一种麝香心痛宁制剂的检测方法
一种麝香心痛宁制剂的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种麝香心痛宁制剂的检测方法，属于中药检测领域。
【背景技术】
[0002] 现有技术中，对麝香心痛宁制剂的鉴别和检测方法为：
[0003] 鉴别：（1)人工麝香鉴别：乙醚提取，硅胶G薄层板，甲苯展开，二硝基苯肼试液显 色；
[0004] (2)苏合香鉴别：乙醚提取，硅胶G254薄层板石油醚-正己烷-甲酸乙酯-甲酸展 开，紫外灯检视；
[0005] (3)川芎鉴别：乙醚提取，硅胶G薄层板正己烷-乙酸乙酯展开，紫外灯检视下检 视；
[0006] (4)冰片鉴别：乙酸乙酯提取，PEG-20W为固定相的气相色谱鉴别；
[0007] (5)人参鉴别：乙醚提取后残渣，水饱和正丁醇超声，正丁醇提取液用质量浓度为 〇. 5%氢氧化钠溶液洗涤2次，水相弃去，再用正丁醇饱和的水洗至中性，蒸干，硅胶G薄层 板，氯仿-甲醇-水展开，10%硫酸乙醇显色；
[0008] 含测：延胡索乙素检测：
[0009] 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇_0. 1 %磷酸（三乙胺调节pH至7. 0)(体 积比为60:40)为流动相，0. 1%磷酸为体积浓度，检测波长为280nm。
[0010] 供试品制备方法：取重量差异下的本品，研细，取2.0克，精密称定，至锥形瓶中， 加氨水2. 0毫升，浸润15分钟，精密加入乙醚50毫升，加塞，称重，超声处理1小时，放冷， 称重，补足重量，精密取25毫升，用乙酸溶液（1-10)提取3次（20、20、15毫升），合并乙酸 提取液，至分液漏斗中，用氨水调pH至10-11，用乙醚振摇提取4次（20、20、15、15毫升）， 合并乙醚液，低温挥干，残渣加甲醇溶解转移至5毫升容量瓶中，摇匀即得。
[0011] 现有技术中所存在的缺陷如下：
[0012] 1、⑴人工麝香鉴别：麝香酮对照品为油状液体，配制溶液不方便，称量过程损失 大；麝香酮易挥发，稳定性差；
[0013] (2)冰片鉴别：方法准确度高，但简洁性差，对设备要求高，可以采用薄层色谱代 替；
[0014] (3)人参鉴别：过程复杂，正丁醇液氢氧化钠洗涤、水洗涤过程乳化严重，放置过 夜仍不能很好分层，操作时间非常长；
[0015] (4)没有延胡索的鉴别。
[0016] 2、含测：检测延胡索乙素
[0017] (1)对除延胡索乙素其他成分检出差，分离度差。
【发明内容】
[0018] 针对上述问题，本发明提供了一种麝香心痛宁制剂的检测方法，本发明对麝香心 痛宁制剂的全部药味进行鉴别，且确定了麝香心痛宁的以延胡索乙素为参照物的特征指 纹。本发明的技术方案如下：
[0019] -种麝香心痛宁制剂的检测方法
[0020] 1、鉴别：
[0021] (1)鉴别人工麝香：取麝香心痛宁样品，研细，加乙醚，样品与乙醚的质量体积比 为1:8-10 (g/mL)，超声处理15分钟，滤过，过滤后的滤液挥发干留下的残渣（滤渣为滤纸上 的不溶物；残渣为为溶液蒸干溶剂后的残留物）中加入2, 4-二硝基苯肼试液（2, 4-二硝基 苯肼试液的配制方法：取2, 4-二硝基苯肼lg，加乙醇1000毫升，即得），2, 4-二硝基苯肼试 液与乙醚的体积比为1 :20,放置30分钟，加乙腈溶解转移并定容至容量瓶中，振摇，滤过， 滤液作为供试品溶液；另取麝香酮腙对照品，加乙腈配置成每毫升含麝香酮腙〇. 2mg的溶 液，作为对照品溶液，按照高效液相色谱法，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0. 1 % 磷酸（三乙胺调节pH至6.0,甲醇和0. 1 %磷酸的体积比为95:5,0. 1 %磷酸为体积浓度） 为流动相，检测波长为365nm;
[0022] 分别取供试品溶液和对照品溶液10ul注入高效液相色谱仪中，供试品色谱中呈 现与对照品保留时间一致的色谱峰。
[0023] (2)鉴别苏合香、川芎、冰片：取麝香心痛宁样品，研细，加乙醚，样品与乙醚的质 量体积比为l:8-10(g/mL)，超声处理15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液，滤渣备用；另取 冰片对照品，加甲醇配置成每毫升含冰片2mg的溶液，作为冰片对照品溶液；取川芎对照药 材1克，加乙醚20毫升，超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，加乙酸乙酯2毫升溶解，作为川 芎对照药材溶液；取苏合香对照药材0. 1克，加乙醚10毫升溶解，作为苏合香对照药材溶 液；按照薄层色谱法实验，吸取供试品溶液、冰片对照品溶液、川芎对照药材溶液、苏合香对 照药材溶液四种溶液各l〇ul，点于同一硅胶G薄层板，石油醚-乙酸乙酯（体积比为9:1) 展开，利用质量浓度为5%的硫酸香草醛试液显色，热风烘至斑点清晰，供试品色谱中，与对 照品、对照药材色谱相应位置显相同颜色的斑点（或主斑点）。
[0024] (3)鉴别人参：取麝香心痛宁样品，研细，加乙醚，样品与乙醚的质量体积比为 1:8-10 (g/mL)，超声处理15分钟，滤过，滤澄中加与乙醚等体积的水超声处理5分钟，取上 清液，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径lcm，柱长15cm)，以水洗脱，弃去水液，再用体 积浓度为80 %乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，加甲醇溶解作为供试品溶液；另取人参对照药 材0. 5克，加水饱和正丁醇溶液20毫升超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，通 过D101型大孔吸附树脂柱（内径lcm，柱长15cm)，以水洗脱，弃去水液，再用体积浓度为 80 %乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，加甲醇溶解作为对照溶液；取供试品溶液和对照溶液各 l〇ul，点于同一硅胶G薄层板，以体积比为65:35:10的氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开 剂（注：溶液分层，取下层），展开，用体积浓度为10 %的硫酸乙醇溶液显色，加热至斑点清 晰，供试品色谱中，与对照药材色谱相应位置显相同颜色的主斑点。
[0025] (4)延胡索鉴别：取麝香心痛宁样品，研细，加乙醚，样品与乙醚的质量体积比为 1:8-10 (g/mL)，超声处理15分钟，过滤，滤液作为供试品溶液；另取延胡索对照品，加甲醇 配置成每ml含延胡索乙素0. 5mg的溶液，作为对照品溶液；
[0026]取供试品溶液和对照品溶液各10ul，点于同一硅胶G薄层板，氯仿-甲醇（体积比 为9:1)展开，改良碘化铋钾试液显色，供试品色谱中，与对照品色谱相应位置显相同颜色 的斑点。
[0027] 2、含测：检测延胡索乙素及特征指纹、质谱分析
[0028] 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇_0. 1 %磷酸（三乙胺调节pH至6.0)为流 动相，检测波长为280nm。
[0029] 梯度改变流动相比例的时间点，以及该时间点设定的甲醇与0. 1%磷酸的体积比 如下：
[0030] Omin时，甲醇与0. 1%磷酸溶液的体积比为68:32 ;5min时，甲醇与0. 1%磷酸溶 液的体积比为68:32 ;10min时，甲醇与0. 1%磷酸溶液的体积比为30:70 ;15min时，甲醇 与0. 1%磷酸溶液的体积比为40:60 ;20min时，甲醇与0. 1%磷酸溶液的体积比为50:50 ; 60min时，甲醇与0. 1 %磷酸溶液的体积比为68:32。
[0031] 样品供试液的制备方法：取重量差异下的麝香心痛宁供试品，研细，取2.0克，精 密称定，至锥形瓶中，加氨水2. 0毫升，浸润15分钟，精密加入乙醚50毫升，加塞，称重，超 声处理1小时，放冷，称重，补足重量，精密取25毫升，用体积浓度为10%的乙酸溶液，提取 3次（20、20、15毫升），合并乙酸提取液，至分液漏斗中，用氨水调pH至10-11，用乙醚振摇 提取4次（20、20、15、15毫升），合并乙醚液，低温挥干，残渣加甲醇溶解转移至5毫升容量 瓶中，摇匀即得。
[0032] 本发明与现有技术相比具有以下优点：
[0033] 本发明人工麝香鉴别中对照品为粉末状态，比现有技术的液态对照品稳定性好， 易操作，损失小，准确度高；另外本发明还解决了麝香酮腙一般色谱条件（甲醇-水、乙 腈-水）色谱峰易拖尾或前伸的问题，本发明的色谱峰形状更符合检测要求，更对称；本发 明中川芎、苏合香、冰片鉴别项用同一薄层板，一次性鉴别3种药材，专属性强，与现有技术 相比简便省时，大幅度提高检测分析能力；本发明中人参的鉴别与现有技术的萃取法比较， 既能达到原检测标准，同时使供试品制备时间大幅度缩小，提高检测效率；本发明延胡索的 鉴别与现有技术的碘蒸汽显色比较，本发明显色斑点更多，更环保（碘蒸气有毒性）；本发 明延胡索特征指纹图谱共有10种共有峰，比较现有技术分离度更好；本发明的质谱鉴定为 麝香心痛宁制剂专有技术，现有技术中无此鉴定方法，增强麝香心痛宁制剂的质量控制手 段。
【附图说明】
[0034] 图1为本发明麝香酮腙对照品图谱；
[0035] 图2为本发明缺人工麝香的麝香心痛宁图谱；
[0036] 图3为本发明麝香心痛宁制剂中麝香酮腙样品图谱，1为麝香酮腙峰；
[0037] 图4是流动相为甲醇-水的样品图谱，1为麝香酮腙峰；
[0038] 图5是流动相为乙腈-水的样品图谱，1为麝香酮腙峰；
[0039] 图6是流动相为甲醇-酸水的样品图谱，1为麝香酮腙峰；
[0040] 图7是流动相为乙腈-酸水的样品图谱，1为麝香酮腙峰；
[0041] 图8为本发明川芎、苏合香、冰片鉴别图谱，1为冰片对照品、2为冰片空白样品、3 为苏合香对照药材、4为苏合香空白样品、5为川芎对照药材、6为川芎空白样品、7-9为麝香 心痛宁样品；
[0042] 图9为本发明人参鉴别图谱与萃取法人参鉴别图谱，1为人参空白样品、2为人参 对照药材、3-5为麝香心痛宁样品、6为萃取法样品、7为人参对照药材、8为人参空白样品；
[0043] 图10为本发明延胡索鉴别图谱，1为延胡索乙素对照品、2为延胡索对照药材、3为 缺延胡索空白样品、4-13麝香心痛宁样品；
[0044] 图11为碘蒸气显色的延胡索鉴别图谱，1和15为延胡索乙素对照品、2-14为13 批麝香心痛宁样品、16为缺延胡索空白样品；
[0045] 图12为本发明延胡索药材指纹图谱（S为对照峰）；
[0046]图13为本发明川芎药材指纹图谱；
[0047]图14为本发明人参药材指纹图谱；
[0048] 图15为本发明延胡索乙素图谱（S对照峰）；
[0049] 图16为麝香心痛宁标准指纹图谱（S对照峰）色谱图；
[0050] 图17为麝香心痛宁离子流图；
[0051] 图18为麝香心痛宁中黄连碱（强度分别为为2. 03e5、l. 25e6)质谱图；
[0052] 图19为麝香心痛宁中四氢黄连碱（强度分别为为4.lle6、2. 02e4)质谱图；
[0053] 图20为麝香心痛宁中小檗碱（强度分别为为7. 86e5、8. 16e5、4. 66e5)质谱图；
[0054] 图21为麝香心痛宁中药根碱（强度分别为为4. 29e6、2. 86e6)质谱图；
[0055] 图22为麝香心痛宁中木兰碱（强度分别为为1. 95e4、8. 27e4)质谱图；
[0056] 图23为麝香心痛宁中四氢非防己碱（强度分别为为7. 96e7、5. 69e5)质谱图；
[0057] 图24为麝香心痛宁中巴马汀（强度分别为为3. 93e6、3. 23e6)质谱图；
[0058] 图25为麝香心痛宁中四氢巴马汀（强度分别为为1. 83e6、9. 31e7)质谱图；
[0059] 图26为麝香心痛宁中延胡索甲素（强度分别为为5. 52e7、l. 55e7、l.Ole8)质谱图。
【具体实施方式】
[0060] 下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而 更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员 应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行 修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
[0061] 实施例1一种麝香心痛宁制剂的检测方法
[0062] 1、鉴别
[0063] (1)鉴别人工麝香：取麝香心痛宁制剂2. 5g，研细，加乙醚20毫升，超声处理15 分钟，滤过，过滤后的滤液挥发干留下的残渣中加入lmL2, 4-二硝基苯肼试液，放置30分 钟，加乙腈溶解转移并定容至容量瓶中，振摇，滤过，滤液作为供试品溶液；另取麝香酮腙对 照品，加乙腈配置成每毫升含麝香酮腙0. 2mg的溶液，作为对照品溶液，按照高效液相色谱 法，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0. 1 %磷酸为流动相，检测波长为365nm;
[0064] 分别取供试品溶液和对照品溶液10ul注入高效液相色谱仪中，供试品色谱中呈 现与对照品保留时间一致的色谱峰。本发明麝香酮腙对照品图谱如图1所示，本发明缺人 工麝香空白样品图谱如图2所示，本发明麝香心痛宁制剂麝香酮腙样品图谱如图3所示。
[0065] 将流动相替换为甲醇-水时，麝香酮腙样品图谱如图4所示，样品峰形不好；将流 动相替换为乙腈-水时，麝香酮腙样品图谱如图5所示，样品峰形不好；将流动相替换为甲 醇-酸水时，麝香酮腙样品图谱如图6所示，样品峰形拖尾；将流动相替换为乙腈-酸水时， 麝香酮腙样品图谱如图7所示，样品峰形前伸。
[0066] 且本发明对照品为粉末状态，比现有技术的液态对照品稳定性好，易操作，损失 小，准确度高；本发明的色谱峰形状更符合检测要求，更对称。
[0067] (2)鉴别苏合香、川考、冰片：取麝香心痛宁制剂2. 5克，研细，加乙醚20mL，超声处 理15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液，滤渣备用；另取冰片对照品，加甲醇配置成每毫升 含冰片2mg的溶液，作为冰片对照品溶液；取川芎对照药材1克，加乙醚20毫升，超声处理 15分钟，滤过，滤液挥干，加乙酸乙酯2毫升溶解，作为川芎对照药材溶液；取苏合香对照药 材0. 1克，加乙醚10毫升溶解，作为苏合香对照药材溶液；按照薄层色谱法实验，吸取供试 品溶液、冰片对照品溶液、川芎对照药材溶液、苏合香对照药材溶液四种溶液各l〇ul，点于 同一硅胶G薄层板，石油醚-乙酸乙酯（体积比为9:1)展开，利用质量浓度为5%的硫酸香 草醛试液显色，热风烘至斑点清晰，供试品色谱中，与对照品、对照药材色谱相应位置显相 同颜色的斑点（或主斑点）。麝香心痛宁中川芎、苏合香、冰片的鉴别图谱如图8所示。
[0068] (3)鉴别人参：取麝香心痛宁制剂2. 5g，研细，加乙醚20mL，超声处理15分钟，滤 过，滤渣中加20毫升水超声处理5分钟，取上清液10毫升，通过D101型大孔吸附树脂柱 (内径lcm，柱长15cm)，以30毫升水洗脱，弃去水液，再用体积浓度为80%乙醇洗脱，收集 洗脱液50毫升，蒸干，加1毫升甲醇溶解作为供试品溶液；另取人参对照药材0. 5克，加水 饱和正丁醇溶液20毫升超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加10毫升水溶解，通过D101型 大孔吸附树脂柱（内径lcm，柱长15cm)，以30毫升水洗脱，弃去水液，再用体积浓度为80% 乙醇洗脱，收集洗脱液50毫升，蒸干，加1毫升甲醇溶解作为对照溶液；取供试品溶液和对 照溶液各l〇ul，点于同一硅胶G薄层板，以体积比为65:35:10的氯仿-甲醇-水的下层溶 液为展开剂，展开，用体积浓度为10 %的硫酸乙醇溶液显色，加热至斑点清晰，供试品色谱 中，与对照药材色谱相应位置显相同颜色的主斑点。麝香心痛宁中人参鉴别图谱与萃取法 人参鉴别图谱如图9所示。本发明与现有技术的萃取法比较，既能达到原检测标准，同时使 供试品制备时间大幅度缩小，提尚检测效率。
[0069] (4)延胡索鉴别：取麝香心痛宁制剂2. 5g，研细，加乙醚20mL，超声处理15分钟， 过滤，滤液作为供试品溶液；另取延胡索对照品，加甲醇配置成每ml含延胡索乙素0. 5mg的 溶液，作为对照品溶液；
[0070]取供试品溶液和对照品溶液各10ul，点于同一硅胶G薄层板，氯仿-甲醇（体积比 为9:1)展开，改良碘化铋钾试液显色，供试品色谱中，与对照品色谱相应位置显相同颜色 的斑点。通过本发明检测方法麝香心痛宁制剂中延胡索的鉴别图谱如图10所示，通过碘蒸 气显色的延胡索鉴别图谱如图11所示。本发明与现有技术的碘蒸汽显色比较，本发明显色 斑点更多，更环保（碘蒸气有毒）。
[0071]2、含测：检测延胡索乙素及特征指纹
[0072]十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇_0. 1 %磷酸（三乙胺调节pH至6.0)为流 动相，检测波长为280nm。
[0073]梯度改变流动相比例的时间点，以及该时间点设定的甲醇与0. 1%磷酸的体积比 如下：
[0074] Omin时，甲醇与0. 1%磷酸溶液的体积比为68:32 ;5min时，甲醇与0. 1%磷酸溶 液的体积比为68:32 ;10min时，甲醇与0. 1%磷酸溶液的体积比为30:70 ;15min时，甲醇 与0. 1%磷酸溶液的体积比为40:60 ;20min时，甲醇与0. 1%磷酸溶液的体积比为50:50 ; 60min时，甲醇与0. 1 %磷酸溶液的体积比为68:32。
[0075] 样品供试液的制备方法：取重量差异下的麝香心痛宁供试品，研细，取2. 0克，精 密称定，至锥形瓶中，加氨水2. 0毫升，浸润15分钟，精密加入乙醚50毫升，加塞，称重，超 声处理1小时，放冷，称重，补足重量，精密取25毫升，用体积浓度为10%的乙酸溶液提取3 次（20、20、15毫升），合并乙酸提取液，至分液漏斗中，用氨水调pH至10-11，用乙醚振摇提 取4次（20、20、15、15毫升）， 合并乙醚液，低温挥干，残渣加甲醇溶解转移至5毫升容量瓶 中，摇匀即得。
[0076] (1)稳定性试验
[0077] 取本发明样品供试液，按2、4、6、8、12、24小时测定，共测6次，测定结果见表1、 2。结果表明，供试液中各共有峰的相对保留时间及主要峰的相对峰面积基本没有明显变化 (RSD〈3% )，符合指纹图谱的技术要求。故供试液在24小时内稳定。
[0078] 表1样品液稳定性考察结果（共有峰的相对保留时间）
[0080] 注：tK表示该峰的保留时间％/\表示该峰的相对保留时间下同
[0081] 表2样品液稳定性（占峰总面积5%以上主要峰的相对峰面积）考察结果
[0083] (2)精密度试验
[0084] 同一样品供试液，连续进样6次进行测定，测定结果见表3、4。结果表明，供试液中 各共有峰的相对保留时间及主要峰的相对峰面积基本一致（RSD〈3% )，符合指纹图谱的技 术要求。
[0085] 表3样品液精密度考察结果（共有峰的相对保留时间）
[0087] 表4样品精密度（占总峰面积5%以上主要峰的相对峰面积）考察结果
[0089] (3)重复性试验
[0090] 同一批号制剂，同法制备样品液6份，依法测定，结果见表5、6。结果表明，供试 液中各共有峰的相对保留时间及主要峰（占总峰面积5%以上）的相对峰面积基本一致 (RSD〈3% )，符合指纹图谱的技术要求。
[0091] 表5样品液重复性考察结果（共有峰的相对保留时间）
[0093] 表6样品重复性（占总峰面积5%以上主要峰的相对峰面积）考察结果
[0095] 特征指纹：延胡索乙素为S峰，共有10种共有峰，比较现有技术分离度更好。通过 本发明检测方法，麝香心痛宁制剂中延胡索药材指纹图谱（S为对照峰）如图12所示，川芎 药材指纹图谱如图13所示，人参药材指纹图谱如图14所示，为延胡索乙素图谱（S对照峰） 如图15所示，麝香心痛宁标准指纹图谱（S对照峰）色谱图如图16所示。
[0096] 3、质谱鉴定：
[0097] 鉴定麝香心痛宁制剂中黄连碱、四氢黄连碱、小檗碱、药根碱、木兰碱、四氢非防己 碱、巴马汀、四氢巴马汀、延胡索甲素等成分。麝香心痛宁制剂质谱图如图17-26所示。
【主权项】
1. 一种麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中人工麝香的鉴别： 取麝香心痛宁样品，研细，加乙醚，样品与乙醚的质量体积比为1:8-10 (g/mL)，超声处 理15分钟，滤过，过滤后的滤液挥发干留下的残渣中加入2, 4-二硝基苯肼试液，2, 4-二 硝基苯肼试液与乙醚的体积比为1:20,放置30分钟，加乙腈溶解转移并定容至容量瓶中， 振摇，滤过，滤液作为供试品溶液；另取麝香酮腙对照品，加乙腈配置成每毫升含麝香酮腙 0.2mg的溶液，作为对照品溶液，按照高效液相色谱法，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 甲醇-0. 1%磷酸为流动相，检测波长为365nm; 分别取供试品溶液和对照品溶液IOul注入高效液相色谱仪中，供试品色谱中呈现与 对照品保留时间一致的色谱峰。2. 根据权利要求1所述麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中苏 合香、川芎、冰片的鉴别： 取麝香心痛宁样品，研细，加乙醚，样品与乙醚的质量体积比为1:8-10 (g/mL)，超声处 理15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液，滤渣备用；另取冰片对照品，加甲醇配置成每毫升 含冰片2mg的溶液，作为冰片对照品溶液；取川芎对照药材1克，加乙醚20毫升，超声处理 15分钟，滤过，滤液挥干，加乙酸乙酯2毫升溶解，作为川芎对照药材溶液；取苏合香对照药 材0.1克，加乙醚10毫升溶解，作为苏合香对照药材溶液；按照薄层色谱法实验，吸取供试 品溶液、冰片对照品溶液、川芎对照药材溶液、苏合香对照药材溶液四种溶液各l〇ul，点于 同一硅胶G薄层板，石油醚-乙酸乙酯展开，石油醚与乙酸乙酯的体积比为9:1，利用质量浓 度为5%的硫酸香草醛试液显色，热风烘至斑点清晰，供试品色谱中，与对照品、对照药材色 谱相应位置显相同颜色的斑点或主斑点。3. 根据权利要求1所述麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中人 参的鉴别： 取麝香心痛宁样品，研细，加乙醚，样品与乙醚的质量体积比为1:8-10 (g/mL)，超声处 理15分钟，滤过，滤渣中加与乙醚等体积的水超声处理5分钟，取上清液，通过DlOl型大孔 吸附树脂柱，以水洗脱，弃去水液，再用体积浓度为80 %乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，加甲 醇溶解作为供试品溶液；另取人参对照药材〇. 5克，加水饱和正丁醇溶液20毫升超声30分 钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，通过DlOl型大孔吸附树脂柱，以水洗脱，弃去水液，再 用体积浓度为80 %乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，加甲醇溶解作为对照溶液；取供试品溶液 和对照溶液各l〇ul，点于同一硅胶G薄层板，以体积比为65:35:10的氯仿-甲醇-水的下 层溶液展开，用体积浓度为10%的硫酸乙醇溶液显色，加热至斑点清晰，供试品色谱中，与 对照药材色谱相应位置显相同颜色的主斑点。4. 根据权利要求1所述麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中延 胡索的鉴别： 取麝香心痛宁样品，研细，加乙醚，样品与乙醚的质量体积比为1:8-10 (g/mL)，超声处 理15分钟，过滤，滤液作为供试品溶液；另取延胡索对照品，加甲醇配置成每ml含延胡索乙 素0. 5mg的溶液，作为对照品溶液； 取供试品溶液和对照品溶液各l〇ul，点于同一硅胶G薄层板，氯仿-甲醇展开，氯仿与 甲醇的体积比为9:1，改良碘化铋钾试液显色，供试品色谱中，与对照品色谱相应位置显相 同颜色的斑点。5. 根据权利要求1所述麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中延 胡索乙素的检测及麝香心痛宁制剂的特征指纹和质谱分析： 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1%磷酸（三乙胺调节pH至6.0)为流动相， 检测波长为280nm; 梯度改变流动相比例的时间点，以及该时间点设定的甲醇与〇.1%磷酸的体积比如 下： Omin时，甲醇与0. 1 %磷酸溶液的体积比为68:32 ;5min时，甲醇与0. 1 %磷酸溶液 的体积比为68:32 ;10min时，甲醇与0. 1%磷酸溶液的体积比为30:70 ;15min时，甲醇与 0.1%磷酸溶液的体积比为40:60 ;20min时，甲醇与0.1%磷酸溶液的体积比为50:50 ; 60min时，甲醇与0. 1 %磷酸溶液的体积比为68:32。6. 根据权利要求1所述麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中样 品供试液的制备方法： 取重量差异下的麝香心痛宁供试品，研细，取2.0克，精密称定，至锥形瓶中，加氨水 2. 0毫升，浸润15分钟，精密加入乙醚50毫升，加塞，称重，超声处理1小时，放冷，称重，补 足重量，精密取25毫升，用体积浓度为10%的乙酸溶液提取3次（20、20、15毫升），合并乙 酸提取液，至分液漏斗中，用氨水调pH至10-11，用乙醚振摇提取4次（20、20、15、15毫升）， 合并乙醚液，低温挥干，残渣加甲醇溶解转移至5毫升容量瓶中，摇匀即得。7. 根据权利要求1所述麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中样 品与乙醚的质量体积比为1:8(g/mL)。8. 根据权利要求2所述麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中样 品与乙醚的质量体积比为1:8(g/mL)。9. 根据权利要求3所述麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中样 品与乙醚的质量体积比为1:8(g/mL)。10. 根据权利要求4所述麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中样 品与乙醚的质量体积比为1:8(g/mL)。
【专利摘要】本发明涉及一种麝香心痛宁制剂的检测方法，所述检测方法中包括人工麝香的鉴别，苏合香、川芎、冰片的鉴别，人参的鉴别，延胡索的鉴别，延胡索乙素的检测及麝香心痛宁制剂的特征指纹和质谱分析。本发明对麝香心痛宁制剂的全部药味进行了鉴别，且确定了麝香心痛宁的以延胡索乙素为参照物的特征指纹。本发明稳定性好，易操作，损失小，准确度高；色谱峰形状更符合检测要求，更对称；川芎、苏合香、冰片鉴别项用同一薄层板，一次性鉴别3种药材，专属性强；本发明中人参的鉴别，既能达到原检测标准，同时使供试品制备时间大幅度缩小，提高检测效率；本发明延胡索的鉴别显色斑点多，环保；本发明的质谱鉴定为麝香心痛宁制剂专有技术。
【IPC分类】G01N30/90, G01N30/06, G01N30/02
【公开号】CN104897811
【申请号】CN201510281762
【发明人】张桥, 张京华, 宋骁, 毕丽娟, 李海燕, 李樱, 武勇, 李秀凤
【申请人】山东宏济堂制药集团有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月28日
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种麝香心痛宁制剂的检测方法，属于中药检测领域。
【背景技术】
[0002] 现有技术中，对麝香心痛宁制剂的鉴别和检测方法为：
[0003] 鉴别：（1)人工麝香鉴别：乙醚提取，硅胶G薄层板，甲苯展开，二硝基苯肼试液显 色；
[0004] (2)苏合香鉴别：乙醚提取，硅胶G254薄层板石油醚-正己烷-甲酸乙酯-甲酸展 开，紫外灯检视；
[0005] (3)川芎鉴别：乙醚提取，硅胶G薄层板正己烷-乙酸乙酯展开，紫外灯检视下检 视；
[0006] (4)冰片鉴别：乙酸乙酯提取，PEG-20W为固定相的气相色谱鉴别；
[0007] (5)人参鉴别：乙醚提取后残渣，水饱和正丁醇超声，正丁醇提取液用质量浓度为 〇. 5%氢氧化钠溶液洗涤2次，水相弃去，再用正丁醇饱和的水洗至中性，蒸干，硅胶G薄层 板，氯仿-甲醇-水展开，10%硫酸乙醇显色；
[0008] 含测：延胡索乙素检测：
[0009] 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇_0. 1 %磷酸（三乙胺调节pH至7. 0)(体 积比为60:40)为流动相，0. 1%磷酸为体积浓度，检测波长为280nm。
[0010] 供试品制备方法：取重量差异下的本品，研细，取2.0克，精密称定，至锥形瓶中， 加氨水2. 0毫升，浸润15分钟，精密加入乙醚50毫升，加塞，称重，超声处理1小时，放冷， 称重，补足重量，精密取25毫升，用乙酸溶液（1-10)提取3次（20、20、15毫升），合并乙酸 提取液，至分液漏斗中，用氨水调pH至10-11，用乙醚振摇提取4次（20、20、15、15毫升）， 合并乙醚液，低温挥干，残渣加甲醇溶解转移至5毫升容量瓶中，摇匀即得。
[0011] 现有技术中所存在的缺陷如下：
[0012] 1、⑴人工麝香鉴别：麝香酮对照品为油状液体，配制溶液不方便，称量过程损失 大；麝香酮易挥发，稳定性差；
[0013] (2)冰片鉴别：方法准确度高，但简洁性差，对设备要求高，可以采用薄层色谱代 替；
[0014] (3)人参鉴别：过程复杂，正丁醇液氢氧化钠洗涤、水洗涤过程乳化严重，放置过 夜仍不能很好分层，操作时间非常长；
[0015] (4)没有延胡索的鉴别。
[0016] 2、含测：检测延胡索乙素
[0017] (1)对除延胡索乙素其他成分检出差，分离度差。
【发明内容】
[0018] 针对上述问题，本发明提供了一种麝香心痛宁制剂的检测方法，本发明对麝香心 痛宁制剂的全部药味进行鉴别，且确定了麝香心痛宁的以延胡索乙素为参照物的特征指 纹。本发明的技术方案如下：
[0019] -种麝香心痛宁制剂的检测方法
[0020] 1、鉴别：
[0021] (1)鉴别人工麝香：取麝香心痛宁样品，研细，加乙醚，样品与乙醚的质量体积比 为1:8-10 (g/mL)，超声处理15分钟，滤过，过滤后的滤液挥发干留下的残渣（滤渣为滤纸上 的不溶物；残渣为为溶液蒸干溶剂后的残留物）中加入2, 4-二硝基苯肼试液（2, 4-二硝基 苯肼试液的配制方法：取2, 4-二硝基苯肼lg，加乙醇1000毫升，即得），2, 4-二硝基苯肼试 液与乙醚的体积比为1 :20,放置30分钟，加乙腈溶解转移并定容至容量瓶中，振摇，滤过， 滤液作为供试品溶液；另取麝香酮腙对照品，加乙腈配置成每毫升含麝香酮腙〇. 2mg的溶 液，作为对照品溶液，按照高效液相色谱法，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0. 1 % 磷酸（三乙胺调节pH至6.0,甲醇和0. 1 %磷酸的体积比为95:5,0. 1 %磷酸为体积浓度） 为流动相，检测波长为365nm;
[0022] 分别取供试品溶液和对照品溶液10ul注入高效液相色谱仪中，供试品色谱中呈 现与对照品保留时间一致的色谱峰。
[0023] (2)鉴别苏合香、川芎、冰片：取麝香心痛宁样品，研细，加乙醚，样品与乙醚的质 量体积比为l:8-10(g/mL)，超声处理15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液，滤渣备用；另取 冰片对照品，加甲醇配置成每毫升含冰片2mg的溶液，作为冰片对照品溶液；取川芎对照药 材1克，加乙醚20毫升，超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，加乙酸乙酯2毫升溶解，作为川 芎对照药材溶液；取苏合香对照药材0. 1克，加乙醚10毫升溶解，作为苏合香对照药材溶 液；按照薄层色谱法实验，吸取供试品溶液、冰片对照品溶液、川芎对照药材溶液、苏合香对 照药材溶液四种溶液各l〇ul，点于同一硅胶G薄层板，石油醚-乙酸乙酯（体积比为9:1) 展开，利用质量浓度为5%的硫酸香草醛试液显色，热风烘至斑点清晰，供试品色谱中，与对 照品、对照药材色谱相应位置显相同颜色的斑点（或主斑点）。
[0024] (3)鉴别人参：取麝香心痛宁样品，研细，加乙醚，样品与乙醚的质量体积比为 1:8-10 (g/mL)，超声处理15分钟，滤过，滤澄中加与乙醚等体积的水超声处理5分钟，取上 清液，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径lcm，柱长15cm)，以水洗脱，弃去水液，再用体 积浓度为80 %乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，加甲醇溶解作为供试品溶液；另取人参对照药 材0. 5克，加水饱和正丁醇溶液20毫升超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，通 过D101型大孔吸附树脂柱（内径lcm，柱长15cm)，以水洗脱，弃去水液，再用体积浓度为 80 %乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，加甲醇溶解作为对照溶液；取供试品溶液和对照溶液各 l〇ul，点于同一硅胶G薄层板，以体积比为65:35:10的氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开 剂（注：溶液分层，取下层），展开，用体积浓度为10 %的硫酸乙醇溶液显色，加热至斑点清 晰，供试品色谱中，与对照药材色谱相应位置显相同颜色的主斑点。
[0025] (4)延胡索鉴别：取麝香心痛宁样品，研细，加乙醚，样品与乙醚的质量体积比为 1:8-10 (g/mL)，超声处理15分钟，过滤，滤液作为供试品溶液；另取延胡索对照品，加甲醇 配置成每ml含延胡索乙素0. 5mg的溶液，作为对照品溶液；
[0026]取供试品溶液和对照品溶液各10ul，点于同一硅胶G薄层板，氯仿-甲醇（体积比 为9:1)展开，改良碘化铋钾试液显色，供试品色谱中，与对照品色谱相应位置显相同颜色 的斑点。
[0027] 2、含测：检测延胡索乙素及特征指纹、质谱分析
[0028] 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇_0. 1 %磷酸（三乙胺调节pH至6.0)为流 动相，检测波长为280nm。
[0029] 梯度改变流动相比例的时间点，以及该时间点设定的甲醇与0. 1%磷酸的体积比 如下：
[0030] Omin时，甲醇与0. 1%磷酸溶液的体积比为68:32 ;5min时，甲醇与0. 1%磷酸溶 液的体积比为68:32 ;10min时，甲醇与0. 1%磷酸溶液的体积比为30:70 ;15min时，甲醇 与0. 1%磷酸溶液的体积比为40:60 ;20min时，甲醇与0. 1%磷酸溶液的体积比为50:50 ; 60min时，甲醇与0. 1 %磷酸溶液的体积比为68:32。
[0031] 样品供试液的制备方法：取重量差异下的麝香心痛宁供试品，研细，取2.0克，精 密称定，至锥形瓶中，加氨水2. 0毫升，浸润15分钟，精密加入乙醚50毫升，加塞，称重，超 声处理1小时，放冷，称重，补足重量，精密取25毫升，用体积浓度为10%的乙酸溶液，提取 3次（20、20、15毫升），合并乙酸提取液，至分液漏斗中，用氨水调pH至10-11，用乙醚振摇 提取4次（20、20、15、15毫升），合并乙醚液，低温挥干，残渣加甲醇溶解转移至5毫升容量 瓶中，摇匀即得。
[0032] 本发明与现有技术相比具有以下优点：
[0033] 本发明人工麝香鉴别中对照品为粉末状态，比现有技术的液态对照品稳定性好， 易操作，损失小，准确度高；另外本发明还解决了麝香酮腙一般色谱条件（甲醇-水、乙 腈-水）色谱峰易拖尾或前伸的问题，本发明的色谱峰形状更符合检测要求，更对称；本发 明中川芎、苏合香、冰片鉴别项用同一薄层板，一次性鉴别3种药材，专属性强，与现有技术 相比简便省时，大幅度提高检测分析能力；本发明中人参的鉴别与现有技术的萃取法比较， 既能达到原检测标准，同时使供试品制备时间大幅度缩小，提高检测效率；本发明延胡索的 鉴别与现有技术的碘蒸汽显色比较，本发明显色斑点更多，更环保（碘蒸气有毒性）；本发 明延胡索特征指纹图谱共有10种共有峰，比较现有技术分离度更好；本发明的质谱鉴定为 麝香心痛宁制剂专有技术，现有技术中无此鉴定方法，增强麝香心痛宁制剂的质量控制手 段。
【附图说明】
[0034] 图1为本发明麝香酮腙对照品图谱；
[0035] 图2为本发明缺人工麝香的麝香心痛宁图谱；
[0036] 图3为本发明麝香心痛宁制剂中麝香酮腙样品图谱，1为麝香酮腙峰；
[0037] 图4是流动相为甲醇-水的样品图谱，1为麝香酮腙峰；
[0038] 图5是流动相为乙腈-水的样品图谱，1为麝香酮腙峰；
[0039] 图6是流动相为甲醇-酸水的样品图谱，1为麝香酮腙峰；
[0040] 图7是流动相为乙腈-酸水的样品图谱，1为麝香酮腙峰；
[0041] 图8为本发明川芎、苏合香、冰片鉴别图谱，1为冰片对照品、2为冰片空白样品、3 为苏合香对照药材、4为苏合香空白样品、5为川芎对照药材、6为川芎空白样品、7-9为麝香 心痛宁样品；
[0042] 图9为本发明人参鉴别图谱与萃取法人参鉴别图谱，1为人参空白样品、2为人参 对照药材、3-5为麝香心痛宁样品、6为萃取法样品、7为人参对照药材、8为人参空白样品；
[0043] 图10为本发明延胡索鉴别图谱，1为延胡索乙素对照品、2为延胡索对照药材、3为 缺延胡索空白样品、4-13麝香心痛宁样品；
[0044] 图11为碘蒸气显色的延胡索鉴别图谱，1和15为延胡索乙素对照品、2-14为13 批麝香心痛宁样品、16为缺延胡索空白样品；
[0045] 图12为本发明延胡索药材指纹图谱（S为对照峰）；
[0046]图13为本发明川芎药材指纹图谱；
[0047]图14为本发明人参药材指纹图谱；
[0048] 图15为本发明延胡索乙素图谱（S对照峰）；
[0049] 图16为麝香心痛宁标准指纹图谱（S对照峰）色谱图；
[0050] 图17为麝香心痛宁离子流图；
[0051] 图18为麝香心痛宁中黄连碱（强度分别为为2. 03e5、l. 25e6)质谱图；
[0052] 图19为麝香心痛宁中四氢黄连碱（强度分别为为4.lle6、2. 02e4)质谱图；
[0053] 图20为麝香心痛宁中小檗碱（强度分别为为7. 86e5、8. 16e5、4. 66e5)质谱图；
[0054] 图21为麝香心痛宁中药根碱（强度分别为为4. 29e6、2. 86e6)质谱图；
[0055] 图22为麝香心痛宁中木兰碱（强度分别为为1. 95e4、8. 27e4)质谱图；
[0056] 图23为麝香心痛宁中四氢非防己碱（强度分别为为7. 96e7、5. 69e5)质谱图；
[0057] 图24为麝香心痛宁中巴马汀（强度分别为为3. 93e6、3. 23e6)质谱图；
[0058] 图25为麝香心痛宁中四氢巴马汀（强度分别为为1. 83e6、9. 31e7)质谱图；
[0059] 图26为麝香心痛宁中延胡索甲素（强度分别为为5. 52e7、l. 55e7、l.Ole8)质谱图。
【具体实施方式】
[0060] 下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而 更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员 应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行 修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
[0061] 实施例1一种麝香心痛宁制剂的检测方法
[0062] 1、鉴别
[0063] (1)鉴别人工麝香：取麝香心痛宁制剂2. 5g，研细，加乙醚20毫升，超声处理15 分钟，滤过，过滤后的滤液挥发干留下的残渣中加入lmL2, 4-二硝基苯肼试液，放置30分 钟，加乙腈溶解转移并定容至容量瓶中，振摇，滤过，滤液作为供试品溶液；另取麝香酮腙对 照品，加乙腈配置成每毫升含麝香酮腙0. 2mg的溶液，作为对照品溶液，按照高效液相色谱 法，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0. 1 %磷酸为流动相，检测波长为365nm;
[0064] 分别取供试品溶液和对照品溶液10ul注入高效液相色谱仪中，供试品色谱中呈 现与对照品保留时间一致的色谱峰。本发明麝香酮腙对照品图谱如图1所示，本发明缺人 工麝香空白样品图谱如图2所示，本发明麝香心痛宁制剂麝香酮腙样品图谱如图3所示。
[0065] 将流动相替换为甲醇-水时，麝香酮腙样品图谱如图4所示，样品峰形不好；将流 动相替换为乙腈-水时，麝香酮腙样品图谱如图5所示，样品峰形不好；将流动相替换为甲 醇-酸水时，麝香酮腙样品图谱如图6所示，样品峰形拖尾；将流动相替换为乙腈-酸水时， 麝香酮腙样品图谱如图7所示，样品峰形前伸。
[0066] 且本发明对照品为粉末状态，比现有技术的液态对照品稳定性好，易操作，损失 小，准确度高；本发明的色谱峰形状更符合检测要求，更对称。
[0067] (2)鉴别苏合香、川考、冰片：取麝香心痛宁制剂2. 5克，研细，加乙醚20mL，超声处 理15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液，滤渣备用；另取冰片对照品，加甲醇配置成每毫升 含冰片2mg的溶液，作为冰片对照品溶液；取川芎对照药材1克，加乙醚20毫升，超声处理 15分钟，滤过，滤液挥干，加乙酸乙酯2毫升溶解，作为川芎对照药材溶液；取苏合香对照药 材0. 1克，加乙醚10毫升溶解，作为苏合香对照药材溶液；按照薄层色谱法实验，吸取供试 品溶液、冰片对照品溶液、川芎对照药材溶液、苏合香对照药材溶液四种溶液各l〇ul，点于 同一硅胶G薄层板，石油醚-乙酸乙酯（体积比为9:1)展开，利用质量浓度为5%的硫酸香 草醛试液显色，热风烘至斑点清晰，供试品色谱中，与对照品、对照药材色谱相应位置显相 同颜色的斑点（或主斑点）。麝香心痛宁中川芎、苏合香、冰片的鉴别图谱如图8所示。
[0068] (3)鉴别人参：取麝香心痛宁制剂2. 5g，研细，加乙醚20mL，超声处理15分钟，滤 过，滤渣中加20毫升水超声处理5分钟，取上清液10毫升，通过D101型大孔吸附树脂柱 (内径lcm，柱长15cm)，以30毫升水洗脱，弃去水液，再用体积浓度为80%乙醇洗脱，收集 洗脱液50毫升，蒸干，加1毫升甲醇溶解作为供试品溶液；另取人参对照药材0. 5克，加水 饱和正丁醇溶液20毫升超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加10毫升水溶解，通过D101型 大孔吸附树脂柱（内径lcm，柱长15cm)，以30毫升水洗脱，弃去水液，再用体积浓度为80% 乙醇洗脱，收集洗脱液50毫升，蒸干，加1毫升甲醇溶解作为对照溶液；取供试品溶液和对 照溶液各l〇ul，点于同一硅胶G薄层板，以体积比为65:35:10的氯仿-甲醇-水的下层溶 液为展开剂，展开，用体积浓度为10 %的硫酸乙醇溶液显色，加热至斑点清晰，供试品色谱 中，与对照药材色谱相应位置显相同颜色的主斑点。麝香心痛宁中人参鉴别图谱与萃取法 人参鉴别图谱如图9所示。本发明与现有技术的萃取法比较，既能达到原检测标准，同时使 供试品制备时间大幅度缩小，提尚检测效率。
[0069] (4)延胡索鉴别：取麝香心痛宁制剂2. 5g，研细，加乙醚20mL，超声处理15分钟， 过滤，滤液作为供试品溶液；另取延胡索对照品，加甲醇配置成每ml含延胡索乙素0. 5mg的 溶液，作为对照品溶液；
[0070]取供试品溶液和对照品溶液各10ul，点于同一硅胶G薄层板，氯仿-甲醇（体积比 为9:1)展开，改良碘化铋钾试液显色，供试品色谱中，与对照品色谱相应位置显相同颜色 的斑点。通过本发明检测方法麝香心痛宁制剂中延胡索的鉴别图谱如图10所示，通过碘蒸 气显色的延胡索鉴别图谱如图11所示。本发明与现有技术的碘蒸汽显色比较，本发明显色 斑点更多，更环保（碘蒸气有毒）。
[0071]2、含测：检测延胡索乙素及特征指纹
[0072]十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇_0. 1 %磷酸（三乙胺调节pH至6.0)为流 动相，检测波长为280nm。
[0073]梯度改变流动相比例的时间点，以及该时间点设定的甲醇与0. 1%磷酸的体积比 如下：
[0074] Omin时，甲醇与0. 1%磷酸溶液的体积比为68:32 ;5min时，甲醇与0. 1%磷酸溶 液的体积比为68:32 ;10min时，甲醇与0. 1%磷酸溶液的体积比为30:70 ;15min时，甲醇 与0. 1%磷酸溶液的体积比为40:60 ;20min时，甲醇与0. 1%磷酸溶液的体积比为50:50 ; 60min时，甲醇与0. 1 %磷酸溶液的体积比为68:32。
[0075] 样品供试液的制备方法：取重量差异下的麝香心痛宁供试品，研细，取2. 0克，精 密称定，至锥形瓶中，加氨水2. 0毫升，浸润15分钟，精密加入乙醚50毫升，加塞，称重，超 声处理1小时，放冷，称重，补足重量，精密取25毫升，用体积浓度为10%的乙酸溶液提取3 次（20、20、15毫升），合并乙酸提取液，至分液漏斗中，用氨水调pH至10-11，用乙醚振摇提 取4次（20、20、15、15毫升）， 合并乙醚液，低温挥干，残渣加甲醇溶解转移至5毫升容量瓶 中，摇匀即得。
[0076] (1)稳定性试验
[0077] 取本发明样品供试液，按2、4、6、8、12、24小时测定，共测6次，测定结果见表1、 2。结果表明，供试液中各共有峰的相对保留时间及主要峰的相对峰面积基本没有明显变化 (RSD〈3% )，符合指纹图谱的技术要求。故供试液在24小时内稳定。
[0078] 表1样品液稳定性考察结果（共有峰的相对保留时间）
[0080] 注：tK表示该峰的保留时间％/\表示该峰的相对保留时间下同
[0081] 表2样品液稳定性（占峰总面积5%以上主要峰的相对峰面积）考察结果
[0083] (2)精密度试验
[0084] 同一样品供试液，连续进样6次进行测定，测定结果见表3、4。结果表明，供试液中 各共有峰的相对保留时间及主要峰的相对峰面积基本一致（RSD〈3% )，符合指纹图谱的技 术要求。
[0085] 表3样品液精密度考察结果（共有峰的相对保留时间）
[0087] 表4样品精密度（占总峰面积5%以上主要峰的相对峰面积）考察结果
[0089] (3)重复性试验
[0090] 同一批号制剂，同法制备样品液6份，依法测定，结果见表5、6。结果表明，供试 液中各共有峰的相对保留时间及主要峰（占总峰面积5%以上）的相对峰面积基本一致 (RSD〈3% )，符合指纹图谱的技术要求。
[0091] 表5样品液重复性考察结果（共有峰的相对保留时间）
[0093] 表6样品重复性（占总峰面积5%以上主要峰的相对峰面积）考察结果
[0095] 特征指纹：延胡索乙素为S峰，共有10种共有峰，比较现有技术分离度更好。通过 本发明检测方法，麝香心痛宁制剂中延胡索药材指纹图谱（S为对照峰）如图12所示，川芎 药材指纹图谱如图13所示，人参药材指纹图谱如图14所示，为延胡索乙素图谱（S对照峰） 如图15所示，麝香心痛宁标准指纹图谱（S对照峰）色谱图如图16所示。
[0096] 3、质谱鉴定：
[0097] 鉴定麝香心痛宁制剂中黄连碱、四氢黄连碱、小檗碱、药根碱、木兰碱、四氢非防己 碱、巴马汀、四氢巴马汀、延胡索甲素等成分。麝香心痛宁制剂质谱图如图17-26所示。
【主权项】
1. 一种麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中人工麝香的鉴别： 取麝香心痛宁样品，研细，加乙醚，样品与乙醚的质量体积比为1:8-10 (g/mL)，超声处 理15分钟，滤过，过滤后的滤液挥发干留下的残渣中加入2, 4-二硝基苯肼试液，2, 4-二 硝基苯肼试液与乙醚的体积比为1:20,放置30分钟，加乙腈溶解转移并定容至容量瓶中， 振摇，滤过，滤液作为供试品溶液；另取麝香酮腙对照品，加乙腈配置成每毫升含麝香酮腙 0.2mg的溶液，作为对照品溶液，按照高效液相色谱法，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 甲醇-0. 1%磷酸为流动相，检测波长为365nm; 分别取供试品溶液和对照品溶液IOul注入高效液相色谱仪中，供试品色谱中呈现与 对照品保留时间一致的色谱峰。2. 根据权利要求1所述麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中苏 合香、川芎、冰片的鉴别： 取麝香心痛宁样品，研细，加乙醚，样品与乙醚的质量体积比为1:8-10 (g/mL)，超声处 理15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液，滤渣备用；另取冰片对照品，加甲醇配置成每毫升 含冰片2mg的溶液，作为冰片对照品溶液；取川芎对照药材1克，加乙醚20毫升，超声处理 15分钟，滤过，滤液挥干，加乙酸乙酯2毫升溶解，作为川芎对照药材溶液；取苏合香对照药 材0.1克，加乙醚10毫升溶解，作为苏合香对照药材溶液；按照薄层色谱法实验，吸取供试 品溶液、冰片对照品溶液、川芎对照药材溶液、苏合香对照药材溶液四种溶液各l〇ul，点于 同一硅胶G薄层板，石油醚-乙酸乙酯展开，石油醚与乙酸乙酯的体积比为9:1，利用质量浓 度为5%的硫酸香草醛试液显色，热风烘至斑点清晰，供试品色谱中，与对照品、对照药材色 谱相应位置显相同颜色的斑点或主斑点。3. 根据权利要求1所述麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中人 参的鉴别： 取麝香心痛宁样品，研细，加乙醚，样品与乙醚的质量体积比为1:8-10 (g/mL)，超声处 理15分钟，滤过，滤渣中加与乙醚等体积的水超声处理5分钟，取上清液，通过DlOl型大孔 吸附树脂柱，以水洗脱，弃去水液，再用体积浓度为80 %乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，加甲 醇溶解作为供试品溶液；另取人参对照药材〇. 5克，加水饱和正丁醇溶液20毫升超声30分 钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，通过DlOl型大孔吸附树脂柱，以水洗脱，弃去水液，再 用体积浓度为80 %乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，加甲醇溶解作为对照溶液；取供试品溶液 和对照溶液各l〇ul，点于同一硅胶G薄层板，以体积比为65:35:10的氯仿-甲醇-水的下 层溶液展开，用体积浓度为10%的硫酸乙醇溶液显色，加热至斑点清晰，供试品色谱中，与 对照药材色谱相应位置显相同颜色的主斑点。4. 根据权利要求1所述麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中延 胡索的鉴别： 取麝香心痛宁样品，研细，加乙醚，样品与乙醚的质量体积比为1:8-10 (g/mL)，超声处 理15分钟，过滤，滤液作为供试品溶液；另取延胡索对照品，加甲醇配置成每ml含延胡索乙 素0. 5mg的溶液，作为对照品溶液； 取供试品溶液和对照品溶液各l〇ul，点于同一硅胶G薄层板，氯仿-甲醇展开，氯仿与 甲醇的体积比为9:1，改良碘化铋钾试液显色，供试品色谱中，与对照品色谱相应位置显相 同颜色的斑点。5. 根据权利要求1所述麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中延 胡索乙素的检测及麝香心痛宁制剂的特征指纹和质谱分析： 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1%磷酸（三乙胺调节pH至6.0)为流动相， 检测波长为280nm; 梯度改变流动相比例的时间点，以及该时间点设定的甲醇与〇.1%磷酸的体积比如 下： Omin时，甲醇与0. 1 %磷酸溶液的体积比为68:32 ;5min时，甲醇与0. 1 %磷酸溶液 的体积比为68:32 ;10min时，甲醇与0. 1%磷酸溶液的体积比为30:70 ;15min时，甲醇与 0.1%磷酸溶液的体积比为40:60 ;20min时，甲醇与0.1%磷酸溶液的体积比为50:50 ; 60min时，甲醇与0. 1 %磷酸溶液的体积比为68:32。6. 根据权利要求1所述麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中样 品供试液的制备方法： 取重量差异下的麝香心痛宁供试品，研细，取2.0克，精密称定，至锥形瓶中，加氨水 2. 0毫升，浸润15分钟，精密加入乙醚50毫升，加塞，称重，超声处理1小时，放冷，称重，补 足重量，精密取25毫升，用体积浓度为10%的乙酸溶液提取3次（20、20、15毫升），合并乙 酸提取液，至分液漏斗中，用氨水调pH至10-11，用乙醚振摇提取4次（20、20、15、15毫升）， 合并乙醚液，低温挥干，残渣加甲醇溶解转移至5毫升容量瓶中，摇匀即得。7. 根据权利要求1所述麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中样 品与乙醚的质量体积比为1:8(g/mL)。8. 根据权利要求2所述麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中样 品与乙醚的质量体积比为1:8(g/mL)。9. 根据权利要求3所述麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中样 品与乙醚的质量体积比为1:8(g/mL)。10. 根据权利要求4所述麝香心痛宁制剂的检测方法，其特征在于，所示检测方法中样 品与乙醚的质量体积比为1:8(g/mL)。
【专利摘要】本发明涉及一种麝香心痛宁制剂的检测方法，所述检测方法中包括人工麝香的鉴别，苏合香、川芎、冰片的鉴别，人参的鉴别，延胡索的鉴别，延胡索乙素的检测及麝香心痛宁制剂的特征指纹和质谱分析。本发明对麝香心痛宁制剂的全部药味进行了鉴别，且确定了麝香心痛宁的以延胡索乙素为参照物的特征指纹。本发明稳定性好，易操作，损失小，准确度高；色谱峰形状更符合检测要求，更对称；川芎、苏合香、冰片鉴别项用同一薄层板，一次性鉴别3种药材，专属性强；本发明中人参的鉴别，既能达到原检测标准，同时使供试品制备时间大幅度缩小，提高检测效率；本发明延胡索的鉴别显色斑点多，环保；本发明的质谱鉴定为麝香心痛宁制剂专有技术。
【IPC分类】G01N30/90, G01N30/06, G01N30/02
【公开号】CN104897811
【申请号】CN201510281762
【发明人】张桥, 张京华, 宋骁, 毕丽娟, 李海燕, 李樱, 武勇, 李秀凤
【申请人】山东宏济堂制药集团有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月28日
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