一种缩宫素多肽的合成方法
一种缩宫素多肽的合成方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种缩宫素多肽的合成方法。
【背景技术】
[0002] 缩宫素（Oxytocin)，用于引产、催产、产后及流产后因宫缩无力或缩复不良而引起 的子宫出血；了解胎盘储备功能（催产素激惹试验）；滴鼻可促使排乳。缩宫素能间接刺激 子宫平滑肌收缩，模拟正常分娩的子宫收缩作用，导致子宫颈扩张，子宫对缩宫素的反应在 妊娠过程中逐渐增加，足月时达高峰。缩宫素也可刺激乳腺的平滑肌收缩，有助于乳汁自乳 房排出，但并不增加乳腺的乳汁分泌量。
[0003] 缩宫素最初是由猪、牛脑神经垂体中提取制得，自20世纪50年代，使用液相法完 成了缩宫素的全合成，至今已合成缩宫素的类似物有数百种之多，有的生物活性远远超过 天然缩宫素，而提取的缩宫素因其纯度较低，含少量的加压素，易产生升压的副作用，正逐 渐为化学合成法所替代，目前，国内合成方法有：液相合成法、固相合成法。
[0004] 通过在液体介质中反应制备缩宫素，采用逐步合成或片段缩合方法，适合于短肽 的合成，每步中间产物都可以纯化，制备工艺简单，但是，反应物混合均匀、工艺过程中需要 严格控制反应体系的PH值、温度、搅拌速度等条件，且产生杂质较多每步都需要纯化，且纯 化难度较大，此外耗时较长，合成得到的缩宫素杂质多，纯化步骤多。
[0005] 利用固相合成法原理，以第一个氨基酸的羧基与固相载体（树脂）的氨基以共价 键的形式连接起来，再以这个氨基酸的氨基为起点，与下一个氨基酸的羧基连接，依次循 环，直至目标肽形成为止。优点是不需要每步纯化提高了合成速度，产率较高，缺点是氨基 酸原料投料较大，没有中间纯化步骤，有时长肽粗品纯度较低，需要反相色谱纯化。
【发明内容】
[0006] 本发明为了克服现有技术不足，提供一种高收率、低成本、反应条件温和、环境污 染小，利于产业化的手工固相合成多肽工艺，采用全保护多肽树脂为原料，经裂解切肽、精 制制成，不经偶合、接肽等反应过程，缩短了多肽原料药生产步骤，具有反应周期短、收率 高，生产过程中污染物产生量少等优点。
[0007] 为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
[0008] -种缩宫素多肽的合成方法，包括以下步骤：
[0009] 以缩宫素多肽全保护树脂为原料，将缩宫素多肽全保护树脂加入裂解切肽釜中， 加入三氟乙酸和水进行裂解，得到多肽原料药粗品，再经结晶、HPLC合成、洗脱进行精制后 即可得到缩宫素多肽原料药成品。
[0010] 具体反应方程式如下所示：
[0011]
[0013] 进一步，裂解完成后，旋蒸回收三氟乙酸，浓缩液进入结晶釜，加入乙酸丁酯冷冻 结晶。
[0014] 进一步，结晶后过滤，过滤得到的湿固体后真空干燥。
[0015] 进一步，干燥完后的固体加水溶解，然后进入HPLC仪纯化，用乙腈和水作为流动 相洗脱纯化。
[0016] 进一步，裂解温度为O-KTC。
[0017] 进一步，裂解时间2_3h。
[0018] 进一步，所述缩宫素多肽全保护树脂采用拟合成的缩宫素肽链的梭基末端氨基酸 的梭基，以共价键的结构同一个不溶性的高分子树脂相连，然后以此结合在固相载体上的 氨基酸作为氨基组份，经过脱去氨基保护基并同过量的活化梭基组分反应，接长肽链，重 复操作，达到所要合成的肽链长度，得到缩宫素多肽全保护树脂。本发明的树脂选用适合于 固相多肽合成树脂即可，优选苯氧基树脂。
[0019] 本发明的有益效果主要体现在：本发明多肽原料药采用全保护多肽树脂为原料， 不经偶合、接肽等反应过程，缩短了多肽原料药生产步骤，工艺简单，具有反应周期短、收率 高，产品纯度高，生产过程中污染物产生量少等特点。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于 此：
[0021] 实施例1 :
[0022] 将缩宫素多肽全保护树脂加入裂解切肽釜中，加入三氟乙酸和水进行裂解。其中 三氟乙酸的摩尔的量为缩宫素多肽全保护树脂的2-5倍。裂解温度为0-KTC，裂解时间 2_3h。裂解完成后进行过滤，过滤得到的液体进入旋蒸釜，旋蒸回收三氟乙酸。旋蒸后得到 的浓缩液进入结晶釜，加入乙酸丁酯冷冻结晶，结晶后过滤，过滤得到的湿固体进行真空干 燥。干燥完后的固体加水溶解，然后采用HPLC仪纯化，用乙腈和水作为流动相洗脱纯化，然 后去冻干，冻干后混合、包装的成品，收率为55%，产物纯度彡99. 4%。
[0023] 虽然本发明已由较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟知此技 艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，可作些许的更动与润饰，因此本发明的保护范围当 视权利要求书所要求保护的范围为准。
【主权项】
1. 一种缩宫素多肽的合成方法，其特征在于，包括以下步骤： 以缩宫素多肽全保护树脂为原料，将缩宫素多肽全保护树脂加入裂解切肽釜中，加入 三氟乙酸和水进行裂解，得到多肽原料药粗品，再经结晶、HPLC合成、洗脱进行精制后即可 得到缩宫素多肽原料药成品。2. 根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，裂解完成后，旋蒸回收三氟乙酸，浓 缩液进入结晶釜，加入乙酸丁酯冷冻结晶。3. 根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，结晶后过滤，过滤得到的湿固体后真 空干燥。4. 根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，干燥完后的固体加水溶解，然后进入 HPLC仪纯化，用乙腈和水作为流动相洗脱纯化。5. 根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述缩宫素多肽全保护树脂采用拟 合成的缩宫素肽链的梭基末端氨基酸的梭基，以共价键的结构同一个不溶性的高分子树脂 相连，然后以此结合在固相载体上的氨基酸作为氨基组份，经过脱去氨基保护基并同过量 的活化梭基组分反应，接长肽链，重复操作，达到所要合成的肽链长度，得到缩宫素多肽全 保护树脂。6. 根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，裂解温度为O-KTC。7. 根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，裂解时间2-3h。
【专利摘要】本发明提供了一种缩宫素多肽的合成方法，以缩宫素多肽全保护树脂为原料，将缩宫素多肽全保护树脂加入裂解切肽釜中，加入三氟乙酸和水进行裂解，得到多肽原料药粗品，再经结晶、HPLC合成、洗脱进行精制后即可得到缩宫素多肽原料药成品。本发明不经偶合、接肽等反应过程，缩短了多肽原料药生产步骤，具有反应周期短、收率高，生产过程中污染物产生量少等优点。
【IPC分类】C07K1/06, C07K7/16, C07K1/04
【公开号】CN104892731
【申请号】CN201510383403
【发明人】张胜
【申请人】浙江天顺生物科技有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月30日
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种缩宫素多肽的合成方法。
【背景技术】
[0002] 缩宫素（Oxytocin)，用于引产、催产、产后及流产后因宫缩无力或缩复不良而引起 的子宫出血；了解胎盘储备功能（催产素激惹试验）；滴鼻可促使排乳。缩宫素能间接刺激 子宫平滑肌收缩，模拟正常分娩的子宫收缩作用，导致子宫颈扩张，子宫对缩宫素的反应在 妊娠过程中逐渐增加，足月时达高峰。缩宫素也可刺激乳腺的平滑肌收缩，有助于乳汁自乳 房排出，但并不增加乳腺的乳汁分泌量。
[0003] 缩宫素最初是由猪、牛脑神经垂体中提取制得，自20世纪50年代，使用液相法完 成了缩宫素的全合成，至今已合成缩宫素的类似物有数百种之多，有的生物活性远远超过 天然缩宫素，而提取的缩宫素因其纯度较低，含少量的加压素，易产生升压的副作用，正逐 渐为化学合成法所替代，目前，国内合成方法有：液相合成法、固相合成法。
[0004] 通过在液体介质中反应制备缩宫素，采用逐步合成或片段缩合方法，适合于短肽 的合成，每步中间产物都可以纯化，制备工艺简单，但是，反应物混合均匀、工艺过程中需要 严格控制反应体系的PH值、温度、搅拌速度等条件，且产生杂质较多每步都需要纯化，且纯 化难度较大，此外耗时较长，合成得到的缩宫素杂质多，纯化步骤多。
[0005] 利用固相合成法原理，以第一个氨基酸的羧基与固相载体（树脂）的氨基以共价 键的形式连接起来，再以这个氨基酸的氨基为起点，与下一个氨基酸的羧基连接，依次循 环，直至目标肽形成为止。优点是不需要每步纯化提高了合成速度，产率较高，缺点是氨基 酸原料投料较大，没有中间纯化步骤，有时长肽粗品纯度较低，需要反相色谱纯化。
【发明内容】
[0006] 本发明为了克服现有技术不足，提供一种高收率、低成本、反应条件温和、环境污 染小，利于产业化的手工固相合成多肽工艺，采用全保护多肽树脂为原料，经裂解切肽、精 制制成，不经偶合、接肽等反应过程，缩短了多肽原料药生产步骤，具有反应周期短、收率 高，生产过程中污染物产生量少等优点。
[0007] 为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
[0008] -种缩宫素多肽的合成方法，包括以下步骤：
[0009] 以缩宫素多肽全保护树脂为原料，将缩宫素多肽全保护树脂加入裂解切肽釜中， 加入三氟乙酸和水进行裂解，得到多肽原料药粗品，再经结晶、HPLC合成、洗脱进行精制后 即可得到缩宫素多肽原料药成品。
[0010] 具体反应方程式如下所示：
[0011]
[0013] 进一步，裂解完成后，旋蒸回收三氟乙酸，浓缩液进入结晶釜，加入乙酸丁酯冷冻 结晶。
[0014] 进一步，结晶后过滤，过滤得到的湿固体后真空干燥。
[0015] 进一步，干燥完后的固体加水溶解，然后进入HPLC仪纯化，用乙腈和水作为流动 相洗脱纯化。
[0016] 进一步，裂解温度为O-KTC。
[0017] 进一步，裂解时间2_3h。
[0018] 进一步，所述缩宫素多肽全保护树脂采用拟合成的缩宫素肽链的梭基末端氨基酸 的梭基，以共价键的结构同一个不溶性的高分子树脂相连，然后以此结合在固相载体上的 氨基酸作为氨基组份，经过脱去氨基保护基并同过量的活化梭基组分反应，接长肽链，重 复操作，达到所要合成的肽链长度，得到缩宫素多肽全保护树脂。本发明的树脂选用适合于 固相多肽合成树脂即可，优选苯氧基树脂。
[0019] 本发明的有益效果主要体现在：本发明多肽原料药采用全保护多肽树脂为原料， 不经偶合、接肽等反应过程，缩短了多肽原料药生产步骤，工艺简单，具有反应周期短、收率 高，产品纯度高，生产过程中污染物产生量少等特点。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于 此：
[0021] 实施例1 :
[0022] 将缩宫素多肽全保护树脂加入裂解切肽釜中，加入三氟乙酸和水进行裂解。其中 三氟乙酸的摩尔的量为缩宫素多肽全保护树脂的2-5倍。裂解温度为0-KTC，裂解时间 2_3h。裂解完成后进行过滤，过滤得到的液体进入旋蒸釜，旋蒸回收三氟乙酸。旋蒸后得到 的浓缩液进入结晶釜，加入乙酸丁酯冷冻结晶，结晶后过滤，过滤得到的湿固体进行真空干 燥。干燥完后的固体加水溶解，然后采用HPLC仪纯化，用乙腈和水作为流动相洗脱纯化，然 后去冻干，冻干后混合、包装的成品，收率为55%，产物纯度彡99. 4%。
[0023] 虽然本发明已由较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟知此技 艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，可作些许的更动与润饰，因此本发明的保护范围当 视权利要求书所要求保护的范围为准。
【主权项】
1. 一种缩宫素多肽的合成方法，其特征在于，包括以下步骤： 以缩宫素多肽全保护树脂为原料，将缩宫素多肽全保护树脂加入裂解切肽釜中，加入 三氟乙酸和水进行裂解，得到多肽原料药粗品，再经结晶、HPLC合成、洗脱进行精制后即可 得到缩宫素多肽原料药成品。2. 根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，裂解完成后，旋蒸回收三氟乙酸，浓 缩液进入结晶釜，加入乙酸丁酯冷冻结晶。3. 根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，结晶后过滤，过滤得到的湿固体后真 空干燥。4. 根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，干燥完后的固体加水溶解，然后进入 HPLC仪纯化，用乙腈和水作为流动相洗脱纯化。5. 根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述缩宫素多肽全保护树脂采用拟 合成的缩宫素肽链的梭基末端氨基酸的梭基，以共价键的结构同一个不溶性的高分子树脂 相连，然后以此结合在固相载体上的氨基酸作为氨基组份，经过脱去氨基保护基并同过量 的活化梭基组分反应，接长肽链，重复操作，达到所要合成的肽链长度，得到缩宫素多肽全 保护树脂。6. 根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，裂解温度为O-KTC。7. 根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，裂解时间2-3h。
【专利摘要】本发明提供了一种缩宫素多肽的合成方法，以缩宫素多肽全保护树脂为原料，将缩宫素多肽全保护树脂加入裂解切肽釜中，加入三氟乙酸和水进行裂解，得到多肽原料药粗品，再经结晶、HPLC合成、洗脱进行精制后即可得到缩宫素多肽原料药成品。本发明不经偶合、接肽等反应过程，缩短了多肽原料药生产步骤，具有反应周期短、收率高，生产过程中污染物产生量少等优点。
【IPC分类】C07K1/06, C07K7/16, C07K1/04
【公开号】CN104892731
【申请号】CN201510383403
【发明人】张胜
【申请人】浙江天顺生物科技有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月30日
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