一种高硒含量硒化茶多酚制剂的制作方法
一种高硒含量硒化茶多酚制剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种有机硒化合物，尤其是一种新型高硒含量、无毒型的有机硒化合 物一硒化茶多酚，可广泛用于保健营养产品、强化食品、药品、兽药等等领域。
【背景技术】
[0002] 目前随着经济的提升，人们对健康的认识和需求也在日益提高，而由环境恶化而 引发的多种疾病的增加却深深困扰着人们。于是人们追求预防疾病和增强保健的意识大大 增强，如中、美、日、韩等国服用保健品的人数逐年递增，如火如荼，形成数千亿元的巨大市 场。
[0003] 本世纪初以来，有机硒保健品方兴未艾，然而由于毒性的限制，目前全球市场的有 机硒保健品由于含硒量低，而未能充分发挥其作用，其优良而广谱的效果未能完美体现。因 此新型高硒含量、无毒型的有机硒化合物成为研究的热点和难点。
[0004] 茶多酚是从茶叶中提取的全天然有机化合物，无毒副作用、无异味等特点。茶多酚 (Tea Polyphenols，TP)是茶叶中多酚类物质的总称，包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄 酮醇类和酚酸类等。其中以黄烷醇类物质（儿茶素）最为重要。以儿茶素为主的黄烷醇类 化合物占茶多酚总量的60%- 80%，其中含量最高的几种组分为：L-EGCG(50% -60% )、 L-EGC(15% -20% )、L-ECG(10% -15% )和 L-EC(5% -10% )。茶多酚又称茶鞣或茶单宁， 是形成茶叶色香味的主要成份之一，也是茶叶中有保健功能的主要成份之一。茶多酚结构 中大量的多酚羟基极易被氧化为醌类而产生H+，故有强抗氧化能力。清除自由基和抗氧化 作用是TP最重要的生物特性，是其抑癌抗癌药理作用的基础。
[0005] 茶多酚的分子式为C17H19N3O,分子量为281. 36 ;其结构简式如下：
[0006]
i中，R1 = H，〇H，R2 = H
[0007] 全球研究茶多酚已有百多年历史，长期的研究、分析、实践应用，已知茶多酚有以 下功能：
[0008] 1、消除有害自由基；
[0009] 2、很强的抗氧化作用；
[0010] 3、抗衰老作用；
[0011] 4、抗辐射作用；
[0012] 5、抗肿瘤对癌细胞的抑制作用；
[0013] 6、抗菌杀菌、抗病毒作用；
[0014] 7、抗动脉粥样硬化；
[0015] 8、增强心脏功能；
[0016] 9、抗心律失常；
[0017] 10、防治脑缺血再灌注损伤；
[0018] 11、抗蛀护齿；
[0019] 12、美白皮肤、减少皱纹。
[0020] 2013年仅欧、美、日等诸国消耗高纯度茶多酚约1200余吨，主要用于健康食品、保 健品及药品助剂。
[0021] 众所周知，硒作为防病治病、有益健康的人体必需元素，与四十多种重大疾病密切 相关，在发达地区已为大众所认识。而如何提高有机硒的硒含量同时降低其毒性更为专业 内外人士所关切，新型高硒含量、无毒型的有机硒化合物一硒化茶多酚应运而生。
【发明内容】
[0022] 本发明的目的在于提供一种高硒含量的硒化茶多酚，其以碱金属离子硒配合物为 功能团，硒含量达23. 4%，从而提高了消除自由基、抗氧化、抗肿瘤的效果。
[0023] 本发明的又一目的在于提供一种无毒性的硒化茶多酚，在提高硒含量的同时，通 过工艺的改进，降低硒化茶多酚的毒性，从而减小副作用。
[0024] 本发明的又一目的在于提供一种高硒含量硒化茶多酚的制备方法。
[0025] 为达到以上目的，本发明提供一种高硒含量硒化茶多酚，具有如下结构：
[0026]
[0029] 优选的
[0030] 优选的，该碱金属离子为镁离子。
[0031] 一种所述的高硒含量硒化茶多酚的制备方法，包括：
[0032] A.将茶多酚至少与一种金属无机碱反应，获得茶多酚羟酸基盐；及
[0033] B.将获得的所述茶多酚羟酸基盐与SeO2反应，获得所述的高硒含量硒化茶多酚。
[0034] 优选的，所述步骤A中的该茶多酚纯度> 98%。
[0035] 优选的，在所述步骤A中，茶多酚：金属无机碱=1 :0. 1~0. 5,反应温度为70°C~ 150°C，反应时间为IOOs~250s。
[0036] 优选的，在所述步骤B中，茶多酚羟酸基盐：SeO2=I :0.2~0.5,反应温度为 100°C~250°C，反应时间为80s~300s。
[0037] 优选的，所述步骤A的金属无机碱为氢氧化钠，氢氧化钾或氢氧化镁。
[0038] 根据本发明的制备方法获得的高硒含量硒化茶多酚，可进一步制备成高硒含量 硒化茶多酚制剂，如：胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液、散剂等，以满足不同的给药需求。
[0039] 本发明中的硒化茶多酚含硒量高，且无毒性，可用于制备成保健营养产品、强化食 品、药品等。
[0040] 所述高硒含量硒化茶多酚可应用于癌症的治疗，杀灭癌细胞，提高人体免疫力。
[0041] 本发明的有益效果：本发明的硒化茶多酚在无毒性和高含量两者之间达到了高度 地和谐，在保持茶多酚基本结构的同时，嵌入硒配合物功能基团，通过这种配方和工艺制备 而成的硒化茶多酚，系一种新化合物，突破性地使功能强大而广谱的二种化合物有机地合 而为一，在保留原生化功能之上，进一步强化了有机硒的高含量无毒特色，成为保健营养产 品、强化食品、药品、兽药等领域的生力军。
[0042] 本发明的这些目的，特点，和优点将会在下面的【具体实施方式】，附图，和权利要求 中详细的揭露。
【附图说明】
[0043] 图1为根据本发明实施例获得的以碱金属离子硒配合物为功能团的硒化茶多酚 的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0044] 根据本发明的一个较佳实施例，一种高硒含量（硒含量：23. 4% )硒化茶多酚，包 括茶多酚羟酸基盐，以碱金属离子硒配合物为功能团。
[0045] -种高硒含量硒化茶多酚，具有如下结构：
[0046]
[0050] 优选的，该碱金属离子为镁离子。一种所述的高硒含量硒化茶多酚的制备方法，包 括：
[0051] A.将茶多酚至少与一种金属无机碱反应，获得茶多酚羟酸基盐；及
[0052] B.将获得的所述茶多酚羟酸基盐与SeO2反应，获得所述的高硒含量硒化茶多酚。
[0053] 优选的，步骤A中的该茶多酚纯度彡98%。
[0054] 优选的，在步骤A中，茶多酚：金属无机碱=1 :0.1~0.5,反应温度为70°C~ 150°C，反应时间为IOOs~250s。
[0055] 优选的，在步骤B中，茶多酚羟酸基盐：SeO2=I :0. 2~0. 5,反应温度为KKTC~ 250°C，反应时间为80s~300s。
[0056] 优选的，所述步骤A的金属无机碱为氢氧化钠，氢氧化钾或氢氧化镁。
[0057] 根据本发明的制备方法获得的高硒含量硒化茶多酚，可进一步制备成高硒含量硒 化茶多酚制剂，如：胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液、散剂等，以满足不同的给药需求；制备方 法如下所述。
[0058] -种制备硒化茶多酚制剂的方法，包括：
[0059] A.将茶多酚至少与一种金属无机碱反应，获得茶多酚羟酸基盐；
[0060] B.将获得的所述茶多酚羟酸基盐与SeO2反应，获得所述的硒化茶多酚；及 [0061] C.将获得的硒化茶多酚制备成胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液或散剂。
[0062] 本发明中的硒化茶多酚含硒量高，且无毒性，可用于制备成保健营养产品、强化食 品、药品等。
[0063] 实施例1
[0064] A.将纯度为98 %的茶多酚与氢氧化钠反应，茶多酚：氢氧化钠=1 :0. 3,反应温度 为l〇〇°C，反应时间为150s，获得茶多酚羟酸基钠；
[0065] B.将获得的所述茶多酚羟酸基钠与SeO2反应，茶多酚羟酸基钠：SeO2=I :0. 4,反应 温度为150°C，反应时间为200s，获得高硒含量硒化茶多酚。
[0066] 实施例2.
[0067] A.将纯度为98 %的茶多酚与氢氧化钾反应，茶多酚：氢氧化钾=1 : 0. 5,反应温 度为130°C，反应时间为200s，获得茶多酚羟酸基钾；
[0068] B.将获得的所述茶多酚羟酸基钾与SeO2反应，茶多酚羟酸基钾：SeO2=I :0. 5,反应 温度为200°C，反应时间为280s，获得高硒含量硒化茶多酚。
[0069] 实施例3
[0070] A.将纯度为99%的茶多酚与氢氧化镁，茶多酚：氢氧化镁=1 :0. 2,反应温度为 80°C，反应时间为120s，获得茶多酚羟酸基镁；
[0071] B.将获得的所述茶多酚羟酸基镁与SeO2反应，茶多酚羟酸基镁：SeO2=I :0. 3,反应 温度为KKTC，反应时间为100s，获得高硒含量硒化茶多酚。
[0072] 通过上述实施例，本发明的目的已经被完全有效的达到了。熟悉该项技艺的人士 应该明白本发明包括但不限于附图和上面【具体实施方式】中描述的内容。任何不偏离本发明 的功能和结构原理的修改都将包括在权利要求书的范围中。
[0073] 以下为Pl大鼠急性经口毒性试验，其中Pl为根据本发明实施例1所得的硒化茶 多酚。
[0074] 摘要
[0075] 目的：观察大鼠灌胃受试物Pl后的中毒反应及死亡情况，用于初步评价受试物Pl 安全性。
[0076] 方法：挑选健康的50只SD大鼠为试验动物，雌雄各半，随机分为S组，分别为剂 量组 I (1000 mg / kg)、剂量组 2 (1280mg/kg)、剂量组 3 (1600mg / kg)、剂量组 4 (2000mg / kg)、剂量组5(2500mg / kg)。每组各10只动物，雌雌各半。其后追加三个剂量：3000mg / kg、4000mg / kg、4500mg/kg，每个剂量各5只雄鼠。禁食不禁水过夜后，大鼠均按lml/100g bw灌胃给药一次。给药后4h内严密观察动物出现的反应及死亡情况。然后每天上、下午各 一次对动物进行死亡和濒死情况观察，连续观察14天。动物死亡及时剖检，其他动物在观 察期结束后进行大体解剖，记录每只动物的大体病理改变。
[0077] 结果：（1)大鼠灌服Pl后，观察期剂量组5中雌性大鼠5只全部死亡，雄性大鼠死 亡1只，剂量组4中雄性大鼠死亡3只，雌性大鼠死亡4只，剂量组3中雄性大鼠无死亡，雌 性大鼠死亡4只，剂量组2中雄性大鼠无死亡，雌性大鼠死亡3只，剂量组1中雌雄大鼠都 无死亡。追加剂量3000mg/kg雄性大鼠死亡3只、4000mg/kg雄性大鼠死亡4只、4500mg / kg雄性大鼠死亡5只。（2) 14天观察期结束后进行剖检，未见异常。
[0078] 结论：按照国家食品药品监督管理局《【H】GPTl-I化学药物急性毒性试验技术指 导原则》及预实验结果设计剂量进行试验，根据试验结果求得Pl对雌雄SD大鼠急性经口半 数致死剂量（LD 5tl)为：
[0079] 雄性大鼠；2648. 4mg/kg，可信限：2143. 4-3338. 4mg / kg
[0080] 雌性大鼠：1365. 9mg / kg，可信限：1037. 5-1662. 8mg/kg
[0081] 1.试验题目
[0082] Pl大鼠急性经口毒性试验。
[0083] 2.试验目的
[0084] 研究Pl对大鼠的急性经口半数致死剂量（LD5tl)同时为亚慢性和慢性毒理学研究 中剂量设计提供依据。
[0085] 3.准则和参考文献
[0086] 本试验参照国家食品药品监督管理局《【H】 GPTl-I化学药物急性毒性试验技术指 导原则》为准则。
[0087] 4.试验机构
[0088] 试验机构：上海西普尔-必凯实验动物有限公司
[0089] 地址：上海市浦东新区金科路3577号
[0090] 邮编：201203
[0091] 电话：021-50793648
[0092] 传真：（〇21) 5O793M5
[0093] 5.委托单位及联系人
[0094] 委托单位：上海爱启医药技术有限公司
[0095] 地址：上海市张江高科技园区蔡伦路781号1110室
[0096] 联系人：宋荻讳
[0097] 联系方式：I3386238676
[0098] 6.机构负责人、项目负责人及试验相关人员
[0099] 机构负责人：陈国强
[0100] 地址：金科路3577号邮编：201203
[0101] 电话：50793648 Email :[email protected]· org. cn
[0102] 项目负责人：李伟
[0103] 地址：金科路3577号邮编：201203
[0104] 电话：50793648 Email :[email protected]· org. cn
[0105] 饲育管理负责人：金益
[0106] 地址：金科路3577号邮编：201203
[0107] 电话：50793648 Email :[email protected]· org. cn
[0108] 供试品管理负责人：朱晓君
[0109] 电话：5〇793648 Email :[email protected]· org. cn
[0110] 档案管理负责人：南震宇
[0111] 电话：50793648 Email :[email protected]· org. cn
[0112] 症状观察人员：李伟、施祎锴、刘磊等
[0113] 7.质量保证
[0114] QAU负责人：赵莖
[0115] 地址：金科路3577号邮编：201203
[0116] 电话：5079364 8Email :[email protected]· org. cn
[0117] 8.供试品和溶媒
[0118] 8.1供试品
[0119] 中文名：P1
[0120] 英文名：P1
[0121] 批号：20130903
[0122] CAS号：委托方未提供
[0123] 物理性状：固体粉末
[0124] 纯度：委托方未提供
[0125] 提供单位：上海爱启医药披术有限公司
[0126] 提供日期：20130903
[0127] 失效期：20150903
[0128] 接收总量：（包括容器重）112. 9723g
[0129] 防护措施：接触供试品的人员应采取适当的防护措施，包括口罩、帽子、手套、工作 服等。
[0130] 贮存条件：室温保存。
[0131] 贮存地点：本机构供试品室。
[0132] 稳定性：委托方确认供试品在存储温度下稳定。
[0133] 剩余供试品处理：试验结束后，剩余供试品返还供试品室，按SOP处理。
[0134] 8. 2 溶媒
[0135] 名称：超纯水
[0136] 9.试验日程
[0137] 试验启动：2013年09月11日
[0138] 引鼠日期：2013年09月13日
[0139] 试验开始：2013年09月26日
[0140] 试验结束：2013年12月22日
[0141] 报告草稿：2014年01月06日
[0142] 最终报告：2014年01月09日
[0143] 10.材料与方法
[0144] 10. 1试验体系
[0145] 种类：大鼠
[0146] 品系：SD (Sprague Dawley)
[0147] 等级：SPF级，参照中华人民共和国国家标准《GB14922. 2-2011实验动物微生物学 等级监测》。
[0148] 提供单位：上海西普尔-必凯实验动物有限公司
[0149] 实验动物生产许可证号：SCXK (沪）2008-0016、SCXK (沪）2013-0016
[0150] 实验动物质量合格证号：2008001634761、2008001635380、2008001636435
[0151] 选择理由：大鼠为此类急性毒性试验的公认首选动物，其遗传性状稳定，背景数据 清晰。
[0152] 动物要求：未曾交配，动物健康，符合实验动物质量要求。
[0153] 动物数：引入动物数80只，雌27只，雄53只：使用动物数65只，雌25只，雄40 只。
[0154] 体重：引入时雄性动物体重范围110_130g，雌性动物体重范围130_150g。
[0155] 健康检查与适应：动物引入后24小时内进行健康检查，未见异常表现的动物。适 应期每笼5只动物，适应时间7-13天。
[0156] 10. 2试验条件
[0157] 饲育条件：试验场所在本单位三号楼屏障系统3139室2008042-ZYZX饲育 架的层一、层二、层三、层四、层五，实验动物使用许可证号：SYXK (沪）2008-0058、 SYXK(沪）2013-0058。受试动物饲养于塑料笼具内，适应期动物饲养于规格为 L38. 00cmXW32. 5cmXH17. 5cm的笼具内，笼具放置于饲育架上，饲育架分7层，每层6个笼 具，饲育架规格为L167. 0cmXW70. 0cmXH171. 0cm。给药后5只1笼饲育。
[0158] 动物房每日使用消毒液擦拭房间地面（消毒液每周更换）。笼具每周更换一次。 用塑料水瓶给水.自由饮水和采食。
[0159] 环境条件：动物室（L6. 2mXW5. 8mXH2. 7m)通过空调机组吸入新鲜空气和 大气排风维持正压：温度为20-26°C，相对湿度为40-70% (房间清洁期除外）：照明： 彡200Lux(明暗各12小时），噪音在60dB以下；换气次数：彡15次/小时：落下菌数在3 个以下（无动物时，直径9cm平皿暴露30分钟）。
[0160] 摄食及饮水：动物饲料为全价营养固体料，由上海西普尔-必凯实验动物有限公 司提供，经高压蒸汽灭菌后给实验动物食用。提供饲料质量检测报告，饲料营养成分和污染 物含量符合国标《GB14924. 3-2010实验动物配合饲料营养成分》。
[0161] 饮水为本单位净水系统制备的过滤水。水质委托上海谱尼测试技术有限公司检 测，检测指标符合《GB5749-2006生活饮用水卫生标准》。
[0162] 动物福利：分组后剩余动物用于其它试验或处以安乐死，试验中濒死动物和试验 结束时存活动物处以安乐死，安乐死均采用二氧化碳窒息方法，尸体委托上海市动物无害 化处理中心处理。
[0163] 10. 3试验方法
[0164] 10. 3.1剂量设计
[0165] 设计5个剂量组，分别为剂量组l(1000mg / kg)、剂量组2(1280mg/kg)、剂量 组3(1600mg / kg)、剂量组4(2000mg / kg)、剂量组5(2500mg/kg)。其后追加两个剂量： 3000mg / kg、4000mg / kg、4500mg / kg。动物分别灌胃给予 26mg / mL、43.2mg / mL、 72mg/mL、120mg / mL、200mg / mL、250mg / mL、300mg / mL、400mg/mL、450mg / mL 的供试 品混悬液，灌胃容积为 Iml / 100g bw，染毒I次。
[0166] 剂量设计依据：按照国家食品药品监督管理局《【H】GPT1_1化学药物急性毒性试 验披术指导原则》及预实验结果设计剂量。预实验中每个剂量经口染毒雌雄各2只，结果显 示2500mg / kg的4只动物全部死亡，2000mg / kg的1只动物死亡，1000 mg / kg的4只 动物无死亡，200mg / kg的4只动物无死亡，因此正式试验在1000 mg / kg与2500mg / kg 之间设计5个剂量。后因雄性大鼠高剂量未完全死亡，先后又追加3000mg / kg、4000mg / kg、4500mg / kg 三个剂量。
[0167] 10. 3. 2动物分组
[0168] 适应期结束后对动物分组。
[0169] 分组方法：适应期结束后对所有动物进行称重并计算平均体重。选取一般状态良 好，各剂量组内同性别动物体重差异小于平均体重的10%，组间同性别动物体重均值差异 小于5%，标识动物作为原始编码，按照体重从大到小排列，每5只动物分为1个小组，随机 从已划分的"5段"中，每段选取1只动物，组成某个剂量组，记录下选定后的动物新编码（新 编码随机编写，不以体重升序或降序排列）。按原始编码抓取动物，在分组表中找到相应的 组别及新编码，依次放到对应的组内。
[0170] 动物标识：身份识别采用笼卡、苦味酸被毛染色和耳号标记识别。笼卡标识显示动 物编号和剂量组，被毛标识显示组内动物编号的个位0-9,耳号标记显示组内动物编号的个 位0-9和识别组别。剂量设计与动物分组见表1。
[0171] 表1.剂量设计与动物分组表
[0172]
[0173] 10. 3. 3供试品配制
[0174] 使用纯水在试剂瓶上标定相应刻度（40mL或IOmL)，备用。
[0175] 染毒前1天配制供试品。按照剂量设计计算理论称样量，分别称取供试品置于标 定过的试剂瓶中。加少量超纯水搅拌均匀后定容到标定的刻度线。配制结束后，在试剂瓶 瓶身贴好标签备用。计算公式：供试品浓度（mg / mL) =剂量（mg / kg) /灌胃容积（mL / kg),理论称样量（mg)=配制体积（mL) X供试品浓度（mg / mL)。
[0176] 表2.所需供试品浓度
[0177]
[0178] 10. 3. 4染毒途径、染毒周期及观察期
[0179] 根据人类对供试品的可能接触途径，采用灌胃方式经口染毒，配制的供试品使用 磁力搅拌器搅拌5min后开始给药，给药过程中需持续搅拌。给药容积为IOmL / kg体重。 给药前对动物进行称重，计算给药体积。使用量程为5mL、最小刻度为0. 2mL的一次性无菌 注射器进行灌胃，灌胃针头16G。给予含有相应浓度的供试品混悬液。动物分组当日给药， 给药前动物隔夜禁食，不禁水，滋胃后2h恢复进食。染毒一次,观察期为14天,症状均已恢 复,结束试验。试验结束时,剂量组1、剂量组2、剂量组3、剂量组4、剂量组5、剂量组6、剂 量组7按染毒末计划解剖动物号（见表3)进行大体解剖。
[0180] 表3计划解剖动物编号
[0181]
[0182] 10. 3. 5临床观察和检查
[0183] 1)症状观察
[0184] 给药后4h内严密观察，给药后第1天至第14天每天症状观察1次（染毒当日为 〇天）。观察和记录动物皮毛变化、眼和黏膜、呼吸系统、循环系统、神经系统变化，特别是肢 体活动和行为的改变。记录各动物的中毒症状及其发生和缓解、消失时间。发现动物死亡 后，记录死亡时间。
[0185] 每天上、下午各一次对动物进行两次死亡和濒死情况观察。
[0186] 2)体重称量
[0187] 给药当天、死亡时各称量一次体重，观察期间每3天称量一次。
[0188] 3)大体解剖
[0189] 所有的试验动物应进行大体解剖，试验过程中因濒死而处死的动物、死亡动物应 及时进行大体解剖，其他动物在观察期结束后处死并进行大体解剖。记录每只动物的大体 病理改变。
[0190] 10. 4数据处理
[0191] 10. 4. 1用bliss软件统计计算LD5tl值和可信限。
[0192] 11.结果与结论
[0193] 11. 1 结果
[0194] 11. 1. 1临床观察结果
[0195] 8个剂量组的临床症状见附表1。
[0196] 11. 1. 2动物死亡结果统计
[0197] 观察期剂量组5中雌性大鼠5只全部死亡，雄性大鼠死亡1只，剂量组4中雄性大 鼠死亡3只，雌性大鼠死亡4只，剂量组3中雄性大鼠无死亡，雌性大鼠死亡4只，剂量组2 中雄性大鼠无死亡，雌性大鼠死亡3只，剂量组1中雌雄大鼠都无死亡。追加剂量3000mg / kg雄性大鼠死亡3只、4000mg / kg雄性大鼠死亡4只、4500mg/kg雄性大鼠死亡5只。见 附表2。
[0198] 11. 1.3动物体重
[0199] 给药当天、死亡时各称量一次体重，观察期间每3天称量一次动物体重，见附表 3_4〇
[0200] 11. 1.4大体解剖结果
[0201] 试验动物进行大体解剖，未见异常。见附表5。
[0202] 11. 2 结论
[0203] 11 · 2. 1供试品的LD5tl值和可信限
[0204] 按照国家食品药品监督管理局《【H】GPT1_1化学药物急性毒性试验技术指导原则》 及预实验结果设计剂量进行试验，根据试验结果求得Pl对雌雄SD大鼠急性经口半数致死 剂量（LD 5tl)为：
[0205] 雄性大鼠：2648. 4mg / kg,可信限：2143. 4-3338. 4mg / kg
[0206] 雌性大鼠：1365. 9mg / kg,可信限：1037. 5-1662. 8mg/kg
[0207] 12.资料存档
[0208] 档案管理负责人：南震宇电话：50793648
[0209] 归档后，下列资料将在本机构档案室归档后保存10年；
[0210] ?试验计划书及其所有修改页；
[0211] ?原始记录；
[0212] ?最终报告等。
[0213] 此外，供试品留样归档后保存到供试品失效后。
[0214] 如需延长保存时间，由委托方和本机构协商决定具体事宜。
[0215] 13.试验偏离
[0216] 本试验按照计划书F13003和相关SOP进行，试验中未出现偏离。
[0217] 14.附表
[0218] 附表1.临床症状结果表
[0219]
[0222] 附表3.动物分组时体重对照表
[0223]
[0224] 注表示该动物未用于本试验。
[0225] 续附表3.动物分组时体重对照表
[0226]
[0227] 注表示该动物未用于本试验。
[0228] 附表4.动物体重变化表单位：g
[0229]
[0230] 注表示该动物已死亡。
[0231] 续附表4.动物体重变化表单位：g
[0232]
[0233] 注表示该动物已死亡。
[0234] 附表5.动物大体解剖结果表
[0235]
[0236] 续附表5.动物大体解剖结果表
【主权项】
1. 一种硒化茶多酚，具有如下结构：其中，R1为碱金属离子硒配合物；R2 = H，2. 根据权利要求1所述的硒化茶多酚，其中，3. 根据权利要求1所述的硒化茶多酚，其中，4. 根据权利要求1所述的硒化茶多酚，其中，该碱金属离子为镁离子。5. -种制备如权利要求1所述的硒化茶多酚的制备方法，包括： A. 将茶多酚至少与一种金属无机碱反应，获得茶多酚羟酸基盐；及 B. 将获得的所述茶多酚羟酸基盐与SeO2反应，获得所述的硒化茶多酚。6. 根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述步骤A中的该茶多酚纯度>98%。7. 根据权利要求5所述的硒化茶多酚的制备方法，其中，在所述步骤A中，茶多酚：金 属无机碱=1 : 〇. 1~〇. 5,反应温度为70°C~150°C，反应时间为IOOs~250s。8. 根据权利要求5所述的制备方法，其中，在所述步骤B中，茶多酚羟酸基盐：SeO2 = 1 : 0.2~0.5,反应温度为KKTC~250°C，反应时间为80s~300s。9. 根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述步骤A的金属无机碱为氢氧化钠，氢氧 化钾或氢氧化镁。10. -种制备如权利要求1所述的硒化茶多酚制剂的方法，包括： A. 将茶多酚至少与一种金属无机碱反应，获得茶多酚羟酸基盐； B. 将获得的所述茶多酚羟酸基盐与SeO2反应，获得所述的硒化茶多酚；及 C. 将获得的硒化茶多酚制备成胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液或散剂。11. 根据权利要求1所述的硒化茶多酚在制备保健食品、强化食品或药品的应用。
【专利摘要】一种高硒含量硒化茶多酚，具有如下结构：其中，R1为碱金属离子硒配合物；R2＝H，一种所述的高硒含量硒化茶多酚的制备方法，包括：A.将茶多酚至少与一种金属无机碱反应，获得茶多酚羟酸基盐；B.将获得的所述茶多酚羟酸基盐与SeO2反应，获得所述的高硒含量硒化茶多酚。
【IPC分类】A61P35/00, A61P37/02, A61K31/353, C07D311/62, A23L1/30
【公开号】CN104892558
【申请号】CN201410080979
【发明人】陈躬, 宋昆元
【申请人】上海爱启生态科技有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2014年3月6日
【公告号】WO2015131421A1
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种有机硒化合物，尤其是一种新型高硒含量、无毒型的有机硒化合 物一硒化茶多酚，可广泛用于保健营养产品、强化食品、药品、兽药等等领域。
【背景技术】
[0002] 目前随着经济的提升，人们对健康的认识和需求也在日益提高，而由环境恶化而 引发的多种疾病的增加却深深困扰着人们。于是人们追求预防疾病和增强保健的意识大大 增强，如中、美、日、韩等国服用保健品的人数逐年递增，如火如荼，形成数千亿元的巨大市 场。
[0003] 本世纪初以来，有机硒保健品方兴未艾，然而由于毒性的限制，目前全球市场的有 机硒保健品由于含硒量低，而未能充分发挥其作用，其优良而广谱的效果未能完美体现。因 此新型高硒含量、无毒型的有机硒化合物成为研究的热点和难点。
[0004] 茶多酚是从茶叶中提取的全天然有机化合物，无毒副作用、无异味等特点。茶多酚 (Tea Polyphenols，TP)是茶叶中多酚类物质的总称，包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄 酮醇类和酚酸类等。其中以黄烷醇类物质（儿茶素）最为重要。以儿茶素为主的黄烷醇类 化合物占茶多酚总量的60%- 80%，其中含量最高的几种组分为：L-EGCG(50% -60% )、 L-EGC(15% -20% )、L-ECG(10% -15% )和 L-EC(5% -10% )。茶多酚又称茶鞣或茶单宁， 是形成茶叶色香味的主要成份之一，也是茶叶中有保健功能的主要成份之一。茶多酚结构 中大量的多酚羟基极易被氧化为醌类而产生H+，故有强抗氧化能力。清除自由基和抗氧化 作用是TP最重要的生物特性，是其抑癌抗癌药理作用的基础。
[0005] 茶多酚的分子式为C17H19N3O,分子量为281. 36 ;其结构简式如下：
[0006]
i中，R1 = H，〇H，R2 = H
[0007] 全球研究茶多酚已有百多年历史，长期的研究、分析、实践应用，已知茶多酚有以 下功能：
[0008] 1、消除有害自由基；
[0009] 2、很强的抗氧化作用；
[0010] 3、抗衰老作用；
[0011] 4、抗辐射作用；
[0012] 5、抗肿瘤对癌细胞的抑制作用；
[0013] 6、抗菌杀菌、抗病毒作用；
[0014] 7、抗动脉粥样硬化；
[0015] 8、增强心脏功能；
[0016] 9、抗心律失常；
[0017] 10、防治脑缺血再灌注损伤；
[0018] 11、抗蛀护齿；
[0019] 12、美白皮肤、减少皱纹。
[0020] 2013年仅欧、美、日等诸国消耗高纯度茶多酚约1200余吨，主要用于健康食品、保 健品及药品助剂。
[0021] 众所周知，硒作为防病治病、有益健康的人体必需元素，与四十多种重大疾病密切 相关，在发达地区已为大众所认识。而如何提高有机硒的硒含量同时降低其毒性更为专业 内外人士所关切，新型高硒含量、无毒型的有机硒化合物一硒化茶多酚应运而生。
【发明内容】
[0022] 本发明的目的在于提供一种高硒含量的硒化茶多酚，其以碱金属离子硒配合物为 功能团，硒含量达23. 4%，从而提高了消除自由基、抗氧化、抗肿瘤的效果。
[0023] 本发明的又一目的在于提供一种无毒性的硒化茶多酚，在提高硒含量的同时，通 过工艺的改进，降低硒化茶多酚的毒性，从而减小副作用。
[0024] 本发明的又一目的在于提供一种高硒含量硒化茶多酚的制备方法。
[0025] 为达到以上目的，本发明提供一种高硒含量硒化茶多酚，具有如下结构：
[0026]
[0029] 优选的
[0030] 优选的，该碱金属离子为镁离子。
[0031] 一种所述的高硒含量硒化茶多酚的制备方法，包括：
[0032] A.将茶多酚至少与一种金属无机碱反应，获得茶多酚羟酸基盐；及
[0033] B.将获得的所述茶多酚羟酸基盐与SeO2反应，获得所述的高硒含量硒化茶多酚。
[0034] 优选的，所述步骤A中的该茶多酚纯度> 98%。
[0035] 优选的，在所述步骤A中，茶多酚：金属无机碱=1 :0. 1~0. 5,反应温度为70°C~ 150°C，反应时间为IOOs~250s。
[0036] 优选的，在所述步骤B中，茶多酚羟酸基盐：SeO2=I :0.2~0.5,反应温度为 100°C~250°C，反应时间为80s~300s。
[0037] 优选的，所述步骤A的金属无机碱为氢氧化钠，氢氧化钾或氢氧化镁。
[0038] 根据本发明的制备方法获得的高硒含量硒化茶多酚，可进一步制备成高硒含量 硒化茶多酚制剂，如：胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液、散剂等，以满足不同的给药需求。
[0039] 本发明中的硒化茶多酚含硒量高，且无毒性，可用于制备成保健营养产品、强化食 品、药品等。
[0040] 所述高硒含量硒化茶多酚可应用于癌症的治疗，杀灭癌细胞，提高人体免疫力。
[0041] 本发明的有益效果：本发明的硒化茶多酚在无毒性和高含量两者之间达到了高度 地和谐，在保持茶多酚基本结构的同时，嵌入硒配合物功能基团，通过这种配方和工艺制备 而成的硒化茶多酚，系一种新化合物，突破性地使功能强大而广谱的二种化合物有机地合 而为一，在保留原生化功能之上，进一步强化了有机硒的高含量无毒特色，成为保健营养产 品、强化食品、药品、兽药等领域的生力军。
[0042] 本发明的这些目的，特点，和优点将会在下面的【具体实施方式】，附图，和权利要求 中详细的揭露。
【附图说明】
[0043] 图1为根据本发明实施例获得的以碱金属离子硒配合物为功能团的硒化茶多酚 的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0044] 根据本发明的一个较佳实施例，一种高硒含量（硒含量：23. 4% )硒化茶多酚，包 括茶多酚羟酸基盐，以碱金属离子硒配合物为功能团。
[0045] -种高硒含量硒化茶多酚，具有如下结构：
[0046]
[0050] 优选的，该碱金属离子为镁离子。一种所述的高硒含量硒化茶多酚的制备方法，包 括：
[0051] A.将茶多酚至少与一种金属无机碱反应，获得茶多酚羟酸基盐；及
[0052] B.将获得的所述茶多酚羟酸基盐与SeO2反应，获得所述的高硒含量硒化茶多酚。
[0053] 优选的，步骤A中的该茶多酚纯度彡98%。
[0054] 优选的，在步骤A中，茶多酚：金属无机碱=1 :0.1~0.5,反应温度为70°C~ 150°C，反应时间为IOOs~250s。
[0055] 优选的，在步骤B中，茶多酚羟酸基盐：SeO2=I :0. 2~0. 5,反应温度为KKTC~ 250°C，反应时间为80s~300s。
[0056] 优选的，所述步骤A的金属无机碱为氢氧化钠，氢氧化钾或氢氧化镁。
[0057] 根据本发明的制备方法获得的高硒含量硒化茶多酚，可进一步制备成高硒含量硒 化茶多酚制剂，如：胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液、散剂等，以满足不同的给药需求；制备方 法如下所述。
[0058] -种制备硒化茶多酚制剂的方法，包括：
[0059] A.将茶多酚至少与一种金属无机碱反应，获得茶多酚羟酸基盐；
[0060] B.将获得的所述茶多酚羟酸基盐与SeO2反应，获得所述的硒化茶多酚；及 [0061] C.将获得的硒化茶多酚制备成胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液或散剂。
[0062] 本发明中的硒化茶多酚含硒量高，且无毒性，可用于制备成保健营养产品、强化食 品、药品等。
[0063] 实施例1
[0064] A.将纯度为98 %的茶多酚与氢氧化钠反应，茶多酚：氢氧化钠=1 :0. 3,反应温度 为l〇〇°C，反应时间为150s，获得茶多酚羟酸基钠；
[0065] B.将获得的所述茶多酚羟酸基钠与SeO2反应，茶多酚羟酸基钠：SeO2=I :0. 4,反应 温度为150°C，反应时间为200s，获得高硒含量硒化茶多酚。
[0066] 实施例2.
[0067] A.将纯度为98 %的茶多酚与氢氧化钾反应，茶多酚：氢氧化钾=1 : 0. 5,反应温 度为130°C，反应时间为200s，获得茶多酚羟酸基钾；
[0068] B.将获得的所述茶多酚羟酸基钾与SeO2反应，茶多酚羟酸基钾：SeO2=I :0. 5,反应 温度为200°C，反应时间为280s，获得高硒含量硒化茶多酚。
[0069] 实施例3
[0070] A.将纯度为99%的茶多酚与氢氧化镁，茶多酚：氢氧化镁=1 :0. 2,反应温度为 80°C，反应时间为120s，获得茶多酚羟酸基镁；
[0071] B.将获得的所述茶多酚羟酸基镁与SeO2反应，茶多酚羟酸基镁：SeO2=I :0. 3,反应 温度为KKTC，反应时间为100s，获得高硒含量硒化茶多酚。
[0072] 通过上述实施例，本发明的目的已经被完全有效的达到了。熟悉该项技艺的人士 应该明白本发明包括但不限于附图和上面【具体实施方式】中描述的内容。任何不偏离本发明 的功能和结构原理的修改都将包括在权利要求书的范围中。
[0073] 以下为Pl大鼠急性经口毒性试验，其中Pl为根据本发明实施例1所得的硒化茶 多酚。
[0074] 摘要
[0075] 目的：观察大鼠灌胃受试物Pl后的中毒反应及死亡情况，用于初步评价受试物Pl 安全性。
[0076] 方法：挑选健康的50只SD大鼠为试验动物，雌雄各半，随机分为S组，分别为剂 量组 I (1000 mg / kg)、剂量组 2 (1280mg/kg)、剂量组 3 (1600mg / kg)、剂量组 4 (2000mg / kg)、剂量组5(2500mg / kg)。每组各10只动物，雌雌各半。其后追加三个剂量：3000mg / kg、4000mg / kg、4500mg/kg，每个剂量各5只雄鼠。禁食不禁水过夜后，大鼠均按lml/100g bw灌胃给药一次。给药后4h内严密观察动物出现的反应及死亡情况。然后每天上、下午各 一次对动物进行死亡和濒死情况观察，连续观察14天。动物死亡及时剖检，其他动物在观 察期结束后进行大体解剖，记录每只动物的大体病理改变。
[0077] 结果：（1)大鼠灌服Pl后，观察期剂量组5中雌性大鼠5只全部死亡，雄性大鼠死 亡1只，剂量组4中雄性大鼠死亡3只，雌性大鼠死亡4只，剂量组3中雄性大鼠无死亡，雌 性大鼠死亡4只，剂量组2中雄性大鼠无死亡，雌性大鼠死亡3只，剂量组1中雌雄大鼠都 无死亡。追加剂量3000mg/kg雄性大鼠死亡3只、4000mg/kg雄性大鼠死亡4只、4500mg / kg雄性大鼠死亡5只。（2) 14天观察期结束后进行剖检，未见异常。
[0078] 结论：按照国家食品药品监督管理局《【H】GPTl-I化学药物急性毒性试验技术指 导原则》及预实验结果设计剂量进行试验，根据试验结果求得Pl对雌雄SD大鼠急性经口半 数致死剂量（LD 5tl)为：
[0079] 雄性大鼠；2648. 4mg/kg，可信限：2143. 4-3338. 4mg / kg
[0080] 雌性大鼠：1365. 9mg / kg，可信限：1037. 5-1662. 8mg/kg
[0081] 1.试验题目
[0082] Pl大鼠急性经口毒性试验。
[0083] 2.试验目的
[0084] 研究Pl对大鼠的急性经口半数致死剂量（LD5tl)同时为亚慢性和慢性毒理学研究 中剂量设计提供依据。
[0085] 3.准则和参考文献
[0086] 本试验参照国家食品药品监督管理局《【H】 GPTl-I化学药物急性毒性试验技术指 导原则》为准则。
[0087] 4.试验机构
[0088] 试验机构：上海西普尔-必凯实验动物有限公司
[0089] 地址：上海市浦东新区金科路3577号
[0090] 邮编：201203
[0091] 电话：021-50793648
[0092] 传真：（〇21) 5O793M5
[0093] 5.委托单位及联系人
[0094] 委托单位：上海爱启医药技术有限公司
[0095] 地址：上海市张江高科技园区蔡伦路781号1110室
[0096] 联系人：宋荻讳
[0097] 联系方式：I3386238676
[0098] 6.机构负责人、项目负责人及试验相关人员
[0099] 机构负责人：陈国强
[0100] 地址：金科路3577号邮编：201203
[0101] 电话：50793648 Email :[email protected]· org. cn
[0102] 项目负责人：李伟
[0103] 地址：金科路3577号邮编：201203
[0104] 电话：50793648 Email :[email protected]· org. cn
[0105] 饲育管理负责人：金益
[0106] 地址：金科路3577号邮编：201203
[0107] 电话：50793648 Email :[email protected]· org. cn
[0108] 供试品管理负责人：朱晓君
[0109] 电话：5〇793648 Email :[email protected]· org. cn
[0110] 档案管理负责人：南震宇
[0111] 电话：50793648 Email :[email protected]· org. cn
[0112] 症状观察人员：李伟、施祎锴、刘磊等
[0113] 7.质量保证
[0114] QAU负责人：赵莖
[0115] 地址：金科路3577号邮编：201203
[0116] 电话：5079364 8Email :[email protected]· org. cn
[0117] 8.供试品和溶媒
[0118] 8.1供试品
[0119] 中文名：P1
[0120] 英文名：P1
[0121] 批号：20130903
[0122] CAS号：委托方未提供
[0123] 物理性状：固体粉末
[0124] 纯度：委托方未提供
[0125] 提供单位：上海爱启医药披术有限公司
[0126] 提供日期：20130903
[0127] 失效期：20150903
[0128] 接收总量：（包括容器重）112. 9723g
[0129] 防护措施：接触供试品的人员应采取适当的防护措施，包括口罩、帽子、手套、工作 服等。
[0130] 贮存条件：室温保存。
[0131] 贮存地点：本机构供试品室。
[0132] 稳定性：委托方确认供试品在存储温度下稳定。
[0133] 剩余供试品处理：试验结束后，剩余供试品返还供试品室，按SOP处理。
[0134] 8. 2 溶媒
[0135] 名称：超纯水
[0136] 9.试验日程
[0137] 试验启动：2013年09月11日
[0138] 引鼠日期：2013年09月13日
[0139] 试验开始：2013年09月26日
[0140] 试验结束：2013年12月22日
[0141] 报告草稿：2014年01月06日
[0142] 最终报告：2014年01月09日
[0143] 10.材料与方法
[0144] 10. 1试验体系
[0145] 种类：大鼠
[0146] 品系：SD (Sprague Dawley)
[0147] 等级：SPF级，参照中华人民共和国国家标准《GB14922. 2-2011实验动物微生物学 等级监测》。
[0148] 提供单位：上海西普尔-必凯实验动物有限公司
[0149] 实验动物生产许可证号：SCXK (沪）2008-0016、SCXK (沪）2013-0016
[0150] 实验动物质量合格证号：2008001634761、2008001635380、2008001636435
[0151] 选择理由：大鼠为此类急性毒性试验的公认首选动物，其遗传性状稳定，背景数据 清晰。
[0152] 动物要求：未曾交配，动物健康，符合实验动物质量要求。
[0153] 动物数：引入动物数80只，雌27只，雄53只：使用动物数65只，雌25只，雄40 只。
[0154] 体重：引入时雄性动物体重范围110_130g，雌性动物体重范围130_150g。
[0155] 健康检查与适应：动物引入后24小时内进行健康检查，未见异常表现的动物。适 应期每笼5只动物，适应时间7-13天。
[0156] 10. 2试验条件
[0157] 饲育条件：试验场所在本单位三号楼屏障系统3139室2008042-ZYZX饲育 架的层一、层二、层三、层四、层五，实验动物使用许可证号：SYXK (沪）2008-0058、 SYXK(沪）2013-0058。受试动物饲养于塑料笼具内，适应期动物饲养于规格为 L38. 00cmXW32. 5cmXH17. 5cm的笼具内，笼具放置于饲育架上，饲育架分7层，每层6个笼 具，饲育架规格为L167. 0cmXW70. 0cmXH171. 0cm。给药后5只1笼饲育。
[0158] 动物房每日使用消毒液擦拭房间地面（消毒液每周更换）。笼具每周更换一次。 用塑料水瓶给水.自由饮水和采食。
[0159] 环境条件：动物室（L6. 2mXW5. 8mXH2. 7m)通过空调机组吸入新鲜空气和 大气排风维持正压：温度为20-26°C，相对湿度为40-70% (房间清洁期除外）：照明： 彡200Lux(明暗各12小时），噪音在60dB以下；换气次数：彡15次/小时：落下菌数在3 个以下（无动物时，直径9cm平皿暴露30分钟）。
[0160] 摄食及饮水：动物饲料为全价营养固体料，由上海西普尔-必凯实验动物有限公 司提供，经高压蒸汽灭菌后给实验动物食用。提供饲料质量检测报告，饲料营养成分和污染 物含量符合国标《GB14924. 3-2010实验动物配合饲料营养成分》。
[0161] 饮水为本单位净水系统制备的过滤水。水质委托上海谱尼测试技术有限公司检 测，检测指标符合《GB5749-2006生活饮用水卫生标准》。
[0162] 动物福利：分组后剩余动物用于其它试验或处以安乐死，试验中濒死动物和试验 结束时存活动物处以安乐死，安乐死均采用二氧化碳窒息方法，尸体委托上海市动物无害 化处理中心处理。
[0163] 10. 3试验方法
[0164] 10. 3.1剂量设计
[0165] 设计5个剂量组，分别为剂量组l(1000mg / kg)、剂量组2(1280mg/kg)、剂量 组3(1600mg / kg)、剂量组4(2000mg / kg)、剂量组5(2500mg/kg)。其后追加两个剂量： 3000mg / kg、4000mg / kg、4500mg / kg。动物分别灌胃给予 26mg / mL、43.2mg / mL、 72mg/mL、120mg / mL、200mg / mL、250mg / mL、300mg / mL、400mg/mL、450mg / mL 的供试 品混悬液，灌胃容积为 Iml / 100g bw，染毒I次。
[0166] 剂量设计依据：按照国家食品药品监督管理局《【H】GPT1_1化学药物急性毒性试 验披术指导原则》及预实验结果设计剂量。预实验中每个剂量经口染毒雌雄各2只，结果显 示2500mg / kg的4只动物全部死亡，2000mg / kg的1只动物死亡，1000 mg / kg的4只 动物无死亡，200mg / kg的4只动物无死亡，因此正式试验在1000 mg / kg与2500mg / kg 之间设计5个剂量。后因雄性大鼠高剂量未完全死亡，先后又追加3000mg / kg、4000mg / kg、4500mg / kg 三个剂量。
[0167] 10. 3. 2动物分组
[0168] 适应期结束后对动物分组。
[0169] 分组方法：适应期结束后对所有动物进行称重并计算平均体重。选取一般状态良 好，各剂量组内同性别动物体重差异小于平均体重的10%，组间同性别动物体重均值差异 小于5%，标识动物作为原始编码，按照体重从大到小排列，每5只动物分为1个小组，随机 从已划分的"5段"中，每段选取1只动物，组成某个剂量组，记录下选定后的动物新编码（新 编码随机编写，不以体重升序或降序排列）。按原始编码抓取动物，在分组表中找到相应的 组别及新编码，依次放到对应的组内。
[0170] 动物标识：身份识别采用笼卡、苦味酸被毛染色和耳号标记识别。笼卡标识显示动 物编号和剂量组，被毛标识显示组内动物编号的个位0-9,耳号标记显示组内动物编号的个 位0-9和识别组别。剂量设计与动物分组见表1。
[0171] 表1.剂量设计与动物分组表
[0172]
[0173] 10. 3. 3供试品配制
[0174] 使用纯水在试剂瓶上标定相应刻度（40mL或IOmL)，备用。
[0175] 染毒前1天配制供试品。按照剂量设计计算理论称样量，分别称取供试品置于标 定过的试剂瓶中。加少量超纯水搅拌均匀后定容到标定的刻度线。配制结束后，在试剂瓶 瓶身贴好标签备用。计算公式：供试品浓度（mg / mL) =剂量（mg / kg) /灌胃容积（mL / kg),理论称样量（mg)=配制体积（mL) X供试品浓度（mg / mL)。
[0176] 表2.所需供试品浓度
[0177]
[0178] 10. 3. 4染毒途径、染毒周期及观察期
[0179] 根据人类对供试品的可能接触途径，采用灌胃方式经口染毒，配制的供试品使用 磁力搅拌器搅拌5min后开始给药，给药过程中需持续搅拌。给药容积为IOmL / kg体重。 给药前对动物进行称重，计算给药体积。使用量程为5mL、最小刻度为0. 2mL的一次性无菌 注射器进行灌胃，灌胃针头16G。给予含有相应浓度的供试品混悬液。动物分组当日给药， 给药前动物隔夜禁食，不禁水，滋胃后2h恢复进食。染毒一次,观察期为14天,症状均已恢 复,结束试验。试验结束时,剂量组1、剂量组2、剂量组3、剂量组4、剂量组5、剂量组6、剂 量组7按染毒末计划解剖动物号（见表3)进行大体解剖。
[0180] 表3计划解剖动物编号
[0181]
[0182] 10. 3. 5临床观察和检查
[0183] 1)症状观察
[0184] 给药后4h内严密观察，给药后第1天至第14天每天症状观察1次（染毒当日为 〇天）。观察和记录动物皮毛变化、眼和黏膜、呼吸系统、循环系统、神经系统变化，特别是肢 体活动和行为的改变。记录各动物的中毒症状及其发生和缓解、消失时间。发现动物死亡 后，记录死亡时间。
[0185] 每天上、下午各一次对动物进行两次死亡和濒死情况观察。
[0186] 2)体重称量
[0187] 给药当天、死亡时各称量一次体重，观察期间每3天称量一次。
[0188] 3)大体解剖
[0189] 所有的试验动物应进行大体解剖，试验过程中因濒死而处死的动物、死亡动物应 及时进行大体解剖，其他动物在观察期结束后处死并进行大体解剖。记录每只动物的大体 病理改变。
[0190] 10. 4数据处理
[0191] 10. 4. 1用bliss软件统计计算LD5tl值和可信限。
[0192] 11.结果与结论
[0193] 11. 1 结果
[0194] 11. 1. 1临床观察结果
[0195] 8个剂量组的临床症状见附表1。
[0196] 11. 1. 2动物死亡结果统计
[0197] 观察期剂量组5中雌性大鼠5只全部死亡，雄性大鼠死亡1只，剂量组4中雄性大 鼠死亡3只，雌性大鼠死亡4只，剂量组3中雄性大鼠无死亡，雌性大鼠死亡4只，剂量组2 中雄性大鼠无死亡，雌性大鼠死亡3只，剂量组1中雌雄大鼠都无死亡。追加剂量3000mg / kg雄性大鼠死亡3只、4000mg / kg雄性大鼠死亡4只、4500mg/kg雄性大鼠死亡5只。见 附表2。
[0198] 11. 1.3动物体重
[0199] 给药当天、死亡时各称量一次体重，观察期间每3天称量一次动物体重，见附表 3_4〇
[0200] 11. 1.4大体解剖结果
[0201] 试验动物进行大体解剖，未见异常。见附表5。
[0202] 11. 2 结论
[0203] 11 · 2. 1供试品的LD5tl值和可信限
[0204] 按照国家食品药品监督管理局《【H】GPT1_1化学药物急性毒性试验技术指导原则》 及预实验结果设计剂量进行试验，根据试验结果求得Pl对雌雄SD大鼠急性经口半数致死 剂量（LD 5tl)为：
[0205] 雄性大鼠：2648. 4mg / kg,可信限：2143. 4-3338. 4mg / kg
[0206] 雌性大鼠：1365. 9mg / kg,可信限：1037. 5-1662. 8mg/kg
[0207] 12.资料存档
[0208] 档案管理负责人：南震宇电话：50793648
[0209] 归档后，下列资料将在本机构档案室归档后保存10年；
[0210] ?试验计划书及其所有修改页；
[0211] ?原始记录；
[0212] ?最终报告等。
[0213] 此外，供试品留样归档后保存到供试品失效后。
[0214] 如需延长保存时间，由委托方和本机构协商决定具体事宜。
[0215] 13.试验偏离
[0216] 本试验按照计划书F13003和相关SOP进行，试验中未出现偏离。
[0217] 14.附表
[0218] 附表1.临床症状结果表
[0219]
[0222] 附表3.动物分组时体重对照表
[0223]
[0224] 注表示该动物未用于本试验。
[0225] 续附表3.动物分组时体重对照表
[0226]
[0227] 注表示该动物未用于本试验。
[0228] 附表4.动物体重变化表单位：g
[0229]
[0230] 注表示该动物已死亡。
[0231] 续附表4.动物体重变化表单位：g
[0232]
[0233] 注表示该动物已死亡。
[0234] 附表5.动物大体解剖结果表
[0235]
[0236] 续附表5.动物大体解剖结果表
【主权项】
1. 一种硒化茶多酚，具有如下结构：其中，R1为碱金属离子硒配合物；R2 = H，2. 根据权利要求1所述的硒化茶多酚，其中，3. 根据权利要求1所述的硒化茶多酚，其中，4. 根据权利要求1所述的硒化茶多酚，其中，该碱金属离子为镁离子。5. -种制备如权利要求1所述的硒化茶多酚的制备方法，包括： A. 将茶多酚至少与一种金属无机碱反应，获得茶多酚羟酸基盐；及 B. 将获得的所述茶多酚羟酸基盐与SeO2反应，获得所述的硒化茶多酚。6. 根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述步骤A中的该茶多酚纯度>98%。7. 根据权利要求5所述的硒化茶多酚的制备方法，其中，在所述步骤A中，茶多酚：金 属无机碱=1 : 〇. 1~〇. 5,反应温度为70°C~150°C，反应时间为IOOs~250s。8. 根据权利要求5所述的制备方法，其中，在所述步骤B中，茶多酚羟酸基盐：SeO2 = 1 : 0.2~0.5,反应温度为KKTC~250°C，反应时间为80s~300s。9. 根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述步骤A的金属无机碱为氢氧化钠，氢氧 化钾或氢氧化镁。10. -种制备如权利要求1所述的硒化茶多酚制剂的方法，包括： A. 将茶多酚至少与一种金属无机碱反应，获得茶多酚羟酸基盐； B. 将获得的所述茶多酚羟酸基盐与SeO2反应，获得所述的硒化茶多酚；及 C. 将获得的硒化茶多酚制备成胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液或散剂。11. 根据权利要求1所述的硒化茶多酚在制备保健食品、强化食品或药品的应用。
【专利摘要】一种高硒含量硒化茶多酚，具有如下结构：其中，R1为碱金属离子硒配合物；R2＝H，一种所述的高硒含量硒化茶多酚的制备方法，包括：A.将茶多酚至少与一种金属无机碱反应，获得茶多酚羟酸基盐；B.将获得的所述茶多酚羟酸基盐与SeO2反应，获得所述的高硒含量硒化茶多酚。
【IPC分类】A61P35/00, A61P37/02, A61K31/353, C07D311/62, A23L1/30
【公开号】CN104892558
【申请号】CN201410080979
【发明人】陈躬, 宋昆元
【申请人】上海爱启生态科技有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2014年3月6日
【公告号】WO2015131421A1
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