一种多组分综合量化的中药质量评控方法及应用
一种多组分综合量化的中药质量评控方法及应用
【技术领域】
[0001] 本申请涉及一种多组分综合量化的中药质量的评价方法。
【背景技术】
[0002] 中药质量评价一直是中药研宄与生产中的热点和难点，也是中药现代化的重要基 础和关键。目前，中药质量评价大多参照植物化学和西药质量评价的模式，采用单一测定药 材中某些化学成分的含量来评价药材的质量。从传统的中医药观点来看，单一成分的控制 难以真正反映中药的功效，尤其是复方制剂，检测任何一种指标成分均不能反映其所体现 的整体疗效。生物评价因具有药效相关、整体可控等技术优势，符合中医药特点的质量标准 控制模式及方法[1]，已成为中药质量标准化的重要发展方向之一，并且已经有相关文献报 道[2、3]。
[0003] 大黄别名将军、黄良、火参、肤如等，是我国"中药四维"之一。2010版《中国药典》 收载的正品大黄药材的3个重要基原包括：寥科植物掌叶大黄RheumpalmatumL.、唐古特 大黄RheumtanguticumMaxim,exBalf?或药用大黄RheumofficinaleBaill.的干燥根 和根茎[4]，主产于甘肃东南部、四川西部、青海东部、西藏东部等高寒地区，具有泻下攻积， 泻火解毒，凉血止血，活血祛瘀，清泻湿热的功效[5]。但是现有的大黄药材质量控制标准， 多数测定以经过盐酸水解后的游离蒽醌苷元含量作为其质量优劣的评价指标[4]，这与大 黄泻下通便的临床疗效关联度不强，不能整体全面的评价大黄的质量。现有文献表明[6、7、 8]，大黄中蒽醌类和二蒽酮类成分是其泻下通便的主要药效成分。
[0004] 生物效价的定义：所谓生物效价通常是以其完成某种特定的生理作用的程度作指 标来衡量，而且标准参比物作为100 %进行比较而得，故生物效价是相对值，可大于或小于 100%〇
[0005] 文献[9、10]虽然涉及了基于小鼠复方地芬诺酯便秘模型的致泻效价测定，但是 文献中均采用的是大黄的水煎煮粗提物给药，并不能具体的反映出单个致泻效应成分的泻 下强度，这也就无法与其含量测定结果相关联。因此是一种粗略的效价测定。
[0006] 鉴于大黄饮片是临床用于便秘、慢性肾病、肝胆疾病的常用中药，如何评价不同批 次、不同产地、不同来源的大黄饮片质量稳定性、均一性是摆在人们面前的一个亟须关注、 解决的难点，因此开发一种能从整体上反映大黄泻下疗效的生物效价测定方法显得十分必 要和急迫。
[0007] 参考文献
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[0017] [10]李会芳，王伽伯，肖小河等.致泻效价检测用于大黄品质评价的方法研宄 [J]?中国中药杂志，2008, 33, 11 :1309-1311.
【发明内容】
[0018] 本发明的第一个目的是提供一种中药质量评价方法。
[0019] 本发明的中药质量评价方法，包括（1)测定与所述中药的临床疗效相关的活性成 分的含量；（2)测定所述活性成分的生物效价；（3)利用下述公式I来计算所述中药的活 性成分的效应成分当量值：(4)利用效应成分当量值通过适当换算得到药材的实际用量数 值；
[0020] EV=A:XC!+A2XC2+......AjXCj-------公式I
[0021] 其中EV表示活性成分的效应成分当量值；
[0022] Ai表示活性成分1的效应成分当量系数；
[0023] Q表示每1克中药中活性成分1的含量（mg/g);
[0024] A2表示活性成分2的效应成分当量系数；
[0025] C2表示每1克中药中的活性成分2的含量（mg/g);
[0026] Ai表示活性成分i的效应成分当量系数；
[0027] Q表示每1克中药中活性成分1的含量（mg/g)。
[0028] 本发明的第二个目的是提供一种基于大黄原药材或大黄饮片的致泻效应当量因 子来调节大黄原药材或大黄饮片的用量的方法。
[0029] 本发明的基于大黄原药材或大黄饮片的致泻效应当量因子来调节大黄原药材或 大黄饮片的用量的方法包括以下步骤：
[0030] (a)采用液相色谱法测量所述大黄原药材或大黄饮片中的芦荟大黄 素-8-0- -D-葡萄糖苷、大黄酸-8-0- -D-葡萄糖苷、大黄酚-8-0- -D-葡萄糖苷、大黄 素-8-0-0 -D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-0-0 -D-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、 大黄酚、大黄素甲醚、番泻苷A、番泻苷B共计12种活性成分的含量；
[0031] (b)利用公式II计算待测大黄药材的致泻效应成分当量值EV:
[0032] EV= 1. 000XQ+0. 647XC2+0. 659XC3+0. 722XC4+0. 455XCs+0. 475XC6+0. 559X C7+0. 383XC8+0. 468XC9+0. 273XC10+0. 263XCn+0. 521XC12-------公式II
[0033] Q代表每1克大黄药材/饮片中的番泻苷A的含量，mg/g;
[0034] C2代表每1克大黄药材/饮片中的番泻苷B的含量，mg/g;
[0035] C3代表每1克大黄药材/饮片中的芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/ g;
[0036] C4代表每1克大黄药材/饮片中的大黄酸-8-0- 0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/g;
[0037] C5代表每1克大黄药材/饮片中的大黄酚-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/g;
[0038] C6代表每1克大黄药材/饮片中的大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/g;
[0039] C7代表每1克大黄药材/饮片中的大黄素甲醚-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/ g;
[0040] C8代表每1克大黄药材/饮片中芦荟大黄素的含量，mg/g;
[0041] C9代表每1克大黄药材/饮片中的大黄酸的含量，mg/g;
[0042] C1(l代表每1克大黄药材/饮片中的大黄酚的含量，mg/g;
[0043] Cn代表每1克大黄药材/饮片中的大黄素的含量，mg/g;
[0044] C12代表每1克大黄药材/饮片中的大黄素甲醚的含量，mg/g。
[0045] (c)根据计算得到的致泻效应成分当量值EV来调节大黄原药材或大黄饮片的用 量。
[0046] 在一个实施方案中，步骤（a)包括：
[0047] 色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，C18柱；
[0048] 流动相：以甲醇（A)_0. 1 %磷酸水溶液⑶为流动相；
[0049] 流动相流速：0? 1-0. 4ml/min;
[0050] 洗脱条件：0 ~5min:38 - 43 (A)，5 ~7min:43 - 52 (A)，7 ~12min:52 - 57 (A)， 12 ~15min:57 - 72 (A)，15 ~17min:72 - 79 (A)，17 ~20min:79 - 85 (A);
[0051] 检测波长：250-420nm;
[0052] 柱温：22-42°C;
[0053] 进样量：1. 0-4. 0u1 ;
[0054] 理论塔板数按大黄素甲醚计算应不低于50000 ;
[0055] 对照品溶液的配制：
[0056] 以色谱级甲醇作溶剂；精密称取芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷等10个对照品 适量置于棕色容量瓶，配制成浓度为50yg/ml、55yg/ml、35yg/ml、20yg/ml、15yg/ml、 8yg/ml、10yg/ml、7yg/ml、8yg/ml、7yg/ml的混合对照品溶液。
[0057] 待测供试品溶液的配制：
[0058] 取大黄粉末0. 20g(过四号筛），精密称定，置50ml棕色容量瓶中，精密加入25ml 甲醇，称定重量，超声处理60分钟，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液过 0. 22ym微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
[0059] 测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2y1进样测定，计算峰面积，按 照外标一点法测定含量。
[0060] 超高效液相色谱仪：本发明中优选WatersAcquity超高效液相色 谱仪（美国沃特 世公司），配有WatersPDADetector(二极管阵列检测器），配有自动进样器，Empower2色 谱工作站。
[0061] 色谱柱：本发明中优选的色谱柱为：AcquityUPLCBEHC18柱（1. 7ym， 2. 1X100mm)〇
[0062] 流动相：以甲醇（A)_0. 1%磷酸水溶液（B)为流动相，本发明采用的流动相选择， 是经过发明人在大量实验探索过程中优选而出的，如发明人采用甲醇（A)_0. 1%磷酸水溶 液⑶分别在（45 :55)、（55 :45)、（65 :35)以及梯度洗脱的比例下比较，在410nm的检测波 长，30°C的柱温，0. 2ml/min的流速，2y1的进样量的条件下，利用WatersAcquity超高效 液相色谱仪进行检测，发现在梯度洗脱条件下，能够最大限度的将干扰物质10个目标峰分 离，得到分离度和色谱峰形都符合要求的色谱峰。（见图1)
[0063] 流动相流速：0? 2ml/min;发明人在分别在 0?lml/min、0. 2ml/min和 0? 3ml/min、 0. 4ml/min流速下进行检测，发现均能达到实验要求，优选0. 2ml/min作为检测流速。
[0064]柱温：30°C;发明人在20°C、25°C、30°C、35°C、38°C、42 °C柱温下进行检测，发现均 能达到实验要求，优选30°C作为检测柱温。
[0065] 检测波长：340nm;发明人将番泻苷A对照品溶液、番泻苷B对照品溶液在采用二 极管阵列检测器（PDA检测器）在200-450nm波长范围内扫描，发现在254nm和410nm波长 处具有较强吸收，优选410nm作为检测波长。
[0066] 进样量：2y1 ;发明人在1y1、2y1、2. 5y1、3y1、3. 5y1、4y1柱温下进行检测， 发现均能达到实验要求，优选2y1作为检测进样量。
[0067] 对照品溶液的制备：精密称取芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷等10个对照品 适量置于棕色容量瓶，配制成浓度为50yg/ml、55yg/ml、35yg/ml、20yg/ml、15yg/ml、 8yg/ml、10yg/ml、7yg/ml、8yg/ml、7yg/ml的混合对照品溶液。
[0068] 供试品溶液的制备：以70%甲醇、80%甲醇、90%甲醇、无水甲醇分别作为提取溶 剂，提取时间分别为40分钟、50分钟、60分钟、80分钟、90分钟，采用超声波提取、加热回流 提取法作为提取方法。优选以无水甲醇为提取溶剂、超声波提取60分钟作为本发明的供试 品溶液制备方法。
[0069] b.测定供试品（即待检测的大黄药材或饮片样品）中番泻苷A和番泻苷B的含 量：
[0070] 色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，C18柱；
[0071] 流动相：以乙腈（A)_0. 1%磷酸水溶液⑶为流动相；
[0072] 流动相流速：0? 2ml/min;
[0073] 洗脱条件：0~5min:8 - 12(A)，5~lOmin:12 - 13(A)，10~15min:13 - 15(A)， 15 ~20min:15 - 17(A)，20 ~25min:17 - 21 (A)，25 ~30min:21 - 60(A);
[0074] 检测波长：340nm;
[0075] 柱温：3(TC;
[0076] 进样量：2.Oyl;
[0077] 理论塔板数按番泻苷A计算应不低于10000 ;
[0078] 番泻苷A、番泻苷B的对照品溶液的配制：
[0079] 以含有0. 1 %NaHCO^ 45 %甲醇水溶液作溶剂；精密称取番泻苷A、番泻苷B对照 品适量置于棕色容量瓶，配制成浓度为70yg/ml、40yg/ml混合对照品溶液。
[0080]待测供试品溶液的配制：
[0081] 取大黄粉末0. 20g(过四号筛），精密称定，置50ml棕色容量瓶中，精密加入含有 0. 1%NaHCOj^ 45 %甲醇水溶液25ml，称定重量，超声处理40分钟，再称定重量，用0. 1% NaHCOj^ 45%甲醇水溶液补足减失的重量，离心10分钟，取上清液过0. 22ym微孔滤膜， 取续滤液作为供试品溶液。
[0082] 测定：精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2y1进样测定，计算峰面积，按照外 标一点法测定含量。
[0083] c.测定芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷、番泻苷A等12个化学成分的致泻效价：
[0084] 以ICR雄性小鼠140只，体重20g，分为14组，每组10只，实验前12小时禁食不 禁水，其中第一组作为正常组，不给与任何造模和给药；第二组作为模型对照组，仅仅给与 复方地酚诺酯片造成便秘模型；其余12组分别对应12个效应成分给药。先用复方地酚诺 酯片（剂量50mg?kg'eOmg?kg-1)灌胃进行造模，造模0? 5h、lh、2h后灌胃给药，给药量 0. 4-0.8ml(其中芦荟大黄素-8-0-0-D-葡萄糖苷、番泻苷A等12个化学成分单体的浓度 为lmg/ml、0. 8mg/ml、0. 6mg/ml、0. 4mg/ml，37°C热水溶解），给药后禁食不禁水，6h、8h、10h 后收集粪便质量，作为考察指标，作为大黄单体成分致泻效价测定（U/mg)。
[0085] 经过考察，最终优选以先用复方地酚诺酯片（剂量60mg?kg，灌胃进行造模，造 模lh后灌胃给药，给药量0. 4ml(其中芦荟大黄素-8-0- -D-葡萄糖苷、番泻苷A等12个 化学成分单体的浓度均为lmg/ml，37°C热水溶解），给药后8h后收集粪便质量，作为本发明 的致泻效价测定方法。
[0086] d.大黄致泻效应成分当量公式的构建：
[0087] 根据c步骤各个化学单体成分得到的致泻效价，以番泻苷A的效价作为参照（泻 下系数为1)，其余11个效应成分的致泻效价与之对比，得到11个致泻效应成分的致泻效应 成分当量系数。将芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷、番泻苷A等12个成分的致泻效应成 分当量系数分别乘以含量（mg/g)，再将各项相加，得到大黄致泻效应成分当量公式II。
[0088] EV= 1. 000XQ+0. 647XC2+0. 659XC3+0. 722XC4+0. 455XCs+0. 475XC6+0. 559X C7+0. 383XC8+0. 468XC9+0. 273XC10+0. 263XCn+0. 521XC12-------公式II
[0089] 式中：
[0090] EV代表效应成分当量值
[0091]Q代表每1克大黄药材/饮片中番泻苷A的含量（mg/g);
[0092] C2代表每1克大黄药材/饮片中番泻苷B的含量（mg/g);
[0093] C3代表每1克大黄药材/饮片中芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量（mg/g);
[0094] C4代表每1克大黄药材/饮片中大黄酸-8-0- 0 -D-葡萄糖苷的含量（mg/g);
[0095] C5代表每1克大黄药材/饮片中大黄酚-8-0- 0 -D-葡萄糖苷的含量（mg/g); [0096]C6代表每1克大黄药材/饮片中大黄素-8-0-0-D-葡萄糖苷的含量（mg/g);
[0097] C7代表每1克大黄药材/饮片中大黄素甲醚-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量（mg/g);
[0098] C8代表每1克大黄药材/饮片中芦荟大黄素的含量（mg/g);
[0099] C9代表每1克大黄药材/饮片中大黄酸的含量（mg/g);
[0100] ci(l代表每1克大黄药材/饮片中大黄酚的含量（mg/g);
[0101] Cn代表每1克大黄药材/饮片中大黄素的含量（mg/g);
[0102] C12代表每1克大黄药材/饮片中大黄素甲醚的含量（mg/g);
[0103] 每个分项式前面的系数为致泻效应成分当量系数，其所代表的意义为：以番泻苷 A的泻下效价为参照物，另外11个单体成分的泻下效价与之参比所得，S卩lmg/ml的致泻成 分产生的效价与lmg/ml的番泻苷A产生的效价的比值。
[0104] 效应成分当量值：指的是中药材中某一大类具有相似药理作用的效应成分（活性 成分）的生物效价与参照物质相比，得到各个成分相当于多少参照物质的效价（即当量效 价）。将各个效应成分在药材中的含量乘以当量效价得到该效应成分的当量值，最后将各个 效应成分的当量值加和，即得到该药材相当于多少参照物质的当量值，即效应成分当量值。 例如在本发明中，将大黄药材中具有致泻效应的几个主要药效成分转换成为参照物质番泻 苷A的当量，即为番泻苷A的效应成分当量值。
[0105] 与现有技术相比，本申请多组分综合量化的中药质量评控方法更加适合于大黄药 材的疗效评价，更能全面的体现出大黄泻下疗效的强度，符合中药质量评控的发展方向。具 体地，与现有的大黄药材或饮片中总游离蒽醌含量检测方法相比，本申请的质量评控方法 具有如下优点：
[0106] 1.改变以单一测总游离蒽醌含量来评价大黄药材的质量，增加了与泻下疗效相关 的指标性效应成分的含量测定（结合性蒽醌糖苷、番泻苷类成分）。
[0107] 2.增加了基于复方地芬诺酯便秘模型的生物效价检测，更加准确的体现了不同活 性成分间的泻下强度，更有利于大黄临床疗效的评估。
[0108] 3、首次得到了大黄致泻效应成分的当量系数，为大黄不同致泻效应成分的药理研 宄提供了参考。首次得到了大黄效应成分当量值，通过效应成分当量值的大小可以评价不 同批次大黄药材（或饮片）的泻下强度，可以为临床合理用量提供参考。
[0109] 4、基于效应成分当量值的评价方法为中药质量控制提供了新的思路和模式参考。 例如在评价清热解毒中药金银花时，可以以绿原酸为参照物质，将异绿原酸、豆蔻酸、阿 魏 酸、咖啡酸、原儿茶酸等成分转换成绿原酸的效应成分当量值，以此来反映金银花清热解 毒、抗菌的功效强弱。例如在评价毒性中药附子的时，其中双酯型生物碱具有较强毒性，因 此可以以乌头碱为参照物质，将次乌头碱、中乌头碱、新乌头碱等转换为乌头碱的效应成分 当量值，以效应成分当量值的大小来评价附子的毒性强弱。
[0110] 发明人根据大黄的化学成分、药理作用和参考文献资料的基础上，经过反复摸索， 最终建立了一套结合效应成分含量测定与效应成分致泻效价测定的检测方法，在此基础上 建立了致泻效应成分当量的计算公式，致泻效应成分当量值能够综合反映大黄药材的质 量，并为大黄的生物评价方法提供参考。
【附图说明】
[0111] 图1显示大黄对照品溶液中芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷等色谱图（410nm波 长）；
[0112] 图2显示大黄供试品溶液中芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷等色谱图（410nm波 长）；
【具体实施方式】
[0113] 下面通过实施例来描述本申请的实施方式，本领域的技术人员应当认识到，这些 具体的实施例仅表明为了达到本申请的目的而选择的实施技术方案，并不是对技术方案的 限制。根据本申请的教导，结合现有技术对本申请技术方案的改进是显然的，均属于本申请 保护的范围。
[0114] 以下实施例中采用的物质，除了注明的之外，其余均为市售。
[0115] 实施例1 (大黄药材中的芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷等10种活性成分含量 测定）
[0116] 供试品：大黄供试品（即待检测的大黄药材样品）
[0117] 对照品：芦荟大黄素-8-0-0-D-葡萄糖苷（批号141225,供含量测定用以98. 78 计），大黄酸-8-0-0 -D-葡萄糖苷（批号141211，供含量测定用以98. 57 %计），大黄 酚-8-0- -D-葡萄糖苷（批号141220，供含量测定用以99. 42 %计），大黄素-8-0- -D-葡 萄糖苷（批号141209,供含量测定用以98. 67%计），大黄素甲醚-8-0- -D-葡萄糖苷（批 号141012,供含量测定用以99. 14%计），由成都克洛玛生物科技公司提供；
[0118] 芦荟大黄素（批号110795-201007,供含量测定用以98. 05%计），大黄酸（批 号110757-200206,供含量测定用以98. 65 %计），大黄素（批号110756,供含量测定用以 99. 55%计），大黄酚（批号110796-201118,供含量测定用以99. 50 %计），大黄素甲醚（批 号110758-201013,供含量测定用以99. 80%计）由中国食品药品检定研宄院提供。
[0119] ①实验仪器：WatersAcquity超高效液相色谱仪（美国沃特世公司），配有Waters PDADetector(二极管阵列检测器），自动进样器，Empower2色谱工作站，AcquityUPLC BEHC18 柱（1. 7ym，2.IX100mm)，XS-205 电子天平（MEITLERTOLEDO)，AL-204 电子天平 (METTLERTOLEDO)，超声仪（南京新辰生物科技有限公司，40KHz)。
[0120] ②色谱条件：
[0121] 流动相：以甲醇（A)_0. 1 %磷酸水溶液⑶为流动相；
[0122] 流动相流速：0? 2ml/min;
[0123] 洗脱条件：0 ~5min:38 - 43(A)，5 ~7min:43 - 52(A)，7 ~12min:52 - 57(A)， 12 ~15min:57 - 72 (A)，15 ~17min:72 - 79 (A)，17 ~20min:79 - 85 (A);
[0124] 检测波长：410nm;
[0125] 柱温：30°C;
[0126] 进样量：2.0yl;
[0127] 理论塔板数按大黄素甲醚计算应不低于100000 ;
[0128] ③对照品溶液的配制：
[0129] 以色谱级甲醇作溶剂；精密称取芦荟大黄素-8-O-0 -D-葡萄糖苷等10个对照品 适量置于棕色容量瓶，配制成浓度为50yg/ml、55yg/ml、35yg/ml、20yg/ml、15yg/ml、 8yg/ml、10yg/ml、7yg/ml、8yg/ml、7yg/ml的混合对照品溶液。
[0130] ④待测供试品溶液的配制：取大黄粉末0. 20g(过四号筛），精密称定，置50ml棕 色容量瓶中，精密加入含有25ml甲醇，称定重量，超声处理60分钟，再称定重量，用甲醇补 足减失的重量，摇匀，取上清液过0. 22ym微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
[0131] ⑤供试品测定：按上述方法对10批次不同产地的大黄供试品进行含量测定。测定 结果见表1。
[0132] 表1 10批不同产地的大黄药材结合蒽醌和游离蒽醌含量测定结果（n= 3)
[0134] 实施例2 (大黄药材中番泻苷A、番泻苷B的含量测定）
[0135] 供试品：大黄供试品（即待检测的大黄药材样品）
[0136] 对照品：番泻苷A(批号13122701，供含量测定用以98. 58%计），番泻苷B(批号 13062606,供含量测定用以98. 35%计），由成都普瑞生物科技公司提供；
[0137] WatersAcquity超高效液相色谱仪（美国沃特世公司），配有WatersPDA Detector(二极管阵列检测器），自动进样器，Empower2色谱工作站，AcquityUPLCBEH C18 柱（1. 7ym，2. 1X100mm)，XS-205 电子天平（MEITLERTOLEDO)，AL-204 电子天平 (METTLERTOLEDO)，超声仪（南京新辰生物科技有限公司，40KHz)。
[0138] 番泻苷A、番泻苷B的对照品溶液的制备：
[0139] 以含有0. 1 %NaHCOjA45 %甲醇水溶液作溶剂；精密称取番泻苷A、番泻苷B对照 品适量置于棕色容量瓶，配制成浓度为70yg/ml、40yg/ml的混合对照品溶液。
[0140] 番泻叶供试品溶液制备方法：
[0141] 取番泻叶粉末（过四号筛）约0.20g，精密称定，置50ml棕色容量瓶中，精密加入 0. 1 %NaHC03水溶液25ml，称定重量，超声30分钟（控制水温30°C以下），再称定重量，用 0. 1 %NaHCCyK溶液补足减失的重量，离心5分钟，取上清液过0. 22ym微孔滤膜，取续滤 液作为供试品溶液。
[0142] 测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2y1，注入超高效液相色谱 仪，测定色谱峰面积，按外标法计算即得。
[0143] 表2 10批不同产地的大黄药材番泻苷A、番泻苷B含量测定结果（n= 3)
[0144]
[0145] 实施例3 (大黄致泻效应成分效价的测定及当量系数的计算的详细考察）
[0146] ICR雄性小鼠140只，体重20g，分为14组，每组10只，实验前12小时禁食不禁 水，其中第一组作为正常组，不给与任何造模和给药；第二组作为模型对照组，仅仅给与复 方地酚诺酯片造成便秘模型；其余12组分别对应12个效应成分给药。先用复方地酚诺 酯片（剂量60mg?kg，灌胃进行造模，造模lh后灌胃给药，给药量0. 4ml(其中芦荟大黄 素-8-0--D-葡萄糖苷、番泻苷A等12种活性成分的浓度为lmg/ml，37°C热水溶解），给 药后禁食不禁水，8h后收集粪便质量，即为大黄的各活性成分致泻效价U/mg，以lmg粪便质 量作为1U的致泻效价。芦荟大黄素-8-0- -D-葡萄糖苷、番泻苷A等12种活性成分的致 泻效价测定结果，见表3.如下：
[0147] 表3各成分的效价测定结果（n= 3)
[0149] 以番泻苷A的致泻效价作为参照，其余11种活性成分的致泻效价与之相比，得到 该活性成分以番泻苷A计的致泻效应成分当量系数。结果见表4。
[0150] 表4 12种活性成分的致泻效应成分当量系数计算结果（n= 3)
[0151]
[0152] 特别说明：致泻效应成分当量系数的计算是以（大黄）药材中自身含有的致泻效 应最强的物质作为参照，最后用测定的其它泻下成分的效价与之相比，这个比值即为该活 性成分的当量系数。由于实验动物的个体之间的差异、操作误差等因素，每种成分的致泻效 应成分当量系数存在一定的波动范围，本申请的发明人认为表4中的范围是在可接受范围 内的。
[0153] 实施例4计算不同产地10批次的大黄药材的致泻效应成分当量值
[0154] 根据以上实施例1、2、3得到的数据，按照公式1进行计算，得到该10批次的大黄 药材/饮片的致泻效应成分当量值。结果见表5。
[0155] 表5 10批不同产地大黄药材中效应成分当量值计算结果（n= 3)
[0157] 实施例5效应成分当量的具体应用
[0158] 根据以上实施1-4例结果可以看出，不同产地、不同基原、不同生长年限的大黄药 材，按照2010版《中国药典》的质量控制标准来看，都是符合标准的药材，但是其致泻效应 成分当量存在较大的差异，因此其泻下的药理活性强度就存在较大差异。例如唐古特大黄 的泻下强度远远大于掌叶大黄的泻下强度，因此在临床应用中应注意区别用量。在同一剂 量要求下，致泻效应成分当量值较高的大黄药材通过换算应该适当的降低用量；反之，致泻 效应成分当量值较低的大黄药材可以根据换算适当增加用量，以此保证大黄临床疗效的有 效性和安全性。例如针对表5中10个批次大黄药材的不同致泻效应成分当量通过换算成 当量一致性的药材实际使用量为：
[0159] 表6不同致泻效应成分当量的大黄药材的实际使用量
[0162] 特别说明：针对表6中的数据，是按照如下方式计算的：药材编 号为2的大黄药 材，经过本发明的方法计算得到其lg药材的实测效应成分当量值为41. 611，如果要达到以 番泻苷A计的40当量值，那么药材编号为2的大黄药材临床的实际用量应该为40/41. 611 =0? 961g〇
[0163] 药材编号为3的大黄药材，经过本发明的方法计算得到其lg药材的实测效应成分 当量值为15. 775,如果要达到以番泻苷A计的40当量值，那么药材编号为2的大黄药材临 床的实际用量应该为40/15. 775 = 2. 536g。
[0164] 同理可以计算得到不同批次的大黄的当量一致性的实际用量，即可以保证临床用 量的稳定性。
[0165] 以上所述仅为本申请的优选实施例，并非对本申请作出任何形式上和实质上的限 制。本领域的技术人员，在不脱离本申请技术方案的范围内，当可利用以上所揭示的技术内 容而作出的些许更改、修饰与演变的等同变化均为本申请的等效实施例；同时，凡依据本申 请的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更改、修饰与演变等均在本申请的由权 利要求界定的范围内。
【主权项】
1. 一种中药质量评价方法，包括（1)测定与所述中药的临床疗效相关的活性成分的含 量；（2)测定所述活性成分的生物效价；（3)利用下述公式I来计算所述中药的活性成分的 效应成分当量值：(4)利用效应成分当量值通过适当换算得到药材的实际用量数值； EV=A1XC^A2XC2+......AiXCi-------公式I 其中EV表示活性成分的效应成分当量值； A1表示活性成分1的效应成分当量系数； C1表示每1克中药中活性成分1的含量（mg/g); A2表示活性成分2的效应成分当量系数； C2表示每1克中药中的活性成分2的含量（mg/g); Ai表示活性成分i的效应成分当量系数； Ci表示每1克中药中活性成分1的含量（mg/g)。2. 如权利要求1所述的方法，其中所述中药是大黄原药材或大黄饮片，所述生物效价 是致泻生物效价。3. -种基于大黄原药材或大黄饮片的致泻效应当量因子来调节大黄原药材或大黄饮 片的用量的方法，所述方法包括以下步骤： (a) 采用液相色谱法测量所述大黄原药材或大黄饮片中的芦荟大黄素-8-0--D-葡 萄糖苷、大黄酸-8-0- -D-葡萄糖苷、大黄酚-8-0- -D-葡萄糖苷、大黄素-8-0-e-D-葡 萄糖苷、大黄素甲醚-8-o-e-D-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲 醚、番泻苷A、番泻苷B共计12种活性成分的含量； (b) 利用公式II计算待测大黄药材的致泻效应成分当量值EV: EV= 1. 000XCi+0. 647XC2+0. 659XC3+0. 722XC4+0. 455XC5+0. 475XC6+0. 559XC7+0 .383XC8+0. 468XC9+0. 273XC10+0. 263XCn+0. 521XC12-------公式II C1代表每I克大黄药材/饮片中的番泻苷A的含量，mg/g; C2代表每1克大黄药材/饮片中的番泻苷B的含量，mg/g; C3代表每1克大黄药材/饮片中的芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/g; C4代表每1克大黄药材/饮片中的大黄酸-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/g; C5代表每1克大黄药材/饮片中的大黄酚-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/g; C6代表每1克大黄药材/饮片中的大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/g; C7代表每1克大黄药材/饮片中的大黄素甲醚-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/g; C8代表每1克大黄药材/饮片中芦荟大黄素的含量，mg/g; C9代表每1克大黄药材/饮片中的大黄酸的含量，mg/g; Cltl代表每1克大黄药材/饮片中的大黄酚的含量，mg/g; C11代表每1克大黄药材/饮片中的大黄素的含量，mg/g; C12代表每1克大黄药材/饮片中的大黄素甲醚的含量，mg/g。 (c) 根据计算得到的致泻效应成分当量值EV来调节大黄原药材或大黄饮片的用量。4. 如权利要求3所述的方法，其中所述步骤（a)包括： 色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，C18柱； 流动相：以甲醇（A)-O. 1 %磷酸水溶液（B)为流动相； 流动相流速：〇.卜〇. 4ml/min; 洗脱条件：〇 ~5min:38 - 43 (A)，5 ~7min:43 - 52 (A)，7 ~12min:52 - 57 (A)，12 ~ 15min:57 - 72 (A)，15 ~17min:72 - 79 (A)，17 ~20min:79 - 85 (A); 检测波长：250-420nm; 柱温：22-42°C; 进样量：1.0-4.OyI; 理论塔板数按大黄素甲醚计算应不低于50000 ; 对照品溶液的配制： 以色谱级甲醇作溶剂；精密称取芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷、大黄 酸-8-0--D-葡萄糖苷、大黄酚-8-0--D-葡萄糖苷、大黄素-8-0-e-D-葡萄糖苷、大 黄素甲醚-8-〇-e-D-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚10个对 照品适量置于棕色容量瓶，配制成浓度为50yg/ml、55yg/ml、35yg/ml、20yg/ml、15yg/ ml、8yg/ml、10yg/ml、7yg/ml、8yg/ml、7yg/ml的混合对照品溶液； 待测供试品溶液的配制： 取大黄粉末〇. 20g，过四号筛，精密称定，置50ml棕色容量瓶中，精密加入25ml甲醇，称 定重量，超声处理60分钟，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液过0. 22ym 微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液； 测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2y1进样测定，计算峰面积，按照外 标法测定含量。5.如权利要求3所述的方法，其中所述步骤（a)包括： 测定供试品，即待检测的大黄药材或饮片样品中番泻苷A和番泻苷B的含量： 色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，C18柱； 流动相：以乙腈（A)-O. 1 %磷酸水溶液（B)为流动相； 流动相流速：〇. 2ml/min; 洗脱条件：〇 ~5min:8 - 12(A)，5~IOmin:12 - 13(A)，10 ~15min:13 - 15(A)， 15 ~20min:15 - 17(A)，20 ~25min:17 - 21 (A)，25 ~30min:21 - 60(A); 检测波长：340nm; 柱温：30°C; 进样量：2.OiU; 理论塔板数按番泻苷A计算应不低于10000 ; 番泻苷A、番泻苷B的对照品溶液的配制： 以含有0. 1 %NaHCOj^ 45 %甲醇水溶液作溶剂；精密称取番泻苷A、番泻苷B对照品适 量置于棕色容量瓶，配制成浓度为70yg/ml、40yg/ml混合对照品溶液； 待测供试品溶液的配制： 取大黄粉末〇. 20g，过四号筛，精密称定，置50ml棕色容量瓶中，精密加入含有0. 1%NaHCOj^ 45 %甲醇水溶液25ml，称定重量，超声处理60分钟，控制水温35°C以下，再称定重 量，用0. 1 %NaHCOj^ 45 %甲醇水溶液补足减失的重量，离心10分钟，取上清液过0. 22ym 微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液； 测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2y1进样测定，测定峰面积，按照外 标一点法测定含量。6. 根据权利要求5所述的方法，其中所述a步骤确定的色谱条件为： 流动相：以甲醇（A)-O. 1 %磷酸水溶液（B)为流动相； 流动相流速：〇. 2ml/min; 洗脱条件：〇 ~5min:38 - 43 (A)，5 ~7min:43 - 52 (A)，7 ~12min:52 - 57 (A)，12 ~ 15min:57 - 72 (A)，15 ~17min:72 - 79 (A)，17 ~20min:79 - 85 (A); 检测波长：410nm; 柱温：30°C; 进样量：2.Oy1。7. 如权利要求3所述的方法，其中所述步骤（b)包括： 活性成分番泻苷A的效应成分当量系数为1. 000 ;活性成分番泻苷B的效应成分当量 系数为〇. 647 ;活性成分芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷的效应成分当量系数为0. 659 ; 活性成分大黄酸-8 -〇 _ 0 -D-葡萄糖苷的效应成分当量系数为0. 7 2 2 ;活性成分大黄 酚-8-0-0 -D-葡萄糖苷的效应成分当量系数为0. 455 ;活性成分大黄素-8-0-0 -D-葡萄 糖苷的效应成分当量系数为0. 475 ;活性成分大黄素甲醚-8-0-0-D-葡萄糖苷的效应成分 当量系数为〇. 559 ;活性成分芦荟大黄素的效应成分当量系数为0. 383 ;活性成分大黄酸的 效应成分当量系数为0. 468 ;活性成分大黄素的效应成分当量系数为0. 273 ;活性成分大黄 酚的效应成分当量系数为0. 263 ;活性成分芦荟大黄素甲醚的效应成分当量系数为0. 521。8. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述大黄原药材或大黄饮片包括寥科植 物掌叶大黄RheumpalmatumL.、唐古特大黄RheumtanguticumMaxim,exBalf?或药用大 黄RheumofficinaleBaill.的干燥根、根莖和大黄饮片。
【专利摘要】本申请提供一种多组分综合量化的中药质量评控方法及应用。本申请所述中药质量评控方法，结合化学含量测定和生物效价测定，重点突出以生物效价综合量化评价大黄药材或饮片的质量，首次建立了大黄致泻效应成分当量计算方法，所述方法能够应用于初步评价不同产地、不同批次、不同生长年限的大黄药材或饮片的质量。
【IPC分类】G01N30/88, G01N33/15
【公开号】CN104897839
【申请号】CN201510324220
【发明人】肖小河, 王伽伯, 谭鹏, 张定堃, 李刚, 严桂林
【申请人】中国人民解放军第三〇二医院
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月12日
【技术领域】
[0001] 本申请涉及一种多组分综合量化的中药质量的评价方法。
【背景技术】
[0002] 中药质量评价一直是中药研宄与生产中的热点和难点，也是中药现代化的重要基 础和关键。目前，中药质量评价大多参照植物化学和西药质量评价的模式，采用单一测定药 材中某些化学成分的含量来评价药材的质量。从传统的中医药观点来看，单一成分的控制 难以真正反映中药的功效，尤其是复方制剂，检测任何一种指标成分均不能反映其所体现 的整体疗效。生物评价因具有药效相关、整体可控等技术优势，符合中医药特点的质量标准 控制模式及方法[1]，已成为中药质量标准化的重要发展方向之一，并且已经有相关文献报 道[2、3]。
[0003] 大黄别名将军、黄良、火参、肤如等，是我国"中药四维"之一。2010版《中国药典》 收载的正品大黄药材的3个重要基原包括：寥科植物掌叶大黄RheumpalmatumL.、唐古特 大黄RheumtanguticumMaxim,exBalf?或药用大黄RheumofficinaleBaill.的干燥根 和根茎[4]，主产于甘肃东南部、四川西部、青海东部、西藏东部等高寒地区，具有泻下攻积， 泻火解毒，凉血止血，活血祛瘀，清泻湿热的功效[5]。但是现有的大黄药材质量控制标准， 多数测定以经过盐酸水解后的游离蒽醌苷元含量作为其质量优劣的评价指标[4]，这与大 黄泻下通便的临床疗效关联度不强，不能整体全面的评价大黄的质量。现有文献表明[6、7、 8]，大黄中蒽醌类和二蒽酮类成分是其泻下通便的主要药效成分。
[0004] 生物效价的定义：所谓生物效价通常是以其完成某种特定的生理作用的程度作指 标来衡量，而且标准参比物作为100 %进行比较而得，故生物效价是相对值，可大于或小于 100%〇
[0005] 文献[9、10]虽然涉及了基于小鼠复方地芬诺酯便秘模型的致泻效价测定，但是 文献中均采用的是大黄的水煎煮粗提物给药，并不能具体的反映出单个致泻效应成分的泻 下强度，这也就无法与其含量测定结果相关联。因此是一种粗略的效价测定。
[0006] 鉴于大黄饮片是临床用于便秘、慢性肾病、肝胆疾病的常用中药，如何评价不同批 次、不同产地、不同来源的大黄饮片质量稳定性、均一性是摆在人们面前的一个亟须关注、 解决的难点，因此开发一种能从整体上反映大黄泻下疗效的生物效价测定方法显得十分必 要和急迫。
[0007] 参考文献
[0008] [1]肖小河，王伽伯，鄢丹.生物评价在中药质量标准化中的研宄与应用[J].世 界科学技术一中医药现代化，2014, 16 (3) :514-518.
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[0010] [3]李寒冰，鄢丹，肖小河等.基于抗病毒活性检测的板蓝根质量生物评价方法及 优化研宄[刀.中草药，2011，42(8):1560-1565.
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[0016] [9]王伽伯，李会芳，肖小河等.基于泻下药效模型的大黄生物效价检测方法的研 宄[J].中华中医药学会中成药学术研讨论文集，2007, 08,01 :305-307.
[0017] [10]李会芳，王伽伯，肖小河等.致泻效价检测用于大黄品质评价的方法研宄 [J]?中国中药杂志，2008, 33, 11 :1309-1311.
【发明内容】
[0018] 本发明的第一个目的是提供一种中药质量评价方法。
[0019] 本发明的中药质量评价方法，包括（1)测定与所述中药的临床疗效相关的活性成 分的含量；（2)测定所述活性成分的生物效价；（3)利用下述公式I来计算所述中药的活 性成分的效应成分当量值：(4)利用效应成分当量值通过适当换算得到药材的实际用量数 值；
[0020] EV=A:XC!+A2XC2+......AjXCj-------公式I
[0021] 其中EV表示活性成分的效应成分当量值；
[0022] Ai表示活性成分1的效应成分当量系数；
[0023] Q表示每1克中药中活性成分1的含量（mg/g);
[0024] A2表示活性成分2的效应成分当量系数；
[0025] C2表示每1克中药中的活性成分2的含量（mg/g);
[0026] Ai表示活性成分i的效应成分当量系数；
[0027] Q表示每1克中药中活性成分1的含量（mg/g)。
[0028] 本发明的第二个目的是提供一种基于大黄原药材或大黄饮片的致泻效应当量因 子来调节大黄原药材或大黄饮片的用量的方法。
[0029] 本发明的基于大黄原药材或大黄饮片的致泻效应当量因子来调节大黄原药材或 大黄饮片的用量的方法包括以下步骤：
[0030] (a)采用液相色谱法测量所述大黄原药材或大黄饮片中的芦荟大黄 素-8-0- -D-葡萄糖苷、大黄酸-8-0- -D-葡萄糖苷、大黄酚-8-0- -D-葡萄糖苷、大黄 素-8-0-0 -D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-0-0 -D-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、 大黄酚、大黄素甲醚、番泻苷A、番泻苷B共计12种活性成分的含量；
[0031] (b)利用公式II计算待测大黄药材的致泻效应成分当量值EV:
[0032] EV= 1. 000XQ+0. 647XC2+0. 659XC3+0. 722XC4+0. 455XCs+0. 475XC6+0. 559X C7+0. 383XC8+0. 468XC9+0. 273XC10+0. 263XCn+0. 521XC12-------公式II
[0033] Q代表每1克大黄药材/饮片中的番泻苷A的含量，mg/g;
[0034] C2代表每1克大黄药材/饮片中的番泻苷B的含量，mg/g;
[0035] C3代表每1克大黄药材/饮片中的芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/ g;
[0036] C4代表每1克大黄药材/饮片中的大黄酸-8-0- 0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/g;
[0037] C5代表每1克大黄药材/饮片中的大黄酚-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/g;
[0038] C6代表每1克大黄药材/饮片中的大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/g;
[0039] C7代表每1克大黄药材/饮片中的大黄素甲醚-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/ g;
[0040] C8代表每1克大黄药材/饮片中芦荟大黄素的含量，mg/g;
[0041] C9代表每1克大黄药材/饮片中的大黄酸的含量，mg/g;
[0042] C1(l代表每1克大黄药材/饮片中的大黄酚的含量，mg/g;
[0043] Cn代表每1克大黄药材/饮片中的大黄素的含量，mg/g;
[0044] C12代表每1克大黄药材/饮片中的大黄素甲醚的含量，mg/g。
[0045] (c)根据计算得到的致泻效应成分当量值EV来调节大黄原药材或大黄饮片的用 量。
[0046] 在一个实施方案中，步骤（a)包括：
[0047] 色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，C18柱；
[0048] 流动相：以甲醇（A)_0. 1 %磷酸水溶液⑶为流动相；
[0049] 流动相流速：0? 1-0. 4ml/min;
[0050] 洗脱条件：0 ~5min:38 - 43 (A)，5 ~7min:43 - 52 (A)，7 ~12min:52 - 57 (A)， 12 ~15min:57 - 72 (A)，15 ~17min:72 - 79 (A)，17 ~20min:79 - 85 (A);
[0051] 检测波长：250-420nm;
[0052] 柱温：22-42°C;
[0053] 进样量：1. 0-4. 0u1 ;
[0054] 理论塔板数按大黄素甲醚计算应不低于50000 ;
[0055] 对照品溶液的配制：
[0056] 以色谱级甲醇作溶剂；精密称取芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷等10个对照品 适量置于棕色容量瓶，配制成浓度为50yg/ml、55yg/ml、35yg/ml、20yg/ml、15yg/ml、 8yg/ml、10yg/ml、7yg/ml、8yg/ml、7yg/ml的混合对照品溶液。
[0057] 待测供试品溶液的配制：
[0058] 取大黄粉末0. 20g(过四号筛），精密称定，置50ml棕色容量瓶中，精密加入25ml 甲醇，称定重量，超声处理60分钟，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液过 0. 22ym微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
[0059] 测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2y1进样测定，计算峰面积，按 照外标一点法测定含量。
[0060] 超高效液相色谱仪：本发明中优选WatersAcquity超高效液相色 谱仪（美国沃特 世公司），配有WatersPDADetector(二极管阵列检测器），配有自动进样器，Empower2色 谱工作站。
[0061] 色谱柱：本发明中优选的色谱柱为：AcquityUPLCBEHC18柱（1. 7ym， 2. 1X100mm)〇
[0062] 流动相：以甲醇（A)_0. 1%磷酸水溶液（B)为流动相，本发明采用的流动相选择， 是经过发明人在大量实验探索过程中优选而出的，如发明人采用甲醇（A)_0. 1%磷酸水溶 液⑶分别在（45 :55)、（55 :45)、（65 :35)以及梯度洗脱的比例下比较，在410nm的检测波 长，30°C的柱温，0. 2ml/min的流速，2y1的进样量的条件下，利用WatersAcquity超高效 液相色谱仪进行检测，发现在梯度洗脱条件下，能够最大限度的将干扰物质10个目标峰分 离，得到分离度和色谱峰形都符合要求的色谱峰。（见图1)
[0063] 流动相流速：0? 2ml/min;发明人在分别在 0?lml/min、0. 2ml/min和 0? 3ml/min、 0. 4ml/min流速下进行检测，发现均能达到实验要求，优选0. 2ml/min作为检测流速。
[0064]柱温：30°C;发明人在20°C、25°C、30°C、35°C、38°C、42 °C柱温下进行检测，发现均 能达到实验要求，优选30°C作为检测柱温。
[0065] 检测波长：340nm;发明人将番泻苷A对照品溶液、番泻苷B对照品溶液在采用二 极管阵列检测器（PDA检测器）在200-450nm波长范围内扫描，发现在254nm和410nm波长 处具有较强吸收，优选410nm作为检测波长。
[0066] 进样量：2y1 ;发明人在1y1、2y1、2. 5y1、3y1、3. 5y1、4y1柱温下进行检测， 发现均能达到实验要求，优选2y1作为检测进样量。
[0067] 对照品溶液的制备：精密称取芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷等10个对照品 适量置于棕色容量瓶，配制成浓度为50yg/ml、55yg/ml、35yg/ml、20yg/ml、15yg/ml、 8yg/ml、10yg/ml、7yg/ml、8yg/ml、7yg/ml的混合对照品溶液。
[0068] 供试品溶液的制备：以70%甲醇、80%甲醇、90%甲醇、无水甲醇分别作为提取溶 剂，提取时间分别为40分钟、50分钟、60分钟、80分钟、90分钟，采用超声波提取、加热回流 提取法作为提取方法。优选以无水甲醇为提取溶剂、超声波提取60分钟作为本发明的供试 品溶液制备方法。
[0069] b.测定供试品（即待检测的大黄药材或饮片样品）中番泻苷A和番泻苷B的含 量：
[0070] 色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，C18柱；
[0071] 流动相：以乙腈（A)_0. 1%磷酸水溶液⑶为流动相；
[0072] 流动相流速：0? 2ml/min;
[0073] 洗脱条件：0~5min:8 - 12(A)，5~lOmin:12 - 13(A)，10~15min:13 - 15(A)， 15 ~20min:15 - 17(A)，20 ~25min:17 - 21 (A)，25 ~30min:21 - 60(A);
[0074] 检测波长：340nm;
[0075] 柱温：3(TC;
[0076] 进样量：2.Oyl;
[0077] 理论塔板数按番泻苷A计算应不低于10000 ;
[0078] 番泻苷A、番泻苷B的对照品溶液的配制：
[0079] 以含有0. 1 %NaHCO^ 45 %甲醇水溶液作溶剂；精密称取番泻苷A、番泻苷B对照 品适量置于棕色容量瓶，配制成浓度为70yg/ml、40yg/ml混合对照品溶液。
[0080]待测供试品溶液的配制：
[0081] 取大黄粉末0. 20g(过四号筛），精密称定，置50ml棕色容量瓶中，精密加入含有 0. 1%NaHCOj^ 45 %甲醇水溶液25ml，称定重量，超声处理40分钟，再称定重量，用0. 1% NaHCOj^ 45%甲醇水溶液补足减失的重量，离心10分钟，取上清液过0. 22ym微孔滤膜， 取续滤液作为供试品溶液。
[0082] 测定：精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2y1进样测定，计算峰面积，按照外 标一点法测定含量。
[0083] c.测定芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷、番泻苷A等12个化学成分的致泻效价：
[0084] 以ICR雄性小鼠140只，体重20g，分为14组，每组10只，实验前12小时禁食不 禁水，其中第一组作为正常组，不给与任何造模和给药；第二组作为模型对照组，仅仅给与 复方地酚诺酯片造成便秘模型；其余12组分别对应12个效应成分给药。先用复方地酚诺 酯片（剂量50mg?kg'eOmg?kg-1)灌胃进行造模，造模0? 5h、lh、2h后灌胃给药，给药量 0. 4-0.8ml(其中芦荟大黄素-8-0-0-D-葡萄糖苷、番泻苷A等12个化学成分单体的浓度 为lmg/ml、0. 8mg/ml、0. 6mg/ml、0. 4mg/ml，37°C热水溶解），给药后禁食不禁水，6h、8h、10h 后收集粪便质量，作为考察指标，作为大黄单体成分致泻效价测定（U/mg)。
[0085] 经过考察，最终优选以先用复方地酚诺酯片（剂量60mg?kg，灌胃进行造模，造 模lh后灌胃给药，给药量0. 4ml(其中芦荟大黄素-8-0- -D-葡萄糖苷、番泻苷A等12个 化学成分单体的浓度均为lmg/ml，37°C热水溶解），给药后8h后收集粪便质量，作为本发明 的致泻效价测定方法。
[0086] d.大黄致泻效应成分当量公式的构建：
[0087] 根据c步骤各个化学单体成分得到的致泻效价，以番泻苷A的效价作为参照（泻 下系数为1)，其余11个效应成分的致泻效价与之对比，得到11个致泻效应成分的致泻效应 成分当量系数。将芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷、番泻苷A等12个成分的致泻效应成 分当量系数分别乘以含量（mg/g)，再将各项相加，得到大黄致泻效应成分当量公式II。
[0088] EV= 1. 000XQ+0. 647XC2+0. 659XC3+0. 722XC4+0. 455XCs+0. 475XC6+0. 559X C7+0. 383XC8+0. 468XC9+0. 273XC10+0. 263XCn+0. 521XC12-------公式II
[0089] 式中：
[0090] EV代表效应成分当量值
[0091]Q代表每1克大黄药材/饮片中番泻苷A的含量（mg/g);
[0092] C2代表每1克大黄药材/饮片中番泻苷B的含量（mg/g);
[0093] C3代表每1克大黄药材/饮片中芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量（mg/g);
[0094] C4代表每1克大黄药材/饮片中大黄酸-8-0- 0 -D-葡萄糖苷的含量（mg/g);
[0095] C5代表每1克大黄药材/饮片中大黄酚-8-0- 0 -D-葡萄糖苷的含量（mg/g); [0096]C6代表每1克大黄药材/饮片中大黄素-8-0-0-D-葡萄糖苷的含量（mg/g);
[0097] C7代表每1克大黄药材/饮片中大黄素甲醚-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量（mg/g);
[0098] C8代表每1克大黄药材/饮片中芦荟大黄素的含量（mg/g);
[0099] C9代表每1克大黄药材/饮片中大黄酸的含量（mg/g);
[0100] ci(l代表每1克大黄药材/饮片中大黄酚的含量（mg/g);
[0101] Cn代表每1克大黄药材/饮片中大黄素的含量（mg/g);
[0102] C12代表每1克大黄药材/饮片中大黄素甲醚的含量（mg/g);
[0103] 每个分项式前面的系数为致泻效应成分当量系数，其所代表的意义为：以番泻苷 A的泻下效价为参照物，另外11个单体成分的泻下效价与之参比所得，S卩lmg/ml的致泻成 分产生的效价与lmg/ml的番泻苷A产生的效价的比值。
[0104] 效应成分当量值：指的是中药材中某一大类具有相似药理作用的效应成分（活性 成分）的生物效价与参照物质相比，得到各个成分相当于多少参照物质的效价（即当量效 价）。将各个效应成分在药材中的含量乘以当量效价得到该效应成分的当量值，最后将各个 效应成分的当量值加和，即得到该药材相当于多少参照物质的当量值，即效应成分当量值。 例如在本发明中，将大黄药材中具有致泻效应的几个主要药效成分转换成为参照物质番泻 苷A的当量，即为番泻苷A的效应成分当量值。
[0105] 与现有技术相比，本申请多组分综合量化的中药质量评控方法更加适合于大黄药 材的疗效评价，更能全面的体现出大黄泻下疗效的强度，符合中药质量评控的发展方向。具 体地，与现有的大黄药材或饮片中总游离蒽醌含量检测方法相比，本申请的质量评控方法 具有如下优点：
[0106] 1.改变以单一测总游离蒽醌含量来评价大黄药材的质量，增加了与泻下疗效相关 的指标性效应成分的含量测定（结合性蒽醌糖苷、番泻苷类成分）。
[0107] 2.增加了基于复方地芬诺酯便秘模型的生物效价检测，更加准确的体现了不同活 性成分间的泻下强度，更有利于大黄临床疗效的评估。
[0108] 3、首次得到了大黄致泻效应成分的当量系数，为大黄不同致泻效应成分的药理研 宄提供了参考。首次得到了大黄效应成分当量值，通过效应成分当量值的大小可以评价不 同批次大黄药材（或饮片）的泻下强度，可以为临床合理用量提供参考。
[0109] 4、基于效应成分当量值的评价方法为中药质量控制提供了新的思路和模式参考。 例如在评价清热解毒中药金银花时，可以以绿原酸为参照物质，将异绿原酸、豆蔻酸、阿 魏 酸、咖啡酸、原儿茶酸等成分转换成绿原酸的效应成分当量值，以此来反映金银花清热解 毒、抗菌的功效强弱。例如在评价毒性中药附子的时，其中双酯型生物碱具有较强毒性，因 此可以以乌头碱为参照物质，将次乌头碱、中乌头碱、新乌头碱等转换为乌头碱的效应成分 当量值，以效应成分当量值的大小来评价附子的毒性强弱。
[0110] 发明人根据大黄的化学成分、药理作用和参考文献资料的基础上，经过反复摸索， 最终建立了一套结合效应成分含量测定与效应成分致泻效价测定的检测方法，在此基础上 建立了致泻效应成分当量的计算公式，致泻效应成分当量值能够综合反映大黄药材的质 量，并为大黄的生物评价方法提供参考。
【附图说明】
[0111] 图1显示大黄对照品溶液中芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷等色谱图（410nm波 长）；
[0112] 图2显示大黄供试品溶液中芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷等色谱图（410nm波 长）；
【具体实施方式】
[0113] 下面通过实施例来描述本申请的实施方式，本领域的技术人员应当认识到，这些 具体的实施例仅表明为了达到本申请的目的而选择的实施技术方案，并不是对技术方案的 限制。根据本申请的教导，结合现有技术对本申请技术方案的改进是显然的，均属于本申请 保护的范围。
[0114] 以下实施例中采用的物质，除了注明的之外，其余均为市售。
[0115] 实施例1 (大黄药材中的芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷等10种活性成分含量 测定）
[0116] 供试品：大黄供试品（即待检测的大黄药材样品）
[0117] 对照品：芦荟大黄素-8-0-0-D-葡萄糖苷（批号141225,供含量测定用以98. 78 计），大黄酸-8-0-0 -D-葡萄糖苷（批号141211，供含量测定用以98. 57 %计），大黄 酚-8-0- -D-葡萄糖苷（批号141220，供含量测定用以99. 42 %计），大黄素-8-0- -D-葡 萄糖苷（批号141209,供含量测定用以98. 67%计），大黄素甲醚-8-0- -D-葡萄糖苷（批 号141012,供含量测定用以99. 14%计），由成都克洛玛生物科技公司提供；
[0118] 芦荟大黄素（批号110795-201007,供含量测定用以98. 05%计），大黄酸（批 号110757-200206,供含量测定用以98. 65 %计），大黄素（批号110756,供含量测定用以 99. 55%计），大黄酚（批号110796-201118,供含量测定用以99. 50 %计），大黄素甲醚（批 号110758-201013,供含量测定用以99. 80%计）由中国食品药品检定研宄院提供。
[0119] ①实验仪器：WatersAcquity超高效液相色谱仪（美国沃特世公司），配有Waters PDADetector(二极管阵列检测器），自动进样器，Empower2色谱工作站，AcquityUPLC BEHC18 柱（1. 7ym，2.IX100mm)，XS-205 电子天平（MEITLERTOLEDO)，AL-204 电子天平 (METTLERTOLEDO)，超声仪（南京新辰生物科技有限公司，40KHz)。
[0120] ②色谱条件：
[0121] 流动相：以甲醇（A)_0. 1 %磷酸水溶液⑶为流动相；
[0122] 流动相流速：0? 2ml/min;
[0123] 洗脱条件：0 ~5min:38 - 43(A)，5 ~7min:43 - 52(A)，7 ~12min:52 - 57(A)， 12 ~15min:57 - 72 (A)，15 ~17min:72 - 79 (A)，17 ~20min:79 - 85 (A);
[0124] 检测波长：410nm;
[0125] 柱温：30°C;
[0126] 进样量：2.0yl;
[0127] 理论塔板数按大黄素甲醚计算应不低于100000 ;
[0128] ③对照品溶液的配制：
[0129] 以色谱级甲醇作溶剂；精密称取芦荟大黄素-8-O-0 -D-葡萄糖苷等10个对照品 适量置于棕色容量瓶，配制成浓度为50yg/ml、55yg/ml、35yg/ml、20yg/ml、15yg/ml、 8yg/ml、10yg/ml、7yg/ml、8yg/ml、7yg/ml的混合对照品溶液。
[0130] ④待测供试品溶液的配制：取大黄粉末0. 20g(过四号筛），精密称定，置50ml棕 色容量瓶中，精密加入含有25ml甲醇，称定重量，超声处理60分钟，再称定重量，用甲醇补 足减失的重量，摇匀，取上清液过0. 22ym微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
[0131] ⑤供试品测定：按上述方法对10批次不同产地的大黄供试品进行含量测定。测定 结果见表1。
[0132] 表1 10批不同产地的大黄药材结合蒽醌和游离蒽醌含量测定结果（n= 3)
[0134] 实施例2 (大黄药材中番泻苷A、番泻苷B的含量测定）
[0135] 供试品：大黄供试品（即待检测的大黄药材样品）
[0136] 对照品：番泻苷A(批号13122701，供含量测定用以98. 58%计），番泻苷B(批号 13062606,供含量测定用以98. 35%计），由成都普瑞生物科技公司提供；
[0137] WatersAcquity超高效液相色谱仪（美国沃特世公司），配有WatersPDA Detector(二极管阵列检测器），自动进样器，Empower2色谱工作站，AcquityUPLCBEH C18 柱（1. 7ym，2. 1X100mm)，XS-205 电子天平（MEITLERTOLEDO)，AL-204 电子天平 (METTLERTOLEDO)，超声仪（南京新辰生物科技有限公司，40KHz)。
[0138] 番泻苷A、番泻苷B的对照品溶液的制备：
[0139] 以含有0. 1 %NaHCOjA45 %甲醇水溶液作溶剂；精密称取番泻苷A、番泻苷B对照 品适量置于棕色容量瓶，配制成浓度为70yg/ml、40yg/ml的混合对照品溶液。
[0140] 番泻叶供试品溶液制备方法：
[0141] 取番泻叶粉末（过四号筛）约0.20g，精密称定，置50ml棕色容量瓶中，精密加入 0. 1 %NaHC03水溶液25ml，称定重量，超声30分钟（控制水温30°C以下），再称定重量，用 0. 1 %NaHCCyK溶液补足减失的重量，离心5分钟，取上清液过0. 22ym微孔滤膜，取续滤 液作为供试品溶液。
[0142] 测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2y1，注入超高效液相色谱 仪，测定色谱峰面积，按外标法计算即得。
[0143] 表2 10批不同产地的大黄药材番泻苷A、番泻苷B含量测定结果（n= 3)
[0144]
[0145] 实施例3 (大黄致泻效应成分效价的测定及当量系数的计算的详细考察）
[0146] ICR雄性小鼠140只，体重20g，分为14组，每组10只，实验前12小时禁食不禁 水，其中第一组作为正常组，不给与任何造模和给药；第二组作为模型对照组，仅仅给与复 方地酚诺酯片造成便秘模型；其余12组分别对应12个效应成分给药。先用复方地酚诺 酯片（剂量60mg?kg，灌胃进行造模，造模lh后灌胃给药，给药量0. 4ml(其中芦荟大黄 素-8-0--D-葡萄糖苷、番泻苷A等12种活性成分的浓度为lmg/ml，37°C热水溶解），给 药后禁食不禁水，8h后收集粪便质量，即为大黄的各活性成分致泻效价U/mg，以lmg粪便质 量作为1U的致泻效价。芦荟大黄素-8-0- -D-葡萄糖苷、番泻苷A等12种活性成分的致 泻效价测定结果，见表3.如下：
[0147] 表3各成分的效价测定结果（n= 3)
[0149] 以番泻苷A的致泻效价作为参照，其余11种活性成分的致泻效价与之相比，得到 该活性成分以番泻苷A计的致泻效应成分当量系数。结果见表4。
[0150] 表4 12种活性成分的致泻效应成分当量系数计算结果（n= 3)
[0151]
[0152] 特别说明：致泻效应成分当量系数的计算是以（大黄）药材中自身含有的致泻效 应最强的物质作为参照，最后用测定的其它泻下成分的效价与之相比，这个比值即为该活 性成分的当量系数。由于实验动物的个体之间的差异、操作误差等因素，每种成分的致泻效 应成分当量系数存在一定的波动范围，本申请的发明人认为表4中的范围是在可接受范围 内的。
[0153] 实施例4计算不同产地10批次的大黄药材的致泻效应成分当量值
[0154] 根据以上实施例1、2、3得到的数据，按照公式1进行计算，得到该10批次的大黄 药材/饮片的致泻效应成分当量值。结果见表5。
[0155] 表5 10批不同产地大黄药材中效应成分当量值计算结果（n= 3)
[0157] 实施例5效应成分当量的具体应用
[0158] 根据以上实施1-4例结果可以看出，不同产地、不同基原、不同生长年限的大黄药 材，按照2010版《中国药典》的质量控制标准来看，都是符合标准的药材，但是其致泻效应 成分当量存在较大的差异，因此其泻下的药理活性强度就存在较大差异。例如唐古特大黄 的泻下强度远远大于掌叶大黄的泻下强度，因此在临床应用中应注意区别用量。在同一剂 量要求下，致泻效应成分当量值较高的大黄药材通过换算应该适当的降低用量；反之，致泻 效应成分当量值较低的大黄药材可以根据换算适当增加用量，以此保证大黄临床疗效的有 效性和安全性。例如针对表5中10个批次大黄药材的不同致泻效应成分当量通过换算成 当量一致性的药材实际使用量为：
[0159] 表6不同致泻效应成分当量的大黄药材的实际使用量
[0162] 特别说明：针对表6中的数据，是按照如下方式计算的：药材编 号为2的大黄药 材，经过本发明的方法计算得到其lg药材的实测效应成分当量值为41. 611，如果要达到以 番泻苷A计的40当量值，那么药材编号为2的大黄药材临床的实际用量应该为40/41. 611 =0? 961g〇
[0163] 药材编号为3的大黄药材，经过本发明的方法计算得到其lg药材的实测效应成分 当量值为15. 775,如果要达到以番泻苷A计的40当量值，那么药材编号为2的大黄药材临 床的实际用量应该为40/15. 775 = 2. 536g。
[0164] 同理可以计算得到不同批次的大黄的当量一致性的实际用量，即可以保证临床用 量的稳定性。
[0165] 以上所述仅为本申请的优选实施例，并非对本申请作出任何形式上和实质上的限 制。本领域的技术人员，在不脱离本申请技术方案的范围内，当可利用以上所揭示的技术内 容而作出的些许更改、修饰与演变的等同变化均为本申请的等效实施例；同时，凡依据本申 请的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更改、修饰与演变等均在本申请的由权 利要求界定的范围内。
【主权项】
1. 一种中药质量评价方法，包括（1)测定与所述中药的临床疗效相关的活性成分的含 量；（2)测定所述活性成分的生物效价；（3)利用下述公式I来计算所述中药的活性成分的 效应成分当量值：(4)利用效应成分当量值通过适当换算得到药材的实际用量数值； EV=A1XC^A2XC2+......AiXCi-------公式I 其中EV表示活性成分的效应成分当量值； A1表示活性成分1的效应成分当量系数； C1表示每1克中药中活性成分1的含量（mg/g); A2表示活性成分2的效应成分当量系数； C2表示每1克中药中的活性成分2的含量（mg/g); Ai表示活性成分i的效应成分当量系数； Ci表示每1克中药中活性成分1的含量（mg/g)。2. 如权利要求1所述的方法，其中所述中药是大黄原药材或大黄饮片，所述生物效价 是致泻生物效价。3. -种基于大黄原药材或大黄饮片的致泻效应当量因子来调节大黄原药材或大黄饮 片的用量的方法，所述方法包括以下步骤： (a) 采用液相色谱法测量所述大黄原药材或大黄饮片中的芦荟大黄素-8-0--D-葡 萄糖苷、大黄酸-8-0- -D-葡萄糖苷、大黄酚-8-0- -D-葡萄糖苷、大黄素-8-0-e-D-葡 萄糖苷、大黄素甲醚-8-o-e-D-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲 醚、番泻苷A、番泻苷B共计12种活性成分的含量； (b) 利用公式II计算待测大黄药材的致泻效应成分当量值EV: EV= 1. 000XCi+0. 647XC2+0. 659XC3+0. 722XC4+0. 455XC5+0. 475XC6+0. 559XC7+0 .383XC8+0. 468XC9+0. 273XC10+0. 263XCn+0. 521XC12-------公式II C1代表每I克大黄药材/饮片中的番泻苷A的含量，mg/g; C2代表每1克大黄药材/饮片中的番泻苷B的含量，mg/g; C3代表每1克大黄药材/饮片中的芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/g; C4代表每1克大黄药材/饮片中的大黄酸-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/g; C5代表每1克大黄药材/饮片中的大黄酚-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/g; C6代表每1克大黄药材/饮片中的大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/g; C7代表每1克大黄药材/饮片中的大黄素甲醚-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量，mg/g; C8代表每1克大黄药材/饮片中芦荟大黄素的含量，mg/g; C9代表每1克大黄药材/饮片中的大黄酸的含量，mg/g; Cltl代表每1克大黄药材/饮片中的大黄酚的含量，mg/g; C11代表每1克大黄药材/饮片中的大黄素的含量，mg/g; C12代表每1克大黄药材/饮片中的大黄素甲醚的含量，mg/g。 (c) 根据计算得到的致泻效应成分当量值EV来调节大黄原药材或大黄饮片的用量。4. 如权利要求3所述的方法，其中所述步骤（a)包括： 色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，C18柱； 流动相：以甲醇（A)-O. 1 %磷酸水溶液（B)为流动相； 流动相流速：〇.卜〇. 4ml/min; 洗脱条件：〇 ~5min:38 - 43 (A)，5 ~7min:43 - 52 (A)，7 ~12min:52 - 57 (A)，12 ~ 15min:57 - 72 (A)，15 ~17min:72 - 79 (A)，17 ~20min:79 - 85 (A); 检测波长：250-420nm; 柱温：22-42°C; 进样量：1.0-4.OyI; 理论塔板数按大黄素甲醚计算应不低于50000 ; 对照品溶液的配制： 以色谱级甲醇作溶剂；精密称取芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷、大黄 酸-8-0--D-葡萄糖苷、大黄酚-8-0--D-葡萄糖苷、大黄素-8-0-e-D-葡萄糖苷、大 黄素甲醚-8-〇-e-D-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚10个对 照品适量置于棕色容量瓶，配制成浓度为50yg/ml、55yg/ml、35yg/ml、20yg/ml、15yg/ ml、8yg/ml、10yg/ml、7yg/ml、8yg/ml、7yg/ml的混合对照品溶液； 待测供试品溶液的配制： 取大黄粉末〇. 20g，过四号筛，精密称定，置50ml棕色容量瓶中，精密加入25ml甲醇，称 定重量，超声处理60分钟，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液过0. 22ym 微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液； 测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2y1进样测定，计算峰面积，按照外 标法测定含量。5.如权利要求3所述的方法，其中所述步骤（a)包括： 测定供试品，即待检测的大黄药材或饮片样品中番泻苷A和番泻苷B的含量： 色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，C18柱； 流动相：以乙腈（A)-O. 1 %磷酸水溶液（B)为流动相； 流动相流速：〇. 2ml/min; 洗脱条件：〇 ~5min:8 - 12(A)，5~IOmin:12 - 13(A)，10 ~15min:13 - 15(A)， 15 ~20min:15 - 17(A)，20 ~25min:17 - 21 (A)，25 ~30min:21 - 60(A); 检测波长：340nm; 柱温：30°C; 进样量：2.OiU; 理论塔板数按番泻苷A计算应不低于10000 ; 番泻苷A、番泻苷B的对照品溶液的配制： 以含有0. 1 %NaHCOj^ 45 %甲醇水溶液作溶剂；精密称取番泻苷A、番泻苷B对照品适 量置于棕色容量瓶，配制成浓度为70yg/ml、40yg/ml混合对照品溶液； 待测供试品溶液的配制： 取大黄粉末〇. 20g，过四号筛，精密称定，置50ml棕色容量瓶中，精密加入含有0. 1%NaHCOj^ 45 %甲醇水溶液25ml，称定重量，超声处理60分钟，控制水温35°C以下，再称定重 量，用0. 1 %NaHCOj^ 45 %甲醇水溶液补足减失的重量，离心10分钟，取上清液过0. 22ym 微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液； 测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2y1进样测定，测定峰面积，按照外 标一点法测定含量。6. 根据权利要求5所述的方法，其中所述a步骤确定的色谱条件为： 流动相：以甲醇（A)-O. 1 %磷酸水溶液（B)为流动相； 流动相流速：〇. 2ml/min; 洗脱条件：〇 ~5min:38 - 43 (A)，5 ~7min:43 - 52 (A)，7 ~12min:52 - 57 (A)，12 ~ 15min:57 - 72 (A)，15 ~17min:72 - 79 (A)，17 ~20min:79 - 85 (A); 检测波长：410nm; 柱温：30°C; 进样量：2.Oy1。7. 如权利要求3所述的方法，其中所述步骤（b)包括： 活性成分番泻苷A的效应成分当量系数为1. 000 ;活性成分番泻苷B的效应成分当量 系数为〇. 647 ;活性成分芦荟大黄素-8-0-0 -D-葡萄糖苷的效应成分当量系数为0. 659 ; 活性成分大黄酸-8 -〇 _ 0 -D-葡萄糖苷的效应成分当量系数为0. 7 2 2 ;活性成分大黄 酚-8-0-0 -D-葡萄糖苷的效应成分当量系数为0. 455 ;活性成分大黄素-8-0-0 -D-葡萄 糖苷的效应成分当量系数为0. 475 ;活性成分大黄素甲醚-8-0-0-D-葡萄糖苷的效应成分 当量系数为〇. 559 ;活性成分芦荟大黄素的效应成分当量系数为0. 383 ;活性成分大黄酸的 效应成分当量系数为0. 468 ;活性成分大黄素的效应成分当量系数为0. 273 ;活性成分大黄 酚的效应成分当量系数为0. 263 ;活性成分芦荟大黄素甲醚的效应成分当量系数为0. 521。8. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述大黄原药材或大黄饮片包括寥科植 物掌叶大黄RheumpalmatumL.、唐古特大黄RheumtanguticumMaxim,exBalf?或药用大 黄RheumofficinaleBaill.的干燥根、根莖和大黄饮片。
【专利摘要】本申请提供一种多组分综合量化的中药质量评控方法及应用。本申请所述中药质量评控方法，结合化学含量测定和生物效价测定，重点突出以生物效价综合量化评价大黄药材或饮片的质量，首次建立了大黄致泻效应成分当量计算方法，所述方法能够应用于初步评价不同产地、不同批次、不同生长年限的大黄药材或饮片的质量。
【IPC分类】G01N30/88, G01N33/15
【公开号】CN104897839
【申请号】CN201510324220
【发明人】肖小河, 王伽伯, 谭鹏, 张定堃, 李刚, 严桂林
【申请人】中国人民解放军第三〇二医院
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月12日
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