一种提高水蛭素提取收率的方法
一种提高水蛭素提取收率的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及水蛭素提取技术领域，具体为一种提高水蛭素提取收率的方法。
【背景技术】
[0002]水蛭素(hirudin)因最早从水蛭中分离得到而得名。天然水蛭素由65个氨基酸残基组成，分子量7000道尔顿。水蛭素能同凝血酶的催化中心及纤维蛋白原结合中心发生不可逆的结合，使凝血酶失活，为目前发现的最强有力的凝血酶抑制剂。此外还有很强的抗血栓作用，对多种实验性血栓模型有阻抑作用。水蛭素对于各种血栓疾病如静脉血栓、弥散性血管内凝血、脑凝血、血栓静脉炎及冠状动脉血栓都有预防和治疗效果，尤其是静脉血栓和弥漫性血管内凝血的治疗；也可用于外科手术后预防动脉血栓的形成，预防溶解血栓后或血管成形术后再栓塞；改善体外血液循环和血液透析过程，在显微外科手术中常因为吻合处血管栓塞而导致失败，采用水蛭素可促进伤口愈合。
[0003]工业化生产水蛭素的方法多以对水蛭活体的破坏方法获得水蛭素，影响所得水蛭素的纯度，同时对水蛭资源的供应依赖过大，尤其难以避免水蛭素生产的季节性问题。吸血类水蛭体内抗凝活性物质含量高，但吸血类水蛭在饲养过程中，同批饲养的水蛭因饲喂和捕捞时间而导致水蛭体内水蛭素含量不稳定。
[0004]利用电流对生物体腺体的刺激影响作用，直接使用直流弱电刺激活体水蛭批量提取高纯度水蛭素的方式并保持水蛭的活体性状的方法以期简化水蛭素的生产工艺，提高产品纯度，保持野生水蛭资源的重复利用，降低生产成本，克服生产的季节性障碍问题的方法，至今尚未有成功实现的报道。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种通过调整水蛭的摄食时间，用以改善水蛭体内水蛭素含量，并用电刺激活体水蛭提取水蛭素的方法，它能够简化水蛭素的生产工艺，同时保持水蛭的活体，多次提取高纯度水蛭素。
[0006]为实现上述目的，本发明的技术方案如下:
一种提高水蛭素提取收率的方法，包括以下步骤:
A、补喂:在捕捞前的12?54小时，补喂一次饲料；或者是在正常饲喂饲料12?54小时后进行捕携；
B、捕捞及电刺激:在室温下先将活体水蛭从饲养槽中提取至贮藏槽，用去离子水漂洗除其表面杂质，滤出水分，再浸入生理盐水漂洗，添加电解质液层覆盖，通入直流电进行刺激，收集水蛭分泌的液体，后将活体水蛭从滤槽中放回饲养槽；
C、后续处理:将收集的分泌物经过800μπι纳滤膜后续处理30?180分钟，除去80?90%的水份，添加8?15%稳定剂，减压至0.9大气压下，进行喷雾干燥，获得含800-1000AT-U/g的高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉。
[0007]优选的，所述的步骤A中补喂采用的饲料为经冷藏并加入抗凝血剂的动物血液或者新鲜的动物血液。
[0008]优选的，所述的步骤A中正常饲喂是每周饲喂I或2次。
[0009]优选的，所述的步骤B中电解质液为0.9%的氯化钠溶液。
[0010]优选的，所述的步骤B中电流采用直电流为3?12mA，通电时间为5?20分钟。
[0011]优选的，所述的步骤C中的稳定剂为医用淀粉或者0.05%海藻糖、0.02%乙酰半胱氨酸和0.05%枸杞酸钠配的组合。
[0012]优选的，所述的步骤C中喷雾干燥的进口温度为180?230°C，出口温度为75?90。。。
[0013]本发明方法可采用的动物血液为脊椎动物的新鲜血液，如猪血、牛血、羊血、鸭血、鸡血，优选为鸭血。
[0014]本发明的有益效果为:
1.利用合适大小的直流弱电刺激生物活体导致腺体产生分泌的特点，连续刺激活体水蛭唾液腺分泌唾液，获得高纯度水蛭素。
[0015]2.弱电刺激后的水蛭活体保持活性，可以在隔段时间后继续进行水蛭素的提取； 3.纯的水蛭唾液可以得到较高纯度的水蛭素。
[0016]4.使用超滤膜除水提高有效成分浓度。
[0017]5.合适的赋形淀粉添加量和合适的温度设定喷雾干燥技术制粉。
[0018]6.海藻糖、乙酰半膀氨酸、枸杞酸钠的组合为保护剂，保护水蛭素混合液中抗凝血酶的生理活性的稳定性不发生变化。
[0019]7.用本发明的方法获得的产品经检测，产品中水蛭素中抗凝血酶的活性含量达到800 (干粉)或 1000 (液体)AT-U/g。
【具体实施方式】
[0020]下面通过具体实施例对本发明进行详细说明。
[0021]实施例1
本发明的提高水蛭素提取收率的方法，包括以下步骤:
A、补喂:在捕捞前的12小时，补喂至少一次饲料；或者是在正常饲喂饲料12小时后进行捕携;
B、捕捞及电刺激:在室温下先将活体水蛭从饲养槽中提取至贮藏槽，用去离子水漂洗除其表面杂质，滤出水分，再浸入生理盐水漂洗，添加电解质液层覆盖，通入直流电进行刺激，收集水蛭分泌的液体，后将活体水蛭从滤槽中放回饲养槽；
C、后续处理:将收集的分泌物经过800μπι纳滤膜后续处理30分钟，除去80%的水份，添加8%稳定剂，减压至0.9大气压下，进行喷雾干燥，获得含800AT-U/g的高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉。
[0022]优选的，所述的步骤A中补喂采用的饲料为经冷藏并加入抗凝血剂的动物血液或者新鲜的动物血液。
[0023]优选的，所述的步骤A中正常饲喂是每周饲喂I次。
[0024]优选的，所述的步骤B中电解质液为0.9%的氯化钠溶液。
[0025]优选的，所述的步骤B中电流采用直电流为3mA，通电时间为5分钟。
[0026]优选的，所述的步骤C中的稳定剂为医用淀粉。
[0027]优选的，所述的步骤C中喷雾干燥的进口温度为180°C，出口温度为75°C。
[0028]实施例2
本发明的提高水蛭素提取收率的方法，包括以下步骤:
A、补喂:在捕捞前的24小时，补喂至少一次饲料；或者是在正常饲喂饲料24小时后进行捕携;
B、捕捞及电刺激:在室温下先将活体水蛭从饲养槽中提取至贮藏槽，用去离子水漂洗除其表面杂质，滤出水分，再浸入生理盐水漂洗，添加电解质液层覆盖，通入直流电进行刺激，同时确保合适的电流强度，避免水蛭死亡，收集水蛭分泌的液体，后将活体水蛭从滤槽中放回饲养槽；
C、后续处理:将收集的分泌物经过800μ m纳滤膜处理100分钟，除去85%的水份，添 加10%稳定剂，减压至0.9大气压下，进行喷雾干燥，获得含900AT-U/g的高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉。
[0029]优选的，所述的步骤A中补喂采用的饲料为经冷藏并加入抗凝血剂的动物血液或者新鲜的动物血液。
[0030]优选的，所述的步骤A中正常饲喂是每周饲喂2次。
[0031]优选的，所述的步骤B中电解质液为0.9%的氯化钠溶液。
[0032]优选的，所述的步骤B中电流采用直电流为8mA，通电时间为10分钟。
[0033]优选的，所述的步骤C中的稳定剂为医用淀粉。
[0034]优选的，所述的步骤C中喷雾干燥的进口温度为200°C，出口温度为80°C。
[0035]实施例3
本发明的提高水蛭素提取收率的方法，包括以下步骤:
A、补喂:在捕捞前的36小时，补喂一次饲料；或者是在正常饲喂饲料36小时后进行捕携;
B、捕捞及电刺激:在室温下先将活体水蛭从饲养槽中提取至贮藏槽，用去离子水漂洗除其表面杂质，滤出水分，再浸入生理盐水漂洗，添加电解质液层覆盖，通入直流电进行刺激，同时确保合适的电流强度，避免水蛭死亡，收集水蛭分泌的液体，后将活体水蛭从滤槽中放回饲养槽；
C、后续处理:将收集的分泌物经过800μ m纳滤膜处理150分钟，除去90%的水份，添加12%稳定剂，减压至0.9大气压下，进行喷雾干燥，获得含1000AT-U/g的高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉。
[0036]优选的，所述的步骤A中补喂采用的饲料为经冷藏并加入抗凝血剂的动物血液或者新鲜的动物血液。
[0037]优选的，所述的步骤A中正常饲喂是每周饲喂I次。
[0038]优选的，所述的步骤B中电解质液为0.9%的氯化钠溶液。
[0039]优选的，所述的步骤B中电流采用直电流为10mA，通电时间为15分钟。
[0040]优选的，所述的步骤C中的稳定剂为0.05%海藻糖、0.02%乙酰半胱氨酸和0.05%枸杞酸钠配的组合。
[0041]优选的，所述的步骤C中喷雾干燥的进口温度为220°C，出口温度为85°C。
[0042]实施例4
本发明的提高水蛭素提取收率的方法，包括以下步骤:
A、补喂:在捕捞前的54小时，补喂一次饲料；或者是在正常饲喂饲料54小时后进行捕携;
B、捕捞及电刺激:在室温下先将活体水蛭从饲养槽中提取至贮藏槽，用去离子水漂洗除其表面杂质，滤出水分，再浸入生理盐水漂洗，添加电解质液层覆盖，通入直流电进行刺激，同时确保合适的电流强度，避免水蛭死亡，收集水蛭分泌的液体，后将活体水蛭从滤槽中放回饲养槽；
C、后续处理:将收集的分泌物经过800μπι纳滤膜后续处理180分钟，除去90%的水份，添加15%稳定剂，减压至0.9大气压下，进行喷雾干燥，获得含1000AT-U/g的高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉。
[0043]优选的，所述的步骤A中补喂采用的饲料为经冷藏并加入抗凝血剂的动物血液或者新鲜的动物血液。
[0044]优选的，所述的步骤A中正常饲喂是每周饲喂2次。
[0045]优选的，所述的步骤B中电解质液为0.9%的氯化钠溶液。
[0046]优选的，所述的步骤B中电流采用直电流为12mA，通电时间为20分钟。
[0047]优选的，所述的步骤C中的稳定剂为医用淀粉或者0.05%海藻糖、0.02%乙酰半胱氨酸和0.05%枸杞酸钠配的组合。
[0048]优选的，所述的步骤C中喷雾干燥的进口温度为230°C，出口温度为90°C。
【主权项】
1.一种提高水蛭素提取收率的方法，其特征在于，包括以下步骤: A、补喂:在捕捞前的12?54小时，补喂一次饲料；或者是在正常饲喂饲料12?54小时后进行捕携； B、捕捞及电刺激:在室温下先将活体水蛭从饲养槽中提取至贮藏槽，用去离子水漂洗除其表面杂质，滤出水分，再浸入生理盐水漂洗，添加电解质液层覆盖，通入直流电进行刺激，收集水蛭分泌的液体，后将活体水蛭从滤槽中放回饲养槽； C、后续处理:将收集的分泌物经过800μπι纳滤膜后续处理30?180分钟，除去80?90%的水份，添加8?15%稳定剂，减压至0.9大气压下，进行喷雾干燥，获得含800-1000AT-U/g的高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉。2.根据权利要求1所述的提高水蛭素提取收率的方法，其特征在于:所述的步骤A中补喂采用的饲料为经冷藏并加入抗凝血剂的动物血液或者新鲜的动物血液。3.根据权利要求1任一项所述的提高水蛭素提取收率的方法，其特征在于:所述的步骤A中正常饲喂是每周饲喂I或2次。4.根据权利要求1所述的提高水蛭素提取收率的方法，其特征在于:所述的步骤B中电解质液为0.9%的氯化钠溶液。5.根据权利要求1所述的提高水蛭素提取收率的方法，其特征在于:所述的步骤B中电流采用直电流为3?12mA，通电时间为5?20分钟。6.根据权利要求1所述的提高水蛭素提取收率的方法，其特征在于:所述的步骤C中的稳定剂为医用淀粉或者0.05%海藻糖、0.02%乙酰半胱氨酸和0.05%枸杞酸钠配的组合。7.根据权利要求1所述的提高水蛭素提取收率的方法，其特征在于:所述的步骤C中喷雾干燥的进口温度为180?230°C，出口温度为75?90°C。
【专利摘要】本发明公开一种提高水蛭素提取收率的方法，包括以下步骤：在捕捞前的12～54小时，补喂一次饲料；或在正常饲喂饲料12～54小时后进行捕捞；在室温下先将活体水蛭提取至贮藏槽，用去离子水漂洗，滤出水分，浸入生理盐水漂洗，添加电解质液层覆盖，通入直流电进行刺激，收集水蛭分泌的液体，后将活体水蛭从滤槽中放回饲养槽；将收集的分泌物经过800μm纳滤膜后续处理除去部分的水份，添加稳定剂，进行喷雾干燥，获得高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉。本发明通过调整水蛭的摄食时间，用以改善水蛭体内水蛭素含量，并用电刺激活体水蛭提取水蛭素的方法，简化水蛭素的生产工艺，同时保持水蛭的活体，多次提取高纯度水蛭素。
【IPC分类】C07K14/815, A61N1/18, A01K67/033, C07K1/34
【公开号】CN104892752
【申请号】CN201510345287
【发明人】谢海林
【申请人】广西复鑫益生物科技有限公司平南分公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月23日
【技术领域】
[0001]本发明涉及水蛭素提取技术领域，具体为一种提高水蛭素提取收率的方法。
【背景技术】
[0002]水蛭素(hirudin)因最早从水蛭中分离得到而得名。天然水蛭素由65个氨基酸残基组成，分子量7000道尔顿。水蛭素能同凝血酶的催化中心及纤维蛋白原结合中心发生不可逆的结合，使凝血酶失活，为目前发现的最强有力的凝血酶抑制剂。此外还有很强的抗血栓作用，对多种实验性血栓模型有阻抑作用。水蛭素对于各种血栓疾病如静脉血栓、弥散性血管内凝血、脑凝血、血栓静脉炎及冠状动脉血栓都有预防和治疗效果，尤其是静脉血栓和弥漫性血管内凝血的治疗；也可用于外科手术后预防动脉血栓的形成，预防溶解血栓后或血管成形术后再栓塞；改善体外血液循环和血液透析过程，在显微外科手术中常因为吻合处血管栓塞而导致失败，采用水蛭素可促进伤口愈合。
[0003]工业化生产水蛭素的方法多以对水蛭活体的破坏方法获得水蛭素，影响所得水蛭素的纯度，同时对水蛭资源的供应依赖过大，尤其难以避免水蛭素生产的季节性问题。吸血类水蛭体内抗凝活性物质含量高，但吸血类水蛭在饲养过程中，同批饲养的水蛭因饲喂和捕捞时间而导致水蛭体内水蛭素含量不稳定。
[0004]利用电流对生物体腺体的刺激影响作用，直接使用直流弱电刺激活体水蛭批量提取高纯度水蛭素的方式并保持水蛭的活体性状的方法以期简化水蛭素的生产工艺，提高产品纯度，保持野生水蛭资源的重复利用，降低生产成本，克服生产的季节性障碍问题的方法，至今尚未有成功实现的报道。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种通过调整水蛭的摄食时间，用以改善水蛭体内水蛭素含量，并用电刺激活体水蛭提取水蛭素的方法，它能够简化水蛭素的生产工艺，同时保持水蛭的活体，多次提取高纯度水蛭素。
[0006]为实现上述目的，本发明的技术方案如下:
一种提高水蛭素提取收率的方法，包括以下步骤:
A、补喂:在捕捞前的12?54小时，补喂一次饲料；或者是在正常饲喂饲料12?54小时后进行捕携；
B、捕捞及电刺激:在室温下先将活体水蛭从饲养槽中提取至贮藏槽，用去离子水漂洗除其表面杂质，滤出水分，再浸入生理盐水漂洗，添加电解质液层覆盖，通入直流电进行刺激，收集水蛭分泌的液体，后将活体水蛭从滤槽中放回饲养槽；
C、后续处理:将收集的分泌物经过800μπι纳滤膜后续处理30?180分钟，除去80?90%的水份，添加8?15%稳定剂，减压至0.9大气压下，进行喷雾干燥，获得含800-1000AT-U/g的高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉。
[0007]优选的，所述的步骤A中补喂采用的饲料为经冷藏并加入抗凝血剂的动物血液或者新鲜的动物血液。
[0008]优选的，所述的步骤A中正常饲喂是每周饲喂I或2次。
[0009]优选的，所述的步骤B中电解质液为0.9%的氯化钠溶液。
[0010]优选的，所述的步骤B中电流采用直电流为3?12mA，通电时间为5?20分钟。
[0011]优选的，所述的步骤C中的稳定剂为医用淀粉或者0.05%海藻糖、0.02%乙酰半胱氨酸和0.05%枸杞酸钠配的组合。
[0012]优选的，所述的步骤C中喷雾干燥的进口温度为180?230°C，出口温度为75?90。。。
[0013]本发明方法可采用的动物血液为脊椎动物的新鲜血液，如猪血、牛血、羊血、鸭血、鸡血，优选为鸭血。
[0014]本发明的有益效果为:
1.利用合适大小的直流弱电刺激生物活体导致腺体产生分泌的特点，连续刺激活体水蛭唾液腺分泌唾液，获得高纯度水蛭素。
[0015]2.弱电刺激后的水蛭活体保持活性，可以在隔段时间后继续进行水蛭素的提取； 3.纯的水蛭唾液可以得到较高纯度的水蛭素。
[0016]4.使用超滤膜除水提高有效成分浓度。
[0017]5.合适的赋形淀粉添加量和合适的温度设定喷雾干燥技术制粉。
[0018]6.海藻糖、乙酰半膀氨酸、枸杞酸钠的组合为保护剂，保护水蛭素混合液中抗凝血酶的生理活性的稳定性不发生变化。
[0019]7.用本发明的方法获得的产品经检测，产品中水蛭素中抗凝血酶的活性含量达到800 (干粉)或 1000 (液体)AT-U/g。
【具体实施方式】
[0020]下面通过具体实施例对本发明进行详细说明。
[0021]实施例1
本发明的提高水蛭素提取收率的方法，包括以下步骤:
A、补喂:在捕捞前的12小时，补喂至少一次饲料；或者是在正常饲喂饲料12小时后进行捕携;
B、捕捞及电刺激:在室温下先将活体水蛭从饲养槽中提取至贮藏槽，用去离子水漂洗除其表面杂质，滤出水分，再浸入生理盐水漂洗，添加电解质液层覆盖，通入直流电进行刺激，收集水蛭分泌的液体，后将活体水蛭从滤槽中放回饲养槽；
C、后续处理:将收集的分泌物经过800μπι纳滤膜后续处理30分钟，除去80%的水份，添加8%稳定剂，减压至0.9大气压下，进行喷雾干燥，获得含800AT-U/g的高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉。
[0022]优选的，所述的步骤A中补喂采用的饲料为经冷藏并加入抗凝血剂的动物血液或者新鲜的动物血液。
[0023]优选的，所述的步骤A中正常饲喂是每周饲喂I次。
[0024]优选的，所述的步骤B中电解质液为0.9%的氯化钠溶液。
[0025]优选的，所述的步骤B中电流采用直电流为3mA，通电时间为5分钟。
[0026]优选的，所述的步骤C中的稳定剂为医用淀粉。
[0027]优选的，所述的步骤C中喷雾干燥的进口温度为180°C，出口温度为75°C。
[0028]实施例2
本发明的提高水蛭素提取收率的方法，包括以下步骤:
A、补喂:在捕捞前的24小时，补喂至少一次饲料；或者是在正常饲喂饲料24小时后进行捕携;
B、捕捞及电刺激:在室温下先将活体水蛭从饲养槽中提取至贮藏槽，用去离子水漂洗除其表面杂质，滤出水分，再浸入生理盐水漂洗，添加电解质液层覆盖，通入直流电进行刺激，同时确保合适的电流强度，避免水蛭死亡，收集水蛭分泌的液体，后将活体水蛭从滤槽中放回饲养槽；
C、后续处理:将收集的分泌物经过800μ m纳滤膜处理100分钟，除去85%的水份，添 加10%稳定剂，减压至0.9大气压下，进行喷雾干燥，获得含900AT-U/g的高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉。
[0029]优选的，所述的步骤A中补喂采用的饲料为经冷藏并加入抗凝血剂的动物血液或者新鲜的动物血液。
[0030]优选的，所述的步骤A中正常饲喂是每周饲喂2次。
[0031]优选的，所述的步骤B中电解质液为0.9%的氯化钠溶液。
[0032]优选的，所述的步骤B中电流采用直电流为8mA，通电时间为10分钟。
[0033]优选的，所述的步骤C中的稳定剂为医用淀粉。
[0034]优选的，所述的步骤C中喷雾干燥的进口温度为200°C，出口温度为80°C。
[0035]实施例3
本发明的提高水蛭素提取收率的方法，包括以下步骤:
A、补喂:在捕捞前的36小时，补喂一次饲料；或者是在正常饲喂饲料36小时后进行捕携;
B、捕捞及电刺激:在室温下先将活体水蛭从饲养槽中提取至贮藏槽，用去离子水漂洗除其表面杂质，滤出水分，再浸入生理盐水漂洗，添加电解质液层覆盖，通入直流电进行刺激，同时确保合适的电流强度，避免水蛭死亡，收集水蛭分泌的液体，后将活体水蛭从滤槽中放回饲养槽；
C、后续处理:将收集的分泌物经过800μ m纳滤膜处理150分钟，除去90%的水份，添加12%稳定剂，减压至0.9大气压下，进行喷雾干燥，获得含1000AT-U/g的高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉。
[0036]优选的，所述的步骤A中补喂采用的饲料为经冷藏并加入抗凝血剂的动物血液或者新鲜的动物血液。
[0037]优选的，所述的步骤A中正常饲喂是每周饲喂I次。
[0038]优选的，所述的步骤B中电解质液为0.9%的氯化钠溶液。
[0039]优选的，所述的步骤B中电流采用直电流为10mA，通电时间为15分钟。
[0040]优选的，所述的步骤C中的稳定剂为0.05%海藻糖、0.02%乙酰半胱氨酸和0.05%枸杞酸钠配的组合。
[0041]优选的，所述的步骤C中喷雾干燥的进口温度为220°C，出口温度为85°C。
[0042]实施例4
本发明的提高水蛭素提取收率的方法，包括以下步骤:
A、补喂:在捕捞前的54小时，补喂一次饲料；或者是在正常饲喂饲料54小时后进行捕携;
B、捕捞及电刺激:在室温下先将活体水蛭从饲养槽中提取至贮藏槽，用去离子水漂洗除其表面杂质，滤出水分，再浸入生理盐水漂洗，添加电解质液层覆盖，通入直流电进行刺激，同时确保合适的电流强度，避免水蛭死亡，收集水蛭分泌的液体，后将活体水蛭从滤槽中放回饲养槽；
C、后续处理:将收集的分泌物经过800μπι纳滤膜后续处理180分钟，除去90%的水份，添加15%稳定剂，减压至0.9大气压下，进行喷雾干燥，获得含1000AT-U/g的高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉。
[0043]优选的，所述的步骤A中补喂采用的饲料为经冷藏并加入抗凝血剂的动物血液或者新鲜的动物血液。
[0044]优选的，所述的步骤A中正常饲喂是每周饲喂2次。
[0045]优选的，所述的步骤B中电解质液为0.9%的氯化钠溶液。
[0046]优选的，所述的步骤B中电流采用直电流为12mA，通电时间为20分钟。
[0047]优选的，所述的步骤C中的稳定剂为医用淀粉或者0.05%海藻糖、0.02%乙酰半胱氨酸和0.05%枸杞酸钠配的组合。
[0048]优选的，所述的步骤C中喷雾干燥的进口温度为230°C，出口温度为90°C。
【主权项】
1.一种提高水蛭素提取收率的方法，其特征在于，包括以下步骤: A、补喂:在捕捞前的12?54小时，补喂一次饲料；或者是在正常饲喂饲料12?54小时后进行捕携； B、捕捞及电刺激:在室温下先将活体水蛭从饲养槽中提取至贮藏槽，用去离子水漂洗除其表面杂质，滤出水分，再浸入生理盐水漂洗，添加电解质液层覆盖，通入直流电进行刺激，收集水蛭分泌的液体，后将活体水蛭从滤槽中放回饲养槽； C、后续处理:将收集的分泌物经过800μπι纳滤膜后续处理30?180分钟，除去80?90%的水份，添加8?15%稳定剂，减压至0.9大气压下，进行喷雾干燥，获得含800-1000AT-U/g的高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉。2.根据权利要求1所述的提高水蛭素提取收率的方法，其特征在于:所述的步骤A中补喂采用的饲料为经冷藏并加入抗凝血剂的动物血液或者新鲜的动物血液。3.根据权利要求1任一项所述的提高水蛭素提取收率的方法，其特征在于:所述的步骤A中正常饲喂是每周饲喂I或2次。4.根据权利要求1所述的提高水蛭素提取收率的方法，其特征在于:所述的步骤B中电解质液为0.9%的氯化钠溶液。5.根据权利要求1所述的提高水蛭素提取收率的方法，其特征在于:所述的步骤B中电流采用直电流为3?12mA，通电时间为5?20分钟。6.根据权利要求1所述的提高水蛭素提取收率的方法，其特征在于:所述的步骤C中的稳定剂为医用淀粉或者0.05%海藻糖、0.02%乙酰半胱氨酸和0.05%枸杞酸钠配的组合。7.根据权利要求1所述的提高水蛭素提取收率的方法，其特征在于:所述的步骤C中喷雾干燥的进口温度为180?230°C，出口温度为75?90°C。
【专利摘要】本发明公开一种提高水蛭素提取收率的方法，包括以下步骤：在捕捞前的12～54小时，补喂一次饲料；或在正常饲喂饲料12～54小时后进行捕捞；在室温下先将活体水蛭提取至贮藏槽，用去离子水漂洗，滤出水分，浸入生理盐水漂洗，添加电解质液层覆盖，通入直流电进行刺激，收集水蛭分泌的液体，后将活体水蛭从滤槽中放回饲养槽；将收集的分泌物经过800μm纳滤膜后续处理除去部分的水份，添加稳定剂，进行喷雾干燥，获得高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉。本发明通过调整水蛭的摄食时间，用以改善水蛭体内水蛭素含量，并用电刺激活体水蛭提取水蛭素的方法，简化水蛭素的生产工艺，同时保持水蛭的活体，多次提取高纯度水蛭素。
【IPC分类】C07K14/815, A61N1/18, A01K67/033, C07K1/34
【公开号】CN104892752
【申请号】CN201510345287
【发明人】谢海林
【申请人】广西复鑫益生物科技有限公司平南分公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月23日
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