使用cbp/连环蛋白的抑制剂治疗过度增殖性和癌前皮肤病的制作方法
使用cbp/连环蛋白的抑制剂治疗过度增殖性和癌前皮肤病的制作方法
【专利说明】使用CBP/连环蛋白的抑制剂治疗过度增殖性和癌前皮肤 病
[0001] 相关申请的交叉引用 本申请要求2012年10月19日提交的美国临时申请61/716, 098的优先权，其整体并 入本文中。
【背景技术】
[0002] 由于它在人生物学的许多方面中的关键作用，Wnt/0-连环蛋白信号传递作为先 兆出现。该信号传递途径在胚胎发生、器官发生和维持组织和器官体内稳态中、以及在病理 学状况诸如癌症和其它人障碍诸如炎症性障碍和纤维化中起作用。它也参与几种生理学事 件诸如分化、增殖、存活、氧化性应激、形态发生和其它事件。但是，该途径的异常活化在多 种病理学状况中也是明显的。
[0003] 银肩病是一种以皮肤细胞的过度增殖、瘙痒（pruritis/itching)和发炎组织区域 为特征的皮肤病症。银肩病的特征在于角质形成细胞生长和分化的显著变化，并且存在在 该疾病中改变的fct信号传递的证据U 7/7吧St 乂 130(7):1849-59, 2010)。
[0004] 光化性角化病（也称为"日光性角化病"和"老年性角化病"）是皮肤的厚鳞状或 有痂斑块的恶变前病症。
[0005]Wei等人（办从ri應? 63(6) :1707-17, 2011)培养了具有高增殖潜力的 人角质形成细胞，并发现这样的假定的表皮干细胞表达比富含较低增殖潜力的角质形成细 胞的群体更高水平的非钙粘着蛋白相关的连环蛋白。为了研宄该方面的生理学重要 性，Wei等人通过逆转录病毒感染将一系列0-连环蛋白构建体引入了角质形成细胞。全 长0 _连环蛋白和含有仅9个犰狳重复序列的突变体对培养物的增殖潜力几乎没有影响， 全长蛋白被快速地降解。但是，稳定化的、N-端截短的0-连环蛋白的表达使假定的干细 胞的比例增加至体外增殖群体的几乎90%而没有诱导恶性转化，并减轻了过表达E-钙粘着 蛋白细胞质结构域的分化刺激效应。相反，缺少犰狳重复序列的连环蛋白作为显性失 活的突变体起作用，并且刺激从培养物的干细胞间隔离开。
[0006] Wei等人发现，0 -连环蛋白突变体对增殖潜力的积极效应和负面效应独立于对 细胞周期动力学、明显终末分化或细胞间粘附的影响，并且与基底角质形成细胞中的TCF/ LEF报道基因的反式激活的刺激或抑制相关联。Wei等人得出以下结论：在具有表皮干细 胞特征的那些角质形成细胞中的高水平的细胞质连环蛋白会促进它们的高增殖潜力。 Wei等人的研宄提供了 e -连环蛋白信号传递在过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性 角化病和银肩病）中的作用的证据。
【发明内容】
[0007] 本公开内容提供了通过施用e-连环蛋白的抑制剂来治疗光化性角化病、银肩病 以及过度增殖性和癌前皮肤病的有关形式的方法。本公开内容也提供了 a螺旋模拟的 e-连环蛋白抑制剂化合物和包含e-连环蛋白的抑制剂的组合物。
【附图说明】
[0008]图1A-1B. qPCR结果显示了在（A) 2次局部施用（2X，在t=0、24)和（B) 4次局部 施用（4X，在t= 0、24、48和72小时）以后，试验物化合物C对银肩病组织模型中的弹力素 (elafin)基因表达水平的影响，土SEM，N=3。化合物C是（6S，9S，9aS)-N-苄基-6-(4-羟基 苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4] 三嗪-1-甲酰胺。
[0009]图2A-2B. qPCR结果显示了在（A) 2次局部施用（2X，在t=0、24)和（B) 4次局部 施用（4X，在t= 0、24、48和72小时）以后，试验物化合物C对银肩病组织模型中的HBD-2 基因表达水平的影响，土SEM，N=3。
[0010] 图3A-3B. qPCR结果显示了在（A) 2次局部施用（2X，在t=0、24)和⑶4次局部 施用（4X，在t= 0、24、48和72小时）以后，试验物化合物C对银肩病组织模型中的银肩素 (psoriasin)基因表达水平的影响，土SEM，N=3。
[0011] 图4A-4B. qPCR结果显示了在（A) 2次局部施用（2X，在t=0、24)和⑶4次局 部施用（4X，在t= 0、24、48和72小时）以后，试验物化合物C对银肩病组织模型中的Ki67 基因表达水平的影响，土SEM，N=3。
[0012] 图5A-5B. qPCR结果显示了在（A) 2次局部施用（2X，在t=0、24)和（B) 4次局部 施用（4X，在t= 0、24、48和72小时）以后，试验物化合物C对银肩病组织模型中的p63基 因表达水平的影响，土SEM，N=3。
【具体实施方式】
[0013] 近年来，已经开发了模仿在生物活性蛋白或肽中发现的回折的二级结构的非肽化 合物。例如，美国专利号5, 440, 013和公开的PCT申请号W094/03494、W001/00210A1和 TO 01 /1613 5 A 2各自公开了构象限制的、非肽化合物，其模仿回折的三维结构。另外，美国 专利号5, 929, 237和它的部分继续的美国专利号6, 013, 458公开了构象限制的化合物，其 模仿生物活性肽和蛋白的回折区域的二级结构。关于回折模拟物，在W02007/056513和 W02007/056593中已经公开了模仿生物活性肽和蛋白的a -螺旋区的二级结构的构象限制 的化合物。
[0014] 本公开内容提供了用于治疗过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银 肩病）的新化合物、药物组合物和方法。发明人已经确定，抑制e-连环蛋白信号传递是治 疗这样的病症的有效方案。
[0015] 本发明的a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂的结构和化合物公开在WO 2010/044485、WO 2010/128685、WO 2009/148192 和 US 2011/0092459 中，它们中的每一篇 通过引用整体并入本文。现在已经发现，这些化合物可用于治疗光化性角化病和银肩病以 及过度增殖性和癌前皮肤病的有关形式。尽管不希望受到约束，这些化合物在治疗这些病 症中的有效性部分地基于这些化合物的如下阻断TCF4/0 -连环蛋白转录途径的能力：抑 制环状AMP应答元件结合蛋白（CBP)，从而改变wnt途径信号传递，这已经被发现会改善结 果。
[0016] 本发明的a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂的优选结构具有下式（I):
其中 A是_CHR7_， 其中 R7是任选地被取代的芳基烷基、任选地被取代的杂芳基烷基、任选地被取代的环烷基 烷基或任选地被取代的杂环烷基烷基； G是-NH-、-NR6-或-O-其中 R6是低级烷基或低级烯基； R1是-Ra-R 10; 其中 Ra是任选地被取代的低级亚烷基，且 Rltl是任选地被取代的二环稠合芳基或任选地被取代的二环稠合杂芳基； R2是-(CO)-NH-Rb-R 20， 其中 Rb是键或任选地被取代的低级亚烷基；且 R2tl是任选地被取代的芳基或任选地被取代的杂芳基；且 R3是Cp4烷基。
[0017] 这些化合物在过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩病）的预防 和/或治疗中是特别有用的。
[0018] 本发明的a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂的更优选结构具有上述式（I)中的 下述取代基： A是_CHR7_， 其中 R7是任选地被羟基或Ci_4烷基取代的芳基烷基； G是-NH-、-NR6-或-0_ 其中 R6是C i_4烷基或C i_4烯基； R1是-Ra-R 10; 其中 Ra是Cp4亚烷基，且 Rltl是任选地被卤素或氨基取代的二环稠合芳基或二环稠合杂芳基； R2是-(CO)-NH-Rb-R 20， 其中 Rb是键或Cp4亚烷基；且 R2tl是芳基或杂芳基；且 R3是Cp4烷基。
[0019] 这些化合物在过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩病）的预防 和/或治疗中是特别有用的。
[0020] 本发明的最优选的a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂如下： (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-8-(萘-1-基甲基）-4, 7-二氧代八 氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -2-烯丙基-N-苄基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-8-(萘-1-基甲基）-4, 7-二 氧代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-8-(萘-1-基甲基）-4, 7-二氧代六氢吡 嘆并[2, 1-c] [1，2, 4]噁二嘆-I (6H)-甲酰胺， (6S，9S) -8- ((2-氨基苯并[d]噻唑-4-基）甲基）-N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二 甲基-4, 7-二氧代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基） 八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -2-烯丙基-N-苄基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基 甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， 4- (((6S，9S) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基） 八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸二氢盐， 4- (((6S，9S) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-8-(萘-1-基甲基）-4, 7-二氧代八 氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸二氢盐， 4- (((6S，9S) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基） 八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸钠， 4- (((6S，9S) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(萘-8-基甲基）八 氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸钠， (6S，9S) -2-烯丙基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-4, 7-二氧代-N- ((R) -1-苯基乙 基）-8-(喹 啉-8-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, l-c][l，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -2-烯丙基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-4, 7-二氧代-N- ((S) -1-苯基乙 基）-8-(喹啉-8-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, l-c][l，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基-2, 6-二甲基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹 啉-8-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -8-(苯并[b]噻吩-3-基甲基）-N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲 基-4, 7-二氧代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S)-8-(苯并[c] [1，2,5]噻二唑-4-基甲基）-N-苄基-6-(4-羟基苄基）-2,9-二 甲基-4, 7-二氧代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-8-(异喹啉-5-基甲基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧 代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-8- ((5-氯噻吩并[3, 2-b]吡啶-3-基）甲基）-6- (4-羟基苄 基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹喔啉-5-基甲 基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺，和 (6S，9S) -6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基）-N-(噻 吩-2-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺。
[0021] 这些化合物在过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩病）的预防 和/或治疗中是特别有用的。
[0022] 在最优选的实施方案中，所述化合物是： 4- (((6S，9S，9aS) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲 基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸二氢盐（化合物A)， 或 (6S，9S，9aS) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基 甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺（化合物C)。
[0023] 这些化合物在过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩病）的预防 和/或治疗中是特别有用的。
[0024] "0-连环蛋白抑制剂"是可以减小或阻止0-连环蛋白活性的物质。0-连环蛋 白活性包括易位至细胞核、结合TCF (T细胞因子）转录因子和共活化TCF转录因子诱导的 TCF靶基因的转录。" 0-连环蛋白抑制剂"还可以干扰CBP和0-连环蛋白的相互作用。 因而，0 _连环蛋白抑制剂会抑制或减小CBP/ 0 -连环蛋白信号传递途径的CBP/ 0 -连环 蛋白信号传递和活性，包括一个或多个下游信号传递事件的减小。
[0025] 本文中公开了用于治疗过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩 病）的a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂化合物。
[0026] 疾病 "过度增殖性"疾病或病症的特征在于过度的或不希望的细胞增殖。
[0027] "癌前的"疾病或病症的特征在于与进展至肿瘤或癌性状态有关的细胞发育异常 和改变的细胞生长。
[0028] "治疗"表示尝试改变被治疗的个体或细胞的病程的临床干预，并且可以在临床病 理学过程期间进行。治疗的疗效包括、但不限于，预防疾病的复发、减轻症状、减少疾病的任 何直接或间接病理后果、降低疾病进展的速度、改善或减轻疾病状态、以及减轻或改善的预 后。
[0029] 本文中使用的术语"治疗有效量"和"有效量"互换使用，表示足以产生以下结果 的本发明的组合物的量：预防过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩病）或 其一种或多种症状的发展或发作，增强或改善另一种疗法的一种或多种作用，和/或改善 过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩病)的一种或多种症状。对于遭受光 化性角化病的对象而言，优选的治疗有效量是有效地减轻角化病的症状(诸如减轻皮肤病 变的存在或形成)的量。对于遭受银肩病的对象而言，优选的治疗有效量是有效地减轻银肩 病的症状(诸如减轻皮肤斑块的存在或形成）的量。
[0030] 可以将治疗有效量以足以减轻、改善、稳定、逆转或减缓疾病的进展或以其它方式 减少疾病的病理后果、或减少疾病的症状的一个或多个剂量施用给患者。改善或减少不需 要是永久的，但是可以持续至少1小时、至少1天或至少1周或更久的一段时间。有效量通 常由医师基于个例确定，并且是在本领域技术人员的技术范围内。当确定适当剂量以达到 有效量时，通常考虑几种因素。这些因素包括患者的年龄、性别和重量，要治疗的病症，病症 的严重程度，以及施用途径，剂型和方案和所期望的结果。
[0031] 本文中使用的术语"对象"和"患者"互换使用，且表示动物，优选哺乳动物诸如非 灵长类动物（例如，牛、猪、马、猫、狗、大鼠等）和灵长类动物（例如，猴和人），且最优选人。
[0032] 本文描述的a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂可用于预防或治疗疾病。具体地， 本公开内容提供了治疗处于过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩病）的 风险中（或对其易感）的对象的预防和治疗方法。因此，本发明的方法提供了通过给有此 需要的对象施用有效量的a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂来预防和/或治疗对象中的 这些病症。例如，在改善过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩病）的一个 或多个因素的努力中，可以给对象施用a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂。
[0033] 本文中使用的"光化性角化病"表示以增厚的皮肤病变的发展为特征的皮肤病症。 当皮肤持续地暴露于阳光并且厚的鳞状或有痂区域出现时，发生这些病变的进行性发展。 鳞状或有痂部分是干燥的和粗糙的。病变作为扁平的鳞状区域出现，并且在以后生长成坚 硬的疣样区域。未治疗的病变具有最高达20%的进展成鳞状细胞癌的风险。施用免疫抑制 药物的人，诸如器官移植患者，更可能发展导致皮肤癌的光化性角化病。
[0034]本文中使用的"银肩病"表示影响皮肤从而导致皮肤细胞的过度增殖的过度增殖 性疾病。取决于爆发的严重程度和位置，个体可能经历显著的身体不适和某种失能。存在 5类银肩病：斑块型、滴型、皮褶型、脓疱型和红皮病型。
[0035] 在斑块型银肩病中，皮肤快速地积累在局部部位，这导致皮肤的银白色外观。斑块 经常出现在肘和膝的皮肤上，但是可以影响任何区域，包括头皮、手掌和脚底和生殖器。这 是银肩病的最常见形式。
[0036] 滴型银肩病的特征在于众多小型鳞状红色或粉色泪珠形病变。银肩病的这些众多 斑点出现在身体的较大区域上，主要是躯干，但是也包括肢体和头皮。
[0037] 皮褶型银肩病作为皮肤的光滑发炎斑块出现。它出现在皮褶中，特别是在大腿和 腹股沟之间、腋窝、在超重的腹部下面和在乳房下面。它被摩擦和汗液加重，并且造成皮肤 易感真菌感染。
[0038]脓疱型银肩病作为被非传染性脓汁填充的隆起肿块（脓疱）而出现。在脓疱下面 和周围的皮肤是红色的和触痛的。脓疱型银肩病通常可以局限于手和脚（掌跖脓疱病），或 与在身体的任何部位上随机出现的泛发斑块一起遍及全身。
[0039] 红皮病型银肩病涉及在身体表面的大部分上的泛发性皮肤炎症和表皮剥脱。它可 能伴有严重的瘙痒、肿胀和疼痛。它经常是不稳定的斑块型银肩病恶化的结果，尤其是在突 然停止全身疗法后。该形式的银肩病可以是致命的，因为极端的炎症和表皮剥脱会破坏身 体的调节温度的能力和皮肤的屏障功能。
[0040] 本发明提供了通过施用e-连环蛋白抑制剂来治疗过度增殖性和癌前皮肤病症， 包括光化性角化病和银肩病。本发明还包括这样的方法：其中在联合治疗中施用e-连环 蛋白抑制剂化合物。也就是说，所述化合物可以与其它药剂结合地、但是彼此单独地使用， 所述其它药剂可用于治疗过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩病)。在这 些组合方法中，所述化合物通常与其它药剂结合地以每天1-100 mg/kg体重的每日剂量施 用。所述其它药剂通常以治疗上使用的量施用。但是，具体给药方案将由医师使用合理的 医学判断来确定。
[0041] 治疗光化性角化病表示施用本文描述的化合物或组合来治疗遭受光化性角化病 的对象。治疗光化性角化病的一种结果是，减少多余的结缔组织的形成。治疗光化性角化 病的另一种结果是，减少或阻止皮肤病变的发展。治疗光化性角化病的再一种结果是，阻止 或抑制皮肤癌的发展。
[0042] 治疗银肩病表示施用本文描述的化合物或组合来治疗遭受银肩病的对象。治疗银 肩病的一种结果是，减少皮肤斑块的形成。治疗银肩病的另一种结果是，减少或阻止皮肤瘙 痒和/或片落。治疗银肩病的再一种结果是，减轻银肩病相关的炎症。
[0043] 可以将本文描述的a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂掺入药物组合物中，用于单 独地或组合地施用给对象以治疗或预防本文描述的障碍。这样的组合物通常包括活性剂和 药学上可接受的载体。本文中使用的术语"药学上可接受的载体"包括与药物施用相容的 盐水、溶剂、分散介质、包衣剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。还可将补充 性活性化合物掺入所述组合物中。
[0044] 任何合适的施用途径可以用于给哺乳动物(特别是人）提供有效剂量的本文描述 的化合物。可以使用例如口服、直肠、局部、胃肠外、眼、肺、鼻途径等。剂型包括片剂、糖锭、 分散体、混悬液、溶液、胶囊剂、乳膏剂、软膏剂、气雾剂等。
[0045] 采用的活性成分的有效剂量可以随采用的特定化合物、施用模式、要治疗的病症 和要治疗的病症的严重程度而变化。这样的剂量可以由本领域技术人员容易地确定。
[0046] 当治疗或控制光化性角化病、银肩病和/或本文描述的化合物适用的其它病症 时，当以约0. 01毫克至约100毫克/千克动物体重的日剂量施用本文所述化合物(优选地 作为单个每日剂量或以分份剂量每天2-6次给予，或以缓释形式给予）时，会得到通常令人 满意的结果 。对于大多数大型哺乳动物，总日剂量是约1.0毫克至约1000毫克。在70 kg 成年人的情况下，总日剂量通常是约1毫克至约500毫克。对于特别有效的化合物，成年人 的剂量可以低至0.1 mg。在某些情况下，每日剂量可以高至1克。可以在该范围内或甚至 在该范围以外调节剂量方案，以提供最佳治疗应答。
[0047] 经常使用片剂或胶囊剂进行口服施用。片剂和胶囊剂中的剂量的例子是0.1 mg、 0? 25 mg、0. 5 mg、I mg、2 mg、5 mg、10 mg、15 mg、20 mg、25 mg、30 mg、40 mg、50 mg、100 mg、 200 mg、250 mg、300 mg、400 mg、500 mg和750 mg。其它口服形式也可以具有相同或类似 的剂量。
[0048] 本文还描述了药物组合物，其包含本文描述的化合物和药学上可接受的载体。本 文描述的药物组合物包含作为活性成分的本文描述的化合物或药学上可接受的盐，以及药 学上可接受的载体和任选的其它治疗成分。如果施用前药，则药物组合物还可以包含前药 或其药学上可接受的盐。
[0049] 所述组合物可以适合用于口服的、直肠的、局部的、胃肠外的（包括皮下的、肌肉 内的和静脉内的）、眼的（眼科的）、肺的（经鼻的或经颊的吸入）或经鼻施用，尽管在任何 给定情况下最合适的途径取决于所治疗的病症的性质和严重程度以及活性成分的性质。它 们可以方便地存在于单位剂型中，并且可以利用药学领域众所周知的任何方法制备。
[0050] 在实际应用中，根据常规药物配制技术，可以将本文所述化合物作为活性成分以 紧密地混合的形式与药用载体组合在一起。载体可以采用多种形式，这取决于对于施用而 言所期望的制剂的形式，例如，口服或胃肠外（包括静脉内）施用。在将组合物制备为口服 剂型时，可以使用任何常见的药学介质，例如，水、二醇类、油、醇、矫味剂、防腐剂、着色剂等 (在口服液体制剂(例如，混悬液、酏剂和溶液）的情况下）；或可以使用载体诸如淀粉、糖、 微晶纤维素、稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等（在口服固体制剂(例如，散剂、硬 和软胶囊剂和片剂）的情况下），其中固体口服制剂比液体制剂优选。
[0051] 因为它们容易施用，片剂和胶囊剂代表最有利的口服剂量单位形式，在该情况下， 采用固体药用载体。如果需要的话，可以利用标准的水性或非水性技术包被片剂。这样的 组合物和制剂应该含有至少0. 1%的活性化合物。活性化合物在这些组合物中的百分比当 然可以改变，并且可以方便地在所述单位的重量的大约2%至大约60%之间。活性化合物在 这种治疗上有用的组合物中的量是将获得有效剂量的量。还可以鼻内地施用活性化合物， 作为例如液体滴剂或喷雾剂。
[0052] 片剂、丸剂、胶囊剂等还可以含有：粘合剂诸如黄蓍树胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明 胶；赋形剂诸如磷酸二钙；崩解剂诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸；润滑剂诸如硬脂酸 镁；和甜味剂诸如蔗糖、乳糖或糖精。当剂量单位形式是胶囊时，除了上述类型的物质之外， 它还可以含有液体载体诸如脂肪油。
[0053] 各种其它物质可以作为包衣存在，或用于改变剂量单位的物理形式。例如，可以用 紫胶、糖或两者包被片剂。除了活性成分之外，糖浆剂或酏剂还可以含有：作为甜味剂的蔗 糖，作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯，染料和调味剂例如樱桃或橙味 调味剂。
[0054] 适合于透皮施用的药物制剂可以呈现为不连续的贴剂，其意图在延长的时间段内 保持与接受者的表皮的紧密接触。例如，通过如在Tfes. 3(6):318 (1986)中一般 地描述的离子透入法，可以从贴剂递送活性成分。
[0055] 可以将适合于局部施用的药物制剂配制为软膏剂、乳膏剂、混悬液、洗剂、散剂、溶 液、糊剂、凝胶、喷雾剂、气雾剂、或油。就治疗眼或其它外部组织(例如嘴和皮肤)而言，所述 制剂优选地作为局部软膏剂或乳膏剂施用。当以软膏剂形式配制时，可以与石蜡族的或水 可混溶的软膏基质一起使用所述活性成分。可替换地，可以将所述活性成分与水包油乳膏 剂基质或油包水基质一起配制在乳膏剂中。
[0056] 也可以胃肠外地施用本文描述的化合物。可以在水中制备这些活性化合物的溶 液或混悬液，适当地与表面活性剂或表面活性剂的混合物(诸如羟丙基纤维素、聚山梨酯80 以及中链和长链脂肪酸的甘油单酯和甘油二酯)混合。还可以在丙三醇、液体聚乙二醇和其 在油中的混合物中制备分散体。在贮存和使用的普通条件下，这些制品含有防腐剂以阻止 微生物的生长。
[0057] 适合于注射使用的药物形式包括无菌水溶液或分散体，和用于即时制备无菌注射 溶液或分散体的无菌粉末。在所有情况下，所述形式必须是无菌的，并且必须是具有容易注 射性能的流体。它在制备和贮存条件下必须是稳定的，并且必须被保存以免于微生物(诸如 细菌和真菌)的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇（例如 丙三醇、丙二醇和液体聚乙二醇）、其合适的混合物和植物油。
[0058] 下述非限制性实施例进一步例证了本公开内容。
[0059] 实施例
[0060] 该研宄的目的是，探宄试验化合物即化合物C对基于人细胞的银肩病组织模型的 结构和基因表达的影响。化合物C是（6S，9S，9aS)-N-苄基-6-(4-羟基苄基）-2, 9-二甲 基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰 胺，即一种a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂化合物。
[0061]银肩病组织模型（S0R-300-FT; MatTek Corp.，Ashland, MA)是一种高度分化 的体分银肩病组织，其包含正常的、人衍生的角质形成细胞和银肩病成纤维细胞，所述细 胞已经经过培养以形成高度分化的银肩病组织模型。在形态学上，银肩病组织具有均匀 的厚度，且非常类似于天然银肩病组织，因为它表达增加水平的Ki67+细胞（增殖过度） 和银肩病相关的蛋白诸如银肩素、弹力素和人防卫素-2(111^)-2)〇^7；/ ><3从〇乂 173:815-23，2008)。在多微孔膜（孔径=0.4Mm)细胞培养插入物上培养S0R-300-FT组 织（表面积=0.6 cm2)。所有银肩病组织生长在空气液体界面（ALI)处，其中顶端组织层 暴露于空气。ALI的应用会诱导组织达到皮肤样分化和允许试验材料的直接局部施用（类 似于体片暴露）。
[0062] 使用在培养基中的2. 5、0. 25和0. 025l^g/ml的卡泊三醇作为阳性对照。使用超纯 水作为媒介物对照。将试验物化合物C施加于组织的基底外侧（通过加入培养基中）和顶 端（50 yl)侧。使用苏木精-曙红染色的组织学载玻片，检查每3种浓度的试验物对组织 结构的影响。对于基因分析，使用标准的RNA分离方案（MatTek Corporation)，分离RNA。 将分离的RNA定量，并检查分离的RNA的完整性。进行定量RT-PCR以确定5种银肩病相关 基因（弹力素、HBD-2、银肩素、p63和Ki67)的表达水平。
[0063] 将S0R-300-FT ?组织转移至含有0. 9 ml预温热的测定培养基的6-孔板，并平衡 至标准培养条件（37°C，5%C02) 1小时。平衡1小时以后，如下给组织重新供给新鲜培养基： 1)对于24小时时间点，给组织供给0. 9 ml培养基，和2)对于>24小时的时间点，通过将细 胞培养插入物放在洗绦器（Part # EPI-WSHR, MatTek Corporation)的顶上，给组织供给 5 ml培养基。接着，将50W试验物局部地施加于银肩病组织（n=3)，并将试验物以100剛、 30剛和5剛的浓度加入培养基中。在48和72小时的时间：a)用300-400ML PBS局部地冲 洗组织3次，b)将含有组织的插入物用无菌镊子夹紧，并通过将所述插入物浸渍在PBS中 和从插入物倾析培养基来轻轻冲洗试验物，和c)在冲洗和倾析以后立即将新鲜试验物重 新施加于组织（50ML局部地）。在t = 48小时（2次重复施用）和t= 96小时（4次施用） 进行分析。
[0064] 在t=48 (2次重复暴露）和t=96小时（4次暴露）以后，将N=3组织/处理用于 RNA分离进行生物标志物鉴别（基因表达水平）。在t=48和t=96小时以后，在10%福尔马 林中固定N=I组织/处理用于组织学分析。
[0065] RNA分离：按照MatTek的标准化的RNA分离方案，从组织分离RNA。使用Experion 系统（Bio-Rad)，评估RNA的浓度、完整性和纯度。
[0066]qPCR:使用 RT2 First Strand Kit (Qiagen,目录号 330401)，产生 cDNA。使用 RT2 SYBR Green qPCR Mastermix (Qiagen,目录号 330502)和 Qiagen RT2 引物，测量相 对基因表达。使用Bio-Rad CFX软件进行分析。
[0067]试骀药物对组织结构的影晌.进行组织学样品的显微观察，并评估处理对组织形 态学(诸如顶端表面破坏、结构变化和异常组织染色）的影响。
[0068] 试验物化合物C，100剛：在2次或4次重复暴露于试验物以后组织组织学的显微 观察显示了对分化细胞层（上基层至顶层）的结构损伤。
[0069] 试验物化合物C，30刚：在2次重复暴露于试验物以后组织组织学的显微观察显 示了在48小时时的微小结构损伤。在4次暴露于试验物以后96小时，上基层和顶层脱落， 剩下仍然附着于组织的真皮成分的基底细胞。该脱落提示银肩病性斑块的除去。
[0070] 试验物化合物C，5剛：在2次重复暴露以后组织组织学的显微观察显示了对组织 结构的微小影响。但是，在4次重复暴露于试验物以后，组织的副基底-顶层脱落。该脱落 提示银肩病性斑块的除去。另外，基底细胞是完整的，且组织再生正在发生。
[0071] 卡泊三醇-阳性对照：在2次或4次重复暴露于不同浓度的阳性对照以后组织组 织学的显微观察显示了结构损伤的微小至无证据或对组织形态学的显著改变。
[0072] 培养基-阴性对照：在整个实验中观察到正常组织组织学。
[0073]试骀药物对牛物标iP,基闵的影晌.进行qPCR以定量5种银肩病相关的基因生物 标志物的相对基因表达水平：1)人0防卫素2 (HBD-2)，2)银肩素，3)弹力素和4) p63， 和 5) Ki67。
[0074] 试验物化合物C，100剛：在历时96小时暴露时段的重复（4X)施用以后，100剛浓 度减量调节（彡2倍）弹力素、HBD-2和银肩素的表达（图1B，2B，3B)。注：在2次重复 施用以后，100剛浓度的试验物显示P63基因的轻微减量调节（1.6倍）（图5A)。对于该 浓度的试验物，没有注意到Ki67基因表达的减量调节（图4A-B ;表1和2)。
[0075] 试验物化合物C，30剛：在历时96小时暴露时段的重复（4X)施用以后，30剛浓度 减量调节（彡2倍）弹力素、HBD-2和银肩素的表达（图1B，2B，3B)。另外，该浓度也显 示在48小时时弹力素基因表达水平的2. 2倍下降（图1A)。注：在多次重复施用以后，30剛 浓度的化合物C试验物没有显示p63和Ki67基因的减量调节（2X或4X;图4A-B和5A-B; 表1和2)。
[0076] 试验物化合物C，5剛：在历时96小时暴露时间的4次重复施用以后，5剛浓度减量 调节（彡2倍）弹力素、HBD-2和银肩素的表达（图1B，2B，3B)。注：在多次重复施用以 后，5剛浓度的化合物C试验物没有显示p63和Ki67基因的减量调节（2X或4X;图4A-B和 5A-B ;表 1 和 2)。
[0077] 卡泊三醇（阳性对照）：在2次重复施用以后，2. 5 ug/ml浓度的药物减量调节 (多2倍）所有试验的银肩病相关的基因（弹力素、HBD-2和银肩素、p63和Ki 67)的表达 (表1)。4次重复施用以后，注意到弹力素、HBD-2和银肩素基因的显著减少（表2) ;p63和 Ki67基因分别显示1. 7和1. 6倍下降（表2)。此外，在历时48小时暴露时段的2次施用以 后，0. 25 ug/ml浓度的卡泊三醇也显示HBD2和p63基因表达水平的减量调节（彡2倍）。 在4次重复施用以后，最低浓度的卡泊三醇（0.025 ug/ml)显示弹力素、HBD-2和银肩素的 表达水平的减量调节（多2倍），但是在2次重复施用以后却没有。
[0078] 表1 :在银肩病组织模型上重复（在48小时时2次）施用化合物C和卡泊三醇以 后基因表达水平的倍数变化。用阴影标记减量调节的基因表达水平（>2倍）。
[0079] 表2 :在银肩病组织模型中重复（在96小时时4次）施用化合物C和卡泊三醇以 后基因表达水平的倍数变化。用阴影标记减量调节的基因表达水平（>2倍）。
[0080] 用化合物C对组织的处理显示了银肩病相关的基因标志物弹力素、HBD-2和银肩 素的减量调节。另外，用化合物C的处理导致顶端层的脱落，这与体内银肩病性斑块的除去 和组织再生有关。因此，化合物C (本发明的一种示例性的a螺旋模拟的e-连环蛋白抑 制剂化合物）可有效地治疗银肩病。
【主权项】
1. 用于治疗过度增殖性或癌前皮肤病症的α螺旋模拟的β-连环蛋白抑制剂化合物 或其药学上可接受的盐，其具有下式（I): 其中：A 是 _CHR7_， 其中R7是氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的烯基、任选地被取代的炔基、任选 地被取代的芳基烷基、任选地被取代的杂芳基烷基、任选地被取代的环烷基烷基、任选地被 取代的杂环烷基烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、任选地被取代的环烷 基或任选地被取代的杂环烷基； G 是-NH_、_NR6_、_0 _、_CHR6_ 或-C (R6) 2_， 其中R6独立地选自任选地被取代的烷基、任选地被取代的烯基和任选地被取代的炔 基； R1是任选地被取代的芳基烷基、任选地被取代的杂芳基烷基、任选地被取代的环烷基 烷基或任选地被取代的杂环烷基烷基； R2是-W 21-W22-Rb-R20， 其中W21是-(CO)-或-(SO 2)_; W22是键、-0-、-NH-或任选地被取代的低级亚烷基；Rb 是键或任选地被取代的低级亚烷基；且R2tl是任选地被取代的烷基、任选地被取代的烯基、 任选地被取代的炔基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、任选地被取代的环烷 基或任选地被取代的杂环烷基；且 R3是任选地被取代的烷基、任选地被取代的烯基或任选地被取代的炔基。2. 权利要求1所述的化合物，所述化合物选自： (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-8-(萘-1-基甲基）-4, 7-二氧代八 氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -2-烯丙基-N-苄基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-8-(萘-1-基甲基）-4, 7-二 氧代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-8-(萘-1-基甲基）-4, 7-二氧代六氢吡 嘆并[2, 1-c] [1，2, 4]噁二嘆-I (6H)-甲酰胺， (6S，9S) -8- ((2-氨基苯并[d]噻唑-4-基）甲基）-N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二 甲基-4, 7-二氧代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基） 八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -2-烯丙基-N-苄基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基 甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， 4- (((6S，9S) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基） 八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸二氢盐， 4- (((6S，9S) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-8-(萘-1-基甲基）-4, 7-二氧代八 氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸二氢盐， 4- (((6S，9S) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基） 八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸钠， 4- (((6S，9S) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(萘-8-基甲基）八 氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸钠， (6S，9S) -2-烯丙基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-4, 7-二氧代-N- ((R) -1-苯基乙 基）-8-(喹啉-8-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, l-c][l，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -2-烯丙基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-4, 7-二氧代-N- ((S) -1-苯基乙 基）-8-(喹啉-8-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, l-c][l，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基-2, 6-二甲基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹 啉-8-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -8-(苯并[b]噻吩-3-基甲基）-N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲 基-4, 7-二氧代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S)-8-(苯并[c] [1，2,5]噻二唑-4-基甲基）-N-苄基-6-(4-羟基苄基）-2,9-二 甲基-4, 7-二氧代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-8-(异喹啉-5-基甲基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧 代八氢-IH-吡嗪并[2, Ι-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-8- ((5-氯噻吩并[3, 2-b]吡啶-3-基）甲基）-6- (4-羟基苄 基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代八氢-IH-吡嗪并[2, Ι-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹喔啉-5-基甲 基）八氢-IH-吡嗪并[2, Ι-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺，和 (6S，9S) -6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基）-N-(噻 吩-2-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, Ι-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺。3. 权利要求1所述的化合物，所述化合物选自： 4- (((6S，9S，9aS) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲 基）八氢-IH-吡嗪并[2, Ι-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸二氢盐，和 (6S，9S，9aS) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基 甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, Ι-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺。4. 一种药物组合物，其包含权利要求1、2或3所述的化合物。5. -种用于治疗过度增殖性或癌前皮肤病症的方法，所述方法包括：给有此需要的患 者施用有效量的权利要求1、2或3所述的化合物。6. 权利要求5所述的方法，其中所述皮肤病症是光化性角化病。7. 权利要求5所述的方法，其中所述皮肤病症是银肩病。8. -种用于在光化性角化病以后抑制皮肤癌的发展的方法，所述方法包括：给有此需 要的患者施用有效量的权利要求1、2或3所述的化合物。
【专利摘要】本公开内容一般地涉及α-螺旋模拟物结构，且具体地涉及是β-连环蛋白的抑制剂的α-螺旋模拟物结构。本公开内容也涉及在过度增殖性和癌前皮肤病症（包括光化性角化病和银屑病）的治疗中的应用，和包含这样的α螺旋模拟的β-连环蛋白抑制剂的药物组合物。
【IPC分类】A61P35/00, A61K31/5365, A61P17/06
【公开号】CN104902901
【申请号】CN201380054452
【发明人】小路弘行, 小田上刚直
【申请人】株式会社棱镜制药
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2013年10月21日
【公告号】CA2889010A1, EP2908822A1, US20150283145, WO2014061826A1
【专利说明】使用CBP/连环蛋白的抑制剂治疗过度增殖性和癌前皮肤 病
[0001] 相关申请的交叉引用 本申请要求2012年10月19日提交的美国临时申请61/716, 098的优先权，其整体并 入本文中。
【背景技术】
[0002] 由于它在人生物学的许多方面中的关键作用，Wnt/0-连环蛋白信号传递作为先 兆出现。该信号传递途径在胚胎发生、器官发生和维持组织和器官体内稳态中、以及在病理 学状况诸如癌症和其它人障碍诸如炎症性障碍和纤维化中起作用。它也参与几种生理学事 件诸如分化、增殖、存活、氧化性应激、形态发生和其它事件。但是，该途径的异常活化在多 种病理学状况中也是明显的。
[0003] 银肩病是一种以皮肤细胞的过度增殖、瘙痒（pruritis/itching)和发炎组织区域 为特征的皮肤病症。银肩病的特征在于角质形成细胞生长和分化的显著变化，并且存在在 该疾病中改变的fct信号传递的证据U 7/7吧St 乂 130(7):1849-59, 2010)。
[0004] 光化性角化病（也称为"日光性角化病"和"老年性角化病"）是皮肤的厚鳞状或 有痂斑块的恶变前病症。
[0005]Wei等人（办从ri應? 63(6) :1707-17, 2011)培养了具有高增殖潜力的 人角质形成细胞，并发现这样的假定的表皮干细胞表达比富含较低增殖潜力的角质形成细 胞的群体更高水平的非钙粘着蛋白相关的连环蛋白。为了研宄该方面的生理学重要 性，Wei等人通过逆转录病毒感染将一系列0-连环蛋白构建体引入了角质形成细胞。全 长0 _连环蛋白和含有仅9个犰狳重复序列的突变体对培养物的增殖潜力几乎没有影响， 全长蛋白被快速地降解。但是，稳定化的、N-端截短的0-连环蛋白的表达使假定的干细 胞的比例增加至体外增殖群体的几乎90%而没有诱导恶性转化，并减轻了过表达E-钙粘着 蛋白细胞质结构域的分化刺激效应。相反，缺少犰狳重复序列的连环蛋白作为显性失 活的突变体起作用，并且刺激从培养物的干细胞间隔离开。
[0006] Wei等人发现，0 -连环蛋白突变体对增殖潜力的积极效应和负面效应独立于对 细胞周期动力学、明显终末分化或细胞间粘附的影响，并且与基底角质形成细胞中的TCF/ LEF报道基因的反式激活的刺激或抑制相关联。Wei等人得出以下结论：在具有表皮干细 胞特征的那些角质形成细胞中的高水平的细胞质连环蛋白会促进它们的高增殖潜力。 Wei等人的研宄提供了 e -连环蛋白信号传递在过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性 角化病和银肩病）中的作用的证据。
【发明内容】
[0007] 本公开内容提供了通过施用e-连环蛋白的抑制剂来治疗光化性角化病、银肩病 以及过度增殖性和癌前皮肤病的有关形式的方法。本公开内容也提供了 a螺旋模拟的 e-连环蛋白抑制剂化合物和包含e-连环蛋白的抑制剂的组合物。
【附图说明】
[0008]图1A-1B. qPCR结果显示了在（A) 2次局部施用（2X，在t=0、24)和（B) 4次局部 施用（4X，在t= 0、24、48和72小时）以后，试验物化合物C对银肩病组织模型中的弹力素 (elafin)基因表达水平的影响，土SEM，N=3。化合物C是（6S，9S，9aS)-N-苄基-6-(4-羟基 苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4] 三嗪-1-甲酰胺。
[0009]图2A-2B. qPCR结果显示了在（A) 2次局部施用（2X，在t=0、24)和（B) 4次局部 施用（4X，在t= 0、24、48和72小时）以后，试验物化合物C对银肩病组织模型中的HBD-2 基因表达水平的影响，土SEM，N=3。
[0010] 图3A-3B. qPCR结果显示了在（A) 2次局部施用（2X，在t=0、24)和⑶4次局部 施用（4X，在t= 0、24、48和72小时）以后，试验物化合物C对银肩病组织模型中的银肩素 (psoriasin)基因表达水平的影响，土SEM，N=3。
[0011] 图4A-4B. qPCR结果显示了在（A) 2次局部施用（2X，在t=0、24)和⑶4次局 部施用（4X，在t= 0、24、48和72小时）以后，试验物化合物C对银肩病组织模型中的Ki67 基因表达水平的影响，土SEM，N=3。
[0012] 图5A-5B. qPCR结果显示了在（A) 2次局部施用（2X，在t=0、24)和（B) 4次局部 施用（4X，在t= 0、24、48和72小时）以后，试验物化合物C对银肩病组织模型中的p63基 因表达水平的影响，土SEM，N=3。
【具体实施方式】
[0013] 近年来，已经开发了模仿在生物活性蛋白或肽中发现的回折的二级结构的非肽化 合物。例如，美国专利号5, 440, 013和公开的PCT申请号W094/03494、W001/00210A1和 TO 01 /1613 5 A 2各自公开了构象限制的、非肽化合物，其模仿回折的三维结构。另外，美国 专利号5, 929, 237和它的部分继续的美国专利号6, 013, 458公开了构象限制的化合物，其 模仿生物活性肽和蛋白的回折区域的二级结构。关于回折模拟物，在W02007/056513和 W02007/056593中已经公开了模仿生物活性肽和蛋白的a -螺旋区的二级结构的构象限制 的化合物。
[0014] 本公开内容提供了用于治疗过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银 肩病）的新化合物、药物组合物和方法。发明人已经确定，抑制e-连环蛋白信号传递是治 疗这样的病症的有效方案。
[0015] 本发明的a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂的结构和化合物公开在WO 2010/044485、WO 2010/128685、WO 2009/148192 和 US 2011/0092459 中，它们中的每一篇 通过引用整体并入本文。现在已经发现，这些化合物可用于治疗光化性角化病和银肩病以 及过度增殖性和癌前皮肤病的有关形式。尽管不希望受到约束，这些化合物在治疗这些病 症中的有效性部分地基于这些化合物的如下阻断TCF4/0 -连环蛋白转录途径的能力：抑 制环状AMP应答元件结合蛋白（CBP)，从而改变wnt途径信号传递，这已经被发现会改善结 果。
[0016] 本发明的a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂的优选结构具有下式（I):
其中 A是_CHR7_， 其中 R7是任选地被取代的芳基烷基、任选地被取代的杂芳基烷基、任选地被取代的环烷基 烷基或任选地被取代的杂环烷基烷基； G是-NH-、-NR6-或-O-其中 R6是低级烷基或低级烯基； R1是-Ra-R 10; 其中 Ra是任选地被取代的低级亚烷基，且 Rltl是任选地被取代的二环稠合芳基或任选地被取代的二环稠合杂芳基； R2是-(CO)-NH-Rb-R 20， 其中 Rb是键或任选地被取代的低级亚烷基；且 R2tl是任选地被取代的芳基或任选地被取代的杂芳基；且 R3是Cp4烷基。
[0017] 这些化合物在过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩病）的预防 和/或治疗中是特别有用的。
[0018] 本发明的a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂的更优选结构具有上述式（I)中的 下述取代基： A是_CHR7_， 其中 R7是任选地被羟基或Ci_4烷基取代的芳基烷基； G是-NH-、-NR6-或-0_ 其中 R6是C i_4烷基或C i_4烯基； R1是-Ra-R 10; 其中 Ra是Cp4亚烷基，且 Rltl是任选地被卤素或氨基取代的二环稠合芳基或二环稠合杂芳基； R2是-(CO)-NH-Rb-R 20， 其中 Rb是键或Cp4亚烷基；且 R2tl是芳基或杂芳基；且 R3是Cp4烷基。
[0019] 这些化合物在过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩病）的预防 和/或治疗中是特别有用的。
[0020] 本发明的最优选的a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂如下： (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-8-(萘-1-基甲基）-4, 7-二氧代八 氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -2-烯丙基-N-苄基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-8-(萘-1-基甲基）-4, 7-二 氧代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-8-(萘-1-基甲基）-4, 7-二氧代六氢吡 嘆并[2, 1-c] [1，2, 4]噁二嘆-I (6H)-甲酰胺， (6S，9S) -8- ((2-氨基苯并[d]噻唑-4-基）甲基）-N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二 甲基-4, 7-二氧代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基） 八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -2-烯丙基-N-苄基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基 甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， 4- (((6S，9S) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基） 八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸二氢盐， 4- (((6S，9S) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-8-(萘-1-基甲基）-4, 7-二氧代八 氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸二氢盐， 4- (((6S，9S) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基） 八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸钠， 4- (((6S，9S) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(萘-8-基甲基）八 氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸钠， (6S，9S) -2-烯丙基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-4, 7-二氧代-N- ((R) -1-苯基乙 基）-8-(喹 啉-8-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, l-c][l，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -2-烯丙基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-4, 7-二氧代-N- ((S) -1-苯基乙 基）-8-(喹啉-8-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, l-c][l，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基-2, 6-二甲基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹 啉-8-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -8-(苯并[b]噻吩-3-基甲基）-N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲 基-4, 7-二氧代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S)-8-(苯并[c] [1，2,5]噻二唑-4-基甲基）-N-苄基-6-(4-羟基苄基）-2,9-二 甲基-4, 7-二氧代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-8-(异喹啉-5-基甲基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧 代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-8- ((5-氯噻吩并[3, 2-b]吡啶-3-基）甲基）-6- (4-羟基苄 基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹喔啉-5-基甲 基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺，和 (6S，9S) -6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基）-N-(噻 吩-2-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺。
[0021] 这些化合物在过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩病）的预防 和/或治疗中是特别有用的。
[0022] 在最优选的实施方案中，所述化合物是： 4- (((6S，9S，9aS) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲 基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸二氢盐（化合物A)， 或 (6S，9S，9aS) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基 甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺（化合物C)。
[0023] 这些化合物在过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩病）的预防 和/或治疗中是特别有用的。
[0024] "0-连环蛋白抑制剂"是可以减小或阻止0-连环蛋白活性的物质。0-连环蛋 白活性包括易位至细胞核、结合TCF (T细胞因子）转录因子和共活化TCF转录因子诱导的 TCF靶基因的转录。" 0-连环蛋白抑制剂"还可以干扰CBP和0-连环蛋白的相互作用。 因而，0 _连环蛋白抑制剂会抑制或减小CBP/ 0 -连环蛋白信号传递途径的CBP/ 0 -连环 蛋白信号传递和活性，包括一个或多个下游信号传递事件的减小。
[0025] 本文中公开了用于治疗过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩 病）的a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂化合物。
[0026] 疾病 "过度增殖性"疾病或病症的特征在于过度的或不希望的细胞增殖。
[0027] "癌前的"疾病或病症的特征在于与进展至肿瘤或癌性状态有关的细胞发育异常 和改变的细胞生长。
[0028] "治疗"表示尝试改变被治疗的个体或细胞的病程的临床干预，并且可以在临床病 理学过程期间进行。治疗的疗效包括、但不限于，预防疾病的复发、减轻症状、减少疾病的任 何直接或间接病理后果、降低疾病进展的速度、改善或减轻疾病状态、以及减轻或改善的预 后。
[0029] 本文中使用的术语"治疗有效量"和"有效量"互换使用，表示足以产生以下结果 的本发明的组合物的量：预防过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩病）或 其一种或多种症状的发展或发作，增强或改善另一种疗法的一种或多种作用，和/或改善 过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩病)的一种或多种症状。对于遭受光 化性角化病的对象而言，优选的治疗有效量是有效地减轻角化病的症状(诸如减轻皮肤病 变的存在或形成)的量。对于遭受银肩病的对象而言，优选的治疗有效量是有效地减轻银肩 病的症状(诸如减轻皮肤斑块的存在或形成）的量。
[0030] 可以将治疗有效量以足以减轻、改善、稳定、逆转或减缓疾病的进展或以其它方式 减少疾病的病理后果、或减少疾病的症状的一个或多个剂量施用给患者。改善或减少不需 要是永久的，但是可以持续至少1小时、至少1天或至少1周或更久的一段时间。有效量通 常由医师基于个例确定，并且是在本领域技术人员的技术范围内。当确定适当剂量以达到 有效量时，通常考虑几种因素。这些因素包括患者的年龄、性别和重量，要治疗的病症，病症 的严重程度，以及施用途径，剂型和方案和所期望的结果。
[0031] 本文中使用的术语"对象"和"患者"互换使用，且表示动物，优选哺乳动物诸如非 灵长类动物（例如，牛、猪、马、猫、狗、大鼠等）和灵长类动物（例如，猴和人），且最优选人。
[0032] 本文描述的a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂可用于预防或治疗疾病。具体地， 本公开内容提供了治疗处于过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩病）的 风险中（或对其易感）的对象的预防和治疗方法。因此，本发明的方法提供了通过给有此 需要的对象施用有效量的a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂来预防和/或治疗对象中的 这些病症。例如，在改善过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩病）的一个 或多个因素的努力中，可以给对象施用a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂。
[0033] 本文中使用的"光化性角化病"表示以增厚的皮肤病变的发展为特征的皮肤病症。 当皮肤持续地暴露于阳光并且厚的鳞状或有痂区域出现时，发生这些病变的进行性发展。 鳞状或有痂部分是干燥的和粗糙的。病变作为扁平的鳞状区域出现，并且在以后生长成坚 硬的疣样区域。未治疗的病变具有最高达20%的进展成鳞状细胞癌的风险。施用免疫抑制 药物的人，诸如器官移植患者，更可能发展导致皮肤癌的光化性角化病。
[0034]本文中使用的"银肩病"表示影响皮肤从而导致皮肤细胞的过度增殖的过度增殖 性疾病。取决于爆发的严重程度和位置，个体可能经历显著的身体不适和某种失能。存在 5类银肩病：斑块型、滴型、皮褶型、脓疱型和红皮病型。
[0035] 在斑块型银肩病中，皮肤快速地积累在局部部位，这导致皮肤的银白色外观。斑块 经常出现在肘和膝的皮肤上，但是可以影响任何区域，包括头皮、手掌和脚底和生殖器。这 是银肩病的最常见形式。
[0036] 滴型银肩病的特征在于众多小型鳞状红色或粉色泪珠形病变。银肩病的这些众多 斑点出现在身体的较大区域上，主要是躯干，但是也包括肢体和头皮。
[0037] 皮褶型银肩病作为皮肤的光滑发炎斑块出现。它出现在皮褶中，特别是在大腿和 腹股沟之间、腋窝、在超重的腹部下面和在乳房下面。它被摩擦和汗液加重，并且造成皮肤 易感真菌感染。
[0038]脓疱型银肩病作为被非传染性脓汁填充的隆起肿块（脓疱）而出现。在脓疱下面 和周围的皮肤是红色的和触痛的。脓疱型银肩病通常可以局限于手和脚（掌跖脓疱病），或 与在身体的任何部位上随机出现的泛发斑块一起遍及全身。
[0039] 红皮病型银肩病涉及在身体表面的大部分上的泛发性皮肤炎症和表皮剥脱。它可 能伴有严重的瘙痒、肿胀和疼痛。它经常是不稳定的斑块型银肩病恶化的结果，尤其是在突 然停止全身疗法后。该形式的银肩病可以是致命的，因为极端的炎症和表皮剥脱会破坏身 体的调节温度的能力和皮肤的屏障功能。
[0040] 本发明提供了通过施用e-连环蛋白抑制剂来治疗过度增殖性和癌前皮肤病症， 包括光化性角化病和银肩病。本发明还包括这样的方法：其中在联合治疗中施用e-连环 蛋白抑制剂化合物。也就是说，所述化合物可以与其它药剂结合地、但是彼此单独地使用， 所述其它药剂可用于治疗过度增殖性和癌前皮肤病症(包括光化性角化病和银肩病)。在这 些组合方法中，所述化合物通常与其它药剂结合地以每天1-100 mg/kg体重的每日剂量施 用。所述其它药剂通常以治疗上使用的量施用。但是，具体给药方案将由医师使用合理的 医学判断来确定。
[0041] 治疗光化性角化病表示施用本文描述的化合物或组合来治疗遭受光化性角化病 的对象。治疗光化性角化病的一种结果是，减少多余的结缔组织的形成。治疗光化性角化 病的另一种结果是，减少或阻止皮肤病变的发展。治疗光化性角化病的再一种结果是，阻止 或抑制皮肤癌的发展。
[0042] 治疗银肩病表示施用本文描述的化合物或组合来治疗遭受银肩病的对象。治疗银 肩病的一种结果是，减少皮肤斑块的形成。治疗银肩病的另一种结果是，减少或阻止皮肤瘙 痒和/或片落。治疗银肩病的再一种结果是，减轻银肩病相关的炎症。
[0043] 可以将本文描述的a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂掺入药物组合物中，用于单 独地或组合地施用给对象以治疗或预防本文描述的障碍。这样的组合物通常包括活性剂和 药学上可接受的载体。本文中使用的术语"药学上可接受的载体"包括与药物施用相容的 盐水、溶剂、分散介质、包衣剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。还可将补充 性活性化合物掺入所述组合物中。
[0044] 任何合适的施用途径可以用于给哺乳动物(特别是人）提供有效剂量的本文描述 的化合物。可以使用例如口服、直肠、局部、胃肠外、眼、肺、鼻途径等。剂型包括片剂、糖锭、 分散体、混悬液、溶液、胶囊剂、乳膏剂、软膏剂、气雾剂等。
[0045] 采用的活性成分的有效剂量可以随采用的特定化合物、施用模式、要治疗的病症 和要治疗的病症的严重程度而变化。这样的剂量可以由本领域技术人员容易地确定。
[0046] 当治疗或控制光化性角化病、银肩病和/或本文描述的化合物适用的其它病症 时，当以约0. 01毫克至约100毫克/千克动物体重的日剂量施用本文所述化合物(优选地 作为单个每日剂量或以分份剂量每天2-6次给予，或以缓释形式给予）时，会得到通常令人 满意的结果 。对于大多数大型哺乳动物，总日剂量是约1.0毫克至约1000毫克。在70 kg 成年人的情况下，总日剂量通常是约1毫克至约500毫克。对于特别有效的化合物，成年人 的剂量可以低至0.1 mg。在某些情况下，每日剂量可以高至1克。可以在该范围内或甚至 在该范围以外调节剂量方案，以提供最佳治疗应答。
[0047] 经常使用片剂或胶囊剂进行口服施用。片剂和胶囊剂中的剂量的例子是0.1 mg、 0? 25 mg、0. 5 mg、I mg、2 mg、5 mg、10 mg、15 mg、20 mg、25 mg、30 mg、40 mg、50 mg、100 mg、 200 mg、250 mg、300 mg、400 mg、500 mg和750 mg。其它口服形式也可以具有相同或类似 的剂量。
[0048] 本文还描述了药物组合物，其包含本文描述的化合物和药学上可接受的载体。本 文描述的药物组合物包含作为活性成分的本文描述的化合物或药学上可接受的盐，以及药 学上可接受的载体和任选的其它治疗成分。如果施用前药，则药物组合物还可以包含前药 或其药学上可接受的盐。
[0049] 所述组合物可以适合用于口服的、直肠的、局部的、胃肠外的（包括皮下的、肌肉 内的和静脉内的）、眼的（眼科的）、肺的（经鼻的或经颊的吸入）或经鼻施用，尽管在任何 给定情况下最合适的途径取决于所治疗的病症的性质和严重程度以及活性成分的性质。它 们可以方便地存在于单位剂型中，并且可以利用药学领域众所周知的任何方法制备。
[0050] 在实际应用中，根据常规药物配制技术，可以将本文所述化合物作为活性成分以 紧密地混合的形式与药用载体组合在一起。载体可以采用多种形式，这取决于对于施用而 言所期望的制剂的形式，例如，口服或胃肠外（包括静脉内）施用。在将组合物制备为口服 剂型时，可以使用任何常见的药学介质，例如，水、二醇类、油、醇、矫味剂、防腐剂、着色剂等 (在口服液体制剂(例如，混悬液、酏剂和溶液）的情况下）；或可以使用载体诸如淀粉、糖、 微晶纤维素、稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等（在口服固体制剂(例如，散剂、硬 和软胶囊剂和片剂）的情况下），其中固体口服制剂比液体制剂优选。
[0051] 因为它们容易施用，片剂和胶囊剂代表最有利的口服剂量单位形式，在该情况下， 采用固体药用载体。如果需要的话，可以利用标准的水性或非水性技术包被片剂。这样的 组合物和制剂应该含有至少0. 1%的活性化合物。活性化合物在这些组合物中的百分比当 然可以改变，并且可以方便地在所述单位的重量的大约2%至大约60%之间。活性化合物在 这种治疗上有用的组合物中的量是将获得有效剂量的量。还可以鼻内地施用活性化合物， 作为例如液体滴剂或喷雾剂。
[0052] 片剂、丸剂、胶囊剂等还可以含有：粘合剂诸如黄蓍树胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明 胶；赋形剂诸如磷酸二钙；崩解剂诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸；润滑剂诸如硬脂酸 镁；和甜味剂诸如蔗糖、乳糖或糖精。当剂量单位形式是胶囊时，除了上述类型的物质之外， 它还可以含有液体载体诸如脂肪油。
[0053] 各种其它物质可以作为包衣存在，或用于改变剂量单位的物理形式。例如，可以用 紫胶、糖或两者包被片剂。除了活性成分之外，糖浆剂或酏剂还可以含有：作为甜味剂的蔗 糖，作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯，染料和调味剂例如樱桃或橙味 调味剂。
[0054] 适合于透皮施用的药物制剂可以呈现为不连续的贴剂，其意图在延长的时间段内 保持与接受者的表皮的紧密接触。例如，通过如在Tfes. 3(6):318 (1986)中一般 地描述的离子透入法，可以从贴剂递送活性成分。
[0055] 可以将适合于局部施用的药物制剂配制为软膏剂、乳膏剂、混悬液、洗剂、散剂、溶 液、糊剂、凝胶、喷雾剂、气雾剂、或油。就治疗眼或其它外部组织(例如嘴和皮肤)而言，所述 制剂优选地作为局部软膏剂或乳膏剂施用。当以软膏剂形式配制时，可以与石蜡族的或水 可混溶的软膏基质一起使用所述活性成分。可替换地，可以将所述活性成分与水包油乳膏 剂基质或油包水基质一起配制在乳膏剂中。
[0056] 也可以胃肠外地施用本文描述的化合物。可以在水中制备这些活性化合物的溶 液或混悬液，适当地与表面活性剂或表面活性剂的混合物(诸如羟丙基纤维素、聚山梨酯80 以及中链和长链脂肪酸的甘油单酯和甘油二酯)混合。还可以在丙三醇、液体聚乙二醇和其 在油中的混合物中制备分散体。在贮存和使用的普通条件下，这些制品含有防腐剂以阻止 微生物的生长。
[0057] 适合于注射使用的药物形式包括无菌水溶液或分散体，和用于即时制备无菌注射 溶液或分散体的无菌粉末。在所有情况下，所述形式必须是无菌的，并且必须是具有容易注 射性能的流体。它在制备和贮存条件下必须是稳定的，并且必须被保存以免于微生物(诸如 细菌和真菌)的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇（例如 丙三醇、丙二醇和液体聚乙二醇）、其合适的混合物和植物油。
[0058] 下述非限制性实施例进一步例证了本公开内容。
[0059] 实施例
[0060] 该研宄的目的是，探宄试验化合物即化合物C对基于人细胞的银肩病组织模型的 结构和基因表达的影响。化合物C是（6S，9S，9aS)-N-苄基-6-(4-羟基苄基）-2, 9-二甲 基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰 胺，即一种a螺旋模拟的0-连环蛋白抑制剂化合物。
[0061]银肩病组织模型（S0R-300-FT; MatTek Corp.，Ashland, MA)是一种高度分化 的体分银肩病组织，其包含正常的、人衍生的角质形成细胞和银肩病成纤维细胞，所述细 胞已经经过培养以形成高度分化的银肩病组织模型。在形态学上，银肩病组织具有均匀 的厚度，且非常类似于天然银肩病组织，因为它表达增加水平的Ki67+细胞（增殖过度） 和银肩病相关的蛋白诸如银肩素、弹力素和人防卫素-2(111^)-2)〇^7；/ ><3从〇乂 173:815-23，2008)。在多微孔膜（孔径=0.4Mm)细胞培养插入物上培养S0R-300-FT组 织（表面积=0.6 cm2)。所有银肩病组织生长在空气液体界面（ALI)处，其中顶端组织层 暴露于空气。ALI的应用会诱导组织达到皮肤样分化和允许试验材料的直接局部施用（类 似于体片暴露）。
[0062] 使用在培养基中的2. 5、0. 25和0. 025l^g/ml的卡泊三醇作为阳性对照。使用超纯 水作为媒介物对照。将试验物化合物C施加于组织的基底外侧（通过加入培养基中）和顶 端（50 yl)侧。使用苏木精-曙红染色的组织学载玻片，检查每3种浓度的试验物对组织 结构的影响。对于基因分析，使用标准的RNA分离方案（MatTek Corporation)，分离RNA。 将分离的RNA定量，并检查分离的RNA的完整性。进行定量RT-PCR以确定5种银肩病相关 基因（弹力素、HBD-2、银肩素、p63和Ki67)的表达水平。
[0063] 将S0R-300-FT ?组织转移至含有0. 9 ml预温热的测定培养基的6-孔板，并平衡 至标准培养条件（37°C，5%C02) 1小时。平衡1小时以后，如下给组织重新供给新鲜培养基： 1)对于24小时时间点，给组织供给0. 9 ml培养基，和2)对于>24小时的时间点，通过将细 胞培养插入物放在洗绦器（Part # EPI-WSHR, MatTek Corporation)的顶上，给组织供给 5 ml培养基。接着，将50W试验物局部地施加于银肩病组织（n=3)，并将试验物以100剛、 30剛和5剛的浓度加入培养基中。在48和72小时的时间：a)用300-400ML PBS局部地冲 洗组织3次，b)将含有组织的插入物用无菌镊子夹紧，并通过将所述插入物浸渍在PBS中 和从插入物倾析培养基来轻轻冲洗试验物，和c)在冲洗和倾析以后立即将新鲜试验物重 新施加于组织（50ML局部地）。在t = 48小时（2次重复施用）和t= 96小时（4次施用） 进行分析。
[0064] 在t=48 (2次重复暴露）和t=96小时（4次暴露）以后，将N=3组织/处理用于 RNA分离进行生物标志物鉴别（基因表达水平）。在t=48和t=96小时以后，在10%福尔马 林中固定N=I组织/处理用于组织学分析。
[0065] RNA分离：按照MatTek的标准化的RNA分离方案，从组织分离RNA。使用Experion 系统（Bio-Rad)，评估RNA的浓度、完整性和纯度。
[0066]qPCR:使用 RT2 First Strand Kit (Qiagen,目录号 330401)，产生 cDNA。使用 RT2 SYBR Green qPCR Mastermix (Qiagen,目录号 330502)和 Qiagen RT2 引物，测量相 对基因表达。使用Bio-Rad CFX软件进行分析。
[0067]试骀药物对组织结构的影晌.进行组织学样品的显微观察，并评估处理对组织形 态学(诸如顶端表面破坏、结构变化和异常组织染色）的影响。
[0068] 试验物化合物C，100剛：在2次或4次重复暴露于试验物以后组织组织学的显微 观察显示了对分化细胞层（上基层至顶层）的结构损伤。
[0069] 试验物化合物C，30刚：在2次重复暴露于试验物以后组织组织学的显微观察显 示了在48小时时的微小结构损伤。在4次暴露于试验物以后96小时，上基层和顶层脱落， 剩下仍然附着于组织的真皮成分的基底细胞。该脱落提示银肩病性斑块的除去。
[0070] 试验物化合物C，5剛：在2次重复暴露以后组织组织学的显微观察显示了对组织 结构的微小影响。但是，在4次重复暴露于试验物以后，组织的副基底-顶层脱落。该脱落 提示银肩病性斑块的除去。另外，基底细胞是完整的，且组织再生正在发生。
[0071] 卡泊三醇-阳性对照：在2次或4次重复暴露于不同浓度的阳性对照以后组织组 织学的显微观察显示了结构损伤的微小至无证据或对组织形态学的显著改变。
[0072] 培养基-阴性对照：在整个实验中观察到正常组织组织学。
[0073]试骀药物对牛物标iP,基闵的影晌.进行qPCR以定量5种银肩病相关的基因生物 标志物的相对基因表达水平：1)人0防卫素2 (HBD-2)，2)银肩素，3)弹力素和4) p63， 和 5) Ki67。
[0074] 试验物化合物C，100剛：在历时96小时暴露时段的重复（4X)施用以后，100剛浓 度减量调节（彡2倍）弹力素、HBD-2和银肩素的表达（图1B，2B，3B)。注：在2次重复 施用以后，100剛浓度的试验物显示P63基因的轻微减量调节（1.6倍）（图5A)。对于该 浓度的试验物，没有注意到Ki67基因表达的减量调节（图4A-B ;表1和2)。
[0075] 试验物化合物C，30剛：在历时96小时暴露时段的重复（4X)施用以后，30剛浓度 减量调节（彡2倍）弹力素、HBD-2和银肩素的表达（图1B，2B，3B)。另外，该浓度也显 示在48小时时弹力素基因表达水平的2. 2倍下降（图1A)。注：在多次重复施用以后，30剛 浓度的化合物C试验物没有显示p63和Ki67基因的减量调节（2X或4X;图4A-B和5A-B; 表1和2)。
[0076] 试验物化合物C，5剛：在历时96小时暴露时间的4次重复施用以后，5剛浓度减量 调节（彡2倍）弹力素、HBD-2和银肩素的表达（图1B，2B，3B)。注：在多次重复施用以 后，5剛浓度的化合物C试验物没有显示p63和Ki67基因的减量调节（2X或4X;图4A-B和 5A-B ;表 1 和 2)。
[0077] 卡泊三醇（阳性对照）：在2次重复施用以后，2. 5 ug/ml浓度的药物减量调节 (多2倍）所有试验的银肩病相关的基因（弹力素、HBD-2和银肩素、p63和Ki 67)的表达 (表1)。4次重复施用以后，注意到弹力素、HBD-2和银肩素基因的显著减少（表2) ;p63和 Ki67基因分别显示1. 7和1. 6倍下降（表2)。此外，在历时48小时暴露时段的2次施用以 后，0. 25 ug/ml浓度的卡泊三醇也显示HBD2和p63基因表达水平的减量调节（彡2倍）。 在4次重复施用以后，最低浓度的卡泊三醇（0.025 ug/ml)显示弹力素、HBD-2和银肩素的 表达水平的减量调节（多2倍），但是在2次重复施用以后却没有。
[0078] 表1 :在银肩病组织模型上重复（在48小时时2次）施用化合物C和卡泊三醇以 后基因表达水平的倍数变化。用阴影标记减量调节的基因表达水平（>2倍）。
[0079] 表2 :在银肩病组织模型中重复（在96小时时4次）施用化合物C和卡泊三醇以 后基因表达水平的倍数变化。用阴影标记减量调节的基因表达水平（>2倍）。
[0080] 用化合物C对组织的处理显示了银肩病相关的基因标志物弹力素、HBD-2和银肩 素的减量调节。另外，用化合物C的处理导致顶端层的脱落，这与体内银肩病性斑块的除去 和组织再生有关。因此，化合物C (本发明的一种示例性的a螺旋模拟的e-连环蛋白抑 制剂化合物）可有效地治疗银肩病。
【主权项】
1. 用于治疗过度增殖性或癌前皮肤病症的α螺旋模拟的β-连环蛋白抑制剂化合物 或其药学上可接受的盐，其具有下式（I): 其中：A 是 _CHR7_， 其中R7是氢、任选地被取代的烷基、任选地被取代的烯基、任选地被取代的炔基、任选 地被取代的芳基烷基、任选地被取代的杂芳基烷基、任选地被取代的环烷基烷基、任选地被 取代的杂环烷基烷基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、任选地被取代的环烷 基或任选地被取代的杂环烷基； G 是-NH_、_NR6_、_0 _、_CHR6_ 或-C (R6) 2_， 其中R6独立地选自任选地被取代的烷基、任选地被取代的烯基和任选地被取代的炔 基； R1是任选地被取代的芳基烷基、任选地被取代的杂芳基烷基、任选地被取代的环烷基 烷基或任选地被取代的杂环烷基烷基； R2是-W 21-W22-Rb-R20， 其中W21是-(CO)-或-(SO 2)_; W22是键、-0-、-NH-或任选地被取代的低级亚烷基；Rb 是键或任选地被取代的低级亚烷基；且R2tl是任选地被取代的烷基、任选地被取代的烯基、 任选地被取代的炔基、任选地被取代的芳基、任选地被取代的杂芳基、任选地被取代的环烷 基或任选地被取代的杂环烷基；且 R3是任选地被取代的烷基、任选地被取代的烯基或任选地被取代的炔基。2. 权利要求1所述的化合物，所述化合物选自： (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-8-(萘-1-基甲基）-4, 7-二氧代八 氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -2-烯丙基-N-苄基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-8-(萘-1-基甲基）-4, 7-二 氧代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-8-(萘-1-基甲基）-4, 7-二氧代六氢吡 嘆并[2, 1-c] [1，2, 4]噁二嘆-I (6H)-甲酰胺， (6S，9S) -8- ((2-氨基苯并[d]噻唑-4-基）甲基）-N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二 甲基-4, 7-二氧代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基） 八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -2-烯丙基-N-苄基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基 甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， 4- (((6S，9S) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基） 八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸二氢盐， 4- (((6S，9S) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-8-(萘-1-基甲基）-4, 7-二氧代八 氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸二氢盐， 4- (((6S，9S) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基） 八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸钠， 4- (((6S，9S) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(萘-8-基甲基）八 氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸钠， (6S，9S) -2-烯丙基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-4, 7-二氧代-N- ((R) -1-苯基乙 基）-8-(喹啉-8-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, l-c][l，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -2-烯丙基-6- (4-羟基苄基）-9-甲基-4, 7-二氧代-N- ((S) -1-苯基乙 基）-8-(喹啉-8-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, l-c][l，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基-2, 6-二甲基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹 啉-8-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -8-(苯并[b]噻吩-3-基甲基）-N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲 基-4, 7-二氧代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S)-8-(苯并[c] [1，2,5]噻二唑-4-基甲基）-N-苄基-6-(4-羟基苄基）-2,9-二 甲基-4, 7-二氧代八氢-IH-吡嗪并[2, 1-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-8-(异喹啉-5-基甲基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧 代八氢-IH-吡嗪并[2, Ι-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-8- ((5-氯噻吩并[3, 2-b]吡啶-3-基）甲基）-6- (4-羟基苄 基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代八氢-IH-吡嗪并[2, Ι-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹喔啉-5-基甲 基）八氢-IH-吡嗪并[2, Ι-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺，和 (6S，9S) -6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基）-N-(噻 吩-2-基甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, Ι-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺。3. 权利要求1所述的化合物，所述化合物选自： 4- (((6S，9S，9aS) -1-(苄基氨甲酰基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲 基）八氢-IH-吡嗪并[2, Ι-c] [1，2, 4]三嗪-6-基）甲基）苯基磷酸二氢盐，和 (6S，9S，9aS) -N-苄基-6- (4-羟基苄基）-2, 9-二甲基-4, 7-二氧代-8-(喹啉-8-基 甲基）八氢-IH-吡嗪并[2, Ι-c] [1，2, 4]三嗪-1-甲酰胺。4. 一种药物组合物，其包含权利要求1、2或3所述的化合物。5. -种用于治疗过度增殖性或癌前皮肤病症的方法，所述方法包括：给有此需要的患 者施用有效量的权利要求1、2或3所述的化合物。6. 权利要求5所述的方法，其中所述皮肤病症是光化性角化病。7. 权利要求5所述的方法，其中所述皮肤病症是银肩病。8. -种用于在光化性角化病以后抑制皮肤癌的发展的方法，所述方法包括：给有此需 要的患者施用有效量的权利要求1、2或3所述的化合物。
【专利摘要】本公开内容一般地涉及α-螺旋模拟物结构，且具体地涉及是β-连环蛋白的抑制剂的α-螺旋模拟物结构。本公开内容也涉及在过度增殖性和癌前皮肤病症（包括光化性角化病和银屑病）的治疗中的应用，和包含这样的α螺旋模拟的β-连环蛋白抑制剂的药物组合物。
【IPC分类】A61P35/00, A61K31/5365, A61P17/06
【公开号】CN104902901
【申请号】CN201380054452
【发明人】小路弘行, 小田上刚直
【申请人】株式会社棱镜制药
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2013年10月21日
【公告号】CA2889010A1, EP2908822A1, US20150283145, WO2014061826A1
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