考布他汀类似物水溶性前-前药及其制备方法
考布他汀类似物水溶性前-前药及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种水溶性的考布他汀类似物（Combretastatin A-4 analogue)的 前-前药及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 考布他汀类似物是一类小分子肿瘤血管革E向阻断试剂（Vascular Disrupting Agents，VDA)。它能针对肿瘤血管显示出特异性靶向和阻断破坏已生成的肿瘤血管，使肿 瘤得不到氧气和营养，直至肿瘤"饿死"。因此，对于现有化疗和放疗不能轻易杀死的肿瘤核 心部位的癌细胞，考布他汀类似物可以从内到外地彻 110, 2170-2177 (29 April 2014))〇
[0003] 考布他汀类似物是一类顺式1，2-二苯乙烯芳胺衍生物。由于其水溶性非常低，限 制了临床应用。目前，考布他汀类似物的丝氨酸盐酸盐(AVE8062)水溶性前药由赛诺飞-安 万特制药公司研发进入II期临床研宄。但仍存在着水解稳定性差，体内传运性质不好，毒 性较大等问题。（Lancet Oncol. 2015 Apr 8.) 前药（prodrug)设计已成为药物设计领域中重要的有效手段之一。关于前药概念和应 用已有诸多专利申请并获权。但是，这样的前药常常存在一些问题，如根据特异性靶位裂解 机制（如酶活性）设计的前药，往往因达不到靶位组织而失效；为改善水溶性而设计的注射 用前药，会因其不稳定，在溶液中易分解而不能应用等。克服前药的上述缺点，改善前药的 性质，目前看来较有前途的方法是采用串联潜伏化（Cascade Latentiation)方法，即设计 双前药（Double prodrug)或前-前药（Pro_prodrug)(Bundgaard Η· The double prodrug concept and its applications. Adv Drug Delivery Rev 1999; 3: 39)。例如：将在特异 性部位裂解的前药，进一步潜伏化，改善其传运性能，制成在体内具有良好传运性质，能有 效地到达作用靶位的前药的前药。再如：采用串联潜伏化，使前药具有较理想的性质，即同 时具有体外的足够稳定性和体内再生母体药物的高度敏感性。一般的思路是使体外足够稳 定的双前药在体内先经酶解成前药，然后经酶或非酶分解迅速释放出母体药物，从而发挥 药效。更进一步地研宄发现：双前药或前-前药在体内先经酶解生成前药，而后可经酶或非 酶的化学作用迅速释放出母体药物，发挥药效。前期研宄表明，化合物3- (2'_羟基-4'， 6' -二甲基苯基）-3, 3-二甲基丙酸的酰胺形式在人体内pH值环境下具有快速反应活性， 可以满足双前药设计的要求。Milstien和Cohen小组的研宄（J. Am. Chem. Soc. 1972， 94 (26)，9158-9165)以及 Caswell 和 Schmir 小组的研宄（J. Am. Chem. Soc. 1980，102 (14)，4815-4821)都表明3, 3位上二甲基和6'位上的甲基组成一个所谓"三甲基锁"效 应，使得其分子具有快速内酯化作用。正是由于这个特性，它可以很好的用来设计胺类化合 物的前药。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的之一在于提供一种考布他汀类似物前-前药。
[0005] 本发明的目的之二在于提供该前-前药的制备方法。
[0006] 本发明创造性的运用"磷酸钠盐"水溶性前药和"羟基-酰胺类化合物的'三甲基 锁效应'，提高体内传运性能"的理念，设计合成考布他汀类似物的前-前药，首先构筑具 有"三甲基锁效应"的化合物2c。用3，5-二甲基苯酚和异戊烯酸甲酯在甲基磺酸溶液中 回流反应，得到4，4，5，7-四甲基-3，4-二氢香豆素（2a)。随后2a在氢化铝锂作还原 剂，无水四氢呋喃作溶剂的条件下，还原成3- (2' -羟基-4'，6' -二甲基苯基）-3， 3-二甲基丙醇（2b)。化合物2b溶于二氯甲烷，加入保护试剂叔丁基二甲基氯硅烷，在缚酸 剂三乙胺的作用下，室温反应24小时，得到1-0-叔丁基二甲基硅基-3-(2' -羟基-4'， 6' -二甲基苯基）-3，3-二甲基丙醇（2c)。接着实施磷酸酯化，形成水溶性磷酸二钠盐前 药。化合物2c溶于无水四氢呋喃，在叔丁醇钾和焦磷酸四苄酯作用下，60°C反应1小时，得 到1-0-叔丁基二甲基硅基_3-[2' -氧代（二苄基磷酸酯基）-4'，6' -二甲基苯基]-3， 3-二甲基丙醇（2d)，化合物2d溶解在丙酮中，加入氟化钾后，滴入新制Jones试剂，反应 后得3-[2' -氧代（二苄基磷酸基）-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二甲基丙酸（2e)。在 四氢呋喃溶剂中，化合物2e在搅拌下溶解，再加入新蒸的亚硫酰氯，加热回流4小时候，减 压除去溶剂和过量的亚硫酰氯，随后再次加入无水四氢呋喃溶解反应余留物，加入cis-1， 2- (3，4，4'，5-四甲氧基-3' -氨基）二苯乙稀(考布他汀类似物；Combretastatin A-4 analogue)，室温反应过夜，柱层析分离纯化后，得到考布他汀类似物酰胺化前药（2f)。 考布他汀类似物酰胺化前药（2f)溶于干燥乙腈中，在冰水浴条件下，滴加三甲基溴硅烷，用 薄板层析（TCL)跟踪反应完全后，加入甲醇钠/甲醇溶液，室温搅拌下，出现大量沉淀时， 加入丙酮，搅拌过夜至沉淀完全，得考布他汀类似物水溶性前-前药2g，该方法的合成路线 为.
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种的考布他汀类似物的水溶性前-前药，其特征在于其结构式如下：
[0007] -种制备上述的考布他汀类似物的水溶性前-前药的方法，其特征在于该方法的 具体步骤为： a. 将3，5-二甲基苯酚与异戊烯酸甲酯按1:1. 1~1:1.5的摩尔比溶于甲基磺酸中， 搅拌下回流反应至TLC跟踪反应结束；将反应液用水稀释，用乙酸乙酯萃取，有机层用质量 百分比浓度为5%的NaHCCV冼涤，再用饱和NaCl溶液洗涤，无水MgSO 4干燥，过滤，滤液旋 转蒸发，再经提纯得黄色固体，即为4，4，5，7-四甲基-3，4-二氢香豆素，其结构式为：
b. 在惰性气氛保护下，将步骤a所得4，4，5，7-四甲基-3，4-二氢香豆素在氢化 铝锂无水四氢呋喃作溶剂的銮仳下不庖成·?-〇，-羟基-4，，6，-二甲基苯基）-3，
3-二甲基丙醇，其结构式爻 c. 在惰性气氛下，将步骤b所得3_ (2' -羟基_4'，6' -二甲基苯基）_3，3_二 甲基丙醇和保护试剂叔丁基二甲基氯硅烷按1:1. 1~1:1. 5的摩尔比溶于二氯甲烷，在缚 酸剂三乙胺的作用下，搅拌反应至TLC跟踪反应结束；反应液过滤，滤液旋干后，用二氯甲 烷溶解，水洗涤，有机相用无水MgSO 4干燥，过滤，滤液旋转蒸发，经分离提纯得到1-0-叔 丁基二甲基硅基_3-(2' -羟基-4'，6' -二甲基苯基）-3,3_二甲基丙醇，其结构式为：
d. 将步骤c所得1-0-叔丁基二甲基硅基_3-(2' -羟基-4'，6' -二甲基苯 基）-3, 3-二甲基丙醇和叔丁醇钾按1:1. 1~1:1.5的摩尔比溶于四氢呋喃中，回流至 反应液由蓝色变为黄色；再加入焦磷酸四苄酯，继续搅拌回流反应至TLC跟踪反应结 束；冷至室温后加入石油醚，过滤，滤液去除溶剂，经分离提纯得到l-o-叔丁基二甲基硅 基-3-[2'-氧代(二苄基磷酸酯基)-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二甲基丙醇，其结构式 为
1 ;所述的焦磷酸四苄酯与1-0-叔丁基二甲基硅基-3-(2'_羟 基-4'，6' -二甲基苯基）-3, 3-二甲基丙醇的摩尔比为：1:1. 1~1:1.5 ; e. 在冰水浴中，将步骤d所得1-0-叔丁基二甲基硅基-3-(2'_羟基-4'，6'-二甲 基苯基）-3, 3-二甲基丙醇和氟化钾按1:4~1:7的摩尔比溶于丙酮中，在缓慢滴加催化剂 用量的Jones试剂，继续搅拌反应至TLC跟踪反应结束；向反应液中滴加异丙醇至反应液 由黄绿色变成土绿色，继续搅拌至反应液呈蓝绿色；除去溶剂得深绿色固体，用乙酸乙酯溶 解，水洗，用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和NaCl溶液洗，干燥，过滤，去除溶剂，再经提纯得 白色固体，即为3-[2' -氧代(二苄基磷酸基)-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二甲基丙酸， 其结构式为
f. 将步骤e所得3-[2' -氧代(二苄基磷酸基）-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二甲 基丙酸和亚硫酰氯按1:2~1:5的摩尔比溶于四氢呋喃溶剂中，回流反应4小时候 ，除去溶 剂和过量的亚硫酰氯，随后再次加入无水四氢呋喃溶解反应余留物，再加入cis-1，2- (3， 4，4，5-四甲氧基-3'-氨基)二苯乙烯，室温反应至TLC跟踪反应完全，经分离纯化后，得 到考布他汀类似物酰胺化前药，其结构式为 所述的3-[2' -氧代(二苄基磷酸基)-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-
二甲基丙酸与cis-1， 2- (3，4，4，5-四甲氧基-3' -氨基）二苯乙烯的摩尔比为：1:0. 5~1:1; g. 将步骤f所得考布他汀类似物酰胺化前药溶于乙腈中，在冰水浴条件下，滴加三甲 基溴硅烷，继续搅拌反应至TLC跟踪反应完全，再加入甲醇钠的甲醇溶液，室温搅拌反应有 白色沉淀生成；加入大量丙酮溶液搅拌过夜，抽滤得白色粉末固体，即为考布他汀类似物的 水溶性前-前药，其结构式为：。
[0008] 本发明所涉及的考布他汀类似物的水溶性前-前药是一种新颖的控释型前药。由 国家上海新药安全评价研宄中心按急性毒理试验规范标准进行测试。该受试物的类似物万 艾可的小鼠急性毒性试验资料显示，当剂量达到1000 mg/kg时，动物出现死亡。故本试验 初步拟定剂量为300、500、1000 mg/kg，并于给药后第四天增加2000 mg/kg剂量组，观察单 次给药后动物的毒性反应和死亡情况。其急性毒理试验显示MTD为2000mg/kg。
[0009] 本发明通过焦磷酸四苄酯，使得酚羟基磷酸酯化，形成磷酸钠盐水溶性前药。用 3- (2'-羟基-4'，6'-二甲基苯基）-3，3-二甲基丙酸，构筑"三甲基锁"效应，形成 前-前药，在体内迅速地酯化靶向释放母体药物。该前-前药改善其传运性能，在体内具有 良好传运性质、能有效地达到作用靶位，其释放母体药物过程如下式所示： η
λ 八
【具体实施方式】
[0010] 以下每一实施例均为考布他汀类似物的水溶性前-前药的制备方法，它们只用于 说明本发明，并非对本发明的限定。
[0011] 实施例一：制备4，4，5，7-四甲基-3，4-二氢香豆素（2a) 称取3，5-二甲基苯酷（5.002 g 41 mmol)加入装有5 ml甲基磺酸溶液的50 ml前 形瓶中，搅拌下再加入异戊稀酸甲醋（5.161 g 45. 2 mmol)，加入后溶液呈红褐色。在前形 瓶上依次装好球形冷凝管、干燥管，油浴加热至80°C磁力搅拌，冷凝回流，TLC跟踪(石油 醚：乙酸乙酯=1 : 1)，反应结束(约12小时)。将反应液加800 ml水稀释，用乙酸乙酯萃取 (200 ml X 2 )，合并有机层，5% NaHCCV冼涤（200 ml X 3 )，再用100 ml饱和NaCl溶液洗涤， 无水MgSO4干燥，过滤，滤液旋转蒸发得黄色固体，用乙酸乙酯-石油醚重结晶，过滤得白色 晶状固体，真空干燥（40°〇，称重得7.344 8，产率：87.8%;111? 89-90°〇； 化合物 2a: 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.741 (1H, d, J = 0.5 Hz) ;6· 711 (1H， d，J = 0· 5Hz); 2.589 (2H，s) ;2· 457 (3H，s) ;2· 270 (3H，s) ; 1.434 (6H，s)。
[0012] 实施例二：制备3-(2'-羟基-4'，6' -二甲基苯基）-3，3-二甲基丙醇（2b) 称取LAH (I equiv 0.951 g)溶于40 ml新蒸四氢呋喃溶液于100 ml三口瓶中，冰浴 下搅拌呈灰色悬浮液，再称取化合物2a(5. 109 g 25 mmol)溶于18 ml新蒸四氢呋喃溶液， 氩气保护下缓慢滴入上述LAH的四氢呋喃溶液中，有气体生成。滴毕，自然升温至室温，搅 拌反应1小时，TLC跟踪反应结束(石油醚：乙酸乙酯=2 : 1)。于上述反应液中缓慢滴加 饱和NH4Cl溶液淬灭至不再冒泡，溶液成白色悬浊液。过滤(加一层硅藻土助滤、吸附)，滤 液加100 ml水混合，用乙醚萃取（50 mlX3)，合并有机相，无水MgSO4干燥，过滤，滤液旋转 蒸发除溶剂得无色粘稠液，用乙酸乙酯-正已烷重结晶，过滤得白色亮晶状固体，真空干燥 (40°C)，称重得 4.655 g，产率：89.4% ;mp 112-114°C; 化合物2b: 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.487 (1H, d, J = 0·5Ηζ)，6.334 (1H, d， J = 0·5Ηζ)，5·867 (1Η，br)，3.624 (2Η，t，J = 7.0 Ηζ)，2·471 (3Η，s)，2.233 (2Η， t，J = 7.0 Hz)，2.166 (3H, s)，1.548 (6H, s)。
[0013] 实施例三：制备1-0-叔丁基二甲基硅基-3-(2'_羟基-4'，6'-二甲基苯基）-3, 3-二甲基丙醇（2c) 称取化合物2b (1.165 g 6. 5 mmol)于100 ml三口瓶中，再加入叔丁基二甲基氯硅烷 (0. 932 g 7. 15 mmol)，氩气保护下溶于20 ml二氯甲烧中，冰浴，搅拌约10分钟。通过恒 压滴液漏斗滴加三乙胺（3. 4 ml)的二氯甲烷溶液6 ml于三口瓶中，滴速ld/ (6~7)S。滴 加完毕后除去冰浴，自然升温至室温，反应体系呈浅茶色。搅拌反应24 h，反应液变澄清， TLC跟踪反应结束(石油醚：乙酸乙酯=1 : 1)，反应停止。反应液过滤，滤液旋干后，再加 入25 ml二氯甲烷溶解，用水洗涤（10 mlX4)，合并有机相，无水MgSO4干燥，过滤，滤液旋 转蒸发得白色固体，用乙酸乙酯-正已烷重结晶，过滤得无色晶状固体，真空干燥（40°C)， 称重得2. 064 g，产率：98. 6%; 化合物2c: 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.487 (1H, d, J = 0·5Ηζ)，6.409 (lH，d, J =0. 5Hz), 5. 622 (1H, br), 3. 590 (2H, t, J = 7. 0 Hz), 2. 449 (3H, s), 2. 183 (3H, s)，2.108 (2H, t, J = 7.0 Hz)，1.545 (6H, s)，0.868 (9H, s)，0.013 (6H, s)。
[0014] 实施例四：制备1-0-叔丁基二甲基硅基-3_[2' -氧代（二苄基磷酸基）-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二甲基丙醇（2d) 称取化合物2c (0.252 g 0.78 mmol)溶解在20 ml新蒸THF溶液于100 ml三口瓶 中，搅拌下再加入叔丁醇钾（0.1 g 0.86 mmol)于瓶内，溶液呈蓝色。油浴加热至60°C，回 流约5分钟后溶液由蓝色变为黄色。趁热加入焦磷酸四苄酯（0.463 g 0.86 _〇1)，继续搅 拌，有乳白色沉淀生成。在回流下继续反应1小时，TLC跟踪反应结束(石油醚：乙酸乙酯 =3 : 2)，反应停止加热，冷至室温后加入30 ml石油醚，过滤，除去不溶物，滤液为浅黄色清 液，减压除溶剂，得一黄色油状物。柱层析分离提纯(洗脱剂：乙酸乙酯：石油醚=1 : 3)， 旋蒸除溶剂，得浅黄色色油状物，真空干燥（40°C)，称重得0. 394g，产率：87. 2%。
[0015] 化合物 2d: 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7. 135 (10H，m)，6.838 (1H，d，J = 0·5Ηζ)，6.654 (1H, d, J = 0·5Ηζ)，5.171 (4H, d, J = 8.0 Ηζ)，3·562 (2H, t, J = 7· 0 Hz)，2· 462 (3Η, s)，2· 149 (3Η, s)，2· 096 (2Η, t, J = 7· 0 Hz)，L 598 (6Η, s)，0.921 (9Η，s)，0.021 (6Η，s)。
[0016] 实施例五:制备3_[2' -氧代(二苄基磷酸基）_4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二 甲基丙酸（2e) 称取化合物2d (0. 394 g 0. 68 mmol)溶解在5 ml丙酮于25 ml三口瓶中，冰浴，再加 入氟化钾（0. 040 g 2. 72 mmol)于瓶内，搅拌5分钟。滴液漏斗缓慢滴加0. 6 ml新制Jones 试剂于反应瓶中，溶液呈褐色伴随沉淀生成，继续搅拌反应2小时，TLC跟踪反应结束(石油 醚：乙酸乙酯=3 : 2)。向反应瓶中滴加异丙醇2. 7 ml，溶液由黄绿色变成土绿色，继续搅 拌20分钟，溶液呈蓝绿色。将反应液转移至50 ml单 口瓶，旋转蒸发除去溶剂得深绿色固 体。将深绿色固体用12 ml乙酸乙酯溶解，15 ml H2O洗，分离有机相。水相用乙酸乙酯萃 取（10 ml X 3 )，合并有机相。饱和NaCl溶液洗（10 ml X 2 )，无水MgSO4干燥，过滤，滤液旋转 蒸发除溶剂得黄绿色油状物，用乙醚-正已烷重结晶，过滤得白色固体，真空干燥（40°C)， 称重得0. 247 g，产率：75. 4% ; 化合物 2e: 1H NMR (500 MHz, DMS0-d6) δ 11.804 (1H, br)，7.367 (10H, m)， 6. 929 (1H, d, J = 0· 5Hz)，6. 735 (1H, d, J = 0· 5Hz)，5. 141 (4H, d, J = 8. 0 Hz)， 2.795 (2H，s)，2.475 (3H，s)，2.103 (3H，s)，1.512 (6H，s)。
[0017] 实施例六:制备考布他汀类似物和2e的酰胺化产物（2f) 称取化合物2e (0.531 g LI mmol)于50 ml茄型瓶中，加入40 ml新蒸THF，搅拌溶 解，再加入SOCl2 (0.17 ml ;2. 3 mmol)，装好带有干燥管的球形冷凝管，加热回流反应4小 时。反应结束后停止加热，稍冷后减压蒸除溶剂及多余的SOCl 2，得一浅黄色油状物。将油 状物溶于40 ml新蒸THF，搅拌下加入考布他汀类似物（0.182 g 0.55 mmol)，室温搅拌反 应过夜，TLC跟踪反应完全。减压除溶剂，将油状物柱层析分离收集产物点，旋蒸除溶剂得 茶色油状物0. 402 g，产率90%。
[0018] 化合物 2f: 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8. 238 (1H，br)，7.670 (1H，s)， 7.291 (10H，m)，7.114 (1H，s)，6.931 (1H，d，J = 0·5Ηζ)，6.920 (1H，q，J = 8·5Ηζ)，6·722 (1H, d, J = 0. 5Hz)，6.708 (1H, s)，6.582 (1H, d, J = 8. 5Hz)，6.465 (1H, d, J = 12. 5Hz)，6. 386 (1H, d, J = 12. 5Hz)，5. 108 (4H, d, J = 8Hz)，3. 825 (3H, s)，3. 772 (3H, s)，3. 645 (6H, s)，2. 879 (2H, s)，2. 467 (3H, s)，2. 158 (3H， s)，1.647 ^H, s)。
[0019] 实施例七：制备考布他汀类似物水溶性前-前药（2g) 称取化合物2f (1.427g 1.8mmol)于50ml圆底烧瓶中，加入已干燥的乙腈9ml，冰浴 下搅拌溶解。恒压滴液漏斗滴加三甲基溴硅烷（〇.6ml 4. 5_〇1)，溶液由无色变为紫色，继 续搅拌，溶液颜色逐渐变浅，TLC跟踪反应，反应完全后加入甲醇钠（195mg 3. 6mmol)和甲 醇溶液18ml，室温搅拌，有白色沉淀生成。加入大量丙酮溶液搅拌过夜，抽滤得白色粉末固 体，真空干燥（40°C )，称重得0. 8972 g，产率：75. 8% ; 化合物 Sgi1H NMR (500 MHz, D2O) δ 8.226 (1H, br)，7.645 (1H, s)，7.117 (1H， s)，6.923 (1H, d, J = 0.5Hz)，6.878 (1H, q, J = 8·5Ηζ)，6.767 (1H, d, J = 0.5Hz)， 6. 718 (1H, s)，6.585 (1H, d, J = 8.5Hz)，6.457 (1H, d, J = 12Hz)，6.382 (1H, d， J = 12.5Hz)，3.834 (3H，s)，3.766 (3H，s)，3.638 (6H，s)，2.855 (2H，s)，2.439 (3H, s)，2. 143 (3H, s)，I. 623 (6H, s)。
【主权项】
1. 一种的考布他汀类似物的水溶性前-前药，其特征在于其结构式如下：2. -种制备根据权利要求1所述的考布他汀类似物的水溶性前-前药的方法，其特征 在于该方法的具体步骤为： a. 将3，5-二甲基苯酚与异戊烯酸甲酯按1:1. 1~1:1.5的摩尔比溶于甲基磺酸中， 搅拌下回流反应至TLC跟踪反应结束；将反应液用水稀释，用乙酸乙酯萃取，有机层用质量 百分比浓度为5%的NaHCCV冼涤，再用饱和NaCl溶液洗涤，无水MgSO 4干燥，过滤，滤液旋 转蒸发，再经提纯得黄色固体，即为4，4，5，7-四甲基-3，4-二氢香豆素，其结构式为：b. 在惰性气氛保护下，将步骤a所得4，4，5，7-四甲基-3，4-二氢香豆素在氢化 铝锂无水四氢呋喃作溶剂的条件下，还原成3- (2'_羟基-4'，6' -二甲基苯基）-3， 3-二甲基丙醇，其结构式为：c. 在惰性气氛下，将步骤b所得3_ (2' -羟基_4'，6' -二甲基苯基）_3，3_二 甲基丙醇和保护试剂叔丁基二甲基氯硅烷按1:1. 1~1:1. 5的摩尔比溶于二氯甲烷，在缚 酸剂三乙胺的作用下，搅拌反应至TLC跟踪反应结束；反应液过滤，滤液旋干后，用二氯甲 烷溶解，水洗涤，有机相用无水MgSO4干燥，过滤，滤液旋转蒸发，经分离提纯得到1-0-叔 丁基二甲基硅基_3-(2' -羟基-4'，6' -二甲基苯基）-3,3_二甲基丙醇，其结构式为：d. 将步骤c所得1-0-叔丁基二甲基硅基_3-(2' -羟基-4'，6' -二甲基苯 基）-3, 3-二甲基丙醇和叔丁醇钾按1:1. 1~1:1.5的摩尔比溶于四氢呋喃中，回流至 反应液由蓝色变为黄色；再加入焦磷酸四苄酯，继续搅拌回流反应至TLC跟踪反应结 束；冷至室温后加入石油醚，过滤，滤液去除溶剂，经分离提纯得到l-o-叔丁基二甲基硅 基-3-[2'-氧代(二苄基磷酸酯基)-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二甲基丙醇，其结构式 为：；所述的焦磷酸四苄酯与1-0-叔丁基二甲基硅基-3-(2'_羟 基-4'，6' -二甲基苯基）-3, 3-二甲基丙醇的摩尔比为：1:1. 1~1:1.5 ; e. 在冰水浴中，将步骤d所得1-0-叔丁基二甲基硅基-3-(2'_羟基-4'，6'-二甲 基苯基）-3, 3-二甲基丙醇和氟化钾按1:4~1:7的摩尔比溶于丙酮中，在缓慢滴加催化剂 用量的Jones试剂，继续搅拌反应至TLC跟踪反应结束；向反应液中滴加异丙醇至反应液 由黄绿色变成土绿色，继续搅拌至反应液呈蓝绿色；除去溶剂得深绿色固体，用乙酸乙酯溶 解，水洗，用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和NaCl溶液洗，干燥，过滤，去除溶剂，再经提纯得 白色固体，即为3-[2' -氧代(二苄基磷酸基)-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二甲基丙酸， 其结构式为：f. 将步骤e所得3-[2' -氧代(二苄基磷酸基）-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二甲 基丙酸和亚硫酰氯按1:2~1:5的摩尔比溶于四氢呋喃溶剂中，回流反应4小时候，除去溶 剂和过量的亚硫酰氯，随后再次加入无水四氢呋喃溶解反应余留物，再加入cis-1，2- (3， 4，4，5-四甲氧基-3'-氨基)二苯乙烯，室温反应至TLC跟踪反应完全，经分离纯化后，得 到考布他汀类似物酰胺化前药，其结构式为：所述的3-[2' -氧代(二苄基磷酸基)-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二甲基丙酸与cis-1， 2- (3，4，4，5-四甲氧基-3' -氨基）二苯乙烯的摩尔比为：1:0. 5~1:1; g. 将步骤f所得考布他汀类似物酰胺化前药溶于乙腈中，在冰水浴条件下，滴加三甲 基溴硅烷，继续搅拌反应至TLC跟踪反应完全，再加入甲醇钠的甲醇溶液，室温搅拌反应有 白色沉淀生成；加入大量丙酮溶液搅拌过夜，抽滤得白色粉末固体，即为考布他汀类似物的 水溶性前-前药，其结构式为：
【专利摘要】本发明涉及一种考布他汀类似物的前-前药及其制备方法。该前-前药的结构式为：该前-前药改善其传运性能，制成在体内具有良好传运性质、能有效地达到作用靶位的前药。
【IPC分类】C07F9/12, A61K47/48, A61P35/00, A61K31/167
【公开号】CN104892668
【申请号】CN201510241243
【发明人】鲍治成, 沈卫平, 卜海冬, 王军福, 于静, 方栋
【申请人】上海大学
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月12日
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种水溶性的考布他汀类似物（Combretastatin A-4 analogue)的 前-前药及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 考布他汀类似物是一类小分子肿瘤血管革E向阻断试剂（Vascular Disrupting Agents，VDA)。它能针对肿瘤血管显示出特异性靶向和阻断破坏已生成的肿瘤血管，使肿 瘤得不到氧气和营养，直至肿瘤"饿死"。因此，对于现有化疗和放疗不能轻易杀死的肿瘤核 心部位的癌细胞，考布他汀类似物可以从内到外地彻 110, 2170-2177 (29 April 2014))〇
[0003] 考布他汀类似物是一类顺式1，2-二苯乙烯芳胺衍生物。由于其水溶性非常低，限 制了临床应用。目前，考布他汀类似物的丝氨酸盐酸盐(AVE8062)水溶性前药由赛诺飞-安 万特制药公司研发进入II期临床研宄。但仍存在着水解稳定性差，体内传运性质不好，毒 性较大等问题。（Lancet Oncol. 2015 Apr 8.) 前药（prodrug)设计已成为药物设计领域中重要的有效手段之一。关于前药概念和应 用已有诸多专利申请并获权。但是，这样的前药常常存在一些问题，如根据特异性靶位裂解 机制（如酶活性）设计的前药，往往因达不到靶位组织而失效；为改善水溶性而设计的注射 用前药，会因其不稳定，在溶液中易分解而不能应用等。克服前药的上述缺点，改善前药的 性质，目前看来较有前途的方法是采用串联潜伏化（Cascade Latentiation)方法，即设计 双前药（Double prodrug)或前-前药（Pro_prodrug)(Bundgaard Η· The double prodrug concept and its applications. Adv Drug Delivery Rev 1999; 3: 39)。例如：将在特异 性部位裂解的前药，进一步潜伏化，改善其传运性能，制成在体内具有良好传运性质，能有 效地到达作用靶位的前药的前药。再如：采用串联潜伏化，使前药具有较理想的性质，即同 时具有体外的足够稳定性和体内再生母体药物的高度敏感性。一般的思路是使体外足够稳 定的双前药在体内先经酶解成前药，然后经酶或非酶分解迅速释放出母体药物，从而发挥 药效。更进一步地研宄发现：双前药或前-前药在体内先经酶解生成前药，而后可经酶或非 酶的化学作用迅速释放出母体药物，发挥药效。前期研宄表明，化合物3- (2'_羟基-4'， 6' -二甲基苯基）-3, 3-二甲基丙酸的酰胺形式在人体内pH值环境下具有快速反应活性， 可以满足双前药设计的要求。Milstien和Cohen小组的研宄（J. Am. Chem. Soc. 1972， 94 (26)，9158-9165)以及 Caswell 和 Schmir 小组的研宄（J. Am. Chem. Soc. 1980，102 (14)，4815-4821)都表明3, 3位上二甲基和6'位上的甲基组成一个所谓"三甲基锁"效 应，使得其分子具有快速内酯化作用。正是由于这个特性，它可以很好的用来设计胺类化合 物的前药。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的之一在于提供一种考布他汀类似物前-前药。
[0005] 本发明的目的之二在于提供该前-前药的制备方法。
[0006] 本发明创造性的运用"磷酸钠盐"水溶性前药和"羟基-酰胺类化合物的'三甲基 锁效应'，提高体内传运性能"的理念，设计合成考布他汀类似物的前-前药，首先构筑具 有"三甲基锁效应"的化合物2c。用3，5-二甲基苯酚和异戊烯酸甲酯在甲基磺酸溶液中 回流反应，得到4，4，5，7-四甲基-3，4-二氢香豆素（2a)。随后2a在氢化铝锂作还原 剂，无水四氢呋喃作溶剂的条件下，还原成3- (2' -羟基-4'，6' -二甲基苯基）-3， 3-二甲基丙醇（2b)。化合物2b溶于二氯甲烷，加入保护试剂叔丁基二甲基氯硅烷，在缚酸 剂三乙胺的作用下，室温反应24小时，得到1-0-叔丁基二甲基硅基-3-(2' -羟基-4'， 6' -二甲基苯基）-3，3-二甲基丙醇（2c)。接着实施磷酸酯化，形成水溶性磷酸二钠盐前 药。化合物2c溶于无水四氢呋喃，在叔丁醇钾和焦磷酸四苄酯作用下，60°C反应1小时，得 到1-0-叔丁基二甲基硅基_3-[2' -氧代（二苄基磷酸酯基）-4'，6' -二甲基苯基]-3， 3-二甲基丙醇（2d)，化合物2d溶解在丙酮中，加入氟化钾后，滴入新制Jones试剂，反应 后得3-[2' -氧代（二苄基磷酸基）-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二甲基丙酸（2e)。在 四氢呋喃溶剂中，化合物2e在搅拌下溶解，再加入新蒸的亚硫酰氯，加热回流4小时候，减 压除去溶剂和过量的亚硫酰氯，随后再次加入无水四氢呋喃溶解反应余留物，加入cis-1， 2- (3，4，4'，5-四甲氧基-3' -氨基）二苯乙稀(考布他汀类似物；Combretastatin A-4 analogue)，室温反应过夜，柱层析分离纯化后，得到考布他汀类似物酰胺化前药（2f)。 考布他汀类似物酰胺化前药（2f)溶于干燥乙腈中，在冰水浴条件下，滴加三甲基溴硅烷，用 薄板层析（TCL)跟踪反应完全后，加入甲醇钠/甲醇溶液，室温搅拌下，出现大量沉淀时， 加入丙酮，搅拌过夜至沉淀完全，得考布他汀类似物水溶性前-前药2g，该方法的合成路线 为.
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种的考布他汀类似物的水溶性前-前药，其特征在于其结构式如下：
[0007] -种制备上述的考布他汀类似物的水溶性前-前药的方法，其特征在于该方法的 具体步骤为： a. 将3，5-二甲基苯酚与异戊烯酸甲酯按1:1. 1~1:1.5的摩尔比溶于甲基磺酸中， 搅拌下回流反应至TLC跟踪反应结束；将反应液用水稀释，用乙酸乙酯萃取，有机层用质量 百分比浓度为5%的NaHCCV冼涤，再用饱和NaCl溶液洗涤，无水MgSO 4干燥，过滤，滤液旋 转蒸发，再经提纯得黄色固体，即为4，4，5，7-四甲基-3，4-二氢香豆素，其结构式为：
b. 在惰性气氛保护下，将步骤a所得4，4，5，7-四甲基-3，4-二氢香豆素在氢化 铝锂无水四氢呋喃作溶剂的銮仳下不庖成·?-〇，-羟基-4，，6，-二甲基苯基）-3，
3-二甲基丙醇，其结构式爻 c. 在惰性气氛下，将步骤b所得3_ (2' -羟基_4'，6' -二甲基苯基）_3，3_二 甲基丙醇和保护试剂叔丁基二甲基氯硅烷按1:1. 1~1:1. 5的摩尔比溶于二氯甲烷，在缚 酸剂三乙胺的作用下，搅拌反应至TLC跟踪反应结束；反应液过滤，滤液旋干后，用二氯甲 烷溶解，水洗涤，有机相用无水MgSO 4干燥，过滤，滤液旋转蒸发，经分离提纯得到1-0-叔 丁基二甲基硅基_3-(2' -羟基-4'，6' -二甲基苯基）-3,3_二甲基丙醇，其结构式为：
d. 将步骤c所得1-0-叔丁基二甲基硅基_3-(2' -羟基-4'，6' -二甲基苯 基）-3, 3-二甲基丙醇和叔丁醇钾按1:1. 1~1:1.5的摩尔比溶于四氢呋喃中，回流至 反应液由蓝色变为黄色；再加入焦磷酸四苄酯，继续搅拌回流反应至TLC跟踪反应结 束；冷至室温后加入石油醚，过滤，滤液去除溶剂，经分离提纯得到l-o-叔丁基二甲基硅 基-3-[2'-氧代(二苄基磷酸酯基)-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二甲基丙醇，其结构式 为
1 ;所述的焦磷酸四苄酯与1-0-叔丁基二甲基硅基-3-(2'_羟 基-4'，6' -二甲基苯基）-3, 3-二甲基丙醇的摩尔比为：1:1. 1~1:1.5 ; e. 在冰水浴中，将步骤d所得1-0-叔丁基二甲基硅基-3-(2'_羟基-4'，6'-二甲 基苯基）-3, 3-二甲基丙醇和氟化钾按1:4~1:7的摩尔比溶于丙酮中，在缓慢滴加催化剂 用量的Jones试剂，继续搅拌反应至TLC跟踪反应结束；向反应液中滴加异丙醇至反应液 由黄绿色变成土绿色，继续搅拌至反应液呈蓝绿色；除去溶剂得深绿色固体，用乙酸乙酯溶 解，水洗，用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和NaCl溶液洗，干燥，过滤，去除溶剂，再经提纯得 白色固体，即为3-[2' -氧代(二苄基磷酸基)-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二甲基丙酸， 其结构式为
f. 将步骤e所得3-[2' -氧代(二苄基磷酸基）-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二甲 基丙酸和亚硫酰氯按1:2~1:5的摩尔比溶于四氢呋喃溶剂中，回流反应4小时候 ，除去溶 剂和过量的亚硫酰氯，随后再次加入无水四氢呋喃溶解反应余留物，再加入cis-1，2- (3， 4，4，5-四甲氧基-3'-氨基)二苯乙烯，室温反应至TLC跟踪反应完全，经分离纯化后，得 到考布他汀类似物酰胺化前药，其结构式为 所述的3-[2' -氧代(二苄基磷酸基)-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-
二甲基丙酸与cis-1， 2- (3，4，4，5-四甲氧基-3' -氨基）二苯乙烯的摩尔比为：1:0. 5~1:1; g. 将步骤f所得考布他汀类似物酰胺化前药溶于乙腈中，在冰水浴条件下，滴加三甲 基溴硅烷，继续搅拌反应至TLC跟踪反应完全，再加入甲醇钠的甲醇溶液，室温搅拌反应有 白色沉淀生成；加入大量丙酮溶液搅拌过夜，抽滤得白色粉末固体，即为考布他汀类似物的 水溶性前-前药，其结构式为：。
[0008] 本发明所涉及的考布他汀类似物的水溶性前-前药是一种新颖的控释型前药。由 国家上海新药安全评价研宄中心按急性毒理试验规范标准进行测试。该受试物的类似物万 艾可的小鼠急性毒性试验资料显示，当剂量达到1000 mg/kg时，动物出现死亡。故本试验 初步拟定剂量为300、500、1000 mg/kg，并于给药后第四天增加2000 mg/kg剂量组，观察单 次给药后动物的毒性反应和死亡情况。其急性毒理试验显示MTD为2000mg/kg。
[0009] 本发明通过焦磷酸四苄酯，使得酚羟基磷酸酯化，形成磷酸钠盐水溶性前药。用 3- (2'-羟基-4'，6'-二甲基苯基）-3，3-二甲基丙酸，构筑"三甲基锁"效应，形成 前-前药，在体内迅速地酯化靶向释放母体药物。该前-前药改善其传运性能，在体内具有 良好传运性质、能有效地达到作用靶位，其释放母体药物过程如下式所示： η
λ 八
【具体实施方式】
[0010] 以下每一实施例均为考布他汀类似物的水溶性前-前药的制备方法，它们只用于 说明本发明，并非对本发明的限定。
[0011] 实施例一：制备4，4，5，7-四甲基-3，4-二氢香豆素（2a) 称取3，5-二甲基苯酷（5.002 g 41 mmol)加入装有5 ml甲基磺酸溶液的50 ml前 形瓶中，搅拌下再加入异戊稀酸甲醋（5.161 g 45. 2 mmol)，加入后溶液呈红褐色。在前形 瓶上依次装好球形冷凝管、干燥管，油浴加热至80°C磁力搅拌，冷凝回流，TLC跟踪(石油 醚：乙酸乙酯=1 : 1)，反应结束(约12小时)。将反应液加800 ml水稀释，用乙酸乙酯萃取 (200 ml X 2 )，合并有机层，5% NaHCCV冼涤（200 ml X 3 )，再用100 ml饱和NaCl溶液洗涤， 无水MgSO4干燥，过滤，滤液旋转蒸发得黄色固体，用乙酸乙酯-石油醚重结晶，过滤得白色 晶状固体，真空干燥（40°〇，称重得7.344 8，产率：87.8%;111? 89-90°〇； 化合物 2a: 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.741 (1H, d, J = 0.5 Hz) ;6· 711 (1H， d，J = 0· 5Hz); 2.589 (2H，s) ;2· 457 (3H，s) ;2· 270 (3H，s) ; 1.434 (6H，s)。
[0012] 实施例二：制备3-(2'-羟基-4'，6' -二甲基苯基）-3，3-二甲基丙醇（2b) 称取LAH (I equiv 0.951 g)溶于40 ml新蒸四氢呋喃溶液于100 ml三口瓶中，冰浴 下搅拌呈灰色悬浮液，再称取化合物2a(5. 109 g 25 mmol)溶于18 ml新蒸四氢呋喃溶液， 氩气保护下缓慢滴入上述LAH的四氢呋喃溶液中，有气体生成。滴毕，自然升温至室温，搅 拌反应1小时，TLC跟踪反应结束(石油醚：乙酸乙酯=2 : 1)。于上述反应液中缓慢滴加 饱和NH4Cl溶液淬灭至不再冒泡，溶液成白色悬浊液。过滤(加一层硅藻土助滤、吸附)，滤 液加100 ml水混合，用乙醚萃取（50 mlX3)，合并有机相，无水MgSO4干燥，过滤，滤液旋转 蒸发除溶剂得无色粘稠液，用乙酸乙酯-正已烷重结晶，过滤得白色亮晶状固体，真空干燥 (40°C)，称重得 4.655 g，产率：89.4% ;mp 112-114°C; 化合物2b: 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.487 (1H, d, J = 0·5Ηζ)，6.334 (1H, d， J = 0·5Ηζ)，5·867 (1Η，br)，3.624 (2Η，t，J = 7.0 Ηζ)，2·471 (3Η，s)，2.233 (2Η， t，J = 7.0 Hz)，2.166 (3H, s)，1.548 (6H, s)。
[0013] 实施例三：制备1-0-叔丁基二甲基硅基-3-(2'_羟基-4'，6'-二甲基苯基）-3, 3-二甲基丙醇（2c) 称取化合物2b (1.165 g 6. 5 mmol)于100 ml三口瓶中，再加入叔丁基二甲基氯硅烷 (0. 932 g 7. 15 mmol)，氩气保护下溶于20 ml二氯甲烧中，冰浴，搅拌约10分钟。通过恒 压滴液漏斗滴加三乙胺（3. 4 ml)的二氯甲烷溶液6 ml于三口瓶中，滴速ld/ (6~7)S。滴 加完毕后除去冰浴，自然升温至室温，反应体系呈浅茶色。搅拌反应24 h，反应液变澄清， TLC跟踪反应结束(石油醚：乙酸乙酯=1 : 1)，反应停止。反应液过滤，滤液旋干后，再加 入25 ml二氯甲烷溶解，用水洗涤（10 mlX4)，合并有机相，无水MgSO4干燥，过滤，滤液旋 转蒸发得白色固体，用乙酸乙酯-正已烷重结晶，过滤得无色晶状固体，真空干燥（40°C)， 称重得2. 064 g，产率：98. 6%; 化合物2c: 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.487 (1H, d, J = 0·5Ηζ)，6.409 (lH，d, J =0. 5Hz), 5. 622 (1H, br), 3. 590 (2H, t, J = 7. 0 Hz), 2. 449 (3H, s), 2. 183 (3H, s)，2.108 (2H, t, J = 7.0 Hz)，1.545 (6H, s)，0.868 (9H, s)，0.013 (6H, s)。
[0014] 实施例四：制备1-0-叔丁基二甲基硅基-3_[2' -氧代（二苄基磷酸基）-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二甲基丙醇（2d) 称取化合物2c (0.252 g 0.78 mmol)溶解在20 ml新蒸THF溶液于100 ml三口瓶 中，搅拌下再加入叔丁醇钾（0.1 g 0.86 mmol)于瓶内，溶液呈蓝色。油浴加热至60°C，回 流约5分钟后溶液由蓝色变为黄色。趁热加入焦磷酸四苄酯（0.463 g 0.86 _〇1)，继续搅 拌，有乳白色沉淀生成。在回流下继续反应1小时，TLC跟踪反应结束(石油醚：乙酸乙酯 =3 : 2)，反应停止加热，冷至室温后加入30 ml石油醚，过滤，除去不溶物，滤液为浅黄色清 液，减压除溶剂，得一黄色油状物。柱层析分离提纯(洗脱剂：乙酸乙酯：石油醚=1 : 3)， 旋蒸除溶剂，得浅黄色色油状物，真空干燥（40°C)，称重得0. 394g，产率：87. 2%。
[0015] 化合物 2d: 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7. 135 (10H，m)，6.838 (1H，d，J = 0·5Ηζ)，6.654 (1H, d, J = 0·5Ηζ)，5.171 (4H, d, J = 8.0 Ηζ)，3·562 (2H, t, J = 7· 0 Hz)，2· 462 (3Η, s)，2· 149 (3Η, s)，2· 096 (2Η, t, J = 7· 0 Hz)，L 598 (6Η, s)，0.921 (9Η，s)，0.021 (6Η，s)。
[0016] 实施例五:制备3_[2' -氧代(二苄基磷酸基）_4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二 甲基丙酸（2e) 称取化合物2d (0. 394 g 0. 68 mmol)溶解在5 ml丙酮于25 ml三口瓶中，冰浴，再加 入氟化钾（0. 040 g 2. 72 mmol)于瓶内，搅拌5分钟。滴液漏斗缓慢滴加0. 6 ml新制Jones 试剂于反应瓶中，溶液呈褐色伴随沉淀生成，继续搅拌反应2小时，TLC跟踪反应结束(石油 醚：乙酸乙酯=3 : 2)。向反应瓶中滴加异丙醇2. 7 ml，溶液由黄绿色变成土绿色，继续搅 拌20分钟，溶液呈蓝绿色。将反应液转移至50 ml单 口瓶，旋转蒸发除去溶剂得深绿色固 体。将深绿色固体用12 ml乙酸乙酯溶解，15 ml H2O洗，分离有机相。水相用乙酸乙酯萃 取（10 ml X 3 )，合并有机相。饱和NaCl溶液洗（10 ml X 2 )，无水MgSO4干燥，过滤，滤液旋转 蒸发除溶剂得黄绿色油状物，用乙醚-正已烷重结晶，过滤得白色固体，真空干燥（40°C)， 称重得0. 247 g，产率：75. 4% ; 化合物 2e: 1H NMR (500 MHz, DMS0-d6) δ 11.804 (1H, br)，7.367 (10H, m)， 6. 929 (1H, d, J = 0· 5Hz)，6. 735 (1H, d, J = 0· 5Hz)，5. 141 (4H, d, J = 8. 0 Hz)， 2.795 (2H，s)，2.475 (3H，s)，2.103 (3H，s)，1.512 (6H，s)。
[0017] 实施例六:制备考布他汀类似物和2e的酰胺化产物（2f) 称取化合物2e (0.531 g LI mmol)于50 ml茄型瓶中，加入40 ml新蒸THF，搅拌溶 解，再加入SOCl2 (0.17 ml ;2. 3 mmol)，装好带有干燥管的球形冷凝管，加热回流反应4小 时。反应结束后停止加热，稍冷后减压蒸除溶剂及多余的SOCl 2，得一浅黄色油状物。将油 状物溶于40 ml新蒸THF，搅拌下加入考布他汀类似物（0.182 g 0.55 mmol)，室温搅拌反 应过夜，TLC跟踪反应完全。减压除溶剂，将油状物柱层析分离收集产物点，旋蒸除溶剂得 茶色油状物0. 402 g，产率90%。
[0018] 化合物 2f: 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8. 238 (1H，br)，7.670 (1H，s)， 7.291 (10H，m)，7.114 (1H，s)，6.931 (1H，d，J = 0·5Ηζ)，6.920 (1H，q，J = 8·5Ηζ)，6·722 (1H, d, J = 0. 5Hz)，6.708 (1H, s)，6.582 (1H, d, J = 8. 5Hz)，6.465 (1H, d, J = 12. 5Hz)，6. 386 (1H, d, J = 12. 5Hz)，5. 108 (4H, d, J = 8Hz)，3. 825 (3H, s)，3. 772 (3H, s)，3. 645 (6H, s)，2. 879 (2H, s)，2. 467 (3H, s)，2. 158 (3H， s)，1.647 ^H, s)。
[0019] 实施例七：制备考布他汀类似物水溶性前-前药（2g) 称取化合物2f (1.427g 1.8mmol)于50ml圆底烧瓶中，加入已干燥的乙腈9ml，冰浴 下搅拌溶解。恒压滴液漏斗滴加三甲基溴硅烷（〇.6ml 4. 5_〇1)，溶液由无色变为紫色，继 续搅拌，溶液颜色逐渐变浅，TLC跟踪反应，反应完全后加入甲醇钠（195mg 3. 6mmol)和甲 醇溶液18ml，室温搅拌，有白色沉淀生成。加入大量丙酮溶液搅拌过夜，抽滤得白色粉末固 体，真空干燥（40°C )，称重得0. 8972 g，产率：75. 8% ; 化合物 Sgi1H NMR (500 MHz, D2O) δ 8.226 (1H, br)，7.645 (1H, s)，7.117 (1H， s)，6.923 (1H, d, J = 0.5Hz)，6.878 (1H, q, J = 8·5Ηζ)，6.767 (1H, d, J = 0.5Hz)， 6. 718 (1H, s)，6.585 (1H, d, J = 8.5Hz)，6.457 (1H, d, J = 12Hz)，6.382 (1H, d， J = 12.5Hz)，3.834 (3H，s)，3.766 (3H，s)，3.638 (6H，s)，2.855 (2H，s)，2.439 (3H, s)，2. 143 (3H, s)，I. 623 (6H, s)。
【主权项】
1. 一种的考布他汀类似物的水溶性前-前药，其特征在于其结构式如下：2. -种制备根据权利要求1所述的考布他汀类似物的水溶性前-前药的方法，其特征 在于该方法的具体步骤为： a. 将3，5-二甲基苯酚与异戊烯酸甲酯按1:1. 1~1:1.5的摩尔比溶于甲基磺酸中， 搅拌下回流反应至TLC跟踪反应结束；将反应液用水稀释，用乙酸乙酯萃取，有机层用质量 百分比浓度为5%的NaHCCV冼涤，再用饱和NaCl溶液洗涤，无水MgSO 4干燥，过滤，滤液旋 转蒸发，再经提纯得黄色固体，即为4，4，5，7-四甲基-3，4-二氢香豆素，其结构式为：b. 在惰性气氛保护下，将步骤a所得4，4，5，7-四甲基-3，4-二氢香豆素在氢化 铝锂无水四氢呋喃作溶剂的条件下，还原成3- (2'_羟基-4'，6' -二甲基苯基）-3， 3-二甲基丙醇，其结构式为：c. 在惰性气氛下，将步骤b所得3_ (2' -羟基_4'，6' -二甲基苯基）_3，3_二 甲基丙醇和保护试剂叔丁基二甲基氯硅烷按1:1. 1~1:1. 5的摩尔比溶于二氯甲烷，在缚 酸剂三乙胺的作用下，搅拌反应至TLC跟踪反应结束；反应液过滤，滤液旋干后，用二氯甲 烷溶解，水洗涤，有机相用无水MgSO4干燥，过滤，滤液旋转蒸发，经分离提纯得到1-0-叔 丁基二甲基硅基_3-(2' -羟基-4'，6' -二甲基苯基）-3,3_二甲基丙醇，其结构式为：d. 将步骤c所得1-0-叔丁基二甲基硅基_3-(2' -羟基-4'，6' -二甲基苯 基）-3, 3-二甲基丙醇和叔丁醇钾按1:1. 1~1:1.5的摩尔比溶于四氢呋喃中，回流至 反应液由蓝色变为黄色；再加入焦磷酸四苄酯，继续搅拌回流反应至TLC跟踪反应结 束；冷至室温后加入石油醚，过滤，滤液去除溶剂，经分离提纯得到l-o-叔丁基二甲基硅 基-3-[2'-氧代(二苄基磷酸酯基)-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二甲基丙醇，其结构式 为：；所述的焦磷酸四苄酯与1-0-叔丁基二甲基硅基-3-(2'_羟 基-4'，6' -二甲基苯基）-3, 3-二甲基丙醇的摩尔比为：1:1. 1~1:1.5 ; e. 在冰水浴中，将步骤d所得1-0-叔丁基二甲基硅基-3-(2'_羟基-4'，6'-二甲 基苯基）-3, 3-二甲基丙醇和氟化钾按1:4~1:7的摩尔比溶于丙酮中，在缓慢滴加催化剂 用量的Jones试剂，继续搅拌反应至TLC跟踪反应结束；向反应液中滴加异丙醇至反应液 由黄绿色变成土绿色，继续搅拌至反应液呈蓝绿色；除去溶剂得深绿色固体，用乙酸乙酯溶 解，水洗，用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和NaCl溶液洗，干燥，过滤，去除溶剂，再经提纯得 白色固体，即为3-[2' -氧代(二苄基磷酸基)-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二甲基丙酸， 其结构式为：f. 将步骤e所得3-[2' -氧代(二苄基磷酸基）-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二甲 基丙酸和亚硫酰氯按1:2~1:5的摩尔比溶于四氢呋喃溶剂中，回流反应4小时候，除去溶 剂和过量的亚硫酰氯，随后再次加入无水四氢呋喃溶解反应余留物，再加入cis-1，2- (3， 4，4，5-四甲氧基-3'-氨基)二苯乙烯，室温反应至TLC跟踪反应完全，经分离纯化后，得 到考布他汀类似物酰胺化前药，其结构式为：所述的3-[2' -氧代(二苄基磷酸基)-4'，6' -二甲基苯基]-3，3-二甲基丙酸与cis-1， 2- (3，4，4，5-四甲氧基-3' -氨基）二苯乙烯的摩尔比为：1:0. 5~1:1; g. 将步骤f所得考布他汀类似物酰胺化前药溶于乙腈中，在冰水浴条件下，滴加三甲 基溴硅烷，继续搅拌反应至TLC跟踪反应完全，再加入甲醇钠的甲醇溶液，室温搅拌反应有 白色沉淀生成；加入大量丙酮溶液搅拌过夜，抽滤得白色粉末固体，即为考布他汀类似物的 水溶性前-前药，其结构式为：
【专利摘要】本发明涉及一种考布他汀类似物的前-前药及其制备方法。该前-前药的结构式为：该前-前药改善其传运性能，制成在体内具有良好传运性质、能有效地达到作用靶位的前药。
【IPC分类】C07F9/12, A61K47/48, A61P35/00, A61K31/167
【公开号】CN104892668
【申请号】CN201510241243
【发明人】鲍治成, 沈卫平, 卜海冬, 王军福, 于静, 方栋
【申请人】上海大学
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月12日
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