗组使心肌梗死面积(5.4±1.3%，4.9±1.1% )显著减少(ρ〈0.05)(见图1)，提取物 AE10mg/kg 的提取物同样可以减少心肌梗死面积，但未达统计學显著性差異。CAPE给药組心肌梗死面积是
7.9±0.9%。结果表明提取物AE可以在缺血再灌注后减少心肌梗死面积，其减少作用与剂量相关。
[0069](2)提取物(AE)抑制缺血性再灌注诱导的ST段压低
[0070]记录ST段的波幅，并将其作为缺血性心电图仪变化的一个指标，如图2所示(见图2)，再灌注之后的麻醉大鼠ST段下降的总电位数约为0.2mV,与假手术组相比，提取物AE20、40mg/kg组显著抑制再灌注诱导的ST段压低。CAPE對再灌注诱导的ST段压低也表现出了明显的保护作用。相比于假手术组，对照组在再灌注24h之后，通过持续记录15分钟，心率降低。与ST段压低的情况相似，提取物AE40mg/kg组，可以显著改善心率降低。
[0071](3)提取物(AE)减弱缺血再灌注诱导的心肌坏死
[0072]血清水平CK-MB和LDH作为心肌坏死的两个指标，在缺血再灌注之后的对照组明显提高。同CAPE的治疗相同，提取物AE 20mg/kg给药组，其CK-MB为975±26.6U/L，与阳性药组(1375±56.8U/L)相比较，有显著性差异(P〈0.05);其LDH为306± 14.7，与阳性药组(465±15.6U/L)相比较，有显著性差异(P〈0.05) ;40mg/kg给药组，其CK-MB为841±31.2U/L，LDH 为 246±23.5，血清水平 CK-MB 和 LDH 有了明显下降(P〈0.01)。(见图3)。
【主权项】
1.一种多舌飞蓬的总咖啡酸酯提取物，其特征在于:按干燥品计算，该提取物中，咖啡酸醋类化合物的含量为60?90% w/w，进一步为80-90% w/w ;灯盏乙素含量低于5% w/w，更进一步地，其含量低于1% w/w。2.根据权利要求1所述的总咖啡酸酯提取物，其特征在于:盏乙素含量低于0.1% w/Wo3.根据权利要求1或2所述的总咖啡酸酯提取物，其特征在于:所述咖啡酸酯类化合物包括1，3- 二咖啡酰奎宁酸、3，4- 二咖啡酰奎宁酸、3，5- 二咖啡酰奎宁酸、4，5—二咖啡酰奎宁酸、3，4，5- 二咖啡酰奎宁酸、飞蓬酯乙。4.根据权利要求3所述的总咖啡酸酯提取物，其特征在于:按干燥品计算，所述提取物中，各咖啡酸酯类化合物的含量分别为:1，3- 二咖啡酰奎宁酸为0.4-1.5% w/w，优选为0.5-1.0% w/w ;3，4-二咖啡酰奎宁酸为 2.5 ?5.8% w/w，优选为 3.0-4.0% w/w ;3，5-二咖啡酰奎宁酸为7.0?14.0% w/w，优选为10.0-11.0% w/w ;4，5—二咖啡酰奎宁酸为1.5?3.0% w/w，优选为1.7-2.5 % w/w ;3，4，5- 二咖啡酰奎宁酸为5.0?10.5% w/w，优选为6.5-8.0% w/w ;飞蓬醋乙为 2.0 ?3.8% w/w，优选为 2.5-3.0% w/w。5.权利要求1所述总咖啡酸酯提取物的制备方法，其特征在于:它包括如下操作步骤: (1)取干燥的多舌飞蓬全草，以水或乙醇水溶液提取，优选为50?95%v/v乙醇； (2)收集醇提液，上大孔吸附树脂柱，依次用水、30-40%v/v>50-60% v/v乙醇进行洗脱，收集50-60% v/v乙醇洗脱液，减压浓缩除去乙醇后，剩余溶液用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯萃取部位，回收溶剂，即得多舌飞蓬的总咖啡酸酯提取物。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于:步骤(2)中，依次用水、35-40%v/v、55-60% v/v乙醇洗脱，收集55-60% v/v乙醇洗脱液；优选地，依次用水、40% v/v,60% v/V乙醇洗脱，收集60% v/v乙醇洗脱液。7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于:所述大孔吸附树脂选自弱极性或非极性大孔吸附树脂；进一步地，所述大孔吸附树脂为D101、HPD100, HPD400或AB-8型大孔吸附树脂。8.权利要求1?4任意一项所述总咖啡酸酯提取物在制备抗心肌缺血的药物或保健品中的用途。9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于:所述药物或保健品是治疗或/和预防心肌梗死的药物或保健品；进一步地，所述药物或保健品是减少缺血性心肌梗死面积、抑制ST段下降或/和抑制血清CK-MB和LDH升高的药物或保健品。10.一种药物组合物，其特征在于:它是以权利要求1?4任意一项所述多舌飞蓬的总咖啡酸酯提取物为活性成分制备而成的制剂。
【专利摘要】本发明提供了一种多舌飞蓬的咖啡酸酯类提取物，按干燥品计算，该提取物中，咖啡酸酯类化合物的含量为60～90％w/w，进一步为80-90％w/w；灯盏乙素含量低于5％w/w，更进一步地，其含量低于1％w/w。本发明还提供了该提取物的制备方法和用途。本发明实际是提供了一种全新的多舌飞蓬提取物，该提取物与现有技术不同，主要是含有咖啡酸酯类化合物，灯盏乙素等黄酮类化合物含量较低，本发明研究发现，该提取物能够有效对抗心肌缺血，縮小缺血再灌注心肌梗死面积、抑制ST段壓低、減少血清CK-MB和LDH升高，可有效预防或治疗心肌梗死，为多舌飞蓬的进一步开发提供了可能。
【IPC分类】C07C67/48, A61K31/35, C07D493/08, C07C69/732, C07C67/58, A61K36/28, C07C67/56, A61K31/216, A61P9/10
【公开号】CN104892419
【申请号】CN201510240634
【发明人】张志锋, 张 浩, 罗培
【申请人】西南民族大学, 张志锋
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月13日
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