一种从白屈菜中提取的白屈菜多糖及其应用
一种从白屈菜中提取的白屈菜多糖及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药领域，特别是涉及一种从白屈菜中提取的白屈菜多糖及其应用。
【背景技术】
[0002] 近年来，随着社会科技的进步，生活水平的提高及公众自我保健意识的增强，越来 越多的人将目光聚焦在能够增强免疫作用的产品上，大大促进了免疫增强产品的研宄。植 物多糖是一类从天然药物中提取的成分，现代研宄表明，植物多糖具有提高人体免疫力、抗 肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗衰老、降血糖、降血脂、愈溃疡等方面的活性。并且，许多研宄表明， 多糖具有较强的生物活性，为天然药物发挥作用的主要有效成分。
[0003] 白屈菜为罂粟科白屈菜属植物白屈菜（Chelidonium majus L)的干燥全草，为 2010版中华人民共和国药典（一部）新增品种。其味苦，性凉，有毒：全草入药，有解痉镇 痛、止咳平喘之功效；用于胃脘挛痛，咳嗽气喘，百日咳。目前天然药物化学及药理学方面的 研宄主要集中在白屈菜的生物碱类成分方面，但对其多糖类成分的提取分离及其药理活性 的研宄却未见报道。
【发明内容】
[0004] 针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种从白屈菜中 提取的白屈菜多糖及其应用，可有效解决白屈菜多糖的提取，并有效用于增强免疫力产品 中的问题。
[0005] 本发明解决的技术方案是，一种从白屈菜中提取的白屈菜多糖，所述白屈菜多糖 的提取方法包括以下步骤：
[0006] (1)取白屈菜药材粉末，加入10~40倍白屈菜药材粉末重量的水，60~100°C提 取2~3次，每次1~3h，过滤，合并滤液，减压浓缩至40°C相对密度1. 10~1. 20,得到多 糖浓缩液；
[0007] (2)在步骤（1)的多糖浓缩液中加入体积分数95%~100%乙醇至含醇量达到 80%，静置过夜，取底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量50~100倍的无水乙醇、丙 酮、无水乙醚各洗绦1~2次，干燥，得到粗多糖；
[0008] (3)取步骤（2)的粗多糖0. 2~1.0 g溶于IOmL水中，上样于HPD-600型大孔吸附 树脂柱，并以200~300mL水洗脱，流速为0. 5~I. 5mL/min，收集洗脱液，再减压浓缩至洗 脱液原体积的1/2-2/3 ;加入体积分数95%~100%乙醇至含醇量达到80%，静置过夜，取 底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量50~100倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤 1~2次，干燥，得到白屈菜多糖。
[0009] 步骤（1)中的白屈菜药材粉末为过2号药典筛的粉末。
[0010] 本发明的技术方案还在于提供一种白屈菜多糖在制备增强免疫功能药物中的应 用。
[0011] 本发明的技术方案还在于提供一种白屈菜多糖在制备增强免疫功能保健食品中 的应用。
[0012] 本发明从白屈菜中提取白屈菜多糖，原料为天然中药材，来源广泛，成本低廉。本 发明的白屈菜多糖为灰褐色粉末，具有较强的增强机体免疫力的作用，应用于药物中，能够 实现白屈菜在制备增强机体免疫力的药物和保健食品中的应用，开辟了白屈菜药材的应用 新前景，具有很好的社会效益和经济效益，是中药上的创新。同时，本发明方法简单，易于工 业化推广。
【具体实施方式】
[0013] 以下结合实施例对本发明的【具体实施方式】作详细说明。
[0014] 实施例1
[0015] 本实施例的白屈菜多糖的提取方法包括以下步骤：
[0016] (1)取白屈菜药材粉末，加入10倍白屈菜药材粉末重量的水，60°C提取2次，每次 lh，过滤，合并滤液，减压浓缩至40°C相对密度1. 10,得到多糖浓缩液；
[0017] (2)在步骤（1)的多糖浓缩液中加入体积分数95%乙醇至含醇量达到80%，静置 过夜，取底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量50倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗 涤1次，干燥，得到粗多糖；
[0018] (3)取步骤（2)的粗多糖0. 2g溶于IOmL水中，上样于HPD-600型大孔吸附树脂 柱，并以200mL水洗脱，流速为0. 5mL/min，收集洗脱液，再减压浓缩至洗脱液原体积的1/2 ; 加入体积分数95 %乙醇至含醇量达到80 %，静置过夜，取底部沉淀，对所得沉淀物依次用 沉淀物重量50倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤1次，干燥，得到白屈菜多糖。
[0019] 实施例2
[0020] 本实施例的白屈菜多糖的提取方法包括以下步骤：
[0021] (1)取白屈菜药材粉末，加入40倍白屈菜药材粉末重量的水，100°C提取3次，每次 3h，过滤，合并滤液，减压浓缩至40°C相对密度1. 20,得到多糖浓缩液；
[0022] (2)在步骤（1)的多糖浓缩液中加入体积分数100%乙醇至含醇量达到80%，静置 过夜，取底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量100倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各 洗涤2次，干燥，得到粗多糖；
[0023] (3)取步骤⑵的粗多糖1.0 g溶于IOmL水中，上样于HPD-600型大孔吸附树脂 柱，并以300mL水洗脱，流速为I. 5mL/min，收集洗脱液，再减压浓缩至洗脱液原体积的2/3 ; 加入体积分数100%乙醇至含醇量达到80%，静置过夜，取底部沉淀，对所得沉淀物依次用 沉淀物重量100倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤2次，干燥，得到白屈菜多糖。
[0024] 实施例3
[0025] 本实施例的白屈菜多糖的提取方法包括以下步骤：
[0026] (1)取白屈菜药材粉末，加入25倍白屈菜药材粉末重量的水，80°C提取2次，每次 2h，过滤，合并滤液，减压浓缩至40°C相对密度1. 15,得到多糖浓缩液；
[0027] (2)在步骤（1)的多糖浓缩液中加入体积分数98%乙醇至含醇量达到80%，静置 过夜，取底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量60倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗 涤1次，干燥，得到粗多糖；
[0028] (3)取步骤⑵的粗多糖0. 5g溶于IOmL水中，上样于HPD-600型大孔吸附树脂 柱，并以250mL水洗脱，流速为1.0 mL/min，收集洗脱液，再减压浓缩至洗脱液原体积的1/2 ; 加入体积分数98 %乙醇至含醇量达到80 %，静置过夜，对所得沉淀物依次用沉淀物重量60 倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤1次，干燥，得到白屈菜多糖。
[0029] 本发明的白屈菜多糖可用于药品的制备，特别是用于增强免疫力药物，并经试验 得到了充分证明，有关试验资料如下：
[0030] 检验结果
[0031] 实施例1所得白屈菜多糖为灰褐色粉末，多糖得率为15. 63%，经苯酚-硫酸法测 定多糖含量为51. 48%。
[0032] 白屈菜多糖增强免疫功能的实验
[0033] 实验材料
[0034] 1.实验动物：昆明种清洁级健康小鼠，体重18~22g，雌雄各半，由山东鲁抗医药 股份有限公司实验动物室提供，合格证号：SCXK鲁20130001。
[0035] 2.实验药品：白屈菜多糖，瑞士染液，香菇多糖片（开封制药集团有限公司），注射 用环磷酰胺（山西普德药业有限公司），枸橼酸钠，氯化钙，氯化钠，酒石酸钾钠，氯化钾，葡 萄糖，磷酸氢二钾，磷酸二氢钾，酚红。
[0036] 二、实验方法
[0037] 1.白屈菜多糖对免疫低下小鼠溶血素和溶血空斑形成的影响
[0038] 取昆明种小鼠300只，体重20g左右，雌雄各半，随机分6组，每组50只，分别为： 空白对照组、模型组、阳性对照组、白屈菜多糖50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg剂量组。除了 空白对照组外，其余各组均腹腔注射浓度为8mg/mL的环磷酰胺溶液连续3天，建立环磷酰 胺免疫低下小鼠模型。7~10天内除空白组小鼠免疫功能全部降低。造模后第1天各组小 鼠均腹腔注射〇. 2mL/只的5%的绵羊红细胞生理盐水混悬液进行免疫。造模结束后第1-7 天，阳性对照组（香葫多糖l〇〇mg/kg)，白屈菜多糖50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg剂量组分 别按照相应的剂量每天给药一次；对空白对照组、模型组小鼠每天一次灌服等体积生理盐 水溶液，每天给药1次，持续给药7天。第7天给药2h后，小鼠摘眼球取血，离心，得到上层 血清，血清用生理盐水稀释100倍。吸ImL的血清稀释液、0. 5mL体积分数5%绵羊红细胞 混悬液与0. 5mL体积分数10 %豚鼠血清混合均勾，置于37 °C水浴锅30min后，置于冰水中 终止反应，以2500r/min离心10min。另设不加血清空白管作对照，取上清液于540nm处测 吸光度，得各组小鼠的溶血素形成情况，结果见表1。
[0039] 将摘眼球取血后的小鼠脱颈椎处死，解剖取脾脏，匀浆，并调整脾细胞 个数，使脾 细胞混悬液中脾细胞数为5 X IO6个/mL。吸调整后的脾细胞混悬液lmL，然后加入0. 5mL体 积分数0. 2%绵羊红细胞混悬液与体积分数10%豚鼠血清0. 5mL，混匀，置37°C水浴lh，以 2000r/min离心10min。另设不加脾细胞混悬液空白管作对照，取上清液于413nm处测吸光 度，得各组小鼠的溶血空斑细胞形成情况，结果见表2。
[0040] 表1白屈菜多糖对免疫抑制小鼠溶血素形成的影响（5±s η = 50)
[0041]
[0042] 与模型组比较，*表示Ρ〈0· 05 表示Ρ〈0· 01
[0043] 表2白屈菜多糖对免疫抑制小鼠溶血空斑形成的影响（[土s, η = 50)
[0044]
[0045] 与模型组比较，*表示Ρ〈0· 05 表示Ρ〈0· 01
[0046] 从表1-2可以看出，与空白对照组相比，模型组的小鼠溶血素和溶血空斑形成均 显著降低，说明环磷酰胺致小鼠免疫抑制模型造模成功。与模型组相比，白屈菜多糖50mg/ kg、100mg/kg、200mg/kg剂量组和阳性对照组均可极显著促进免疫抑制小鼠溶血素和溶血 空斑的形成（P〈〇. 01)。
[0047] 2.白屈菜多糖对免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
[0048] 小鼠的分组、规格、造模方法、给药方法和剂量均同上。于第7天对各组小鼠均腹 腔注射体积分数5 %的绵羊红细胞生理盐水混悬溶液0. 5mL/只，注射2h后给药，灌胃给药 2h后（即给绵羊红细胞混悬液4h后），将小鼠脱颈椎处死，然后腹腔注射Hank' s应用液 2. 5mL，轻揉小鼠腹部后，在小鼠腹部剪开一小孔，用移液枪吸取腹腔液2mL置于塑料试管 中，混匀，吸取20 μ L腹腔液滴于载玻片一端，推片，并将载玻片置于铺有湿纱布的瓷盘中， 37°C条件下保温30min，用生理盐水冲去附着粘着细胞，滴加血细胞染色液染色，水冲洗，晾 干，在显微镜下观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬情况，并计算吞噬百分率和吞噬指数，计算公 式如下，结果见表3。
[0049] 吞噬百分率（％) = (吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/巨噬细胞总数）X 100%
[0050] 吞噬指数=巨噬细胞吞噬鸡红细胞的总数/巨噬细胞总数
[0051] 表3白屈菜多糖对免疫低下小鼠吞噬功能的影响（i±s，η = 50)
[0052]
[0053] 与模型组比较，*表示P〈0. 05 表示P〈0. 01
[0054] 从表3可以看出，与空白对照组相比，模型组的小鼠吞噬百分率和吞噬指数均显 著降低，说明环磷酰胺致小鼠免疫抑制模型造模成功。与模型组相比，白屈菜多糖50m g/ kg剂量组和阳性对照组均可对吞噬百分率形成极显著性影响（P〈0.01) ;200m g/kg剂量组 可对吞噬百分率形成显著性影响（P〈〇.〇5) ;100mg/kg剂量组对吞噬百分率无显著性影响。 50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg白屈菜多糖组和阳性对照组均可对吞·指数形成极显著性影 响（Ρ〈0· 01)。
[0055] 经动物实验验证，本发明中提取的白屈菜多糖类成分具有良好的增强免疫的活 性，完全具备开发为药品或保健食品的潜力及实际推广价值，该类成分可用于改善由营养 不全、生活无序、过度疲劳、肿瘤病人放化疗等多种原因导致的免疫力低下的症状。开发研 宄白屈菜多糖不仅可拓宽中药白屈菜应用的新前景，更是紧随时代步伐对中医药的创造性 贡献，具有巨大的经济及社会效益。
【主权项】
1. 一种从白屈菜中提取的白屈菜多糖，其特征在于，所述白屈菜多糖的提取方法包括 以下步骤： (1) 取白屈菜药材粉末，加入10~40倍白屈菜药材粉末重量的水，60~100°C提取2~ 3次，每次1~3h，过滤，合并滤液，减压浓缩至40°C相对密度1. 10~1. 20,得到多糖浓缩 液； (2) 在步骤（1)的多糖浓缩液中加入体积分数95%~100%乙醇至含醇量达到80%，静 置过夜，取底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量50~100倍的无水乙醇、丙酮、无水 乙醚各洗涤1~2次，干燥，得到粗多糖； (3) 取步骤（2)的粗多糖0. 2~I.Og溶于IOmL水中，上样于HPD-600型大孔吸附树脂 柱，并以200~300mL水洗脱，流速为0. 5~I. 5mL/min，收集洗脱液，再减压浓缩至洗脱液 原体积的1/2-2/3 ;加入体积分数95%~100%乙醇至含醇量达到80%，静置过夜，取底部沉 淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量50~100倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗绦1~2 次，干燥，得到白屈菜多糖。2. 根据权利要求1所述的白屈菜多糖，其特征在于，步骤（1)中的白屈菜药材粉末为过 2号药典筛的粉末。3. 根据权利要求1所述的白屈菜多糖，其特征在于，所述白屈菜多糖的提取方法包括 以下步骤： (1) 取白屈菜药材粉末，加入10倍白屈菜药材粉末重量的水，60°C提取2次，每次lh， 过滤，合并滤液，减压浓缩至40°C相对密度1. 10,得到多糖浓缩液； (2) 在步骤（1)的多糖浓缩液中加入体积分数95%乙醇至含醇量达到80%，静置过夜，取 底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量50倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤1次， 干燥，得到粗多糖； (3) 取步骤（2)的粗多糖0. 2g溶于IOmL水中，上样于HPD-600型大孔吸附树脂柱，并 以200mL水洗脱，流速为0. 5mL/min，收集洗脱液，再减压浓缩至洗脱液原体积的1/2 ;加入 体积分数95%乙醇至含醇量达到80%，静置过夜，取底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物 重量50倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤1次，干燥，得到白屈菜多糖。4. 根据权利要求1所述的白屈菜多糖，其特征在于，所述白屈菜多糖的提取方法包括 以下步骤： (1) 取白屈菜药材粉末，加入40倍白屈菜药材粉末重量的水，100°C提取3次，每次3h， 过滤，合并滤液，减压浓缩至40°C相对密度1. 20,得到多糖浓缩液； (2) 在步骤（1)的多糖浓缩液中加入体积分数100%乙醇至含醇量达到80%，静置过夜， 取底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量100倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤2 次，干燥，得到粗多糖； (3) 取步骤（2)的粗多糖I.Og溶于IOmL水中，上样于HPD-600型大孔吸附树脂柱，并 以300mL水洗脱，流速为I. 5mL/min，收集洗脱液，再减压浓缩至洗脱液原体积的2/3 ;加入 体积分数100%乙醇至含醇量达到80%，静置过夜，取底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物 重量1〇〇倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤2次，干燥，得到白屈菜多糖。5. 根据权利要求1所述的白屈菜多糖，其特征在于，所述白屈菜多糖的提取方法包括 以下步骤： (1) 取白屈菜药材粉末，加入25倍白屈菜药材粉末重量的水，80°C提取2次，每次2h， 过滤，合并滤液，减压浓缩至40°C相对密度1. 15,得到多糖浓缩液； (2) 在步骤（1)的多糖浓缩液中加入体积分数98%乙醇至含醇量达到80%，静置过夜，取 底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量60倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤1次， 干燥，得到粗多糖； (3) 取步骤（2)的粗多糖0. 5g溶于IOmL水中，上样于HPD-600型大孔吸附树脂柱，并 以250mL水洗脱，流速为I.OmL/min，收集洗脱液，再减压浓缩至洗脱液原体积的1/2 ;加入 体积分数98%乙醇至含醇量达到80%，静置过夜，对所得沉淀物依次用沉淀物重量60倍的无 水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤1次，干燥，得到白屈菜多糖。6. -种如权利要求1所述的白屈菜多糖在制备增强免疫功能药物中的应用。7. -种如权利要求1所述的白屈菜多糖在制备增强免疫功能保健食品中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种从白屈菜中提取的白屈菜多糖及其应用，可有效解决白屈菜多糖的提取，并有效用于增强免疫力药物中的问题，其解决的技术方案是，将白屈菜药材粉末加水提取，过滤，减压浓缩得到多糖浓缩液；再加乙醇沉淀并洗涤得到粗多糖，最后上样树脂柱，洗脱液再次减压浓缩、加乙醇沉淀并洗涤得到白屈菜多糖。本发明从白屈菜中提取白屈菜多糖，原料为天然中药材，来源广泛，成本低廉。本发明的白屈菜多糖为灰褐色粉末，具有较强的增强机体免疫力的作用，应用于药物中，能够实现白屈菜在制备增强机体免疫力的药物和保健食品中的应用，开辟了白屈菜药材的应用新前景，具有很好的社会效益和经济效益，是中药上的创新。
【IPC分类】A23L1/30, C08B37/00, A23L1/09, A61P37/02
【公开号】CN104892789
【申请号】CN201510355723
【发明人】王彦志, 张 杰, 刘炯, 刘富岗, 杨云
【申请人】河南中医学院
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月24日
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药领域，特别是涉及一种从白屈菜中提取的白屈菜多糖及其应用。
【背景技术】
[0002] 近年来，随着社会科技的进步，生活水平的提高及公众自我保健意识的增强，越来 越多的人将目光聚焦在能够增强免疫作用的产品上，大大促进了免疫增强产品的研宄。植 物多糖是一类从天然药物中提取的成分，现代研宄表明，植物多糖具有提高人体免疫力、抗 肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗衰老、降血糖、降血脂、愈溃疡等方面的活性。并且，许多研宄表明， 多糖具有较强的生物活性，为天然药物发挥作用的主要有效成分。
[0003] 白屈菜为罂粟科白屈菜属植物白屈菜（Chelidonium majus L)的干燥全草，为 2010版中华人民共和国药典（一部）新增品种。其味苦，性凉，有毒：全草入药，有解痉镇 痛、止咳平喘之功效；用于胃脘挛痛，咳嗽气喘，百日咳。目前天然药物化学及药理学方面的 研宄主要集中在白屈菜的生物碱类成分方面，但对其多糖类成分的提取分离及其药理活性 的研宄却未见报道。
【发明内容】
[0004] 针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种从白屈菜中 提取的白屈菜多糖及其应用，可有效解决白屈菜多糖的提取，并有效用于增强免疫力产品 中的问题。
[0005] 本发明解决的技术方案是，一种从白屈菜中提取的白屈菜多糖，所述白屈菜多糖 的提取方法包括以下步骤：
[0006] (1)取白屈菜药材粉末，加入10~40倍白屈菜药材粉末重量的水，60~100°C提 取2~3次，每次1~3h，过滤，合并滤液，减压浓缩至40°C相对密度1. 10~1. 20,得到多 糖浓缩液；
[0007] (2)在步骤（1)的多糖浓缩液中加入体积分数95%~100%乙醇至含醇量达到 80%，静置过夜，取底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量50~100倍的无水乙醇、丙 酮、无水乙醚各洗绦1~2次，干燥，得到粗多糖；
[0008] (3)取步骤（2)的粗多糖0. 2~1.0 g溶于IOmL水中，上样于HPD-600型大孔吸附 树脂柱，并以200~300mL水洗脱，流速为0. 5~I. 5mL/min，收集洗脱液，再减压浓缩至洗 脱液原体积的1/2-2/3 ;加入体积分数95%~100%乙醇至含醇量达到80%，静置过夜，取 底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量50~100倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤 1~2次，干燥，得到白屈菜多糖。
[0009] 步骤（1)中的白屈菜药材粉末为过2号药典筛的粉末。
[0010] 本发明的技术方案还在于提供一种白屈菜多糖在制备增强免疫功能药物中的应 用。
[0011] 本发明的技术方案还在于提供一种白屈菜多糖在制备增强免疫功能保健食品中 的应用。
[0012] 本发明从白屈菜中提取白屈菜多糖，原料为天然中药材，来源广泛，成本低廉。本 发明的白屈菜多糖为灰褐色粉末，具有较强的增强机体免疫力的作用，应用于药物中，能够 实现白屈菜在制备增强机体免疫力的药物和保健食品中的应用，开辟了白屈菜药材的应用 新前景，具有很好的社会效益和经济效益，是中药上的创新。同时，本发明方法简单，易于工 业化推广。
【具体实施方式】
[0013] 以下结合实施例对本发明的【具体实施方式】作详细说明。
[0014] 实施例1
[0015] 本实施例的白屈菜多糖的提取方法包括以下步骤：
[0016] (1)取白屈菜药材粉末，加入10倍白屈菜药材粉末重量的水，60°C提取2次，每次 lh，过滤，合并滤液，减压浓缩至40°C相对密度1. 10,得到多糖浓缩液；
[0017] (2)在步骤（1)的多糖浓缩液中加入体积分数95%乙醇至含醇量达到80%，静置 过夜，取底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量50倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗 涤1次，干燥，得到粗多糖；
[0018] (3)取步骤（2)的粗多糖0. 2g溶于IOmL水中，上样于HPD-600型大孔吸附树脂 柱，并以200mL水洗脱，流速为0. 5mL/min，收集洗脱液，再减压浓缩至洗脱液原体积的1/2 ; 加入体积分数95 %乙醇至含醇量达到80 %，静置过夜，取底部沉淀，对所得沉淀物依次用 沉淀物重量50倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤1次，干燥，得到白屈菜多糖。
[0019] 实施例2
[0020] 本实施例的白屈菜多糖的提取方法包括以下步骤：
[0021] (1)取白屈菜药材粉末，加入40倍白屈菜药材粉末重量的水，100°C提取3次，每次 3h，过滤，合并滤液，减压浓缩至40°C相对密度1. 20,得到多糖浓缩液；
[0022] (2)在步骤（1)的多糖浓缩液中加入体积分数100%乙醇至含醇量达到80%，静置 过夜，取底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量100倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各 洗涤2次，干燥，得到粗多糖；
[0023] (3)取步骤⑵的粗多糖1.0 g溶于IOmL水中，上样于HPD-600型大孔吸附树脂 柱，并以300mL水洗脱，流速为I. 5mL/min，收集洗脱液，再减压浓缩至洗脱液原体积的2/3 ; 加入体积分数100%乙醇至含醇量达到80%，静置过夜，取底部沉淀，对所得沉淀物依次用 沉淀物重量100倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤2次，干燥，得到白屈菜多糖。
[0024] 实施例3
[0025] 本实施例的白屈菜多糖的提取方法包括以下步骤：
[0026] (1)取白屈菜药材粉末，加入25倍白屈菜药材粉末重量的水，80°C提取2次，每次 2h，过滤，合并滤液，减压浓缩至40°C相对密度1. 15,得到多糖浓缩液；
[0027] (2)在步骤（1)的多糖浓缩液中加入体积分数98%乙醇至含醇量达到80%，静置 过夜，取底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量60倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗 涤1次，干燥，得到粗多糖；
[0028] (3)取步骤⑵的粗多糖0. 5g溶于IOmL水中，上样于HPD-600型大孔吸附树脂 柱，并以250mL水洗脱，流速为1.0 mL/min，收集洗脱液，再减压浓缩至洗脱液原体积的1/2 ; 加入体积分数98 %乙醇至含醇量达到80 %，静置过夜，对所得沉淀物依次用沉淀物重量60 倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤1次，干燥，得到白屈菜多糖。
[0029] 本发明的白屈菜多糖可用于药品的制备，特别是用于增强免疫力药物，并经试验 得到了充分证明，有关试验资料如下：
[0030] 检验结果
[0031] 实施例1所得白屈菜多糖为灰褐色粉末，多糖得率为15. 63%，经苯酚-硫酸法测 定多糖含量为51. 48%。
[0032] 白屈菜多糖增强免疫功能的实验
[0033] 实验材料
[0034] 1.实验动物：昆明种清洁级健康小鼠，体重18~22g，雌雄各半，由山东鲁抗医药 股份有限公司实验动物室提供，合格证号：SCXK鲁20130001。
[0035] 2.实验药品：白屈菜多糖，瑞士染液，香菇多糖片（开封制药集团有限公司），注射 用环磷酰胺（山西普德药业有限公司），枸橼酸钠，氯化钙，氯化钠，酒石酸钾钠，氯化钾，葡 萄糖，磷酸氢二钾，磷酸二氢钾，酚红。
[0036] 二、实验方法
[0037] 1.白屈菜多糖对免疫低下小鼠溶血素和溶血空斑形成的影响
[0038] 取昆明种小鼠300只，体重20g左右，雌雄各半，随机分6组，每组50只，分别为： 空白对照组、模型组、阳性对照组、白屈菜多糖50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg剂量组。除了 空白对照组外，其余各组均腹腔注射浓度为8mg/mL的环磷酰胺溶液连续3天，建立环磷酰 胺免疫低下小鼠模型。7~10天内除空白组小鼠免疫功能全部降低。造模后第1天各组小 鼠均腹腔注射〇. 2mL/只的5%的绵羊红细胞生理盐水混悬液进行免疫。造模结束后第1-7 天，阳性对照组（香葫多糖l〇〇mg/kg)，白屈菜多糖50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg剂量组分 别按照相应的剂量每天给药一次；对空白对照组、模型组小鼠每天一次灌服等体积生理盐 水溶液，每天给药1次，持续给药7天。第7天给药2h后，小鼠摘眼球取血，离心，得到上层 血清，血清用生理盐水稀释100倍。吸ImL的血清稀释液、0. 5mL体积分数5%绵羊红细胞 混悬液与0. 5mL体积分数10 %豚鼠血清混合均勾，置于37 °C水浴锅30min后，置于冰水中 终止反应，以2500r/min离心10min。另设不加血清空白管作对照，取上清液于540nm处测 吸光度，得各组小鼠的溶血素形成情况，结果见表1。
[0039] 将摘眼球取血后的小鼠脱颈椎处死，解剖取脾脏，匀浆，并调整脾细胞 个数，使脾 细胞混悬液中脾细胞数为5 X IO6个/mL。吸调整后的脾细胞混悬液lmL，然后加入0. 5mL体 积分数0. 2%绵羊红细胞混悬液与体积分数10%豚鼠血清0. 5mL，混匀，置37°C水浴lh，以 2000r/min离心10min。另设不加脾细胞混悬液空白管作对照，取上清液于413nm处测吸光 度，得各组小鼠的溶血空斑细胞形成情况，结果见表2。
[0040] 表1白屈菜多糖对免疫抑制小鼠溶血素形成的影响（5±s η = 50)
[0041]
[0042] 与模型组比较，*表示Ρ〈0· 05 表示Ρ〈0· 01
[0043] 表2白屈菜多糖对免疫抑制小鼠溶血空斑形成的影响（[土s, η = 50)
[0044]
[0045] 与模型组比较，*表示Ρ〈0· 05 表示Ρ〈0· 01
[0046] 从表1-2可以看出，与空白对照组相比，模型组的小鼠溶血素和溶血空斑形成均 显著降低，说明环磷酰胺致小鼠免疫抑制模型造模成功。与模型组相比，白屈菜多糖50mg/ kg、100mg/kg、200mg/kg剂量组和阳性对照组均可极显著促进免疫抑制小鼠溶血素和溶血 空斑的形成（P〈〇. 01)。
[0047] 2.白屈菜多糖对免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
[0048] 小鼠的分组、规格、造模方法、给药方法和剂量均同上。于第7天对各组小鼠均腹 腔注射体积分数5 %的绵羊红细胞生理盐水混悬溶液0. 5mL/只，注射2h后给药，灌胃给药 2h后（即给绵羊红细胞混悬液4h后），将小鼠脱颈椎处死，然后腹腔注射Hank' s应用液 2. 5mL，轻揉小鼠腹部后，在小鼠腹部剪开一小孔，用移液枪吸取腹腔液2mL置于塑料试管 中，混匀，吸取20 μ L腹腔液滴于载玻片一端，推片，并将载玻片置于铺有湿纱布的瓷盘中， 37°C条件下保温30min，用生理盐水冲去附着粘着细胞，滴加血细胞染色液染色，水冲洗，晾 干，在显微镜下观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬情况，并计算吞噬百分率和吞噬指数，计算公 式如下，结果见表3。
[0049] 吞噬百分率（％) = (吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/巨噬细胞总数）X 100%
[0050] 吞噬指数=巨噬细胞吞噬鸡红细胞的总数/巨噬细胞总数
[0051] 表3白屈菜多糖对免疫低下小鼠吞噬功能的影响（i±s，η = 50)
[0052]
[0053] 与模型组比较，*表示P〈0. 05 表示P〈0. 01
[0054] 从表3可以看出，与空白对照组相比，模型组的小鼠吞噬百分率和吞噬指数均显 著降低，说明环磷酰胺致小鼠免疫抑制模型造模成功。与模型组相比，白屈菜多糖50m g/ kg剂量组和阳性对照组均可对吞噬百分率形成极显著性影响（P〈0.01) ;200m g/kg剂量组 可对吞噬百分率形成显著性影响（P〈〇.〇5) ;100mg/kg剂量组对吞噬百分率无显著性影响。 50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg白屈菜多糖组和阳性对照组均可对吞·指数形成极显著性影 响（Ρ〈0· 01)。
[0055] 经动物实验验证，本发明中提取的白屈菜多糖类成分具有良好的增强免疫的活 性，完全具备开发为药品或保健食品的潜力及实际推广价值，该类成分可用于改善由营养 不全、生活无序、过度疲劳、肿瘤病人放化疗等多种原因导致的免疫力低下的症状。开发研 宄白屈菜多糖不仅可拓宽中药白屈菜应用的新前景，更是紧随时代步伐对中医药的创造性 贡献，具有巨大的经济及社会效益。
【主权项】
1. 一种从白屈菜中提取的白屈菜多糖，其特征在于，所述白屈菜多糖的提取方法包括 以下步骤： (1) 取白屈菜药材粉末，加入10~40倍白屈菜药材粉末重量的水，60~100°C提取2~ 3次，每次1~3h，过滤，合并滤液，减压浓缩至40°C相对密度1. 10~1. 20,得到多糖浓缩 液； (2) 在步骤（1)的多糖浓缩液中加入体积分数95%~100%乙醇至含醇量达到80%，静 置过夜，取底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量50~100倍的无水乙醇、丙酮、无水 乙醚各洗涤1~2次，干燥，得到粗多糖； (3) 取步骤（2)的粗多糖0. 2~I.Og溶于IOmL水中，上样于HPD-600型大孔吸附树脂 柱，并以200~300mL水洗脱，流速为0. 5~I. 5mL/min，收集洗脱液，再减压浓缩至洗脱液 原体积的1/2-2/3 ;加入体积分数95%~100%乙醇至含醇量达到80%，静置过夜，取底部沉 淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量50~100倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗绦1~2 次，干燥，得到白屈菜多糖。2. 根据权利要求1所述的白屈菜多糖，其特征在于，步骤（1)中的白屈菜药材粉末为过 2号药典筛的粉末。3. 根据权利要求1所述的白屈菜多糖，其特征在于，所述白屈菜多糖的提取方法包括 以下步骤： (1) 取白屈菜药材粉末，加入10倍白屈菜药材粉末重量的水，60°C提取2次，每次lh， 过滤，合并滤液，减压浓缩至40°C相对密度1. 10,得到多糖浓缩液； (2) 在步骤（1)的多糖浓缩液中加入体积分数95%乙醇至含醇量达到80%，静置过夜，取 底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量50倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤1次， 干燥，得到粗多糖； (3) 取步骤（2)的粗多糖0. 2g溶于IOmL水中，上样于HPD-600型大孔吸附树脂柱，并 以200mL水洗脱，流速为0. 5mL/min，收集洗脱液，再减压浓缩至洗脱液原体积的1/2 ;加入 体积分数95%乙醇至含醇量达到80%，静置过夜，取底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物 重量50倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤1次，干燥，得到白屈菜多糖。4. 根据权利要求1所述的白屈菜多糖，其特征在于，所述白屈菜多糖的提取方法包括 以下步骤： (1) 取白屈菜药材粉末，加入40倍白屈菜药材粉末重量的水，100°C提取3次，每次3h， 过滤，合并滤液，减压浓缩至40°C相对密度1. 20,得到多糖浓缩液； (2) 在步骤（1)的多糖浓缩液中加入体积分数100%乙醇至含醇量达到80%，静置过夜， 取底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量100倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤2 次，干燥，得到粗多糖； (3) 取步骤（2)的粗多糖I.Og溶于IOmL水中，上样于HPD-600型大孔吸附树脂柱，并 以300mL水洗脱，流速为I. 5mL/min，收集洗脱液，再减压浓缩至洗脱液原体积的2/3 ;加入 体积分数100%乙醇至含醇量达到80%，静置过夜，取底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物 重量1〇〇倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤2次，干燥，得到白屈菜多糖。5. 根据权利要求1所述的白屈菜多糖，其特征在于，所述白屈菜多糖的提取方法包括 以下步骤： (1) 取白屈菜药材粉末，加入25倍白屈菜药材粉末重量的水，80°C提取2次，每次2h， 过滤，合并滤液，减压浓缩至40°C相对密度1. 15,得到多糖浓缩液； (2) 在步骤（1)的多糖浓缩液中加入体积分数98%乙醇至含醇量达到80%，静置过夜，取 底部沉淀，对所得沉淀物依次用沉淀物重量60倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤1次， 干燥，得到粗多糖； (3) 取步骤（2)的粗多糖0. 5g溶于IOmL水中，上样于HPD-600型大孔吸附树脂柱，并 以250mL水洗脱，流速为I.OmL/min，收集洗脱液，再减压浓缩至洗脱液原体积的1/2 ;加入 体积分数98%乙醇至含醇量达到80%，静置过夜，对所得沉淀物依次用沉淀物重量60倍的无 水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗涤1次，干燥，得到白屈菜多糖。6. -种如权利要求1所述的白屈菜多糖在制备增强免疫功能药物中的应用。7. -种如权利要求1所述的白屈菜多糖在制备增强免疫功能保健食品中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种从白屈菜中提取的白屈菜多糖及其应用，可有效解决白屈菜多糖的提取，并有效用于增强免疫力药物中的问题，其解决的技术方案是，将白屈菜药材粉末加水提取，过滤，减压浓缩得到多糖浓缩液；再加乙醇沉淀并洗涤得到粗多糖，最后上样树脂柱，洗脱液再次减压浓缩、加乙醇沉淀并洗涤得到白屈菜多糖。本发明从白屈菜中提取白屈菜多糖，原料为天然中药材，来源广泛，成本低廉。本发明的白屈菜多糖为灰褐色粉末，具有较强的增强机体免疫力的作用，应用于药物中，能够实现白屈菜在制备增强机体免疫力的药物和保健食品中的应用，开辟了白屈菜药材的应用新前景，具有很好的社会效益和经济效益，是中药上的创新。
【IPC分类】A23L1/30, C08B37/00, A23L1/09, A61P37/02
【公开号】CN104892789
【申请号】CN201510355723
【发明人】王彦志, 张 杰, 刘炯, 刘富岗, 杨云
【申请人】河南中医学院
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月24日
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