一种含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物及其制备方法和应用
一种含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物及其制备方法和应用，属于生 物医药领域。
【背景技术】
[0002] 癌症是严重危害人类健康的主要疾病之一，攻克癌症是目前世界性的研宄课题。 据世界卫生组织（WHO)报告，全世界癌症患者每年增加1000万人，死亡约700万人，到 2020年，癌症患者每年将新增2000万人。目前，我国每年大约在超过160万人患癌症，130 万人死于癌症，癌症正成为仅次于心血管疾病的严重危害人类健康的"第二杀手"。尽管近 20年来，分子生物学的迅速发展，人们对癌症的认识开始由外及里、由细胞到分子水平的 深入，并且通过化学成的方法得到了不少的抗癌药物，但这些化学合成的抗癌药大多数对 人体的正常细胞产生较严重的毒副作用。如何避免传统抗癌药物的毒副作用，从而获得更 安全的抗癌新药物，成为了医药工作者研宄的新方向。
[0003] 随着蛋白质组学和基因组学等学科的发展，人们对于药物在体内作用机制的认识 逐渐深入，现代新药研宄已进入合理药物设计时代，许多选择性作用于特殊靶点的药物也 不断被发现。但对于某些复杂疾病如癌症、高血压、糖尿病、病毒感染及神经系统疾病等，单 一靶点的药物通常很难达到预期治疗效果甚至会出现不良反应，而将几种不同单一靶点药 物联用或选择使用作用于多个分子靶标的"多靶点"药物治疗复杂疾病时则会有较佳疗效。 近年来，FDA先后批准了多个多靶点药物上市，如2005年和2006年分别批准了索拉非尼和 达沙替尼，2007年批准了苏尼替尼和拉帕替尼等。
[0004] 索拉菲尼（Sorafenib)，商品名Nexavar多吉美，是一种种口服多激酶抑制剂。它 具有双重抗肿瘤作用，一方面抑制Raf/MEK/ERK信号传导通路直接抑制肿瘤的生长，另一 方面抑制几种与新生血管生成和肿瘤发展有关的酪氨酸激酶受体的活性，包括血管内皮生 长因子受体-2 (VEGFR-2)等，阻断肿瘤新生血管生成，间接抑制肿瘤细胞的生长，从而起到 抗肿瘤作用。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是提供一种含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物及其 制备方法和应用，本申请发明人在研宄索拉非尼及其与多种受体蛋白的结合模式的基础 上，设计了一系列含芳香胺结构的二芳基脲类化合物，该系列化合物与药物靶标具有良好 的匹配模式，对体外肿瘤细胞株具有良好的抑制活性。
[0006] 本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种含喹唑啉结构的二芳基脲类化合 物，包括具有通式I结构的化合物或其药学上可接受的盐，通式I结构如下所示：
[0007]
[0008] 其中，R1选自 H、C rC8的烷基、卤素 、-CF 3、-〇CF3、-N02、-CN、R20-、-S0 2NH2、-NHSO2R3 、-NR4R5、-CONR6R7、-COOR 8、R9CO-及上述基团的二取代或上述基团的三取代，R2、R3、R 4、R5、R6、 R7、馬和R 9分别为H或C「(：8的烃基，X选自0或S。
[0009] 在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
[0010] 进一步，所述 R1选自 H、C「C4的烷基、F、CI、CF 3、0CF3、CN、R20、NHS02R 3、NR4R5、 C0NR6R7、C00R8、R9CO及上述基团的二取代或上述基团的三取代，R 2、R3、R4、R5、R6、R 7、馬和R 9 分别为H或(^-(；的烷基。
[0011] 进一步，所述药学上可接受的盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸 盐、三氟甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、1-萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、乙酸盐、三氟乙酸 盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、苯甲酸 盐、水杨酸盐、苯乙酸盐、杏仁酸盐或上述盐的水溶物。
[0012] 进一步，所述含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物，选自下列化合物中的一种：
[0013] BOl N-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基}-Ν'-(4-氟-3-三氟甲基 苯基）脈；
[0014] Β02 N- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (3-三氟甲基苯基） 脲；
[0015] Β03 N-{3-[ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基}-Ν'-(4-三氟甲氧基苯 基）脈；
[0016] Β04 N- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (3-氯-4-氟苯基） 脲；
[0017] Β05 N-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基}-Ν'-(3, 4-二氟苯基） 脲；
[0018] Β06 N- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (4-氯苯基）脲；
[0019] Β07 N- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (4-氟苯基）脲；
[0020] Β08 N- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (4-甲基苯基）脲；
[0021] Β09 N- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基} -Ν' - (4-氟-3-三氟甲基 苯基）脈；
[0022] BlO N-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν'-(3-三氟甲基苯基） 脲；
[0023] Bll N-{3-[ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν'-(4-三氟甲氧基苯 基）脈；
[0024] Β12 N-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν'-(3-氯-4-氟苯基） 脲；
[0025] Β13 Ν-{3-[(6,7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν'-(3,4-二氟苯基） 脲；
[0026] B14 N-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν' -(4-氯苯基）脲；
[0027] B15 N-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν' -(4-氟苯基）脲；
[0028] Β16 Ν-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-N' -(4-甲基苯基）脲。
[0029] 本发明还提供一种上述含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物在制备治疗结肠癌、乳 腺癌和/或胃癌药物中的应用。
[0030] 本发明还提供一种药物组合物，含有上述含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物，以 及一种或多种药学或食品学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
[0031] 在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
[0032] 进一步，所述药物组合物为口服制剂或注射剂。
[0033] 进一步，所述口服制剂包括：片剂、胶囊、颗粒剂或口服溶液剂。
[0034] 进一步，所述注射剂包括：注射用水针、注射用粉针或小输液。
[0035] 进一步，所述药物组合物还包括药学或食品学上可接受的：辅料及填充剂、黏合 剂、崩解剂中的一种或几种，其中，所述辅料及填充剂包括乳糖、蔗糖、糊精、淀粉、预胶化淀 粉、甘露醇、山梨醇、磷酸氢钙、硫酸钙、碳酸钙、微晶纤维素中的一种或多种的混合物；所述 黏合剂包括淀粉、聚维酮、羧甲基纤维素钠、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、聚 乙二醇、药用乙醇、水中的一种或多种的混合物；所述崩解剂包括淀粉、交联聚维酮、交联 羧甲基纤维素钠、低取代羟甲基纤维素钠、羟丙纤维素、泡腾崩解剂中的一种或多种的混合 物。
[0036] 本发明还提供一种含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物的制备方法，包括：
[0037] 1)化合物1藜芦醛在硝酸中被硝化，得到6-硝基藜芦醛，即化合物2 ;
[0038] 2) 6-硝基藜芦醛与高锰酸钾反应，得到6-硝基藜芦酸，即化合物3 ;
[0039] 3) 6-硝基藜芦酸在钯碳催化下与氢气反应，得到6-氨基藜芦酸，即化合物4 ;
[0040] 4)6-氨基藜芦酸与醋酸甲脒在二甲基亚砜（DMSO)中反应，得到6, 7-二甲氧 基-4 (3Η)-喹唑啉酮，即化合物5 ;
[0041] 5) 6, 7-二甲氧基-4 (3Η)-喹唑啉酮经氯化亚砜氯代，得到6, 7-二甲氧基-4-氯喹 唑啉，即化合物6 ;[0042] 6)6, 7-二甲氧基-4-氯喹唑啉与间氨基苯酚或间氨基苯硫酚缩合，得到化合物 7 ；
[0043] 7)化合物8在二氯乙烷中与三光气反应，得到化合物9 ;
[0044] 8)化合物7与化合物9在有机溶剂中反应，得到具有通式I结构的化合物，该化合 物与酸反应，得到通式I结构的化合物其药学上可接受的盐，具体反应如下所示：
[0045] 8
9
[0046] 其中，R1选自 H、C rC8的烷基、卤素 、-CF 3、-〇CF3、-N02、-CN、R20-、-S0 2NH2、-NHSO2R3 、-NR4R5、-CONR6R7、-COOR 8、R9CO-及上述基团的二取代或上述基团的三取代，R2、R3、R 4、R5、R6、 R7、馬和R 9分别为H或C「(：8的烃基，X选自0或S。
[0047] 本发明提供的含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物与现有技术不同之处在于：本发 明含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物含有所述通式I化合物或其药学上可以接受的盐具 有对多种肿瘤细胞株的抑制作用，可作为有效成分用于制备肿瘤方面的治疗药物。本发明 所述通式I化合物的活性是通过体外抗肿瘤模型、体内异种移植模型验证的。体外活性测 试所选用的肿瘤细胞株包括：人结肠癌细胞株HCT-15、人结肠癌细胞株HCT-116、人乳腺癌 细胞株MCF-7、人胃癌细胞株BGC-823等，但不限于上述肿瘤细胞株。体内活性测试所选用 模型是鼠黑色素瘤B16异种移植模型。本发明所述通式I化合物的机制研宄所选用的肿瘤 细胞株是人结肠癌细胞株HCT-116。本发明所述通式I化合物在相当宽的剂量范围内是有 效的。例如每天服用的剂量在Img-1000 mg/人范围内，分为一次或数次给药。实际服用本 发明通式I化合物的剂量可由医生根据有关情况确定。这些情况包括：被治疗者的身体状 态、给药途径、年龄、体重、对药物的个体反应、症状的严重程度等。
【具体实施方式】
[0048] 以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限 定本发明的范围。
[0049] 实施例1
[0050] 6-硝基藜芦醛（2)
[0051]
[0052] 将硝酸（100ml，I. 52mol)加入到带有机械搅拌桨的250ml三口圆底烧瓶中，在 20°C下分批加入藜芦醛（16.6g，0. lmol)，保持体系的温度在25°C以内。加毕后继续搅拌 0. 5h，TLC检测反应进程。反应结束后将反应液缓慢倒入400ml冰水中搅拌析晶，大量黄色 固体析出，抽滤得黄色固体，干燥后称重得粗品18g。
[0053] 粗品加入50 % (V/V)乙醇水重结晶，得产品⑵16. 0g，产率78. 2 %， m. p. 133-135?。
[0054] 6-硝基藜芦酸（3)
[0055]
[0056] 在三口瓶中加入500ml水、氢氧化钠（12g, 300.0 mmol)和化合物 2(33g, 156.3mmol)，搅拌，分批加入19.75g(125mmol)的高锰酸钾（控制温度20°C以下）， 可观察到溶液逐渐由红棕色变为黑色。反应7h后，抽滤，得墨绿色滤液。滤液加盐酸调PH 至7-8,有少量棕色浑浊物产生，双层滤纸抽滤，得黄色滤液。滤液加盐酸调节pH至1-2,大 量固体析出，抽滤，干燥得黄色粉末状晶体（3)29.4g，产率83.0%，m.p. 193-195°C。
[0057] 6-氨基藜芦酿（4?
[0058]
[0059] 在高压爸中加入化合物3 (lOg, 44. 02mmol)，加入200ml的工业甲醇，0· 5g钮碳。 封釜，氢气置换釜内空气2次。关闭排气阀，调节温度45. 0°C，转速300n/s，压力0. 4MPa进 行反应。2h后关闭进气阀，釜内压力无下降趋势，反应结束。打开冷却水，待体系温度降至 25°C后开釜，尽快吸出反应液，滤除钯碳，真空脱溶剂。待溶剂蒸出约85%时，大量固体析 出，抽滤，2ml工业甲醇淋洗滤饼。所得滤饼真空干燥，得黄色固体（4)7. 2g，收率83. 7%， m. P. 170-172。。。
[0060] 6, 7-二甲氧基-4 (3H)-喹唑啉酮（5)
[0061]
[0062] 将化合物4(5g，25. 38mmol)与醋酸甲脒（4g，38. 83mmol)加入到100mL三口瓶中， 加入5ml DMS0,搅拌下升温至140-170°C。体系由黑色溶液逐渐变为棕色浑浊液。4h后 降温至50°C，加入20ml水，大量固体析出，抽滤，得浅黄色固体，烘干，得产品（5) 5g，收率 95. 7%，m. P. 295-297°C。
[0063] 6, 7-二甲氧基-4-氯喹唑啉（6)
[0064]
[0065] 将制得的化合物5(1. 7g，8. 2mmol)和15ml二氯亚砜加入100mL的圆底烧瓶中， 缓慢的加入〇. 5ml的二甲基甲酰胺（DMF)，回流反应Ih后，取样，反应完全后，蒸干，加饱 和碳酸钠水溶液，调pH至8-9,抽滤，烘干得浅黄色固体粉末（6) I. 53g，产率82. 2 %，m. p. 180-182°C。
[0066] 3- (6, 7-二甲氧基喹唑啉-4-氧基）苯胺（7a)
[0067] 在100mL的圆底烧瓶中加入间氨基苯酷（0. 35g, 3. 2mmol)、叔丁醇钾 (0. 44g，3. 9mmol)和20ml DMF，25°C搅拌l_1.5h，溶液由暗绿色变为红棕色。加碳酸钾 (0. 31g，2. 2mmol)，IOmin后，加入用20mlDMF溶解的化合物6(0. 72g)，升温至85°C，反应 2. 5h后取样TLC，反应结束。加水50ml，乙酸乙酯（EA)萃取（100ml X 3)，合并有机相，饱和 氯化钠溶液洗两次后无水硫酸钠干燥。浓缩至蒸干，称重得晶体（7a)0.74g，产率77. 9%， m. P. 183-185°C，高效液相测定含量为 98. 45 %。1H-NMR (400MHz, DMS0-d6) δ 3. 97 (s, 3H, O-CH 3)，3· 98 (s, 3Η, O-CH3), 5· 28 (s, 2Η, -NH2), 6· 98 (dd, J = I. 6Hz, 9. 6Hz, 1Η, Ph-H-6), 7· 13 (d, J =7· 6Ηζ, 1Η, Ph-H-4)，7· 23 (d, J = I. 6Ηζ, 1Η, Ph-H-2)，7· 43 (t, J = 7· 8Ηζ, 1Η, Ph-H-5)，7· 5 5(s, 1Η, quinazolineH-5), 7. 63(s, 1Η, quinaz oline Η-8), 8. 56(s, 1Η, quinazoline Η-2). HRMS(AP-ESI)m/z:calcd for C16H15N3O3[Μ+Η]+298. 1192, found 298. 1199〇
[0068] 化合物（7b)是具有通式为（7)的化合物中的一个，3-(6, 7-二甲氧基 喹唑啉-4-巯基）苯胺（7b)合成以间氨基苯硫酚为原料，方法与上实施例类 似。实验结果为：产率74. 0 %，m. p. 172-175 °C，高效液相测定含量为97. 5 %。 1H-匪R (400MHz，DMS0-d6) δ 3. 97 (s，3H，O-CH3)，3. 98 (s，3H，O-CH3)，5. 33 (s，2H，-NH2)，6 ,68(dd, J = I. 6Hz, 9. 6Hz, 1H, Ph-H-6), 6. 73(d, J = 7. 6Hz, 1H, Ph-H-4), 6. 80 (d, J = I. 6Hz, 1H, Ph-H-2), 7. 13 (t, J = 7. 8Hz, 1H, Ph-H-5), 7. 31 (s, 1H, quinazolineH-5), 7. 33 (s ,1H, quinazoline H-8), 8. 70 (s, 1H, quinazoline H_2) 〇 HRMS(AP_ESI)m/z:calcd for C16 H15N3O2S [M+H]+314. 0963, found314. 0958。
[0069] 目标化合物的合成
[0070] N-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基}-Ν'-(4-氟-3-三氟甲基苯 基）脲（BOl)
[0071]
[0072] 将4-氟-3-三氟甲基苯胺（8,0. 21g，1.2mmol )溶解于IOml二氯乙烷中，冰浴 下搅拌，降温至〇_5°C。低温下缓慢滴加 BTC(三光气，0. 18g，0. 6mmol)的IOml二氯乙 烷溶液，体系温度稍升，大量白色固体析出，保持体系温度在〇_5°C至滴加结束。滴加 结束0. 5h后撤去冰浴，25°C搅拌0. 5h后升温至回流反应。回流过程中大量酸性气体溢 出。回流反应8h后蒸除溶剂，得淡黄色油状液体。加入二氯甲烷IOml将淡黄色油状 液体溶解，冰浴搅拌下滴加7a(0. 3g，1.0 mmol)的IOml二氯甲烷溶液，滴加完毕后升至 25°C反应。反应2h后大量固体析出，抽滤，滤饼用大量二氯甲烷洗涤，得最终产品BOl为 白色固体，〇· 33g，含量 97. 8 %，收率 65. 1 %，m. P. 205-208 °C。1H-NMR (400MHz, DMS0-d6) δ 3. 99 (s, 3H, quinazoline-〇CH3-6), 4. 00 (s, 3H, quinazoline-〇CH3-7), 6. 94 (d, J = 7. 8Hz, 1H, Ph-H-6)，7. 27 (d, J = 7. 8Hz, 1H, Ph-H-4)，7. 37-7. 46 (m, 3H, Ph-H-5, Ph' -H-5and quinazoline H-5), 7. 57-7. 58 (m, 2H, Ph-H-2and quinazoline H-8), 7. 60-7. 64 (m, 1H, Ph? -H-2)，7. 99 (dd, J = 2. 5, 6. 4Hz, Ph' -H-6)，8. 56 (s, 1H, quinazoline H-2)，9. 01 (s, 1H, -NH CS-), 9. 10 (s, 1H, -NHCS-). HRMS (AP-ESI) m/z: calcd for C24H18F4N4O4 [M+H] +503. 1342, found 503. 1345.
[0073] 化合物（BOl)是具有通式为（I )的化合物中的一个，其他化合物（B02-B16)的 合成方法同上实施例。实验结果如下表所示。
[0074] 表 1
[0075]
[0076] 表2化合物B02到B16的结构表征数据
[0077]
[0078]
[0079]
[0080] 实施例2
[0081] 片剂 100片 BOl 1 0.0 g 乳糖 12 Og 预胶化淀粉 2. 5g 微晶纤维素 2 5g 羧曱基纤维素 0. 8g 10%聚维酮溶液 2g 硬脂酸镁 0. 6g 滑石粉 0.8g
[0082] 制备工艺：将实施例1制备的活性成分BOl和辅料预先粉碎后过100目筛，称取主 药加辅料乳糖、预胶化淀粉、羧甲基纤维素钠和微晶纤维素充分混合，过60目筛三次，加入 质量浓度10%的聚维酮溶液，混合，制软材，过20目筛，制得湿粒，与50-60°C干燥后，加硬 脂酸镁和滑石粉预先过筛，充分混合，检测，压片。
[0083] 实施例3
[0084] 胶嚢剂 100粒 B04 15. Og 二氧化硅 I. 8g 硬脂酸镁 0. 8g
[0085] 制备工艺：将实施例1制备的活性成分B04和辅料预先粉碎后过100目筛，加辅料 二氧化硅和硬脂酸镁，充分混合，检测，灌装与4号胶囊。
[0086] 实施例4
[0087] 口崩片 100片 BO7 5. Og 甘露醇 18. Og 微晶纤维素 18. Og 羧曱基纤维素钠 1.0 g 硬脂酸4吴 q 21 g 二氧化硅 〇. 〇84g
[0088] 制备工艺：将实施例1制备的活性成分B07和辅料预先粉碎后过100目筛，充分混 合，采用辊压机压饼，再用整粒机过18目筛，最后加入硬脂酸镁，充分混合，检测，压片。
[0089] 实施例5
[0090] 颗粒剂 100袋 B08 30.0 g
[0091] 乳糖 55. Og 甘露醇 14. Og 阿斯巴甜 0. 05g 香精 〇. 〇5g 幾丙基纤维素 0. 5g
[0092] 制备工艺：将实施例1制备的活性成分B08和辅料预先粉碎后过100目筛，充分混 合，再加入黏合剂制得软材，14目筛制粒，55°C干燥，12目筛整粒，检测，包装。
[0093] 实施例6
[0094] 规格 小容量注射液 lrag/ml BI 3 50.0 mg 嶙酸二氢枘 10.0 mg 狩檬酸 30.0 mg 氯化納 9G. Omg 注射用水 50.0 ml
[0095] 制备工艺：取注射用水50. 0ml，称取处方量的磷酸二氢钠、柠檬酸和氯化钠搅拌 使其溶解，加入实施例1制备的主药B13,搅拌溶解。用0. lmol/L的盐酸或氢氧化钠调pH 为4. 0-7. 0,加入占主药质量0. 1 %的活性炭吸附20min。先用0. 45 μ m的滤膜滤过，再用 0. 22 ym的滤膜精滤。按每瓶Iml灌装，105°C高温灭菌30min，即得注射液。
[0096] 实施例7
[0097] 冻干剂 B09 5. Og
[0098] 波洛沙姆 2. Og 氢氧化钠 0. 3g 构橡酸 1. 48 g 甘露醇 40.0 g 乳糖 30.0 g 注射用水 150.0 ml
[0099] 制备工艺：取注射用水100. 0ml，加入实施例1制备的主药B09、甘露醇、乳糖和波 洛沙姆搅拌溶解。用lmol/L的枸橼酸调pH为7. 0-9. 0,补加水至150ml。加入0. 5g的活 性炭，在30°C搅拌30min，脱炭。采用微孔滤膜过滤除菌，滤液按每支Iml分装，预冻2h后， 冷冻下减压干燥12h，样品温度至25°C后再干燥5h，制得白色疏松块状物，封口即得。
[0100] 实施例8
[0101] 小输液 B12 25. Omg 三羟曱基氨基曱烷20.0 g 低分子右旋糖苷 500.0 g EDTA-2Na 15 Og 碳酸氣納 I 2g 注射用水 5000.0 ml
[0102] 称取注射用水2000.0 ml，加入实施例1制备的主药B12、三羟甲基氨基甲烷、低分 子右旋糖苷和EDTA-2Na搅拌溶解。用碳酸氢钠调pH为7. 0-9. 0,加入IOg活性炭在20-50°C 搅拌吸附30min，除炭，补加水至5000. 0ml。精滤，灌封每瓶50ml，灭菌即得。
[0103] 实施例9
[0104] 本实验中所用B01-B16样品均为实施例1中制备的样品。
[0105] ⑴材料
[0106] HTC-15细胞株、HTC-116细胞株、MCF-7细胞株和BGC-823细胞株由绿叶制药 研发中心非临床研发部实验室所提供，采用常规培养，实验过程均采用对数生长期细胞。 RPMI1640培养基购于GIBCO,胎牛血清为浙江天杭生物科技有限公司产品，MTT为碧云天生 物技术公司产品，DMSO均为赛尔斯公司产品。
[0107] 仪器：CO2培养箱（SANYO MC0-20AIC，Japan)，超净工作台（山东三瑞），酶标 仪（Molecular Devices SpectraMax M5)，倒置显微镜（OLYMPUS CKX41)，细胞培养皿 (Costar，USA)，96 孔细胞培养板（Costar，USA)。
[0108] 软件：Microsoft Excel统计分析软件
[0109] (2)方'法
[0110] 分别将对数生长期的HTC-15细胞、HTC-116细胞、MCF-7细胞、BGC-823细胞，用 0.25%胰酶-EDTA消化后，配制成一定浓度的单细胞悬液，根据细胞生长速度的差异，按 1000-2000个/孔接种于96孔板，每孔加入细胞悬液100 μ L。24h后，加入含不同浓度化合 物及相应溶剂对照的新鲜培养基，每孔加100 μ L (DMSO终浓度〈0. 1 % )，每种受试化合物设 5~7个剂量组，每组至少设3个平行孔，于37°C继续培养72h后，弃上清，每孔加入100 μ L 新鲜配制的含0. 5mg/mL MTT的无血清培养基，继续培养2h，弃上清后，每孔加入200 μ L DMSO溶解MTT甲簪沉淀，微型振荡器振荡混匀后，酶标仪在参考波长450nm，检测波长570nm 条件下测定光密度值（OD)，以溶剂对照处理的肿瘤细胞为对照组，用以下公式计算化合物 对肿瘤细胞的抑制率，并按中效方程计算IC 5tl:
[0111]
[0112] (3)结果
[0113] 表3样品对体外肿瘤细胞的半数抑制浓度IC5tl ( μ Μ)
[0114]
[0115] (4)结论
[0116] 本发明所述通式（I )的含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物B 01及Β09对人结 肠癌细胞株此1'-15、人结肠癌细胞株!1(：1'-116、人结肠癌细胞株哪-48()、人乳腺癌细胞株 MCF-7、人胃癌细胞株BGC-823具有增殖抑制活性
[0117] 实施例10
[0118] ⑴材料
[0119] C57BL/6鼠由北京华阜康生物科技有限公司提供，采用常规饲养。
[0120] 软件：Microsoft Excel统计分析软件
[0121] 本实验所用BOl和B09均为实施例1制备。
[0122] (2)方法
[0123] 选用雄性C57/BL6小鼠，18_22g。实验过程简述如下：取生长良好的荷瘤小鼠， 颈椎脱白处死，无菌条件下剥取长势良好的黑色素瘤B16瘤块，匀浆，以每克瘤组织4mL生 理盐水的比例释后给每只小鼠腋下皮下接种0.1 mL瘤液，次日将动物随机分组并开始给 药。化合物B01、B09在90mg/kg剂量下于接种24h后灌胃给药，给药体积为0. 2mL/10g ; Sorafenib以90mg/kg剂量灌胃给药，给药体积为0. 2mL/10g。每天给药一次，连续给药14 次后颈椎脱白处死，分别称量体重、瘤重。计算肿瘤生长抑制率（％)，并将结果进行统计学 处理。
[0124]
[0125] (3)结果
[0126] 表4样品对体内B16异种移植瘤的抑制率
[0127]
[0128] (4)结论
[0129] 从上述体内实验结果可以看出，本发明所述通式（I )的含喹唑啉结构的二芳基 脲类化合物BOl和B09对小鼠黑色素 B16移植瘤具有生长抑制活性。
[0130] 以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和 原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物，其特征在于，包括具有通式I结构的化合 物或其药学上可接受的盐，通式I结构如下所示：其中，R1选自 H、C rC8的烷基、卤素 、-CF 3、-〇CF3、-N02、-CN、R20-、-SO 2NH2、-NHS02R3、-NR4R5、-CONR6R7、-C00R8、R 9CO-及上述基团的二取代或上述基团的三取代，X选自0或S。2. 根据权利要求1所述的含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物，其特征在于，所述R 1选 自 H、C1-Cja烷基、F、CI、CF 3、0CF3、CN、R20、NHS02R 3、NR4R5、C0NR6R7、C00R 8、R9CO 及上述基团 的二取代或上述基团的三取代，R2、R3、R4、R5、R 6、R7、馬和R 9分别为H或C rC4的烷基。3. 根据权利要求2所述的含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物，其特征在于，所述药学 上可接受的盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、苯磺酸 盐、对甲苯磺酸盐、1-萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠 檬酸盐、乳酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、苯乙酸盐、杏 仁酸盐或上述盐的水溶物。4. 根据权利要求3所述的含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物，其特征在于，所述含喹 唑啉结构的二芳基脲类化合物选自下列化合物中的一种： BO IN- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (4-氟-3-三氟甲基苯基） 脲； Β02Ν- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (3-三氟甲基苯基）脲； Β03Ν- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (4-三氟甲氧基苯基）脲； Β04Ν- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (3-氯-4-氟苯基）脲； Β05Ν-{3-[ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基}-Ν' - (3, 4-二氟苯基）脲； Β06Ν- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (4-氯苯基）脲； Β07Ν- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (4-氟苯基）脲； Β08Ν-{3-[ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基}-Ν' - (4-甲基苯基）脲； Β09Ν- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基} -Ν' - (4-氟-3-三氟甲基苯基） 脲； BlON-{3-[ (6,7_二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν'-(3-三氟甲基苯基）脲； BI IN-{3-[ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν'-(4-三氟甲氧基苯基）脲； Β12Ν-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν' -(3-氯-4-氟苯基）脲； Β13Ν-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν' -(3, 4-二氟苯基）脲； Β14Ν-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν' -(4-氯苯基）脲； Β15Ν-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν' -(4-氟苯基）脲； Β16Ν-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-N' -(4-甲基苯基）脲。5. 根据权利要求1-4任一所述的含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物在制备治疗结肠 癌、乳腺癌和/或胃癌药物中的应用。6. -种药物组合物，其特征在于，含有权利要求1-4中任一所述的含喹唑啉结构的二 芳基脲类化合物，以及一种或多种药学或食品学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。7. 根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物为口服制剂或注 射剂。8. -种含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物的制备方法，其特征在于：包括： 1) 化合物1藜芦醛在硝酸中被硝化，得到6-硝基藜芦醛，即化合物2 ; 2) 6-硝基藜芦醛与高锰酸钾反应，得到6-硝基藜芦酸，即化合物3 ; 3) 6-硝基藜芦酸在钯碳催化下与氢气反应，得到6-氨基藜芦酸，即化合物4 ; 4) 6-氨基藜芦酸与醋酸甲脒在DMSO中反应，得到6, 7-二甲氧基-4 (3H)-喹唑啉酮，即 化合物5 ; 5) 6, 7-二甲氧基-4(3H)-喹唑啉酮经氯化亚砜氯代，得到6, 7-二甲氧基-4-氯喹唑 啉，即化合物6 ; 6) 6, 7-二甲氧基-4-氯喹唑啉与间氨基苯酚或间氨基苯硫酚缩合，得到化合物7 ; 7) 化合物8在二氯乙烷中与三光气反应，得到化合物9 ; 8) 化合物7与化合物9在有机溶剂中反应，得到具有通式I结构的化合物，该化合物与 酸反应，得到通式I结构的化合物其药学上可接受的盐，具体反应如下所示：其中，R1选自 H、C rC8的烷基、卤素 、-CF 3、-〇CF3、-N02、-CN、R20-、-SO 2NH2、-NHS02R3、-NR4R5、-CONR6R7、-C00R8、R 9CO-及上述基团的二取代或上述基团的三取代，R2、R3、R4、R 5、R6、R7、 馬和R 9分别为H或C「(^的烃基，X选自0或S。
【专利摘要】本发明涉及一种含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物及其制备方法和应用，本含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物包括具有通式Ⅰ结构的化合物或其药学上可接受的盐，通式Ⅰ结构如下所示：其中，R1选自H、C1-C8的烷基、卤素、-CF3、-OCF3、-NO2、-CN、R2O-、-SO2NH2、-NHSO2R3、-NR4R5、-CONR6R7、-COOR8、R9CO-及上述基团的二取代或上述基团的三取代，R2、R3、R4、R5、R6,R7、R8和R9分别为H或C1-C8的烃基；X选自O或S。药理学试验证明，含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物对多种酪氨酸激酶具有抑制活性，对于人体结肠癌、人体乳腺癌和/或人体胃癌均具有良好的抗肿瘤效果。
【IPC分类】A61K31/517, C07D239/93, C07D239/88, A61P35/00
【公开号】CN104892530
【申请号】CN201510279335
【发明人】王洪波, 姚建文, 傅风华, 孔祥凯, 姚泽宇, 张静文, 解晓霞, 王宁, 王宗良
【申请人】烟台大学
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月27日
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物及其制备方法和应用，属于生 物医药领域。
【背景技术】
[0002] 癌症是严重危害人类健康的主要疾病之一，攻克癌症是目前世界性的研宄课题。 据世界卫生组织（WHO)报告，全世界癌症患者每年增加1000万人，死亡约700万人，到 2020年，癌症患者每年将新增2000万人。目前，我国每年大约在超过160万人患癌症，130 万人死于癌症，癌症正成为仅次于心血管疾病的严重危害人类健康的"第二杀手"。尽管近 20年来，分子生物学的迅速发展，人们对癌症的认识开始由外及里、由细胞到分子水平的 深入，并且通过化学成的方法得到了不少的抗癌药物，但这些化学合成的抗癌药大多数对 人体的正常细胞产生较严重的毒副作用。如何避免传统抗癌药物的毒副作用，从而获得更 安全的抗癌新药物，成为了医药工作者研宄的新方向。
[0003] 随着蛋白质组学和基因组学等学科的发展，人们对于药物在体内作用机制的认识 逐渐深入，现代新药研宄已进入合理药物设计时代，许多选择性作用于特殊靶点的药物也 不断被发现。但对于某些复杂疾病如癌症、高血压、糖尿病、病毒感染及神经系统疾病等，单 一靶点的药物通常很难达到预期治疗效果甚至会出现不良反应，而将几种不同单一靶点药 物联用或选择使用作用于多个分子靶标的"多靶点"药物治疗复杂疾病时则会有较佳疗效。 近年来，FDA先后批准了多个多靶点药物上市，如2005年和2006年分别批准了索拉非尼和 达沙替尼，2007年批准了苏尼替尼和拉帕替尼等。
[0004] 索拉菲尼（Sorafenib)，商品名Nexavar多吉美，是一种种口服多激酶抑制剂。它 具有双重抗肿瘤作用，一方面抑制Raf/MEK/ERK信号传导通路直接抑制肿瘤的生长，另一 方面抑制几种与新生血管生成和肿瘤发展有关的酪氨酸激酶受体的活性，包括血管内皮生 长因子受体-2 (VEGFR-2)等，阻断肿瘤新生血管生成，间接抑制肿瘤细胞的生长，从而起到 抗肿瘤作用。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是提供一种含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物及其 制备方法和应用，本申请发明人在研宄索拉非尼及其与多种受体蛋白的结合模式的基础 上，设计了一系列含芳香胺结构的二芳基脲类化合物，该系列化合物与药物靶标具有良好 的匹配模式，对体外肿瘤细胞株具有良好的抑制活性。
[0006] 本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种含喹唑啉结构的二芳基脲类化合 物，包括具有通式I结构的化合物或其药学上可接受的盐，通式I结构如下所示：
[0007]
[0008] 其中，R1选自 H、C rC8的烷基、卤素 、-CF 3、-〇CF3、-N02、-CN、R20-、-S0 2NH2、-NHSO2R3 、-NR4R5、-CONR6R7、-COOR 8、R9CO-及上述基团的二取代或上述基团的三取代，R2、R3、R 4、R5、R6、 R7、馬和R 9分别为H或C「(：8的烃基，X选自0或S。
[0009] 在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
[0010] 进一步，所述 R1选自 H、C「C4的烷基、F、CI、CF 3、0CF3、CN、R20、NHS02R 3、NR4R5、 C0NR6R7、C00R8、R9CO及上述基团的二取代或上述基团的三取代，R 2、R3、R4、R5、R6、R 7、馬和R 9 分别为H或(^-(；的烷基。
[0011] 进一步，所述药学上可接受的盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸 盐、三氟甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、1-萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、乙酸盐、三氟乙酸 盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、苯甲酸 盐、水杨酸盐、苯乙酸盐、杏仁酸盐或上述盐的水溶物。
[0012] 进一步，所述含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物，选自下列化合物中的一种：
[0013] BOl N-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基}-Ν'-(4-氟-3-三氟甲基 苯基）脈；
[0014] Β02 N- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (3-三氟甲基苯基） 脲；
[0015] Β03 N-{3-[ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基}-Ν'-(4-三氟甲氧基苯 基）脈；
[0016] Β04 N- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (3-氯-4-氟苯基） 脲；
[0017] Β05 N-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基}-Ν'-(3, 4-二氟苯基） 脲；
[0018] Β06 N- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (4-氯苯基）脲；
[0019] Β07 N- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (4-氟苯基）脲；
[0020] Β08 N- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (4-甲基苯基）脲；
[0021] Β09 N- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基} -Ν' - (4-氟-3-三氟甲基 苯基）脈；
[0022] BlO N-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν'-(3-三氟甲基苯基） 脲；
[0023] Bll N-{3-[ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν'-(4-三氟甲氧基苯 基）脈；
[0024] Β12 N-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν'-(3-氯-4-氟苯基） 脲；
[0025] Β13 Ν-{3-[(6,7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν'-(3,4-二氟苯基） 脲；
[0026] B14 N-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν' -(4-氯苯基）脲；
[0027] B15 N-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν' -(4-氟苯基）脲；
[0028] Β16 Ν-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-N' -(4-甲基苯基）脲。
[0029] 本发明还提供一种上述含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物在制备治疗结肠癌、乳 腺癌和/或胃癌药物中的应用。
[0030] 本发明还提供一种药物组合物，含有上述含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物，以 及一种或多种药学或食品学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
[0031] 在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
[0032] 进一步，所述药物组合物为口服制剂或注射剂。
[0033] 进一步，所述口服制剂包括：片剂、胶囊、颗粒剂或口服溶液剂。
[0034] 进一步，所述注射剂包括：注射用水针、注射用粉针或小输液。
[0035] 进一步，所述药物组合物还包括药学或食品学上可接受的：辅料及填充剂、黏合 剂、崩解剂中的一种或几种，其中，所述辅料及填充剂包括乳糖、蔗糖、糊精、淀粉、预胶化淀 粉、甘露醇、山梨醇、磷酸氢钙、硫酸钙、碳酸钙、微晶纤维素中的一种或多种的混合物；所述 黏合剂包括淀粉、聚维酮、羧甲基纤维素钠、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、聚 乙二醇、药用乙醇、水中的一种或多种的混合物；所述崩解剂包括淀粉、交联聚维酮、交联 羧甲基纤维素钠、低取代羟甲基纤维素钠、羟丙纤维素、泡腾崩解剂中的一种或多种的混合 物。
[0036] 本发明还提供一种含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物的制备方法，包括：
[0037] 1)化合物1藜芦醛在硝酸中被硝化，得到6-硝基藜芦醛，即化合物2 ;
[0038] 2) 6-硝基藜芦醛与高锰酸钾反应，得到6-硝基藜芦酸，即化合物3 ;
[0039] 3) 6-硝基藜芦酸在钯碳催化下与氢气反应，得到6-氨基藜芦酸，即化合物4 ;
[0040] 4)6-氨基藜芦酸与醋酸甲脒在二甲基亚砜（DMSO)中反应，得到6, 7-二甲氧 基-4 (3Η)-喹唑啉酮，即化合物5 ;
[0041] 5) 6, 7-二甲氧基-4 (3Η)-喹唑啉酮经氯化亚砜氯代，得到6, 7-二甲氧基-4-氯喹 唑啉，即化合物6 ;[0042] 6)6, 7-二甲氧基-4-氯喹唑啉与间氨基苯酚或间氨基苯硫酚缩合，得到化合物 7 ；
[0043] 7)化合物8在二氯乙烷中与三光气反应，得到化合物9 ;
[0044] 8)化合物7与化合物9在有机溶剂中反应，得到具有通式I结构的化合物，该化合 物与酸反应，得到通式I结构的化合物其药学上可接受的盐，具体反应如下所示：
[0045] 8
9
[0046] 其中，R1选自 H、C rC8的烷基、卤素 、-CF 3、-〇CF3、-N02、-CN、R20-、-S0 2NH2、-NHSO2R3 、-NR4R5、-CONR6R7、-COOR 8、R9CO-及上述基团的二取代或上述基团的三取代，R2、R3、R 4、R5、R6、 R7、馬和R 9分别为H或C「(：8的烃基，X选自0或S。
[0047] 本发明提供的含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物与现有技术不同之处在于：本发 明含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物含有所述通式I化合物或其药学上可以接受的盐具 有对多种肿瘤细胞株的抑制作用，可作为有效成分用于制备肿瘤方面的治疗药物。本发明 所述通式I化合物的活性是通过体外抗肿瘤模型、体内异种移植模型验证的。体外活性测 试所选用的肿瘤细胞株包括：人结肠癌细胞株HCT-15、人结肠癌细胞株HCT-116、人乳腺癌 细胞株MCF-7、人胃癌细胞株BGC-823等，但不限于上述肿瘤细胞株。体内活性测试所选用 模型是鼠黑色素瘤B16异种移植模型。本发明所述通式I化合物的机制研宄所选用的肿瘤 细胞株是人结肠癌细胞株HCT-116。本发明所述通式I化合物在相当宽的剂量范围内是有 效的。例如每天服用的剂量在Img-1000 mg/人范围内，分为一次或数次给药。实际服用本 发明通式I化合物的剂量可由医生根据有关情况确定。这些情况包括：被治疗者的身体状 态、给药途径、年龄、体重、对药物的个体反应、症状的严重程度等。
【具体实施方式】
[0048] 以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限 定本发明的范围。
[0049] 实施例1
[0050] 6-硝基藜芦醛（2)
[0051]
[0052] 将硝酸（100ml，I. 52mol)加入到带有机械搅拌桨的250ml三口圆底烧瓶中，在 20°C下分批加入藜芦醛（16.6g，0. lmol)，保持体系的温度在25°C以内。加毕后继续搅拌 0. 5h，TLC检测反应进程。反应结束后将反应液缓慢倒入400ml冰水中搅拌析晶，大量黄色 固体析出，抽滤得黄色固体，干燥后称重得粗品18g。
[0053] 粗品加入50 % (V/V)乙醇水重结晶，得产品⑵16. 0g，产率78. 2 %， m. p. 133-135?。
[0054] 6-硝基藜芦酸（3)
[0055]
[0056] 在三口瓶中加入500ml水、氢氧化钠（12g, 300.0 mmol)和化合物 2(33g, 156.3mmol)，搅拌，分批加入19.75g(125mmol)的高锰酸钾（控制温度20°C以下）， 可观察到溶液逐渐由红棕色变为黑色。反应7h后，抽滤，得墨绿色滤液。滤液加盐酸调PH 至7-8,有少量棕色浑浊物产生，双层滤纸抽滤，得黄色滤液。滤液加盐酸调节pH至1-2,大 量固体析出，抽滤，干燥得黄色粉末状晶体（3)29.4g，产率83.0%，m.p. 193-195°C。
[0057] 6-氨基藜芦酿（4?
[0058]
[0059] 在高压爸中加入化合物3 (lOg, 44. 02mmol)，加入200ml的工业甲醇，0· 5g钮碳。 封釜，氢气置换釜内空气2次。关闭排气阀，调节温度45. 0°C，转速300n/s，压力0. 4MPa进 行反应。2h后关闭进气阀，釜内压力无下降趋势，反应结束。打开冷却水，待体系温度降至 25°C后开釜，尽快吸出反应液，滤除钯碳，真空脱溶剂。待溶剂蒸出约85%时，大量固体析 出，抽滤，2ml工业甲醇淋洗滤饼。所得滤饼真空干燥，得黄色固体（4)7. 2g，收率83. 7%， m. P. 170-172。。。
[0060] 6, 7-二甲氧基-4 (3H)-喹唑啉酮（5)
[0061]
[0062] 将化合物4(5g，25. 38mmol)与醋酸甲脒（4g，38. 83mmol)加入到100mL三口瓶中， 加入5ml DMS0,搅拌下升温至140-170°C。体系由黑色溶液逐渐变为棕色浑浊液。4h后 降温至50°C，加入20ml水，大量固体析出，抽滤，得浅黄色固体，烘干，得产品（5) 5g，收率 95. 7%，m. P. 295-297°C。
[0063] 6, 7-二甲氧基-4-氯喹唑啉（6)
[0064]
[0065] 将制得的化合物5(1. 7g，8. 2mmol)和15ml二氯亚砜加入100mL的圆底烧瓶中， 缓慢的加入〇. 5ml的二甲基甲酰胺（DMF)，回流反应Ih后，取样，反应完全后，蒸干，加饱 和碳酸钠水溶液，调pH至8-9,抽滤，烘干得浅黄色固体粉末（6) I. 53g，产率82. 2 %，m. p. 180-182°C。
[0066] 3- (6, 7-二甲氧基喹唑啉-4-氧基）苯胺（7a)
[0067] 在100mL的圆底烧瓶中加入间氨基苯酷（0. 35g, 3. 2mmol)、叔丁醇钾 (0. 44g，3. 9mmol)和20ml DMF，25°C搅拌l_1.5h，溶液由暗绿色变为红棕色。加碳酸钾 (0. 31g，2. 2mmol)，IOmin后，加入用20mlDMF溶解的化合物6(0. 72g)，升温至85°C，反应 2. 5h后取样TLC，反应结束。加水50ml，乙酸乙酯（EA)萃取（100ml X 3)，合并有机相，饱和 氯化钠溶液洗两次后无水硫酸钠干燥。浓缩至蒸干，称重得晶体（7a)0.74g，产率77. 9%， m. P. 183-185°C，高效液相测定含量为 98. 45 %。1H-NMR (400MHz, DMS0-d6) δ 3. 97 (s, 3H, O-CH 3)，3· 98 (s, 3Η, O-CH3), 5· 28 (s, 2Η, -NH2), 6· 98 (dd, J = I. 6Hz, 9. 6Hz, 1Η, Ph-H-6), 7· 13 (d, J =7· 6Ηζ, 1Η, Ph-H-4)，7· 23 (d, J = I. 6Ηζ, 1Η, Ph-H-2)，7· 43 (t, J = 7· 8Ηζ, 1Η, Ph-H-5)，7· 5 5(s, 1Η, quinazolineH-5), 7. 63(s, 1Η, quinaz oline Η-8), 8. 56(s, 1Η, quinazoline Η-2). HRMS(AP-ESI)m/z:calcd for C16H15N3O3[Μ+Η]+298. 1192, found 298. 1199〇
[0068] 化合物（7b)是具有通式为（7)的化合物中的一个，3-(6, 7-二甲氧基 喹唑啉-4-巯基）苯胺（7b)合成以间氨基苯硫酚为原料，方法与上实施例类 似。实验结果为：产率74. 0 %，m. p. 172-175 °C，高效液相测定含量为97. 5 %。 1H-匪R (400MHz，DMS0-d6) δ 3. 97 (s，3H，O-CH3)，3. 98 (s，3H，O-CH3)，5. 33 (s，2H，-NH2)，6 ,68(dd, J = I. 6Hz, 9. 6Hz, 1H, Ph-H-6), 6. 73(d, J = 7. 6Hz, 1H, Ph-H-4), 6. 80 (d, J = I. 6Hz, 1H, Ph-H-2), 7. 13 (t, J = 7. 8Hz, 1H, Ph-H-5), 7. 31 (s, 1H, quinazolineH-5), 7. 33 (s ,1H, quinazoline H-8), 8. 70 (s, 1H, quinazoline H_2) 〇 HRMS(AP_ESI)m/z:calcd for C16 H15N3O2S [M+H]+314. 0963, found314. 0958。
[0069] 目标化合物的合成
[0070] N-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基}-Ν'-(4-氟-3-三氟甲基苯 基）脲（BOl)
[0071]
[0072] 将4-氟-3-三氟甲基苯胺（8,0. 21g，1.2mmol )溶解于IOml二氯乙烷中，冰浴 下搅拌，降温至〇_5°C。低温下缓慢滴加 BTC(三光气，0. 18g，0. 6mmol)的IOml二氯乙 烷溶液，体系温度稍升，大量白色固体析出，保持体系温度在〇_5°C至滴加结束。滴加 结束0. 5h后撤去冰浴，25°C搅拌0. 5h后升温至回流反应。回流过程中大量酸性气体溢 出。回流反应8h后蒸除溶剂，得淡黄色油状液体。加入二氯甲烷IOml将淡黄色油状 液体溶解，冰浴搅拌下滴加7a(0. 3g，1.0 mmol)的IOml二氯甲烷溶液，滴加完毕后升至 25°C反应。反应2h后大量固体析出，抽滤，滤饼用大量二氯甲烷洗涤，得最终产品BOl为 白色固体，〇· 33g，含量 97. 8 %，收率 65. 1 %，m. P. 205-208 °C。1H-NMR (400MHz, DMS0-d6) δ 3. 99 (s, 3H, quinazoline-〇CH3-6), 4. 00 (s, 3H, quinazoline-〇CH3-7), 6. 94 (d, J = 7. 8Hz, 1H, Ph-H-6)，7. 27 (d, J = 7. 8Hz, 1H, Ph-H-4)，7. 37-7. 46 (m, 3H, Ph-H-5, Ph' -H-5and quinazoline H-5), 7. 57-7. 58 (m, 2H, Ph-H-2and quinazoline H-8), 7. 60-7. 64 (m, 1H, Ph? -H-2)，7. 99 (dd, J = 2. 5, 6. 4Hz, Ph' -H-6)，8. 56 (s, 1H, quinazoline H-2)，9. 01 (s, 1H, -NH CS-), 9. 10 (s, 1H, -NHCS-). HRMS (AP-ESI) m/z: calcd for C24H18F4N4O4 [M+H] +503. 1342, found 503. 1345.
[0073] 化合物（BOl)是具有通式为（I )的化合物中的一个，其他化合物（B02-B16)的 合成方法同上实施例。实验结果如下表所示。
[0074] 表 1
[0075]
[0076] 表2化合物B02到B16的结构表征数据
[0077]
[0078]
[0079]
[0080] 实施例2
[0081] 片剂 100片 BOl 1 0.0 g 乳糖 12 Og 预胶化淀粉 2. 5g 微晶纤维素 2 5g 羧曱基纤维素 0. 8g 10%聚维酮溶液 2g 硬脂酸镁 0. 6g 滑石粉 0.8g
[0082] 制备工艺：将实施例1制备的活性成分BOl和辅料预先粉碎后过100目筛，称取主 药加辅料乳糖、预胶化淀粉、羧甲基纤维素钠和微晶纤维素充分混合，过60目筛三次，加入 质量浓度10%的聚维酮溶液，混合，制软材，过20目筛，制得湿粒，与50-60°C干燥后，加硬 脂酸镁和滑石粉预先过筛，充分混合，检测，压片。
[0083] 实施例3
[0084] 胶嚢剂 100粒 B04 15. Og 二氧化硅 I. 8g 硬脂酸镁 0. 8g
[0085] 制备工艺：将实施例1制备的活性成分B04和辅料预先粉碎后过100目筛，加辅料 二氧化硅和硬脂酸镁，充分混合，检测，灌装与4号胶囊。
[0086] 实施例4
[0087] 口崩片 100片 BO7 5. Og 甘露醇 18. Og 微晶纤维素 18. Og 羧曱基纤维素钠 1.0 g 硬脂酸4吴 q 21 g 二氧化硅 〇. 〇84g
[0088] 制备工艺：将实施例1制备的活性成分B07和辅料预先粉碎后过100目筛，充分混 合，采用辊压机压饼，再用整粒机过18目筛，最后加入硬脂酸镁，充分混合，检测，压片。
[0089] 实施例5
[0090] 颗粒剂 100袋 B08 30.0 g
[0091] 乳糖 55. Og 甘露醇 14. Og 阿斯巴甜 0. 05g 香精 〇. 〇5g 幾丙基纤维素 0. 5g
[0092] 制备工艺：将实施例1制备的活性成分B08和辅料预先粉碎后过100目筛，充分混 合，再加入黏合剂制得软材，14目筛制粒，55°C干燥，12目筛整粒，检测，包装。
[0093] 实施例6
[0094] 规格 小容量注射液 lrag/ml BI 3 50.0 mg 嶙酸二氢枘 10.0 mg 狩檬酸 30.0 mg 氯化納 9G. Omg 注射用水 50.0 ml
[0095] 制备工艺：取注射用水50. 0ml，称取处方量的磷酸二氢钠、柠檬酸和氯化钠搅拌 使其溶解，加入实施例1制备的主药B13,搅拌溶解。用0. lmol/L的盐酸或氢氧化钠调pH 为4. 0-7. 0,加入占主药质量0. 1 %的活性炭吸附20min。先用0. 45 μ m的滤膜滤过，再用 0. 22 ym的滤膜精滤。按每瓶Iml灌装，105°C高温灭菌30min，即得注射液。
[0096] 实施例7
[0097] 冻干剂 B09 5. Og
[0098] 波洛沙姆 2. Og 氢氧化钠 0. 3g 构橡酸 1. 48 g 甘露醇 40.0 g 乳糖 30.0 g 注射用水 150.0 ml
[0099] 制备工艺：取注射用水100. 0ml，加入实施例1制备的主药B09、甘露醇、乳糖和波 洛沙姆搅拌溶解。用lmol/L的枸橼酸调pH为7. 0-9. 0,补加水至150ml。加入0. 5g的活 性炭，在30°C搅拌30min，脱炭。采用微孔滤膜过滤除菌，滤液按每支Iml分装，预冻2h后， 冷冻下减压干燥12h，样品温度至25°C后再干燥5h，制得白色疏松块状物，封口即得。
[0100] 实施例8
[0101] 小输液 B12 25. Omg 三羟曱基氨基曱烷20.0 g 低分子右旋糖苷 500.0 g EDTA-2Na 15 Og 碳酸氣納 I 2g 注射用水 5000.0 ml
[0102] 称取注射用水2000.0 ml，加入实施例1制备的主药B12、三羟甲基氨基甲烷、低分 子右旋糖苷和EDTA-2Na搅拌溶解。用碳酸氢钠调pH为7. 0-9. 0,加入IOg活性炭在20-50°C 搅拌吸附30min，除炭，补加水至5000. 0ml。精滤，灌封每瓶50ml，灭菌即得。
[0103] 实施例9
[0104] 本实验中所用B01-B16样品均为实施例1中制备的样品。
[0105] ⑴材料
[0106] HTC-15细胞株、HTC-116细胞株、MCF-7细胞株和BGC-823细胞株由绿叶制药 研发中心非临床研发部实验室所提供，采用常规培养，实验过程均采用对数生长期细胞。 RPMI1640培养基购于GIBCO,胎牛血清为浙江天杭生物科技有限公司产品，MTT为碧云天生 物技术公司产品，DMSO均为赛尔斯公司产品。
[0107] 仪器：CO2培养箱（SANYO MC0-20AIC，Japan)，超净工作台（山东三瑞），酶标 仪（Molecular Devices SpectraMax M5)，倒置显微镜（OLYMPUS CKX41)，细胞培养皿 (Costar，USA)，96 孔细胞培养板（Costar，USA)。
[0108] 软件：Microsoft Excel统计分析软件
[0109] (2)方'法
[0110] 分别将对数生长期的HTC-15细胞、HTC-116细胞、MCF-7细胞、BGC-823细胞，用 0.25%胰酶-EDTA消化后，配制成一定浓度的单细胞悬液，根据细胞生长速度的差异，按 1000-2000个/孔接种于96孔板，每孔加入细胞悬液100 μ L。24h后，加入含不同浓度化合 物及相应溶剂对照的新鲜培养基，每孔加100 μ L (DMSO终浓度〈0. 1 % )，每种受试化合物设 5~7个剂量组，每组至少设3个平行孔，于37°C继续培养72h后，弃上清，每孔加入100 μ L 新鲜配制的含0. 5mg/mL MTT的无血清培养基，继续培养2h，弃上清后，每孔加入200 μ L DMSO溶解MTT甲簪沉淀，微型振荡器振荡混匀后，酶标仪在参考波长450nm，检测波长570nm 条件下测定光密度值（OD)，以溶剂对照处理的肿瘤细胞为对照组，用以下公式计算化合物 对肿瘤细胞的抑制率，并按中效方程计算IC 5tl:
[0111]
[0112] (3)结果
[0113] 表3样品对体外肿瘤细胞的半数抑制浓度IC5tl ( μ Μ)
[0114]
[0115] (4)结论
[0116] 本发明所述通式（I )的含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物B 01及Β09对人结 肠癌细胞株此1'-15、人结肠癌细胞株!1(：1'-116、人结肠癌细胞株哪-48()、人乳腺癌细胞株 MCF-7、人胃癌细胞株BGC-823具有增殖抑制活性
[0117] 实施例10
[0118] ⑴材料
[0119] C57BL/6鼠由北京华阜康生物科技有限公司提供，采用常规饲养。
[0120] 软件：Microsoft Excel统计分析软件
[0121] 本实验所用BOl和B09均为实施例1制备。
[0122] (2)方法
[0123] 选用雄性C57/BL6小鼠，18_22g。实验过程简述如下：取生长良好的荷瘤小鼠， 颈椎脱白处死，无菌条件下剥取长势良好的黑色素瘤B16瘤块，匀浆，以每克瘤组织4mL生 理盐水的比例释后给每只小鼠腋下皮下接种0.1 mL瘤液，次日将动物随机分组并开始给 药。化合物B01、B09在90mg/kg剂量下于接种24h后灌胃给药，给药体积为0. 2mL/10g ; Sorafenib以90mg/kg剂量灌胃给药，给药体积为0. 2mL/10g。每天给药一次，连续给药14 次后颈椎脱白处死，分别称量体重、瘤重。计算肿瘤生长抑制率（％)，并将结果进行统计学 处理。
[0124]
[0125] (3)结果
[0126] 表4样品对体内B16异种移植瘤的抑制率
[0127]
[0128] (4)结论
[0129] 从上述体内实验结果可以看出，本发明所述通式（I )的含喹唑啉结构的二芳基 脲类化合物BOl和B09对小鼠黑色素 B16移植瘤具有生长抑制活性。
[0130] 以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和 原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物，其特征在于，包括具有通式I结构的化合 物或其药学上可接受的盐，通式I结构如下所示：其中，R1选自 H、C rC8的烷基、卤素 、-CF 3、-〇CF3、-N02、-CN、R20-、-SO 2NH2、-NHS02R3、-NR4R5、-CONR6R7、-C00R8、R 9CO-及上述基团的二取代或上述基团的三取代，X选自0或S。2. 根据权利要求1所述的含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物，其特征在于，所述R 1选 自 H、C1-Cja烷基、F、CI、CF 3、0CF3、CN、R20、NHS02R 3、NR4R5、C0NR6R7、C00R 8、R9CO 及上述基团 的二取代或上述基团的三取代，R2、R3、R4、R5、R 6、R7、馬和R 9分别为H或C rC4的烷基。3. 根据权利要求2所述的含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物，其特征在于，所述药学 上可接受的盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、苯磺酸 盐、对甲苯磺酸盐、1-萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠 檬酸盐、乳酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、苯乙酸盐、杏 仁酸盐或上述盐的水溶物。4. 根据权利要求3所述的含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物，其特征在于，所述含喹 唑啉结构的二芳基脲类化合物选自下列化合物中的一种： BO IN- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (4-氟-3-三氟甲基苯基） 脲； Β02Ν- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (3-三氟甲基苯基）脲； Β03Ν- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (4-三氟甲氧基苯基）脲； Β04Ν- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (3-氯-4-氟苯基）脲； Β05Ν-{3-[ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基}-Ν' - (3, 4-二氟苯基）脲； Β06Ν- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (4-氯苯基）脲； Β07Ν- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基} -Ν' - (4-氟苯基）脲； Β08Ν-{3-[ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）氧基]苯基}-Ν' - (4-甲基苯基）脲； Β09Ν- {3- [ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基} -Ν' - (4-氟-3-三氟甲基苯基） 脲； BlON-{3-[ (6,7_二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν'-(3-三氟甲基苯基）脲； BI IN-{3-[ (6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν'-(4-三氟甲氧基苯基）脲； Β12Ν-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν' -(3-氯-4-氟苯基）脲； Β13Ν-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν' -(3, 4-二氟苯基）脲； Β14Ν-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν' -(4-氯苯基）脲； Β15Ν-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-Ν' -(4-氟苯基）脲； Β16Ν-{3-[(6, 7-二甲氧基-4-喹唑啉基）硫基]苯基}-N' -(4-甲基苯基）脲。5. 根据权利要求1-4任一所述的含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物在制备治疗结肠 癌、乳腺癌和/或胃癌药物中的应用。6. -种药物组合物，其特征在于，含有权利要求1-4中任一所述的含喹唑啉结构的二 芳基脲类化合物，以及一种或多种药学或食品学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。7. 根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物为口服制剂或注 射剂。8. -种含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物的制备方法，其特征在于：包括： 1) 化合物1藜芦醛在硝酸中被硝化，得到6-硝基藜芦醛，即化合物2 ; 2) 6-硝基藜芦醛与高锰酸钾反应，得到6-硝基藜芦酸，即化合物3 ; 3) 6-硝基藜芦酸在钯碳催化下与氢气反应，得到6-氨基藜芦酸，即化合物4 ; 4) 6-氨基藜芦酸与醋酸甲脒在DMSO中反应，得到6, 7-二甲氧基-4 (3H)-喹唑啉酮，即 化合物5 ; 5) 6, 7-二甲氧基-4(3H)-喹唑啉酮经氯化亚砜氯代，得到6, 7-二甲氧基-4-氯喹唑 啉，即化合物6 ; 6) 6, 7-二甲氧基-4-氯喹唑啉与间氨基苯酚或间氨基苯硫酚缩合，得到化合物7 ; 7) 化合物8在二氯乙烷中与三光气反应，得到化合物9 ; 8) 化合物7与化合物9在有机溶剂中反应，得到具有通式I结构的化合物，该化合物与 酸反应，得到通式I结构的化合物其药学上可接受的盐，具体反应如下所示：其中，R1选自 H、C rC8的烷基、卤素 、-CF 3、-〇CF3、-N02、-CN、R20-、-SO 2NH2、-NHS02R3、-NR4R5、-CONR6R7、-C00R8、R 9CO-及上述基团的二取代或上述基团的三取代，R2、R3、R4、R 5、R6、R7、 馬和R 9分别为H或C「(^的烃基，X选自0或S。
【专利摘要】本发明涉及一种含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物及其制备方法和应用，本含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物包括具有通式Ⅰ结构的化合物或其药学上可接受的盐，通式Ⅰ结构如下所示：其中，R1选自H、C1-C8的烷基、卤素、-CF3、-OCF3、-NO2、-CN、R2O-、-SO2NH2、-NHSO2R3、-NR4R5、-CONR6R7、-COOR8、R9CO-及上述基团的二取代或上述基团的三取代，R2、R3、R4、R5、R6,R7、R8和R9分别为H或C1-C8的烃基；X选自O或S。药理学试验证明，含喹唑啉结构的二芳基脲类化合物对多种酪氨酸激酶具有抑制活性，对于人体结肠癌、人体乳腺癌和/或人体胃癌均具有良好的抗肿瘤效果。
【IPC分类】A61K31/517, C07D239/93, C07D239/88, A61P35/00
【公开号】CN104892530
【申请号】CN201510279335
【发明人】王洪波, 姚建文, 傅风华, 孔祥凯, 姚泽宇, 张静文, 解晓霞, 王宁, 王宗良
【申请人】烟台大学
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月27日
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