一种高效液相色谱法测定茶油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法
一种高效液相色谱法测定茶油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种高效液相色谱法测定茶油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，所属
技术领域：二、生物与新医药技术（七）现代农业技术4、农产品精深加工与现代储运：农产 品质量安全评价、快速检测、全程质量控制等技术。
【背景技术】
[0002]HPLC是一项高压、高效、高灵敏度的分离技术，可用于分离分析高沸点、相对分子 量大、热稳定性差的有机化合物，广泛应用于化学、化工、高分子、生物、食品、医药等领域。
[0003] 齐墩果酸、熊果酸主要存在于茶油及其油脚中，为五环三萜类化合物；性质相近， 难以分离；是一种活性成分；有保肝、消炎、抗肿瘤、降血脂、增强免疫和抑制免疫（免疫双 向调解作用）等作用。
[0004] 目前这2种物质还只能从植物中提取，无法化学合成；检测方法有分光光度法、薄 层扫描法和高效液相色谱法，前者通常采用显色剂显色后测定，由于他们性质相近，分光光 度法通常测得其三萜类总量，方法缺乏专属性；而普通的薄层色谱很难使OA和UA分离；相 比较而言，HPLC较容易实施两者的分离，且紫外检测相对于蒸发光散射检测有较好的重现 性。在现有可查范围内，利用HPLC同时测定茶油中齐墩果酸、熊果酸未见报道，本发明采用 反相高效液相色谱法二极管阵列检测器测定了茶油中的齐墩果酸和熊果酸含量，旨在为评 价茶油的质量提供科学依据。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题在于提供一种高效液相色谱法测定茶油中齐墩果酸、 熊果酸含量的方法，从而准确测定其含量，方法操作简单、灵敏度高、重现性好。
[0006] 为了实现上述目的本发明采用如下技术方案：
[0007] -种高效液相色谱法测定茶油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，其特征在于包括 以下步骤：
[0008] (1)对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品10. 20mg、熊果酸对照品8. 54mg， 分别置l〇ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得齐墩果酸、熊果酸对照品贮备 液。
[0009] (2)样品溶液的处理：取茶油样品约0. 5-1. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密 加甲醇25ml，密塞，称定重量，浸渍2h，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取 续滤液，即得；
[0010] (3)将滤液过0. 40-0. 50ym微孔滤膜后，在实验色谱条件下进行高效液相色谱 法测定，得测定数值；所述的实验色谱条件为：色谱柱：C18柱，250X4. 6mm，5ym;流动相： 265 %甲醇-35 %水-0. 1 %冰乙酸-0. 05 %三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰 乙酸0. 05mL和三乙胺0. 05mL配置；紫外检测器的检测波长：210nm;流动相流速为0. 6mL/ min，柱温20°C，进样体积为20yL;
[0011] ⑷按照外标法计算茶油中齐墩果酸、熊果酸的含量。
[0012] 所述的高效液相色谱法测定茶油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，其特征在于： 所述的实验色谱条件为：色谱柱：C18柱，250X4. 6mm，5ym;流动相：265 %甲醇-35% 水-0.1%冰乙酸-0.05%三乙胺，其中，流动相由甲醇2651^、水351^、冰乙酸0.0511^和三 乙胺0. 05mL配置；紫外检测器的检测波长：210nm;流动相流速为0. 6mL/min，柱温20°C，进 样体积为20yL。
[0013] 本发明的有益效果：本发明可准确测定茶油中齐墩果酸、熊果酸的含量，方法操作 简单、灵敏度高、重现性好。
【附图说明】
[0014] 图1本发明实施例2齐墩果酸对照品的线性图。
[0015] 图2本发明实施例2熊果酸对照品的线性图。
[0016] 图3本发明实施例2对照品中齐墩果酸、熊果酸的色谱图，a齐墩果酸、b熊果酸。
[0017] 图4本发明实施例2茶油中齐墩果酸、熊果酸的色谱图，a齐墩果酸、b熊果酸。
【具体实施方式】
[0018] 实施例1 :高效液相色谱法测定茶油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，包括以下步 骤：
[0019] (1)对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品10. 20mg、熊果酸对照品8. 54mg， 分别置l〇ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得齐墩果酸、熊果酸对照品贮备 液。
[0020] (2)样品溶液的处理：取茶油样品约0. 5-1. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密 加甲醇25ml，密塞，称定重量，浸渍2h，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取 续滤液，即得；
[0021] (3)将滤液过0. 40-0. 50ym微孔滤膜后，在实验色谱条件下进行高效液相色谱 法测定，得测定数值；所述的实验色谱条件为：色谱柱：C18柱，250X4. 6mm，5ym;流动相： 265 %甲醇-35 %水-0. 1 %冰乙酸-0. 05 %三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰 乙酸0. 05mL和三乙胺0. 05mL配置；紫外检测器的检测波长：210nm;流动相流速为0. 6mL/ min，柱温20°C，进样体积为20yL;
[0022] (4)按照外标法计算茶油中齐墩果酸、熊果酸的含量。
[0023] 所述的实验色谱条件为：色谱柱：(：18柱，250\4.6111111，5錢 ；流动相：265 %甲 醇-35 %水-0. 1 %冰乙酸-0. 05 %三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸 0. 05mL和三乙胺0. 05mL配置；紫外检测器的检测波长：210nm;流动相流速为0. 6mL/min， 柱温20°C，进样体积为20yL。
[0024] 实施例2 :本发明的具体实验数据：
[0025] 1仪器与试剂
[0026]仪器：1100高效液相色谱仪（包括G1311A泵、G1322脱气机、G1313AZ自动进样 器、G1313A柱温箱、G1315 DAD;Agilent 1100 ChemStation) ;BP221D 电子天平（Sartorius 公司）；KQ-250DB数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；石英亚沸高纯水提取器 (江苏金城教学仪器厂）。
[0027] 试剂：齐墩果酸、熊果酸对照品（110709-200505、110742-200516,供含量测定用） 由中国药 品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯，茶油（岳西县光圣茶油有限公司菊盛牌 野生茶油）其他试剂均为分析纯。
[0028] 流动相配制：分别按照265mL甲醇、35mL水、0. 05mL冰乙酸和0. 05mL三乙胺比例 配置流动相。
[0029] 齐墩果酸、熊果酸标准溶液：精密称取齐墩果酸对照品10. 20mg、熊果酸对照品 8. 54mg，分别置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得齐墩果酸、熊果酸对照 品备液。
[0030] 样品溶液的处理：取茶油样品约0. 5-1. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲 醇25ml，密塞，称定重量，浸渍2h，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤 液，即得，过0. 45ym微孔滤膜后，在实验设定条件下进行HPLC测定。
[0031] 2含量测定方法的建立
[0032] 2. 1波长选择
[0033] 齐墩果酸与熊果酸在206nm处有最大吸收，本实验采用DAD检测器，对同一茶油供 试液在205、210、215和220nm处进行多波长同时检测，结果显示除205nm有溶剂干扰和末 端吸收外，其它波长处分离均较为理想，但215nm和220nm均较210nm波长处响应强度低， 检测灵敏度低，故本实验采用210nm为检测波长。
[0034] 2. 2流动相的选择
[0035] 对甲醇-水、甲醇-水-磷酸、甲醇-水-冰乙酸、甲醇-乙腈-水、甲醇_水-冰 乙酸-三乙胺等多个流动相系统进行考察，通过配比调整，发现甲醇-水-冰乙酸-三乙胺 (265 : 35 : 0.1 : 0.05)在确定的色谱系统中容易获得满意且稳定的分离结果；流速减 慢利于分离，本实验流速为0. 6ml/min。性能参数见表1。
[0036] 表1甲醇-水-冰乙酸-三乙胺色谱系统性能参数
[0038] 2. 3定性试验
[0039] 利用相对保留时间法及添加标准物质法定性。对照标准溶液、加标样品溶液和样 品溶液在相同的色谱条件下的色谱图和相对保留时间。实验结果表明，三种溶液中齐墩果 酸、熊果酸的出峰时间是一致的。
[0040] 2. 4标准曲线和相关系数
[0041] 精密量取齐墩果酸对照品贮备液0. 04ml、0. 22ml、0. 42ml、0. 62ml、0. 82ml，熊果酸 对照品贮备液0. 05ml、0. 28ml、0. 52ml、0. 80ml、l. 00ml，分别置5个10ml量瓶中，加甲醇稀 释至刻度，摇匀，即得齐墩果酸和熊果酸混合对照品溶液系列。分别精密吸取各混合对照 品溶液20yl，注入液相色谱仪，按色谱条件下的方法测定。数据见表2、3。以色谱峰面积 (y)为纵坐标，对照品浓度（x，mg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为齐墩果酸：y =16782. 3x+2. 17(r= 0? 9998);熊果酸：y= 15682.Ox+11. 58(r= 0? 9994)。由表可见， 齐墩果酸进样量在〇. 162~3. 31yg，熊果酸进样量在0. 195~3. 91yg之间呈现良好的线 性关系。线性见图1、2。
[0042] 2. 5对照品、样品的测定及重复性试验
[0043] 取上述经处理的对照品溶液及样品溶液，依照上述的色谱条件，将样品打入高效 液相色谱仪中，其色谱图见附图3、4。
[0044] 进样6次后，根据色谱图，记录实验数据，其进样结果：茶油中齐墩果酸、熊果酸的 平均含量分别为：〇. 281 %，0.438% ;RSD分别为1.07%，1.31 %。
[0045] 2. 6稳定性试验
[0046] 取同一茶油样品依照上述处理方法，制取样品溶液，分别在0,4,8,12, 24h进样测 定，峰面积的RSD为1. 05 %，结果表明样品溶液中齐墩果酸、熊果酸在24H内含量稳定。
[0047] 实验结果表明：本发明对测定齐墩果酸、熊果酸准确可靠，重现性好，可用于茶油 中齐墩果酸、熊果酸含量的测定。
[0048] 表2齐墩果酸对照品标准曲线数据表
[0050] 表3熊果酸对照品标准曲线数据表
【主权项】
1. 一种高效液相色谱法测定茶油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，其特征在于包括以 下步骤： (1) 对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品10. 20mg、熊果酸对照品8. 54mg，分 别置IOml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得齐墩果酸、熊果酸对照品贮备液。 (2) 样品溶液的处理：取茶油样品约0. 5-1. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲 醇25ml，密塞，称定重量，浸渍2h，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤 液，即得； (3)将滤液过0. 40-0. 50 y m微孔滤膜后，在实验色谱条件下进行高效液相色谱法测 定，得测定数值；所述的实验色谱条件为：色谱柱：C18柱，250X4. 6mm，5 ym ;流动相：265% 甲醇-35%水-0. 1%冰乙酸-0. 05%三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸 0. 05mL和三乙胺0. 05mL配置；紫外检测器的检测波长：210nm ;流动相流速为0. 6mL/min， 柱温20°C，进样体积为20 y L ; (4) 按照外标法计算茶油中齐墩果酸、熊果酸的含量。
【专利摘要】本发明公开了一种茶油中齐墩果酸和熊果酸的含量测定方法，其主要是通过采用反相高效液相色谱法，其色谱条件为：a.色谱柱：C18柱，250×4.6mm，5μm；b.流动相组成：265％甲醇-35％水-0.1％冰乙酸-0.05％三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸0.05mL和三乙胺0.05mL配置；c.所用紫外检测器的检测波长：210nm；d.流速：0.6mL/min，进样体积：20μL，柱温：20℃；样品溶液的处理：取茶油样品约0.5-1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25ml，密塞，称定重量，浸渍2h，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。为有效控制其质量，本发明方法灵敏、高效、准确、稳定，可有效控制茶油中齐墩果酸和熊果酸的含量。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN104897800
【申请号】CN201510189069
【发明人】查孝柱
【申请人】查孝柱
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年4月6日
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种高效液相色谱法测定茶油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，所属
技术领域：二、生物与新医药技术（七）现代农业技术4、农产品精深加工与现代储运：农产 品质量安全评价、快速检测、全程质量控制等技术。
【背景技术】
[0002]HPLC是一项高压、高效、高灵敏度的分离技术，可用于分离分析高沸点、相对分子 量大、热稳定性差的有机化合物，广泛应用于化学、化工、高分子、生物、食品、医药等领域。
[0003] 齐墩果酸、熊果酸主要存在于茶油及其油脚中，为五环三萜类化合物；性质相近， 难以分离；是一种活性成分；有保肝、消炎、抗肿瘤、降血脂、增强免疫和抑制免疫（免疫双 向调解作用）等作用。
[0004] 目前这2种物质还只能从植物中提取，无法化学合成；检测方法有分光光度法、薄 层扫描法和高效液相色谱法，前者通常采用显色剂显色后测定，由于他们性质相近，分光光 度法通常测得其三萜类总量，方法缺乏专属性；而普通的薄层色谱很难使OA和UA分离；相 比较而言，HPLC较容易实施两者的分离，且紫外检测相对于蒸发光散射检测有较好的重现 性。在现有可查范围内，利用HPLC同时测定茶油中齐墩果酸、熊果酸未见报道，本发明采用 反相高效液相色谱法二极管阵列检测器测定了茶油中的齐墩果酸和熊果酸含量，旨在为评 价茶油的质量提供科学依据。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题在于提供一种高效液相色谱法测定茶油中齐墩果酸、 熊果酸含量的方法，从而准确测定其含量，方法操作简单、灵敏度高、重现性好。
[0006] 为了实现上述目的本发明采用如下技术方案：
[0007] -种高效液相色谱法测定茶油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，其特征在于包括 以下步骤：
[0008] (1)对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品10. 20mg、熊果酸对照品8. 54mg， 分别置l〇ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得齐墩果酸、熊果酸对照品贮备 液。
[0009] (2)样品溶液的处理：取茶油样品约0. 5-1. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密 加甲醇25ml，密塞，称定重量，浸渍2h，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取 续滤液，即得；
[0010] (3)将滤液过0. 40-0. 50ym微孔滤膜后，在实验色谱条件下进行高效液相色谱 法测定，得测定数值；所述的实验色谱条件为：色谱柱：C18柱，250X4. 6mm，5ym;流动相： 265 %甲醇-35 %水-0. 1 %冰乙酸-0. 05 %三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰 乙酸0. 05mL和三乙胺0. 05mL配置；紫外检测器的检测波长：210nm;流动相流速为0. 6mL/ min，柱温20°C，进样体积为20yL;
[0011] ⑷按照外标法计算茶油中齐墩果酸、熊果酸的含量。
[0012] 所述的高效液相色谱法测定茶油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，其特征在于： 所述的实验色谱条件为：色谱柱：C18柱，250X4. 6mm，5ym;流动相：265 %甲醇-35% 水-0.1%冰乙酸-0.05%三乙胺，其中，流动相由甲醇2651^、水351^、冰乙酸0.0511^和三 乙胺0. 05mL配置；紫外检测器的检测波长：210nm;流动相流速为0. 6mL/min，柱温20°C，进 样体积为20yL。
[0013] 本发明的有益效果：本发明可准确测定茶油中齐墩果酸、熊果酸的含量，方法操作 简单、灵敏度高、重现性好。
【附图说明】
[0014] 图1本发明实施例2齐墩果酸对照品的线性图。
[0015] 图2本发明实施例2熊果酸对照品的线性图。
[0016] 图3本发明实施例2对照品中齐墩果酸、熊果酸的色谱图，a齐墩果酸、b熊果酸。
[0017] 图4本发明实施例2茶油中齐墩果酸、熊果酸的色谱图，a齐墩果酸、b熊果酸。
【具体实施方式】
[0018] 实施例1 :高效液相色谱法测定茶油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，包括以下步 骤：
[0019] (1)对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品10. 20mg、熊果酸对照品8. 54mg， 分别置l〇ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得齐墩果酸、熊果酸对照品贮备 液。
[0020] (2)样品溶液的处理：取茶油样品约0. 5-1. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密 加甲醇25ml，密塞，称定重量，浸渍2h，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取 续滤液，即得；
[0021] (3)将滤液过0. 40-0. 50ym微孔滤膜后，在实验色谱条件下进行高效液相色谱 法测定，得测定数值；所述的实验色谱条件为：色谱柱：C18柱，250X4. 6mm，5ym;流动相： 265 %甲醇-35 %水-0. 1 %冰乙酸-0. 05 %三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰 乙酸0. 05mL和三乙胺0. 05mL配置；紫外检测器的检测波长：210nm;流动相流速为0. 6mL/ min，柱温20°C，进样体积为20yL;
[0022] (4)按照外标法计算茶油中齐墩果酸、熊果酸的含量。
[0023] 所述的实验色谱条件为：色谱柱：(：18柱，250\4.6111111，5錢 ；流动相：265 %甲 醇-35 %水-0. 1 %冰乙酸-0. 05 %三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸 0. 05mL和三乙胺0. 05mL配置；紫外检测器的检测波长：210nm;流动相流速为0. 6mL/min， 柱温20°C，进样体积为20yL。
[0024] 实施例2 :本发明的具体实验数据：
[0025] 1仪器与试剂
[0026]仪器：1100高效液相色谱仪（包括G1311A泵、G1322脱气机、G1313AZ自动进样 器、G1313A柱温箱、G1315 DAD;Agilent 1100 ChemStation) ;BP221D 电子天平（Sartorius 公司）；KQ-250DB数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；石英亚沸高纯水提取器 (江苏金城教学仪器厂）。
[0027] 试剂：齐墩果酸、熊果酸对照品（110709-200505、110742-200516,供含量测定用） 由中国药 品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯，茶油（岳西县光圣茶油有限公司菊盛牌 野生茶油）其他试剂均为分析纯。
[0028] 流动相配制：分别按照265mL甲醇、35mL水、0. 05mL冰乙酸和0. 05mL三乙胺比例 配置流动相。
[0029] 齐墩果酸、熊果酸标准溶液：精密称取齐墩果酸对照品10. 20mg、熊果酸对照品 8. 54mg，分别置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得齐墩果酸、熊果酸对照 品备液。
[0030] 样品溶液的处理：取茶油样品约0. 5-1. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲 醇25ml，密塞，称定重量，浸渍2h，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤 液，即得，过0. 45ym微孔滤膜后，在实验设定条件下进行HPLC测定。
[0031] 2含量测定方法的建立
[0032] 2. 1波长选择
[0033] 齐墩果酸与熊果酸在206nm处有最大吸收，本实验采用DAD检测器，对同一茶油供 试液在205、210、215和220nm处进行多波长同时检测，结果显示除205nm有溶剂干扰和末 端吸收外，其它波长处分离均较为理想，但215nm和220nm均较210nm波长处响应强度低， 检测灵敏度低，故本实验采用210nm为检测波长。
[0034] 2. 2流动相的选择
[0035] 对甲醇-水、甲醇-水-磷酸、甲醇-水-冰乙酸、甲醇-乙腈-水、甲醇_水-冰 乙酸-三乙胺等多个流动相系统进行考察，通过配比调整，发现甲醇-水-冰乙酸-三乙胺 (265 : 35 : 0.1 : 0.05)在确定的色谱系统中容易获得满意且稳定的分离结果；流速减 慢利于分离，本实验流速为0. 6ml/min。性能参数见表1。
[0036] 表1甲醇-水-冰乙酸-三乙胺色谱系统性能参数
[0038] 2. 3定性试验
[0039] 利用相对保留时间法及添加标准物质法定性。对照标准溶液、加标样品溶液和样 品溶液在相同的色谱条件下的色谱图和相对保留时间。实验结果表明，三种溶液中齐墩果 酸、熊果酸的出峰时间是一致的。
[0040] 2. 4标准曲线和相关系数
[0041] 精密量取齐墩果酸对照品贮备液0. 04ml、0. 22ml、0. 42ml、0. 62ml、0. 82ml，熊果酸 对照品贮备液0. 05ml、0. 28ml、0. 52ml、0. 80ml、l. 00ml，分别置5个10ml量瓶中，加甲醇稀 释至刻度，摇匀，即得齐墩果酸和熊果酸混合对照品溶液系列。分别精密吸取各混合对照 品溶液20yl，注入液相色谱仪，按色谱条件下的方法测定。数据见表2、3。以色谱峰面积 (y)为纵坐标，对照品浓度（x，mg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为齐墩果酸：y =16782. 3x+2. 17(r= 0? 9998);熊果酸：y= 15682.Ox+11. 58(r= 0? 9994)。由表可见， 齐墩果酸进样量在〇. 162~3. 31yg，熊果酸进样量在0. 195~3. 91yg之间呈现良好的线 性关系。线性见图1、2。
[0042] 2. 5对照品、样品的测定及重复性试验
[0043] 取上述经处理的对照品溶液及样品溶液，依照上述的色谱条件，将样品打入高效 液相色谱仪中，其色谱图见附图3、4。
[0044] 进样6次后，根据色谱图，记录实验数据，其进样结果：茶油中齐墩果酸、熊果酸的 平均含量分别为：〇. 281 %，0.438% ;RSD分别为1.07%，1.31 %。
[0045] 2. 6稳定性试验
[0046] 取同一茶油样品依照上述处理方法，制取样品溶液，分别在0,4,8,12, 24h进样测 定，峰面积的RSD为1. 05 %，结果表明样品溶液中齐墩果酸、熊果酸在24H内含量稳定。
[0047] 实验结果表明：本发明对测定齐墩果酸、熊果酸准确可靠，重现性好，可用于茶油 中齐墩果酸、熊果酸含量的测定。
[0048] 表2齐墩果酸对照品标准曲线数据表
[0050] 表3熊果酸对照品标准曲线数据表
【主权项】
1. 一种高效液相色谱法测定茶油中齐墩果酸、熊果酸含量的方法，其特征在于包括以 下步骤： (1) 对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品10. 20mg、熊果酸对照品8. 54mg，分 别置IOml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得齐墩果酸、熊果酸对照品贮备液。 (2) 样品溶液的处理：取茶油样品约0. 5-1. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲 醇25ml，密塞，称定重量，浸渍2h，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤 液，即得； (3)将滤液过0. 40-0. 50 y m微孔滤膜后，在实验色谱条件下进行高效液相色谱法测 定，得测定数值；所述的实验色谱条件为：色谱柱：C18柱，250X4. 6mm，5 ym ;流动相：265% 甲醇-35%水-0. 1%冰乙酸-0. 05%三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸 0. 05mL和三乙胺0. 05mL配置；紫外检测器的检测波长：210nm ;流动相流速为0. 6mL/min， 柱温20°C，进样体积为20 y L ; (4) 按照外标法计算茶油中齐墩果酸、熊果酸的含量。
【专利摘要】本发明公开了一种茶油中齐墩果酸和熊果酸的含量测定方法，其主要是通过采用反相高效液相色谱法，其色谱条件为：a.色谱柱：C18柱，250×4.6mm，5μm；b.流动相组成：265％甲醇-35％水-0.1％冰乙酸-0.05％三乙胺，其中，流动相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸0.05mL和三乙胺0.05mL配置；c.所用紫外检测器的检测波长：210nm；d.流速：0.6mL/min，进样体积：20μL，柱温：20℃；样品溶液的处理：取茶油样品约0.5-1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25ml，密塞，称定重量，浸渍2h，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。为有效控制其质量，本发明方法灵敏、高效、准确、稳定，可有效控制茶油中齐墩果酸和熊果酸的含量。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN104897800
【申请号】CN201510189069
【发明人】查孝柱
【申请人】查孝柱
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年4月6日
最新回复(0)