一种普那霉素iia单组份的制备方法
一种普那霉素iia单组份的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于工业微生物技术领域，涉及药品原料的制备方法，具体地说是涉及一 种普那霉素 IIA单组份的制备方法。
【背景技术】
[0002] 普那霉素（pristinamycin)属链阳性菌类抗生素，主要由约30%的普那霉素 PIA 和约70%的普那霉素 PIIA两类化合物组成。普那霉素对各种感染均有很好的疗效作用，包 括传染性肺炎、医院获得性肺炎、皮肤和软组织感染、脓毒血症、菌血症和心内膜炎等。美国 FDA的专家小组推荐普那霉素可用于治疗医院获得性肺炎，皮肤、软组织感染和万古霉素耐 药屎肠球菌（VREF)的急性感染，很多是用在急症时。普那霉素号称"人类对付致病菌的最 后一道屏障"，是继万古霉素、替考拉宁之后的又一个抗多重耐药菌的抗生素，而且它还具 有较长的抗生素后效应、耐药性低和不良反应少等优点。
[0003] 目前关于普那霉素 IIA单组份的制备方法未见报道。文献和专利中报道过的普 那霉素的提取方法主要包括有机溶剂萃取、双水相萃取和高速逆流色谱法等。美国专利 US3154475中采用溶剂萃取方法得到普那霉素粗品，再进行粉末活性炭层析得到纯品，收率 低，溶剂用量大，不适合工业化生产。双水相萃取和高速逆流色谱法还停留在实验室研宄阶 段。中国专利CN102558302A中，采用大孔树脂吸附，纳滤，溶媒结晶等步骤得到黄色普那霉 素产品，该工艺成本较高，色素去除不理想。
[0004] 工业化生产的普那霉素经纯化后还含有20%的杂质，无法满足一些国家在药品注 册方面的法规要求，再加上普那霉素 IIA的不稳定性，增加了其纯化难度，从而致使多年来 的研宄都无法克服纯化步骤这个瓶颈，产品难以工业化生产。
[0005] 本发明所得普那霉素 IIA单组份纯度高，与普那霉素 IA单组份协同作用后，表现 出更强的抗菌活性，其生物效价达到lOOOOU/mg以上，生物活性比对照药高近30%。该工艺 操作简单，产品纯度和收率高，适于工业化生产。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种高纯度普那霉素 IIA单组份的制备方法，该方法工艺流 程短、产品质量可控、易操作，适于工业化生产。
[0007] 为实现本发明目的，本发明提供了一种普那霉素 IIA单组份的制备方法，该方法 包括以下步骤： a、 将普那霉素 IIA粗品用有机溶剂溶解，得到上样液； b、 将上样液注入装有反相层析填料的色谱柱中，用含有机溶剂的盐水溶液进行洗脱， 收集纯度大于98. 5%的普那霉素 IIA洗脱液； c、 将洗脱液浓缩、过滤、干燥，得到普那霉素 IIA单组份。
[0008] 本发明步骤（a)所述有机溶剂为DMF、乙腈、甲醇或乙醇中任意一种，用量为每克 普那霉素 IIA粗品用3~10mL有机溶剂，优选为DMF。
[0009] 本发明步骤（b)所述反相层析填料为C18。
[0010] 本发明步骤（b)所述有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈中任意一种。
[0011] 本发明步骤（b)所述盐水为1^#04或NaH2POd^水溶液，浓度为每1000 mL水中含 0· 2~1.0 g KH2PO4或 NaH2P04,即浓度为 0· 2~1. 0%。（g/mL)，优选 0· 4~0· 6%〇。
[0012] 本发明步骤（b)所述含有机溶剂的盐水溶液中有机溶剂所占体积百分比为 43%~47%，优选 45%。
[0013] 本发明步骤（c)所述浓缩是在40~50°C下减压浓缩。
[0014] 本发明步骤（c)所述干燥是将湿粉置于40~45°C，真空度彡0.0 SMPa条件下，真空 干燥5~12h。
[0015] 本发明优势：1、采用二元液相分离系统，使用反相填料层析，只一步层析就可以得 到纯度大于98. 5%的普那霉素 IIA单组份，制备收率大于75%。2、所述方法工艺流程短，克 服了普那霉素 IIA易降解的缺点，且具有易操作、可控性强的优点，适于工业化生产。
【附图说明】
[0016] 图1普那霉素 IIA粗品HPLC图谱。
[0017] 图2普那霉素 IIA精制品HPLC图谱。
【具体实施方式】
[0018] 下面用具体实施例来进一步说明本发明的内容，但并不以任何方式意味着对本发 明进行限制。下列实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。
[0019] 本发明所使用的普那霉素 IIA粗品（含量65. 8%)，华北制药集团新药研宄开发有 限责任公司生产；对照药(批号14N0400,效价8000u/mg)，PY0STACINE公司生产。反相填料 C18,苏州纳微生物科技有限公司；二元液相分离系统，汉邦科技有限责任公司；高效液相 色谱仪（SPD-M20A型紫外检测器，LC-20AT泵，SIL-20A自动进样器，CTO-IOAS柱温箱)，岛 津公司；甲醇、乙醇和乙腈为制备级；其他试剂为分析纯。
[0020] 实施例1 将上述普那霉素 IIA粗品（HPLC图谱见附图1)10. 0g，用50mL乙腈溶解，得到上样液。
[0021] 将上样液注入装有C18填料的层析柱，采用二元液相分离系统，用43%乙腈-盐水 (1. 0%。的KH2PO4)进行洗脱，收集HPLC含量大于98. 5%的洗脱液。
[0022] 将收集的洗脱液，40°C减压浓缩，蒸去有机溶剂，得到普那霉素 IIA浓缩液，将浓 缩液过滤、水洗，得到普那霉素 IIA湿粉。将湿粉置于40°C，真空度多0.0 SMpa的烤箱中， 真空干燥5h，得到普那霉素 IIA精制品（HPLC图谱见附图2) 5. 0g，纯度99. 2%，制备收率 75. 4%〇
[0023] 实施例2 将上述普那霉素 IIA粗品50. 0g，用500mL乙醇溶解，得到上样液。
[0024] 将上样液注入装有C18填料的层析柱，采用二元液相分离系统，用45%乙醇-盐水 (0· 2%。的KH2PO4)进行洗脱，收集HPLC含量大于98. 5%的洗脱液。
[0025] 将收集的洗脱液，45°C减压浓缩，蒸去有机溶剂，得到普那霉素 IIA浓缩液，将浓 缩液过滤、水洗，得到普那霉素 IIA湿粉。将湿粉置于45°C，真空度多0.0 SMpa的烤箱中，真 空干燥8h，得到普那霉素 IIA精制品25 . 5g，纯度98. 7%，制备收率76. 5% 实施例3 将上述普那霉素 IIA粗品100.0 g，用300mL甲醇溶解，得到上样液。
[0026] 将上样液注入装有C18填料的层析柱，采用二元液相分离系统，用47%甲醇-盐水 (0. 5%。的NaH2PO4)进行洗脱，收集HPLC含量大于98. 5%的洗脱液。
[0027] 将收集的洗脱液，50°C减压浓缩，蒸去有机溶剂，得到普那霉素 IIA浓缩液，将浓 缩液过滤、水洗，得到普那霉素 IIA湿粉。将湿粉置于40°C，真空度多0.0 SMpa的烤箱中，真 空干燥l〇h，得到普那霉素 IIA精制品50. 3g，纯度98. 9%，制备收率75. 6% 实施例4 将上述普那霉素 IIA粗品200. 0g，用800mL DMF溶解，得到上样液。
[0028] 将上样液注入装有C18填料的层析柱，采用二元液相分离系统，用45%乙腈-盐水 (0. 4%。的KH2PO4)进行洗脱，收集HPLC含量大于98. 5%的洗脱液。
[0029] 将收集的洗脱液，40°C减压浓缩，蒸去有机溶剂，得到普那霉素 IIA浓缩液，将浓 缩液过滤、水洗，得到普那霉素 IIA湿粉。将湿粉置于45°C，真空度多0.0 SMpa的烤箱中，真 空干燥12h，得到普那霉素 IIA精制品102g，纯度98. 8%，制备收率76. 6%。
[0030] 实施例5 将上述普那霉素 IIA粗品200. 0g，用800mL DMF溶解，得到上样液。
[0031] 将上样液注入装有C18填料的层析柱，采用二元液相分离系统，用45%乙腈-盐水 (0· 6%。的KH2PO4)进行洗脱，收集HPLC含量大于98. 5%的洗脱液。
[0032] 将收集的洗脱液，40°C减压浓缩，蒸去有机溶剂，得到普那霉素 IIA浓缩液，将浓 缩液过滤、水洗，得到普那霉素 IIA湿粉。将湿粉置于45°C，真空度多0.0 SMpa的烤箱中，真 空干燥12h，得到普那霉素 IIA精制品103g，纯度99. 0%，制备收率77. 2%。
[0033] 实施例6 普那霉素生物效价测定：精密称定对照品及样品适量置称量瓶中，加 N，N-二甲基甲酰 胺溶解，制成每I mL中约含40000U普那霉素的溶液，摇匀，静置，备用。
[0034] 选择40*40的平板大盘放置于水平平面上，将300mL培养基I均匀平铺于平板内， 待底层凝固后再加入300mL培养基I，适当冷却后均匀加入0. 2%的试验菌液，凝固后放置 无菌小钢管。将标准品与样品用缓冲液分别稀释至200U/mL和100U/mL。在双碟的4个钢 管中分别成对角滴加对照品（S)及供试品（T)高（H)、低（L)两种浓度的溶液，滴加顺序： SH - TH - TL - SL。滴注完毕后，盖上盘盖，在35~37°C恒温培养箱中培养18~20小 时。培养结束后，量取抑菌圈直径，用生物检定统计软件BS2000,对测定结果进行可靠性测 验、计算效价及实验误差。
[0035] 其中所述试验菌为：枯草芽孢杆菌〔CMCC (B) 63 501〕 其中所述培养基I的制备方法为：蛋白胨5g，磷酸二氢钾3g，牛肉浸出粉3g，琼脂 14g，水 1000mL，ρΗ6· 5 ~ρΗ6· 6,115°C 灭菌 30min。
[0036] 其中所述缓冲溶液的配制方法为：磷酸二氢钾8g，磷酸氢二钾2g，用蒸馏水定容 至 1000 mL，pH6.0。
[0037] 用本发明所得普那霉素 IIA精制品与普那霉素 IA精制品（自制，纯度98. 6%)按质 量比7:3配制普那霉素原料。按以上方法测定对照药及自制原料的效价。结果显示，自制 原料生物活性高于对照药近30%，详见表1。
[0038] 表1 普那霉素生物效价测定结果
【主权项】
1. 一种普那霉素IIA单组份的制备方法，其特征在于该方法包括下述步骤： a、 将普那霉素IIA粗品用有机溶剂溶解，得到上样液； b、 将上样液注入装有反相层析填料的色谱柱中，用含有机溶剂的盐水溶液进行洗脱， 收集纯度大于98. 5%的普那霉素IIA洗脱液； c、 将洗脱液浓缩、过滤、干燥，得到普那霉素IIA单组份。2. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤（a)所述有机溶剂为DMF、乙腈、甲醇或乙醇 中任意一种，用量为每克普那霉素IIA粗品用3~10mL有机溶剂。3. 根据权利要求2所述的方法，其中步骤（a)所述有机溶剂为DMF。4. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤（b)所述反相层析填料为C18。5. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤（b)所述有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈中任意 一种。6. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤（b)所述的盐水为KH丨04或NaH2P04的水溶 液，浓度为每 1000mL水中含 0? 2~1.OgKH2PO4或NaH2P04。7. 根据权利要求6所述的方法，其中步骤（b)所述盐水的浓度为每1000mL水中含 0? 4~0? 6g腿#04或NaH2P04。8. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤（b)所述含有机溶剂的盐水溶液中有机溶剂 所占体积百分比为43%~47°/〇。9. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤（c)所述浓缩是在40~50°C下减压浓缩。10. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤（c)所述干燥是将湿粉置于40~45°C，真空 度彡0. 08MPa条件下，真空干燥5~12h。
【专利摘要】本发明公开了一种普那霉素IIA单组份的制备方法，该方法包括以下步骤：a、将普那霉素IIA粗品采用二元液相分离系统，采用反相填料层析，用含有机溶剂的盐水溶液进行洗脱，收集普那霉素IIA纯度大于98.5%的洗脱液；b、步骤（a）所得洗脱液经浓缩、过滤、干燥，得到的普那霉素IIA单组份。本发明采用工业色谱分离技术手段，得到了高纯度的普那霉素IIA单组份，工艺简洁，质量可控，适于工业化生产。
【IPC分类】C07K1/20, C07K5/078
【公开号】CN104892726
【申请号】CN201510327860
【发明人】王海燕, 张雪霞, 李晓露, 郭栋, 任风芝, 高月麒, 王宁, 张曦, 段宝玲
【申请人】华北制药集团新药研究开发有限责任公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月15日
【技术领域】
[0001] 本发明属于工业微生物技术领域，涉及药品原料的制备方法，具体地说是涉及一 种普那霉素 IIA单组份的制备方法。
【背景技术】
[0002] 普那霉素（pristinamycin)属链阳性菌类抗生素，主要由约30%的普那霉素 PIA 和约70%的普那霉素 PIIA两类化合物组成。普那霉素对各种感染均有很好的疗效作用，包 括传染性肺炎、医院获得性肺炎、皮肤和软组织感染、脓毒血症、菌血症和心内膜炎等。美国 FDA的专家小组推荐普那霉素可用于治疗医院获得性肺炎，皮肤、软组织感染和万古霉素耐 药屎肠球菌（VREF)的急性感染，很多是用在急症时。普那霉素号称"人类对付致病菌的最 后一道屏障"，是继万古霉素、替考拉宁之后的又一个抗多重耐药菌的抗生素，而且它还具 有较长的抗生素后效应、耐药性低和不良反应少等优点。
[0003] 目前关于普那霉素 IIA单组份的制备方法未见报道。文献和专利中报道过的普 那霉素的提取方法主要包括有机溶剂萃取、双水相萃取和高速逆流色谱法等。美国专利 US3154475中采用溶剂萃取方法得到普那霉素粗品，再进行粉末活性炭层析得到纯品，收率 低，溶剂用量大，不适合工业化生产。双水相萃取和高速逆流色谱法还停留在实验室研宄阶 段。中国专利CN102558302A中，采用大孔树脂吸附，纳滤，溶媒结晶等步骤得到黄色普那霉 素产品，该工艺成本较高，色素去除不理想。
[0004] 工业化生产的普那霉素经纯化后还含有20%的杂质，无法满足一些国家在药品注 册方面的法规要求，再加上普那霉素 IIA的不稳定性，增加了其纯化难度，从而致使多年来 的研宄都无法克服纯化步骤这个瓶颈，产品难以工业化生产。
[0005] 本发明所得普那霉素 IIA单组份纯度高，与普那霉素 IA单组份协同作用后，表现 出更强的抗菌活性，其生物效价达到lOOOOU/mg以上，生物活性比对照药高近30%。该工艺 操作简单，产品纯度和收率高，适于工业化生产。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种高纯度普那霉素 IIA单组份的制备方法，该方法工艺流 程短、产品质量可控、易操作，适于工业化生产。
[0007] 为实现本发明目的，本发明提供了一种普那霉素 IIA单组份的制备方法，该方法 包括以下步骤： a、 将普那霉素 IIA粗品用有机溶剂溶解，得到上样液； b、 将上样液注入装有反相层析填料的色谱柱中，用含有机溶剂的盐水溶液进行洗脱， 收集纯度大于98. 5%的普那霉素 IIA洗脱液； c、 将洗脱液浓缩、过滤、干燥，得到普那霉素 IIA单组份。
[0008] 本发明步骤（a)所述有机溶剂为DMF、乙腈、甲醇或乙醇中任意一种，用量为每克 普那霉素 IIA粗品用3~10mL有机溶剂，优选为DMF。
[0009] 本发明步骤（b)所述反相层析填料为C18。
[0010] 本发明步骤（b)所述有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈中任意一种。
[0011] 本发明步骤（b)所述盐水为1^#04或NaH2POd^水溶液，浓度为每1000 mL水中含 0· 2~1.0 g KH2PO4或 NaH2P04,即浓度为 0· 2~1. 0%。（g/mL)，优选 0· 4~0· 6%〇。
[0012] 本发明步骤（b)所述含有机溶剂的盐水溶液中有机溶剂所占体积百分比为 43%~47%，优选 45%。
[0013] 本发明步骤（c)所述浓缩是在40~50°C下减压浓缩。
[0014] 本发明步骤（c)所述干燥是将湿粉置于40~45°C，真空度彡0.0 SMPa条件下，真空 干燥5~12h。
[0015] 本发明优势：1、采用二元液相分离系统，使用反相填料层析，只一步层析就可以得 到纯度大于98. 5%的普那霉素 IIA单组份，制备收率大于75%。2、所述方法工艺流程短，克 服了普那霉素 IIA易降解的缺点，且具有易操作、可控性强的优点，适于工业化生产。
【附图说明】
[0016] 图1普那霉素 IIA粗品HPLC图谱。
[0017] 图2普那霉素 IIA精制品HPLC图谱。
【具体实施方式】
[0018] 下面用具体实施例来进一步说明本发明的内容，但并不以任何方式意味着对本发 明进行限制。下列实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。
[0019] 本发明所使用的普那霉素 IIA粗品（含量65. 8%)，华北制药集团新药研宄开发有 限责任公司生产；对照药(批号14N0400,效价8000u/mg)，PY0STACINE公司生产。反相填料 C18,苏州纳微生物科技有限公司；二元液相分离系统，汉邦科技有限责任公司；高效液相 色谱仪（SPD-M20A型紫外检测器，LC-20AT泵，SIL-20A自动进样器，CTO-IOAS柱温箱)，岛 津公司；甲醇、乙醇和乙腈为制备级；其他试剂为分析纯。
[0020] 实施例1 将上述普那霉素 IIA粗品（HPLC图谱见附图1)10. 0g，用50mL乙腈溶解，得到上样液。
[0021] 将上样液注入装有C18填料的层析柱，采用二元液相分离系统，用43%乙腈-盐水 (1. 0%。的KH2PO4)进行洗脱，收集HPLC含量大于98. 5%的洗脱液。
[0022] 将收集的洗脱液，40°C减压浓缩，蒸去有机溶剂，得到普那霉素 IIA浓缩液，将浓 缩液过滤、水洗，得到普那霉素 IIA湿粉。将湿粉置于40°C，真空度多0.0 SMpa的烤箱中， 真空干燥5h，得到普那霉素 IIA精制品（HPLC图谱见附图2) 5. 0g，纯度99. 2%，制备收率 75. 4%〇
[0023] 实施例2 将上述普那霉素 IIA粗品50. 0g，用500mL乙醇溶解，得到上样液。
[0024] 将上样液注入装有C18填料的层析柱，采用二元液相分离系统，用45%乙醇-盐水 (0· 2%。的KH2PO4)进行洗脱，收集HPLC含量大于98. 5%的洗脱液。
[0025] 将收集的洗脱液，45°C减压浓缩，蒸去有机溶剂，得到普那霉素 IIA浓缩液，将浓 缩液过滤、水洗，得到普那霉素 IIA湿粉。将湿粉置于45°C，真空度多0.0 SMpa的烤箱中，真 空干燥8h，得到普那霉素 IIA精制品25 . 5g，纯度98. 7%，制备收率76. 5% 实施例3 将上述普那霉素 IIA粗品100.0 g，用300mL甲醇溶解，得到上样液。
[0026] 将上样液注入装有C18填料的层析柱，采用二元液相分离系统，用47%甲醇-盐水 (0. 5%。的NaH2PO4)进行洗脱，收集HPLC含量大于98. 5%的洗脱液。
[0027] 将收集的洗脱液，50°C减压浓缩，蒸去有机溶剂，得到普那霉素 IIA浓缩液，将浓 缩液过滤、水洗，得到普那霉素 IIA湿粉。将湿粉置于40°C，真空度多0.0 SMpa的烤箱中，真 空干燥l〇h，得到普那霉素 IIA精制品50. 3g，纯度98. 9%，制备收率75. 6% 实施例4 将上述普那霉素 IIA粗品200. 0g，用800mL DMF溶解，得到上样液。
[0028] 将上样液注入装有C18填料的层析柱，采用二元液相分离系统，用45%乙腈-盐水 (0. 4%。的KH2PO4)进行洗脱，收集HPLC含量大于98. 5%的洗脱液。
[0029] 将收集的洗脱液，40°C减压浓缩，蒸去有机溶剂，得到普那霉素 IIA浓缩液，将浓 缩液过滤、水洗，得到普那霉素 IIA湿粉。将湿粉置于45°C，真空度多0.0 SMpa的烤箱中，真 空干燥12h，得到普那霉素 IIA精制品102g，纯度98. 8%，制备收率76. 6%。
[0030] 实施例5 将上述普那霉素 IIA粗品200. 0g，用800mL DMF溶解，得到上样液。
[0031] 将上样液注入装有C18填料的层析柱，采用二元液相分离系统，用45%乙腈-盐水 (0· 6%。的KH2PO4)进行洗脱，收集HPLC含量大于98. 5%的洗脱液。
[0032] 将收集的洗脱液，40°C减压浓缩，蒸去有机溶剂，得到普那霉素 IIA浓缩液，将浓 缩液过滤、水洗，得到普那霉素 IIA湿粉。将湿粉置于45°C，真空度多0.0 SMpa的烤箱中，真 空干燥12h，得到普那霉素 IIA精制品103g，纯度99. 0%，制备收率77. 2%。
[0033] 实施例6 普那霉素生物效价测定：精密称定对照品及样品适量置称量瓶中，加 N，N-二甲基甲酰 胺溶解，制成每I mL中约含40000U普那霉素的溶液，摇匀，静置，备用。
[0034] 选择40*40的平板大盘放置于水平平面上，将300mL培养基I均匀平铺于平板内， 待底层凝固后再加入300mL培养基I，适当冷却后均匀加入0. 2%的试验菌液，凝固后放置 无菌小钢管。将标准品与样品用缓冲液分别稀释至200U/mL和100U/mL。在双碟的4个钢 管中分别成对角滴加对照品（S)及供试品（T)高（H)、低（L)两种浓度的溶液，滴加顺序： SH - TH - TL - SL。滴注完毕后，盖上盘盖，在35~37°C恒温培养箱中培养18~20小 时。培养结束后，量取抑菌圈直径，用生物检定统计软件BS2000,对测定结果进行可靠性测 验、计算效价及实验误差。
[0035] 其中所述试验菌为：枯草芽孢杆菌〔CMCC (B) 63 501〕 其中所述培养基I的制备方法为：蛋白胨5g，磷酸二氢钾3g，牛肉浸出粉3g，琼脂 14g，水 1000mL，ρΗ6· 5 ~ρΗ6· 6,115°C 灭菌 30min。
[0036] 其中所述缓冲溶液的配制方法为：磷酸二氢钾8g，磷酸氢二钾2g，用蒸馏水定容 至 1000 mL，pH6.0。
[0037] 用本发明所得普那霉素 IIA精制品与普那霉素 IA精制品（自制，纯度98. 6%)按质 量比7:3配制普那霉素原料。按以上方法测定对照药及自制原料的效价。结果显示，自制 原料生物活性高于对照药近30%，详见表1。
[0038] 表1 普那霉素生物效价测定结果
【主权项】
1. 一种普那霉素IIA单组份的制备方法，其特征在于该方法包括下述步骤： a、 将普那霉素IIA粗品用有机溶剂溶解，得到上样液； b、 将上样液注入装有反相层析填料的色谱柱中，用含有机溶剂的盐水溶液进行洗脱， 收集纯度大于98. 5%的普那霉素IIA洗脱液； c、 将洗脱液浓缩、过滤、干燥，得到普那霉素IIA单组份。2. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤（a)所述有机溶剂为DMF、乙腈、甲醇或乙醇 中任意一种，用量为每克普那霉素IIA粗品用3~10mL有机溶剂。3. 根据权利要求2所述的方法，其中步骤（a)所述有机溶剂为DMF。4. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤（b)所述反相层析填料为C18。5. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤（b)所述有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈中任意 一种。6. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤（b)所述的盐水为KH丨04或NaH2P04的水溶 液，浓度为每 1000mL水中含 0? 2~1.OgKH2PO4或NaH2P04。7. 根据权利要求6所述的方法，其中步骤（b)所述盐水的浓度为每1000mL水中含 0? 4~0? 6g腿#04或NaH2P04。8. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤（b)所述含有机溶剂的盐水溶液中有机溶剂 所占体积百分比为43%~47°/〇。9. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤（c)所述浓缩是在40~50°C下减压浓缩。10. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤（c)所述干燥是将湿粉置于40~45°C，真空 度彡0. 08MPa条件下，真空干燥5~12h。
【专利摘要】本发明公开了一种普那霉素IIA单组份的制备方法，该方法包括以下步骤：a、将普那霉素IIA粗品采用二元液相分离系统，采用反相填料层析，用含有机溶剂的盐水溶液进行洗脱，收集普那霉素IIA纯度大于98.5%的洗脱液；b、步骤（a）所得洗脱液经浓缩、过滤、干燥，得到的普那霉素IIA单组份。本发明采用工业色谱分离技术手段，得到了高纯度的普那霉素IIA单组份，工艺简洁，质量可控，适于工业化生产。
【IPC分类】C07K1/20, C07K5/078
【公开号】CN104892726
【申请号】CN201510327860
【发明人】王海燕, 张雪霞, 李晓露, 郭栋, 任风芝, 高月麒, 王宁, 张曦, 段宝玲
【申请人】华北制药集团新药研究开发有限责任公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月15日
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