合生元组合物及其用图
合生元组合物及其用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种用于调节免疫系统、特别是在肠道内进行调节的合生元组合物。
【背景技术】
[0002] 在本申请说明书全文中关于现有技术的任何讨论绝不应被视为承认这样的现有 技术是众所周知的，或属于该领域内公知常识的范畴。
[0003] 阿糖基木寡糖（AXOS)为益生元成分。几位作者已经表示AXOS可以改善消化系 统健康（Broekaert 等，2011 ;Francois 等，2012 ;Grootaert 等，2009)。WO 2009/040445 A2中提到来源于阿拉伯糖基木聚糖的寡糖在预防和治疗细菌性肠胃炎导致的动物或人的 胃肠道感染中的用途。虽然AXOS相关产品已被发现可以提高免疫活性水平（Ogawa等， 2005)，并且可以改善炎症性结肠炎（Komiyama等，2011)，但是AXOS对于免疫功能的影响， 除了一项动物模型研宄表明AXOS对于沙门氏菌的定植有抑制作用外，仍然存在大量未知 性（Eeckhaut 等，2008)。
[0004] WO 2010/066012 A2描述了富含阿拉伯糖基木聚糖-寡糖的营养组合物，并且还 包括水不可提取的阿拉伯木聚糖或水溶性阿拉伯木聚糖其中之一或两者皆有，优选两者皆 有。
[0005] WO 2009/117790 A2描述了（阿拉伯）糖基木聚糖的制备方法。WO 2010/088744 A2描述了用于提取和分离溶解的阿拉伯糖基木聚糖解聚产品，例如水溶性阿拉伯糖基木聚 糖、阿拉伯糖基木聚糖-寡糖、木糖和阿拉伯糖的方法。
[0006] Crittenden等人（2001)提出了可以用来整合互补性益生菌和益生成分用于新型 合生元性功能食品的体外筛选方法。他们使用这种方法选择益生性双歧杆菌属菌株以补足 合生元性酸奶中的抗酶解淀粉（Hi-maize?)。
[0007] WO 2008/071930 Al公开了一种组合物，该组合物包含一或多个活乳酸双歧杆菌 属菌株，还包含聚合度为2 - 100的木寡糖的糖类成分。
[0008] WO 2006/002495 Al公开了包括阿拉伯糖基木聚糖的食品或饮品，例如AXOS和双 歧杆菌或乳酸杆菌。
[0009] WO 2010/071421 A公开了含有动物双歧杆菌乳酸菌（Bifidobacterium animalis lactis)或乳酸杆菌和低聚半乳糖的食品或营养组合物，例如阿拉伯糖基木聚糖，该组合物 用于肺心病的治疗。
【发明内容】
[0010] 本发明人发现以下成分的组合产品对于调节结肠内的免疫系统具有协同效应： (i)包含双歧杆菌属菌株的益生菌微生物，和（ii)包含阿糖基木寡糖的寡糖成分。结肠内 免疫系统的调节可包括免疫应答的调节和趋化因子分泌的调节，并且，所述调节与结肠内 病原体感染的抑制和/或治疗相关。
[0011] 因此，需要提供含有合生元组合物的食品，以用于病原体感染的抑制和/或治疗， 尤其是在消化道内的感染，作为现有技术的改善方法，或者至少是替代方法。
[0012] 为此，本发明的一个实施方案提供了用于抑制和/或治疗病原体感染的合生元组 合物，尤其是在消化道内的感染，其中所述组合物包含：（i)包含双歧杆菌属菌株的益生菌 微生物，和（ii)包含阿糖基木寡糖的寡糖成分。在一个实施方案中，所述病原体感染为沙 门氏菌感染。
[0013] 本发明的另一实施方案提供了合生元组合物，该组合物包含：（i)包含双歧杆菌 属菌株的益生菌微生物，和（ii)包含阿糖基木寡糖的寡糖成分。
[0014] 本发明的另一实施方案提供了含有所述合生元组合物的食品组合物。
[0015] 在本发明的另一实施方案中，所述食品组合物用于抑制和/或治疗病原体感染， 尤其是在消化道内的感染。
[0016] 在本发明的一个实施方案中，食品组合物含有每日量为IOOmg-IOg阿糖基木寡 糖，和/或每克食品组合物IO6 - 1012Cfu的双歧杆菌。
[0017] 在本发明的实施方案中，所述双歧杆菌属菌株可选自长双歧杆菌 (Bifidobacterium Iongum)、乳酸双歧杆菌（Bifidobacterium Iactis)、动物双歧杆菌 (Bifidobacterium animalis)、短双歧杆菌（Bifidobacterium breve)、婴儿双歧杆菌 (Bifidobacterium infantis)、青春双歧杆菌（Bifidobacterium adolescentis)及其混合 物及其混合物。在本发明实施方案中，所述双歧杆菌属菌株可选自长双歧杆菌NCC 3001、长 双歧杆菌NCC 2705、短双歧杆菌NCC 2950、乳酸双歧杆菌NCC 2818及其混合物。所述双歧 杆菌属菌株优选为乳酸双歧杆菌属菌株。所述益生菌微生物优选基本由乳酸双歧杆菌NCC 2818组成。
[0018] 在本发明的实施方案中，所述阿糖基木寡糖（AXOS)具有3 - 8的平均聚合度 (DP)，且阿拉伯糖与木糖的比例（A/X比）为0. 18 - 0.30。在本发明的实施方案中，阿魏酸 残基与所述阿糖基木寡糖（AXOS)通过酯键连接，优选通过阿拉伯糖残基连接。在本发明的 实施方案中，所述寡糖成分还包括0 -葡聚糖、木寡糖、木二糖及其混合物。
[0019] 对本领域技术人员而言，本发明的这些和其他方面、特征和优点将从本发明实施 方案的详述及附图变得更显而易见。
【附图说明】
[0020] 图1显示，在Caco-2/PBMC(外周血单核细胞）共培养系统中，lOμg/ml AXOS在 24小时内对于趋化因子分泌的作用（实施例1)。
[0021] 图2显示，在Caco-2/PBMC共培养系统中，10 y g/ml AXOS与107CFU/ml乳酸双歧 杆菌NCC 2818在24小时内对趋化因子分泌的作用（实施例1)。
[0022] 图3、4和5显示，分别接受饮食PRE (图3)、PRO (图4)和SYN(Fig 5)时，在实施 例2的实验装置中，短链脂肪酸（SCFA)在升结肠（AC)、横结肠（TC)和降结肠（DC)中浓度 的演进。三角形：丁酸盐；正方形：丙酸盐；菱形：乙酸盐；十字形：总SCFA。CU C2 :对照 的第1和2周。Tl、T2、T3 :试验的第1、2和3周。PRE :AX0S 2. 5g/天；PRO :乳双歧杆菌 2. 8 X IO9CFU 每天；SYN :AX0S 2. 5g/ 天和 2. 8 X IO9CFU 每天。
[0023]图6、7和8显示，分别接受饮食PRE(图6)、PR0(图7)和SYN(图8)时，在经过如 实施例2所述的试验过程中，NaOH(N)和HCl (H)在升结肠（AC)、横结肠（TC)和降结肠（DC) 中的消耗。PRE :AXOS2.5g/ 天；PRO :乳双歧杆菌2.8X IO9CFU 每天；SYN :AXOS2.5g/ 天和 2.8 X IO9CFU 每天。
[0024] 图9显示，分别接受PRE、PRO和SYN三种饮食时，在实施例2的实验装置中，通过 三周的试验时长，乳双歧杆菌16S在结肠隔间（升结肠AC、横结肠TC和降结肠DC)内累计 拷贝数。PRE :AX0S 2. 5g/ 天；PRO :乳双歧杆菌 2. 8X IO9CFU 每天；SYN :AX0S 2. 5g/ 天和 2. 8 X IO9CFU 每天。
[0025] 图10显示，分别接受PRE、PRO和SYN三种饮食时，在实施例2的实验装置中，通 过三周的试验时长，双歧杆菌群体在结肠隔间（升结肠AC、横结肠TC和降结肠DC)内相对 于对照周群体的累计总数。PRE :AX0S 2. 5g/天；PRO :乳双歧杆菌2. 8 X IO9CFU每天；SYN : AXOS 2. 5g/ 天和 2. 8 X IO9CFU 每天。
[0026] 图11和12显示，乳双歧杆菌（IO7CFUAiL)单独的、AX0S(100mg/mL)单独的以及乳 双歧杆菌（IO7CFUAiL)和AX0S(100mg/mL)联合对于沙门氏菌侵入的CaC〇2细胞的作用，所 用细胞为分化的Caco-2细胞（图11)以 及分化极化的Caco-2细胞（图12)(实施例4)。
[0027] 发明详述
[0028] 除另外清楚说明外，否则在本说明书全文中，与排他性或详尽性意思相反，词"包 含"、"含有"和"包括"等应当以包含性意思，也就是说，以"包含，但不限于"的意思解释。
[0029] 除另外说明外，本说明书中所用的百分比指重量百分数。
[0030] 除另外定义外，所有技术和科学术语表示或应当表示本发明领域普通技术人员一 般理解的意思。
[0031] 术语"益生菌"指当给予适量时能为寄主带来健康益处的活的微生物（FA0/WH0指 南）。如上所述，益生菌微生物优选选自如下的双歧杆菌属菌株：长双歧杆菌菌株、乳酸双 歧杆菌菌株、动物双歧杆菌菌株、短双歧杆菌菌株、婴儿双歧杆菌菌株、青春双歧杆菌菌株 及其混合物。例如，所述双歧杆菌属菌株选自长双歧杆菌NCC 3001、长双歧杆菌NCC 2705、 短双歧杆菌NCC 2950、乳酸双歧杆菌NCC 2818及其混合物。
[0032] 以下菌株按照布达佩斯条约在法国微生物保藏中心（Collection Nationale de Cultures de Micro-Organismes) (CNCM,巴斯德研宄所，28rue du Dr Roux, 75724 巴黎 Cedex 15，法国）保藏：
[0034] 长双歧杆菌NCC 3001由Morinaga在美国典型培养物保藏中心（American Type Culture Collection) (ATCC)保藏，保藏号为ATCC BAA-999。所述菌株能公开得到，例如如 Mercenier 等（2006)的摘要 PG3-11 所示。
[0035] 益生菌微生物可作为活的益生菌提供，或者以灭活的状态提供。灭活的益生菌微 生物如 WO 2010/130659、WO 2010/130660 或者 WO 2011/000621 中所述。
[0036] "益生元"为通常为寡糖的化合物，其无法被上肠胃道中的酶消化，但是可以被结 肠或大肠内某些类型的细菌有选择地发酵。
[0037] "合生元"是益生菌（probiotic)成分和益生元（prebiotic)成分的协同组合。当 两种处理方法、成分或组分的联合作用与每种处理方法、成分或组分分别单独使用时的简 单相加效果不同时，则为协同作用。通常，联合作用比每种治疗方法、成分或组分分别使用 时的相加效果要强。
[0038] "阿糖基木寡糖"或"AX0S"是由通过(6-(1-4)糖苷键（osidic linkage)连接在 一起的木糖残基主链组成的寡糖，其中至少一个木糖残基被一或多个阿拉伯糖在木糖残基 的0-2位、0-3位或0-2和0-3两位上置换。在一个实施方案中，AXOS具有2 - 50的平均 聚合度（DP)，优选2 - 15,甚至更优选为2 - 8。AXOS的较低DP值为2、3或4。AXOS的较 高DP值可高至50、40、30、20、15、10、9、8、7或6。在一个实施方案中，AXOS中阿拉伯糖与木 糖的比例（A/X比），低至0. 18或0. 19,高至0. 30、0. 27、0. 24或0. 21，这一比例也称作平均 阿拉伯糖置换度。在一个实施方案中，AXOS的平均DP为3和8,其A/X比为0. 18 - 0.30。 上文提到的最小值和最大值可以组合。
[0039] 寡糖成分优选包括木寡糖（XOS)、AXOS和任选其它糖类的混合物，所述其它糖类 可存在于用作制备所述寡糖成分的原材料中。XOS为聚合度为2 - 9的木糖寡聚物。优选， 木二糖（DP为2的X0S，也称作X2)占寡糖成分干物质重量的15 % - 25%。优选，DP为2 - 9 (X2-9)的XOS占寡糖成分干物质重量的35% - 45%。优选，AXOS占寡糖成分干物质重量 的30 % - 40 %。在一个实施方案中，阿魏酸残基通过酯键与阿糖基木寡糖的阿拉伯糖残基 连接。
[0040] 优选，所述寡糖成分，特别是所述阿糖基木寡糖，源自谷类，优选选自小麦、稻米、 玉米、燕麦、大麦、高粱、黑麦。
[0041] 可将合生元组合物纳入食品组合物中，例如通过常规处理技术，将合生元组合物 成分相继地、一起地或作为预混料干混入食品组合物中。在一个实施方案中，此类食品组合 物含有每日量IOOmg-IOg的寡糖成分。在另一个实施方案中，此类食品组合物含有每g 食品组合物IO6-1012Cfu的双歧杆菌属菌株。在另一个实施方案中，此类食品组合物含有 每日量IOOmg-IOg的寡糖成分和每g食品组合物IO6-1012Cfu的双歧杆菌属菌株。
[0042] 所述食品任选添加选自以下的营养成分：矿物质、维生素、氨基酸、不饱和脂肪酸、 多元酚、植物留醇及其混合物。例如，食品组合物为婴儿用谷类产品、干燥谷类混合物、粥类 制品、早餐谷物制品、粉状膳食产品、谷物棒、粉状饮料、乳制品和宠物食品。
[0043] 优选，所述食品组合物可用于调节结肠免疫系统，例如通过调节免疫反应和趋化 因子分泌。所述调节作用可能与抑制和/或治疗病原体感染有关。
[0044] 合生元组合物以及含有此类合生元组合物的食品组合物可用于抑制和/或治 疗结肠中的病原体感染。在一个实施方案中，所述病原体为细菌病原体，例如弯曲杆菌 (Campylobacter)、沙门氏菌（Salmonellae)或志贺杆菌（Schigellae)。在另一个实施方案 中，所述病原体为沙门氏菌。上述细菌可为腹泻的病因。在一个实施方案中，合生元组合物 以及含有此类合生元组合物的食品组合物可用于抑制和/或治疗与结肠中弯曲杆菌、沙门 氏菌或志贺杆菌感染相关的腹泻，优选与结肠中沙门氏菌感染相关。 实施例
[0045] 实施例1 一合生元组合物的协同效应
[0046] Caco-2是源于人类结直肠腺癌的上皮细胞。Caco-2/PBMC共培养系统用作研宄外 源微生物群和肠道之间的相互作用的体外模型。我们采用此系统来探讨AXOS和乳双歧杆 菌NCC2818之间的潜在协同作用。Caco-2细胞购得自ATCC。新鲜制备的人类外周血单核 细胞（PBMC)来自于健康的捐献者。由Fugeia NV得到平均聚合度为3 - 8和阿拉伯糖与 木糖的比例（A/X)为0. 18 - 0. 30的AXOS。内部获得乳双歧杆菌NCC2818。处理结束后进 行样本采集24小时。
[0047] 通过在基底侧介质里的趋化因子水平对免疫反应进行评估。在Caco-2/PBMC系统 中，我们首先确定一个AXOS不调节趋化因子水平的浓度。然后，我们在这个浓度下将AXOS 和不同量的乳双歧杆菌NCC2818培养。于单独给予乳双歧杆菌的实验组相比，将高水平的 趋化因子认为是乳双歧杆菌和AXOS之间存在协同效应。
[0048] 1)选择用于评价的AXOS浓度。经过数个剂量的测试。采用中尺度（Mesoscale) 测量趋化因子水平。我们发现与无处理的对照相比，在10 U g/ml水平下，AXOS对于趋化因 子的分泌没有明显影响，如图1所示，相对趋化因子浓度被表示为平均值+标准误差（SEM : 平均值的标准误差）。白色条表示无处理对照组。黑色条表示IOu g/ml AXOS处理组。
[0049] 2)评价合生元组合物对于免疫反应的影响。24小时内在IOy g/ml AXOS存在或 不存在的情况下，用l〇7CFU/ml乳双歧杆菌NCC2818来处理Caca-2细胞。采用中尺度测量 趋化因子水平。如图2所示，趋化因子的相对值表示为平均值+标准误差，白色条表示单独 施用乳双歧杆菌NCC2818,黑色条表示乳双歧杆菌NCC2818和AXOS联合施用。相比于乳双 歧杆菌组，在乳双歧杆菌+AXOS组获得趋化因子水平的提高，特别是在诱集免疫细胞（特别 是中性粒细胞和单核细胞）趋向感染区中起重要作用的IL-8和MCP-I趋化因子。如上所 述，因为10 U g/ml AXOS不能影响趋化因子水平，所以表明在乳双歧杆菌和AXOS之间显示 了协同效应。
[0050] 双歧杆菌的协同组合，特别是含有乳双歧杆菌NCC2818和包括AXOS的寡糖组分， 可以调节趋化因子在结肠中的分泌。
[0051] 实施例2-体外动态结肠模型[0052] 在本实验中采用由ProDigest操作的体外动态结肠装置模型SHMEtm (人类肠道微 生物生态系统模拟器）。该装置包括各自代表消化道某个区室的连续反应器，其中控制不 同反应器中的接种物制剂、保留时间、pH条件、温度、设置、胃液、胰液和酸胆液，以尽可能接 近地模拟体内条件。例如，根据目标PH，通过添加氢氧化钠或氢氯酸溶液至相应的反应器 中，自动调整pH。反应器中的液体泵到下一个反应器中。装置中的最后三个反应器分别代 表升结肠、横结肠和降结肠（Possemiers等，2004)。第一天，向装置中接种1. 5岁的孩童奠 便。在接种物中未检测到乳双歧杆菌。使装置运行2周以稳定化（稳定时期）。接着向装 置中引入2周的标准饮食（对照时期），然后引入3周的试验饮食（试验时期）。然后，采 用标准饮食进行2周的清洗时期。在本实验中试验三组试验饮食：2. 5g/天的AXOS的PRE、 2. 8 X IO9Cfu/天的乳双歧杆菌NCC 2818的PR0,以及合并了 PRE和PRO的SYN :2. 5g/天 AXOS和2. 8X IO9Cfu/天的乳双歧杆菌NCC 2818。在每一时期期间，向SHMEtm系统中每天 引入饮食。
[0053] 在处理期间，当细菌适应试验饮食时，它们可能产生更多数量的短链脂肪酸 (SCFA)。因此，反应器中的环境可能会酸化，引发氢氧化钠溶液的加入，以调节各反应器中 的pH。相反地，反应器中环境的碱化引发盐酸溶液的加入。由此而论，试验期间的酸化度可 以用作试验饮食时细菌新陈代谢强度的度量，特别是在加入益生元掺和物时。
[0054] 测量对照期间和试验期间的短链脂肪酸（SCFA)浓度以及酸和碱的消耗，所述测 量在三个代表结肠（升结肠、横结肠和降结肠）的反应器中给予三种试验饮食PRE、PRO和 SYN时进行。
[0055] 图3、4和5显示，分别接受饮食PRE (图3)、PR0 (图4)和SYN(Fig 5)时，SCFA在 升结肠（AC)、横结肠（TC)和降结肠（DC)中浓度的演变。三角形：丁酸盐；正方形：丙酸盐； 菱形：乙酸盐；十字形：总SCFA。C1、C2 :对照的第1和2周。T1、T2、T3 :试验的第1、2和3 周。
[0056] 结果显示，益生元单独治疗引起SCFA总浓度的上升，表明产品在胃肠道中充分发 酵。益生元治疗在所有结肠容器中引起丙酸盐和乙酸盐的产量增加。益生元和益生菌的组 合治疗引起所有3种主要SCFA的增加。
[0057]图6、7和8显示，采用益生元（PRE)、益生菌（PRO)或合生元（SYN)治疗时，在试验 期间，于不同结肠区域升结肠（AC)、横结肠（TC)、降结肠（DC)内，对于酸碱消耗的分析，SP NaOH(N)和 HCl(H)的消耗。
[0058] 给予合生元在AC隔间内引起三种试验饮食中的最强酸化。单独给予益生元引起 更逐步地发酵，以及在末端结肠（TC+DC)内仍然发生的残余酸化。
[0059] 认为，双歧杆菌（尤其是乳双歧杆菌NCC2818)和包括AXOS的寡糖成分的协同组 合可以调节结肠中的酸度，并且可以调节结肠中短链脂肪酸的浓度。短链脂肪酸的产生意 味着健康的肠道环境。结肠内酸度的调节，特别是通过保持结肠内酸性PH的调节，有助于 结肠内环境的建立，有利于非病原体微生物，而不利于病原体微生物，例如沙门氏菌（实施 例3和4)。
[0060] 实施例3-乳双歧杆菌的生长
[0061] 此外，在实施例2中描述的实验中测量了结肠区室中的乳双歧杆菌16S拷贝数。经 过3周试验期间的累计数量如图9所示。双歧杆菌总数以类似方法测定。与对照周群体的 比例如图10所示。
[0062] 在益生菌治疗期间，乳双歧杆菌能够在结肠不同的区域中繁殖。益生菌与益生元 的组合可以在治疗期间引起所有结肠隔间中乳双歧杆菌的更高浓度。
[0063] 认为，双歧杆菌（尤其是乳双歧杆菌NCC2818)和包括AXOS的寡糖成分的协同组 合可以调节肠道微生物群落，在某种程度上有助于健康肠道环境的建立和/或保持。
[0064] 实施例4 一抑制沙门氏菌感染Caco-2细胞
[0065] 采用Caco-2模型观察不同处理方法抑制沙门氏菌侵入肠上皮细胞的能力。采用 分化的Caco-2细胞和分化极化的Caco-2细胞进行观察。在细胞培养皿中培养Caco-2细 胞直至紧密的细胞单层在培养皿表面形成，以制备分化的Caco-2细胞。在transwell中培 养Caco-2细胞直至紧密细胞单层形成，以制备分化极化的Caco-2细胞，并且Caco-2细胞 呈现顶上和底外侧的极化。接着，在病原体攻击前，将Caco-2细胞与益生元、益生菌和合生 元一起培养。培养1小时后，采用PBS缓冲液洗涤细胞3次以消除未粘着的病原体，并与 lOOmg/ml的庆大霉素一起温育，接着在水中裂解1小时。接着将释放的病原体平铺到有盖 培养皿上以测定细胞计数。结果以内部化的病原体细胞计数相对于未接受治疗的细胞计数 表不。
[0066] 如图11所示，与益生菌或益生元单独处理相比，益生菌和益生元的组合能够有效 地使分化的Caco-2细胞中的沙门氏菌侵入减少。如图12所示，与益生菌或益生元单独处 理相比，以及与在分化的Caco-2细胞中的作用相比，益生菌和益生元的组合能够有效地使 分化极化的Caco-2细胞中的沙门氏菌侵入减少。
[0067] 认为，双歧杆菌（尤其是乳双歧杆菌NCC 2818)和包括AXOS的寡糖成分的协同组 合可以通过抑制病原体的感染调节肠道微生物群落，例如通过抑制肠上皮细胞中的沙门氏 菌侵入，在某种程度上有助于健康肠道环境的建立和/或保持。
[0068] 实施例5 -婴儿用谷类产品
[0069] 由Nestl6 Nutrition获得商业的婴儿用谷类产品。本发明的组合物可以通过将乳 双歧杆菌NCC 2818粉末和包括AXOS的寡糖成分与所述商业的婴儿用谷类产品干混制成， 由此最终产物含有重量占0.01 % - 0.02 % (干物质）的乳双歧杆菌NCC 2818粉末和重量 占L 0% - 3. 5% (干物质）的包含AXOS的寡糖成分。
[0070] 尽管参照具体的实例在本发明详述中公开了优选的实施方案，但是应当理解的 是，本发明不限于优选的实施方案。对于本领域普通技术人员而言，多种修改方式是显而易 见的，并且可以在实施本发明中获得。应当理解的是，所采用的材料和化学细节可在不背离 本发明所公开和教授的方法和组合物的前提下有轻微地不同或改动。
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[0080] Possemiers，S.等，PCR-DGGE对人小肠微生物生态系统模拟器中微生物菌群稳定 性的定量（PCR-DGGE-based quantification of stability of the microbial community in a simulator of the human intestinal microbial ecosystem). FEMS Microbiology Ecology. 2004 ；4:495 - 507〇
【主权项】
1. 用于抑制结肠内病原体感染的合生元组合物，其中所述组合物包含（i)包含双歧杆 菌属（Bifidobacterium)菌株的益生菌微生物，和（ii)包含阿糖基木寡糖的寡糖成分。2. 权利要求1的合生元组合物，其中所述双歧杆菌属菌株选自长双歧杆菌 (BifidobacteriumIongum)、乳酸双歧杆菌（BifidobacteriumIactis)、动物双歧杆菌 (Bifidobacteriumanimalis)、短双歧杆菌（Bifidobacteriumbreve)、婴儿双歧杆菌 (Bifidobacteriuminfantis)、青春双歧杆菌（Bifidobacteriumadolescentis)及其混合 物。3. 权利要求1或2的合生元组合物，其中所述双歧杆菌属菌株选自长双歧杆菌NCC 3001、长双歧杆菌NCC2705、短双歧杆菌NCC2950、乳酸双歧杆菌NCC2818及其混合物。4. 权利要求1 一 3中任一项的合生元组合物，其中所述阿糖基木寡糖（AXOS)的平均聚 合度（DP)为2 - 50,优选2 - 15,且其阿拉伯糖与木糖的比（A/X比）为0. 18 - 0. 30。5. 权利要求1 一 4中任一项的合生元组合物，其中阿魏酸残基与所述阿糖基木寡糖 (AXOS)通过酯键连接，优选与阿拉伯糖残基连接。6. 权利要求1 一 5中任一项的合生元组合物，其中所述寡糖成分还包含0 -葡聚糖、木 寡糖、木二糖及其混合物。7. 合生元组合物，所述组合物包含：（i)包含双歧杆菌属菌株的益生菌微生物，和（ii) 包含阿糖基木寡糖的寡糖成分。8. 权利要求7的合生元组合物，其中所述双歧杆菌属菌株为乳酸双歧杆菌属菌株，其 中所述益生菌微生物优选基本上由乳酸双歧杆菌NCC2818组成。9. 权利要求7或8的合生元组合物，其中所述阿糖基木寡糖源于谷类，优选选自小麦、 稻米、玉米、燕麦、大麦、高粱、黑麦。10. 食品组合物，该食品组合物含有权利要求7 - 9中任一项的合生元组合物。11. 权利要求10的食品组合物，其中所述食品组合物选自婴儿谷物产品、干燥谷类混 合物、粥类制剂、早餐谷物产品、粉状膳食产品、谷物棒、粉状饮料、乳制品和宠物食品。12. 权利要求10或11的食品组合物，其中所述食品组合物含有： -每日量为IOOmg-IOg的寡糖成分，和/或 -每克食品组合物IO6 - 1012Cfu的双歧杆菌属菌株。13. 权利要求12的食品组合物，其中所述双歧杆菌属菌株为乳酸双歧杆菌属菌株，其 中所述双歧杆菌属菌株优选基本上由乳酸双歧杆菌NCC2818组成。14. 权利要求10 - 13中任一项的食品组合物，该组合物用于抑制结肠中的病原体感 染。15. 权利要求7 - 9中任一项的合生元组合物，或者权利要求10 - 13中任一项的食品 组合物，该组合物用于治疗结肠中的病原体感染。
【专利摘要】本发明涉及合生元组合物、其在抑制病原体感染(尤其是消化道中的感染)中的用途，以及含有所述合生元组合物的食品组合物。CNCM I-261820010129CNCM I-386520071115CNCM I-344620050607
【IPC分类】A61K35/745, A61K31/702
【公开号】CN104902910
【申请号】CN201380061438
【发明人】D·王, C·沙费尔-勒卡特, J·本雅各布, P·沃勒里, J-Y·许阿
【申请人】雀巢产品技术援助有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2013年11月29日
【公告号】CA2891860A1, EP2925334A1, US20150290258, WO2014083166A1
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种用于调节免疫系统、特别是在肠道内进行调节的合生元组合物。
【背景技术】
[0002] 在本申请说明书全文中关于现有技术的任何讨论绝不应被视为承认这样的现有 技术是众所周知的，或属于该领域内公知常识的范畴。
[0003] 阿糖基木寡糖（AXOS)为益生元成分。几位作者已经表示AXOS可以改善消化系 统健康（Broekaert 等，2011 ;Francois 等，2012 ;Grootaert 等，2009)。WO 2009/040445 A2中提到来源于阿拉伯糖基木聚糖的寡糖在预防和治疗细菌性肠胃炎导致的动物或人的 胃肠道感染中的用途。虽然AXOS相关产品已被发现可以提高免疫活性水平（Ogawa等， 2005)，并且可以改善炎症性结肠炎（Komiyama等，2011)，但是AXOS对于免疫功能的影响， 除了一项动物模型研宄表明AXOS对于沙门氏菌的定植有抑制作用外，仍然存在大量未知 性（Eeckhaut 等，2008)。
[0004] WO 2010/066012 A2描述了富含阿拉伯糖基木聚糖-寡糖的营养组合物，并且还 包括水不可提取的阿拉伯木聚糖或水溶性阿拉伯木聚糖其中之一或两者皆有，优选两者皆 有。
[0005] WO 2009/117790 A2描述了（阿拉伯）糖基木聚糖的制备方法。WO 2010/088744 A2描述了用于提取和分离溶解的阿拉伯糖基木聚糖解聚产品，例如水溶性阿拉伯糖基木聚 糖、阿拉伯糖基木聚糖-寡糖、木糖和阿拉伯糖的方法。
[0006] Crittenden等人（2001)提出了可以用来整合互补性益生菌和益生成分用于新型 合生元性功能食品的体外筛选方法。他们使用这种方法选择益生性双歧杆菌属菌株以补足 合生元性酸奶中的抗酶解淀粉（Hi-maize?)。
[0007] WO 2008/071930 Al公开了一种组合物，该组合物包含一或多个活乳酸双歧杆菌 属菌株，还包含聚合度为2 - 100的木寡糖的糖类成分。
[0008] WO 2006/002495 Al公开了包括阿拉伯糖基木聚糖的食品或饮品，例如AXOS和双 歧杆菌或乳酸杆菌。
[0009] WO 2010/071421 A公开了含有动物双歧杆菌乳酸菌（Bifidobacterium animalis lactis)或乳酸杆菌和低聚半乳糖的食品或营养组合物，例如阿拉伯糖基木聚糖，该组合物 用于肺心病的治疗。
【发明内容】
[0010] 本发明人发现以下成分的组合产品对于调节结肠内的免疫系统具有协同效应： (i)包含双歧杆菌属菌株的益生菌微生物，和（ii)包含阿糖基木寡糖的寡糖成分。结肠内 免疫系统的调节可包括免疫应答的调节和趋化因子分泌的调节，并且，所述调节与结肠内 病原体感染的抑制和/或治疗相关。
[0011] 因此，需要提供含有合生元组合物的食品，以用于病原体感染的抑制和/或治疗， 尤其是在消化道内的感染，作为现有技术的改善方法，或者至少是替代方法。
[0012] 为此，本发明的一个实施方案提供了用于抑制和/或治疗病原体感染的合生元组 合物，尤其是在消化道内的感染，其中所述组合物包含：（i)包含双歧杆菌属菌株的益生菌 微生物，和（ii)包含阿糖基木寡糖的寡糖成分。在一个实施方案中，所述病原体感染为沙 门氏菌感染。
[0013] 本发明的另一实施方案提供了合生元组合物，该组合物包含：（i)包含双歧杆菌 属菌株的益生菌微生物，和（ii)包含阿糖基木寡糖的寡糖成分。
[0014] 本发明的另一实施方案提供了含有所述合生元组合物的食品组合物。
[0015] 在本发明的另一实施方案中，所述食品组合物用于抑制和/或治疗病原体感染， 尤其是在消化道内的感染。
[0016] 在本发明的一个实施方案中，食品组合物含有每日量为IOOmg-IOg阿糖基木寡 糖，和/或每克食品组合物IO6 - 1012Cfu的双歧杆菌。
[0017] 在本发明的实施方案中，所述双歧杆菌属菌株可选自长双歧杆菌 (Bifidobacterium Iongum)、乳酸双歧杆菌（Bifidobacterium Iactis)、动物双歧杆菌 (Bifidobacterium animalis)、短双歧杆菌（Bifidobacterium breve)、婴儿双歧杆菌 (Bifidobacterium infantis)、青春双歧杆菌（Bifidobacterium adolescentis)及其混合 物及其混合物。在本发明实施方案中，所述双歧杆菌属菌株可选自长双歧杆菌NCC 3001、长 双歧杆菌NCC 2705、短双歧杆菌NCC 2950、乳酸双歧杆菌NCC 2818及其混合物。所述双歧 杆菌属菌株优选为乳酸双歧杆菌属菌株。所述益生菌微生物优选基本由乳酸双歧杆菌NCC 2818组成。
[0018] 在本发明的实施方案中，所述阿糖基木寡糖（AXOS)具有3 - 8的平均聚合度 (DP)，且阿拉伯糖与木糖的比例（A/X比）为0. 18 - 0.30。在本发明的实施方案中，阿魏酸 残基与所述阿糖基木寡糖（AXOS)通过酯键连接，优选通过阿拉伯糖残基连接。在本发明的 实施方案中，所述寡糖成分还包括0 -葡聚糖、木寡糖、木二糖及其混合物。
[0019] 对本领域技术人员而言，本发明的这些和其他方面、特征和优点将从本发明实施 方案的详述及附图变得更显而易见。
【附图说明】
[0020] 图1显示，在Caco-2/PBMC(外周血单核细胞）共培养系统中，lOμg/ml AXOS在 24小时内对于趋化因子分泌的作用（实施例1)。
[0021] 图2显示，在Caco-2/PBMC共培养系统中，10 y g/ml AXOS与107CFU/ml乳酸双歧 杆菌NCC 2818在24小时内对趋化因子分泌的作用（实施例1)。
[0022] 图3、4和5显示，分别接受饮食PRE (图3)、PRO (图4)和SYN(Fig 5)时，在实施 例2的实验装置中，短链脂肪酸（SCFA)在升结肠（AC)、横结肠（TC)和降结肠（DC)中浓度 的演进。三角形：丁酸盐；正方形：丙酸盐；菱形：乙酸盐；十字形：总SCFA。CU C2 :对照 的第1和2周。Tl、T2、T3 :试验的第1、2和3周。PRE :AX0S 2. 5g/天；PRO :乳双歧杆菌 2. 8 X IO9CFU 每天；SYN :AX0S 2. 5g/ 天和 2. 8 X IO9CFU 每天。
[0023]图6、7和8显示，分别接受饮食PRE(图6)、PR0(图7)和SYN(图8)时，在经过如 实施例2所述的试验过程中，NaOH(N)和HCl (H)在升结肠（AC)、横结肠（TC)和降结肠（DC) 中的消耗。PRE :AXOS2.5g/ 天；PRO :乳双歧杆菌2.8X IO9CFU 每天；SYN :AXOS2.5g/ 天和 2.8 X IO9CFU 每天。
[0024] 图9显示，分别接受PRE、PRO和SYN三种饮食时，在实施例2的实验装置中，通过 三周的试验时长，乳双歧杆菌16S在结肠隔间（升结肠AC、横结肠TC和降结肠DC)内累计 拷贝数。PRE :AX0S 2. 5g/ 天；PRO :乳双歧杆菌 2. 8X IO9CFU 每天；SYN :AX0S 2. 5g/ 天和 2. 8 X IO9CFU 每天。
[0025] 图10显示，分别接受PRE、PRO和SYN三种饮食时，在实施例2的实验装置中，通 过三周的试验时长，双歧杆菌群体在结肠隔间（升结肠AC、横结肠TC和降结肠DC)内相对 于对照周群体的累计总数。PRE :AX0S 2. 5g/天；PRO :乳双歧杆菌2. 8 X IO9CFU每天；SYN : AXOS 2. 5g/ 天和 2. 8 X IO9CFU 每天。
[0026] 图11和12显示，乳双歧杆菌（IO7CFUAiL)单独的、AX0S(100mg/mL)单独的以及乳 双歧杆菌（IO7CFUAiL)和AX0S(100mg/mL)联合对于沙门氏菌侵入的CaC〇2细胞的作用，所 用细胞为分化的Caco-2细胞（图11)以 及分化极化的Caco-2细胞（图12)(实施例4)。
[0027] 发明详述
[0028] 除另外清楚说明外，否则在本说明书全文中，与排他性或详尽性意思相反，词"包 含"、"含有"和"包括"等应当以包含性意思，也就是说，以"包含，但不限于"的意思解释。
[0029] 除另外说明外，本说明书中所用的百分比指重量百分数。
[0030] 除另外定义外，所有技术和科学术语表示或应当表示本发明领域普通技术人员一 般理解的意思。
[0031] 术语"益生菌"指当给予适量时能为寄主带来健康益处的活的微生物（FA0/WH0指 南）。如上所述，益生菌微生物优选选自如下的双歧杆菌属菌株：长双歧杆菌菌株、乳酸双 歧杆菌菌株、动物双歧杆菌菌株、短双歧杆菌菌株、婴儿双歧杆菌菌株、青春双歧杆菌菌株 及其混合物。例如，所述双歧杆菌属菌株选自长双歧杆菌NCC 3001、长双歧杆菌NCC 2705、 短双歧杆菌NCC 2950、乳酸双歧杆菌NCC 2818及其混合物。
[0032] 以下菌株按照布达佩斯条约在法国微生物保藏中心（Collection Nationale de Cultures de Micro-Organismes) (CNCM,巴斯德研宄所，28rue du Dr Roux, 75724 巴黎 Cedex 15，法国）保藏：
[0034] 长双歧杆菌NCC 3001由Morinaga在美国典型培养物保藏中心（American Type Culture Collection) (ATCC)保藏，保藏号为ATCC BAA-999。所述菌株能公开得到，例如如 Mercenier 等（2006)的摘要 PG3-11 所示。
[0035] 益生菌微生物可作为活的益生菌提供，或者以灭活的状态提供。灭活的益生菌微 生物如 WO 2010/130659、WO 2010/130660 或者 WO 2011/000621 中所述。
[0036] "益生元"为通常为寡糖的化合物，其无法被上肠胃道中的酶消化，但是可以被结 肠或大肠内某些类型的细菌有选择地发酵。
[0037] "合生元"是益生菌（probiotic)成分和益生元（prebiotic)成分的协同组合。当 两种处理方法、成分或组分的联合作用与每种处理方法、成分或组分分别单独使用时的简 单相加效果不同时，则为协同作用。通常，联合作用比每种治疗方法、成分或组分分别使用 时的相加效果要强。
[0038] "阿糖基木寡糖"或"AX0S"是由通过(6-(1-4)糖苷键（osidic linkage)连接在 一起的木糖残基主链组成的寡糖，其中至少一个木糖残基被一或多个阿拉伯糖在木糖残基 的0-2位、0-3位或0-2和0-3两位上置换。在一个实施方案中，AXOS具有2 - 50的平均 聚合度（DP)，优选2 - 15,甚至更优选为2 - 8。AXOS的较低DP值为2、3或4。AXOS的较 高DP值可高至50、40、30、20、15、10、9、8、7或6。在一个实施方案中，AXOS中阿拉伯糖与木 糖的比例（A/X比），低至0. 18或0. 19,高至0. 30、0. 27、0. 24或0. 21，这一比例也称作平均 阿拉伯糖置换度。在一个实施方案中，AXOS的平均DP为3和8,其A/X比为0. 18 - 0.30。 上文提到的最小值和最大值可以组合。
[0039] 寡糖成分优选包括木寡糖（XOS)、AXOS和任选其它糖类的混合物，所述其它糖类 可存在于用作制备所述寡糖成分的原材料中。XOS为聚合度为2 - 9的木糖寡聚物。优选， 木二糖（DP为2的X0S，也称作X2)占寡糖成分干物质重量的15 % - 25%。优选，DP为2 - 9 (X2-9)的XOS占寡糖成分干物质重量的35% - 45%。优选，AXOS占寡糖成分干物质重量 的30 % - 40 %。在一个实施方案中，阿魏酸残基通过酯键与阿糖基木寡糖的阿拉伯糖残基 连接。
[0040] 优选，所述寡糖成分，特别是所述阿糖基木寡糖，源自谷类，优选选自小麦、稻米、 玉米、燕麦、大麦、高粱、黑麦。
[0041] 可将合生元组合物纳入食品组合物中，例如通过常规处理技术，将合生元组合物 成分相继地、一起地或作为预混料干混入食品组合物中。在一个实施方案中，此类食品组合 物含有每日量IOOmg-IOg的寡糖成分。在另一个实施方案中，此类食品组合物含有每g 食品组合物IO6-1012Cfu的双歧杆菌属菌株。在另一个实施方案中，此类食品组合物含有 每日量IOOmg-IOg的寡糖成分和每g食品组合物IO6-1012Cfu的双歧杆菌属菌株。
[0042] 所述食品任选添加选自以下的营养成分：矿物质、维生素、氨基酸、不饱和脂肪酸、 多元酚、植物留醇及其混合物。例如，食品组合物为婴儿用谷类产品、干燥谷类混合物、粥类 制品、早餐谷物制品、粉状膳食产品、谷物棒、粉状饮料、乳制品和宠物食品。
[0043] 优选，所述食品组合物可用于调节结肠免疫系统，例如通过调节免疫反应和趋化 因子分泌。所述调节作用可能与抑制和/或治疗病原体感染有关。
[0044] 合生元组合物以及含有此类合生元组合物的食品组合物可用于抑制和/或治 疗结肠中的病原体感染。在一个实施方案中，所述病原体为细菌病原体，例如弯曲杆菌 (Campylobacter)、沙门氏菌（Salmonellae)或志贺杆菌（Schigellae)。在另一个实施方案 中，所述病原体为沙门氏菌。上述细菌可为腹泻的病因。在一个实施方案中，合生元组合物 以及含有此类合生元组合物的食品组合物可用于抑制和/或治疗与结肠中弯曲杆菌、沙门 氏菌或志贺杆菌感染相关的腹泻，优选与结肠中沙门氏菌感染相关。 实施例
[0045] 实施例1 一合生元组合物的协同效应
[0046] Caco-2是源于人类结直肠腺癌的上皮细胞。Caco-2/PBMC共培养系统用作研宄外 源微生物群和肠道之间的相互作用的体外模型。我们采用此系统来探讨AXOS和乳双歧杆 菌NCC2818之间的潜在协同作用。Caco-2细胞购得自ATCC。新鲜制备的人类外周血单核 细胞（PBMC)来自于健康的捐献者。由Fugeia NV得到平均聚合度为3 - 8和阿拉伯糖与 木糖的比例（A/X)为0. 18 - 0. 30的AXOS。内部获得乳双歧杆菌NCC2818。处理结束后进 行样本采集24小时。
[0047] 通过在基底侧介质里的趋化因子水平对免疫反应进行评估。在Caco-2/PBMC系统 中，我们首先确定一个AXOS不调节趋化因子水平的浓度。然后，我们在这个浓度下将AXOS 和不同量的乳双歧杆菌NCC2818培养。于单独给予乳双歧杆菌的实验组相比，将高水平的 趋化因子认为是乳双歧杆菌和AXOS之间存在协同效应。
[0048] 1)选择用于评价的AXOS浓度。经过数个剂量的测试。采用中尺度（Mesoscale) 测量趋化因子水平。我们发现与无处理的对照相比，在10 U g/ml水平下，AXOS对于趋化因 子的分泌没有明显影响，如图1所示，相对趋化因子浓度被表示为平均值+标准误差（SEM : 平均值的标准误差）。白色条表示无处理对照组。黑色条表示IOu g/ml AXOS处理组。
[0049] 2)评价合生元组合物对于免疫反应的影响。24小时内在IOy g/ml AXOS存在或 不存在的情况下，用l〇7CFU/ml乳双歧杆菌NCC2818来处理Caca-2细胞。采用中尺度测量 趋化因子水平。如图2所示，趋化因子的相对值表示为平均值+标准误差，白色条表示单独 施用乳双歧杆菌NCC2818,黑色条表示乳双歧杆菌NCC2818和AXOS联合施用。相比于乳双 歧杆菌组，在乳双歧杆菌+AXOS组获得趋化因子水平的提高，特别是在诱集免疫细胞（特别 是中性粒细胞和单核细胞）趋向感染区中起重要作用的IL-8和MCP-I趋化因子。如上所 述，因为10 U g/ml AXOS不能影响趋化因子水平，所以表明在乳双歧杆菌和AXOS之间显示 了协同效应。
[0050] 双歧杆菌的协同组合，特别是含有乳双歧杆菌NCC2818和包括AXOS的寡糖组分， 可以调节趋化因子在结肠中的分泌。
[0051] 实施例2-体外动态结肠模型[0052] 在本实验中采用由ProDigest操作的体外动态结肠装置模型SHMEtm (人类肠道微 生物生态系统模拟器）。该装置包括各自代表消化道某个区室的连续反应器，其中控制不 同反应器中的接种物制剂、保留时间、pH条件、温度、设置、胃液、胰液和酸胆液，以尽可能接 近地模拟体内条件。例如，根据目标PH，通过添加氢氧化钠或氢氯酸溶液至相应的反应器 中，自动调整pH。反应器中的液体泵到下一个反应器中。装置中的最后三个反应器分别代 表升结肠、横结肠和降结肠（Possemiers等，2004)。第一天，向装置中接种1. 5岁的孩童奠 便。在接种物中未检测到乳双歧杆菌。使装置运行2周以稳定化（稳定时期）。接着向装 置中引入2周的标准饮食（对照时期），然后引入3周的试验饮食（试验时期）。然后，采 用标准饮食进行2周的清洗时期。在本实验中试验三组试验饮食：2. 5g/天的AXOS的PRE、 2. 8 X IO9Cfu/天的乳双歧杆菌NCC 2818的PR0,以及合并了 PRE和PRO的SYN :2. 5g/天 AXOS和2. 8X IO9Cfu/天的乳双歧杆菌NCC 2818。在每一时期期间，向SHMEtm系统中每天 引入饮食。
[0053] 在处理期间，当细菌适应试验饮食时，它们可能产生更多数量的短链脂肪酸 (SCFA)。因此，反应器中的环境可能会酸化，引发氢氧化钠溶液的加入，以调节各反应器中 的pH。相反地，反应器中环境的碱化引发盐酸溶液的加入。由此而论，试验期间的酸化度可 以用作试验饮食时细菌新陈代谢强度的度量，特别是在加入益生元掺和物时。
[0054] 测量对照期间和试验期间的短链脂肪酸（SCFA)浓度以及酸和碱的消耗，所述测 量在三个代表结肠（升结肠、横结肠和降结肠）的反应器中给予三种试验饮食PRE、PRO和 SYN时进行。
[0055] 图3、4和5显示，分别接受饮食PRE (图3)、PR0 (图4)和SYN(Fig 5)时，SCFA在 升结肠（AC)、横结肠（TC)和降结肠（DC)中浓度的演变。三角形：丁酸盐；正方形：丙酸盐； 菱形：乙酸盐；十字形：总SCFA。C1、C2 :对照的第1和2周。T1、T2、T3 :试验的第1、2和3 周。
[0056] 结果显示，益生元单独治疗引起SCFA总浓度的上升，表明产品在胃肠道中充分发 酵。益生元治疗在所有结肠容器中引起丙酸盐和乙酸盐的产量增加。益生元和益生菌的组 合治疗引起所有3种主要SCFA的增加。
[0057]图6、7和8显示，采用益生元（PRE)、益生菌（PRO)或合生元（SYN)治疗时，在试验 期间，于不同结肠区域升结肠（AC)、横结肠（TC)、降结肠（DC)内，对于酸碱消耗的分析，SP NaOH(N)和 HCl(H)的消耗。
[0058] 给予合生元在AC隔间内引起三种试验饮食中的最强酸化。单独给予益生元引起 更逐步地发酵，以及在末端结肠（TC+DC)内仍然发生的残余酸化。
[0059] 认为，双歧杆菌（尤其是乳双歧杆菌NCC2818)和包括AXOS的寡糖成分的协同组 合可以调节结肠中的酸度，并且可以调节结肠中短链脂肪酸的浓度。短链脂肪酸的产生意 味着健康的肠道环境。结肠内酸度的调节，特别是通过保持结肠内酸性PH的调节，有助于 结肠内环境的建立，有利于非病原体微生物，而不利于病原体微生物，例如沙门氏菌（实施 例3和4)。
[0060] 实施例3-乳双歧杆菌的生长
[0061] 此外，在实施例2中描述的实验中测量了结肠区室中的乳双歧杆菌16S拷贝数。经 过3周试验期间的累计数量如图9所示。双歧杆菌总数以类似方法测定。与对照周群体的 比例如图10所示。
[0062] 在益生菌治疗期间，乳双歧杆菌能够在结肠不同的区域中繁殖。益生菌与益生元 的组合可以在治疗期间引起所有结肠隔间中乳双歧杆菌的更高浓度。
[0063] 认为，双歧杆菌（尤其是乳双歧杆菌NCC2818)和包括AXOS的寡糖成分的协同组 合可以调节肠道微生物群落，在某种程度上有助于健康肠道环境的建立和/或保持。
[0064] 实施例4 一抑制沙门氏菌感染Caco-2细胞
[0065] 采用Caco-2模型观察不同处理方法抑制沙门氏菌侵入肠上皮细胞的能力。采用 分化的Caco-2细胞和分化极化的Caco-2细胞进行观察。在细胞培养皿中培养Caco-2细 胞直至紧密的细胞单层在培养皿表面形成，以制备分化的Caco-2细胞。在transwell中培 养Caco-2细胞直至紧密细胞单层形成，以制备分化极化的Caco-2细胞，并且Caco-2细胞 呈现顶上和底外侧的极化。接着，在病原体攻击前，将Caco-2细胞与益生元、益生菌和合生 元一起培养。培养1小时后，采用PBS缓冲液洗涤细胞3次以消除未粘着的病原体，并与 lOOmg/ml的庆大霉素一起温育，接着在水中裂解1小时。接着将释放的病原体平铺到有盖 培养皿上以测定细胞计数。结果以内部化的病原体细胞计数相对于未接受治疗的细胞计数 表不。
[0066] 如图11所示，与益生菌或益生元单独处理相比，益生菌和益生元的组合能够有效 地使分化的Caco-2细胞中的沙门氏菌侵入减少。如图12所示，与益生菌或益生元单独处 理相比，以及与在分化的Caco-2细胞中的作用相比，益生菌和益生元的组合能够有效地使 分化极化的Caco-2细胞中的沙门氏菌侵入减少。
[0067] 认为，双歧杆菌（尤其是乳双歧杆菌NCC 2818)和包括AXOS的寡糖成分的协同组 合可以通过抑制病原体的感染调节肠道微生物群落，例如通过抑制肠上皮细胞中的沙门氏 菌侵入，在某种程度上有助于健康肠道环境的建立和/或保持。
[0068] 实施例5 -婴儿用谷类产品
[0069] 由Nestl6 Nutrition获得商业的婴儿用谷类产品。本发明的组合物可以通过将乳 双歧杆菌NCC 2818粉末和包括AXOS的寡糖成分与所述商业的婴儿用谷类产品干混制成， 由此最终产物含有重量占0.01 % - 0.02 % (干物质）的乳双歧杆菌NCC 2818粉末和重量 占L 0% - 3. 5% (干物质）的包含AXOS的寡糖成分。
[0070] 尽管参照具体的实例在本发明详述中公开了优选的实施方案，但是应当理解的 是，本发明不限于优选的实施方案。对于本领域普通技术人员而言，多种修改方式是显而易 见的，并且可以在实施本发明中获得。应当理解的是，所采用的材料和化学细节可在不背离 本发明所公开和教授的方法和组合物的前提下有轻微地不同或改动。
[0071] 参考文献列表
[0072] Broekaert WF, Courtin CM, Verbeke K, Van de Wiele T, Verstraete ff, Delcour JA.谷物来源的阿拉伯木聚糖、阿拉伯木聚糖一寡糖和低聚木糖的宜生和其他健康相关的 作用(Prebiotic and other health-related effects of cereal-derived arabinoxyl ans, arabinoxylan-oligosaccharides, and xylooligosaccharides). Crit Rev Food Sci Nutr. 2011Feb ;51:178 - 94。
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【主权项】
1. 用于抑制结肠内病原体感染的合生元组合物，其中所述组合物包含（i)包含双歧杆 菌属（Bifidobacterium)菌株的益生菌微生物，和（ii)包含阿糖基木寡糖的寡糖成分。2. 权利要求1的合生元组合物，其中所述双歧杆菌属菌株选自长双歧杆菌 (BifidobacteriumIongum)、乳酸双歧杆菌（BifidobacteriumIactis)、动物双歧杆菌 (Bifidobacteriumanimalis)、短双歧杆菌（Bifidobacteriumbreve)、婴儿双歧杆菌 (Bifidobacteriuminfantis)、青春双歧杆菌（Bifidobacteriumadolescentis)及其混合 物。3. 权利要求1或2的合生元组合物，其中所述双歧杆菌属菌株选自长双歧杆菌NCC 3001、长双歧杆菌NCC2705、短双歧杆菌NCC2950、乳酸双歧杆菌NCC2818及其混合物。4. 权利要求1 一 3中任一项的合生元组合物，其中所述阿糖基木寡糖（AXOS)的平均聚 合度（DP)为2 - 50,优选2 - 15,且其阿拉伯糖与木糖的比（A/X比）为0. 18 - 0. 30。5. 权利要求1 一 4中任一项的合生元组合物，其中阿魏酸残基与所述阿糖基木寡糖 (AXOS)通过酯键连接，优选与阿拉伯糖残基连接。6. 权利要求1 一 5中任一项的合生元组合物，其中所述寡糖成分还包含0 -葡聚糖、木 寡糖、木二糖及其混合物。7. 合生元组合物，所述组合物包含：（i)包含双歧杆菌属菌株的益生菌微生物，和（ii) 包含阿糖基木寡糖的寡糖成分。8. 权利要求7的合生元组合物，其中所述双歧杆菌属菌株为乳酸双歧杆菌属菌株，其 中所述益生菌微生物优选基本上由乳酸双歧杆菌NCC2818组成。9. 权利要求7或8的合生元组合物，其中所述阿糖基木寡糖源于谷类，优选选自小麦、 稻米、玉米、燕麦、大麦、高粱、黑麦。10. 食品组合物，该食品组合物含有权利要求7 - 9中任一项的合生元组合物。11. 权利要求10的食品组合物，其中所述食品组合物选自婴儿谷物产品、干燥谷类混 合物、粥类制剂、早餐谷物产品、粉状膳食产品、谷物棒、粉状饮料、乳制品和宠物食品。12. 权利要求10或11的食品组合物，其中所述食品组合物含有： -每日量为IOOmg-IOg的寡糖成分，和/或 -每克食品组合物IO6 - 1012Cfu的双歧杆菌属菌株。13. 权利要求12的食品组合物，其中所述双歧杆菌属菌株为乳酸双歧杆菌属菌株，其 中所述双歧杆菌属菌株优选基本上由乳酸双歧杆菌NCC2818组成。14. 权利要求10 - 13中任一项的食品组合物，该组合物用于抑制结肠中的病原体感 染。15. 权利要求7 - 9中任一项的合生元组合物，或者权利要求10 - 13中任一项的食品 组合物，该组合物用于治疗结肠中的病原体感染。
【专利摘要】本发明涉及合生元组合物、其在抑制病原体感染(尤其是消化道中的感染)中的用途，以及含有所述合生元组合物的食品组合物。CNCM I-261820010129CNCM I-386520071115CNCM I-344620050607
【IPC分类】A61K35/745, A61K31/702
【公开号】CN104902910
【申请号】CN201380061438
【发明人】D·王, C·沙费尔-勒卡特, J·本雅各布, P·沃勒里, J-Y·许阿
【申请人】雀巢产品技术援助有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2013年11月29日
【公告号】CA2891860A1, EP2925334A1, US20150290258, WO2014083166A1
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