一种精胺类似物及其药用盐的制备方法和用图
一种精胺类似物及其药用盐的制备方法和用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，特别涉及一种精胺类似物及其药用盐的制备方法和用 途及其在预防和治疗全身性炎症反应和自身免疫紊乱相关疾病中的应用。
【背景技术】
[0002] 研究证实，细菌等病原体入侵机体后会产生大量内毒素（LPS)和细菌基因组 DNA (CpG DNA)。LPS和CpG DNA通过活化炎症反应细胞，诱导TNF- a、IL-I β和IL-6等炎 症介质大量释放，引发全身炎症反应。同时，近年研究显示LPS和CpGDNA对机体的持续刺 激与自身免疫紊乱相关疾病的发生发展有密切联系。LPS和CpGDNA通过与相应受体结合， 可导致炎症反应的持续和慢性演变，反复诱导生成炎症介质、免疫球蛋白和类风湿因子等， 诱发或加重自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎的症状。
[0003] 目前治疗全身性炎症反应和自身免疫紊乱相关疾病，仍然缺乏有效治疗药物，因 此，开发有效拮抗LPS的药物，对全身性炎症反应和自身免疫紊乱相关疾病的治疗或缓解 具有重要作用。
[0004] 一些天然精胺类似物具有一定的预防和治疗全身性炎症反应和自身免疫紊乱效 果。但由于该类化合物结构复杂，合成步骤多，产率低，难于大量生产。因此，对于精胺类似 物的研究筛选具有重大意义。
【发明内容】
[0005] 本发明针对上述不足，提供一种精胺类似物或其盐的制备方法，本发明还提供一 种精胺类似物或其药用盐以及含有它们的组合物在制备预防和治疗全身性炎性反应的应 用，使用这些精胺类似物和包含这些化合物的药物组合物，为全身性炎性和自身免疫紊乱 相关疾病的治疗提供了一些新的可选择的药物基础。
[0006] 本发明的技术方案是：
[0007] 提供一种精胺类似物或其药用盐，所述精胺类似物具有如下化学结构：
[0008]
[0009]
[0010] 其中，R1~R5为H或CH3以及其他活性基团，其中所述精胺类似物的药用盐为无氧 酸或含氧酸的无机酸或羧酸或羟基酸或磺酸或酸性氨基酸的有机酸。
[0011] 优选的精胺类似物为：
[0012] LJ LJ
LJ
[0013] 本发明的精胺类似物的药用盐为无氧酸或含氧酸的无机酸或羧酸或羟基酸或磺 酸或酸性氨基酸的有机酸。
[0014] 所述无氧酸为盐酸和氢溴酸中的任意一种。
[0015] 所述含氧酸为硫酸、磷酸和硝酸中的任意一种。
[0016] 所述无机酸为盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸中的任意一种。
[0017] 所述羧酸为醋酸、丙酸、丁酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、己二酸、苯甲酸、苯丙酸、肉桂 酸、硬脂酸、三氟醋酸、马来酸、富马酸、烟酸和棕榈酸中的任意一种。
[0018] 所述羟基酸为苹果酸、柠檬酸、乳酸、羟基丁酸、乳糖酸、酒石酸、扁桃酸、葡萄糖 酸、葡萄糖醛酸和抗坏血酸中的任意一种。
[0019] 所述磺酸为甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸和樟脑磺酸中的任意一种。
[0020] 所述酸性氨基酸为谷氨酸和天冬氨酸中的任意一种。
[0021] 所述有机酸为醋酸、马来酸、琥珀酸、苹果酸、乳酸、酒石酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、 谷氨酸和天冬氨酸中的任意一种。
[0022] 所述的精胺类似物的盐中的酸广泛选自多种无机酸和/或有机酸，主要是从医药 上允许使用的各类酸中分别选取2~3个具有代表性的酸对制备精胺盐的共性问题进行说 明，包括从无机酸中的无氧酸中选取盐酸和氢溴酸，含氧酸中选取硫酸和磷酸，有机酸中的 羧酸中选取醋酸、马来酸和琥珀酸，羟基酸中选取苹果酸、乳酸和酒石酸，磺酸中选取甲磺 酸和对甲苯磺酸，酸性氨基酸中选取谷氨酸和天冬氨酸。虽然申请人的实验只提出了这四 种无机酸和十种有机酸，但是其他无机酸和/或有机酸（包括本发明已例举的和未例举的 酸）均是可以相同方式制备精胺类似物盐。
[0023] 优选的本发明的精胺类似物的盐为盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、醋酸盐。
[0024] 最优选的为盐酸盐、氢溴酸盐。
[0025] 本发明还提供含有精胺类似物及其盐的药物组合物，以及药物组合物在制备预防 和治疗全身性炎症反应和自身免疫紊乱药物中的应用。
[0026] 本发明的药物组合物可以制备成任何药用剂型，如可经胃肠道给药的剂型，如 以散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂等剂型给药；或非经胃肠道给药的剂 型，如注射给药，腔道给药，粘膜给药等方式给药。对成人而言，用药量以每公斤体重每天 0. 1~15mg为宜，用药方式可以为一天一次或多次。
[0027] 本发明所述的精胺类似物及其盐的药物组合物，包含精胺类似物及其盐作为活性 成分和药学上可接受的载体和/或稀释剂。
[0028] 本发明的药物组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充 剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。 [0029] 适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包 括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬 脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。
[0030] 可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活 性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。
[0031] 口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂， 或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含 有常规的添加剂，诸如助悬剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基 纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉 伯胶；非水性载体（它们可以包括食用油），例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性 酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需 要，可含有常规的香味剂或着色剂。
[0032] 对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体 和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载 体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉 剂、渗透压调节剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以 后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。
[0033] 本发明的药物组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载 体，所述药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐 酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素 C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋 酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、 麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及 其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性 剂、聚乙二醇、环糊精、β -环糊精、磷脂类材料等。
[0034] 本发明还提供精胺类似物及其盐的制备方法。
[0035] 本发明所述的精胺类似物结构如下
[0038] 其中，R1~R5为H或CH3以及其他活性基团，其中所述精胺类似物的药用盐为无氧 酸或含氧酸的无机酸或羧酸或羟基酸或磺酸或酸性氨基酸的有机酸。
[0039] 我们以Caldopentamine为主结构，以化合物3, 3' -亚氨基二丙酸作为起始原料， 通过2-3步反应，设计合成出链状化合物4,6,8,11，以及含环状结构的同系化合物13,15， 17,19,21，23。
[0040] 该类化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0041] 3,3' -亚氨基二丙酸与保护基团发生反应，得到氨基保护的3,3' -亚氨基二丙酸 化合物。
[0042] 上述保护的3,3' -亚氨基二丙酸化合物单保护的1，3-丙二胺及其链状和环状 的类似物和衍生物在缩合剂存在下发生缩合反应，得到多个或单个氨基保护的双酰胺化合 物。
[0043] 上述双酰胺化合物经去除氨基保护，得到目标化合物。
[0044] 上述化合物可与相应的有机酸或无机酸按比例反应得到其药用盐。
[0045] 本发明所述的精 胺类似物及其盐可以用于制备预防和治疗全身性炎性和自身免 疫紊乱相关疾病的治疗。
[0046] 申请人通过药理活性实验显示：
[0047] 本发明的精胺类似物与LPS的活性中心lipid A的结合能力强，;这些具有较强结 合能力的化合物在体外以剂量依赖的方式中和LPS ;这些具有较强结合能力的化合物以剂 量依赖的方式分别抑制LPS和CpG DNA诱导RAW264. 7细胞释放炎症介质。
[0048] 本发明使用精胺类似物及其盐的药物组合物，不同于现有的糖皮质激素、胰岛素、 抗炎症介质药物、抗凝药物、抗LPS多肽及lipid A单抗等药物；疗效好，能够通过同时拮抗 多个病原分子从而显著抑制其诱导的炎症反应，为全身性炎性和自身免疫紊乱相关疾病的 的治疗提供了更多的可选择的小分子化合物。
[0049] 本发明广泛选取多种无机酸和/或有机酸对制备精胺类似物及药学上可接受的 盐的共性问题进行说明，化学和药学领域的技术人员可以理解，使用同类的无机酸和/或 有机酸均可以相同的方式，通过化学领域熟知的方法制备精胺类似物药学上可接受的盐。 因此应当说明，用其他无机酸和/或有机酸替代本发明列举的无机酸和/或有机酸，均应属 于本发明的技术方案内容和专利保护范围，本领域技术人员在本说明的启示下对本发明实 施所作的任何变动均在本申请的权利要求范围之内。
[0050] LPS和CpG DNA是导致疾病发作的关键致病因子，药物对LPS和CpG DNA的拮抗作 用反映了其全身性炎性和自身免疫紊乱相关疾病的防治作用。 具体实施例
[0051 ] 下面结合具体实施例进一步说明本发明，但是并非限定本发明。
[0052] 实施例1精胺类似物4的合成
[0053]
LI
[0054] (1)化合物2的合成将16g化合物1溶于IOOmL纯水中，加入200mL二氧六环、 150mLlM碳酸钠水溶液和30mL三乙胺，混合物在冰浴下逐次加入26g二碳酸二叔丁酯（Boc 酸酐），反应逐渐升至室温，常温搅拌48小时。用饱和柠檬酸水溶液将混合物PH调至3， 并用乙酸乙酯萃取。分液，无水硫酸钠干燥有机相，过滤，旋干。粗产物在乙酸乙酯-己烷 (I : 1)中重结晶得到化合物2。
[0055] (2)化合物3的合成将2. 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烷中，加入5g二环己 基碳二亚胺（DCC)和0. 12g4-二甲氨基吡啶（DMAP)，加入4. 4g N-叔丁氧羰基-1，3-丙二 胺，常温氮气保护下搅拌反应24小时。过滤反应混合物，滤液用0. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠 水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物3。
[0056] (3)化合物4的合成将2. 87g化合物3溶于30mL无水二氯甲烷中，冰浴下滴加 5. 7g三氟乙酸，反应逐渐升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液 调至中性，分液，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物4。
[0057] 质谱（ESI_MS[M+H]+) :274. 2。
[0058] 实施例2 :精胺类似物有机酸盐的合成
[0059] 实验方法：将实施例1中得到精胺类似物溶于乙醇中，再滴入用乙醇溶解的相应 的有机酸，调节PH值到7,将乙醇蒸干，得到的固体用乙醇重结晶得到相对应的有机酸盐， 如苹果酸盐，乳酸盐，琥珀酸盐，甲磺酸盐等。
[0060] 实施例3 :精胺类似物无机酸盐的合成
[0061] 实验方法：将实施例1中得到的精胺类似物溶于乙醇中，再滴入用水稀释的相应 的无机酸，调节PH值到7,将乙醇蒸干，得到的固体用乙醇重结晶得到相对应的有机酸盐， 如盐酸盐,硫酸盐,磷酸盐,氢溴酸盐等。
[0062] 实施例4 :腈胺类似物6的合成
[0063]
[0064] 将2. 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烧中，加入5g二环己基碳二亚胺（DCC)和 0. 12g4-二甲氨基吡啶（DMP)，加入4. 7g2-(甲基氨基）丙基氨基甲酸叔丁酯，常温氮气保 护下搅拌反应48小时。过滤反应混合物，滤液用0. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯 化钠水溶液洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物5。
[0065] 将3g化合物3溶于30mL无水二氯甲烷中，冰浴下滴加5. 7g三氟乙酸，反应逐渐 升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液调至中性，分液，有机相 用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物6。质谱（ESI-MS[M+H] +) :302. 3。
[0066] 实施例5 :腈胺类似物8的合成
[0068] 将2. 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烧中，加入5g二环己基碳二亚胺（DCC)和 0. 12g4-二甲氨基吡啶（DMP)，加入4. 7g新制得的N-(3-氨基丙基）-N-甲基氨基甲酸叔 丁酯（由N-(3-氨基丙基）-N-甲基氨基甲酸叔丁酯盐酸盐碱化得到），常温氮气保护下搅 拌反应24小时。过滤反应混合物,滤液用0. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水 溶液洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物7。
[0069] 将3g化合物7溶于30mL无水二氯甲烷中，冰浴下滴加5. 7g三氟乙酸，反应逐渐 升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液调至中性，分液，有机相 用饱和食盐水洗漆，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物8。
[0070] 质谱（ESI-MS[M+H]+) :302. 3。
[0071] 实施例6 :腈胺类似物11的合成
[0072]
[0073] 将10. 2g N，N' -二甲基-1，3-丙二胺溶于150mL无水二氯甲烷中，在1小时内冰 水浴下滴加含有21. Sg二碳酸二叔丁酯（Boc酸酐）的无水二氯甲烷溶液。反应逐渐升至 室温，常温搅拌24小时。反应液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，有机相用10%乙酸水溶液调 至PH=3。水相用6N氢氧化钠水溶液调至PH=12,并用二氯甲烷萃取。分液，无水硫酸钠干 燥有机相，过滤，旋干，得到化合物9。
[0074] 将2. 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烷中，加入5g二环己基碳二亚胺（DCC)和 0. 12g4-二甲氨基吡啶（DMP)，加入5. 4g化合物9,常温氮气保护下搅拌反应48小时。过 滤反应混合物，滤液用〇. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗漆。无水硫 酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物10。
[0075] 将3. 15g化合物10溶于30mL无水二氯甲烷中，冰浴下滴加5. 7g三氟乙酸，反应 逐渐升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液调至中性，分液，有 机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物11。
[0076] 质谱（ESI_MS[M+H]+) :330. 3。
[0077] 实施例7 :腈胺类似物13的合成
[0078] Λ Λ η η
[0079] 将2· 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烷中，加入5g二环己基碳二亚胺（DCC)和 0. 12g4-二甲氨基吡啶（DMP)，加入5g4-叔丁氧羰基氨基哌啶，常温氮气保护下搅拌反应 48小时。过滤反应混合物,滤液用0. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗 涤。无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物12。
[0080] 将3g化合物12溶于30mL无水二氯甲烷中，冰浴下滴加5. 7g三氟乙酸，反应逐渐 升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液调至中性，分液，有机相 用饱和食盐水洗漆，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物13。
[0081] 质谱（ESI_MS[M+H]+) :326. 3。
[0082] 实施例8 :腈胺类似物15的合成
[0083]
[0084] 将2. 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烷中，加入5g二环己基碳二亚胺（DCC)和 0. 12g4-二甲氨基吡啶（DMP)，加入5. 4g4-N-叔丁氧羰基-4-N-甲氨基哌啶，常温氮气保 护下搅拌反应48小时。过滤反应混合物，滤液用0. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯 化钠水溶液洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物14。
[0085] 将3. 26g化合物3溶于30mL无水二氯甲烷中 ，冰浴下滴加5. 7g三氟乙酸，反应逐 渐升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液调至中性，分液，有机 相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物15。
[0086] 质谱（ESI_MS[M+H]+) :354. 3。
[0087] 实施例9 :腈胺类似物17的合成
[0088]
[0089] 将2. 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烷中，加入5g二环己基碳二亚胺（DCC)和 0. 12g4-二甲氨基吡啶（DMP)，加入5gl-叔丁氧羰基-4-甲氨基哌陡，常温氮气保护下搅 拌反应48小时。过滤反应混合物,滤液用0. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水 溶液洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物16。
[0090] 将3g化合物16溶于30mL无水二氯甲烷中，冰浴下滴加5. 7g三氟乙酸，反应逐渐 升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液调至中性，分液，有机相 用饱和食盐水洗漆，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物17。
[0091] 质谱（ESI-MS[M+H]+) :326. 3。
[0092] 实施例10 :腈胺类似物19的合成
[0093]
[0094] 将2. 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烷中，加入5g二环己基碳二亚胺（DCC)和 0. 12g4-二甲氨基吡啶（DMP)，加入2. 86g4-氨基-1-甲基哌啶，常温氮气保护下搅拌反应 48小时。过滤反应混合物,滤液用0. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗 涤。无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物18。
[0095] 将2. 3g化合物18溶于30mL无水二氯甲烷中，冰浴下滴加2. 9g三氟乙酸，反应逐 渐升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液调至中性，分液，有机 相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物19。
[0096] 质谱（ESI_MS[M+H]+) :382. 3。
[0097] 实施例11 :腈胺类似物21的合成
[0098]
y-\ i
[0099] 将2. 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烷中，加入5g二环己基碳二亚胺（DCC)和 0. 12g4-二甲氨基吡啶（DMP)，加入5. 3gl-叔丁氧羰基-4-甲氨基哌啶，常温氮气保护下 搅拌反应48小时。过滤反应混合物,滤液用0. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠 水溶液洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物20。
[0100] 将3. 27g化合物20溶于30mL无水二氯甲烷中，冰浴下滴加5. 7g三氟乙酸，反应 逐渐升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液调至中性，分液，有 机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物21。
[0101] 质谱（ESI-MS[M+H]+) :326. 3。
[0102] 实施例12 :腈胺类似物23的合成
[0103]
[0104] 将2. 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烷中，加入5g二环己基碳二亚胺（DCC)和 0.12g4-二甲氨基吡啶（DMAP)，加入3.2gl-甲基-4-(甲氨基）哌啶，常温氮气保护下搅拌 反应48小时。过滤反应混合物,滤液用0. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶 液洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物22。
[0105] 将2. 4g化合物22溶于30mL无水二氯甲烷中，冰浴下滴加2. 9g三氟乙酸，反应逐 渐升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液调至中性，分液，有机 相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物23。
[0106] 质谱（ESI-MS[M+H]+) :382. 3。
[0107] 实施例13 :化合物对LPS诱导RAW264. 7细胞释放TNF- α的影响
[0108] 实验方法：采用含有10% NCS(v/v)的DMEM培养液将RAW264.7细胞稀释至 I X 106/mL，加入96孔板（200 μ 1/孔），在37°C、体积分数为5 %的CO2条件下孵育4h贴 壁后；更换新鲜培养液，加入终浓度为100 μ g/ml的化合物，随即加入LPS (终浓度IOOng/ ml)，同时设不加任何刺激物的空白对照组（medium)，继续孵育4h ;取上清按照ELISA试剂 盒操作说明进行操作，检测TNF-α的浓度，结果以均值土标准差表示。
[0109] 实验结果：化合物可以抑制LPS诱导的TNF-α释放，与对照组相比具有显著差异 (p〈0. 01)。TNF- α的大量或持续释放对全身性炎症反应和自身免疫紊乱的病理损伤具有重 要意义，因此抑制TNF-α的释放可以有效发挥对全身性炎症反应和自身免疫紊乱疾病的 防治作用，结果如表1所示。
[0110] 表1、化合物抑制LPS诱导RAW264. 7细胞释放炎症介质
[0111]
[0112] 实施例14精胺类似物的盐抑制LPS诱导RAW264. 7细胞释放炎症介质实验：
[0113] 实验方法：采用DMEM培养液将RAW264. 7细胞稀释至lX106/ml，加入96孔板 (200 μ 1/孔），在37°C、体积分数为5 %的CO2条件下孵育4小时，贴壁后更换细胞上清为 200 μ 1无血清的DMEM培养液，然后加入LPS (终浓度100ng/ml)，同时分别加入终浓度为 100 μ M的各种化合物的盐（包括盐酸盐，氢溴酸盐，硫酸盐，磷酸盐，醋酸盐，苹果酸盐，乳 酸盐），空白对照组（Medium)不加 LPS，继续孵育4小时，取上清，按照ELISA试剂盒操作说 明检测TNF- α的浓度，实验结果见表2。
[0114] 表2、精胺类似物药用盐抑制LPS诱导RAW264. 7细胞释放炎症介质
[0115]
[0116]
[0117] 实验结果表明多数化合物的盐均能抑制LPS诱导RAW264. 7细胞释放炎症介质 TNF- α。
【主权项】
1. 一种精胺类似物及其药用盐，其特征在于：所述精胺类似物具有如下化学结构其中，R1~R5为H或CH3以及其他活性基团，其中所述精胺类似物的药用盐为无氧酸或 含氧酸的无机酸或羧酸或羟基酸或磺酸或酸性氨基酸的有机酸。2. 根据权利要求1所述的精胺类似物及其药用盐，其特征在于，所述精胺类似物为下 列化合物：3. 根据权利要求1或2所述的精胺类似物或其药用盐，其特征在于，其中所述无氧酸为 盐酸和氢溴酸中的任意一种。4. 根据权利要求1或2所述的精胺类似物或其药用盐，其特征在于：其中所述含氧酸 为硫酸、磷酸和硝酸中的任意一种。5. 根据权利要求1或2所述的精胺类似物或其药用盐，其特征在于：其中所述羧酸为 醋酸、丙酸、丁酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、己二酸、苯甲酸、苯丙酸、肉桂酸、硬脂酸、三氟醋 酸、马来酸、富马酸、烟酸和棕榈酸中的任意一种。6. 根据权利要求1或2所述的精胺类似物或其药用盐，其特征在于：其中所述羟基酸 为苹果酸、柠檬酸、乳酸、羟基丁酸、乳糖酸、酒石酸、扁桃酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸和抗坏 血酸中的任意一种。7. 根据权利要求1或2所述的精胺类似物或其药用盐，其特征在于：所述磺酸为甲磺 酸、苯磺酸、对甲苯磺酸和樟脑磺酸中的任意一种。8. 根据权利要求1或2所述的精胺类似物或其药用盐，其特征在于：所述酸性氨基酸 为谷氨酸和天冬氨酸中的任意一种。9. 一种药物组合物，包含权利要求1或2所述的精胺类似物或其药用盐。10. 权利要求1或2的精胺类似物或其药用盐以及含有它们的组合物在制备预防和治 疗全身性炎症反应和自身免疫紊乱相关疾病中的应用。
【专利摘要】本发明属于医药技术领域，涉及具有式(1)-(3)结构的精胺类似物和其药用盐，以及它们的制备方法和在预防和治疗全身性炎症反应和自身免疫紊乱相关疾病中的应用。
【IPC分类】C07C231/12, C07D211/58, A61K31/16, A61P29/00, C07C237/10, A61K31/4468, A61P37/02
【公开号】CN104892449
【申请号】CN201410080845
【发明人】王梅
【申请人】王梅
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2014年3月6日
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，特别涉及一种精胺类似物及其药用盐的制备方法和用 途及其在预防和治疗全身性炎症反应和自身免疫紊乱相关疾病中的应用。
【背景技术】
[0002] 研究证实，细菌等病原体入侵机体后会产生大量内毒素（LPS)和细菌基因组 DNA (CpG DNA)。LPS和CpG DNA通过活化炎症反应细胞，诱导TNF- a、IL-I β和IL-6等炎 症介质大量释放，引发全身炎症反应。同时，近年研究显示LPS和CpGDNA对机体的持续刺 激与自身免疫紊乱相关疾病的发生发展有密切联系。LPS和CpGDNA通过与相应受体结合， 可导致炎症反应的持续和慢性演变，反复诱导生成炎症介质、免疫球蛋白和类风湿因子等， 诱发或加重自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎的症状。
[0003] 目前治疗全身性炎症反应和自身免疫紊乱相关疾病，仍然缺乏有效治疗药物，因 此，开发有效拮抗LPS的药物，对全身性炎症反应和自身免疫紊乱相关疾病的治疗或缓解 具有重要作用。
[0004] 一些天然精胺类似物具有一定的预防和治疗全身性炎症反应和自身免疫紊乱效 果。但由于该类化合物结构复杂，合成步骤多，产率低，难于大量生产。因此，对于精胺类似 物的研究筛选具有重大意义。
【发明内容】
[0005] 本发明针对上述不足，提供一种精胺类似物或其盐的制备方法，本发明还提供一 种精胺类似物或其药用盐以及含有它们的组合物在制备预防和治疗全身性炎性反应的应 用，使用这些精胺类似物和包含这些化合物的药物组合物，为全身性炎性和自身免疫紊乱 相关疾病的治疗提供了一些新的可选择的药物基础。
[0006] 本发明的技术方案是：
[0007] 提供一种精胺类似物或其药用盐，所述精胺类似物具有如下化学结构：
[0008]
[0009]
[0010] 其中，R1~R5为H或CH3以及其他活性基团，其中所述精胺类似物的药用盐为无氧 酸或含氧酸的无机酸或羧酸或羟基酸或磺酸或酸性氨基酸的有机酸。
[0011] 优选的精胺类似物为：
[0012] LJ LJ
LJ
[0013] 本发明的精胺类似物的药用盐为无氧酸或含氧酸的无机酸或羧酸或羟基酸或磺 酸或酸性氨基酸的有机酸。
[0014] 所述无氧酸为盐酸和氢溴酸中的任意一种。
[0015] 所述含氧酸为硫酸、磷酸和硝酸中的任意一种。
[0016] 所述无机酸为盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸中的任意一种。
[0017] 所述羧酸为醋酸、丙酸、丁酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、己二酸、苯甲酸、苯丙酸、肉桂 酸、硬脂酸、三氟醋酸、马来酸、富马酸、烟酸和棕榈酸中的任意一种。
[0018] 所述羟基酸为苹果酸、柠檬酸、乳酸、羟基丁酸、乳糖酸、酒石酸、扁桃酸、葡萄糖 酸、葡萄糖醛酸和抗坏血酸中的任意一种。
[0019] 所述磺酸为甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸和樟脑磺酸中的任意一种。
[0020] 所述酸性氨基酸为谷氨酸和天冬氨酸中的任意一种。
[0021] 所述有机酸为醋酸、马来酸、琥珀酸、苹果酸、乳酸、酒石酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、 谷氨酸和天冬氨酸中的任意一种。
[0022] 所述的精胺类似物的盐中的酸广泛选自多种无机酸和/或有机酸，主要是从医药 上允许使用的各类酸中分别选取2~3个具有代表性的酸对制备精胺盐的共性问题进行说 明，包括从无机酸中的无氧酸中选取盐酸和氢溴酸，含氧酸中选取硫酸和磷酸，有机酸中的 羧酸中选取醋酸、马来酸和琥珀酸，羟基酸中选取苹果酸、乳酸和酒石酸，磺酸中选取甲磺 酸和对甲苯磺酸，酸性氨基酸中选取谷氨酸和天冬氨酸。虽然申请人的实验只提出了这四 种无机酸和十种有机酸，但是其他无机酸和/或有机酸（包括本发明已例举的和未例举的 酸）均是可以相同方式制备精胺类似物盐。
[0023] 优选的本发明的精胺类似物的盐为盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、醋酸盐。
[0024] 最优选的为盐酸盐、氢溴酸盐。
[0025] 本发明还提供含有精胺类似物及其盐的药物组合物，以及药物组合物在制备预防 和治疗全身性炎症反应和自身免疫紊乱药物中的应用。
[0026] 本发明的药物组合物可以制备成任何药用剂型，如可经胃肠道给药的剂型，如 以散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂等剂型给药；或非经胃肠道给药的剂 型，如注射给药，腔道给药，粘膜给药等方式给药。对成人而言，用药量以每公斤体重每天 0. 1~15mg为宜，用药方式可以为一天一次或多次。
[0027] 本发明所述的精胺类似物及其盐的药物组合物，包含精胺类似物及其盐作为活性 成分和药学上可接受的载体和/或稀释剂。
[0028] 本发明的药物组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充 剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。 [0029] 适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包 括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬 脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。
[0030] 可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活 性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。
[0031] 口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂， 或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含 有常规的添加剂，诸如助悬剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基 纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉 伯胶；非水性载体（它们可以包括食用油），例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性 酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需 要，可含有常规的香味剂或着色剂。
[0032] 对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体 和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载 体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉 剂、渗透压调节剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以 后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。
[0033] 本发明的药物组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载 体，所述药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐 酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素 C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋 酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、 麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及 其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性 剂、聚乙二醇、环糊精、β -环糊精、磷脂类材料等。
[0034] 本发明还提供精胺类似物及其盐的制备方法。
[0035] 本发明所述的精胺类似物结构如下
[0038] 其中，R1~R5为H或CH3以及其他活性基团，其中所述精胺类似物的药用盐为无氧 酸或含氧酸的无机酸或羧酸或羟基酸或磺酸或酸性氨基酸的有机酸。
[0039] 我们以Caldopentamine为主结构，以化合物3, 3' -亚氨基二丙酸作为起始原料， 通过2-3步反应，设计合成出链状化合物4,6,8,11，以及含环状结构的同系化合物13,15， 17,19,21，23。
[0040] 该类化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0041] 3,3' -亚氨基二丙酸与保护基团发生反应，得到氨基保护的3,3' -亚氨基二丙酸 化合物。
[0042] 上述保护的3,3' -亚氨基二丙酸化合物单保护的1，3-丙二胺及其链状和环状 的类似物和衍生物在缩合剂存在下发生缩合反应，得到多个或单个氨基保护的双酰胺化合 物。
[0043] 上述双酰胺化合物经去除氨基保护，得到目标化合物。
[0044] 上述化合物可与相应的有机酸或无机酸按比例反应得到其药用盐。
[0045] 本发明所述的精 胺类似物及其盐可以用于制备预防和治疗全身性炎性和自身免 疫紊乱相关疾病的治疗。
[0046] 申请人通过药理活性实验显示：
[0047] 本发明的精胺类似物与LPS的活性中心lipid A的结合能力强，;这些具有较强结 合能力的化合物在体外以剂量依赖的方式中和LPS ;这些具有较强结合能力的化合物以剂 量依赖的方式分别抑制LPS和CpG DNA诱导RAW264. 7细胞释放炎症介质。
[0048] 本发明使用精胺类似物及其盐的药物组合物，不同于现有的糖皮质激素、胰岛素、 抗炎症介质药物、抗凝药物、抗LPS多肽及lipid A单抗等药物；疗效好，能够通过同时拮抗 多个病原分子从而显著抑制其诱导的炎症反应，为全身性炎性和自身免疫紊乱相关疾病的 的治疗提供了更多的可选择的小分子化合物。
[0049] 本发明广泛选取多种无机酸和/或有机酸对制备精胺类似物及药学上可接受的 盐的共性问题进行说明，化学和药学领域的技术人员可以理解，使用同类的无机酸和/或 有机酸均可以相同的方式，通过化学领域熟知的方法制备精胺类似物药学上可接受的盐。 因此应当说明，用其他无机酸和/或有机酸替代本发明列举的无机酸和/或有机酸，均应属 于本发明的技术方案内容和专利保护范围，本领域技术人员在本说明的启示下对本发明实 施所作的任何变动均在本申请的权利要求范围之内。
[0050] LPS和CpG DNA是导致疾病发作的关键致病因子，药物对LPS和CpG DNA的拮抗作 用反映了其全身性炎性和自身免疫紊乱相关疾病的防治作用。 具体实施例
[0051 ] 下面结合具体实施例进一步说明本发明，但是并非限定本发明。
[0052] 实施例1精胺类似物4的合成
[0053]
LI
[0054] (1)化合物2的合成将16g化合物1溶于IOOmL纯水中，加入200mL二氧六环、 150mLlM碳酸钠水溶液和30mL三乙胺，混合物在冰浴下逐次加入26g二碳酸二叔丁酯（Boc 酸酐），反应逐渐升至室温，常温搅拌48小时。用饱和柠檬酸水溶液将混合物PH调至3， 并用乙酸乙酯萃取。分液，无水硫酸钠干燥有机相，过滤，旋干。粗产物在乙酸乙酯-己烷 (I : 1)中重结晶得到化合物2。
[0055] (2)化合物3的合成将2. 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烷中，加入5g二环己 基碳二亚胺（DCC)和0. 12g4-二甲氨基吡啶（DMAP)，加入4. 4g N-叔丁氧羰基-1，3-丙二 胺，常温氮气保护下搅拌反应24小时。过滤反应混合物，滤液用0. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠 水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物3。
[0056] (3)化合物4的合成将2. 87g化合物3溶于30mL无水二氯甲烷中，冰浴下滴加 5. 7g三氟乙酸，反应逐渐升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液 调至中性，分液，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物4。
[0057] 质谱（ESI_MS[M+H]+) :274. 2。
[0058] 实施例2 :精胺类似物有机酸盐的合成
[0059] 实验方法：将实施例1中得到精胺类似物溶于乙醇中，再滴入用乙醇溶解的相应 的有机酸，调节PH值到7,将乙醇蒸干，得到的固体用乙醇重结晶得到相对应的有机酸盐， 如苹果酸盐，乳酸盐，琥珀酸盐，甲磺酸盐等。
[0060] 实施例3 :精胺类似物无机酸盐的合成
[0061] 实验方法：将实施例1中得到的精胺类似物溶于乙醇中，再滴入用水稀释的相应 的无机酸，调节PH值到7,将乙醇蒸干，得到的固体用乙醇重结晶得到相对应的有机酸盐， 如盐酸盐,硫酸盐,磷酸盐,氢溴酸盐等。
[0062] 实施例4 :腈胺类似物6的合成
[0063]
[0064] 将2. 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烧中，加入5g二环己基碳二亚胺（DCC)和 0. 12g4-二甲氨基吡啶（DMP)，加入4. 7g2-(甲基氨基）丙基氨基甲酸叔丁酯，常温氮气保 护下搅拌反应48小时。过滤反应混合物，滤液用0. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯 化钠水溶液洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物5。
[0065] 将3g化合物3溶于30mL无水二氯甲烷中，冰浴下滴加5. 7g三氟乙酸，反应逐渐 升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液调至中性，分液，有机相 用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物6。质谱（ESI-MS[M+H] +) :302. 3。
[0066] 实施例5 :腈胺类似物8的合成
[0068] 将2. 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烧中，加入5g二环己基碳二亚胺（DCC)和 0. 12g4-二甲氨基吡啶（DMP)，加入4. 7g新制得的N-(3-氨基丙基）-N-甲基氨基甲酸叔 丁酯（由N-(3-氨基丙基）-N-甲基氨基甲酸叔丁酯盐酸盐碱化得到），常温氮气保护下搅 拌反应24小时。过滤反应混合物,滤液用0. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水 溶液洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物7。
[0069] 将3g化合物7溶于30mL无水二氯甲烷中，冰浴下滴加5. 7g三氟乙酸，反应逐渐 升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液调至中性，分液，有机相 用饱和食盐水洗漆，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物8。
[0070] 质谱（ESI-MS[M+H]+) :302. 3。
[0071] 实施例6 :腈胺类似物11的合成
[0072]
[0073] 将10. 2g N，N' -二甲基-1，3-丙二胺溶于150mL无水二氯甲烷中，在1小时内冰 水浴下滴加含有21. Sg二碳酸二叔丁酯（Boc酸酐）的无水二氯甲烷溶液。反应逐渐升至 室温，常温搅拌24小时。反应液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，有机相用10%乙酸水溶液调 至PH=3。水相用6N氢氧化钠水溶液调至PH=12,并用二氯甲烷萃取。分液，无水硫酸钠干 燥有机相，过滤，旋干，得到化合物9。
[0074] 将2. 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烷中，加入5g二环己基碳二亚胺（DCC)和 0. 12g4-二甲氨基吡啶（DMP)，加入5. 4g化合物9,常温氮气保护下搅拌反应48小时。过 滤反应混合物，滤液用〇. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗漆。无水硫 酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物10。
[0075] 将3. 15g化合物10溶于30mL无水二氯甲烷中，冰浴下滴加5. 7g三氟乙酸，反应 逐渐升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液调至中性，分液，有 机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物11。
[0076] 质谱（ESI_MS[M+H]+) :330. 3。
[0077] 实施例7 :腈胺类似物13的合成
[0078] Λ Λ η η
[0079] 将2· 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烷中，加入5g二环己基碳二亚胺（DCC)和 0. 12g4-二甲氨基吡啶（DMP)，加入5g4-叔丁氧羰基氨基哌啶，常温氮气保护下搅拌反应 48小时。过滤反应混合物,滤液用0. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗 涤。无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物12。
[0080] 将3g化合物12溶于30mL无水二氯甲烷中，冰浴下滴加5. 7g三氟乙酸，反应逐渐 升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液调至中性，分液，有机相 用饱和食盐水洗漆，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物13。
[0081] 质谱（ESI_MS[M+H]+) :326. 3。
[0082] 实施例8 :腈胺类似物15的合成
[0083]
[0084] 将2. 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烷中，加入5g二环己基碳二亚胺（DCC)和 0. 12g4-二甲氨基吡啶（DMP)，加入5. 4g4-N-叔丁氧羰基-4-N-甲氨基哌啶，常温氮气保 护下搅拌反应48小时。过滤反应混合物，滤液用0. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯 化钠水溶液洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物14。
[0085] 将3. 26g化合物3溶于30mL无水二氯甲烷中 ，冰浴下滴加5. 7g三氟乙酸，反应逐 渐升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液调至中性，分液，有机 相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物15。
[0086] 质谱（ESI_MS[M+H]+) :354. 3。
[0087] 实施例9 :腈胺类似物17的合成
[0088]
[0089] 将2. 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烷中，加入5g二环己基碳二亚胺（DCC)和 0. 12g4-二甲氨基吡啶（DMP)，加入5gl-叔丁氧羰基-4-甲氨基哌陡，常温氮气保护下搅 拌反应48小时。过滤反应混合物,滤液用0. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水 溶液洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物16。
[0090] 将3g化合物16溶于30mL无水二氯甲烷中，冰浴下滴加5. 7g三氟乙酸，反应逐渐 升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液调至中性，分液，有机相 用饱和食盐水洗漆，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物17。
[0091] 质谱（ESI-MS[M+H]+) :326. 3。
[0092] 实施例10 :腈胺类似物19的合成
[0093]
[0094] 将2. 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烷中，加入5g二环己基碳二亚胺（DCC)和 0. 12g4-二甲氨基吡啶（DMP)，加入2. 86g4-氨基-1-甲基哌啶，常温氮气保护下搅拌反应 48小时。过滤反应混合物,滤液用0. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗 涤。无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物18。
[0095] 将2. 3g化合物18溶于30mL无水二氯甲烷中，冰浴下滴加2. 9g三氟乙酸，反应逐 渐升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液调至中性，分液，有机 相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物19。
[0096] 质谱（ESI_MS[M+H]+) :382. 3。
[0097] 实施例11 :腈胺类似物21的合成
[0098]
y-\ i
[0099] 将2. 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烷中，加入5g二环己基碳二亚胺（DCC)和 0. 12g4-二甲氨基吡啶（DMP)，加入5. 3gl-叔丁氧羰基-4-甲氨基哌啶，常温氮气保护下 搅拌反应48小时。过滤反应混合物,滤液用0. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠 水溶液洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物20。
[0100] 将3. 27g化合物20溶于30mL无水二氯甲烷中，冰浴下滴加5. 7g三氟乙酸，反应 逐渐升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液调至中性，分液，有 机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物21。
[0101] 质谱（ESI-MS[M+H]+) :326. 3。
[0102] 实施例12 :腈胺类似物23的合成
[0103]
[0104] 将2. 5g化合物2溶于20mL无水二氯甲烷中，加入5g二环己基碳二亚胺（DCC)和 0.12g4-二甲氨基吡啶（DMAP)，加入3.2gl-甲基-4-(甲氨基）哌啶，常温氮气保护下搅拌 反应48小时。过滤反应混合物,滤液用0. 5M盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶 液洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。柱层析分离得到化合物22。
[0105] 将2. 4g化合物22溶于30mL无水二氯甲烷中，冰浴下滴加2. 9g三氟乙酸，反应逐 渐升至室温，常温搅拌5小时，旋干，加入二氯甲烷，用碳酸钾水溶液调至中性，分液，有机 相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得化合物23。
[0106] 质谱（ESI-MS[M+H]+) :382. 3。
[0107] 实施例13 :化合物对LPS诱导RAW264. 7细胞释放TNF- α的影响
[0108] 实验方法：采用含有10% NCS(v/v)的DMEM培养液将RAW264.7细胞稀释至 I X 106/mL，加入96孔板（200 μ 1/孔），在37°C、体积分数为5 %的CO2条件下孵育4h贴 壁后；更换新鲜培养液，加入终浓度为100 μ g/ml的化合物，随即加入LPS (终浓度IOOng/ ml)，同时设不加任何刺激物的空白对照组（medium)，继续孵育4h ;取上清按照ELISA试剂 盒操作说明进行操作，检测TNF-α的浓度，结果以均值土标准差表示。
[0109] 实验结果：化合物可以抑制LPS诱导的TNF-α释放，与对照组相比具有显著差异 (p〈0. 01)。TNF- α的大量或持续释放对全身性炎症反应和自身免疫紊乱的病理损伤具有重 要意义，因此抑制TNF-α的释放可以有效发挥对全身性炎症反应和自身免疫紊乱疾病的 防治作用，结果如表1所示。
[0110] 表1、化合物抑制LPS诱导RAW264. 7细胞释放炎症介质
[0111]
[0112] 实施例14精胺类似物的盐抑制LPS诱导RAW264. 7细胞释放炎症介质实验：
[0113] 实验方法：采用DMEM培养液将RAW264. 7细胞稀释至lX106/ml，加入96孔板 (200 μ 1/孔），在37°C、体积分数为5 %的CO2条件下孵育4小时，贴壁后更换细胞上清为 200 μ 1无血清的DMEM培养液，然后加入LPS (终浓度100ng/ml)，同时分别加入终浓度为 100 μ M的各种化合物的盐（包括盐酸盐，氢溴酸盐，硫酸盐，磷酸盐，醋酸盐，苹果酸盐，乳 酸盐），空白对照组（Medium)不加 LPS，继续孵育4小时，取上清，按照ELISA试剂盒操作说 明检测TNF- α的浓度，实验结果见表2。
[0114] 表2、精胺类似物药用盐抑制LPS诱导RAW264. 7细胞释放炎症介质
[0115]
[0116]
[0117] 实验结果表明多数化合物的盐均能抑制LPS诱导RAW264. 7细胞释放炎症介质 TNF- α。
【主权项】
1. 一种精胺类似物及其药用盐，其特征在于：所述精胺类似物具有如下化学结构其中，R1~R5为H或CH3以及其他活性基团，其中所述精胺类似物的药用盐为无氧酸或 含氧酸的无机酸或羧酸或羟基酸或磺酸或酸性氨基酸的有机酸。2. 根据权利要求1所述的精胺类似物及其药用盐，其特征在于，所述精胺类似物为下 列化合物：3. 根据权利要求1或2所述的精胺类似物或其药用盐，其特征在于，其中所述无氧酸为 盐酸和氢溴酸中的任意一种。4. 根据权利要求1或2所述的精胺类似物或其药用盐，其特征在于：其中所述含氧酸 为硫酸、磷酸和硝酸中的任意一种。5. 根据权利要求1或2所述的精胺类似物或其药用盐，其特征在于：其中所述羧酸为 醋酸、丙酸、丁酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、己二酸、苯甲酸、苯丙酸、肉桂酸、硬脂酸、三氟醋 酸、马来酸、富马酸、烟酸和棕榈酸中的任意一种。6. 根据权利要求1或2所述的精胺类似物或其药用盐，其特征在于：其中所述羟基酸 为苹果酸、柠檬酸、乳酸、羟基丁酸、乳糖酸、酒石酸、扁桃酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸和抗坏 血酸中的任意一种。7. 根据权利要求1或2所述的精胺类似物或其药用盐，其特征在于：所述磺酸为甲磺 酸、苯磺酸、对甲苯磺酸和樟脑磺酸中的任意一种。8. 根据权利要求1或2所述的精胺类似物或其药用盐，其特征在于：所述酸性氨基酸 为谷氨酸和天冬氨酸中的任意一种。9. 一种药物组合物，包含权利要求1或2所述的精胺类似物或其药用盐。10. 权利要求1或2的精胺类似物或其药用盐以及含有它们的组合物在制备预防和治 疗全身性炎症反应和自身免疫紊乱相关疾病中的应用。
【专利摘要】本发明属于医药技术领域，涉及具有式(1)-(3)结构的精胺类似物和其药用盐，以及它们的制备方法和在预防和治疗全身性炎症反应和自身免疫紊乱相关疾病中的应用。
【IPC分类】C07C231/12, C07D211/58, A61K31/16, A61P29/00, C07C237/10, A61K31/4468, A61P37/02
【公开号】CN104892449
【申请号】CN201410080845
【发明人】王梅
【申请人】王梅
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2014年3月6日
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