一种新型的cdk4抑制剂的合成方法
一种新型的cdk4抑制剂的合成方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药领域，尤其涉及一种新型的⑶K4抑制剂的合成方法。
【背景技术】
[0002]
[0003] 帕博昔里布（Palbociclib)，化学名6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-(5-哌 嗪-1-基-吡啶-2-基氨基）-8H-吡啶并[2, 3-d]嘧啶-7-酮，美国化学文摘登记号CAS : 571190-30-2,结构：
[0004]
[0005] 帕博昔里布是一种口服细胞周期素依赖性激酶（⑶Ks) 4/6抑制剂。⑶Ks 4/6是细 胞周期的关键调节因素，其能够触发细胞周期进展。IBRANCE在美国的适应症为联合来曲唑 用于治疗雌激素受体阳性，人类表皮生长因子受体2阴性（ER+/HER2-)绝经后晚期乳腺癌 患者，作为初始的内分泌治疗为基础的方案治疗转移性疾病。
[0006] FDA给予IBRANCE突破性治疗认定和优先审评项目基础上审评并批准了 IBRANCE 并且在基于其无进展生存期（PFS)加速批准了这一适应症。同时也将根据验证临床研宄能 否验证和描述临床获益而决定是否给予持续批准。其3期验证临床试验，PAL0MA-2,已经完 成入组。。
[0007] 目前，国际文献所有公开的帕博昔里布的制备方法及类似方法不多，大部分 专利所述研发路线相似，并有下列文献报道：CN200780033416. I ;W02014128588A1 ; W02014183520A1。
[0008] 2007年公开的中国专利CN200780033416. 1和W02014128588A1提供了制备帕博昔 里布的合成路线。
[0009] 该路线先以5-溴-2,4-二氯嘧啶为原料通过与环戊胺缩合制得制备化合物1，1 在四氢呋喃中与巴豆酸进行heck偶联、缩合制备化合物2,2与NBS进行羰基α溴代，制得 关键化合物3。
[0010]
[0011] 再以5-溴-2-硝基吡啶为原料在DMSO中与Boc哌嗪缩合生成化合物，4在异丙醇 中氢化还原硝基制得另一关键化合物5。中间体3与中间体5在有机镁或有机锂试剂存在 下发生缩合制备化合物6,6与乙烯基丁醚再次进行heck反应制备化合物7, 7在酸性条件 下脱去保护，经碱化制得目标化合物I。
[0012] 2014年公开的世界专利W02014128588A1中披露了一条关于帕博昔里布相似化合 物6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-( (1，2, 3,6-四氢-[3,4-联吡啶]-6-基）氨基）吡 啶并[2, 3-d]嘧啶-7 (8H)-酮合成路线：
[0013]
[0014] 该路线中所制备的目标化合物与帕博昔里布结构基本相似，不同基团对反应影响 较小，也是以5-溴-2,4-二氯嘧啶为原料通过与环戊胺缩合制得制备化合物1，1在四氢呋 喃中与巴豆酸进行heck偶联、缩合制备化合物2,2与NBS进行羰基α溴代，制得化合物3。 3在DMF溶液中与氨水反应制备关键化合物8,8与乙烯基丁醚进行heck反应生制备化合 物9.在同时用5-溴-氯吡啶与4-(4,4,5,5，_四甲基-1，3,2-二氧杂戊硼烷-2-基）-5， 6-二氢吡啶-1-(2H)_羧酸叔丁酯在二氧六环和水的混合液中，在[1，1_双（二苯基膦）二 茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物催化下反应得到另一关键化合物10,10在与9进过缩合反 应生成化合物11，11在酸性条件下脱去保护，经碱化制得目标化合物12。
[0015] CN03802556.6, CN200480023494.X， CN200780033416.1， CN201010255766.6， CN201110115074. 6，EP1740184A1等文献介绍了一种帕博昔里布的合成方法，其合成路线如 下：
[0016]
[0017] 综上所述，在制备帕博昔里布的过程中存在如下缺陷；中间体制备收率过低，且使 用了很多复杂的贵金属辅助试剂，和对反应条件苛刻的有机金属试剂，不易于工业化生产。 本方法成功的改变了上述路线的缺陷，缩短了合成路线且采用价格更为廉价，易于购买和 运输的试剂，操作简单，产品的收率稳定，纯度高。
【发明内容】
[0018] 本发明的目的在于提供一种纯度高、收率高成本底，操作简单的帕博昔里布的制 备方法。该方法原料来源便捷。产品的质量易于控制。合成路线如下：
[0019]
[0020] 该方法具体操作分为以下几个步骤：
[0021] 步骤1 :将2-氯-8-环戊基-5-甲基-8H-吡啶并[2, 3-d]嘧啶-7-酮与乙酰氯 反应，在无水氯化铝作用下，在氯仿溶液中反应4-5小时，料液加入稀盐酸中，分液，有机相 水洗，碱洗，水洗，干燥，过滤浓缩得油状残留物中间体化合物（1)，无需纯化也可用于下一 步反应。
[0022] 步骤2 :将中间体（1)、碳酸钾和4-(6-氨基-吡啶-3-基）-哌嗪-1-羧酸叔丁 酯加入到DMF中，搅拌升温，80°C反应3-4小时。降至室温，将料液加入水中，析出亮黄色固 体，过滤，滤饼水洗，用DMSO溶解，结晶得中间体化合物（2)。
[0023] 步骤3 :中间体⑵加入丙酮和水，加入浓盐酸。升温40-50°C，反应6-12小时。 加入三乙胺，析出固体，用正丁醇和苯甲醚重结晶得化合物I帕博昔里布。
[0024] 优选，步骤1中使用氯仿作为反应溶剂。
[0025] 优选，步骤1中试用无水氯化铝作为催化剂。
[0026] 优选，步骤1中的反应温度应控制在0_70°C
[0027] 优选，步骤2中使用DMF(N，N-二甲基甲酰胺）作为反应溶剂。
[0028] 优选，步骤2中使用碳酸钾作为缚酸剂。
[0029] 优选，步骤2中的反应温度控制在80-90°C。
[0030] 优选，步骤2中的结晶溶剂为DMSO(二甲基亚砜）。
[0031] 优选，步骤3中使用丙酮水作为反应溶剂。
[0032] 优选，步骤3中选用的酸为浓盐酸。
[0033] 优选，步骤3中选用的胺为三乙胺。
[0034] 优选，步骤3中选用正丁醇和苯甲醚混合物比例优选20 : 20。
[0035] 2-氯-8-环戊基-5-甲基-8H-吡啶并[2, 3-d]嘧啶-7-酮，CAS 号：1013916-37-4
[0036]
[0037] 4-(6-氨基吡啶-3-基）哌嗪-1-羧酸叔丁酯，CAS号：571188-59-5
[0038]
[0039] 将本发明的结晶本身或剂型制成药品，本发明作为抗肿瘤剂，能够治疗乳腺癌。
[0040] 将本发明的结晶的剂型制成药品，将结晶与适当的辅料添加剂混合，制成制剂。 [0041 ] 本发明的优选制剂是：片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、含片剂、等口服制剂。
[0042] 优选的辅料是：赋形剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、矫味矫嗅剂、乳化剂、表 面活性剂、助溶剂、混悬化剂、等渗剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、稳定剂、吸收促进剂等。
[0043] 优选的赋形剂是：乳糖、白糖、葡萄糖、玉米淀粉、甘露醇、山梨糖醇、淀粉、α淀 粉、糊精、结晶纤维素、轻质硅酸酐、硅酸铝、硅酸钙、硅酸铝酸镁、磷酸氢钙等。
[0044] 优选的粘合剂是：聚乙烯醇、甲基纤维素、乙基纤维素、阿拉伯胶、黄耆胶、明胶、虫 胶、羟丙甲基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙二醇等。
[0045] 优选的润滑剂是：硬脂酸镁、硬脂酸钙、富马酸十八酯钠、滑石、聚乙二醇、胶态二 氧化硅等。
[0046] 优选的崩解剂是：结晶纤维素、琼脂、明胶、碳酸妈、碳酸氢钠、柠檬酸钙、糊精、果 胶、低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀 粉、羧甲基淀粉钠等。
[0047] 优选的着色剂是：三氧化二铁、黄色三氧化二铁、胭脂红、焦糖、β_胡萝卜素、氧 化钛、滑石、磷酸核黄素钠等。
[0048] 优选的矫味剂是：可可粉、薄荷醇、薄荷油、冰片、桂皮粉等。
[0049] 优选的乳化剂或表面活性剂是：十八烷基三乙醇胺、十二烷基硫酸钠、十二烷基氨 基丙酸、卵磷脂、甘油单硬脂酸酯、蔗糖脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯等。
[0050] 优选的助溶剂是：聚乙二醇、丙二醇、安息香酸苄酯、乙醇、胆固醇、三乙醇胺、碳酸 钠、柠檬酸钠、吐温80、烟酰胺等。
[0051] 优选的混悬剂是：聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙 基纤维素、羟丙基纤维素等亲水性高分子。
[0052] 优选的等渗剂是：葡萄糖、氯化钠、甘露醇、山梨糖醇等。
[0053] 优选的缓冲剂是：磷酸盐、柠檬酸盐等缓冲液。
[0054] 优选的防腐剂是：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯丁醇、苄醇、苯乙醇、 脱氢乙酸、山梨酸等。
[0055] 优选的抗氧化剂是：亚硫酸盐、抗坏血酸、α -生育酚等。
[0056] 本发明提供一种帕博昔里布缓释制剂的制备方法，包括如下步骤：
[0057] 帕博昔里布 50-200mg 磷酸二氢钠 1-4mg 磷酸氢二钠 0. 5_2mg 羟丙甲纤维素 20-200mg 微晶纤维素 10-60mg 硬脂酸镁 l-6mg。
[0058] 本发明提供一种帕博昔里布缓释制剂：
[0059] 帕博昔里布 50-200mg 磷酸二氢钠 l-4mg 磷酸氢二钠 0. 5-2mg 轻丙甲纤维素 50-200mg 泊洛沙姆 10-6〇mg 硬脂酸镁 l-6mg。
[0060] 制备工艺可以为：将主药和辅料分别过100目筛。将主药和除硬脂酸镁之外的辅 料混合均匀，以70%乙醇制软材，16目制粒，50°C干燥，16目整粒，加入硬脂酸镁作为缓释 部分颗粒；在压片机上制备此帕博昔里布的缓释片。
[0061] 本发明提供的帕博昔里布缓释片系统配方及其制备方法，制成一口服缓释制剂产 品，使得帕博昔里布在口服后，在人体系统中缓慢释放，维持血药浓度，从而使得每天服用 一次本缓释制剂产品即可维持一天的血药浓度。 具体实施例
[0062] 实施例只是本发明的一种较佳方案，并非对苯发明作任何上的限制，在不超出要 求所记载的技术方案的前提下还有其他的变形计改型。
[0063] 实 施例1 :中间体⑴的合成
[0064] 向反应瓶中加入13. 2g2-氯-8-环戊基-5-甲基-8H-吡啶并[2, 3-d]嘧啶-7-酮、 6. 2g乙酰氯，65ml氯仿，搅拌使之溶解，降温至0°C，向体系中加入IOg无水氯化铝，保温 l〇°C反应1小时，升温至60°C，继续反应4小时。TLC监控（石油醚：乙酸乙酯=5 : 1) 至原料点基本反应完全。将料液降至室温，加入30ml稀盐酸，搅拌5min后静置，分液，水 洗有机相，5%氢氧化钠溶液适量进行碱洗有机相，水洗有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤， 40°C减压浓缩至干，得13. 7g浅黄色油状中间体（1)。收率90%，无需纯化进行下一步。1H NMR(500MHz，DMS0-d 6) : δ 7. 78(s，1H)，5. 65(m，1H)，2. 40(s，3H)，2. 23(s，3H)，I. 95(m，2H)， I. 85 (m，2H)，I. 63 (m，2H)，I. 56 (m，2H)。
[0065] 实施例2 :中间体⑵的合成
[0066] 将IOg上述油状物中间体⑴溶解于100ml DMF中，加入9g碳酸钾和11. 8g 4-(6-氨基-吡啶-3-基）-哌嗪-1-羧酸叔丁酯，搅拌升温至80°C，保温85°C搅拌4小 时。TLC(石油醚：乙酸乙酯=1 : 2)监控，待原料点消失后，降至室温。将料液倾入水 中，析出大量橘黄色固体，过滤，大量水洗滤饼，至母液为中性，50°C干燥，烘干得14. 2g黄 色固体粗品，加入300mlDMS0加热至溶解，降温，抽滤，滤饼少量乙醇洗涤，50°C减压干燥至 干，得 12. 5g 亮黄色中间体（2)。总收率：70%。1H NMR (500MHz，DMS0-d6) : δ 8. 15 (s，1H)， 7. 83(s，1Η)，7· 03(d，J = 8. 2Hz，1Η)，6· 75(d，J = 8. 2Hz，1Η)，5· 74(m，1Η)，3· 40(bro,4H)， 3· 25 (bro, 4Η)，2· 35 (s，3Η)，2· 29 (s，3Η)，2· 21 (m，2Η)，I. 91 (m，2Η)，I. 79 (m，2Η)，I. 59 (m， 2H)，I. 44(s，9H) 〇
[0067] 实施例3 :化合物I的合成
[0068] 将IOg中间体（2)加入100ml丙酮，200ml水的混合溶液中，搅拌至料液分散均匀， 加入12ml 35%浓盐酸，升温至50°C反应10小时。TLC(二氯甲烷：甲醇，10 : 1)监控至 原料点消失。降温至l〇°C，缓慢向体系中加入13g三乙胺，至PH > 9,充分搅拌至有大量固 体析出，继续搅拌3小时，抽滤，水洗滤饼至中性。40 °C干燥至干得7. 28g黄色固体I粗品， 将该粗品溶于150ml的正丁醇和150ml苯甲醚混合液中，加热100-1KTC至溶解，加入0. 5g 活性炭，回流30min后热滤，母液降至室温自然析晶，过滤，40°C干燥，得6. Sg亮黄色固体化 合物I，收率：83%。
[0069] 所得化合物经核磁确认，系6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2- (5-哌嗪-1-基-吡 啶-2-基氨基）-8H-吡啶并[2, 3-d]嘧啶-7-酮，具体数据如下：
[0070] 1H NMR(500MHz，DMS0-d6/TFA) δ 10. 40(s，1H)，9. 03(s，1H)，8. 98(s，1H)，8. 12(s， 1H)，7· 90(s，1H)，7· 63(s，1H)，5· 84(m，1H)，3· 40(bro,4H)，3· 29(bro,4H)，2· 43(s，3H)， 2· 33 (s，3H)，2· 21 (m，2H)，I. 91 (m，2H)，I. 79 (m，2H)，I. 59 (m，2H)。
[0071] 实施例4 :固体化合物I的结晶工艺
[0072] 按照如下结晶工艺处理：
[0073] 150mg实施例3的亮黄色固体化合物I，加入乙醇10mL，于50°C下使其溶解，然后 在室温下搅拌3小时，母液降至室温自然析晶，过滤析出的结晶，在60°C下干燥，得到帕博 昔里布的结晶I (143mg)。
[0074] 150mg实施例3的亮黄色固体化合物I，加入乙醇5mL，甲醇55mL，于50°C下使其溶 解，然后在室温下搅拌3小时，母液降至室温自然析晶，过滤析出的结晶，在60°C下干燥，得 到帕博昔里布的结晶2 (146mg)。
[0075] 实施例5 :帕博昔里布缓释片的制备
[0076] 帕博昔里布120mg，磷酸二氢钠 lmg，磷酸氢二钠0. 5mg，羟丙甲纤维素20mg，微晶 纤维素56mg，硬脂酸镁2. 5mg，
[0077] 制备工艺为：将主药和辅料分别过100目筛。将主药和除硬脂酸镁之外的辅料混 合均匀，以70%乙醇制软材，16目制粒，50°C干燥，16目整粒，加入硬脂酸镁作为缓释部分 颗粒；在压片机上制备此帕博昔里布的缓释片。
[0078] 实施例6 :帕博昔里布缓释片的制备
[0079] 帕博昔里布120mg，磷酸二氢钠 lmg，磷酸氢二钠0. 5mg，轻丙甲纤维素20mg，泊洛 沙姆56mg，硬脂酸镁2. 5mg，
[0080] 制备工艺为：将主药和辅料分别过100目筛。将主药和除硬脂酸镁之外的辅料混 合均匀，以70%乙醇制软材，16目制粒，50°C干燥，16目整粒，加入硬脂酸镁作为缓释部分 颗粒；在压片机上制备此帕博昔里布的缓释片。
[0081] 实验例7:
[0082] 测定帕博昔里布在不同介质中的近似溶解度，如下所示。
[0083] 参照中国药典2010版近似溶解度测定方法：在10毫升的试管的各介质中加入实 施例5的产品粉末50mg，25°C条件下每5分钟，在200转/每分钟的摇床上振摇试管30秒。 30分钟后，用0. 25 μ m微孔滤膜过滤，HPLC测定续滤液中帕博昔里布浓度。
[0084] 帕博昔里布在不同介质中的近似溶解度
[0085]
[0086] 实施例8本发明产品的HPLC分析方法
[0087] 本发明产品，含帕博昔里布应为标示量的98. 0%~102. 0%。
[0088] 照高效液相色谱法试验，用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比10 : 80甲 醇：乙腈为流动相洗脱；流速为每分钟I. 〇ml，检测波长为240nm ;柱温为45°C。取供试品 溶液，取20 μ 1注入液相色谱仪，记录色谱图，帕博昔里布峰保留时间为13. 9分钟，理论板 数按帕博昔里布峰计算不低于3000，
[0089]
[0090] 实验例9 :
[0091] 取实施例5-6所制备的片剂样品，在包装（铝塑包装，置纸盒中）条件下，于40°C、 相对湿度75%下放置6个月，于0、0. 5、1、2、3、6个月时各取10片，测定片剂硬度（kg)。 [0092] 加速试验考察6个月，硬度测定结果表明，实施例1-4制得的片剂，放置6个月后， 硬度均保持不变，显著提高了制剂的稳定性，能满足运输和贮存的要求。
[0093] 实验例10 :本发明的抗肿瘤活性
[0094] 将以I X IOVml的浓度混悬于PBS的人乳腺癌细胞MCF-7按照0.1 ml的容量移植 到8周龄的雌性balb/c(nu/nu)小鼠的右肋腹皮下部。从肿瘤体积达到约IOOmm3时，连续 口服给予被测物质14天。被测物质混悬于0. 5%甲基纤维素中，按0. lml/kg体重剂量给 药。末次给药后次日称重、处死动物后剖瘤称重。实验按照对照组（溶剂对照组）1组10 只，阳性对照组（5-FU) 1组10只，被测物质给药组，1组10只进行。按下列公式计算肿瘤抑 制率。
[0095] 肿瘤抑制率=(对照组平均瘤重-药物组平均瘤重）/对照组平均瘤重X 100%。
[0096]
【主权项】
1. 一种新型的⑶K4抑制剂的合成方法，其特征在于： 步骤1 :将2-氯-8-环戊基-5-甲基-8Η-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮与乙酰氯反应，在 无水氯化铝作用下，在氯仿溶液中反应4-5小时，料液加入稀盐酸中，分液，有机相水洗，碱 洗，水洗，干燥，过滤浓缩得油状残留物中间体化合物（1)，无需纯化既可用于下一步反应； 步骤2 :将中间体（1)、碳酸钾和4-(6-氨基-吡啶-3-基）-哌嗪-1-羧酸叔丁酯加 入到DMF中，搅拌升温，80 °C反应3-4小时，降至室温，将料液冲入水中，析出亮黄色固体，过 滤，滤饼水洗，用DMSO溶解，结晶得中间体化合物（2); 步骤3 :中间体（2)加入丙酮和水，加入浓盐酸，升温40-50°C，反应6-12小时，加入三 乙胺，析出固体，用正丁醇和苯甲醚重结晶得化合物I帕博昔里布；2. 根据权利要求1的一种新型的CDK4抑制剂的合成方法，其特征在于： 步骤1中使用氯仿作为反应溶剂； 步骤1中试用无水氯化铝作为催化剂； 步骤1中的反应温度应控制在0_70°C。3. 根据权利要求1的一种新型的CDK4抑制剂的合成方法，其特征在于： 步骤2中使用DMF作为反应溶剂； 步骤2中使用碳酸钾作为缚酸剂； 步骤2中的反应温度控制在80-90°C ; 步骤2中的结晶溶剂为DMSO。4. 根据权利要求1的一种新型的CDK4抑制剂的合成方法，其特征在于： 步骤3中使用丙酮水作为反应溶剂； 步骤3中选用的酸为浓盐酸； 步骤3中选用的胺为三乙胺； 步骤3中选用正丁醇和苯甲醚混合物比例20 : 20。5. 根据权利要求1的一种新型的CDK4抑制剂的合成方法，其特征在于： 一种帕博昔里布缓释制剂的组成是：6.根据权利要求1的一种新型的CDK4抑制剂的合成方法，其特征在于： 一种帕博昔里布缓释制剂的组成是：
【专利摘要】本发明涉及一种新型的CDK4抑制剂的合成方法，以2-氯-8-环戊基-5-甲基-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮与乙酰氯反应为起始反应，进行后续反应，制备得到CDK4抑制剂，此制备方法简便易行、收率高，质量好，便于工业化生产。
【IPC分类】A61K9/22, C07D471/04, A61P35/00, A61K31/519
【公开号】CN104892604
【申请号】CN201510342570
【发明人】程刚
【申请人】北京康立生医药技术开发有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月19日
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药领域，尤其涉及一种新型的⑶K4抑制剂的合成方法。
【背景技术】
[0002]
[0003] 帕博昔里布（Palbociclib)，化学名6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-(5-哌 嗪-1-基-吡啶-2-基氨基）-8H-吡啶并[2, 3-d]嘧啶-7-酮，美国化学文摘登记号CAS : 571190-30-2,结构：
[0004]
[0005] 帕博昔里布是一种口服细胞周期素依赖性激酶（⑶Ks) 4/6抑制剂。⑶Ks 4/6是细 胞周期的关键调节因素，其能够触发细胞周期进展。IBRANCE在美国的适应症为联合来曲唑 用于治疗雌激素受体阳性，人类表皮生长因子受体2阴性（ER+/HER2-)绝经后晚期乳腺癌 患者，作为初始的内分泌治疗为基础的方案治疗转移性疾病。
[0006] FDA给予IBRANCE突破性治疗认定和优先审评项目基础上审评并批准了 IBRANCE 并且在基于其无进展生存期（PFS)加速批准了这一适应症。同时也将根据验证临床研宄能 否验证和描述临床获益而决定是否给予持续批准。其3期验证临床试验，PAL0MA-2,已经完 成入组。。
[0007] 目前，国际文献所有公开的帕博昔里布的制备方法及类似方法不多，大部分 专利所述研发路线相似，并有下列文献报道：CN200780033416. I ;W02014128588A1 ; W02014183520A1。
[0008] 2007年公开的中国专利CN200780033416. 1和W02014128588A1提供了制备帕博昔 里布的合成路线。
[0009] 该路线先以5-溴-2,4-二氯嘧啶为原料通过与环戊胺缩合制得制备化合物1，1 在四氢呋喃中与巴豆酸进行heck偶联、缩合制备化合物2,2与NBS进行羰基α溴代，制得 关键化合物3。
[0010]
[0011] 再以5-溴-2-硝基吡啶为原料在DMSO中与Boc哌嗪缩合生成化合物，4在异丙醇 中氢化还原硝基制得另一关键化合物5。中间体3与中间体5在有机镁或有机锂试剂存在 下发生缩合制备化合物6,6与乙烯基丁醚再次进行heck反应制备化合物7, 7在酸性条件 下脱去保护，经碱化制得目标化合物I。
[0012] 2014年公开的世界专利W02014128588A1中披露了一条关于帕博昔里布相似化合 物6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-( (1，2, 3,6-四氢-[3,4-联吡啶]-6-基）氨基）吡 啶并[2, 3-d]嘧啶-7 (8H)-酮合成路线：
[0013]
[0014] 该路线中所制备的目标化合物与帕博昔里布结构基本相似，不同基团对反应影响 较小，也是以5-溴-2,4-二氯嘧啶为原料通过与环戊胺缩合制得制备化合物1，1在四氢呋 喃中与巴豆酸进行heck偶联、缩合制备化合物2,2与NBS进行羰基α溴代，制得化合物3。 3在DMF溶液中与氨水反应制备关键化合物8,8与乙烯基丁醚进行heck反应生制备化合 物9.在同时用5-溴-氯吡啶与4-(4,4,5,5，_四甲基-1，3,2-二氧杂戊硼烷-2-基）-5， 6-二氢吡啶-1-(2H)_羧酸叔丁酯在二氧六环和水的混合液中，在[1，1_双（二苯基膦）二 茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物催化下反应得到另一关键化合物10,10在与9进过缩合反 应生成化合物11，11在酸性条件下脱去保护，经碱化制得目标化合物12。
[0015] CN03802556.6, CN200480023494.X， CN200780033416.1， CN201010255766.6， CN201110115074. 6，EP1740184A1等文献介绍了一种帕博昔里布的合成方法，其合成路线如 下：
[0016]
[0017] 综上所述，在制备帕博昔里布的过程中存在如下缺陷；中间体制备收率过低，且使 用了很多复杂的贵金属辅助试剂，和对反应条件苛刻的有机金属试剂，不易于工业化生产。 本方法成功的改变了上述路线的缺陷，缩短了合成路线且采用价格更为廉价，易于购买和 运输的试剂，操作简单，产品的收率稳定，纯度高。
【发明内容】
[0018] 本发明的目的在于提供一种纯度高、收率高成本底，操作简单的帕博昔里布的制 备方法。该方法原料来源便捷。产品的质量易于控制。合成路线如下：
[0019]
[0020] 该方法具体操作分为以下几个步骤：
[0021] 步骤1 :将2-氯-8-环戊基-5-甲基-8H-吡啶并[2, 3-d]嘧啶-7-酮与乙酰氯 反应，在无水氯化铝作用下，在氯仿溶液中反应4-5小时，料液加入稀盐酸中，分液，有机相 水洗，碱洗，水洗，干燥，过滤浓缩得油状残留物中间体化合物（1)，无需纯化也可用于下一 步反应。
[0022] 步骤2 :将中间体（1)、碳酸钾和4-(6-氨基-吡啶-3-基）-哌嗪-1-羧酸叔丁 酯加入到DMF中，搅拌升温，80°C反应3-4小时。降至室温，将料液加入水中，析出亮黄色固 体，过滤，滤饼水洗，用DMSO溶解，结晶得中间体化合物（2)。
[0023] 步骤3 :中间体⑵加入丙酮和水，加入浓盐酸。升温40-50°C，反应6-12小时。 加入三乙胺，析出固体，用正丁醇和苯甲醚重结晶得化合物I帕博昔里布。
[0024] 优选，步骤1中使用氯仿作为反应溶剂。
[0025] 优选，步骤1中试用无水氯化铝作为催化剂。
[0026] 优选，步骤1中的反应温度应控制在0_70°C
[0027] 优选，步骤2中使用DMF(N，N-二甲基甲酰胺）作为反应溶剂。
[0028] 优选，步骤2中使用碳酸钾作为缚酸剂。
[0029] 优选，步骤2中的反应温度控制在80-90°C。
[0030] 优选，步骤2中的结晶溶剂为DMSO(二甲基亚砜）。
[0031] 优选，步骤3中使用丙酮水作为反应溶剂。
[0032] 优选，步骤3中选用的酸为浓盐酸。
[0033] 优选，步骤3中选用的胺为三乙胺。
[0034] 优选，步骤3中选用正丁醇和苯甲醚混合物比例优选20 : 20。
[0035] 2-氯-8-环戊基-5-甲基-8H-吡啶并[2, 3-d]嘧啶-7-酮，CAS 号：1013916-37-4
[0036]
[0037] 4-(6-氨基吡啶-3-基）哌嗪-1-羧酸叔丁酯，CAS号：571188-59-5
[0038]
[0039] 将本发明的结晶本身或剂型制成药品，本发明作为抗肿瘤剂，能够治疗乳腺癌。
[0040] 将本发明的结晶的剂型制成药品，将结晶与适当的辅料添加剂混合，制成制剂。 [0041 ] 本发明的优选制剂是：片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、含片剂、等口服制剂。
[0042] 优选的辅料是：赋形剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、矫味矫嗅剂、乳化剂、表 面活性剂、助溶剂、混悬化剂、等渗剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、稳定剂、吸收促进剂等。
[0043] 优选的赋形剂是：乳糖、白糖、葡萄糖、玉米淀粉、甘露醇、山梨糖醇、淀粉、α淀 粉、糊精、结晶纤维素、轻质硅酸酐、硅酸铝、硅酸钙、硅酸铝酸镁、磷酸氢钙等。
[0044] 优选的粘合剂是：聚乙烯醇、甲基纤维素、乙基纤维素、阿拉伯胶、黄耆胶、明胶、虫 胶、羟丙甲基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙二醇等。
[0045] 优选的润滑剂是：硬脂酸镁、硬脂酸钙、富马酸十八酯钠、滑石、聚乙二醇、胶态二 氧化硅等。
[0046] 优选的崩解剂是：结晶纤维素、琼脂、明胶、碳酸妈、碳酸氢钠、柠檬酸钙、糊精、果 胶、低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀 粉、羧甲基淀粉钠等。
[0047] 优选的着色剂是：三氧化二铁、黄色三氧化二铁、胭脂红、焦糖、β_胡萝卜素、氧 化钛、滑石、磷酸核黄素钠等。
[0048] 优选的矫味剂是：可可粉、薄荷醇、薄荷油、冰片、桂皮粉等。
[0049] 优选的乳化剂或表面活性剂是：十八烷基三乙醇胺、十二烷基硫酸钠、十二烷基氨 基丙酸、卵磷脂、甘油单硬脂酸酯、蔗糖脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯等。
[0050] 优选的助溶剂是：聚乙二醇、丙二醇、安息香酸苄酯、乙醇、胆固醇、三乙醇胺、碳酸 钠、柠檬酸钠、吐温80、烟酰胺等。
[0051] 优选的混悬剂是：聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙 基纤维素、羟丙基纤维素等亲水性高分子。
[0052] 优选的等渗剂是：葡萄糖、氯化钠、甘露醇、山梨糖醇等。
[0053] 优选的缓冲剂是：磷酸盐、柠檬酸盐等缓冲液。
[0054] 优选的防腐剂是：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯丁醇、苄醇、苯乙醇、 脱氢乙酸、山梨酸等。
[0055] 优选的抗氧化剂是：亚硫酸盐、抗坏血酸、α -生育酚等。
[0056] 本发明提供一种帕博昔里布缓释制剂的制备方法，包括如下步骤：
[0057] 帕博昔里布 50-200mg 磷酸二氢钠 1-4mg 磷酸氢二钠 0. 5_2mg 羟丙甲纤维素 20-200mg 微晶纤维素 10-60mg 硬脂酸镁 l-6mg。
[0058] 本发明提供一种帕博昔里布缓释制剂：
[0059] 帕博昔里布 50-200mg 磷酸二氢钠 l-4mg 磷酸氢二钠 0. 5-2mg 轻丙甲纤维素 50-200mg 泊洛沙姆 10-6〇mg 硬脂酸镁 l-6mg。
[0060] 制备工艺可以为：将主药和辅料分别过100目筛。将主药和除硬脂酸镁之外的辅 料混合均匀，以70%乙醇制软材，16目制粒，50°C干燥，16目整粒，加入硬脂酸镁作为缓释 部分颗粒；在压片机上制备此帕博昔里布的缓释片。
[0061] 本发明提供的帕博昔里布缓释片系统配方及其制备方法，制成一口服缓释制剂产 品，使得帕博昔里布在口服后，在人体系统中缓慢释放，维持血药浓度，从而使得每天服用 一次本缓释制剂产品即可维持一天的血药浓度。 具体实施例
[0062] 实施例只是本发明的一种较佳方案，并非对苯发明作任何上的限制，在不超出要 求所记载的技术方案的前提下还有其他的变形计改型。
[0063] 实 施例1 :中间体⑴的合成
[0064] 向反应瓶中加入13. 2g2-氯-8-环戊基-5-甲基-8H-吡啶并[2, 3-d]嘧啶-7-酮、 6. 2g乙酰氯，65ml氯仿，搅拌使之溶解，降温至0°C，向体系中加入IOg无水氯化铝，保温 l〇°C反应1小时，升温至60°C，继续反应4小时。TLC监控（石油醚：乙酸乙酯=5 : 1) 至原料点基本反应完全。将料液降至室温，加入30ml稀盐酸，搅拌5min后静置，分液，水 洗有机相，5%氢氧化钠溶液适量进行碱洗有机相，水洗有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤， 40°C减压浓缩至干，得13. 7g浅黄色油状中间体（1)。收率90%，无需纯化进行下一步。1H NMR(500MHz，DMS0-d 6) : δ 7. 78(s，1H)，5. 65(m，1H)，2. 40(s，3H)，2. 23(s，3H)，I. 95(m，2H)， I. 85 (m，2H)，I. 63 (m，2H)，I. 56 (m，2H)。
[0065] 实施例2 :中间体⑵的合成
[0066] 将IOg上述油状物中间体⑴溶解于100ml DMF中，加入9g碳酸钾和11. 8g 4-(6-氨基-吡啶-3-基）-哌嗪-1-羧酸叔丁酯，搅拌升温至80°C，保温85°C搅拌4小 时。TLC(石油醚：乙酸乙酯=1 : 2)监控，待原料点消失后，降至室温。将料液倾入水 中，析出大量橘黄色固体，过滤，大量水洗滤饼，至母液为中性，50°C干燥，烘干得14. 2g黄 色固体粗品，加入300mlDMS0加热至溶解，降温，抽滤，滤饼少量乙醇洗涤，50°C减压干燥至 干，得 12. 5g 亮黄色中间体（2)。总收率：70%。1H NMR (500MHz，DMS0-d6) : δ 8. 15 (s，1H)， 7. 83(s，1Η)，7· 03(d，J = 8. 2Hz，1Η)，6· 75(d，J = 8. 2Hz，1Η)，5· 74(m，1Η)，3· 40(bro,4H)， 3· 25 (bro, 4Η)，2· 35 (s，3Η)，2· 29 (s，3Η)，2· 21 (m，2Η)，I. 91 (m，2Η)，I. 79 (m，2Η)，I. 59 (m， 2H)，I. 44(s，9H) 〇
[0067] 实施例3 :化合物I的合成
[0068] 将IOg中间体（2)加入100ml丙酮，200ml水的混合溶液中，搅拌至料液分散均匀， 加入12ml 35%浓盐酸，升温至50°C反应10小时。TLC(二氯甲烷：甲醇，10 : 1)监控至 原料点消失。降温至l〇°C，缓慢向体系中加入13g三乙胺，至PH > 9,充分搅拌至有大量固 体析出，继续搅拌3小时，抽滤，水洗滤饼至中性。40 °C干燥至干得7. 28g黄色固体I粗品， 将该粗品溶于150ml的正丁醇和150ml苯甲醚混合液中，加热100-1KTC至溶解，加入0. 5g 活性炭，回流30min后热滤，母液降至室温自然析晶，过滤，40°C干燥，得6. Sg亮黄色固体化 合物I，收率：83%。
[0069] 所得化合物经核磁确认，系6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2- (5-哌嗪-1-基-吡 啶-2-基氨基）-8H-吡啶并[2, 3-d]嘧啶-7-酮，具体数据如下：
[0070] 1H NMR(500MHz，DMS0-d6/TFA) δ 10. 40(s，1H)，9. 03(s，1H)，8. 98(s，1H)，8. 12(s， 1H)，7· 90(s，1H)，7· 63(s，1H)，5· 84(m，1H)，3· 40(bro,4H)，3· 29(bro,4H)，2· 43(s，3H)， 2· 33 (s，3H)，2· 21 (m，2H)，I. 91 (m，2H)，I. 79 (m，2H)，I. 59 (m，2H)。
[0071] 实施例4 :固体化合物I的结晶工艺
[0072] 按照如下结晶工艺处理：
[0073] 150mg实施例3的亮黄色固体化合物I，加入乙醇10mL，于50°C下使其溶解，然后 在室温下搅拌3小时，母液降至室温自然析晶，过滤析出的结晶，在60°C下干燥，得到帕博 昔里布的结晶I (143mg)。
[0074] 150mg实施例3的亮黄色固体化合物I，加入乙醇5mL，甲醇55mL，于50°C下使其溶 解，然后在室温下搅拌3小时，母液降至室温自然析晶，过滤析出的结晶，在60°C下干燥，得 到帕博昔里布的结晶2 (146mg)。
[0075] 实施例5 :帕博昔里布缓释片的制备
[0076] 帕博昔里布120mg，磷酸二氢钠 lmg，磷酸氢二钠0. 5mg，羟丙甲纤维素20mg，微晶 纤维素56mg，硬脂酸镁2. 5mg，
[0077] 制备工艺为：将主药和辅料分别过100目筛。将主药和除硬脂酸镁之外的辅料混 合均匀，以70%乙醇制软材，16目制粒，50°C干燥，16目整粒，加入硬脂酸镁作为缓释部分 颗粒；在压片机上制备此帕博昔里布的缓释片。
[0078] 实施例6 :帕博昔里布缓释片的制备
[0079] 帕博昔里布120mg，磷酸二氢钠 lmg，磷酸氢二钠0. 5mg，轻丙甲纤维素20mg，泊洛 沙姆56mg，硬脂酸镁2. 5mg，
[0080] 制备工艺为：将主药和辅料分别过100目筛。将主药和除硬脂酸镁之外的辅料混 合均匀，以70%乙醇制软材，16目制粒，50°C干燥，16目整粒，加入硬脂酸镁作为缓释部分 颗粒；在压片机上制备此帕博昔里布的缓释片。
[0081] 实验例7:
[0082] 测定帕博昔里布在不同介质中的近似溶解度，如下所示。
[0083] 参照中国药典2010版近似溶解度测定方法：在10毫升的试管的各介质中加入实 施例5的产品粉末50mg，25°C条件下每5分钟，在200转/每分钟的摇床上振摇试管30秒。 30分钟后，用0. 25 μ m微孔滤膜过滤，HPLC测定续滤液中帕博昔里布浓度。
[0084] 帕博昔里布在不同介质中的近似溶解度
[0085]
[0086] 实施例8本发明产品的HPLC分析方法
[0087] 本发明产品，含帕博昔里布应为标示量的98. 0%~102. 0%。
[0088] 照高效液相色谱法试验，用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比10 : 80甲 醇：乙腈为流动相洗脱；流速为每分钟I. 〇ml，检测波长为240nm ;柱温为45°C。取供试品 溶液，取20 μ 1注入液相色谱仪，记录色谱图，帕博昔里布峰保留时间为13. 9分钟，理论板 数按帕博昔里布峰计算不低于3000，
[0089]
[0090] 实验例9 :
[0091] 取实施例5-6所制备的片剂样品，在包装（铝塑包装，置纸盒中）条件下，于40°C、 相对湿度75%下放置6个月，于0、0. 5、1、2、3、6个月时各取10片，测定片剂硬度（kg)。 [0092] 加速试验考察6个月，硬度测定结果表明，实施例1-4制得的片剂，放置6个月后， 硬度均保持不变，显著提高了制剂的稳定性，能满足运输和贮存的要求。
[0093] 实验例10 :本发明的抗肿瘤活性
[0094] 将以I X IOVml的浓度混悬于PBS的人乳腺癌细胞MCF-7按照0.1 ml的容量移植 到8周龄的雌性balb/c(nu/nu)小鼠的右肋腹皮下部。从肿瘤体积达到约IOOmm3时，连续 口服给予被测物质14天。被测物质混悬于0. 5%甲基纤维素中，按0. lml/kg体重剂量给 药。末次给药后次日称重、处死动物后剖瘤称重。实验按照对照组（溶剂对照组）1组10 只，阳性对照组（5-FU) 1组10只，被测物质给药组，1组10只进行。按下列公式计算肿瘤抑 制率。
[0095] 肿瘤抑制率=(对照组平均瘤重-药物组平均瘤重）/对照组平均瘤重X 100%。
[0096]
【主权项】
1. 一种新型的⑶K4抑制剂的合成方法，其特征在于： 步骤1 :将2-氯-8-环戊基-5-甲基-8Η-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮与乙酰氯反应，在 无水氯化铝作用下，在氯仿溶液中反应4-5小时，料液加入稀盐酸中，分液，有机相水洗，碱 洗，水洗，干燥，过滤浓缩得油状残留物中间体化合物（1)，无需纯化既可用于下一步反应； 步骤2 :将中间体（1)、碳酸钾和4-(6-氨基-吡啶-3-基）-哌嗪-1-羧酸叔丁酯加 入到DMF中，搅拌升温，80 °C反应3-4小时，降至室温，将料液冲入水中，析出亮黄色固体，过 滤，滤饼水洗，用DMSO溶解，结晶得中间体化合物（2); 步骤3 :中间体（2)加入丙酮和水，加入浓盐酸，升温40-50°C，反应6-12小时，加入三 乙胺，析出固体，用正丁醇和苯甲醚重结晶得化合物I帕博昔里布；2. 根据权利要求1的一种新型的CDK4抑制剂的合成方法，其特征在于： 步骤1中使用氯仿作为反应溶剂； 步骤1中试用无水氯化铝作为催化剂； 步骤1中的反应温度应控制在0_70°C。3. 根据权利要求1的一种新型的CDK4抑制剂的合成方法，其特征在于： 步骤2中使用DMF作为反应溶剂； 步骤2中使用碳酸钾作为缚酸剂； 步骤2中的反应温度控制在80-90°C ; 步骤2中的结晶溶剂为DMSO。4. 根据权利要求1的一种新型的CDK4抑制剂的合成方法，其特征在于： 步骤3中使用丙酮水作为反应溶剂； 步骤3中选用的酸为浓盐酸； 步骤3中选用的胺为三乙胺； 步骤3中选用正丁醇和苯甲醚混合物比例20 : 20。5. 根据权利要求1的一种新型的CDK4抑制剂的合成方法，其特征在于： 一种帕博昔里布缓释制剂的组成是：6.根据权利要求1的一种新型的CDK4抑制剂的合成方法，其特征在于： 一种帕博昔里布缓释制剂的组成是：
【专利摘要】本发明涉及一种新型的CDK4抑制剂的合成方法，以2-氯-8-环戊基-5-甲基-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮与乙酰氯反应为起始反应，进行后续反应，制备得到CDK4抑制剂，此制备方法简便易行、收率高，质量好，便于工业化生产。
【IPC分类】A61K9/22, C07D471/04, A61P35/00, A61K31/519
【公开号】CN104892604
【申请号】CN201510342570
【发明人】程刚
【申请人】北京康立生医药技术开发有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月19日
最新回复(0)