源自柑橘类的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法以及由此获得的川陈皮素和橘皮素含有物的制作方法
源自柑橘类的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法以及由此获得的川陈皮素和橘皮素含有物的制作方法
【专利说明】源自柑橘类的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法以及由 此获得的川陈皮素和橘皮素含有物
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求享有2012年10月12日提交的日本专利申请2012-227173号专利申 请的优先权，在此以引用的方式将上述申请的全部公开内容并入本文。
技术领域
[0003] 本申请涉及源自柑橘类的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法。
【背景技术】
[0004] 川陈皮素和橘皮素属于柑橘类中含有的多甲氧基黄酮类。川陈皮素具有下述式 (I)表示的结构。橘皮素具有下述式（II)表示的结构。据说川陈皮素和橘皮素具有癌变抑 制作用、血糖值降低作用、阿尔兹海默型痴呆症的预防效果等各种药理作用。
[0009] 栊柑和台湾香檬等柑橘类在许多情况下被用作加工果汁或果酱等的原料。当柑橘 类被提供用于这样的加工时，主要利用其果肉，榨汁后的果肉或果皮等被作为榨汁残渣而 丢弃。然而，与在果肉中相比，川陈皮素和橘皮素在榨汁残渣中含量更多。柑橘类的榨汁残 渣的一部分作为精油提取或家畜等的饲料而被再利用，然而，并不期望其作为含有川陈皮 素和橘皮素的食品材料的原料。
[0010] 日本专利申请公开2005-145824(以下称为"专利文献1"。在此以引用的方式将 该文献的公开内容并入本文）中，记载了以下获得川陈皮素的方法：将栊柑疏果在回流下 用30%乙醇提取1小时，所得残渣用90°C以上的热水提取1小时后浓缩，倾析获得上清液， 使其通过多孔吸附树脂后，以70%乙醇溶出，获得川陈皮素。
[0011] 此外，日本专利申请公开2006-327998(以下称为"专利文献2"。在此以引用的方 式将该文献的公开内容并入本文）公开了以下制造含有川陈皮素和橘皮素的多甲氧基黄 酮类的方法：作为对橙子的果皮油进行减压蒸馏除去苎烯的釜底油，对该釜底油进行薄膜 蒸馏，之后加入约25倍量的70%乙醇加热回流，制造含有川陈皮素和橘皮素的多甲氧基黄 酮类。
[0012] 此外，作为目前市售的产品，已知由ARKRAY公司（株式会社7 -夕U彳）销售的 产品（参见非专利文献1，在此以引用的方式将该文献的公开内容并入本文）。
[0013] 现有技术文献
[0014] 专利文献
[0015] 专利文献1 :日本专利申请公开2005-145824
[0016] 专利文献2 :日本专利申请公开2006-327998
[0017] 非专利文献
[0018] 非专利文献1 :功能性食品材料-ARKRAY〉〉台湾香檬提取物"Biletin产品的使 用"〈URL :http://ebn. arkray. co. jp/products/shiikuwasha-extract/detail_02/>
【发明内容】
[0019] 发明有待解决的问题
[0020] 由于柑橘类中含有的川陈皮素、橘皮素和其它多甲氧基黄酮类具有上述多种药理 作用，因而对其需要正在不断增加。因此，如果存在有效率地制造含有川陈皮素和橘皮素的 天然来源的物质（以下称为川陈皮素和橘皮素含有物）的方法，可对利用川陈皮素和橘皮 素含有物作为食品材料产生更多的期待。
[0021] 然而，对于专利文献1中记载的方法，存在以下问题：由于包括在回流下提取1小 时、随后进一步以90°C以上的热水进行提取的步骤，以及包括使用柱的步骤，因此，对操作 者具有高危险性，并且在经济性上是低效的方法。
[0022] 对于专利文献2中记载的方法，存在以下问题：由于包括通过减压蒸馏制造釜底 油以及薄膜蒸馏的步骤，随后需要进一步使用大量的70%乙醇，因此具有危险，并且是不经 济的方法。
[0023] 对于非专利文献1中记载的产品，存在以下问题：由于川陈皮素和橘皮素的含有 率为10%左右（w/w)，因此是川陈皮素和橘皮素含有率非常低的产品，不能用作食品材料 的原料。
[0024] 因此，本发明的目的为提供一种川陈皮素和橘皮素含有率高的川陈皮素和橘皮素 含有物的制造方法以及通过该方法获得的川陈皮素和橘皮素含有物。与现有技术相比，本 发明的方法更具安全性，并且，由于方法中使用的溶剂量和步骤数量不多，因而在经济性和 工业化方面优异。
[0025] 解决问题的手段
[0026] 为了达成上述目的，本发明人进行了深入探讨，作为结果，通过对柑橘类进行热水 处理和溶剂提取处理、或者对柑橘类进行温溶剂提取处理而获得川陈皮素和橘皮素溶解产 物，随后，以稀碱对所述川陈皮素和橘皮素溶解产物进行处理，成功获得了高含有率的川陈 皮素和橘皮素含有物。此外，与专利文献1和专利文献2中记载的方法相比，该方法所使用 的溶剂量更小，也可设定为较低的温度，并且还具有简单的步骤，因此是安全性、经济性和 工业化优异的方法。本发明是基于这样的发现而完成的发明。
[0027] 因此，根据本发明，提供了包括以下步骤（1-1)至（1-3)以及步骤⑶和步骤⑷、 或者步骤（2)以及步骤（3)和步骤（4)的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法：
[0028] (1-1)以热水对柑橘类进行处理，获得热水处理产物的步骤；
[0029] (1-2)对所述热水处理产物进行干燥，获得干燥产物的步骤；
[0030] (1-3)以可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂对所述干燥产物进行处理，获得川陈皮 素和橘皮素溶解产物的步骤；
[0031] (2)以可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶剂对柑橘类进行处理，获得川陈皮素和橘 皮素溶解产物的步骤；
[0032] (3)对所述川陈皮素和橘皮素溶解产物进行浓缩和/或干燥，获得川陈皮素和橘 皮素浓缩产物的步骤；
[0033] (4)使用稀碱对所述川陈皮素和橘皮素浓缩产物进行处理，获得作为不溶性成分 的川陈皮素和橘皮素含有物的步骤。
[0034] 优选地，在所述步骤（4)的后期阶段，进一步包含以下步骤（5):
[0035] (5)向所述含有川陈皮素和橘皮素的浓缩产物中添加10% (v/v)以下的甲醇进行 处理，获得甲醇不溶性成分的步骤。
[0036] 优选地，所述步骤（1-2)为：通过对所述热水处理产物进行过滤得到的过滤残渣 进行压榨或不进行压榨，通过干燥从所述热水处理产物除去水分获得干燥产物的步骤。
[0037] 优选地，所述步骤（1-1)为：使用保持在50_80°C温度下的热水对柑橘类处理2-4 小时，获得热水处理产物的步骤。
[0038] 优选地，所述步骤（2)为：使用保持在50_70°C温度下的、可溶解川陈皮素和橘皮 素的温溶剂对柑橘类处理1-8小时，获得川陈皮素和橘皮素溶解产物的步骤。
[0039] 优选地，所述可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂或可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶 剂为20-100% (v/v)的乙醇、更优选为20-50% (v/v)的乙醇。
[0040] 优选地，所述步骤（4)为：在室温下，使用1-3% (w/v)的碱水溶液对所述川陈皮 素和橘皮素浓缩产物进行处理，获得作为不溶性成分的川陈皮素和橘皮素含有物的步骤。
[0041] 优选地，所述柑橘类为选自以下植物所组成的组中的至少一种：台湾香檬（Citrus depressa)、温州蜜柑（C.unshiu)、立花橘（C.tachibana)、光橘（C.leiocarpa)、奇利蜜 柑（C.tardiva)、本地早橘（C.succosa)、乳橘（C.kinokuni)、朱橘（C.erythrosa)、酸橘 (C.sunki)、地中海柑（C.deliciosa)、广西沙柑（C.nobilis)、栊柑（C.retuculata)、红 橘（C.tangerina)、花柚（C.hanayu)、蜜橘（C. reticulata)、酸橘（C.sunki)、高雷立花橘 (C. nippokoreana)、不知火杂柑（シ7 ^匕）和清见（清見）。
[0042] 根据本发明的另一方面，提供了通过本发明的方法制造的川陈皮素和橘皮素含有 物。
[0043] 优选地，所述川陈皮素和橘皮素含有物中川陈皮素的含有率为45% (w/v)以上， 并且，橘皮素的含有率为25% (w/v)以上。
[0044] 优选地，所述川陈皮素和橘皮素含有物中辛弗林（シ冬7 y y )的含有率低于检 出下限值。
[0045] 作为本发明的川陈皮素和橘皮素含有物的另一实施方式，提供了来自柑橘类的川 陈皮素和橘皮素含有物，其中，川陈皮素的含有率为45% (w/v)以上，橘皮素的含有率为 25% (w/v)以上，并且，辛弗林的含有率低于检出下限值。
[0046] 作为其它实施方式，提供了以下的发明。
[0047] 1.以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的级分（画分）的制造方法，所述方法具有 以下步骤：将压榨柑橘类果实得到的榨汁残渣以热水洗涤，获得热水洗涤残渣的残渣获得 步骤；将所述残渣进行干燥，以20-40 %的乙醇提取，获得提取产物的乙醇提取产物获得步 骤；在低温下，对所述乙醇提取产物进行浓缩，获得浓缩产物的浓缩产物获得步骤；向所述 浓缩产物中添加稀碱，然后进行搅拌处理，获得不溶性成分的碱不溶性成分获得步骤；以 及，以乙醇使所述碱不溶性成分溶出的乙醇溶出步骤。
[0048] 2.所述方法的特征在于，所述柑橘类为选自以下植物所组成的组中的至少一 种：台湾香檬（Citrus depressa)、立花橘（C.tachibana)、光橘（C. Ieiocarpa)、奇利蜜 柑（C.tardiva)、本地早橘（C.succosa)、乳橘（C.kinokuni)、朱橘（C.erythrosa)、酸橘 (C.sunki)、地中海柑（C.deliciosa)、广西沙柑（C.nobilis)、栊柑（C.retuculata)、红橘 (C. tangerina)、花柚（C. hanayu)以及高雷立花橘（C. nippokoreana)。
[0049] 3.所述方法的特征在于，所述方法进一步包括在浓缩产物获得步骤与所述碱不溶 性成分获得步骤之间，通过向所述浓缩产物中添加甲醇进行处理，获得甲醇不溶性成分的 甲醇不溶性成分获得步骤。
[0050] 4.所述方法的特征在于，所述残渣获得步骤中的加热干燥在50-70°C、15-45分钟 的条件下进行。
[0051] 5.所述方法的特征在于，所述残渣获得步骤中的加热干燥在60°C、30分钟的条件 下进行。
[0052] 6.所述方法的特征在于，所述残渣获得步骤中的热水提取在50_80°C的温浴中、 2-4小时的条件下进行。
[0053] 7.所 述方法的特征在于，所述残渣获得步骤中的热水提取在70°C、3小时的条件 下进行。
[0054] 8.所述方法的特征在于，所述残渣获得步骤中的热水提取后残渣的获得使用保留 粒径5 ym以下的过滤器进行。
[0055] 9.所述方法的特征在于，所述乙醇提取步骤中的加热干燥在50_70°C、15-45分钟 的条件下进行。
[0056] 10.所述方法的特征在于，所述乙醇提取步骤中的加热干燥在60°C、30分钟的条 件下进行。
[0057] 11.所述方法的特征在于，所述乙醇提取产物获得步骤中的乙醇提取使用 20-40%的乙醇，在室温下进行1-5天。
[0058] 12.所述方法的特征在于，所述乙醇提取产物获得步骤中的乙醇提取使用30%的 乙醇在室温下进行。
[0059] 13.所述方法的特征在于，所述乙醇提取产物获得步骤中的乙醇提取液在50°C以 下的温度下浓缩预定的时间。
[0060] 14.所述方法的特征在于，所述碱不溶性成分获得步骤中的碱处理使用1-3%的 碱液在室温下进行4-8天。
[0061] 15.所述方法的特征在于，所述碱不溶性成分获得步骤中的不溶性成分的获得使 用保留粒径5 ym以下的过滤器进行。
[0062] 16.所述方法的特征在于，以甲醇使前述不溶性成分溶出，使用保留粒径5 ym以 下的过滤器进行过滤。
[0063] 17.通过所述制造方法制造的以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的级分。
[0064] 18.所述以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的级分的特征在于，所述级分中，川陈皮 素的含有率为45% (w/v)，橘皮素的含有率为25% (w/v)以上。
[0065] 发明效果
[0066] 与现有技术相比，本发明的方法为安全性、工业化和经济性上优异的方法，能够制 造以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的来自柑橘类的组合物。进一步地，当使用本发明的川 陈皮素和橘皮素含有物时，可进一步期待将其作为川陈皮素和橘皮素含有物的食品材料， 例如食品用原料或食品用组合物而加以利用。此外，利用川陈皮素和橘皮素的生理活性，可 提供医药品以及化妆品的用途。此时，可以单独或与其它添加物一起，通过以下各种形式提 供本发明的川陈皮素和橘皮素含有物：食品用、化妆品用或医药品用的粉末剂、颗粒剂、片 剂、液剂、糊剂、胶囊剂、凝胶剂、霜剂等。
【具体实施方式】
[0067] 以下更详细地说明本发明。
[0068] 本发明所述的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法是特征在于以下内容的方法： 通过对作为原料的柑橘类进行加热和溶剂提取，获得川陈皮素和橘皮素溶解产物，通过稀 碱对所述溶解产物进行处理，除去柑橘类中含有的糖类和脂肪酸等成分，制造作为不溶性 成分的、以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的川陈皮素和橘皮素含有物。根据川陈皮素和橘 皮素溶解产物获得步骤的差别，可以将本发明的方法大致划分为第一实施方式和第二实施 方式。
[0069] 首先，本发明的方法的第一实施方式包括以下步骤（1-1)至（1-3)以及步骤（3) 和⑷。
[0070] (1-1)以热水对柑橘类进行处理，获得热水处理产物的步骤；
[0071] (1-2)对所述热水处理产物进行干燥，获得干燥产物的步骤；
[0072] (1-3)以可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂，对所述干燥产物进行处理，获得川陈皮 素和橘皮素溶解产物的步骤；
[0073] (3)对所述川陈皮素和橘皮素溶解产物进行浓缩和/或干燥，获得川陈皮素和橘 皮素浓缩产物的步骤；
[0074] (4)使用稀碱对所述川陈皮素和橘皮素浓缩产物进行处理，获得作为不溶性成分 的川陈皮素和橘皮素含有物的步骤。
[0075] 其次，本发明的方法的第二实施方式包括以下步骤（2)以及步骤⑶和（4)。
[0076] (2)以可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶剂对柑橘类进行处理，获得川陈皮素和橘 皮素溶解产物的步骤；
[0077] (3)对所述川陈皮素和橘皮素溶解产物进行浓缩和/或干燥，获得川陈皮素和橘 皮素浓缩产物的步骤；
[0078] (4)使用稀碱对所述川陈皮素和橘皮素浓缩产物进行处理，获得作为不溶性成分 的川陈皮素和橘皮素含有物的步骤。
[0079] 对于本发明所述的柑橘类，只要是含有川陈皮素和橘皮素的柑橘类即可，并无特 别限制。作为本发明所述的柑橘类，例如，厚叶橙7卜）、雅法橙、约帕橙、脐橙、伏 令夏橙、福原橙、血橙、佛手柑等橙类；柚橙和葡萄柚等葡萄柚类；臭橙（力求只）、清冈橙、 泰国柠檬（ 37'' s力 > )、三宝柑、台湾香檬、香橼、史达橘（只久'于）、酸橙（久久'彳）、 新姬果、佛手柑、Yuukou mandarin( 10 33 )、柚柑、香橙（工文）、来檬、梓檬等香酸柑 橘类；cocktail fruit (力夕亍7少一 7 )、川野夏橙（力7 77久、Y久、Y )、黄蜜柑、 贾巴拉柑橘（9A 7 )、湘南金（湘南3''- ;1/卜'、）、sweetie (只々4 一亍?一）、夏蜜柑、 八朔、Haruka(过力〇、媛小春、日向夏等杂柑类；Akino kagayaki (凸栊）、伊予柑、爱媛 果试28号、清见、佐贺果试34号（凸栊）、shion no megumi (師恩?恵）、shiranuhi (凸 栊）、setoka(甘i：扣）、setomi (甘i：办）、大将季（凸栊）、蕉柑（夕y力y )、harumi ( ?S *)、hinoyutaka (凸栊）、默科特（Y - r/ 7卜）和麗红等橘橙类；牙买加丑橘（ y 7少一 7 )、夏鲜（寸Y - ッシi )、甜春（只彳一卜）、西米诺尔（七S 7P )、橘柚、明尼奥拉（S氺才7 )等橘柚类；安政柑、河内晚柑、晚白柚和文旦（7''> 夕> (铲求 >))等柚子类；温州蜜柑、大津四号、加利蒙地亚橘（力7 シ一）、甘平、纪 州蜜柑（紀州S力 > )、光橘（柑橘类）、樱岛蜜柑、立花橘（夕)、藤中蜜柑、栊柑和 蜜橘等蜜柑类；枳等枳属；以及长叶金橘、椭圆金橘、宁波金橘、福州金橘、香港金橘、圆金 橘等金橘属。优选的例子包括台湾香檬（Citrus depressa)、温州蜜柑（C. unshiu)、立花 橘（C. tachibana)、光橘（C. Ieiocarpa)、奇利蜜柑（C. tardiva)、本地早橘（C. succosa)、 乳橘（C.kinokuni)、朱橘（C.erythrosa)、酸橘（C.sunki)、地中海柑（C.deliciosa)、广 西沙柑（C.nobilis)、栊柑（C.retuculata)、红橘（C.tangerina)、花柚（C.hanayu)、蜜橘 (C. reticulata)、酸橘（C. sunki)、高雷立花橘（C. nippokoreana)、不知火杂柑（シ 7 ^ 匕） 以及清见（清見）。本发明所述的柑橘类可以是一种或两种以上，也可以是上述作为具体实 例列举的柑橘类的杂交品种。
[0080] 对于本发明中可利用的柑橘类的部位，只要是含有川陈皮素和橘皮素的部位即 可，并无特别限制。例如，除了果实以外，果皮、榨汁残渣（果渣）、剪除的叶子与小枝、上述 部位的干燥物等也可作为原料使用。在使用台湾香檬、栊柑等的情况下，优选使用果实、果 皮和榨汁残渣，这是因为其单位重量中含有较多的川陈皮素、橘皮素。另一方面，尽管剪除 的叶子与小枝等的单位重量中的川陈皮素、橘皮素含量不像果皮中的那么多，但剪除的叶 子与小枝等却大量产生。因此，使用这些部位具有可减轻环境负担的可能性。
[0081] 对于获得柑橘类的榨汁残渣的方法，并不特别限定，可通过榨汁机等对柑橘类的 果实进行处理而获得榨汁残渣。对于榨汁机，并不特别限定，然而优选辊压机、滤布压榨机、 离心过滤式分离装置等，这是由于它们可有效地获得榨汁后的果皮。
[0082]对于获得柑橘类的果实、果皮以及榨汁残渣的干燥产物的方法，并不特别限定，可 在50-70°C、15-45分钟的条件下加热干燥柑橘类，获得柑橘类的干燥物。此时，在低于50°C 的温度下干燥时，15-45分钟这样短的时间可能无法进行充分干燥；而在超过70°C的温度 下干燥时，柑橘类中含有的成分可能在干燥中发生变性。因此，加热干燥柑橘类时，优选在 约60 °C下，干燥约30分钟。
[0083] 在步骤（1-1)中，通过以热水对柑橘类进行处理，获得热水处理产物。通过使用热 水对柑橘类进行处理，在热水中对柑橘类中的糖分进行溶出等，可除去糖分。热水优选为保 持在50°C以上的温度的热水。当热水的温度低于50°C时，存在着柑橘类中的水溶性污物不 能充分除去的可能性。另一方面，当热水的温度超过80°C时，对方法操作人员存在危险性， 且产生燃料费用。因此，优选热水的温度为50-80°C。对于以热水对柑橘类进行处理的时 间，只要是能够完全除去柑橘类中的水溶性污物的时间即可，并不特别限定，例如1小时以 上、优选2小时以上、更优选2-4小时的时间。步骤（1-1)的优选实施方式为获得热水处 理产物的步骤，该步骤例如使用保持在50-80°C的温度的热水，将柑橘类处理2-4小时的时 间。作为步骤（1-1)的【具体实施方式】，并不特别限定，例如可列举将在蒸馏水中加入柑橘类 的容器放入温浴中，在50-80°C的温度下保持2-4小时的时间。此时，进一步优选热水处理 在约70°C下、约3小时的条件下进行。
[0084] 步骤（1-1)获得的热水处理产物为柑橘类与水的混合物。因此，从后续步骤（1-2) 的干燥效率和获取效率的角度出发，优选使用保留粒径5 ym以下的过滤器对热水处理产 物进行过滤处理等通常知晓的固液分离手段，得到作为固体残渣的热水处理产物。当使用 过滤器时，若保留粒径设定在3 ym以下时，可进一步提高效率。此外，步骤（1-1)中使用的 柑橘类为果实、果皮的情况下，从后续步骤（1-2)的干燥效率或获取效率的角度出发，优选 对热水处理产物或热水处理产物的残渣进行压榨获得榨汁残渣。因此，本发明的方法中，步 骤（1-1)的后期阶段中，可设置获得热水处理产物的残渣的步骤，或者对热水处理产物的 残渣进行压榨获得榨汁残渣的步骤。此外，本发明所述的热水处理产物除了步骤（1-1)获 得的热水处理产物之外，还包含热水处理产物的残渣或榨汁残渣等由热水处理产物加工以 降低水分的产物。
[0085] 步骤（1-2)中，通过对步骤（1-1)中获得的热水处理产物进行干燥而获得干燥产 物。对于该干燥，只要是将热水处理产物的含水率干燥至低于数十％、优选低于10%的干 燥即可，并不特别限定，然而优选在约50_80°C、数十分钟至数十小时的条件下进行加热干 燥。在低于50°C下对热水处理产物进行干燥时，存在数十分钟的短时间内不能充分进行干 燥的可能性；另一方面，在高于80°C的温度下对热水处理产物进行干燥 时，存在热水处理 产物中含有的成分在干燥中发生变性的可能性。因此，在工业化时，优选使用干燥机等，在 约50-80°C下，将热水处理产物干燥数小时至数十小时，更优选在约70°C下干燥12-24小 时。经过这样的干燥处理，通过步骤（1-2)，可获得含有川陈皮素和橘皮素、并且含水率低于 约10 %的干燥产物。
[0086] 步骤（1-3)中，以可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂对步骤（1-2)中获得的干燥产 物进行处理，获得川陈皮素和橘皮素溶解产物。对于可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂，只要 是能够溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂即可，并不特别限定。例如，可列举对川陈皮素和橘 皮素具有易溶性的溶剂，具体来说，如乙醇和乙酸乙酯等有机溶剂、以及这些有机溶剂与水 的混合溶剂。作为可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂，使用乙醇和水的混合溶剂的情况下，例 如，可使用20-100% (v/v)的乙醇。然而，如果乙醇浓度低于20% (v/v)，存在提取效率低 下的可能性，并且，即使乙醇浓度超过50% (v/v)，提取效率也不会显著提高，因此，作为可 溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂，优选20-50% (v/v)的乙醇；从提取效率、安全性和工业化 的角度出发，更优选30% (v/v)的乙醇。此外，对于步骤（1-3)的处理条件，只要是适合于 使干燥产物中的川陈皮素和橘皮素溶于溶剂中的条件即可，并不特别限定，可通过适当地 进行采样并确认溶液中的川陈皮素和橘皮素的浓度来对条件进行确定即可，然而，例如可 在室温下处理1-5天，从提取效率的角度出发，优选在室温下处理3天。对于川陈皮素和橘 皮素溶解产物中的川陈皮素和橘皮素的回收率，并不特别限定，然而，以原料柑橘类中含有 的川陈皮素和橘皮素的预测含量（59mg/g)作为基准，优选40% (23.6mg/g)以上，更优选 70% (41.3mg/g)以上、进一步优选 90% (53.1mg/g)以上，更进一步优选 95% (56.1mg/g) 以上。
[0087] 通过步骤（1-3)获得的川陈皮素和橘皮素溶解产物含有一定量的固体成分。因 此，从后续步骤（4)的处理效率的角度出发，优选使步骤（1-3)获得的川陈皮素和橘皮素溶 解产物经过固液分离手段，例如，使用保留粒径10 ym以下的过滤器、优选3 ym以下的过滤 器进行过滤等，获得作为液体成分的溶解产物。此时，在本发明中，对于川陈皮素和橘皮素 溶解产物，除了通过步骤（1-3)获得的含有固体成分的川陈皮素和橘皮素溶解产物以外， 还包含除去固体成分的液体性质的川陈皮素和橘皮素溶解产物。
[0088] 步骤（2)中，通过以可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶剂进行处理，获得川陈皮素 和橘皮素溶解产物。步骤（2)中，为了通过可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶剂更有效地对 柑橘类中的川陈皮素和橘皮素进行溶出，优选步骤（2)中使用的柑橘类为榨汁残渣或榨汁 残渣的干燥产物。可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶剂为将可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂 保持在50-70°C、优选保持在约60°C下的溶剂。对于步骤（2)的处理时间，只要是能够使柑 橘类中的川陈皮素和橘皮素能在溶剂中充分溶出的时间即可，并不特别限定，然而，例如在 1小时以上、优选2小时以上、更优选4-8小时。优选与步骤（1-3)相同地，由步骤⑵的溶 剂处理获得的川陈皮素和橘皮素溶解产物经过保留粒径10 Um的滤芯式过滤器进行过滤 等固液分离手段，获得作为液体成分的溶解产物。
[0089] 本发明的方法包含步骤（3)，所述步骤（3)通过对步骤（1-3)或步骤（2)获得的川 陈皮素和橘皮素溶解产物进行浓缩、干燥或浓缩与干燥，获得川陈皮素和橘皮素浓缩产物。 对于川陈皮素和橘皮素溶解产物的浓缩方法，并不特别限定，然而，可列举例如在低温下使 川陈皮素和橘皮素溶解产物中的溶剂挥发预定的时间而形成干固状态的含有川陈皮素和 橘皮素的浓缩产物的方法。对于川陈皮素和橘皮素的浓缩，只要是除去可溶解川陈皮素和 橘皮素的溶剂而获得体积减少的川陈皮素和橘皮素浓缩产物即可，并不特别限定，然而，例 如，在使用20-100% (v/v)乙醇作为可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂的情况下，考虑到防 止所含成分发生变性，在50°C以下的温度下，进行数十分钟至数小时、优选10分钟-2小时 的浓缩。此外，对于川陈皮素和橘皮素溶解产物的干燥方法，并不特别限定，然而，可列举对 川陈皮素和橘皮素溶解产物或其浓缩产物进行加热干燥或冷冻干燥的方法。
[0090] 步骤（4)中，通过使用稀碱对川陈皮素和橘皮素浓缩产物进行处理，获得作为不 溶性成分的川陈皮素和橘皮素含有物。通过使用稀碱对川陈皮素和橘皮素浓缩产物进行处 理，可除去溶液中的脂肪酸等污物成分，获得以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的川陈皮素 和橘皮素含有物。对于稀碱，只要是分解川陈皮素和橘皮素浓缩产物中的污物且不分解川 陈皮素和橘皮素的稀碱即可，并不特别限定。例如，可列举选自于由氢氧化钠水溶液与氢氧 化钾水溶液所组成的组的稀碱水溶液。对于稀碱的碱浓度，并不特别限定，然而，例如，在稀 碱为氢氧化钠水溶液的情况下，可为0. 1-20% (w/v)、优选0. 5-10% (w/v)、更优选1-3% (w/v)〇
[0091] 对于步骤（4)的川陈皮素和橘皮素浓缩产物的稀碱处理，例如，可通过使川陈皮 素和橘皮素浓缩产物与1-3% (w/v)的碱溶液相接触，在室温下实施1-6天。作为步骤（4) 的【具体实施方式】，并不特别限定，然而，可通过在室温下，对川陈皮素和橘皮素浓缩产物与 1% (w/v)的氢氧化钠水溶液的混合物搅拌1-2天，实施所述稀碱处理。
[0092] 通过实施步骤（4)，可获得作为不溶性成分的川陈皮素和橘皮素含有物。为了收集 川陈皮素和橘皮素含有物，可使用离心分离、过滤等通常知晓的固液分离手段。此外，例如 将川陈皮素和橘皮素含有物作为食品用原料使用的情况下，优选用水洗涤等而进行中和。 进一步地，可使川陈皮素和橘皮素含有物经过精制步骤。例如，收集并用水洗涤川陈皮素和 橘皮素含有物与可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂相混合所得到的混合物，通过使该混合物 经过固液分离，可获得作为液体成分的、杂质减少的川陈皮素和橘皮素含有物。
[0093]与现有技术相比，通过本发明的方法获得的川陈皮素和橘皮素含有物是以高浓度 含有川陈皮素和橘皮素的来自柑橘类的组合物，然而，例如，优选川陈皮素和橘皮素含有率 为25% (w/v)以上的川陈皮素和橘皮素含有物，更优选川陈皮素含有率为45% (w/v)以上 且橘皮素含有率为25% (w/v)以上的川陈皮素和橘皮素含有物。
[0094] 此外，本发明人发现，通过本发明方法获得的川陈皮素和橘皮素含有物中，可能对 人体产生不利影响的辛弗林的含有率非常小。从而，本发明的方法的优选实施方式是辛弗 林的含有率低于〇. 5% (w/v)、优选辛弗林的含有率低于检出下限值的川陈皮素和橘皮素 含有物的制造方法。川陈皮素、橘皮素和辛弗林的含量可通过下述实施例中记载的方法进 行测定。
[0095] 只要是能够实现本发明的目的，本发明的方法也可加入上述步骤以外的各种步 骤。例如，在步骤（4)的早期阶段，可包括在将川陈皮素和橘皮素浓缩产物与不溶解川陈皮 素和橘皮素的有机溶剂混合之后，通过固液分离手段获得不溶性成分的步骤。此外，在该工 序之后，可加入如下步骤：所述不溶性成分与可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂混合后，通过 固液分离手段获得可溶性成分。对于不溶解川陈皮素和橘皮素的有机溶剂，并不特别限定， 然而，可列举例如10% (v/v)以下的甲醇和乙醇。
[0096] 作为其它实施方式，本发明的方法也可表达为具有以下步骤的以高浓度含有川陈 皮素和橘皮素的级分的制造方法：对柑橘类果实进行压榨和干燥或不进行压榨和干燥，以 热水洗涤获得热水洗涤残渣的残渣获得步骤；将所述残渣进行干燥，以20-40%乙醇提取 获得提取产物的乙醇提取产物获得步骤；在低温下对所述乙醇提取产物进行浓缩，获得浓 缩产物的浓缩产物获得步骤；向所述浓缩产物中添加稀碱，进行搅拌处理，获得不溶性成分 的碱不溶性成分获得步骤；以乙醇对所述碱不溶性成分进行溶出的乙醇溶出步骤。
[0097] 通过本发明的方法制造的川陈皮素和橘皮素含有物可作为另一实施方式包含于 本发明中。本发明的川陈皮素和橘皮素含有物可通过本发明的方法制造，并且只要是与现 有技术相比，以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的来自柑橘类的组合物即可，并不特别限定， 然而，例如，从使用含有川陈皮素和橘皮素的组合物作为食品用原料制造产品时的成本的 角度出发，优选川陈皮素和橘皮素的含有率在25% (w/v)以上的川陈皮素和橘皮素含有 物，更优选川陈皮素含有率在45% (w/v)以上且橘皮素含有率在25% (w/v)以上的川陈皮 素和橘皮素含有物。进一步地，本发明的川陈皮素和橘皮素含有物进一步优选辛弗林的含 有率低于0.5% (w/v)，并且进一步优选辛弗林的含有率低于检出下限值。此外，作为本发 明的川陈皮素和橘皮素含有物的其它实施方式，提供了川陈皮素的含有率在45% (w/v)以 上、橘皮素的含有率在25% (w/v)以上、且辛弗林的含有率低于检出下限值的、来自柑橘类 的川陈皮素和橘皮素含有物。
[0098] 以下，作为【具体实施方式】，对以压榨台湾香檬获得的榨汁残渣的果渣作为原料，制 造以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的级分的方法进行说明，然而本发明的方法并不限于以 下内容。
[0099] 首先，以水洗涤台湾香檬，随后使用可直接压榨台湾香檬果实的各种压榨机进行 压榨处理。作为进行此类处理的压榨机，可列举例如，使其间夹有10-20目的连续网的两个 压缩辊转动、使用这两个压缩辊对连续供给的台湾香檬果实进行压榨的辊压榨汁机；以布 包裹台湾香檬果实进行压缩而榨汁的滤布压缩机；离心过滤式分离装置等。
[0100]称量压榨果汁获得的、预定量（例如约300g-约500g(湿重））的榨汁残渣。随后， 将该残渣在约50°C-约70°C下，使用干燥机等干燥。对干燥后的榨汁残渣的重量（干燥重 量）进行称量后，将干燥榨汁残渣置于合适的容器，向其中添加上述干燥重量的1-2倍量的 蒸馏水，将该容器移入约60°C -约80°C的温浴中，提取1-3小时。提取后，将烧杯由温浴中 取出并自然冷却，随后例如将保留粒径在5 ym以下的滤纸铺于布氏漏斗中，对全部提取液 进行抽滤，过滤分离残渣。
[0101] 再次与上述相同地，将所得残渣在约50°c -约70°C下使用干燥机等干燥、称量。添 加干燥重量的2-3倍量的乙醇，在室温下提取2-4天。随后，与上述相同地、对全部提取液 进行抽滤、过滤分离残渣。在约30 °C -40 °C下，将滤液浓缩约15分钟-约60分钟。
[0102] 向所得浓缩产物中添加该浓缩产物8-10倍量的1 % (w/v)氢氧化钠水溶液，在室 温下充分混合。在室温下，例如使用搅拌器对该混合液进行持续搅拌1-2天。随后，例如通 过将保留粒径在5 ym以 下的滤纸设置在漏斗中进行自然过滤，对可溶性成分与不溶性成 分进行分离。以1-2倍量的水洗涤所得的不溶性成分。以5-10倍量的乙醇对所残留的不 溶性成分进行溶出。随后，在室温下对可溶于乙醇的部分浓缩约15分钟-约60分钟。浓 缩后的液体量变成浓缩前的重量的约1/15-约1/20,对该液体量进行测定。
[0103] 向该浓缩液中添加液体量8-10倍量的约0.5-2% (w/v)氢氧化钠水溶液，充分混 合。随后，在室温下，例如使用搅拌器对该混合液持续搅拌4-8天。随后，例如通过将保留 粒径在5 ym以下的滤纸设置在漏斗中进行自然过滤，分离残渣。通过以上步骤，可获得以 高含有率含有川陈皮素和橘皮素的级分。
[0104] 以下，通过列举实施例对本发明作进一步详细说明。然而，本发明并不限于以下实 施例。
[0105] 实施例
[0106]作为柱，使用Develosil ODS-HG-5柱，作为流动相，使用MeOH = H2O = 70:30,设定 流速lml/min、测定波长215. Onm，通过确定具有保留时间分别为约8-9分钟、约11-12分钟 的峰的物质，由校准曲线法测定了川陈皮素和橘皮素的含量（mg)。
[0107] 作为柱，使用Develosil ODS-HG-5柱，作为流动相，使用CH3CN = H2O = 2:98(包括 0. 1% TFA)，设定流速lml/min、测定波长223. Onm，通过确定具有保留时间约为8-9分钟的 峰的物质，由校准曲线法测定了辛弗林的含量（mg)。
[0108] 实施例1
[0109] 对产自冲绳县东村的台湾香檬的500g压榨果渣进行充分洗涤，添加1800mL的 约70°C的蒸馏水，置于约70°C的水浴，加热处理3小时。使用铺有保留粒径3 ym的滤纸 (ADVANTEC公司制，No. 131)的布氏漏斗，对所获得的加热处理产物进行抽滤，获得残渣。将 残渣加入压榨机进行榨汁。
[0110] 称量300g(湿重）榨汁后的榨汁残渣，使用干燥机（松下公司制，产品编号 EH5101P TurboDry)在约60°C下干燥30分钟，获得150g干燥果皮。向其中添加榨汁残渣 重量的2倍量的30% (v/v)乙醇，在室温下进行3天的乙醇提取。使用铺有保留粒径3 ym 的滤纸（ADVANTEC公司制，No. 131)的布氏漏斗进行抽滤，获得3200mg滤液（表1中的"乙 醇提取后（1)"）。使用旋转蒸发仪对所获得的滤液进行浓缩，获得浓缩液。
[0111] 向浓缩液添加10倍量的1% (w/v)氢氧化钠水溶液，在室温下，用搅拌器搅拌1 天。使用2倍量的水对所得的不溶性成分进行洗涤。以5-10倍量的100% (v/v)乙醇对 残留的不溶性成分进行溶出。随后，使用布氏漏斗对乙醇溶出成分进行处理以过滤分离沉 淀物。通过HPLC测定，如表1所示，所得滤液的浓缩干固产物66. 3mg中的川陈皮素和橘皮 素的含量分别为34.〇1^和16.811^，含有率为约77被％。此外，回收率（％)通过假设50(^ 台湾香檬的压榨果渣中含有的川陈皮素和橘皮素含量为500mg而确定。
[0112] 表 1
[0114] 实施例2
[0115] 对产自冲绳县东村的台湾香檬的500g压榨果渣进行充分洗涤，添加1800mL的 约70°C的蒸馏水，置于约70°C的水浴，加热处理3小时。使用铺有保留粒径3 ym的滤纸 (ADVANTEC公司制，No. 131)的布氏漏斗，对所获得的加热处理产物进行抽滤，获得残渣。
[0116] 称量500g(湿重）残渣，使用干燥机（松下公司制，产品编号H15101P TurboDry) 在约60°C下干燥30分钟，获得225g干燥果皮。向其中添加残渣重量的2倍量的100% (v/ v)乙醇，在室温下进行3天的乙醇提取。使用铺有保留粒径3 ym的滤纸（ADVANTEC公司 制，No. 131)的布氏漏斗进行抽滤，获得滤液。对滤液进行浓缩干固，获得13. Ig浓缩干固产 物（表2中的"乙醇提取后（1) "）。以旋转蒸发仪对所获得的滤液进行浓缩，获得浓缩液。
[0117] 向浓缩液添加10倍量的1% (w/v)氢氧化钠水溶液，在室温下，用搅拌器搅拌1 天。使用2倍量的水对所得的不溶性成分进行洗涤。以5-10倍量的100% (v/v)乙醇对残 留的不溶性成分进行溶出。随后，使用布氏漏斗对乙醇溶出成分进行处理以过滤分离沉淀 物。通过HPLC测定，如表2所示，浓缩干固滤液后所得的高含量的川陈皮素和橘皮素含有 物76. Omg中，川陈皮素和橘皮素的含量分别为43. 9mg和26. 8mg，含有率为约93wt %。以下 表2中，川陈皮素和橘皮素的含量、含有率和回收率通过与上述实施例1同样的方式确定。
[0118]表2
[0119]
[0120] 实施例3
[0121] 称量台湾香檬的50g(湿重）压榨果渣，使用干燥机（松下公司制，产品编号 EH5101P TurboDry)在约60°C下干燥30分钟，获得15g干燥果皮。向所获得的干燥果皮中 添加IOOmL的约70°C的蒸馏水，置于约70°C的水浴，加热提取3小时。使用铺有保留粒径 3 ym的滤纸（ADVANTEC公司制，No. 131)的布氏漏斗，对所获得的提取液进行抽滤，获得残 渣。
[0122] 对所获得的残渣进行干燥。向其中添加残渣重量的2倍量的100% (v/v)乙醇，在 室温下进行3天的乙醇提取。使用铺有保留粒径3 ym的滤纸（ADVANTEC公司制，No. 131) 的布氏漏斗进行抽滤，获得滤液（表3中的"乙醇提取后（1)"）。以旋转蒸发仪对所获得 的滤液进行浓缩，获得干固状态的I. 15g浓缩液。向其中添加所得浓缩液重量的2倍量的 10% (v/v)甲醇进行溶解，以4X15g在室温下离心30分钟，将10%甲醇不溶性成分与可溶 性成分进行分尚。
[0123] 向所获得的10%甲醇不溶性成分中添加1倍量的50% (v/v)乙醇，以4XIOg在 室温下离心30分钟，进一步对不溶性成分和可溶性成分进行分离。在40°C下，对可溶性成 分进行30分钟的浓缩，添加10倍量的1% (w/v)氢氧化钠水溶液，在室温下用搅拌器搅拌 6天。随后，使用铺有保留粒径3 ym的滤纸（ADVANTEC公司制，No. 131)的布氏漏斗进行 抽滤，对沉淀物和滤液进行过滤分离。以2倍量的水洗涤所获得的沉淀物，随后以5-10倍 量的100% (v/v)乙醇进行溶出。随后，使用布氏漏斗对乙醇溶出成分与沉淀物进行过滤 分离。对所得的滤液进行浓缩干固，获得28. 4mg川陈皮素和橘皮素的高含量精制产物。通 过HPLC测定，如表3所示，高含量精制产物中的川陈皮素和橘皮素的含量分别为14. Img和 11. 2mg，含有率为约89wt%。以下表3中，川陈皮素和橘皮素的含量、含有率和回收率通过 与上述实施例1同样的方式确定。
[0124]表3
[0125]
[0126] 通过上述内容，获得了以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的级分。与目前为止能够 制得的级分相比，所获得的级分以高出数倍的浓度含有川陈皮素和橘皮素，因此可简便地 制造这些化合物。此外，通过使用根据本发明的方法获得的高浓度级分，从制造这些化合物 及其类似物时的成本考虑，具有更高的优越性。
[0127] 实施例4
[0128] 获得了以下批次1-3的以尚浓度含有川陈皮素和橘皮素的粉末。
[0129]批次1
[0130] 对于70kg干燥台湾香檬压榨果渣，使用450L的30% (v/v)乙醇，在60°C下提取2 小时。对提取进行1小时以及2小时的提取物及其后浓缩的提取物进行制样，以滤芯式过滤 器（保留粒径10 ym)进行过滤后，浓缩滤液使得溶液的量减少至130L。添加与该溶液等量 (130L)的2% (w/v)氢氧化钠水溶液，在室温下将溶液搅拌过夜。随后，对溶液进行离心分 离，获得319g(湿重）沉淀粉末。将所获得的粉末浸渍于水中，随后进行过滤操作，并重复 一次以上操作。以水洗涤后再次进行过滤，随后将滤纸上的残渣浸渍于乙醇中。对残渣进 行抽滤，对所获得的乙醇提取液进行浓缩，获得了 62. 5g川陈皮素和橘皮素高含量粉末（川 陈皮素含有率42. 8wt %，橘皮素含有率45. 9wt % )。结果示于表4中。
[0131]表 4
[0132]
[0133]批次2
[0134] 对于55kg干燥台湾香檬压榨果渣，使用450L的30% (v/v)乙醇在60°C下提取1 小时。在室温静置过夜后，以滤芯式过滤器（保留粒径IOym)进行过滤后，浓缩滤液使得 溶液的量减少至80L。添加与该溶液等量的2% (w/v)氢氧化钠水溶液，将溶液于6°C下保 持冷却状态的同时进行搅拌。随后，对溶液进行离心分离，获得1534g氢氧化钠处理产物。 以水洗涤所获得的氢氧化钠处理产物中的1294g。随后进行离心分离，对上清液和沉淀物进 行分离。对沉淀物进行冷冻干燥，随后以水洗涤，获得92. 6g粉末。将再次以水洗涤后的粉 末溶于乙醇并进行抽滤。浓缩乙醇溶出成分，获得了 58. 2g川陈皮素和橘皮素高含量粉末 (川陈皮素含有率54. 2wt %，橘皮素含有率36. Owt % )。回收率为24. 3 %。
[0135]批次 3
[0136] 对于55kg干燥台湾香檬压榨果渣，使用450L的30% (v/v)乙醇在60°C下提取1 小时。在室温静置过夜后，以滤芯式过滤器（保留粒径IOym)进行过滤后，浓缩滤液使得溶 液的量减少至95L。将5L该溶液喷雾干燥，向90L浓缩液中添加等量的2% (w/v)氢氧化钠 水溶液，将溶液保持在20°C -25°C下进行搅拌。随后，对溶液进行离心分离，获得260g氢氧 化钠处理产物。以水洗涤所获得的氢氧化钠处理产物。随后进行离心分离，对沉淀物进行冷 冻干燥，以水洗涤后获得90. 7g粉末。将再次以水洗涤后的粉末溶于乙醇并进行抽滤。浓 缩乙醇溶出成分，获得了 76. 3g川陈皮素和橘皮素高含量粉末（川陈皮素含有率50. 2wt%， 橘皮素含有率31. 2wt%)。回收率为25. 2%。
[0137] 实施例5
[0138] 将55g台湾香檬压榨果渣干燥产物浸泡于450ml的30% (v/v)乙醇中，在70°C的 水浴中进行2小时的提取。使用无纺布过滤提取液。将一部分提取液浓缩称量，进行HPLC 测定以计算得出川陈皮素和橘皮素的含量。通过同样的方法，使用40% (v/v)、50% (v/v)、 70% (v/v)乙醇代替30% (v/v)乙醇进行操作。通过假设55g干燥压榨果渣中含有的量为 275mg而确定回收率。结果示于表5中。
[0139]表5
[0140]
[0141] 实施例6
[0142] 对于55kg干燥台湾香檬压榨果渣，使用450L的30% (v/v)乙醇在60°C下提取6 小时。在室温静置过夜后，以滤芯式过滤器（保留粒径IOym)进行过滤后，浓缩滤液使得 溶液的量减少至130L，作为台湾香檬提取液。向5g该台湾香檬提取液的冷冻干燥粉末（含 有19511^(3.9￥1:%)川陈皮素、10〇11^(2.〇￥1:%)橘皮素）中添加3〇1111的1%(￥/￥)氢氧化 钠水溶液，获得台湾香檬碱处理产物。将该碱处理产物循环搅拌16小时后，进行离心分离， 获得沉淀物1。以水洗涤该沉淀物1，随后进行离心分离，获得沉淀物2。该步骤将上清液处 理至中性。向最终获得的沉淀物干燥而得的物质（I. Ig)中添加100% (v/v)乙醇并进行离 心分离，浓缩所得的滤液，获得了 344mg粉末。该粉末中含有159mg川陈皮素（46. 3wt% ) 和87mg橘皮素（25. 3wt%)。根据本发明的方法，可回收冷冻干燥粉末中含有的80%以上 的川陈皮素和橘皮素。
[0143] 实施例7
[0144] 对于55kg干燥台湾香檬压榨果澄，使用450L的30% (v/v)乙醇在60°C下提取6 小时。在室温静置过夜后，以滤芯式过滤器（保留粒径IOym)进行过滤后，浓缩滤液使得 溶液的量减少至130L，作为台湾香檬提取液。向4. 5g该台湾香檬提取液的浓缩干固产物 4. 5g(含有175mg(3. 9wt% )川陈皮素、90mg(2. Owt% )橘皮素）中添加30ml的lw/v%氢 氧化钠水溶液，获得台湾香檬碱处理产物。将该碱处理产物循环搅拌16小时后，进行离心 分离，获得沉淀物1。以水洗涤该沉淀物1，随后进行离心分离，获得沉淀物2。该步骤中将 上清液处理至中性。向最终获得的沉淀物干燥而得的物质（760mg)中添加100% (v/v)乙 醇并进行离心分离，浓缩所得的滤液，获得了 344mg粉末。该粉末中含有159mg川陈皮素 (44. 2wt% )和87mg橘皮素（22. 7wt% )。根据本发明的方法，可回收浓缩液中含有的60% 以上的川陈皮素和橘皮素。
[0145]参照例I
[0146] 称量589g(湿重）台湾香檬的叶，使用干燥机（东京理化器械（株）、WF0-1001SD) 在80°C下干燥16小时，获得218g干燥叶。向所得干燥叶中的5g中添加IOOmL约70°C的蒸 馏水，置于约70°C的水浴中，加热提取3小时。使用铺有保留粒径3ym的滤纸（ADVANTEC 公司制，No. 131)的布氏漏斗对所获得的提取液进行抽滤，获得残渣。
[0147] 对所获得的残渣进行干燥，向其中添加所述残渣重量的2倍量的30% (v/v)乙 醇，在室温下进行3天的乙醇提取。使用铺有保留粒径3ym的滤纸（ADVANTEC公司制， No. 131)的布氏漏斗进行抽滤，获得滤液。使用旋转蒸发仪对所获得的滤液进行浓缩，获得 干固状态的浓缩液。向其中添加所获得的浓缩液重量的相同量的水和乙酸乙酯进行溶解， 并进行分液。对可溶于乙酸乙酯的成分进行浓缩，获得川陈皮素含有率24. 4%、橘皮素含有 率11. 2wt %的提取物。
[0148] 参照例2
[0149] 向5g台湾香檬的干燥叶中添加IOOmL约70°C的蒸馏水，置于约70°C的水浴中，加 热提取3小时。使用铺有保留粒径3ym的滤纸（ADVANTEC公司制，No. 131)的布氏漏斗， 对所获得的提取液进行抽滤，获得残渣。
[0150] 对所获得的残渣进行干燥，向其中添加所述残渣重量的2倍量的100% (v/v)乙 醇，在室温下进行3天的乙醇提取。使用铺有保留粒径3ym的滤纸（ADVANTEC公司制， No. 131)的布氏漏斗进行抽滤，获得滤液。使用旋转蒸发仪对所获得的滤液进行浓缩，获得 干固状态的浓缩液。向其中添加所获得的浓缩液重量的相同量的水和乙酸乙酯进行溶解， 并进行分配提取。对可溶于乙酸乙酯的成分进行浓缩，获得川陈皮素含有率6. 9%、橘皮素 含有率5. 2wt %的提取物。
[0151] 参照例3
[0152] 向5g台湾香檬的干燥叶中添加IOOmL约70°C的蒸馏水，置于约70°C的水浴中，加 热提取3小时。使用铺有保留粒径3ym的滤纸（ADVANTEC公司制，No. 131)的布氏漏斗对 所获得的提取液进行抽滤，获得残渣。
[0153] 对所获得的残渣进行干燥，向其中添加所述残渣重量的2倍量的100% (v/v)乙 醇，在室温下进行3天的乙醇提取。使用铺有保留粒径3ym的滤纸（ADVANTEC公司制， No. 131)的布氏漏斗进行抽滤，获得滤液。使用旋转蒸发仪对所获得的滤液进行浓缩，获得 干固状态的浓缩液。向其中添加所获得的浓缩液重量的相同量的水和乙酸乙酯进行溶解， 并进行分液。对可溶于乙酸乙酯的成分进行浓缩，获得川陈皮素含有率6. 9wt%、橘皮素含 有率5. 2wt%的提取物。通过同样的方法，使用30% (v/v)乙醇、50% (v/v)乙醇和70% (v/v)乙醇代替100% (v/v)乙醇分别进行提取。结果示于表6中。
[0154]表6
[0155]
[0156] 根据以上内容，随着乙醇浓度上升，乙酸乙酯提取物重量增加，但显示川陈皮素和 橘皮素的含量在使用30% (v/v)乙醇或50% (v/v)乙醇时更多，使用这些浓度的乙醇时提 取效率更高。如上所述，即使是从台湾香檬的叶中，也获得了以高浓度含有川陈皮素和橘皮 素的级分。与目前为止能够制得的级分相比，所获得的级分以高出数倍的浓度含有川陈皮 素和橘皮素，因此可简便地制造这些化合物。此外，通过使用根据本发明的方法获得的高浓 度级分，从制造这些化合物及其类似物时的成本考虑，具有更高的优越性。
[0157] 工业实用性
[0158] 本发明可用于食品、医药品以及化妆品领域，特别是从作为霜剂、凝胶霜剂、化妆 水或者从能配合到这些产品中的角度出发是有用的。
【主权项】
1. 一种川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法，所述方法包括以下步骤（1-1)至（1-3) 以及步骤（3)和步骤（4)，或者，所述方法包括以下步骤⑵以及步骤⑶和步骤⑷： (1-1)以热水处理柑橘类，获得热水处理产物的步骤； (1-2)干燥所述热水处理产物，获得干燥产物的步骤； (1-3)以可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂，对所述干燥产物进行处理，获得川陈皮素和 橘皮素溶解产物的步骤； (2) 以可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶剂对柑橘类进行处理，获得川陈皮素和橘皮素 溶解产物的步骤； (3) 通过对所述川陈皮素和橘皮素溶解产物进行浓缩和/或干燥，获得川陈皮素和橘 皮素浓缩产物的步骤； (4) 使用稀碱对所述川陈皮素和橘皮素浓缩产物进行处理，获得作为不溶性成分的川 陈皮素和橘皮素含有物的步骤。2. 如权利要求1所述的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法，其中，所述步骤（1-1) 为，使用保持在50°C-80°C的温度下的热水，对柑橘类处理2-4小时，获得热水处理产物的 步骤。3. 如权利要求1所述的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法，其中，所述步骤（2)为， 使用保持在50°C_70°C的温度下的、可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶剂对柑橘类处理1-8 小时，获得川陈皮素和橘皮素溶解产物的步骤。4. 如权利要求1所述的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法，其中，所述可溶解川陈 皮素和橘皮素的溶剂或所述可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶剂为20-100% (v/v)的乙醇。5. 如权利要求1所述的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法，其中，所述可溶解川陈 皮素和橘皮素的溶剂或所述可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶剂为20-50% (v/v)的乙醇。6. 如权利要求1所述的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法，其中，所述步骤（4)为， 在室温下，使用1-3% (w/v)的碱水溶液对所述川陈皮素和橘皮素浓缩产物进行处理，获得 作为不溶性成分的川陈皮素和橘皮素含有物的步骤。7. 如权利要求1所述的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法，其中，所述柑橘类 为选自以下植物所组成的组中的至少一种：台湾香檬（Citrusd印ressa)、温州蜜柑 (C.unshiu)、立花橘（C.tachibana)、光橘（C.Ieiocarpa)、奇利蜜柑（C.tardiva)、本地 早橘（C.succosa)、乳橘（C.kinokuni)、朱橘（C.erythrosa)、酸橘（C.sunki)、地中海柑 (C.deliciosa)、广西沙柑（C.nobilis)、栊柑（C.retuculata)、红橘（C.tangerina)、花柚 (C.hanayu)、蜜橘（C.reticulata)、酸橘（C.sunki)、高雷立花橘（C.nippokoreana)、不知 火杂柑和清见。8. 通过权利要求1-7中任一项所述的制造方法制造的川陈皮素和橘皮素含有物。9. 如权利要求8所述的川陈皮素和橘皮素含有物，其中，所述川陈皮素和橘皮素含有 物中的川陈皮素的含有率为45 % (w/v)以上，并且，橘皮素的含有率为25 % (w/v)以上。10. 如权利要求8所述的川陈皮素和橘皮素含有物，其中，所述川陈皮素和橘皮素含有 物中辛弗林的含有率低于检出下限值。11. 一种来自柑橘类的川陈皮素和橘皮素含有物，其中，川陈皮素的含有率为45 % (w/ v)以上，橘皮素的含有率为25% (w/v)以上，并且，辛弗林的含有率低于检出下限值。
【专利摘要】本发明的目的是提供一种安全性、经济性以及工业化方面优异的以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的级分的制造方法。所述目的通过以下制造川陈皮素和橘皮素含有物的方法以及通过该方法制造的川陈皮素和橘皮素高浓度含有物而得以实现：(1-1)以热水处理柑橘类，获得热水处理产物的步骤；(1-2)干燥所述热水处理产物，获得干燥产物的步骤；(1-3)以可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂，对所述干燥产物进行处理，获得川陈皮素和橘皮素溶解产物的步骤；(3)通过对所述川陈皮素和橘皮素溶解产物进行浓缩和/或干燥，获得川陈皮素和橘皮素浓缩产物的步骤；以及(4)使用稀碱对所述川陈皮素和橘皮素浓缩产物进行处理，获得作为不溶性成分的川陈皮素和橘皮素含有物的步骤。
【IPC分类】A23L1/212, A23L1/30, A61P25/28, A61K36/75, A61K36/00, C07D311/30, A61P35/00, A61P3/10
【公开号】CN104902764
【申请号】CN201380062808
【发明人】照屋俊明, 照屋勇人, 杉山幸来, 禹済泰
【申请人】国立大学法人琉球大学, 株式会社冲绳研究中心
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2013年8月9日
【公告号】EP2907395A1, US20150283196, WO2014057727A1
【专利说明】源自柑橘类的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法以及由 此获得的川陈皮素和橘皮素含有物
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求享有2012年10月12日提交的日本专利申请2012-227173号专利申 请的优先权，在此以引用的方式将上述申请的全部公开内容并入本文。
技术领域
[0003] 本申请涉及源自柑橘类的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法。
【背景技术】
[0004] 川陈皮素和橘皮素属于柑橘类中含有的多甲氧基黄酮类。川陈皮素具有下述式 (I)表示的结构。橘皮素具有下述式（II)表示的结构。据说川陈皮素和橘皮素具有癌变抑 制作用、血糖值降低作用、阿尔兹海默型痴呆症的预防效果等各种药理作用。
[0009] 栊柑和台湾香檬等柑橘类在许多情况下被用作加工果汁或果酱等的原料。当柑橘 类被提供用于这样的加工时，主要利用其果肉，榨汁后的果肉或果皮等被作为榨汁残渣而 丢弃。然而，与在果肉中相比，川陈皮素和橘皮素在榨汁残渣中含量更多。柑橘类的榨汁残 渣的一部分作为精油提取或家畜等的饲料而被再利用，然而，并不期望其作为含有川陈皮 素和橘皮素的食品材料的原料。
[0010] 日本专利申请公开2005-145824(以下称为"专利文献1"。在此以引用的方式将 该文献的公开内容并入本文）中，记载了以下获得川陈皮素的方法：将栊柑疏果在回流下 用30%乙醇提取1小时，所得残渣用90°C以上的热水提取1小时后浓缩，倾析获得上清液， 使其通过多孔吸附树脂后，以70%乙醇溶出，获得川陈皮素。
[0011] 此外，日本专利申请公开2006-327998(以下称为"专利文献2"。在此以引用的方 式将该文献的公开内容并入本文）公开了以下制造含有川陈皮素和橘皮素的多甲氧基黄 酮类的方法：作为对橙子的果皮油进行减压蒸馏除去苎烯的釜底油，对该釜底油进行薄膜 蒸馏，之后加入约25倍量的70%乙醇加热回流，制造含有川陈皮素和橘皮素的多甲氧基黄 酮类。
[0012] 此外，作为目前市售的产品，已知由ARKRAY公司（株式会社7 -夕U彳）销售的 产品（参见非专利文献1，在此以引用的方式将该文献的公开内容并入本文）。
[0013] 现有技术文献
[0014] 专利文献
[0015] 专利文献1 :日本专利申请公开2005-145824
[0016] 专利文献2 :日本专利申请公开2006-327998
[0017] 非专利文献
[0018] 非专利文献1 :功能性食品材料-ARKRAY〉〉台湾香檬提取物"Biletin产品的使 用"〈URL :http://ebn. arkray. co. jp/products/shiikuwasha-extract/detail_02/>
【发明内容】
[0019] 发明有待解决的问题
[0020] 由于柑橘类中含有的川陈皮素、橘皮素和其它多甲氧基黄酮类具有上述多种药理 作用，因而对其需要正在不断增加。因此，如果存在有效率地制造含有川陈皮素和橘皮素的 天然来源的物质（以下称为川陈皮素和橘皮素含有物）的方法，可对利用川陈皮素和橘皮 素含有物作为食品材料产生更多的期待。
[0021] 然而，对于专利文献1中记载的方法，存在以下问题：由于包括在回流下提取1小 时、随后进一步以90°C以上的热水进行提取的步骤，以及包括使用柱的步骤，因此，对操作 者具有高危险性，并且在经济性上是低效的方法。
[0022] 对于专利文献2中记载的方法，存在以下问题：由于包括通过减压蒸馏制造釜底 油以及薄膜蒸馏的步骤，随后需要进一步使用大量的70%乙醇，因此具有危险，并且是不经 济的方法。
[0023] 对于非专利文献1中记载的产品，存在以下问题：由于川陈皮素和橘皮素的含有 率为10%左右（w/w)，因此是川陈皮素和橘皮素含有率非常低的产品，不能用作食品材料 的原料。
[0024] 因此，本发明的目的为提供一种川陈皮素和橘皮素含有率高的川陈皮素和橘皮素 含有物的制造方法以及通过该方法获得的川陈皮素和橘皮素含有物。与现有技术相比，本 发明的方法更具安全性，并且，由于方法中使用的溶剂量和步骤数量不多，因而在经济性和 工业化方面优异。
[0025] 解决问题的手段
[0026] 为了达成上述目的，本发明人进行了深入探讨，作为结果，通过对柑橘类进行热水 处理和溶剂提取处理、或者对柑橘类进行温溶剂提取处理而获得川陈皮素和橘皮素溶解产 物，随后，以稀碱对所述川陈皮素和橘皮素溶解产物进行处理，成功获得了高含有率的川陈 皮素和橘皮素含有物。此外，与专利文献1和专利文献2中记载的方法相比，该方法所使用 的溶剂量更小，也可设定为较低的温度，并且还具有简单的步骤，因此是安全性、经济性和 工业化优异的方法。本发明是基于这样的发现而完成的发明。
[0027] 因此，根据本发明，提供了包括以下步骤（1-1)至（1-3)以及步骤⑶和步骤⑷、 或者步骤（2)以及步骤（3)和步骤（4)的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法：
[0028] (1-1)以热水对柑橘类进行处理，获得热水处理产物的步骤；
[0029] (1-2)对所述热水处理产物进行干燥，获得干燥产物的步骤；
[0030] (1-3)以可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂对所述干燥产物进行处理，获得川陈皮 素和橘皮素溶解产物的步骤；
[0031] (2)以可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶剂对柑橘类进行处理，获得川陈皮素和橘 皮素溶解产物的步骤；
[0032] (3)对所述川陈皮素和橘皮素溶解产物进行浓缩和/或干燥，获得川陈皮素和橘 皮素浓缩产物的步骤；
[0033] (4)使用稀碱对所述川陈皮素和橘皮素浓缩产物进行处理，获得作为不溶性成分 的川陈皮素和橘皮素含有物的步骤。
[0034] 优选地，在所述步骤（4)的后期阶段，进一步包含以下步骤（5):
[0035] (5)向所述含有川陈皮素和橘皮素的浓缩产物中添加10% (v/v)以下的甲醇进行 处理，获得甲醇不溶性成分的步骤。
[0036] 优选地，所述步骤（1-2)为：通过对所述热水处理产物进行过滤得到的过滤残渣 进行压榨或不进行压榨，通过干燥从所述热水处理产物除去水分获得干燥产物的步骤。
[0037] 优选地，所述步骤（1-1)为：使用保持在50_80°C温度下的热水对柑橘类处理2-4 小时，获得热水处理产物的步骤。
[0038] 优选地，所述步骤（2)为：使用保持在50_70°C温度下的、可溶解川陈皮素和橘皮 素的温溶剂对柑橘类处理1-8小时，获得川陈皮素和橘皮素溶解产物的步骤。
[0039] 优选地，所述可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂或可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶 剂为20-100% (v/v)的乙醇、更优选为20-50% (v/v)的乙醇。
[0040] 优选地，所述步骤（4)为：在室温下，使用1-3% (w/v)的碱水溶液对所述川陈皮 素和橘皮素浓缩产物进行处理，获得作为不溶性成分的川陈皮素和橘皮素含有物的步骤。
[0041] 优选地，所述柑橘类为选自以下植物所组成的组中的至少一种：台湾香檬（Citrus depressa)、温州蜜柑（C.unshiu)、立花橘（C.tachibana)、光橘（C.leiocarpa)、奇利蜜 柑（C.tardiva)、本地早橘（C.succosa)、乳橘（C.kinokuni)、朱橘（C.erythrosa)、酸橘 (C.sunki)、地中海柑（C.deliciosa)、广西沙柑（C.nobilis)、栊柑（C.retuculata)、红 橘（C.tangerina)、花柚（C.hanayu)、蜜橘（C. reticulata)、酸橘（C.sunki)、高雷立花橘 (C. nippokoreana)、不知火杂柑（シ7 ^匕）和清见（清見）。
[0042] 根据本发明的另一方面，提供了通过本发明的方法制造的川陈皮素和橘皮素含有 物。
[0043] 优选地，所述川陈皮素和橘皮素含有物中川陈皮素的含有率为45% (w/v)以上， 并且，橘皮素的含有率为25% (w/v)以上。
[0044] 优选地，所述川陈皮素和橘皮素含有物中辛弗林（シ冬7 y y )的含有率低于检 出下限值。
[0045] 作为本发明的川陈皮素和橘皮素含有物的另一实施方式，提供了来自柑橘类的川 陈皮素和橘皮素含有物，其中，川陈皮素的含有率为45% (w/v)以上，橘皮素的含有率为 25% (w/v)以上，并且，辛弗林的含有率低于检出下限值。
[0046] 作为其它实施方式，提供了以下的发明。
[0047] 1.以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的级分（画分）的制造方法，所述方法具有 以下步骤：将压榨柑橘类果实得到的榨汁残渣以热水洗涤，获得热水洗涤残渣的残渣获得 步骤；将所述残渣进行干燥，以20-40 %的乙醇提取，获得提取产物的乙醇提取产物获得步 骤；在低温下，对所述乙醇提取产物进行浓缩，获得浓缩产物的浓缩产物获得步骤；向所述 浓缩产物中添加稀碱，然后进行搅拌处理，获得不溶性成分的碱不溶性成分获得步骤；以 及，以乙醇使所述碱不溶性成分溶出的乙醇溶出步骤。
[0048] 2.所述方法的特征在于，所述柑橘类为选自以下植物所组成的组中的至少一 种：台湾香檬（Citrus depressa)、立花橘（C.tachibana)、光橘（C. Ieiocarpa)、奇利蜜 柑（C.tardiva)、本地早橘（C.succosa)、乳橘（C.kinokuni)、朱橘（C.erythrosa)、酸橘 (C.sunki)、地中海柑（C.deliciosa)、广西沙柑（C.nobilis)、栊柑（C.retuculata)、红橘 (C. tangerina)、花柚（C. hanayu)以及高雷立花橘（C. nippokoreana)。
[0049] 3.所述方法的特征在于，所述方法进一步包括在浓缩产物获得步骤与所述碱不溶 性成分获得步骤之间，通过向所述浓缩产物中添加甲醇进行处理，获得甲醇不溶性成分的 甲醇不溶性成分获得步骤。
[0050] 4.所述方法的特征在于，所述残渣获得步骤中的加热干燥在50-70°C、15-45分钟 的条件下进行。
[0051] 5.所述方法的特征在于，所述残渣获得步骤中的加热干燥在60°C、30分钟的条件 下进行。
[0052] 6.所述方法的特征在于，所述残渣获得步骤中的热水提取在50_80°C的温浴中、 2-4小时的条件下进行。
[0053] 7.所 述方法的特征在于，所述残渣获得步骤中的热水提取在70°C、3小时的条件 下进行。
[0054] 8.所述方法的特征在于，所述残渣获得步骤中的热水提取后残渣的获得使用保留 粒径5 ym以下的过滤器进行。
[0055] 9.所述方法的特征在于，所述乙醇提取步骤中的加热干燥在50_70°C、15-45分钟 的条件下进行。
[0056] 10.所述方法的特征在于，所述乙醇提取步骤中的加热干燥在60°C、30分钟的条 件下进行。
[0057] 11.所述方法的特征在于，所述乙醇提取产物获得步骤中的乙醇提取使用 20-40%的乙醇，在室温下进行1-5天。
[0058] 12.所述方法的特征在于，所述乙醇提取产物获得步骤中的乙醇提取使用30%的 乙醇在室温下进行。
[0059] 13.所述方法的特征在于，所述乙醇提取产物获得步骤中的乙醇提取液在50°C以 下的温度下浓缩预定的时间。
[0060] 14.所述方法的特征在于，所述碱不溶性成分获得步骤中的碱处理使用1-3%的 碱液在室温下进行4-8天。
[0061] 15.所述方法的特征在于，所述碱不溶性成分获得步骤中的不溶性成分的获得使 用保留粒径5 ym以下的过滤器进行。
[0062] 16.所述方法的特征在于，以甲醇使前述不溶性成分溶出，使用保留粒径5 ym以 下的过滤器进行过滤。
[0063] 17.通过所述制造方法制造的以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的级分。
[0064] 18.所述以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的级分的特征在于，所述级分中，川陈皮 素的含有率为45% (w/v)，橘皮素的含有率为25% (w/v)以上。
[0065] 发明效果
[0066] 与现有技术相比，本发明的方法为安全性、工业化和经济性上优异的方法，能够制 造以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的来自柑橘类的组合物。进一步地，当使用本发明的川 陈皮素和橘皮素含有物时，可进一步期待将其作为川陈皮素和橘皮素含有物的食品材料， 例如食品用原料或食品用组合物而加以利用。此外，利用川陈皮素和橘皮素的生理活性，可 提供医药品以及化妆品的用途。此时，可以单独或与其它添加物一起，通过以下各种形式提 供本发明的川陈皮素和橘皮素含有物：食品用、化妆品用或医药品用的粉末剂、颗粒剂、片 剂、液剂、糊剂、胶囊剂、凝胶剂、霜剂等。
【具体实施方式】
[0067] 以下更详细地说明本发明。
[0068] 本发明所述的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法是特征在于以下内容的方法： 通过对作为原料的柑橘类进行加热和溶剂提取，获得川陈皮素和橘皮素溶解产物，通过稀 碱对所述溶解产物进行处理，除去柑橘类中含有的糖类和脂肪酸等成分，制造作为不溶性 成分的、以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的川陈皮素和橘皮素含有物。根据川陈皮素和橘 皮素溶解产物获得步骤的差别，可以将本发明的方法大致划分为第一实施方式和第二实施 方式。
[0069] 首先，本发明的方法的第一实施方式包括以下步骤（1-1)至（1-3)以及步骤（3) 和⑷。
[0070] (1-1)以热水对柑橘类进行处理，获得热水处理产物的步骤；
[0071] (1-2)对所述热水处理产物进行干燥，获得干燥产物的步骤；
[0072] (1-3)以可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂，对所述干燥产物进行处理，获得川陈皮 素和橘皮素溶解产物的步骤；
[0073] (3)对所述川陈皮素和橘皮素溶解产物进行浓缩和/或干燥，获得川陈皮素和橘 皮素浓缩产物的步骤；
[0074] (4)使用稀碱对所述川陈皮素和橘皮素浓缩产物进行处理，获得作为不溶性成分 的川陈皮素和橘皮素含有物的步骤。
[0075] 其次，本发明的方法的第二实施方式包括以下步骤（2)以及步骤⑶和（4)。
[0076] (2)以可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶剂对柑橘类进行处理，获得川陈皮素和橘 皮素溶解产物的步骤；
[0077] (3)对所述川陈皮素和橘皮素溶解产物进行浓缩和/或干燥，获得川陈皮素和橘 皮素浓缩产物的步骤；
[0078] (4)使用稀碱对所述川陈皮素和橘皮素浓缩产物进行处理，获得作为不溶性成分 的川陈皮素和橘皮素含有物的步骤。
[0079] 对于本发明所述的柑橘类，只要是含有川陈皮素和橘皮素的柑橘类即可，并无特 别限制。作为本发明所述的柑橘类，例如，厚叶橙7卜）、雅法橙、约帕橙、脐橙、伏 令夏橙、福原橙、血橙、佛手柑等橙类；柚橙和葡萄柚等葡萄柚类；臭橙（力求只）、清冈橙、 泰国柠檬（ 37'' s力 > )、三宝柑、台湾香檬、香橼、史达橘（只久'于）、酸橙（久久'彳）、 新姬果、佛手柑、Yuukou mandarin( 10 33 )、柚柑、香橙（工文）、来檬、梓檬等香酸柑 橘类；cocktail fruit (力夕亍7少一 7 )、川野夏橙（力7 77久、Y久、Y )、黄蜜柑、 贾巴拉柑橘（9A 7 )、湘南金（湘南3''- ;1/卜'、）、sweetie (只々4 一亍?一）、夏蜜柑、 八朔、Haruka(过力〇、媛小春、日向夏等杂柑类；Akino kagayaki (凸栊）、伊予柑、爱媛 果试28号、清见、佐贺果试34号（凸栊）、shion no megumi (師恩?恵）、shiranuhi (凸 栊）、setoka(甘i：扣）、setomi (甘i：办）、大将季（凸栊）、蕉柑（夕y力y )、harumi ( ?S *)、hinoyutaka (凸栊）、默科特（Y - r/ 7卜）和麗红等橘橙类；牙买加丑橘（ y 7少一 7 )、夏鲜（寸Y - ッシi )、甜春（只彳一卜）、西米诺尔（七S 7P )、橘柚、明尼奥拉（S氺才7 )等橘柚类；安政柑、河内晚柑、晚白柚和文旦（7''> 夕> (铲求 >))等柚子类；温州蜜柑、大津四号、加利蒙地亚橘（力7 シ一）、甘平、纪 州蜜柑（紀州S力 > )、光橘（柑橘类）、樱岛蜜柑、立花橘（夕)、藤中蜜柑、栊柑和 蜜橘等蜜柑类；枳等枳属；以及长叶金橘、椭圆金橘、宁波金橘、福州金橘、香港金橘、圆金 橘等金橘属。优选的例子包括台湾香檬（Citrus depressa)、温州蜜柑（C. unshiu)、立花 橘（C. tachibana)、光橘（C. Ieiocarpa)、奇利蜜柑（C. tardiva)、本地早橘（C. succosa)、 乳橘（C.kinokuni)、朱橘（C.erythrosa)、酸橘（C.sunki)、地中海柑（C.deliciosa)、广 西沙柑（C.nobilis)、栊柑（C.retuculata)、红橘（C.tangerina)、花柚（C.hanayu)、蜜橘 (C. reticulata)、酸橘（C. sunki)、高雷立花橘（C. nippokoreana)、不知火杂柑（シ 7 ^ 匕） 以及清见（清見）。本发明所述的柑橘类可以是一种或两种以上，也可以是上述作为具体实 例列举的柑橘类的杂交品种。
[0080] 对于本发明中可利用的柑橘类的部位，只要是含有川陈皮素和橘皮素的部位即 可，并无特别限制。例如，除了果实以外，果皮、榨汁残渣（果渣）、剪除的叶子与小枝、上述 部位的干燥物等也可作为原料使用。在使用台湾香檬、栊柑等的情况下，优选使用果实、果 皮和榨汁残渣，这是因为其单位重量中含有较多的川陈皮素、橘皮素。另一方面，尽管剪除 的叶子与小枝等的单位重量中的川陈皮素、橘皮素含量不像果皮中的那么多，但剪除的叶 子与小枝等却大量产生。因此，使用这些部位具有可减轻环境负担的可能性。
[0081] 对于获得柑橘类的榨汁残渣的方法，并不特别限定，可通过榨汁机等对柑橘类的 果实进行处理而获得榨汁残渣。对于榨汁机，并不特别限定，然而优选辊压机、滤布压榨机、 离心过滤式分离装置等，这是由于它们可有效地获得榨汁后的果皮。
[0082]对于获得柑橘类的果实、果皮以及榨汁残渣的干燥产物的方法，并不特别限定，可 在50-70°C、15-45分钟的条件下加热干燥柑橘类，获得柑橘类的干燥物。此时，在低于50°C 的温度下干燥时，15-45分钟这样短的时间可能无法进行充分干燥；而在超过70°C的温度 下干燥时，柑橘类中含有的成分可能在干燥中发生变性。因此，加热干燥柑橘类时，优选在 约60 °C下，干燥约30分钟。
[0083] 在步骤（1-1)中，通过以热水对柑橘类进行处理，获得热水处理产物。通过使用热 水对柑橘类进行处理，在热水中对柑橘类中的糖分进行溶出等，可除去糖分。热水优选为保 持在50°C以上的温度的热水。当热水的温度低于50°C时，存在着柑橘类中的水溶性污物不 能充分除去的可能性。另一方面，当热水的温度超过80°C时，对方法操作人员存在危险性， 且产生燃料费用。因此，优选热水的温度为50-80°C。对于以热水对柑橘类进行处理的时 间，只要是能够完全除去柑橘类中的水溶性污物的时间即可，并不特别限定，例如1小时以 上、优选2小时以上、更优选2-4小时的时间。步骤（1-1)的优选实施方式为获得热水处 理产物的步骤，该步骤例如使用保持在50-80°C的温度的热水，将柑橘类处理2-4小时的时 间。作为步骤（1-1)的【具体实施方式】，并不特别限定，例如可列举将在蒸馏水中加入柑橘类 的容器放入温浴中，在50-80°C的温度下保持2-4小时的时间。此时，进一步优选热水处理 在约70°C下、约3小时的条件下进行。
[0084] 步骤（1-1)获得的热水处理产物为柑橘类与水的混合物。因此，从后续步骤（1-2) 的干燥效率和获取效率的角度出发，优选使用保留粒径5 ym以下的过滤器对热水处理产 物进行过滤处理等通常知晓的固液分离手段，得到作为固体残渣的热水处理产物。当使用 过滤器时，若保留粒径设定在3 ym以下时，可进一步提高效率。此外，步骤（1-1)中使用的 柑橘类为果实、果皮的情况下，从后续步骤（1-2)的干燥效率或获取效率的角度出发，优选 对热水处理产物或热水处理产物的残渣进行压榨获得榨汁残渣。因此，本发明的方法中，步 骤（1-1)的后期阶段中，可设置获得热水处理产物的残渣的步骤，或者对热水处理产物的 残渣进行压榨获得榨汁残渣的步骤。此外，本发明所述的热水处理产物除了步骤（1-1)获 得的热水处理产物之外，还包含热水处理产物的残渣或榨汁残渣等由热水处理产物加工以 降低水分的产物。
[0085] 步骤（1-2)中，通过对步骤（1-1)中获得的热水处理产物进行干燥而获得干燥产 物。对于该干燥，只要是将热水处理产物的含水率干燥至低于数十％、优选低于10%的干 燥即可，并不特别限定，然而优选在约50_80°C、数十分钟至数十小时的条件下进行加热干 燥。在低于50°C下对热水处理产物进行干燥时，存在数十分钟的短时间内不能充分进行干 燥的可能性；另一方面，在高于80°C的温度下对热水处理产物进行干燥 时，存在热水处理 产物中含有的成分在干燥中发生变性的可能性。因此，在工业化时，优选使用干燥机等，在 约50-80°C下，将热水处理产物干燥数小时至数十小时，更优选在约70°C下干燥12-24小 时。经过这样的干燥处理，通过步骤（1-2)，可获得含有川陈皮素和橘皮素、并且含水率低于 约10 %的干燥产物。
[0086] 步骤（1-3)中，以可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂对步骤（1-2)中获得的干燥产 物进行处理，获得川陈皮素和橘皮素溶解产物。对于可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂，只要 是能够溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂即可，并不特别限定。例如，可列举对川陈皮素和橘 皮素具有易溶性的溶剂，具体来说，如乙醇和乙酸乙酯等有机溶剂、以及这些有机溶剂与水 的混合溶剂。作为可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂，使用乙醇和水的混合溶剂的情况下，例 如，可使用20-100% (v/v)的乙醇。然而，如果乙醇浓度低于20% (v/v)，存在提取效率低 下的可能性，并且，即使乙醇浓度超过50% (v/v)，提取效率也不会显著提高，因此，作为可 溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂，优选20-50% (v/v)的乙醇；从提取效率、安全性和工业化 的角度出发，更优选30% (v/v)的乙醇。此外，对于步骤（1-3)的处理条件，只要是适合于 使干燥产物中的川陈皮素和橘皮素溶于溶剂中的条件即可，并不特别限定，可通过适当地 进行采样并确认溶液中的川陈皮素和橘皮素的浓度来对条件进行确定即可，然而，例如可 在室温下处理1-5天，从提取效率的角度出发，优选在室温下处理3天。对于川陈皮素和橘 皮素溶解产物中的川陈皮素和橘皮素的回收率，并不特别限定，然而，以原料柑橘类中含有 的川陈皮素和橘皮素的预测含量（59mg/g)作为基准，优选40% (23.6mg/g)以上，更优选 70% (41.3mg/g)以上、进一步优选 90% (53.1mg/g)以上，更进一步优选 95% (56.1mg/g) 以上。
[0087] 通过步骤（1-3)获得的川陈皮素和橘皮素溶解产物含有一定量的固体成分。因 此，从后续步骤（4)的处理效率的角度出发，优选使步骤（1-3)获得的川陈皮素和橘皮素溶 解产物经过固液分离手段，例如，使用保留粒径10 ym以下的过滤器、优选3 ym以下的过滤 器进行过滤等，获得作为液体成分的溶解产物。此时，在本发明中，对于川陈皮素和橘皮素 溶解产物，除了通过步骤（1-3)获得的含有固体成分的川陈皮素和橘皮素溶解产物以外， 还包含除去固体成分的液体性质的川陈皮素和橘皮素溶解产物。
[0088] 步骤（2)中，通过以可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶剂进行处理，获得川陈皮素 和橘皮素溶解产物。步骤（2)中，为了通过可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶剂更有效地对 柑橘类中的川陈皮素和橘皮素进行溶出，优选步骤（2)中使用的柑橘类为榨汁残渣或榨汁 残渣的干燥产物。可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶剂为将可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂 保持在50-70°C、优选保持在约60°C下的溶剂。对于步骤（2)的处理时间，只要是能够使柑 橘类中的川陈皮素和橘皮素能在溶剂中充分溶出的时间即可，并不特别限定，然而，例如在 1小时以上、优选2小时以上、更优选4-8小时。优选与步骤（1-3)相同地，由步骤⑵的溶 剂处理获得的川陈皮素和橘皮素溶解产物经过保留粒径10 Um的滤芯式过滤器进行过滤 等固液分离手段，获得作为液体成分的溶解产物。
[0089] 本发明的方法包含步骤（3)，所述步骤（3)通过对步骤（1-3)或步骤（2)获得的川 陈皮素和橘皮素溶解产物进行浓缩、干燥或浓缩与干燥，获得川陈皮素和橘皮素浓缩产物。 对于川陈皮素和橘皮素溶解产物的浓缩方法，并不特别限定，然而，可列举例如在低温下使 川陈皮素和橘皮素溶解产物中的溶剂挥发预定的时间而形成干固状态的含有川陈皮素和 橘皮素的浓缩产物的方法。对于川陈皮素和橘皮素的浓缩，只要是除去可溶解川陈皮素和 橘皮素的溶剂而获得体积减少的川陈皮素和橘皮素浓缩产物即可，并不特别限定，然而，例 如，在使用20-100% (v/v)乙醇作为可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂的情况下，考虑到防 止所含成分发生变性，在50°C以下的温度下，进行数十分钟至数小时、优选10分钟-2小时 的浓缩。此外，对于川陈皮素和橘皮素溶解产物的干燥方法，并不特别限定，然而，可列举对 川陈皮素和橘皮素溶解产物或其浓缩产物进行加热干燥或冷冻干燥的方法。
[0090] 步骤（4)中，通过使用稀碱对川陈皮素和橘皮素浓缩产物进行处理，获得作为不 溶性成分的川陈皮素和橘皮素含有物。通过使用稀碱对川陈皮素和橘皮素浓缩产物进行处 理，可除去溶液中的脂肪酸等污物成分，获得以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的川陈皮素 和橘皮素含有物。对于稀碱，只要是分解川陈皮素和橘皮素浓缩产物中的污物且不分解川 陈皮素和橘皮素的稀碱即可，并不特别限定。例如，可列举选自于由氢氧化钠水溶液与氢氧 化钾水溶液所组成的组的稀碱水溶液。对于稀碱的碱浓度，并不特别限定，然而，例如，在稀 碱为氢氧化钠水溶液的情况下，可为0. 1-20% (w/v)、优选0. 5-10% (w/v)、更优选1-3% (w/v)〇
[0091] 对于步骤（4)的川陈皮素和橘皮素浓缩产物的稀碱处理，例如，可通过使川陈皮 素和橘皮素浓缩产物与1-3% (w/v)的碱溶液相接触，在室温下实施1-6天。作为步骤（4) 的【具体实施方式】，并不特别限定，然而，可通过在室温下，对川陈皮素和橘皮素浓缩产物与 1% (w/v)的氢氧化钠水溶液的混合物搅拌1-2天，实施所述稀碱处理。
[0092] 通过实施步骤（4)，可获得作为不溶性成分的川陈皮素和橘皮素含有物。为了收集 川陈皮素和橘皮素含有物，可使用离心分离、过滤等通常知晓的固液分离手段。此外，例如 将川陈皮素和橘皮素含有物作为食品用原料使用的情况下，优选用水洗涤等而进行中和。 进一步地，可使川陈皮素和橘皮素含有物经过精制步骤。例如，收集并用水洗涤川陈皮素和 橘皮素含有物与可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂相混合所得到的混合物，通过使该混合物 经过固液分离，可获得作为液体成分的、杂质减少的川陈皮素和橘皮素含有物。
[0093]与现有技术相比，通过本发明的方法获得的川陈皮素和橘皮素含有物是以高浓度 含有川陈皮素和橘皮素的来自柑橘类的组合物，然而，例如，优选川陈皮素和橘皮素含有率 为25% (w/v)以上的川陈皮素和橘皮素含有物，更优选川陈皮素含有率为45% (w/v)以上 且橘皮素含有率为25% (w/v)以上的川陈皮素和橘皮素含有物。
[0094] 此外，本发明人发现，通过本发明方法获得的川陈皮素和橘皮素含有物中，可能对 人体产生不利影响的辛弗林的含有率非常小。从而，本发明的方法的优选实施方式是辛弗 林的含有率低于〇. 5% (w/v)、优选辛弗林的含有率低于检出下限值的川陈皮素和橘皮素 含有物的制造方法。川陈皮素、橘皮素和辛弗林的含量可通过下述实施例中记载的方法进 行测定。
[0095] 只要是能够实现本发明的目的，本发明的方法也可加入上述步骤以外的各种步 骤。例如，在步骤（4)的早期阶段，可包括在将川陈皮素和橘皮素浓缩产物与不溶解川陈皮 素和橘皮素的有机溶剂混合之后，通过固液分离手段获得不溶性成分的步骤。此外，在该工 序之后，可加入如下步骤：所述不溶性成分与可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂混合后，通过 固液分离手段获得可溶性成分。对于不溶解川陈皮素和橘皮素的有机溶剂，并不特别限定， 然而，可列举例如10% (v/v)以下的甲醇和乙醇。
[0096] 作为其它实施方式，本发明的方法也可表达为具有以下步骤的以高浓度含有川陈 皮素和橘皮素的级分的制造方法：对柑橘类果实进行压榨和干燥或不进行压榨和干燥，以 热水洗涤获得热水洗涤残渣的残渣获得步骤；将所述残渣进行干燥，以20-40%乙醇提取 获得提取产物的乙醇提取产物获得步骤；在低温下对所述乙醇提取产物进行浓缩，获得浓 缩产物的浓缩产物获得步骤；向所述浓缩产物中添加稀碱，进行搅拌处理，获得不溶性成分 的碱不溶性成分获得步骤；以乙醇对所述碱不溶性成分进行溶出的乙醇溶出步骤。
[0097] 通过本发明的方法制造的川陈皮素和橘皮素含有物可作为另一实施方式包含于 本发明中。本发明的川陈皮素和橘皮素含有物可通过本发明的方法制造，并且只要是与现 有技术相比，以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的来自柑橘类的组合物即可，并不特别限定， 然而，例如，从使用含有川陈皮素和橘皮素的组合物作为食品用原料制造产品时的成本的 角度出发，优选川陈皮素和橘皮素的含有率在25% (w/v)以上的川陈皮素和橘皮素含有 物，更优选川陈皮素含有率在45% (w/v)以上且橘皮素含有率在25% (w/v)以上的川陈皮 素和橘皮素含有物。进一步地，本发明的川陈皮素和橘皮素含有物进一步优选辛弗林的含 有率低于0.5% (w/v)，并且进一步优选辛弗林的含有率低于检出下限值。此外，作为本发 明的川陈皮素和橘皮素含有物的其它实施方式，提供了川陈皮素的含有率在45% (w/v)以 上、橘皮素的含有率在25% (w/v)以上、且辛弗林的含有率低于检出下限值的、来自柑橘类 的川陈皮素和橘皮素含有物。
[0098] 以下，作为【具体实施方式】，对以压榨台湾香檬获得的榨汁残渣的果渣作为原料，制 造以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的级分的方法进行说明，然而本发明的方法并不限于以 下内容。
[0099] 首先，以水洗涤台湾香檬，随后使用可直接压榨台湾香檬果实的各种压榨机进行 压榨处理。作为进行此类处理的压榨机，可列举例如，使其间夹有10-20目的连续网的两个 压缩辊转动、使用这两个压缩辊对连续供给的台湾香檬果实进行压榨的辊压榨汁机；以布 包裹台湾香檬果实进行压缩而榨汁的滤布压缩机；离心过滤式分离装置等。
[0100]称量压榨果汁获得的、预定量（例如约300g-约500g(湿重））的榨汁残渣。随后， 将该残渣在约50°C-约70°C下，使用干燥机等干燥。对干燥后的榨汁残渣的重量（干燥重 量）进行称量后，将干燥榨汁残渣置于合适的容器，向其中添加上述干燥重量的1-2倍量的 蒸馏水，将该容器移入约60°C -约80°C的温浴中，提取1-3小时。提取后，将烧杯由温浴中 取出并自然冷却，随后例如将保留粒径在5 ym以下的滤纸铺于布氏漏斗中，对全部提取液 进行抽滤，过滤分离残渣。
[0101] 再次与上述相同地，将所得残渣在约50°c -约70°C下使用干燥机等干燥、称量。添 加干燥重量的2-3倍量的乙醇，在室温下提取2-4天。随后，与上述相同地、对全部提取液 进行抽滤、过滤分离残渣。在约30 °C -40 °C下，将滤液浓缩约15分钟-约60分钟。
[0102] 向所得浓缩产物中添加该浓缩产物8-10倍量的1 % (w/v)氢氧化钠水溶液，在室 温下充分混合。在室温下，例如使用搅拌器对该混合液进行持续搅拌1-2天。随后，例如通 过将保留粒径在5 ym以 下的滤纸设置在漏斗中进行自然过滤，对可溶性成分与不溶性成 分进行分离。以1-2倍量的水洗涤所得的不溶性成分。以5-10倍量的乙醇对所残留的不 溶性成分进行溶出。随后，在室温下对可溶于乙醇的部分浓缩约15分钟-约60分钟。浓 缩后的液体量变成浓缩前的重量的约1/15-约1/20,对该液体量进行测定。
[0103] 向该浓缩液中添加液体量8-10倍量的约0.5-2% (w/v)氢氧化钠水溶液，充分混 合。随后，在室温下，例如使用搅拌器对该混合液持续搅拌4-8天。随后，例如通过将保留 粒径在5 ym以下的滤纸设置在漏斗中进行自然过滤，分离残渣。通过以上步骤，可获得以 高含有率含有川陈皮素和橘皮素的级分。
[0104] 以下，通过列举实施例对本发明作进一步详细说明。然而，本发明并不限于以下实 施例。
[0105] 实施例
[0106]作为柱，使用Develosil ODS-HG-5柱，作为流动相，使用MeOH = H2O = 70:30,设定 流速lml/min、测定波长215. Onm，通过确定具有保留时间分别为约8-9分钟、约11-12分钟 的峰的物质，由校准曲线法测定了川陈皮素和橘皮素的含量（mg)。
[0107] 作为柱，使用Develosil ODS-HG-5柱，作为流动相，使用CH3CN = H2O = 2:98(包括 0. 1% TFA)，设定流速lml/min、测定波长223. Onm，通过确定具有保留时间约为8-9分钟的 峰的物质，由校准曲线法测定了辛弗林的含量（mg)。
[0108] 实施例1
[0109] 对产自冲绳县东村的台湾香檬的500g压榨果渣进行充分洗涤，添加1800mL的 约70°C的蒸馏水，置于约70°C的水浴，加热处理3小时。使用铺有保留粒径3 ym的滤纸 (ADVANTEC公司制，No. 131)的布氏漏斗，对所获得的加热处理产物进行抽滤，获得残渣。将 残渣加入压榨机进行榨汁。
[0110] 称量300g(湿重）榨汁后的榨汁残渣，使用干燥机（松下公司制，产品编号 EH5101P TurboDry)在约60°C下干燥30分钟，获得150g干燥果皮。向其中添加榨汁残渣 重量的2倍量的30% (v/v)乙醇，在室温下进行3天的乙醇提取。使用铺有保留粒径3 ym 的滤纸（ADVANTEC公司制，No. 131)的布氏漏斗进行抽滤，获得3200mg滤液（表1中的"乙 醇提取后（1)"）。使用旋转蒸发仪对所获得的滤液进行浓缩，获得浓缩液。
[0111] 向浓缩液添加10倍量的1% (w/v)氢氧化钠水溶液，在室温下，用搅拌器搅拌1 天。使用2倍量的水对所得的不溶性成分进行洗涤。以5-10倍量的100% (v/v)乙醇对 残留的不溶性成分进行溶出。随后，使用布氏漏斗对乙醇溶出成分进行处理以过滤分离沉 淀物。通过HPLC测定，如表1所示，所得滤液的浓缩干固产物66. 3mg中的川陈皮素和橘皮 素的含量分别为34.〇1^和16.811^，含有率为约77被％。此外，回收率（％)通过假设50(^ 台湾香檬的压榨果渣中含有的川陈皮素和橘皮素含量为500mg而确定。
[0112] 表 1
[0114] 实施例2
[0115] 对产自冲绳县东村的台湾香檬的500g压榨果渣进行充分洗涤，添加1800mL的 约70°C的蒸馏水，置于约70°C的水浴，加热处理3小时。使用铺有保留粒径3 ym的滤纸 (ADVANTEC公司制，No. 131)的布氏漏斗，对所获得的加热处理产物进行抽滤，获得残渣。
[0116] 称量500g(湿重）残渣，使用干燥机（松下公司制，产品编号H15101P TurboDry) 在约60°C下干燥30分钟，获得225g干燥果皮。向其中添加残渣重量的2倍量的100% (v/ v)乙醇，在室温下进行3天的乙醇提取。使用铺有保留粒径3 ym的滤纸（ADVANTEC公司 制，No. 131)的布氏漏斗进行抽滤，获得滤液。对滤液进行浓缩干固，获得13. Ig浓缩干固产 物（表2中的"乙醇提取后（1) "）。以旋转蒸发仪对所获得的滤液进行浓缩，获得浓缩液。
[0117] 向浓缩液添加10倍量的1% (w/v)氢氧化钠水溶液，在室温下，用搅拌器搅拌1 天。使用2倍量的水对所得的不溶性成分进行洗涤。以5-10倍量的100% (v/v)乙醇对残 留的不溶性成分进行溶出。随后，使用布氏漏斗对乙醇溶出成分进行处理以过滤分离沉淀 物。通过HPLC测定，如表2所示，浓缩干固滤液后所得的高含量的川陈皮素和橘皮素含有 物76. Omg中，川陈皮素和橘皮素的含量分别为43. 9mg和26. 8mg，含有率为约93wt %。以下 表2中，川陈皮素和橘皮素的含量、含有率和回收率通过与上述实施例1同样的方式确定。
[0118]表2
[0119]
[0120] 实施例3
[0121] 称量台湾香檬的50g(湿重）压榨果渣，使用干燥机（松下公司制，产品编号 EH5101P TurboDry)在约60°C下干燥30分钟，获得15g干燥果皮。向所获得的干燥果皮中 添加IOOmL的约70°C的蒸馏水，置于约70°C的水浴，加热提取3小时。使用铺有保留粒径 3 ym的滤纸（ADVANTEC公司制，No. 131)的布氏漏斗，对所获得的提取液进行抽滤，获得残 渣。
[0122] 对所获得的残渣进行干燥。向其中添加残渣重量的2倍量的100% (v/v)乙醇，在 室温下进行3天的乙醇提取。使用铺有保留粒径3 ym的滤纸（ADVANTEC公司制，No. 131) 的布氏漏斗进行抽滤，获得滤液（表3中的"乙醇提取后（1)"）。以旋转蒸发仪对所获得 的滤液进行浓缩，获得干固状态的I. 15g浓缩液。向其中添加所得浓缩液重量的2倍量的 10% (v/v)甲醇进行溶解，以4X15g在室温下离心30分钟，将10%甲醇不溶性成分与可溶 性成分进行分尚。
[0123] 向所获得的10%甲醇不溶性成分中添加1倍量的50% (v/v)乙醇，以4XIOg在 室温下离心30分钟，进一步对不溶性成分和可溶性成分进行分离。在40°C下，对可溶性成 分进行30分钟的浓缩，添加10倍量的1% (w/v)氢氧化钠水溶液，在室温下用搅拌器搅拌 6天。随后，使用铺有保留粒径3 ym的滤纸（ADVANTEC公司制，No. 131)的布氏漏斗进行 抽滤，对沉淀物和滤液进行过滤分离。以2倍量的水洗涤所获得的沉淀物，随后以5-10倍 量的100% (v/v)乙醇进行溶出。随后，使用布氏漏斗对乙醇溶出成分与沉淀物进行过滤 分离。对所得的滤液进行浓缩干固，获得28. 4mg川陈皮素和橘皮素的高含量精制产物。通 过HPLC测定，如表3所示，高含量精制产物中的川陈皮素和橘皮素的含量分别为14. Img和 11. 2mg，含有率为约89wt%。以下表3中，川陈皮素和橘皮素的含量、含有率和回收率通过 与上述实施例1同样的方式确定。
[0124]表3
[0125]
[0126] 通过上述内容，获得了以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的级分。与目前为止能够 制得的级分相比，所获得的级分以高出数倍的浓度含有川陈皮素和橘皮素，因此可简便地 制造这些化合物。此外，通过使用根据本发明的方法获得的高浓度级分，从制造这些化合物 及其类似物时的成本考虑，具有更高的优越性。
[0127] 实施例4
[0128] 获得了以下批次1-3的以尚浓度含有川陈皮素和橘皮素的粉末。
[0129]批次1
[0130] 对于70kg干燥台湾香檬压榨果渣，使用450L的30% (v/v)乙醇，在60°C下提取2 小时。对提取进行1小时以及2小时的提取物及其后浓缩的提取物进行制样，以滤芯式过滤 器（保留粒径10 ym)进行过滤后，浓缩滤液使得溶液的量减少至130L。添加与该溶液等量 (130L)的2% (w/v)氢氧化钠水溶液，在室温下将溶液搅拌过夜。随后，对溶液进行离心分 离，获得319g(湿重）沉淀粉末。将所获得的粉末浸渍于水中，随后进行过滤操作，并重复 一次以上操作。以水洗涤后再次进行过滤，随后将滤纸上的残渣浸渍于乙醇中。对残渣进 行抽滤，对所获得的乙醇提取液进行浓缩，获得了 62. 5g川陈皮素和橘皮素高含量粉末（川 陈皮素含有率42. 8wt %，橘皮素含有率45. 9wt % )。结果示于表4中。
[0131]表 4
[0132]
[0133]批次2
[0134] 对于55kg干燥台湾香檬压榨果渣，使用450L的30% (v/v)乙醇在60°C下提取1 小时。在室温静置过夜后，以滤芯式过滤器（保留粒径IOym)进行过滤后，浓缩滤液使得 溶液的量减少至80L。添加与该溶液等量的2% (w/v)氢氧化钠水溶液，将溶液于6°C下保 持冷却状态的同时进行搅拌。随后，对溶液进行离心分离，获得1534g氢氧化钠处理产物。 以水洗涤所获得的氢氧化钠处理产物中的1294g。随后进行离心分离，对上清液和沉淀物进 行分离。对沉淀物进行冷冻干燥，随后以水洗涤，获得92. 6g粉末。将再次以水洗涤后的粉 末溶于乙醇并进行抽滤。浓缩乙醇溶出成分，获得了 58. 2g川陈皮素和橘皮素高含量粉末 (川陈皮素含有率54. 2wt %，橘皮素含有率36. Owt % )。回收率为24. 3 %。
[0135]批次 3
[0136] 对于55kg干燥台湾香檬压榨果渣，使用450L的30% (v/v)乙醇在60°C下提取1 小时。在室温静置过夜后，以滤芯式过滤器（保留粒径IOym)进行过滤后，浓缩滤液使得溶 液的量减少至95L。将5L该溶液喷雾干燥，向90L浓缩液中添加等量的2% (w/v)氢氧化钠 水溶液，将溶液保持在20°C -25°C下进行搅拌。随后，对溶液进行离心分离，获得260g氢氧 化钠处理产物。以水洗涤所获得的氢氧化钠处理产物。随后进行离心分离，对沉淀物进行冷 冻干燥，以水洗涤后获得90. 7g粉末。将再次以水洗涤后的粉末溶于乙醇并进行抽滤。浓 缩乙醇溶出成分，获得了 76. 3g川陈皮素和橘皮素高含量粉末（川陈皮素含有率50. 2wt%， 橘皮素含有率31. 2wt%)。回收率为25. 2%。
[0137] 实施例5
[0138] 将55g台湾香檬压榨果渣干燥产物浸泡于450ml的30% (v/v)乙醇中，在70°C的 水浴中进行2小时的提取。使用无纺布过滤提取液。将一部分提取液浓缩称量，进行HPLC 测定以计算得出川陈皮素和橘皮素的含量。通过同样的方法，使用40% (v/v)、50% (v/v)、 70% (v/v)乙醇代替30% (v/v)乙醇进行操作。通过假设55g干燥压榨果渣中含有的量为 275mg而确定回收率。结果示于表5中。
[0139]表5
[0140]
[0141] 实施例6
[0142] 对于55kg干燥台湾香檬压榨果渣，使用450L的30% (v/v)乙醇在60°C下提取6 小时。在室温静置过夜后，以滤芯式过滤器（保留粒径IOym)进行过滤后，浓缩滤液使得 溶液的量减少至130L，作为台湾香檬提取液。向5g该台湾香檬提取液的冷冻干燥粉末（含 有19511^(3.9￥1:%)川陈皮素、10〇11^(2.〇￥1:%)橘皮素）中添加3〇1111的1%(￥/￥)氢氧化 钠水溶液，获得台湾香檬碱处理产物。将该碱处理产物循环搅拌16小时后，进行离心分离， 获得沉淀物1。以水洗涤该沉淀物1，随后进行离心分离，获得沉淀物2。该步骤将上清液处 理至中性。向最终获得的沉淀物干燥而得的物质（I. Ig)中添加100% (v/v)乙醇并进行离 心分离，浓缩所得的滤液，获得了 344mg粉末。该粉末中含有159mg川陈皮素（46. 3wt% ) 和87mg橘皮素（25. 3wt%)。根据本发明的方法，可回收冷冻干燥粉末中含有的80%以上 的川陈皮素和橘皮素。
[0143] 实施例7
[0144] 对于55kg干燥台湾香檬压榨果澄，使用450L的30% (v/v)乙醇在60°C下提取6 小时。在室温静置过夜后，以滤芯式过滤器（保留粒径IOym)进行过滤后，浓缩滤液使得 溶液的量减少至130L，作为台湾香檬提取液。向4. 5g该台湾香檬提取液的浓缩干固产物 4. 5g(含有175mg(3. 9wt% )川陈皮素、90mg(2. Owt% )橘皮素）中添加30ml的lw/v%氢 氧化钠水溶液，获得台湾香檬碱处理产物。将该碱处理产物循环搅拌16小时后，进行离心 分离，获得沉淀物1。以水洗涤该沉淀物1，随后进行离心分离，获得沉淀物2。该步骤中将 上清液处理至中性。向最终获得的沉淀物干燥而得的物质（760mg)中添加100% (v/v)乙 醇并进行离心分离，浓缩所得的滤液，获得了 344mg粉末。该粉末中含有159mg川陈皮素 (44. 2wt% )和87mg橘皮素（22. 7wt% )。根据本发明的方法，可回收浓缩液中含有的60% 以上的川陈皮素和橘皮素。
[0145]参照例I
[0146] 称量589g(湿重）台湾香檬的叶，使用干燥机（东京理化器械（株）、WF0-1001SD) 在80°C下干燥16小时，获得218g干燥叶。向所得干燥叶中的5g中添加IOOmL约70°C的蒸 馏水，置于约70°C的水浴中，加热提取3小时。使用铺有保留粒径3ym的滤纸（ADVANTEC 公司制，No. 131)的布氏漏斗对所获得的提取液进行抽滤，获得残渣。
[0147] 对所获得的残渣进行干燥，向其中添加所述残渣重量的2倍量的30% (v/v)乙 醇，在室温下进行3天的乙醇提取。使用铺有保留粒径3ym的滤纸（ADVANTEC公司制， No. 131)的布氏漏斗进行抽滤，获得滤液。使用旋转蒸发仪对所获得的滤液进行浓缩，获得 干固状态的浓缩液。向其中添加所获得的浓缩液重量的相同量的水和乙酸乙酯进行溶解， 并进行分液。对可溶于乙酸乙酯的成分进行浓缩，获得川陈皮素含有率24. 4%、橘皮素含有 率11. 2wt %的提取物。
[0148] 参照例2
[0149] 向5g台湾香檬的干燥叶中添加IOOmL约70°C的蒸馏水，置于约70°C的水浴中，加 热提取3小时。使用铺有保留粒径3ym的滤纸（ADVANTEC公司制，No. 131)的布氏漏斗， 对所获得的提取液进行抽滤，获得残渣。
[0150] 对所获得的残渣进行干燥，向其中添加所述残渣重量的2倍量的100% (v/v)乙 醇，在室温下进行3天的乙醇提取。使用铺有保留粒径3ym的滤纸（ADVANTEC公司制， No. 131)的布氏漏斗进行抽滤，获得滤液。使用旋转蒸发仪对所获得的滤液进行浓缩，获得 干固状态的浓缩液。向其中添加所获得的浓缩液重量的相同量的水和乙酸乙酯进行溶解， 并进行分配提取。对可溶于乙酸乙酯的成分进行浓缩，获得川陈皮素含有率6. 9%、橘皮素 含有率5. 2wt %的提取物。
[0151] 参照例3
[0152] 向5g台湾香檬的干燥叶中添加IOOmL约70°C的蒸馏水，置于约70°C的水浴中，加 热提取3小时。使用铺有保留粒径3ym的滤纸（ADVANTEC公司制，No. 131)的布氏漏斗对 所获得的提取液进行抽滤，获得残渣。
[0153] 对所获得的残渣进行干燥，向其中添加所述残渣重量的2倍量的100% (v/v)乙 醇，在室温下进行3天的乙醇提取。使用铺有保留粒径3ym的滤纸（ADVANTEC公司制， No. 131)的布氏漏斗进行抽滤，获得滤液。使用旋转蒸发仪对所获得的滤液进行浓缩，获得 干固状态的浓缩液。向其中添加所获得的浓缩液重量的相同量的水和乙酸乙酯进行溶解， 并进行分液。对可溶于乙酸乙酯的成分进行浓缩，获得川陈皮素含有率6. 9wt%、橘皮素含 有率5. 2wt%的提取物。通过同样的方法，使用30% (v/v)乙醇、50% (v/v)乙醇和70% (v/v)乙醇代替100% (v/v)乙醇分别进行提取。结果示于表6中。
[0154]表6
[0155]
[0156] 根据以上内容，随着乙醇浓度上升，乙酸乙酯提取物重量增加，但显示川陈皮素和 橘皮素的含量在使用30% (v/v)乙醇或50% (v/v)乙醇时更多，使用这些浓度的乙醇时提 取效率更高。如上所述，即使是从台湾香檬的叶中，也获得了以高浓度含有川陈皮素和橘皮 素的级分。与目前为止能够制得的级分相比，所获得的级分以高出数倍的浓度含有川陈皮 素和橘皮素，因此可简便地制造这些化合物。此外，通过使用根据本发明的方法获得的高浓 度级分，从制造这些化合物及其类似物时的成本考虑，具有更高的优越性。
[0157] 工业实用性
[0158] 本发明可用于食品、医药品以及化妆品领域，特别是从作为霜剂、凝胶霜剂、化妆 水或者从能配合到这些产品中的角度出发是有用的。
【主权项】
1. 一种川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法，所述方法包括以下步骤（1-1)至（1-3) 以及步骤（3)和步骤（4)，或者，所述方法包括以下步骤⑵以及步骤⑶和步骤⑷： (1-1)以热水处理柑橘类，获得热水处理产物的步骤； (1-2)干燥所述热水处理产物，获得干燥产物的步骤； (1-3)以可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂，对所述干燥产物进行处理，获得川陈皮素和 橘皮素溶解产物的步骤； (2) 以可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶剂对柑橘类进行处理，获得川陈皮素和橘皮素 溶解产物的步骤； (3) 通过对所述川陈皮素和橘皮素溶解产物进行浓缩和/或干燥，获得川陈皮素和橘 皮素浓缩产物的步骤； (4) 使用稀碱对所述川陈皮素和橘皮素浓缩产物进行处理，获得作为不溶性成分的川 陈皮素和橘皮素含有物的步骤。2. 如权利要求1所述的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法，其中，所述步骤（1-1) 为，使用保持在50°C-80°C的温度下的热水，对柑橘类处理2-4小时，获得热水处理产物的 步骤。3. 如权利要求1所述的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法，其中，所述步骤（2)为， 使用保持在50°C_70°C的温度下的、可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶剂对柑橘类处理1-8 小时，获得川陈皮素和橘皮素溶解产物的步骤。4. 如权利要求1所述的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法，其中，所述可溶解川陈 皮素和橘皮素的溶剂或所述可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶剂为20-100% (v/v)的乙醇。5. 如权利要求1所述的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法，其中，所述可溶解川陈 皮素和橘皮素的溶剂或所述可溶解川陈皮素和橘皮素的温溶剂为20-50% (v/v)的乙醇。6. 如权利要求1所述的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法，其中，所述步骤（4)为， 在室温下，使用1-3% (w/v)的碱水溶液对所述川陈皮素和橘皮素浓缩产物进行处理，获得 作为不溶性成分的川陈皮素和橘皮素含有物的步骤。7. 如权利要求1所述的川陈皮素和橘皮素含有物的制造方法，其中，所述柑橘类 为选自以下植物所组成的组中的至少一种：台湾香檬（Citrusd印ressa)、温州蜜柑 (C.unshiu)、立花橘（C.tachibana)、光橘（C.Ieiocarpa)、奇利蜜柑（C.tardiva)、本地 早橘（C.succosa)、乳橘（C.kinokuni)、朱橘（C.erythrosa)、酸橘（C.sunki)、地中海柑 (C.deliciosa)、广西沙柑（C.nobilis)、栊柑（C.retuculata)、红橘（C.tangerina)、花柚 (C.hanayu)、蜜橘（C.reticulata)、酸橘（C.sunki)、高雷立花橘（C.nippokoreana)、不知 火杂柑和清见。8. 通过权利要求1-7中任一项所述的制造方法制造的川陈皮素和橘皮素含有物。9. 如权利要求8所述的川陈皮素和橘皮素含有物，其中，所述川陈皮素和橘皮素含有 物中的川陈皮素的含有率为45 % (w/v)以上，并且，橘皮素的含有率为25 % (w/v)以上。10. 如权利要求8所述的川陈皮素和橘皮素含有物，其中，所述川陈皮素和橘皮素含有 物中辛弗林的含有率低于检出下限值。11. 一种来自柑橘类的川陈皮素和橘皮素含有物，其中，川陈皮素的含有率为45 % (w/ v)以上，橘皮素的含有率为25% (w/v)以上，并且，辛弗林的含有率低于检出下限值。
【专利摘要】本发明的目的是提供一种安全性、经济性以及工业化方面优异的以高浓度含有川陈皮素和橘皮素的级分的制造方法。所述目的通过以下制造川陈皮素和橘皮素含有物的方法以及通过该方法制造的川陈皮素和橘皮素高浓度含有物而得以实现：(1-1)以热水处理柑橘类，获得热水处理产物的步骤；(1-2)干燥所述热水处理产物，获得干燥产物的步骤；(1-3)以可溶解川陈皮素和橘皮素的溶剂，对所述干燥产物进行处理，获得川陈皮素和橘皮素溶解产物的步骤；(3)通过对所述川陈皮素和橘皮素溶解产物进行浓缩和/或干燥，获得川陈皮素和橘皮素浓缩产物的步骤；以及(4)使用稀碱对所述川陈皮素和橘皮素浓缩产物进行处理，获得作为不溶性成分的川陈皮素和橘皮素含有物的步骤。
【IPC分类】A23L1/212, A23L1/30, A61P25/28, A61K36/75, A61K36/00, C07D311/30, A61P35/00, A61P3/10
【公开号】CN104902764
【申请号】CN201380062808
【发明人】照屋俊明, 照屋勇人, 杉山幸来, 禹済泰
【申请人】国立大学法人琉球大学, 株式会社冲绳研究中心
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2013年8月9日
【公告号】EP2907395A1, US20150283196, WO2014057727A1
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