一种绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法及其应用
一种绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及烟用香精香料的制备领域，具体地说是一种绣球菌发酵物烟用提取物 的提取方法及其应用。
【背景技术】
[0002] 绣球菌为担子菌纲，绣球菌科真菌，又名绣球菇，海拔生长范围为2500-3700，主要 分布在黑龙江、吉林、河北、云南、陕西、四川、甘肃、西藏、广东、福建等地。绣球菌每百克含 蛋白质15. 58%，脂肪7. 95%，高分子多糖58%，甘露醇12%，碳水化合物5%，多种维生素 和多种氨基酸等营养成分，是一种高级滋补品，具有强精、补肾、生津、润肺、提神健脑，抗疲 劳的功能。其富含60%以上的高分子绣球葡聚糖，这种特殊成分是治疗癌症的首选药物，除 了治疗各种癌症、肿瘤而外，还具有提高人体的免疫功能，治疗心脑血管疾病、糖尿病、高血 压等功能，长期食用可降低胆固醇、降低血压、清除面部色斑、色素、雀斑、黄斑及嫩肤美容 的效果。目前对于绣球菌的研宄应用主要集中于食用和药用方面，对其发酵产物的提取应 用还未做深入研宄。
[0003] 香精香料常用于食品、化妆品、医药、洗涤剂等工业，香料可分为天然香料、天然 等同香料和人造香料3种。由于天然香料相比其他香料具有香味自然、持久、协调性好、单 一纯正，且避免重金属和有机物溶剂对人体的危害等优势，长期以来，一直备受人们的喜爱 和关注。近年来，天然香料的需求急剧增大，使得天然香料面临着动植物香料资源来源更加 紧缺。因此，寻找价廉、资源丰富、供应稳定的产香来源，成为天然香料开发研宄的迫切需 求。绣球菌香脆可口，回味无穷，独具风格，似茴香味，香味浓郁独特，具有制备天然香料的 潜在特性。绣球菌的野生资源随需求量不断增多逐渐面临枯竭，而人工栽培因产量小且不 稳定，在香料行业中的应用并不多见。深层发酵（Submerged Fermentation, SmF)技术是一 种快速获取药食用菌原料的生物技术，其生产周期短，成本低，便于操控管理更适合大规模 工业生产。近年来，对绣球菌的研宄大多集中于对其活性成分的功效研宄，而对于绣球菌的 香味成分研宄甚少。目前，尚未有有关将绣球菌深层发酵的发酵产物提取物用于烟用添加 剂的报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是根据现有技术提供一种绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法及 其应用，将该烟用提取物用于卷烟中不仅香味自然持久，协调性好，而且该提取物产量稳 定，可控性强。
[0005] 本发明是通过如下技术方案实现的：一种绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法， 其步骤包括：（1)先将绣球菌子实体接种得到绣球菌接种物，然后按绣球菌接种物与发酵 培养基的体积比5-15 %，将绣球菌接种物接种于发酵培养基，在温度25-30°C，通气量为 0. 5-1. 5dm3/min，转速120-170r/min条件下，培养3-7天，进行深层发酵获得绣球菌发酵混 合物；
[0006] (2)将步骤（1)中的绣球菌发酵混合物用质量浓度为90-95%的乙醇回流提取后 过滤，并将滤液浓缩得到所述绣球菌发酵物烟用提取物。
[0007] 优选的，所述步骤（2)中的加入的乙醇量为绣球菌发酵混合物质量的0. 5-2倍，回 流温度为85_90°C，回流提取1-3小时。
[0008] 优选的，所述步骤（1)中绣球菌子实体接种得到绣球菌接种物是指，将绣球菌子 实体在无菌条件下从菌柄部位剪取组织片段，接种于分离琼脂平板，在温度28-30°C下静置 培养5-7天至菌丝长满分离琼脂平板后，在无菌条件下挑取带有菌丝的琼脂10-20块，接种 至种子培养基，在温度26-28°C，摇床转速为150r/min条件下，培养5-7天，得到所述绣球菌 接种物。
[0009] 更优选的，所述分离琼脂平板的配方为：土豆：200-300g/L，蔗糖：15-25g/L，琼脂 粉：20-30g/L。
[0010] 更优选的，所述种子培养基的配方为：土豆：200-300g/L，蔗糖：15-25g/L。
[0011] 更优选的，所述发酵培养基的配方为：土豆：200-300g/L，蔗糖20-40g/L，磷酸二 氢钾：0· 5-1. 5g/L，亚硒酸钠：1-1. 5g/L。
[0012] 本发明的另一个目的是提供上述绣球菌发酵物烟用提取物的应用，其特征在于： 将绣球菌发酵物烟用提取物按照重组烟叶重量的0. 01-0. 6%的比例添加到重组烟叶中。
[0013] 本发明将绣球菌的深层发酵物提取后用于卷烟的香精香料中，不仅天然无毒，产 量稳定，可控性强，不受季节、气候、病害等因素的影响，而且生产周期短，成本低廉。同时， 制备的烟用香精香料香味更加自然、持久，具有更好的协调性，可与其他烟用香精香料协调 配合增香。本发明工艺简单，成本低，具有很强的实用性。
【具体实施方式】
[0014] 以下通过具体实施例来进一步说明本发明：
[0015] 实施例1
[0016] (1)将绣球菌子实体在无菌条件下从菌柄部位剪取小块组织片段，接种于分离琼 脂平板，在温度28°C静置培养7天，待菌丝长满平板后，在无菌条件下用接种钩挑取带有菌 丝的琼脂10块，接种至种子培养基，在温度28°C，摇床转速150r/min条件下，培养5天，获 得绣球菌接种物。按体积比10%将绣球菌接种物接种于发酵培养基，在温度30°C，通气量 为I. 0dm3/min，转速150r/min条件下，培养7天，进行深层发酵获得绣球菌发酵混合物；
[0017] (2)按体积比2 : 1将绣球菌发酵产物和质量浓度为95%的乙醇混合均匀加入蒸 馏装置中，于90°C温度下进行蒸馏回流萃取lh，通过过滤离心，得到提取液溶液，然后减压 离心浓缩得到所述棕色透明香料浸膏绣球菌发酵物烟用提取物1。
[0018] 实施例2
[0019] (1)将绣球菌子实体在无菌条件下从菌柄部位剪取小块组织片段，接种于分离琼 脂平板，在温度30°C静置培养5天，待菌丝长满平板后，在无菌条件下用接种钩挑取带有菌 丝的琼脂15块，接种至种子培养基，在温度26°C，摇床转速150r/min条件下，培养6天，获 得绣球菌接种物。按体积比15%将绣球菌接种物接种于发酵培养基，在温度28°C，通气量 为I. 5dm3/min，转速120r/min条件下，培养5天，进行深层发酵获得绣球菌发酵混合物；
[0020] (2)按体积比0. 5 : 1将绣球菌发酵产物和质量浓度为90%的乙醇混合均匀加入 蒸馏装置中，于88°C温度下进行蒸馏回流萃取2h，通过过滤离心，得到提取液溶液，然后减 压离心浓缩得到所述棕色透明香料浸膏绣球菌发酵物烟用提取物2。
[0021] 实施例3
[0022] (1)将绣球菌子实体在无菌条件下从菌柄部位剪取小块组织片段，接种于分离琼 脂平板，在温度29°C静置培养6天，待菌丝长满平板后，在无菌条件下用接种钩挑取带有菌 丝的琼脂20块，接种至种子培养基，在温度27°C，摇床转速150r/min条件下，培养7天，获 得绣球菌接种物。按体积比5%将绣球菌接种物接种于发酵培养基，在温度25°C，通气量为 0. 5dm3/min，转 速170r/min条件下，培养3天，进行深层发酵获得绣球菌发酵混合物；
[0023] (2)按体积比I : 1将绣球菌发酵产物和质量浓度为92%的乙醇混合均匀加入 蒸馏装置中，于85°C温度下进行蒸馏回流萃取3h，通过过滤离心，得到提取液溶液，然后减 压离心浓缩得到所述棕色透明香料浸膏绣球菌发酵物烟用提取物3。
[0024] 上述实施例1-3中，所述分离琼脂平板配方为：土豆：200-300g/L，蔗糖：15-25g/ L，琼脂粉：20-30g/L，在121°C灭菌15min后，在无菌条件下倒入无菌平皿。
[0025] 所述种子培养基配方为：土豆：200-300g/L，鹿糖：15-25g/L，通过双层纱布过滤 土豆蒸煮液得到浸出液，在121°C高温高压灭菌15min。
[0026] 所述发酵培养基的配方为：土豆200-300g/L，加入蒸馏水水1500ml，沸水蒸煮 30分钟，双层纱布过滤土豆蒸煮液，蔗糖20-40g/L，磷酸二氢钾：0. 5-1. 5g/L，亚硒酸钠 1-1. 5g/L，在121°C高温高压灭菌15min。
[0027] 将实施例1中的绣球菌发酵物烟用提取物用美国Agi lent公司产（6890N/5975C) 气相质谱联用仪进行分析，分析条件如下，谱图如图1所示：
[0028] 色谱柱：DB-WAX 毛细管柱（30mX250 μπιΧΟ· 25 μπι);载气：He ;流量：1. OmL/min ; 分流比：3 : 1;进样量：lyL;升温程序：进样口温度250°C，起始温度40°C，停留lmin，以 10°C /min升至250°C，最后停留15min。EI电离能量：70eV ;离子源温度：250°C;质谱接口 温度：280°C ;扫描质量范围：40-500m/z。
[0029] 采用NISTll检索谱库法定性，峰面积归一化法定量。
[0030] 图1为绣球菌发酵物烟用提取物的GC-MS图，出峰保留时间及峰面积结果如表1 所示。从中共鉴定出来36种挥发性化合物，其中醛酮类占5. 866%，酯类（41. 5% )、芳香 族类（11.8% )、烯烃类（14. 2% )、酸类占1.636%，醇类占3. 489,其他占2. 503%。其中 含量比较高的有：月桂酸乙酯（1.762% )、肉豆蔻酸乙酯（1.842% )、4_甲基，4-戊烯基笨 (4. 909)、棕榈酸乙酯（0· 958% )、13-甲基烷酸乙酯（2. 298% )、1，2, 3, 4-四氢 5, 6, 7, 8-四 甲基萘（1. 498)、棕榈酸甲酯（5. 743)、硬脂酸乙酯（8. 126)、油酸乙酯（3. 338)、亚油酸乙酯 (10. 789)、9, 12, 15-三十八碳酸乙酯（1. 879)、棕榈酸（1. 187)。
[0031] 绣球菌发酵物烟用提取物通过GC-MS检测，提取得到的物质共36种，酯类有15 种，烯烃类13种，芳香族类有8种，酚类有3种，醇类有4种，醛酮类有5类，脂肪酸类有4 类，烷烃类有2类，醛类有1类。
[0032] 绣球菌发酵物烟用提取物中一些挥发性混合成分，如醛、酮、酸和酯类，可对卷烟 风味中起着重要的酸碱调和作用，其中醛类和酮类化合物是烟草中重要的香味物质，一般 具有愉快的香气，可赋予烟草坚果、酚香、酒香的香味，醛类还是一种很强的可与其它物质 相重叠的风味效应，可使香烟香味更加浓郁纯正；芳香类具有苦杏仁的芳香气味，烯酮类具 有浓厚的玫瑰叶香味，与烟草香味协调和合，从而增强烟草香味的自然风味；外加上其酯 类、醇类和烷烃类伴有的果香风味，从而使卷烟香味更加自然、浓郁、多样。因此，绣球菌发 酵提取物香味成分丰富多样，具有极好的香烟增香功效。
[0033]
[0034]
[0035] 表1绣球菌发酵物烟用提取物A的GC-MS检测结果。
【主权项】
1. 一种绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法，其步骤包括：（1)先将绣球菌子实体接 种得到绣球菌接种物，然后按绣球菌接种物与发酵培养基的体积比5-15%，将绣球菌接种 物接种于发酵培养基，在温度25-30°C，通气量为0. 5-1. 5dm3/min，转速120-170r/min条件 下，培养3-7天，进行深层发酵获得绣球菌发酵混合物； (2)将步骤（1)中的绣球菌发酵混合物用质量浓度为90-95%的乙醇回流提取后过滤， 并将滤液浓缩得到所述绣球菌发酵物烟用提取物。2. 根据权利要求1所述绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法，其特征在于：所述步骤 (2)中的加入的乙醇量为绣球菌发酵混合物质量的0. 5-2倍，回流温度为85-90°C，回流提 取1-3小时。3. 根据权利要求1所述绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法，其特征在于：所述步骤 (1)中绣球菌子实体接种得到绣球菌接种物是指，将绣球菌子实体在无菌条件下从菌柄部 位剪取组织片段，接种于分离琼脂平板，在温度28-30°C下静置培养5-7天至菌丝长满分 离琼脂平板后，在无菌条件下挑取带有菌丝的琼脂10-20块，接种至种子培养基，在温度 26-28°C，摇床转速为150r/min条件下，培养5-7天，得到所述绣球菌接种物。4. 根据权利要求3所述绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法，其特征在于：所述分离 琼脂平板的配方为：土豆：200-300g/L，蔗糖：15-25g/L，琼脂粉：20-30g/L。5. 根据权利要求3所述绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法，其特征在于：所述种子 培养基的配方为：土豆：200-300g/L，蔗糖：15-25g/L。6. 根据权利要求1所述绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法，其特征在于：所述发酵 培养基的配方为：土豆：200-300g/L，蔗糖20-40g/L，磷酸二氢钾：0. 5-1. 5g/L，亚硒酸钠： 1-1. 5g/L〇7. -种权利要求1-6中任一项所述绣球菌发酵物烟用提取物的应用，其特征在于：将 绣球菌发酵物烟用提取物按照重组烟叶重量的0. 01-0. 6%的比例添加到重组烟叶中。
【专利摘要】本发明提供了一种绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法，其步骤包括：(1)先将绣球菌子实体接种得到绣球菌接种物，然后将绣球菌接种物接种于发酵培养基，进行深层发酵获得绣球菌发酵混合物；(2)将步骤(1)中的绣球菌发酵混合物用质量浓度为90-95％的乙醇回流提取后过滤，并将滤液浓缩得到所述绣球菌发酵物烟用提取物。本发明将绣球菌的深层发酵物提取后用于卷烟的香精香料中，不仅天然无毒，产量稳定，可控性强，不受季节、气候、病害等因素的影响，而且生产周期短，成本低廉。同时，制备的烟用香精香料香味更加自然、持久，具有更好的协调性，可与其他烟用香精香料协调配合增香。本发明工艺简单，成本低，具有很强的实用性。
【IPC分类】A24B15/20, C12R1/645, C12P1/02
【公开号】CN104894167
【申请号】CN201510340435
【发明人】郭国宁, 刘祥浩, 岳海波
【申请人】湖北中烟工业有限责任公司, 黄鹤楼科技园（集团）有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月18日
【技术领域】
[0001] 本发明涉及烟用香精香料的制备领域，具体地说是一种绣球菌发酵物烟用提取物 的提取方法及其应用。
【背景技术】
[0002] 绣球菌为担子菌纲，绣球菌科真菌，又名绣球菇，海拔生长范围为2500-3700，主要 分布在黑龙江、吉林、河北、云南、陕西、四川、甘肃、西藏、广东、福建等地。绣球菌每百克含 蛋白质15. 58%，脂肪7. 95%，高分子多糖58%，甘露醇12%，碳水化合物5%，多种维生素 和多种氨基酸等营养成分，是一种高级滋补品，具有强精、补肾、生津、润肺、提神健脑，抗疲 劳的功能。其富含60%以上的高分子绣球葡聚糖，这种特殊成分是治疗癌症的首选药物，除 了治疗各种癌症、肿瘤而外，还具有提高人体的免疫功能，治疗心脑血管疾病、糖尿病、高血 压等功能，长期食用可降低胆固醇、降低血压、清除面部色斑、色素、雀斑、黄斑及嫩肤美容 的效果。目前对于绣球菌的研宄应用主要集中于食用和药用方面，对其发酵产物的提取应 用还未做深入研宄。
[0003] 香精香料常用于食品、化妆品、医药、洗涤剂等工业，香料可分为天然香料、天然 等同香料和人造香料3种。由于天然香料相比其他香料具有香味自然、持久、协调性好、单 一纯正，且避免重金属和有机物溶剂对人体的危害等优势，长期以来，一直备受人们的喜爱 和关注。近年来，天然香料的需求急剧增大，使得天然香料面临着动植物香料资源来源更加 紧缺。因此，寻找价廉、资源丰富、供应稳定的产香来源，成为天然香料开发研宄的迫切需 求。绣球菌香脆可口，回味无穷，独具风格，似茴香味，香味浓郁独特，具有制备天然香料的 潜在特性。绣球菌的野生资源随需求量不断增多逐渐面临枯竭，而人工栽培因产量小且不 稳定，在香料行业中的应用并不多见。深层发酵（Submerged Fermentation, SmF)技术是一 种快速获取药食用菌原料的生物技术，其生产周期短，成本低，便于操控管理更适合大规模 工业生产。近年来，对绣球菌的研宄大多集中于对其活性成分的功效研宄，而对于绣球菌的 香味成分研宄甚少。目前，尚未有有关将绣球菌深层发酵的发酵产物提取物用于烟用添加 剂的报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是根据现有技术提供一种绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法及 其应用，将该烟用提取物用于卷烟中不仅香味自然持久，协调性好，而且该提取物产量稳 定，可控性强。
[0005] 本发明是通过如下技术方案实现的：一种绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法， 其步骤包括：（1)先将绣球菌子实体接种得到绣球菌接种物，然后按绣球菌接种物与发酵 培养基的体积比5-15 %，将绣球菌接种物接种于发酵培养基，在温度25-30°C，通气量为 0. 5-1. 5dm3/min，转速120-170r/min条件下，培养3-7天，进行深层发酵获得绣球菌发酵混 合物；
[0006] (2)将步骤（1)中的绣球菌发酵混合物用质量浓度为90-95%的乙醇回流提取后 过滤，并将滤液浓缩得到所述绣球菌发酵物烟用提取物。
[0007] 优选的，所述步骤（2)中的加入的乙醇量为绣球菌发酵混合物质量的0. 5-2倍，回 流温度为85_90°C，回流提取1-3小时。
[0008] 优选的，所述步骤（1)中绣球菌子实体接种得到绣球菌接种物是指，将绣球菌子 实体在无菌条件下从菌柄部位剪取组织片段，接种于分离琼脂平板，在温度28-30°C下静置 培养5-7天至菌丝长满分离琼脂平板后，在无菌条件下挑取带有菌丝的琼脂10-20块，接种 至种子培养基，在温度26-28°C，摇床转速为150r/min条件下，培养5-7天，得到所述绣球菌 接种物。
[0009] 更优选的，所述分离琼脂平板的配方为：土豆：200-300g/L，蔗糖：15-25g/L，琼脂 粉：20-30g/L。
[0010] 更优选的，所述种子培养基的配方为：土豆：200-300g/L，蔗糖：15-25g/L。
[0011] 更优选的，所述发酵培养基的配方为：土豆：200-300g/L，蔗糖20-40g/L，磷酸二 氢钾：0· 5-1. 5g/L，亚硒酸钠：1-1. 5g/L。
[0012] 本发明的另一个目的是提供上述绣球菌发酵物烟用提取物的应用，其特征在于： 将绣球菌发酵物烟用提取物按照重组烟叶重量的0. 01-0. 6%的比例添加到重组烟叶中。
[0013] 本发明将绣球菌的深层发酵物提取后用于卷烟的香精香料中，不仅天然无毒，产 量稳定，可控性强，不受季节、气候、病害等因素的影响，而且生产周期短，成本低廉。同时， 制备的烟用香精香料香味更加自然、持久，具有更好的协调性，可与其他烟用香精香料协调 配合增香。本发明工艺简单，成本低，具有很强的实用性。
【具体实施方式】
[0014] 以下通过具体实施例来进一步说明本发明：
[0015] 实施例1
[0016] (1)将绣球菌子实体在无菌条件下从菌柄部位剪取小块组织片段，接种于分离琼 脂平板，在温度28°C静置培养7天，待菌丝长满平板后，在无菌条件下用接种钩挑取带有菌 丝的琼脂10块，接种至种子培养基，在温度28°C，摇床转速150r/min条件下，培养5天，获 得绣球菌接种物。按体积比10%将绣球菌接种物接种于发酵培养基，在温度30°C，通气量 为I. 0dm3/min，转速150r/min条件下，培养7天，进行深层发酵获得绣球菌发酵混合物；
[0017] (2)按体积比2 : 1将绣球菌发酵产物和质量浓度为95%的乙醇混合均匀加入蒸 馏装置中，于90°C温度下进行蒸馏回流萃取lh，通过过滤离心，得到提取液溶液，然后减压 离心浓缩得到所述棕色透明香料浸膏绣球菌发酵物烟用提取物1。
[0018] 实施例2
[0019] (1)将绣球菌子实体在无菌条件下从菌柄部位剪取小块组织片段，接种于分离琼 脂平板，在温度30°C静置培养5天，待菌丝长满平板后，在无菌条件下用接种钩挑取带有菌 丝的琼脂15块，接种至种子培养基，在温度26°C，摇床转速150r/min条件下，培养6天，获 得绣球菌接种物。按体积比15%将绣球菌接种物接种于发酵培养基，在温度28°C，通气量 为I. 5dm3/min，转速120r/min条件下，培养5天，进行深层发酵获得绣球菌发酵混合物；
[0020] (2)按体积比0. 5 : 1将绣球菌发酵产物和质量浓度为90%的乙醇混合均匀加入 蒸馏装置中，于88°C温度下进行蒸馏回流萃取2h，通过过滤离心，得到提取液溶液，然后减 压离心浓缩得到所述棕色透明香料浸膏绣球菌发酵物烟用提取物2。
[0021] 实施例3
[0022] (1)将绣球菌子实体在无菌条件下从菌柄部位剪取小块组织片段，接种于分离琼 脂平板，在温度29°C静置培养6天，待菌丝长满平板后，在无菌条件下用接种钩挑取带有菌 丝的琼脂20块，接种至种子培养基，在温度27°C，摇床转速150r/min条件下，培养7天，获 得绣球菌接种物。按体积比5%将绣球菌接种物接种于发酵培养基，在温度25°C，通气量为 0. 5dm3/min，转 速170r/min条件下，培养3天，进行深层发酵获得绣球菌发酵混合物；
[0023] (2)按体积比I : 1将绣球菌发酵产物和质量浓度为92%的乙醇混合均匀加入 蒸馏装置中，于85°C温度下进行蒸馏回流萃取3h，通过过滤离心，得到提取液溶液，然后减 压离心浓缩得到所述棕色透明香料浸膏绣球菌发酵物烟用提取物3。
[0024] 上述实施例1-3中，所述分离琼脂平板配方为：土豆：200-300g/L，蔗糖：15-25g/ L，琼脂粉：20-30g/L，在121°C灭菌15min后，在无菌条件下倒入无菌平皿。
[0025] 所述种子培养基配方为：土豆：200-300g/L，鹿糖：15-25g/L，通过双层纱布过滤 土豆蒸煮液得到浸出液，在121°C高温高压灭菌15min。
[0026] 所述发酵培养基的配方为：土豆200-300g/L，加入蒸馏水水1500ml，沸水蒸煮 30分钟，双层纱布过滤土豆蒸煮液，蔗糖20-40g/L，磷酸二氢钾：0. 5-1. 5g/L，亚硒酸钠 1-1. 5g/L，在121°C高温高压灭菌15min。
[0027] 将实施例1中的绣球菌发酵物烟用提取物用美国Agi lent公司产（6890N/5975C) 气相质谱联用仪进行分析，分析条件如下，谱图如图1所示：
[0028] 色谱柱：DB-WAX 毛细管柱（30mX250 μπιΧΟ· 25 μπι);载气：He ;流量：1. OmL/min ; 分流比：3 : 1;进样量：lyL;升温程序：进样口温度250°C，起始温度40°C，停留lmin，以 10°C /min升至250°C，最后停留15min。EI电离能量：70eV ;离子源温度：250°C;质谱接口 温度：280°C ;扫描质量范围：40-500m/z。
[0029] 采用NISTll检索谱库法定性，峰面积归一化法定量。
[0030] 图1为绣球菌发酵物烟用提取物的GC-MS图，出峰保留时间及峰面积结果如表1 所示。从中共鉴定出来36种挥发性化合物，其中醛酮类占5. 866%，酯类（41. 5% )、芳香 族类（11.8% )、烯烃类（14. 2% )、酸类占1.636%，醇类占3. 489,其他占2. 503%。其中 含量比较高的有：月桂酸乙酯（1.762% )、肉豆蔻酸乙酯（1.842% )、4_甲基，4-戊烯基笨 (4. 909)、棕榈酸乙酯（0· 958% )、13-甲基烷酸乙酯（2. 298% )、1，2, 3, 4-四氢 5, 6, 7, 8-四 甲基萘（1. 498)、棕榈酸甲酯（5. 743)、硬脂酸乙酯（8. 126)、油酸乙酯（3. 338)、亚油酸乙酯 (10. 789)、9, 12, 15-三十八碳酸乙酯（1. 879)、棕榈酸（1. 187)。
[0031] 绣球菌发酵物烟用提取物通过GC-MS检测，提取得到的物质共36种，酯类有15 种，烯烃类13种，芳香族类有8种，酚类有3种，醇类有4种，醛酮类有5类，脂肪酸类有4 类，烷烃类有2类，醛类有1类。
[0032] 绣球菌发酵物烟用提取物中一些挥发性混合成分，如醛、酮、酸和酯类，可对卷烟 风味中起着重要的酸碱调和作用，其中醛类和酮类化合物是烟草中重要的香味物质，一般 具有愉快的香气，可赋予烟草坚果、酚香、酒香的香味，醛类还是一种很强的可与其它物质 相重叠的风味效应，可使香烟香味更加浓郁纯正；芳香类具有苦杏仁的芳香气味，烯酮类具 有浓厚的玫瑰叶香味，与烟草香味协调和合，从而增强烟草香味的自然风味；外加上其酯 类、醇类和烷烃类伴有的果香风味，从而使卷烟香味更加自然、浓郁、多样。因此，绣球菌发 酵提取物香味成分丰富多样，具有极好的香烟增香功效。
[0033]
[0034]
[0035] 表1绣球菌发酵物烟用提取物A的GC-MS检测结果。
【主权项】
1. 一种绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法，其步骤包括：（1)先将绣球菌子实体接 种得到绣球菌接种物，然后按绣球菌接种物与发酵培养基的体积比5-15%，将绣球菌接种 物接种于发酵培养基，在温度25-30°C，通气量为0. 5-1. 5dm3/min，转速120-170r/min条件 下，培养3-7天，进行深层发酵获得绣球菌发酵混合物； (2)将步骤（1)中的绣球菌发酵混合物用质量浓度为90-95%的乙醇回流提取后过滤， 并将滤液浓缩得到所述绣球菌发酵物烟用提取物。2. 根据权利要求1所述绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法，其特征在于：所述步骤 (2)中的加入的乙醇量为绣球菌发酵混合物质量的0. 5-2倍，回流温度为85-90°C，回流提 取1-3小时。3. 根据权利要求1所述绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法，其特征在于：所述步骤 (1)中绣球菌子实体接种得到绣球菌接种物是指，将绣球菌子实体在无菌条件下从菌柄部 位剪取组织片段，接种于分离琼脂平板，在温度28-30°C下静置培养5-7天至菌丝长满分 离琼脂平板后，在无菌条件下挑取带有菌丝的琼脂10-20块，接种至种子培养基，在温度 26-28°C，摇床转速为150r/min条件下，培养5-7天，得到所述绣球菌接种物。4. 根据权利要求3所述绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法，其特征在于：所述分离 琼脂平板的配方为：土豆：200-300g/L，蔗糖：15-25g/L，琼脂粉：20-30g/L。5. 根据权利要求3所述绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法，其特征在于：所述种子 培养基的配方为：土豆：200-300g/L，蔗糖：15-25g/L。6. 根据权利要求1所述绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法，其特征在于：所述发酵 培养基的配方为：土豆：200-300g/L，蔗糖20-40g/L，磷酸二氢钾：0. 5-1. 5g/L，亚硒酸钠： 1-1. 5g/L〇7. -种权利要求1-6中任一项所述绣球菌发酵物烟用提取物的应用，其特征在于：将 绣球菌发酵物烟用提取物按照重组烟叶重量的0. 01-0. 6%的比例添加到重组烟叶中。
【专利摘要】本发明提供了一种绣球菌发酵物烟用提取物的提取方法，其步骤包括：(1)先将绣球菌子实体接种得到绣球菌接种物，然后将绣球菌接种物接种于发酵培养基，进行深层发酵获得绣球菌发酵混合物；(2)将步骤(1)中的绣球菌发酵混合物用质量浓度为90-95％的乙醇回流提取后过滤，并将滤液浓缩得到所述绣球菌发酵物烟用提取物。本发明将绣球菌的深层发酵物提取后用于卷烟的香精香料中，不仅天然无毒，产量稳定，可控性强，不受季节、气候、病害等因素的影响，而且生产周期短，成本低廉。同时，制备的烟用香精香料香味更加自然、持久，具有更好的协调性，可与其他烟用香精香料协调配合增香。本发明工艺简单，成本低，具有很强的实用性。
【IPC分类】A24B15/20, C12R1/645, C12P1/02
【公开号】CN104894167
【申请号】CN201510340435
【发明人】郭国宁, 刘祥浩, 岳海波
【申请人】湖北中烟工业有限责任公司, 黄鹤楼科技园（集团）有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月18日
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