一种马西替坦中间体的检测方法及其应用
一种马西替坦中间体的检测方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本专利涉及一种用于治疗肺动脉高压药物的中间体N-丙胺基磺酰胺或其盐的检 测方法，以及在药物马西替坦及其制剂中的应用。
【背景技术】
[0002] 马西替坦（macitentan)是一个小分子、高度有效的组织祀向内皮素受体诘抗剂， 同时具有高度亲脂性，对内皮素-1 (ET-1)及其2个受体（ETA、ETB受体）具有双重抑制作 用，且具有组织靶向性。内皮素与其受体结合后能够促进血管平滑肌的收缩，还可以通过组 织机制诱导血管平滑肌细胞的增殖和纤维化，引起血管炎症，改变组织结构，内皮素在众多 心血管疾病的发生、发展过程中均发挥重要作用。因此，马西替坦作为内皮素受体拮抗剂， 有重要的临床意义。该药由瑞士Actelion公司研制开发，已在美国和欧洲国家上市。
[0003] 在马西替坦（式I)的合成工艺中用到了N-丙胺基磺酰胺（式II)或其盐，该化合 物可能在马西替坦后续的合成步骤中残留，影响到终产品的质量。因此，为了保证在马西替 坦的整个合成工艺中下游产品的质量，需要对N-丙胺基磺酰胺或其盐的纯度进行控制；同 时，需要对马西替坦及其制剂中N-丙胺基磺酰胺或其盐的含量进行控制，保证产品质量。
[0004]
[0005] 目前，尚没有任何文献报道（II)或其盐的检测方法，因此，研宄开发一种专属性 强、灵敏度高的N-丙胺基磺酰胺或其盐的检测方法显得至关重要。
【发明内容】
[0006] 根据N-丙胺基磺酰胺或其盐的结构特点，在近紫外区N-丙胺基磺酰胺或其盐不 产生吸收，无法采用常用的紫外分光光度法进行检测。因此，本发明解决的问题在于提供一 种专属性强、灵敏度高的检测方法。
[0007] 本发明通过如下技术方案实现：
[0008] -种N-丙胺基磺酰胺或其盐的检测方法，其特征在于，所述方法采用高效液相色 谱法进行检测，检测器为蒸发光散射检测器（ELSD)，流动相中含有一定比例的碱性添加剂。
[0009] 根据本发明，所述碱性添加剂为二乙胺、三乙胺、乙醇胺中的至少一种。
[0010] 根据本发明，所述流动相为正己烷-异丙醇-碱性添加剂，所述正己烷和异丙醇的 体积比为50~90 :10~50。碱性添加剂的量没有特别限制。优选地，正己烷：异丙醇：碱 性添加剂的量为50~90 :10~50 :0. 01~20。更优选地，正己烷：异丙醇：碱性添加剂的 量为60~80 :20~40 :0. 05~10,还更优选地，正己烷：异丙醇：碱性添加剂的量为65~ 75 :25 ~35 :0. 1 ~5。
[0011] 根据本发明，所述检测方法包括：
[0012] (1)采用正相条件进行分离；
[0013] (2)采用蒸发光散射检测器进行高效液相色谱法检测。
[0014] 根据本发明，所述正相条件采用硅胶柱进行。更优选地，所述正相条件采用正己 烷-异丙醇作为流动相，二乙胺或三乙胺作为碱性添加剂。
[0015] 根据本发明，所述N-丙胺基磺酰胺或其盐的检测方法，其具体操作步骤如下：
[0016] (1)溶液的制备：取N-丙胺基磺酰胺加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含 50.0yg的溶液，备用；
[0017] (2)色谱条件：
[0018] 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD)
[0019] 流动相：正己烷-异丙醇-二乙胺或三乙胺（50~90 :10~50 :0? 01~20)
[0020] 色谱柱：硅胶柱
[0021] 柱温：25 ~40°C
[0022] 流速：0? 5 ~1.Oml/min
[0023] 漂移管温度：35~60°C
[0024] 空气流速：1. 0 ~5.OL/min
[0025] (3)检测步骤：按照高效液相色谱法（例如中国药典2010年版二部附录VD)测 定，取供试溶液20y1注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0026] (4)按面积归一化法计算N-丙胺基磺酰胺的含量。
[0027] 本发明还提供一种马西替坦中杂质N-丙胺基磺酰胺或其盐的检测方法，其特征 在于，所述方法采用高效液相色谱法进行检测，检测器为蒸发光散射检测器（ELSD)，流动相 中含有一定比例的碱性添加剂。
[0028] 根据本发明，所述检测方法优选包括如下步骤：
[0029] (1)对照品溶液的制备：取N-丙胺基磺酰胺对照品加流动相溶解并稀释制成每 lml中约含50. 0yg的溶液作为对照品溶液；
[0030](2)供试品溶液的制备：取马西替坦，加流动相溶解并稀释成每1ml中约
[0031] 含50mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液；
[0032] (3)色谱条件：
[0033] 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD)
[0034] 流动相：正己烷-异丙醇-二乙胺或三乙胺（50~90 :10~50 :0? 01~20)
[0035] 色谱柱：硅胶柱
[0036] 柱温：25 ~40°C
[0037] 流速：0? 5 ~1.Oml/min
[0038] 漂移管温度：35~60°C
[0039] 空气流速：1. 0 ~5.OL/min
[0040] (4)检测步骤：按照高效液相色谱法（例如中国药典2010年版二部附录VD)测 定，取供试品溶液和对照品溶液各20y1注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0041] (5)按外标法计算供试品中N-丙胺基磺酰胺的含量。
[0042]本发明还提供一种含有马西替坦及其制剂中杂质N-丙胺基磺酰胺或其盐的检测 方法，其特征在于，所述方法采用高效液相色谱法进行检测，检测器为蒸发光散射检测器 (ELSD)，流动相中含有一定比例的碱性添加剂。
[0043] 所述检测方法及其各具体特征如前述任一项所述。
[0044] 本发明还提供上述检测方法的应用，其特征在于，所述方法用于N-丙胺基磺酰胺 或其盐的纯度或含量测定。
[0045] 本发明还提供上述检测方法的应用，其特征在于，所述方法用于在马西替坦中检 测杂质N-丙胺基磺酰胺或其盐。
[0046] 本发明还提供上述检测方法的应用，其特征在于，所述方法用于含有马西替坦及 其可药用盐形式的药物制剂中检测杂质N-丙胺基磺酰胺或其盐。
[0047] 优选地，所述马西替坦及其制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、控释制剂或缓释 制剂的形式。
[0048] 本发明通过改变流动相，检测器参数等多次试验确定了本发明的检测条件。本发 明的检测方法，可以很好地将主成分与其他物质完全分离，可以准确地测定其杂质的含量。 该方法具有如下优点：样品溶解速度快，1分钟内可完全溶解，分析时间一般在30分钟以 内；流动相的配制操作简单；该方法的N-丙胺基磺酰胺检测限为15. 75ng，灵敏度高；在该 方法下N-丙胺基磺酰胺的回收率在90%以上，平均回收率可以达到98. 16%，能满足N-丙 胺基磺酰胺定量测定的要求。另外，配制的溶液在36h内测定均较稳定。综上，确定的分析 方法稳定可靠，灵敏度高。
【附图说明】
[0049] 图1为实施例3中N-丙胺基磺酰胺线性关系图；
[0050] 图2为实施例3中马西替坦线性关系图；
[0051] 图3为实施例4中N-丙胺基磺酰胺定位HPLC图；
[0052] 图4为实施例4中N-丙胺基磺酰胺与马西替坦混合溶液HPLC图；
[0053] 图5为实施例8中检测马西替坦供试品中N-丙胺基磺酰胺含量的HPLC图。
【具体实施方式】
[0054] 以下结合实施例对本发明进行详细说明。但本领域技术人员了解，下述实施例不 是对本发明保护范围的限制，任何在本发明基础上做出的改进和变化都在本发明的保护范 围之内。
[0055] 实施例1色谱备件的诜择
[0056] 仪器与条件：Alltech液相色谱系统，蒸发光散射检测器（2000ES)，色谱柱： InnovalSilica柱（250X4.6mm，100A，5ym);柱温 30°C。
[0057] 试验步骤：
[0058] 供试液配制：取N-丙胺基磺酰胺和马西替坦，配制为含N-丙胺基磺酰胺约 50yg/ml，马西替坦约50.Omg/ml的溶液；
[0059] 色谱条件1 :Alltech液相色谱系统，蒸发光散射检测器（2000ES)，色谱柱： InnovalSilica柱（250X4. 6mm，100A，5ym);以正己烧-异丙醇为流动相（90:10);漂移 管温度：35°C。
[0060] 色谱条件2:Alltech液相色谱系统，蒸发光散射检测器（2000ES)，色谱柱： InnovalSilica柱（250X4. 6mm，100A，5ym);以正己烧-异丙醇-二乙胺为流动相 (80:20:0.2);漂移管温度：40°C。
[0061] 色谱条件3 :Alltech液相色谱系统，蒸发光散射检测器（2000ES)，色谱柱： InnovalSilica柱（250X4. 6mm，100A，5ym);以正己烧-异丙醇-三乙胺为流动相 (50:50:0.5);漂移管温度：60°C。
[0062] 色谱条件4 :Alltech液相色谱系统，蒸发光散射检测器（2000ES)，色谱柱： InnovalSilica柱（250X4. 6mm，100A，5ym);以正己烧-异丙醇-乙醇胺为流动相 (65:35:0. 1);漂移管温度：45°C。
[0063] 取供试液20ul，注入色谱仪，分别照上述条件进行检测。试验结果见下表。
[0064] 表1 :流动相选择试验结果
[0066] 实施例2定量限和检测限
[0067] 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD)
[0068] 流动相：正己烧_异丙醇_ ^乙胺（80 :20 :0. 2)
[0069] 色谱柱：硅胶
[0070] 流速：0? 5ml/min
[0071] 漂移管温度：40 °C
[0072] 空气流速：3. 0L
[0073] 试验步骤：
[0074] 精密称取N-丙胺基磺酰胺适量，加流动相溶解并进行梯度稀释，结果：
[0075] 供试品溶液浓度为6. 042yg/ml时色谱图中信噪比（S/N)约为10,经过计算，供试 品的定量限为54. 35ng;
[0076] 供试品溶液浓度为2. 016yg/ml时色谱图中信噪比（S/N)约为3,经过计算，供试 品的检测限为15. 75ng。
[0077] 实施例3线件试骀
[0078] 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD)
[0079] 流动相：正己烧_异丙醇_ ^乙胺（80 :20 :0. 2)
[0080] 色谱柱：硅胶
[0081] 流速：0? 5ml/min
[0082] 漂移管温度：40°C
[0083] 空气流速：3. 0L
[0084] 试验步骤：
[0085] 分别称取N-丙胺基磺酰胺以及马西替坦，用流动相梯度稀释制成供试品溶液，分 别进行测定，以供试品溶液浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标进行线性回归。
[0088] 图1为N-丙胺基磺酰胺线性关系图。从图中可以看出，N-丙胺基磺酰胺溶液的 浓度与其相应的色谱峰面积呈良好的线性关系，相关系数为〇. 999,满足定量测定的要求。
[0089] 图2为马西替坦线性关系图，从图中可以看出，马西替坦溶液的浓度与其相应的 色谱峰面积呈良好的线性关系，相关系数为0. 999,满足定量测定的要求。
[0090] 实施例4宙位实骀
[0091] 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD)
[0092] 流动相：正己烧_异丙醇_ ^乙胺（80 :20 :0. 2)
[0093] 色谱柱：硅胶
[0094] 流速：0? 5ml/min
[0095] 漂移管温度：40°C
[0096] 空气流速：3. 0L
[0097] 试验步骤：
[0098] 供试液配制：取N-丙胺基磺酰胺和马西替坦，分别配制含N-丙胺基磺酰胺约 500yg/ml的溶液，以及含有N-丙胺基磺酰胺约50yg/ml和马西替坦约50.Omg/ml的混合 溶液；
[0099] 分别取上述溶液20y1注入液相色谱仪，记录色谱图，N-丙胺基磺酰胺定位HPLC 图的结果如图3所示，其中保留时间在5. 041处即为N-丙胺基磺酰胺的峰；N-丙胺基磺酰 胺+马西替坦混合溶液定位HPLC图的结果如图4所示，其中保留时间在5. 191处即为N-丙 胺基磺酰胺的峰，保留时间在6. 100处即为马西替坦的峰。
[0100] 实施例5精密度试验
[0101] 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD)
[0102] 流动相：正己烧_异丙醇_ ^乙胺（80 :20 :0? 2)
[0103] 色谱柱：硅胶
[0104] 流速：0? 5ml/min
[0105] 漂移管温度：40°C
[0106] 空气流速：3.0L
[0107] 试验步骤：
[0108] 分别取实施例1供试品溶液20y1注入液相色谱仪，记录色谱图，连续测定6次， 结果见下表：
[0110] 试验结果表明本方法的精密度良好。
[0111] 实施例6回收率试骀
[0112] 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD)
[0113] 流动相：正己烧_异丙醇_ ^乙胺（80 :20 :0. 2)
[0114] 色谱柱：硅胶
[0115] 流速：0? 5ml/min
[0116] 漂移管温度：40°C
[0117] 空气流速：3.0L
[0118] 试验步骤：
[0119] 取马西替坦供试品，加流动相制成每1毫升中含1.Omg的溶液，作为供试品溶液， 在供试品溶液中分别加入N-丙胺基磺酰胺，使得每1毫升的供试品溶液中分别含有N-丙 胺基磺酰胺〇. 8yg，1. 0yg，1. 2yg;测定，计算N-丙胺基磺酰胺的回收率。
[0120] N-丙胺基磺酰胺回收率试验结果
[0121]
[0122] 试验结果表明，该方法的回收率良好，满足杂质定量测定的要求。
[0123] 实施例7稳宙件试骀
[0124] 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD)
[0125] 流动相：正己烧_异丙醇_ ^乙胺（80 :20 :0. 2)
[0126] 色谱柱：硅胶
[0127] 流速：0? 5ml/min
[0128] 漂移管温度：40°C
[0129] 空气流速：5. 0L
[0130] 试验步骤：
[0131] 分别取实施例1供试品溶液，放置36小时，分别于第0、4、8、12、24、36小时取 20y1注入液相色谱仪，记录色谱图，考察供试品溶液的稳定性，结果见下表：
[0134] 试验结果表明，该方法条件下供试品溶液的稳定性良好，符合测定要求。
[0135] 实施例8马西替坦中N-丙胺基磺酰胺的检测
[0136] 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD)
[0137] 流动相：正己烧_异丙醇_ ^乙胺（80 :20 :0. 2)
[0138] 色谱柱：硅胶
[0139] 流速：0? 5ml/min
[0140] 漂移管温度：40°C
[0141] 空气流速：3. 0L
[0142] 对照品溶液制备：取N-丙胺基磺酰胺适量，加流动相适量溶解并稀释制成 50. 0yg的溶液，摇匀作为对照品溶液。
[0143] 供试品溶液制备：取马西替坦，加流动相溶解并稀释成5mg/ml的溶液，摇匀，作为 供试品溶液。
[0144] 检测/计算：精密量取对照品溶液和供试品溶液各20y1注入液相色谱仪，记录色 谱图。计算N-丙胺基磺酰胺含量。
[0145] 检测结果：见图5。根据图5可以看出，马西替坦样品中未检出N-丙胺基磺酰胺。
【主权项】
1. 一种N-丙胺基磺酰胺或其盐的检测方法，其特征在于，所述方法采用高效液相色谱 法进行检测，检测器为蒸发光散射检测器（ELSD)，流动相中含有碱性添加剂。2. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述碱性添加剂为二乙胺、三乙胺以 及乙醇胺中的至少一种。3. 根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述流动相为正己烷-异丙 醇-碱性添加剂，所述正己烷和异丙醇的体积比为50~90 :10~50。 优选地，正己烷：异丙醇：碱性添加剂的量为50~90 :10~50 :0.01~20(体积比）。 更优选地，正己烷：异丙醇：碱性添加剂的量为60~80 :20~40 :0. 05~10,还更优选地， 正己烷：异丙醇：碱性添加剂的量为65~75 :25~35 :0. 1~5。4. 根据权利要求1-3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括： (1) 采用正相条件进行分离； (2) 采用蒸发光散射检测器进行高效液相色谱法检测。 优选地，所述正相条件采用硅胶色谱柱。 更优选地，所述正相条件采用流动相：正己烷-异丙醇-二乙胺或三乙胺（50~90 :10~50 :0.01~20)。5. 根据权利要求1-3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述具体操作步骤如下： (1) 溶液的制备：取N-丙胺基磺酰胺对照品加流动相溶解并稀释制成每Iml中约含 1.0Ug的溶液作为对照品溶液； (2) 色谱条件： 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD) 流动相：正己烷-异丙醇-二乙胺或三乙胺（50~90 :10~50 :0. 01~20) 色谱柱：硅胶柱 柱温：25~40°C 流速：〇? 5~LOml/min 漂移管温度：35~60°C 空气流速丄〇~5.OL/min (3) 检测步骤：按照高效液相色谱法（例如中国药典2010年版二部附录VD)测定，取 供试品溶液和对照品溶液各20y1，注入液相色谱仪，记录色谱图。 (4) 按外标法计算N-丙胺基磺酰胺的含量。6. -种马西替坦中杂质N-丙胺基磺酰胺或其盐的检测方法，其特征在于，所述方法采 用权利要求1-5任一项的检测方法进行。7. -种含有马西替坦制剂中杂质N-丙胺基磺酰胺或其盐的检测方法，其特征在于，所 述方法采用权利要求1-5任一项的检测方法进行。8. 权利要求1-5任一项所述的检测方法的应用，其特征在于，所述方法用于N-丙胺基 磺酰胺或其盐的纯度或含量测定。9. 根据权利要求1-5任一项所述的检测方法的应用，其特征在于，所述方法用于在马 西替坦中检测杂质N-丙胺基磺酰胺或其盐。10. 根据权利要求1-5任一项所述的检测方法的应用，其特征在于，所述方法用于在含 有马西替坦制剂中检测杂质N-丙胺基磺酰胺或其盐；所述的马西替坦制剂优选为片剂、胶 囊剂、颗粒剂、注射剂、控释制剂或缓释制剂的形式。
【专利摘要】本发明提供一种马西替坦中间体的检测方法及其应用，所述中间体为N-丙胺基磺酰胺或其盐，其特征在于，所述方法采用高效液相色谱法进行检测，检测器为蒸发光散射检测器(ELSD)，流动相中含有一定比例的碱性添加剂。本发明还提供该检测方法的应用。本发明的检测方法，可以很好地将主成分与其他物质完全分离，可以准确地测定其杂质的含量。该方法具有如下优点：样品溶解速度快，1分钟内可完全溶解，分析时间一般在30分钟以内；流动相的配制操作简单；该方法的N-丙胺基磺酰胺检测限为15.75ng，灵敏度高；在该方法下N-丙胺基磺酰胺的回收率在90％以上，平均回收率可以达到98.16％，能满足N-丙胺基磺酰胺定量测定的要求。另外，配制的溶液在36h内测定均较稳定。综上，确定的分析方法稳定可靠，灵敏度高。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN104897833
【申请号】CN201510247288
【发明人】郭瑞, 李娟 , 王晓玲, 刘华英
【申请人】成都克莱蒙医药科技有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月15日
【技术领域】
[0001] 本专利涉及一种用于治疗肺动脉高压药物的中间体N-丙胺基磺酰胺或其盐的检 测方法，以及在药物马西替坦及其制剂中的应用。
【背景技术】
[0002] 马西替坦（macitentan)是一个小分子、高度有效的组织祀向内皮素受体诘抗剂， 同时具有高度亲脂性，对内皮素-1 (ET-1)及其2个受体（ETA、ETB受体）具有双重抑制作 用，且具有组织靶向性。内皮素与其受体结合后能够促进血管平滑肌的收缩，还可以通过组 织机制诱导血管平滑肌细胞的增殖和纤维化，引起血管炎症，改变组织结构，内皮素在众多 心血管疾病的发生、发展过程中均发挥重要作用。因此，马西替坦作为内皮素受体拮抗剂， 有重要的临床意义。该药由瑞士Actelion公司研制开发，已在美国和欧洲国家上市。
[0003] 在马西替坦（式I)的合成工艺中用到了N-丙胺基磺酰胺（式II)或其盐，该化合 物可能在马西替坦后续的合成步骤中残留，影响到终产品的质量。因此，为了保证在马西替 坦的整个合成工艺中下游产品的质量，需要对N-丙胺基磺酰胺或其盐的纯度进行控制；同 时，需要对马西替坦及其制剂中N-丙胺基磺酰胺或其盐的含量进行控制，保证产品质量。
[0004]
[0005] 目前，尚没有任何文献报道（II)或其盐的检测方法，因此，研宄开发一种专属性 强、灵敏度高的N-丙胺基磺酰胺或其盐的检测方法显得至关重要。
【发明内容】
[0006] 根据N-丙胺基磺酰胺或其盐的结构特点，在近紫外区N-丙胺基磺酰胺或其盐不 产生吸收，无法采用常用的紫外分光光度法进行检测。因此，本发明解决的问题在于提供一 种专属性强、灵敏度高的检测方法。
[0007] 本发明通过如下技术方案实现：
[0008] -种N-丙胺基磺酰胺或其盐的检测方法，其特征在于，所述方法采用高效液相色 谱法进行检测，检测器为蒸发光散射检测器（ELSD)，流动相中含有一定比例的碱性添加剂。
[0009] 根据本发明，所述碱性添加剂为二乙胺、三乙胺、乙醇胺中的至少一种。
[0010] 根据本发明，所述流动相为正己烷-异丙醇-碱性添加剂，所述正己烷和异丙醇的 体积比为50~90 :10~50。碱性添加剂的量没有特别限制。优选地，正己烷：异丙醇：碱 性添加剂的量为50~90 :10~50 :0. 01~20。更优选地，正己烷：异丙醇：碱性添加剂的 量为60~80 :20~40 :0. 05~10,还更优选地，正己烷：异丙醇：碱性添加剂的量为65~ 75 :25 ~35 :0. 1 ~5。
[0011] 根据本发明，所述检测方法包括：
[0012] (1)采用正相条件进行分离；
[0013] (2)采用蒸发光散射检测器进行高效液相色谱法检测。
[0014] 根据本发明，所述正相条件采用硅胶柱进行。更优选地，所述正相条件采用正己 烷-异丙醇作为流动相，二乙胺或三乙胺作为碱性添加剂。
[0015] 根据本发明，所述N-丙胺基磺酰胺或其盐的检测方法，其具体操作步骤如下：
[0016] (1)溶液的制备：取N-丙胺基磺酰胺加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含 50.0yg的溶液，备用；
[0017] (2)色谱条件：
[0018] 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD)
[0019] 流动相：正己烷-异丙醇-二乙胺或三乙胺（50~90 :10~50 :0? 01~20)
[0020] 色谱柱：硅胶柱
[0021] 柱温：25 ~40°C
[0022] 流速：0? 5 ~1.Oml/min
[0023] 漂移管温度：35~60°C
[0024] 空气流速：1. 0 ~5.OL/min
[0025] (3)检测步骤：按照高效液相色谱法（例如中国药典2010年版二部附录VD)测 定，取供试溶液20y1注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0026] (4)按面积归一化法计算N-丙胺基磺酰胺的含量。
[0027] 本发明还提供一种马西替坦中杂质N-丙胺基磺酰胺或其盐的检测方法，其特征 在于，所述方法采用高效液相色谱法进行检测，检测器为蒸发光散射检测器（ELSD)，流动相 中含有一定比例的碱性添加剂。
[0028] 根据本发明，所述检测方法优选包括如下步骤：
[0029] (1)对照品溶液的制备：取N-丙胺基磺酰胺对照品加流动相溶解并稀释制成每 lml中约含50. 0yg的溶液作为对照品溶液；
[0030](2)供试品溶液的制备：取马西替坦，加流动相溶解并稀释成每1ml中约
[0031] 含50mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液；
[0032] (3)色谱条件：
[0033] 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD)
[0034] 流动相：正己烷-异丙醇-二乙胺或三乙胺（50~90 :10~50 :0? 01~20)
[0035] 色谱柱：硅胶柱
[0036] 柱温：25 ~40°C
[0037] 流速：0? 5 ~1.Oml/min
[0038] 漂移管温度：35~60°C
[0039] 空气流速：1. 0 ~5.OL/min
[0040] (4)检测步骤：按照高效液相色谱法（例如中国药典2010年版二部附录VD)测 定，取供试品溶液和对照品溶液各20y1注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0041] (5)按外标法计算供试品中N-丙胺基磺酰胺的含量。
[0042]本发明还提供一种含有马西替坦及其制剂中杂质N-丙胺基磺酰胺或其盐的检测 方法，其特征在于，所述方法采用高效液相色谱法进行检测，检测器为蒸发光散射检测器 (ELSD)，流动相中含有一定比例的碱性添加剂。
[0043] 所述检测方法及其各具体特征如前述任一项所述。
[0044] 本发明还提供上述检测方法的应用，其特征在于，所述方法用于N-丙胺基磺酰胺 或其盐的纯度或含量测定。
[0045] 本发明还提供上述检测方法的应用，其特征在于，所述方法用于在马西替坦中检 测杂质N-丙胺基磺酰胺或其盐。
[0046] 本发明还提供上述检测方法的应用，其特征在于，所述方法用于含有马西替坦及 其可药用盐形式的药物制剂中检测杂质N-丙胺基磺酰胺或其盐。
[0047] 优选地，所述马西替坦及其制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、控释制剂或缓释 制剂的形式。
[0048] 本发明通过改变流动相，检测器参数等多次试验确定了本发明的检测条件。本发 明的检测方法，可以很好地将主成分与其他物质完全分离，可以准确地测定其杂质的含量。 该方法具有如下优点：样品溶解速度快，1分钟内可完全溶解，分析时间一般在30分钟以 内；流动相的配制操作简单；该方法的N-丙胺基磺酰胺检测限为15. 75ng，灵敏度高；在该 方法下N-丙胺基磺酰胺的回收率在90%以上，平均回收率可以达到98. 16%，能满足N-丙 胺基磺酰胺定量测定的要求。另外，配制的溶液在36h内测定均较稳定。综上，确定的分析 方法稳定可靠，灵敏度高。
【附图说明】
[0049] 图1为实施例3中N-丙胺基磺酰胺线性关系图；
[0050] 图2为实施例3中马西替坦线性关系图；
[0051] 图3为实施例4中N-丙胺基磺酰胺定位HPLC图；
[0052] 图4为实施例4中N-丙胺基磺酰胺与马西替坦混合溶液HPLC图；
[0053] 图5为实施例8中检测马西替坦供试品中N-丙胺基磺酰胺含量的HPLC图。
【具体实施方式】
[0054] 以下结合实施例对本发明进行详细说明。但本领域技术人员了解，下述实施例不 是对本发明保护范围的限制，任何在本发明基础上做出的改进和变化都在本发明的保护范 围之内。
[0055] 实施例1色谱备件的诜择
[0056] 仪器与条件：Alltech液相色谱系统，蒸发光散射检测器（2000ES)，色谱柱： InnovalSilica柱（250X4.6mm，100A，5ym);柱温 30°C。
[0057] 试验步骤：
[0058] 供试液配制：取N-丙胺基磺酰胺和马西替坦，配制为含N-丙胺基磺酰胺约 50yg/ml，马西替坦约50.Omg/ml的溶液；
[0059] 色谱条件1 :Alltech液相色谱系统，蒸发光散射检测器（2000ES)，色谱柱： InnovalSilica柱（250X4. 6mm，100A，5ym);以正己烧-异丙醇为流动相（90:10);漂移 管温度：35°C。
[0060] 色谱条件2:Alltech液相色谱系统，蒸发光散射检测器（2000ES)，色谱柱： InnovalSilica柱（250X4. 6mm，100A，5ym);以正己烧-异丙醇-二乙胺为流动相 (80:20:0.2);漂移管温度：40°C。
[0061] 色谱条件3 :Alltech液相色谱系统，蒸发光散射检测器（2000ES)，色谱柱： InnovalSilica柱（250X4. 6mm，100A，5ym);以正己烧-异丙醇-三乙胺为流动相 (50:50:0.5);漂移管温度：60°C。
[0062] 色谱条件4 :Alltech液相色谱系统，蒸发光散射检测器（2000ES)，色谱柱： InnovalSilica柱（250X4. 6mm，100A，5ym);以正己烧-异丙醇-乙醇胺为流动相 (65:35:0. 1);漂移管温度：45°C。
[0063] 取供试液20ul，注入色谱仪，分别照上述条件进行检测。试验结果见下表。
[0064] 表1 :流动相选择试验结果
[0066] 实施例2定量限和检测限
[0067] 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD)
[0068] 流动相：正己烧_异丙醇_ ^乙胺（80 :20 :0. 2)
[0069] 色谱柱：硅胶
[0070] 流速：0? 5ml/min
[0071] 漂移管温度：40 °C
[0072] 空气流速：3. 0L
[0073] 试验步骤：
[0074] 精密称取N-丙胺基磺酰胺适量，加流动相溶解并进行梯度稀释，结果：
[0075] 供试品溶液浓度为6. 042yg/ml时色谱图中信噪比（S/N)约为10,经过计算，供试 品的定量限为54. 35ng;
[0076] 供试品溶液浓度为2. 016yg/ml时色谱图中信噪比（S/N)约为3,经过计算，供试 品的检测限为15. 75ng。
[0077] 实施例3线件试骀
[0078] 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD)
[0079] 流动相：正己烧_异丙醇_ ^乙胺（80 :20 :0. 2)
[0080] 色谱柱：硅胶
[0081] 流速：0? 5ml/min
[0082] 漂移管温度：40°C
[0083] 空气流速：3. 0L
[0084] 试验步骤：
[0085] 分别称取N-丙胺基磺酰胺以及马西替坦，用流动相梯度稀释制成供试品溶液，分 别进行测定，以供试品溶液浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标进行线性回归。
[0088] 图1为N-丙胺基磺酰胺线性关系图。从图中可以看出，N-丙胺基磺酰胺溶液的 浓度与其相应的色谱峰面积呈良好的线性关系，相关系数为〇. 999,满足定量测定的要求。
[0089] 图2为马西替坦线性关系图，从图中可以看出，马西替坦溶液的浓度与其相应的 色谱峰面积呈良好的线性关系，相关系数为0. 999,满足定量测定的要求。
[0090] 实施例4宙位实骀
[0091] 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD)
[0092] 流动相：正己烧_异丙醇_ ^乙胺（80 :20 :0. 2)
[0093] 色谱柱：硅胶
[0094] 流速：0? 5ml/min
[0095] 漂移管温度：40°C
[0096] 空气流速：3. 0L
[0097] 试验步骤：
[0098] 供试液配制：取N-丙胺基磺酰胺和马西替坦，分别配制含N-丙胺基磺酰胺约 500yg/ml的溶液，以及含有N-丙胺基磺酰胺约50yg/ml和马西替坦约50.Omg/ml的混合 溶液；
[0099] 分别取上述溶液20y1注入液相色谱仪，记录色谱图，N-丙胺基磺酰胺定位HPLC 图的结果如图3所示，其中保留时间在5. 041处即为N-丙胺基磺酰胺的峰；N-丙胺基磺酰 胺+马西替坦混合溶液定位HPLC图的结果如图4所示，其中保留时间在5. 191处即为N-丙 胺基磺酰胺的峰，保留时间在6. 100处即为马西替坦的峰。
[0100] 实施例5精密度试验
[0101] 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD)
[0102] 流动相：正己烧_异丙醇_ ^乙胺（80 :20 :0? 2)
[0103] 色谱柱：硅胶
[0104] 流速：0? 5ml/min
[0105] 漂移管温度：40°C
[0106] 空气流速：3.0L
[0107] 试验步骤：
[0108] 分别取实施例1供试品溶液20y1注入液相色谱仪，记录色谱图，连续测定6次， 结果见下表：
[0110] 试验结果表明本方法的精密度良好。
[0111] 实施例6回收率试骀
[0112] 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD)
[0113] 流动相：正己烧_异丙醇_ ^乙胺（80 :20 :0. 2)
[0114] 色谱柱：硅胶
[0115] 流速：0? 5ml/min
[0116] 漂移管温度：40°C
[0117] 空气流速：3.0L
[0118] 试验步骤：
[0119] 取马西替坦供试品，加流动相制成每1毫升中含1.Omg的溶液，作为供试品溶液， 在供试品溶液中分别加入N-丙胺基磺酰胺，使得每1毫升的供试品溶液中分别含有N-丙 胺基磺酰胺〇. 8yg，1. 0yg，1. 2yg;测定，计算N-丙胺基磺酰胺的回收率。
[0120] N-丙胺基磺酰胺回收率试验结果
[0121]
[0122] 试验结果表明，该方法的回收率良好，满足杂质定量测定的要求。
[0123] 实施例7稳宙件试骀
[0124] 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD)
[0125] 流动相：正己烧_异丙醇_ ^乙胺（80 :20 :0. 2)
[0126] 色谱柱：硅胶
[0127] 流速：0? 5ml/min
[0128] 漂移管温度：40°C
[0129] 空气流速：5. 0L
[0130] 试验步骤：
[0131] 分别取实施例1供试品溶液，放置36小时，分别于第0、4、8、12、24、36小时取 20y1注入液相色谱仪，记录色谱图，考察供试品溶液的稳定性，结果见下表：
[0134] 试验结果表明，该方法条件下供试品溶液的稳定性良好，符合测定要求。
[0135] 实施例8马西替坦中N-丙胺基磺酰胺的检测
[0136] 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD)
[0137] 流动相：正己烧_异丙醇_ ^乙胺（80 :20 :0. 2)
[0138] 色谱柱：硅胶
[0139] 流速：0? 5ml/min
[0140] 漂移管温度：40°C
[0141] 空气流速：3. 0L
[0142] 对照品溶液制备：取N-丙胺基磺酰胺适量，加流动相适量溶解并稀释制成 50. 0yg的溶液，摇匀作为对照品溶液。
[0143] 供试品溶液制备：取马西替坦，加流动相溶解并稀释成5mg/ml的溶液，摇匀，作为 供试品溶液。
[0144] 检测/计算：精密量取对照品溶液和供试品溶液各20y1注入液相色谱仪，记录色 谱图。计算N-丙胺基磺酰胺含量。
[0145] 检测结果：见图5。根据图5可以看出，马西替坦样品中未检出N-丙胺基磺酰胺。
【主权项】
1. 一种N-丙胺基磺酰胺或其盐的检测方法，其特征在于，所述方法采用高效液相色谱 法进行检测，检测器为蒸发光散射检测器（ELSD)，流动相中含有碱性添加剂。2. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述碱性添加剂为二乙胺、三乙胺以 及乙醇胺中的至少一种。3. 根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述流动相为正己烷-异丙 醇-碱性添加剂，所述正己烷和异丙醇的体积比为50~90 :10~50。 优选地，正己烷：异丙醇：碱性添加剂的量为50~90 :10~50 :0.01~20(体积比）。 更优选地，正己烷：异丙醇：碱性添加剂的量为60~80 :20~40 :0. 05~10,还更优选地， 正己烷：异丙醇：碱性添加剂的量为65~75 :25~35 :0. 1~5。4. 根据权利要求1-3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括： (1) 采用正相条件进行分离； (2) 采用蒸发光散射检测器进行高效液相色谱法检测。 优选地，所述正相条件采用硅胶色谱柱。 更优选地，所述正相条件采用流动相：正己烷-异丙醇-二乙胺或三乙胺（50~90 :10~50 :0.01~20)。5. 根据权利要求1-3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述具体操作步骤如下： (1) 溶液的制备：取N-丙胺基磺酰胺对照品加流动相溶解并稀释制成每Iml中约含 1.0Ug的溶液作为对照品溶液； (2) 色谱条件： 检测器：蒸发光散射检测器（ELSD) 流动相：正己烷-异丙醇-二乙胺或三乙胺（50~90 :10~50 :0. 01~20) 色谱柱：硅胶柱 柱温：25~40°C 流速：〇? 5~LOml/min 漂移管温度：35~60°C 空气流速丄〇~5.OL/min (3) 检测步骤：按照高效液相色谱法（例如中国药典2010年版二部附录VD)测定，取 供试品溶液和对照品溶液各20y1，注入液相色谱仪，记录色谱图。 (4) 按外标法计算N-丙胺基磺酰胺的含量。6. -种马西替坦中杂质N-丙胺基磺酰胺或其盐的检测方法，其特征在于，所述方法采 用权利要求1-5任一项的检测方法进行。7. -种含有马西替坦制剂中杂质N-丙胺基磺酰胺或其盐的检测方法，其特征在于，所 述方法采用权利要求1-5任一项的检测方法进行。8. 权利要求1-5任一项所述的检测方法的应用，其特征在于，所述方法用于N-丙胺基 磺酰胺或其盐的纯度或含量测定。9. 根据权利要求1-5任一项所述的检测方法的应用，其特征在于，所述方法用于在马 西替坦中检测杂质N-丙胺基磺酰胺或其盐。10. 根据权利要求1-5任一项所述的检测方法的应用，其特征在于，所述方法用于在含 有马西替坦制剂中检测杂质N-丙胺基磺酰胺或其盐；所述的马西替坦制剂优选为片剂、胶 囊剂、颗粒剂、注射剂、控释制剂或缓释制剂的形式。
【专利摘要】本发明提供一种马西替坦中间体的检测方法及其应用，所述中间体为N-丙胺基磺酰胺或其盐，其特征在于，所述方法采用高效液相色谱法进行检测，检测器为蒸发光散射检测器(ELSD)，流动相中含有一定比例的碱性添加剂。本发明还提供该检测方法的应用。本发明的检测方法，可以很好地将主成分与其他物质完全分离，可以准确地测定其杂质的含量。该方法具有如下优点：样品溶解速度快，1分钟内可完全溶解，分析时间一般在30分钟以内；流动相的配制操作简单；该方法的N-丙胺基磺酰胺检测限为15.75ng，灵敏度高；在该方法下N-丙胺基磺酰胺的回收率在90％以上，平均回收率可以达到98.16％，能满足N-丙胺基磺酰胺定量测定的要求。另外，配制的溶液在36h内测定均较稳定。综上，确定的分析方法稳定可靠，灵敏度高。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN104897833
【申请号】CN201510247288
【发明人】郭瑞, 李娟 , 王晓玲, 刘华英
【申请人】成都克莱蒙医药科技有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月15日
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