一种长春地辛的纯化方法
一种长春地辛的纯化方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及长春地辛的纯化技术，特别是涉及一种长春地辛的纯化方法。
【背景技术】
[0002] 长春碱类化合物是从夹竹桃科植物长春花（Catharanthus roseus)中提取的生 物碱，具有抗肿瘤活性，主要用于治疗非小细胞肺癌，小细胞癌，乳腺癌，恶性淋巴瘤等恶性 肿瘤。现已正式用于临床的有长春碱（vinblastine)、长春新碱（vincristhle)、长春地辛 (vindesine)及长春瑞宾（vinorelbine)。其中长春地辛是对长春碱G环的3、4位修饰而 得到的典型4-去乙酰-C-3酰胺衍生物，可与细胞内的循环糖蛋白一转铁蛋白形成共价键， 从而破环其与铁的结合导致肿瘤细胞凋亡，结构式如下。
[0003]
[0004] 国内主要研宄长春地辛化合物的剂型改造、药物组合，对其分离纯化方法的研宄 较少。中国专利CN101638413公开了一种长春碱类生物碱的分离纯化方法，在氧化铝柱上 预处理样品后，再用高效液相色谱进行分离纯化，最后重结晶精制样品，覆盖长春碱、长春 新碱、长春地辛或长春瑞滨等生物碱。该工艺属小试工艺且步骤繁多，成本高，不适宜工业 生产。
【发明内容】
[0005] 针对长春地辛纯化效率低、工艺复杂等难题，本发明的目的是提供一种高纯度、操 作性强、适合工业化生产的长春地辛的纯化方法。
[0006] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0007] (1)采用有机溶剂A溶胀后的硅胶为色谱柱填料制备色谱柱；
[0008] (2)将长春地辛粗品有机溶剂A溶液加入上述色谱柱；
[0009] (3)采用梯度淋洗的方法对色谱柱进行洗脱，依次用体积比逐渐减小的有机溶剂 A/有机溶剂B混合液作为洗脱液进行洗脱，收集主成份流出液，最后洗下残留物；
[0010] (4)减压浓缩回收洗脱剂，得到高纯度长春地辛90wt %以上，收率为40~80%。
[0011] 在上述制备方法中：
[0012] 步骤⑴中，所采用硅胶为100~400目，干硅胶用量为5. 9~6. Ikg ;
[0013] 步骤⑴中，所述有机溶剂A为二氯甲烷、正丁醇、甲基异丙酮、乙酸乙醋、氯仿、二 氧六环中的一种；
[0014] 步骤（2)中，长春地辛上样量为1~5wt%，进料量为制备色谱柱体积的1~10%;
[0015] 步骤⑶中，所述有机溶剂B为丙酮、乙腈、二甲基甲酰胺、甲醇、二甲亚砜中的一 种；
[0016] 步骤（3)中，采用恒压恒流泵进洗脱剂，洗脱剂依次为溶剂A :B = 99 :1~80 :1、 溶剂A :B = 60 :1~45 :1、溶剂A :B = 40 :1~20 :1，洗脱剂用量为柱体积的200~500 %， 洗脱流速为每分钟洗脱柱体积的1~10% ;制备色谱柱运行的压力为〇. 1~〇. 7MPa ;
[0017] 步骤⑶中，洗脱液分段收集，收集分两段，第一段收集溶剂A :B = 60 :1~45 :1 馏分，为含量较低的长春地辛洗脱液；第二段收集溶剂A :B = 40 :1~20 :1馏分，主要为高 浓度长春地辛洗脱液。
[0018] 步骤（3)中，采用溶剂A :B = 20 :1~5 :1洗脱残留物。
[0019] 本发明以长春地辛粗品为起始原料，通过硅胶制备色谱纯化分离，实现高纯度长 春地辛的制备。本发明具有如下优点：
[0020] 1、产品纯度高，该方法可使长春地辛的纯度达到90%以上，收率为40~80%。固 定相稳定，可重复使用；
[0021] 2、本发明使用的洗脱剂易回收，可反复使用，生产成本低；
[0022] 3、工艺过程简单，设备一次性投入小，能耗低，可操作性强，适合工业化生产。
【附图说明】
[0023] 图1是本发明实施例1采用的长春地辛粗品原料的液相色谱分析图谱。
[0024] 图2是本发明实施例1得到的长春地辛产品的液相色谱分析图谱。
【具体实施方式】 [0025] 实施例1
[0026] 1)称取5. 98kg 300目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀 地装到制备色谱中，柱尺寸为?20cmX52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装 好的制备色谱柱；
[0027] 2)将195g长春地辛粗品（纯度为76. 73% )用氯仿溶解，进料，进料量为300ml ;
[0028] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：甲醇=90 :1溶剂洗脱2个床层，换用氯 仿：甲醇=40 :1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：甲醇=30 :1溶剂洗脱4 个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：甲醇=15 :1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
[0029] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛107. 7g，液相色谱检测纯度为99. 05%，收率 为 71. 3%〇
[0030] 长春地辛粗品原料的液相色谱分析图谱如图1所示，长春地辛产品的液相色谱分 析图谱如图2所示。
[0031] 实施例2
[0032] 1)称取6. IOkg 400目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀 地装到制备色谱中，柱尺寸为?20cmX52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装 好的制备色谱柱；
[0033] 2)将205g长春地辛粗品（纯度为72. 19% )用氯仿溶解，进料，进料量为320ml ;
[0034] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：甲醇=95 :1溶剂洗脱2个床层，换用氯 仿：甲醇=45 :1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：甲醇=35 :1溶剂洗脱4 个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：甲醇=15 :1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
[0035] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛94. 5g，液相色谱检测纯度为97. 86%，收率为 62. 3%〇
[0036] 实施例3
[0037] 1)称取6. OOkg 200目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀 地装到制备色谱中，柱尺寸为?20cmX52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装 好的制备色谱柱；
[0038] 2)将165g长春地辛粗品（纯度为58. 97% )用氯仿溶解，进料，进料量为280ml ;
[0039] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：甲醇=90 :1溶剂洗脱3个床层，换用氯 仿：甲醇=40 :1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：甲醇=30 :1溶剂洗脱4 个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：甲醇=10 :1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
[0040] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛90g，液相色谱检测纯度为91. 73%，收率为 84. 8% 〇
[0041] 实施例4
[0042] 1)称取5. 96kg 300目硅胶，添加二氯甲烷并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶 均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为?20cmX52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得 到装好的制备色谱柱；
[0043] 2)将184g长春地辛粗品（纯度为53. 74% )用二氯甲烷溶解，进料，进料量为 300ml ；
[0044] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用二氯甲烷：乙腈=80 :1溶剂洗脱2个床层，换 用二氯甲烷：乙腈=35 :1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用二氯甲烷：乙腈=25 : 1溶剂洗脱4个床层并收集洗脱液b，最后换用二氯甲烷：乙腈=5 :1的洗脱液洗脱制备色 谱柱中残留物；
[0045] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛66g，液相色谱检测纯度为95. 39%，收率为 63. 7%〇
[0046] 实施例5
[0047] 1)称取5. 97kg 400目硅胶，添加二氯甲烷并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶 均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为?20cmX52cm，固 定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得 到装好的制备色谱柱；
[0048] 2)将161g长春地辛粗品（纯度为64. 26 % )用二氯甲烷溶解，进料，进料量为 280ml ；
[0049] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用二氯甲烷：乙腈=85 :1溶剂洗脱3个床层，换 用二氯甲烷：乙腈=45 :1溶剂洗脱4个床层并收集洗脱液a，再换用二氯甲烷：乙腈=30 : 1溶剂洗脱4个床层并收集洗脱液b，最后换用二氯甲烷：乙腈=5 :1的洗脱液洗脱制备色 谱柱中残留物；
[0050] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛59. 7g，液相色谱检测纯度为94. 80%，收率为 54. 7%。
[0051] 实施例6
[0052] 1)称取6.20kg 300目硅胶，添加乙酸乙酯并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶 均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为?20cmX52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得 到装好的制备色谱柱；
[0053] 2)将159. 2g长春地辛粗品（纯度为63. 18% )用乙酸乙酯溶解，进料，进料量为 290ml ；
[0054] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用乙酸乙酯：甲醇=99 :1溶剂洗脱2个床层，换 用乙酸乙酯：甲醇=50 :1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用乙酸乙酯：甲醇=35 : 1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液b，最后换用乙酸乙酯：甲醇=10 :1的洗脱液洗脱制备色 谱柱中残留物；
[0055] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛52g，液相色谱检测纯度为93. 74%，收率为 48. 5% 〇
[0056] 实施例7
[0057] 1)称取6. IOkg 400目硅胶，添加乙酸乙酯并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶 均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为Φ20ο?Χ52cm，固定相硅胶压实后，得到装好的制备色谱 柱；
[0058] 2)将169. 7g长春地辛粗品（纯度为84. 58% )用乙酸乙酯溶解，进料，进料量为 300ml ；
[0059] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用乙酸乙酯：甲醇=98 :1溶剂洗脱2个床层，换 用乙酸乙酯：甲醇=48 :1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用乙酸乙酯：甲醇=30 : 1溶剂洗脱2个床层并收集洗脱液b，最后换用乙酸乙酯：甲醇=10 :1的洗脱液洗脱制备色 谱柱中残留物；
[0060] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛64. 2g，液相色谱检测纯度为98. 75%，收率为 44. 2% 〇
[0061] 实施例8
[0062] 1)称取5. 90kg 400目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀 地装到制备色谱中，柱尺寸为?20cmX52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装 好的制备色谱柱；
[0063] 2)将191. 3g长春地辛粗品（纯度为79. 26% )用氯仿溶解，进料，进料量为 310ml ；
[0064] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：丙酮=75 :1溶剂洗脱3个床层，换用氯 仿：丙酮=40 :1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：丙酮=25 :1溶剂洗脱2 个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：丙酮=5 :1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
[0065] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛112. 3g，液相色谱检测纯度为98. 66%，收率 为 73. 1%。
[0066] 实施例9
[0067] 1)称取5. 80kg 300目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀 地装到制备色谱中，柱尺寸为?20cmX52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装 好的制备色谱柱；
[0068] 2)将170. 3g长春地辛粗品（纯度为67. 82 % )用氯仿溶解，进料，进料量为 300ml ；
[0069] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：丙酮=80 :1溶剂洗脱3个床层，换用氯 仿：丙酮=45 :1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：丙酮=30 :1溶剂洗脱2 个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：丙酮=5 :1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
[0070] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛83. 3g，液相色谱检测纯度为97. 33%，收率为 70. 2%〇
[0071] 实施例10
[0072] 1)称取6. 20kg 300目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀 地装到制备色谱中，柱尺寸为?20cmX52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装 好的制备色谱柱；
[0073] 2)将150.1 g长春地辛粗品（纯度为72. 37 % )用氯仿溶解，进料，进料量为 280ml ；
[0074] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：丙酮=75 :1溶剂洗脱3个床层，换用氯 仿：丙酮=45 :1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：丙酮=30 :1溶剂洗脱2 个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：丙酮=5 :1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
[0075] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛77. 3g，液相色谱检测纯度为96. 56%，收率为 68. 7%〇
【主权项】
1. 一种长春地辛的纯化方法，其特征在于包括如下步骤： (1) 采用有机溶剂A溶胀后的硅胶为色谱柱填料制备色谱柱； (2) 将长春地辛粗品有机溶剂A溶液加入上述色谱柱； (3) 采用梯度淋洗的方法对色谱柱进行洗脱，依次用体积比逐渐减小的有机溶剂A/有 机溶剂B混合液作为洗脱液进行洗脱，收集主成份流出液，最后洗下残留物； (4) 减压浓缩回收洗脱剂，得到高纯度长春地辛。2. 根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（1)中，所采用硅胶为100~400 目，干硅胶用量为5. 9~6.Ikg。3. 根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（1)中，所述有机溶剂A为二氯甲 烷、正丁醇、甲基异丙酮、乙酸乙酯、氯仿、二氧六环中的一种。4. 根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（2)中，所述长春地辛上样量为 1~5wt%，进料量为制备色谱柱体积的1~10%。5. 根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（3)中，所述有机溶剂B为丙酮、乙 腈、二甲基甲酰胺、甲醇、二甲亚砜中的一种。6. 根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（3)中，采用恒压恒流泵进洗脱剂， 洗脱剂依次为溶剂A:B=99 :1~80 :1、溶剂A:B=60 :1~45 :1、溶剂A:B=40 :1~20 :1，洗 脱剂用量为柱体积的200~500%，洗脱流速为每分钟洗脱柱体积的1~10% ;制备色谱柱运 行的压力为〇? 1~0.7MPa。7. 根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（3)中，洗脱液分段收集，收集分两 段，第一段收集溶剂A:B=60 :1~45 :1馏分；第二段收集溶剂A:B=40 :1~20 :1馏分。8. 根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（3)中，采用溶剂A:B=20 :1~5 : 1洗脱残留物。
【专利摘要】本发明公开了一种长春地辛的纯化方法。（1）采用有机溶剂A溶胀后的硅胶为色谱柱填料制备色谱柱；（2）将长春地辛粗品有机溶剂A溶液加入上述色谱柱；（3）采用梯度淋洗的方法对色谱柱进行洗脱，依次用体积比逐渐减小的有机溶剂A/有机溶剂B混合液作为洗脱液进行洗脱，收集主成份流出液，最后洗下残留物；（4）减压浓缩回收洗脱剂，得到高纯度长春地辛。本发明所得产品纯度高，该方法可使长春地辛的纯度达到90%以上，收率为40～80%。固定相稳定，可重复使用。
【IPC分类】C07D519/04
【公开号】CN104892642
【申请号】CN201510276239
【发明人】宋晓燕, 颜景胡, 袁诚, 李金华, 傅玉萍, 林秀仙, 潘振华, 李咏华
【申请人】广州白云山汉方现代药业有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月26日
【技术领域】
[0001] 本发明涉及长春地辛的纯化技术，特别是涉及一种长春地辛的纯化方法。
【背景技术】
[0002] 长春碱类化合物是从夹竹桃科植物长春花（Catharanthus roseus)中提取的生 物碱，具有抗肿瘤活性，主要用于治疗非小细胞肺癌，小细胞癌，乳腺癌，恶性淋巴瘤等恶性 肿瘤。现已正式用于临床的有长春碱（vinblastine)、长春新碱（vincristhle)、长春地辛 (vindesine)及长春瑞宾（vinorelbine)。其中长春地辛是对长春碱G环的3、4位修饰而 得到的典型4-去乙酰-C-3酰胺衍生物，可与细胞内的循环糖蛋白一转铁蛋白形成共价键， 从而破环其与铁的结合导致肿瘤细胞凋亡，结构式如下。
[0003]
[0004] 国内主要研宄长春地辛化合物的剂型改造、药物组合，对其分离纯化方法的研宄 较少。中国专利CN101638413公开了一种长春碱类生物碱的分离纯化方法，在氧化铝柱上 预处理样品后，再用高效液相色谱进行分离纯化，最后重结晶精制样品，覆盖长春碱、长春 新碱、长春地辛或长春瑞滨等生物碱。该工艺属小试工艺且步骤繁多，成本高，不适宜工业 生产。
【发明内容】
[0005] 针对长春地辛纯化效率低、工艺复杂等难题，本发明的目的是提供一种高纯度、操 作性强、适合工业化生产的长春地辛的纯化方法。
[0006] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0007] (1)采用有机溶剂A溶胀后的硅胶为色谱柱填料制备色谱柱；
[0008] (2)将长春地辛粗品有机溶剂A溶液加入上述色谱柱；
[0009] (3)采用梯度淋洗的方法对色谱柱进行洗脱，依次用体积比逐渐减小的有机溶剂 A/有机溶剂B混合液作为洗脱液进行洗脱，收集主成份流出液，最后洗下残留物；
[0010] (4)减压浓缩回收洗脱剂，得到高纯度长春地辛90wt %以上，收率为40~80%。
[0011] 在上述制备方法中：
[0012] 步骤⑴中，所采用硅胶为100~400目，干硅胶用量为5. 9~6. Ikg ;
[0013] 步骤⑴中，所述有机溶剂A为二氯甲烷、正丁醇、甲基异丙酮、乙酸乙醋、氯仿、二 氧六环中的一种；
[0014] 步骤（2)中，长春地辛上样量为1~5wt%，进料量为制备色谱柱体积的1~10%;
[0015] 步骤⑶中，所述有机溶剂B为丙酮、乙腈、二甲基甲酰胺、甲醇、二甲亚砜中的一 种；
[0016] 步骤（3)中，采用恒压恒流泵进洗脱剂，洗脱剂依次为溶剂A :B = 99 :1~80 :1、 溶剂A :B = 60 :1~45 :1、溶剂A :B = 40 :1~20 :1，洗脱剂用量为柱体积的200~500 %， 洗脱流速为每分钟洗脱柱体积的1~10% ;制备色谱柱运行的压力为〇. 1~〇. 7MPa ;
[0017] 步骤⑶中，洗脱液分段收集，收集分两段，第一段收集溶剂A :B = 60 :1~45 :1 馏分，为含量较低的长春地辛洗脱液；第二段收集溶剂A :B = 40 :1~20 :1馏分，主要为高 浓度长春地辛洗脱液。
[0018] 步骤（3)中，采用溶剂A :B = 20 :1~5 :1洗脱残留物。
[0019] 本发明以长春地辛粗品为起始原料，通过硅胶制备色谱纯化分离，实现高纯度长 春地辛的制备。本发明具有如下优点：
[0020] 1、产品纯度高，该方法可使长春地辛的纯度达到90%以上，收率为40~80%。固 定相稳定，可重复使用；
[0021] 2、本发明使用的洗脱剂易回收，可反复使用，生产成本低；
[0022] 3、工艺过程简单，设备一次性投入小，能耗低，可操作性强，适合工业化生产。
【附图说明】
[0023] 图1是本发明实施例1采用的长春地辛粗品原料的液相色谱分析图谱。
[0024] 图2是本发明实施例1得到的长春地辛产品的液相色谱分析图谱。
【具体实施方式】 [0025] 实施例1
[0026] 1)称取5. 98kg 300目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀 地装到制备色谱中，柱尺寸为?20cmX52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装 好的制备色谱柱；
[0027] 2)将195g长春地辛粗品（纯度为76. 73% )用氯仿溶解，进料，进料量为300ml ;
[0028] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：甲醇=90 :1溶剂洗脱2个床层，换用氯 仿：甲醇=40 :1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：甲醇=30 :1溶剂洗脱4 个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：甲醇=15 :1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
[0029] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛107. 7g，液相色谱检测纯度为99. 05%，收率 为 71. 3%〇
[0030] 长春地辛粗品原料的液相色谱分析图谱如图1所示，长春地辛产品的液相色谱分 析图谱如图2所示。
[0031] 实施例2
[0032] 1)称取6. IOkg 400目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀 地装到制备色谱中，柱尺寸为?20cmX52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装 好的制备色谱柱；
[0033] 2)将205g长春地辛粗品（纯度为72. 19% )用氯仿溶解，进料，进料量为320ml ;
[0034] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：甲醇=95 :1溶剂洗脱2个床层，换用氯 仿：甲醇=45 :1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：甲醇=35 :1溶剂洗脱4 个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：甲醇=15 :1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
[0035] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛94. 5g，液相色谱检测纯度为97. 86%，收率为 62. 3%〇
[0036] 实施例3
[0037] 1)称取6. OOkg 200目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀 地装到制备色谱中，柱尺寸为?20cmX52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装 好的制备色谱柱；
[0038] 2)将165g长春地辛粗品（纯度为58. 97% )用氯仿溶解，进料，进料量为280ml ;
[0039] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：甲醇=90 :1溶剂洗脱3个床层，换用氯 仿：甲醇=40 :1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：甲醇=30 :1溶剂洗脱4 个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：甲醇=10 :1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
[0040] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛90g，液相色谱检测纯度为91. 73%，收率为 84. 8% 〇
[0041] 实施例4
[0042] 1)称取5. 96kg 300目硅胶，添加二氯甲烷并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶 均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为?20cmX52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得 到装好的制备色谱柱；
[0043] 2)将184g长春地辛粗品（纯度为53. 74% )用二氯甲烷溶解，进料，进料量为 300ml ；
[0044] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用二氯甲烷：乙腈=80 :1溶剂洗脱2个床层，换 用二氯甲烷：乙腈=35 :1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用二氯甲烷：乙腈=25 : 1溶剂洗脱4个床层并收集洗脱液b，最后换用二氯甲烷：乙腈=5 :1的洗脱液洗脱制备色 谱柱中残留物；
[0045] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛66g，液相色谱检测纯度为95. 39%，收率为 63. 7%〇
[0046] 实施例5
[0047] 1)称取5. 97kg 400目硅胶，添加二氯甲烷并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶 均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为?20cmX52cm，固 定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得 到装好的制备色谱柱；
[0048] 2)将161g长春地辛粗品（纯度为64. 26 % )用二氯甲烷溶解，进料，进料量为 280ml ；
[0049] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用二氯甲烷：乙腈=85 :1溶剂洗脱3个床层，换 用二氯甲烷：乙腈=45 :1溶剂洗脱4个床层并收集洗脱液a，再换用二氯甲烷：乙腈=30 : 1溶剂洗脱4个床层并收集洗脱液b，最后换用二氯甲烷：乙腈=5 :1的洗脱液洗脱制备色 谱柱中残留物；
[0050] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛59. 7g，液相色谱检测纯度为94. 80%，收率为 54. 7%。
[0051] 实施例6
[0052] 1)称取6.20kg 300目硅胶，添加乙酸乙酯并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶 均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为?20cmX52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得 到装好的制备色谱柱；
[0053] 2)将159. 2g长春地辛粗品（纯度为63. 18% )用乙酸乙酯溶解，进料，进料量为 290ml ；
[0054] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用乙酸乙酯：甲醇=99 :1溶剂洗脱2个床层，换 用乙酸乙酯：甲醇=50 :1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用乙酸乙酯：甲醇=35 : 1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液b，最后换用乙酸乙酯：甲醇=10 :1的洗脱液洗脱制备色 谱柱中残留物；
[0055] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛52g，液相色谱检测纯度为93. 74%，收率为 48. 5% 〇
[0056] 实施例7
[0057] 1)称取6. IOkg 400目硅胶，添加乙酸乙酯并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶 均匀地装到制备色谱中，柱尺寸为Φ20ο?Χ52cm，固定相硅胶压实后，得到装好的制备色谱 柱；
[0058] 2)将169. 7g长春地辛粗品（纯度为84. 58% )用乙酸乙酯溶解，进料，进料量为 300ml ；
[0059] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用乙酸乙酯：甲醇=98 :1溶剂洗脱2个床层，换 用乙酸乙酯：甲醇=48 :1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用乙酸乙酯：甲醇=30 : 1溶剂洗脱2个床层并收集洗脱液b，最后换用乙酸乙酯：甲醇=10 :1的洗脱液洗脱制备色 谱柱中残留物；
[0060] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛64. 2g，液相色谱检测纯度为98. 75%，收率为 44. 2% 〇
[0061] 实施例8
[0062] 1)称取5. 90kg 400目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀 地装到制备色谱中，柱尺寸为?20cmX52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装 好的制备色谱柱；
[0063] 2)将191. 3g长春地辛粗品（纯度为79. 26% )用氯仿溶解，进料，进料量为 310ml ；
[0064] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：丙酮=75 :1溶剂洗脱3个床层，换用氯 仿：丙酮=40 :1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：丙酮=25 :1溶剂洗脱2 个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：丙酮=5 :1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
[0065] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛112. 3g，液相色谱检测纯度为98. 66%，收率 为 73. 1%。
[0066] 实施例9
[0067] 1)称取5. 80kg 300目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀 地装到制备色谱中，柱尺寸为?20cmX52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装 好的制备色谱柱；
[0068] 2)将170. 3g长春地辛粗品（纯度为67. 82 % )用氯仿溶解，进料，进料量为 300ml ；
[0069] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：丙酮=80 :1溶剂洗脱3个床层，换用氯 仿：丙酮=45 :1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：丙酮=30 :1溶剂洗脱2 个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：丙酮=5 :1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
[0070] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛83. 3g，液相色谱检测纯度为97. 33%，收率为 70. 2%〇
[0071] 实施例10
[0072] 1)称取6. 20kg 300目硅胶，添加氯仿并搅拌，排出硅胶中气泡，然后将硅胶均匀 地装到制备色谱中，柱尺寸为?20cmX52cm，固定相硅胶压实后，用洗脱剂冲洗2h，得到装 好的制备色谱柱；
[0073] 2)将150.1 g长春地辛粗品（纯度为72. 37 % )用氯仿溶解，进料，进料量为 280ml ；
[0074] 3)采用恒压恒流泵进洗脱剂，先用氯仿：丙酮=75 :1溶剂洗脱3个床层，换用氯 仿：丙酮=45 :1溶剂洗脱3个床层并收集洗脱液a，再换用氯仿：丙酮=30 :1溶剂洗脱2 个床层并收集洗脱液b，最后换用氯仿：丙酮=5 :1的洗脱液洗脱制备色谱柱中残留物；
[0075] 4)减压回收洗脱液b，得到长春地辛77. 3g，液相色谱检测纯度为96. 56%，收率为 68. 7%〇
【主权项】
1. 一种长春地辛的纯化方法，其特征在于包括如下步骤： (1) 采用有机溶剂A溶胀后的硅胶为色谱柱填料制备色谱柱； (2) 将长春地辛粗品有机溶剂A溶液加入上述色谱柱； (3) 采用梯度淋洗的方法对色谱柱进行洗脱，依次用体积比逐渐减小的有机溶剂A/有 机溶剂B混合液作为洗脱液进行洗脱，收集主成份流出液，最后洗下残留物； (4) 减压浓缩回收洗脱剂，得到高纯度长春地辛。2. 根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（1)中，所采用硅胶为100~400 目，干硅胶用量为5. 9~6.Ikg。3. 根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（1)中，所述有机溶剂A为二氯甲 烷、正丁醇、甲基异丙酮、乙酸乙酯、氯仿、二氧六环中的一种。4. 根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（2)中，所述长春地辛上样量为 1~5wt%，进料量为制备色谱柱体积的1~10%。5. 根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（3)中，所述有机溶剂B为丙酮、乙 腈、二甲基甲酰胺、甲醇、二甲亚砜中的一种。6. 根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（3)中，采用恒压恒流泵进洗脱剂， 洗脱剂依次为溶剂A:B=99 :1~80 :1、溶剂A:B=60 :1~45 :1、溶剂A:B=40 :1~20 :1，洗 脱剂用量为柱体积的200~500%，洗脱流速为每分钟洗脱柱体积的1~10% ;制备色谱柱运 行的压力为〇? 1~0.7MPa。7. 根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（3)中，洗脱液分段收集，收集分两 段，第一段收集溶剂A:B=60 :1~45 :1馏分；第二段收集溶剂A:B=40 :1~20 :1馏分。8. 根据权利要求1所述的纯化方法，其特征是：步骤（3)中，采用溶剂A:B=20 :1~5 : 1洗脱残留物。
【专利摘要】本发明公开了一种长春地辛的纯化方法。（1）采用有机溶剂A溶胀后的硅胶为色谱柱填料制备色谱柱；（2）将长春地辛粗品有机溶剂A溶液加入上述色谱柱；（3）采用梯度淋洗的方法对色谱柱进行洗脱，依次用体积比逐渐减小的有机溶剂A/有机溶剂B混合液作为洗脱液进行洗脱，收集主成份流出液，最后洗下残留物；（4）减压浓缩回收洗脱剂，得到高纯度长春地辛。本发明所得产品纯度高，该方法可使长春地辛的纯度达到90%以上，收率为40～80%。固定相稳定，可重复使用。
【IPC分类】C07D519/04
【公开号】CN104892642
【申请号】CN201510276239
【发明人】宋晓燕, 颜景胡, 袁诚, 李金华, 傅玉萍, 林秀仙, 潘振华, 李咏华
【申请人】广州白云山汉方现代药业有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月26日
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