新的抗侵入性化合物的制作方法
新的抗侵入性化合物的制作方法
【专利说明】新的抗侵入性化合物
[0001] 本发明一般地涉及化合物用于制备用来治疗癌的组合物的用途。
[0002] 在绝大多数癌中，死亡并非由于原发肿瘤而是因为由此衍生转移。导致肿瘤侵入 且临床通过出现转移定义的这种恶性进展是一起使得侵入性细胞离开原发肿瘤位点并移 居至各种靶标组织的原发细胞粘着损失和细胞运动性增加的最终结果。
[0003] 转移被认为是癌不受控的恶性进展的复发特征。在该过程期间，肿瘤细胞通过增 加其迀徙能力而完成其恶性转化。然后，癌细胞能够散布并在远离的位点确立肿瘤病灶。癌 细胞在机体中的扩散是一系列称为《转移级联》的事件的结果：侵入肿瘤周围组织，静脉或 淋巴内渗，在远处的逃离机体的全部防御机制的新群落位置移行和确立。
[0004] 目前对其不存在有效治疗选项的转移性侵入是非常主要的死因。由于在转移阶段 诊断出的癌的频率以及它们所代表的治疗难题，从而开发特别靶向转移性侵入的分子是癌 症治疗的主要突破的关键要求。
[0005] 文献W02009/087238描述可以用来治疗癌症的化合物。如下文实施例17提供的 比较数据所示，在侵入试验中公开于所述文献的相似化合物令人惊讶地比本申请所要求保 护的化合物活性更低。
[0006] 目前发现如下文所定义的式（I)衍生物能够预防（如下文的实验数据所示）转移 癌的侵入性进展；并且基于这种活性，该化合物用于治疗癌症。
[0007] 因此本发明涉及下文定义的式（I)化合物及其药学上可接受的盐本身。
[0008] 此外，本发明涉及下文定义的式（I)化合物用作药物和更特别地用于预防和/或 抑制和/或治疗癌症。
[0009] 此外，本发明涉及预防、抑制或治疗癌的方法，其包括至少一个步骤，该步骤包括 向罹患所述疾病的患者给予有效量的如下文式（I)定义的化合物或其药学上可接受的盐 之一。
[0010] 本发明还涉及制备所述式（I)化合物的方法。
[0011] 本发明也提供药物组合物，包含至少一种所述式（I)化合物。
[0012] 根据一个方面，本发明的主题涉及式（I)化合物
[0013]
[0014] 其中
[0015] A和A'独立地代表亚苯基基团或亚吡啶基基团；
[0016] R2是氢原子或（C rC4)烷基；
[0017] 馬是2-吡啶基基团，3-吡啶基基团，4-吡啶基基团，2-嘧啶基基团，4-嘧啶基基 团或5-嘧啶基基团；
[0018] R4是幾基基团或横醜基基团；和
[0019] R^-NH-(CH2)a-NR6R7基团或4-甲基哌嗪基基团，其中a是1至4的整数，R 6和 R7独立地代表（C1-C4)烷基，或RjPR7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其选自 4-甲基哌嗪基基团，吗啉代基团，吡咯烷基基团和哌啶子基基团；
[0020] 或其药学上可接受的盐中任一种。
[0021] 根据优选实施方式，本发明涉及式（I)化合物，其中在A与A'之间的基团-NH-和 基团-R4-R5相对A'相互位于间位。
[0022] 根据优选实施方式，本发明涉及式（Al)化合物
[0023]
[0024] 其中A，A'，R2, R3, &和R 5如前文所定义。
[0025] 本发明涵盖下文描述的实施方式，其中在A和A'上的取代基团的位置与上文描述 的式（Al)结构一致，也即A上的间位和A'上的间位。
[0026] 根据又一优选的方面，本发明涉及如前文所定义的式（I)化合物，其中
[0027] A和A'独立地代表亚苯基基团或亚吡啶基基团；
[0028] 馬是氢原子或甲基基团；
[0029] 馬是2-吡啶基基团，4-吡啶基基团或4-嘧啶基基团；
[0030] R4是幾基基团或横醜基基团；和
[0031] R^-NH-(CH2)a-NR6R7基团或4-甲基哌嗪基基团，其中a是2至3的整数，R 6和 R7代表乙基基团，或RjPR7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其选自4-甲基哌嗪 基基团，吗啉代基团，吡咯烷基基团和哌啶子基基团；
[0032] 或其药学上可接受的盐中任一种。
[0033] 根据更优选的方面，本发明涉及式（I'）化合物
[0034]
[0035] 其中
[0036] X和X'独立地是CH或N ;
[0037] 1?2是氢原子或甲基基团；
[0038] &是2-吡啶基基团，4-吡啶基基团或4-嘧啶基基团；
[0039] R4是幾基基团或横醜基基团；和
[0040] 馬是-NH- (CH 2) a-NR6R7基团或4-甲基哌嗪基基团，其中a是2至3的整数，R 6和 R7代表乙基基团，或RjPR7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其选自4-甲基哌嗪 基基团，吗啉代基团，吡咯烷基基团和哌啶子基基团；
[0041] 或其药学上可接受的盐中任一种。
[0042] 根据【具体实施方式】，本发明的额外主题是式（Ia)化合物
[0043]
[0044] 其中R2, R3, R4和R 5如前文所定义；
[0045] 或其药学上可接受的盐中任一种。
[0046] 根据优选实施方式，本发明涉及式（Ia)化合物，其中基团-R4-R5相对两个苯基基 团之间的基团-NH-位于间位。
[0047] 根据更优选实施方式，本发明涉及如前文所定义的式（Ia)化合物，其中R4是羰基 基团和R2,馬和R 5如前文所定义，
[0048] 或其药学上可接受的盐中任一种。
[0049] 本文还公开式（Ib)化合物
[0050]
[0051] 其中R2, R3, R4和R 5如前文所定义；
[0052] 或其药学上可接受的盐中任一种。
[0053] 根据优选实施方式，本发明涉及式（Ib)化合物，其中基团-R4-R5相对在苯基基团 与吡啶基团之间的基团-NH-位于间位。
[0054] 更优选，在式（Ib)中，R2是氢原子；R3是4-吡啶基基团；R4是羰基基团；和R5 是-NH-(CH2) a-NR6R7基团，其中a是整数3，和R6和R7代表乙基基团；或其药学上可接受 的盐中任一种。
[0055] 根据又一【具体实施方式】，本发明的额外主题是式（Ic)化合物
[0056]
[0057] 其中R2, R3, R4和R 5如前文所定义；
[0058] 或其药学上可接受的盐中任一种。
[0059] 根据优选实施方式，本发明涉及式（Ic)化合物，其中基团-R4-R5相对在苯基基团 与吡啶基团之间的基团-NH-位于间位。
[0060] 根据更优选实施方式，本发明涉及如前文所定义式（Ic)化合物，其中馬是氢原子 或甲基基团；馬是4-吡啶基基团或4-嘧啶基基团；R 4是羰基基团；和R 5是-NH-(CH2)a-NR6R7 基团，a是整数3, &和R 7代表乙基基团，或R6和R 7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基 团，其是4-甲基哌嗪基基团；或其药学上可接受的盐中任一种。
[0061] 根据又一【具体实施方式】，本发明的额外主题是式（Id)化合物
[0062]
[0063] 其中R2, R3, &和R 5如前文所定义；
[0064] 或其药学上可接受的盐中任一种。
[0065] 根据优选实施方式，本发明涉及式（Id)化合物，其中基团-R4-R5相对两个吡啶基 团之间的基团-NH-位于间位。
[0066] 根据更优选实施方式，本发明涉及如前文所定义式（Id)化合物，其中R2是氢原 子；馬是4-吡啶基基团；R4是羰基基团；和R 5是-NH-(CH2)a-NR6R7基团，a是整数3, RjPR7 代表乙基基团，或RjPR7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其是4-甲基哌嗪基基 团；或其药学上可接受的盐中任一种。
[0067] 根据又一【具体实施方式】，本发明的额外主题是式（Ie)化合物
[0068]
[0069] 其中R2, R3, R4和R 5如前文所定义；
[0070] 或其药学上可接受的盐中任一种。
[0071] 根据优选实施方式，本发明涉及式（Ib)化合物，其中基团-R4-R5相对在苯基基团 与吡啶基团之间的基团-NH-位于间位。
[0072] 根据更优选实施方式，本发明涉及如前文所定义的式（Ie)化合物，其中R2是氢原 子；心是4-吡啶基基团；R 4是羰基基团或磺酰基基团；和1?5是-NH-(CH2)a-NR 6R7基团，a是 整数3, &和R 7代表乙基基团，或R 6和R 7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其选 自4-甲基哌嗪基基团，吗啉代基团，吡咯烷基基团和哌啶子基基团；或其药学上可接受的 盐中任一种。
[0073] 根据本发明的优选实施方式，式（I)化合物选自：
[0074] - (I) N-(3_ (二乙基氨基）丙基）_3_ ((3_ (吡啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基） 苯甲酰胺
[0075]-⑵3- ((4- ((3-(二乙基氨基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N- ( P比 啶-4-基）苯甲酰胺
[0076] -(3)N-(3-吗啉代丙基）-3-((3-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰 胺
[0077] -(4) N-(吡啶-4-基）-3-((3-((3-(吡咯烷-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基） 氨基）苯甲酰胺
[0078] - (5) 3_ ((3_ (N- (3_ (二乙基氨基）丙基）氨横酰基）苯基）氨基）-N- ( P比 啶-4-基）苯甲酰胺
[0079] -(6) N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-3-((3-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基） 氨基）苯甲酰胺
[0080] -(7) N-(3-(哌啶-1-基）丙基）-3-((3-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基） 苯甲酰胺
[0081] -(8)3-((3-(4-甲基哌嗪-1-羰基）苯基）氨基）-N_(吡啶-4-基）苯甲酰胺
[0082] - (9) 3- ((3- (N- (3-(哌啶-1-基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺
[0083] -(10)3-((3-(N-(2-(哌啶-1-基）乙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N_(吡 啶-4-基）苯甲酰胺
[0084] - (11) N-(3_ (二乙基氨基）丙基）_3_ ((3_ (吡啶_2_基氨基甲酰基）苯基）氨基） 苯甲酰胺
[0085] - (12) 3- ((3- (N- (3-吗啉代丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基）苯 甲酰胺
[0086] - (13) N-(3_ (二乙基氨基）丙基）_3_ ((4_ (吡啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基） 苯甲酰胺
[0087] -(14)N_(3-吗啉代丙基）-3-((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰 胺
[0088] - (15) 4- ((3- (N- (3-吗啉代丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基）苯 甲酰胺
[0089] - (16) N-(吡啶-4-基）-4- ((3- (N- (2-(吡咯烷-1-基）乙基）氨磺酰基）苯基） 氨基）苯甲酰胺
[0090] - (17) 3_ ((3_ ((3_ (二乙基氨基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-甲基-N- (P比 啶-4-基）苯甲酰胺
[0091] -(18)N-甲基-N-(吡啶-4-基）-3-((3-((3-(吡咯烷-1-基）丙基）氨基甲酰 基）苯基）氨基）苯甲酰胺
[0092] -(19)3-((3-(N-(3_(二乙基氨基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N_甲基-N-(吡 啶-4-基）苯甲酰胺
[0093] -(20) N-甲基-3-((3-((3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨 基）-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺
[0094] -(21)N-甲基-3-((3-((3-(哌啶-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡 啶-4-基）苯甲酰胺
[0095] -(22)N_甲基-3-((3-((3-吗啉代丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N_(吡 啶-4-基）苯甲酰胺
[0096] -(23)N_甲基-3-((3-(N_(3-吗啉代丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N_(吡 啶-4-基）苯甲酰胺
[0097] -(24) N-甲基-3-( (3-(N-(3-(哌啶-1-基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡 啶-4-基）苯甲酰胺
[0098] - (25) N-(3_ (二乙基氨基）丙基）_3_ ((3_ (喃啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基） 苯甲酰胺
[0099] _(26)3-((3-(N-(3-(二乙基氨基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N_(嘧 啶-4-基）苯甲酰胺
[0100] -(27)3-((3-(N-(3-(哌啶-1-基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(嘧 啶-4-基）苯甲酰胺
[0101] -(28) N-(嘧啶-4-基）-3-((3-((3-(吡咯烷-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基） 氨基）苯甲酰胺
[0102] -(29) N-(3-(哌啶-1-基）丙基）-3-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基） 苯甲酰胺
[0103] -(30)N_(3-吗啉代丙基）-3-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰 胺
[0104] -(31)N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-3-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基） 氨基）苯甲酰胺
[0105] _ (32) N-(3-(二乙基氨基）丙基）_5_ ((3-(吡啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基） 烟酰胺
[0106] _ (33) N-(3_ (二乙基氨基）丙基）_2_ ((3_ (吡啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基） 异烟酰胺
[0107] -(34)N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-2-((3-(吡啶-4-基）氨基甲酰基）_苯 基）氨基）异烟酰胺
[0108] _ (35) N-(3_ (二乙基氨基）丙基）_6_ ((3_ (吡啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基） 吡啶酰胺
[0109] - (36) N- (3-(二乙基氨基）丙基）-6- ((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基） 吡啶酰胺
[0110] -(37)N-(3-(二乙基氨基）丙基）-6-((3-(甲基（吡啶-4-基）氨基甲酰基）苯 基）氨基）吡啶酰胺
[0111] _ (38) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-2-((3-(甲基（P比啶-4-基）氨基甲酰基）苯 基）氨基）异烟酰胺
[0112] -(39)2-((3-(甲基（吡啶-4-基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(3-(4-甲基哌 嗪-1-基）丙基）异烟酰胺
[0113] -(40) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-6-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基） 吡啶酰胺
[0114] -(41) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-2-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基） 异烟酰胺
[0115] -(42) N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-2-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基） 氨基）异烟酰胺
[0116] - (43) N- (3-(二乙基氨基）丙基）-6- ((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）吡啶-2-基） 氨基）吡啶酰胺
[0117] - (44) N- (3-(二乙基氨基）丙基）-2- ((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）吡啶-2-基） 氨基）异烟酰胺
[0118] -(45)N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-2-((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）吡 啶 _2_基）氨基）异烟酰胺
[0119] - (46) 2_ ((3_ (N- (3_ (二乙基氨基）丙基）氨横酰基）苯基）氨基）-N- ( P比 啶-4-基）异烟酰胺
[0120] - (47) 2_ ((3_ ((3_ (二乙基氨基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N- ( P比 啶-4-基）异烟酰胺
[0121] -(48) 2-((3-((3-吗啉代丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基）异 烟酰胺
[0122] -(49) N-(3-(哌啶-1-基）丙基）-3-((3-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基） 苯甲酰胺
[0123] -(50) N-(吡啶-4-基）-2-((3-((3-(吡咯烷-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基） 氨基）异烟酰胺
[0124] -(51)2-((3-((3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N_(吡 啶 _4_基）异烟酰胺
[0125] 本发明的化合物可以以游离碱或与药学上可接受的酸的加成盐形式存在。
[0126] 式（I)化合物的适宜的生理学上可接受的酸加成盐包括氢溴酸盐，酒石酸盐，柠 檬酸盐，三氟乙酸盐，抗坏血酸盐，盐酸盐，酒石酸盐，三氟甲磺酸盐，马来酸盐，甲磺酸盐， 甲酸盐，乙酸盐和富马酸盐。
[0127] 式（I)，（I'），（Ia)，（Ib)，（Ic)，（Id)和（Ie)化合物和/或其盐可以形成溶剂化 物（例如水合物），并且本发明包括全部这样的溶剂化物。
[0128] 因此，本发明扩展至化合物（1)至（51)，其药学上可接受的盐，其溶剂化物及其水 合物本身。
[0129] 在本发明的上下文中，术语：
[0130] (CrC4)烷基〃如本文所用分别是指CrC4伯、仲或叔饱和的烃。实例是但不限 于甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，丁基，异丁基，叔丁基，
[0131] 和
[0132] _〃患者〃可以包括人类或哺乳动物，比如猫或狗。
[0133] 式（I)，（I'），（Ia)，（Ib)，（Ic)，（Id)和（Ie)化合物能够包含一个或多个不对称 碳原子。从而，它们能够以对映体或非对映异构体形式存在。这些对映体，非对映异构体及 其混合物（包括外消旋混合物）属于本发明的范围。
[0134] 根据又一方面，本发明涉及式（I)，（I'），（Ia)，（Ib)，（Ic)，（Id)和（Ie)化合物 用作药物。
[0135] 根据又一方面，本发明涉及式（I)，（I'），（Ia)，（Ib)，（Ic)，（Id)和（Ie)化合物 用于预防和/或抑制和/或治疗癌症。
[0136] 根据本发明，术语〃预防〃或〃防止〃意指降低给定现象即癌症的发作风险或延 缓给定现象即癌症的发生。
[0137] 本发明的化合物能够通过本领域技术人员使用的有机合成常规方法来制备。下述 一般反应程序代表用于制备本发明化合物的一般方法，且并非意在限制其范围或效用。
[0138] 通式（I)化合物能够根据下述方案1制备。 LUliHJJ 刀采丄
[0141] 合成基于偶联反应，起始自式（III)卤代芳族化合物，其中1?4和R5如前文所定义 和X是氯原子、碘原子或溴原子。
[0142] 根据途径（A)，将式（III)化合物置于质子溶剂比如叔丁醇中。然后，在摩尔浓 度比为1至2的无机碱比如& 20)3或K2CO3存在下，在相对式（III)化合物总量的量为 2mol %至IOmol %的二膦比如Xantphos(4, 5-二（二苯基膦基）_9, 9-二甲基咕吨）或 X-Phos (2-二环己基膦基-2'，4'，6' -三异丙基联苯）存在下，且在相对式（III)化合物 总量的量为2mol %至IOmo l %的有机金属催化剂比如Pd (OAc) 2或Pd2dba3存在下，加入相对 式（V)化合物摩尔浓度比为1至1. 5的式（II)化合物，其中R2,馬和A如上文所定义。然 后，可以在惰性气体例如氩下将反应混合物在80至120°C例如在90°C加热，并搅拌15至25 小时例如在20小时。可将反应混合物减压浓缩，残余物可用有机溶剂比如乙酸乙酯稀释。 有机相能够用水洗涤，倾析，在硫酸镁上干燥。最终，固体能够减压干燥过夜，获得产物（I)。
[0143] 式（II)和（III)的起始化合物是可获得的，或者能够根据本领域技术人员已知的 方法制备。
[0144] 更特别地，式（II)化合物（也即分别（IIa)和（IIc))在用于制备式（Ia)和（Ic) 化合物的情况下能够根据下述方案2制备。
[0145] 制备式（Ia)和（Ic)化合物的式（II)中间体化合物，其中X2之一 N，且 X2中另一个是CH(R3是吡啶基基团）。
[0146]
[0147] 方案 2
[0148] 如方案2中所示，式（IIa)和（IVa)中间体化合物用于制备根据本发明的式（Ia) 化合物，而式（IIc)和（IVc)中间体化合物用于制备根据本发明的式（Ic)化合物。
[0149] 根据途径（B)，以相对硝基苯甲酰氯摩尔比范围1至1. 5加入氨基吡啶，将其置于 摩尔浓度范围2M至5M的无机碱比如氢氧化钠的水溶液。将极性非质子溶剂比如二氯甲烷 加至溶液，反应混合物能够用冰浴冷却至〇°C，能够滴加硝基苯甲酰氯的极性非质子溶剂比 如二氯甲烷溶液。然后反应混合物能够在室温下在惰性气体例如氩下搅拌15至24小时 例如18小时的时间。所得沉淀能够过滤，用水和二氯甲烷洗涤，减压干燥过夜，提供产物 (IVa)或（IVc)。
[0150] 根据途径（C)，将式（IVa)或（IVc)化合物和相对苯甲酰胺量比率范围2%至10% 的10% Pd/C置于质子溶剂比如乙醇中。然后反应混合物能够在室温下在H2气氛下搅拌 5至20小时例如16小时的时间。然后反应混合物能够过滤，滤液能够减压浓缩，提供产物 (IIa)或（IIc)。
[0151] 根据途径（D)，将4_(甲基氨基）吡啶置于极性非质子溶剂比如二氯甲烷中。然 后，在摩尔比范围1至2的有机碱比如N，N-二异丙基乙胺或三乙胺存在下，在摩尔比范围 0. 1至1的亲核催化剂比如二甲基氨基吡啶存在下，以相对4-(甲基氨基）吡啶的摩尔比 范围1至1. 5加入硝基苯甲酰氯。然后反应混合物能够在室温下在惰性气体和例如氩下搅 拌5至20小时例如18小时的时间。有机相能够用水洗涤，倾析，在硫酸镁上干燥。最终， 固体能够减压干燥过夜，提供产物（IVa)或（IVc)。
[0152] 更特别，式（II)化合物，在用来制备一种情况的式（Ia)和（Ic)化合物或者另一 种情况的式（Id)和（Ie)化合物的情况下，能够根据下述方案3制备。
[0153] 制备式（Ia)和（Ic)化合物的式（II)中间体化合物，其中CH和X^N(R3 是嘧啶基基团），以及式（Id)和（Ie)化合物的式（II)中间体化合物，其中乂1是N和X 2是 CH(R3是吡啶基基团）。
[0154]
[0155] 方案 3
[0156] 如方案3中所示，式（IIa)和（Va)中间体化合物用于制备根据本发明的式（Ia) 化合物，式（IIc)和（Vc)中间体化合物用于制备根据本发明的式（Ic)化合物，式（IId)和 (Vd)中间体化合物用于制备根据本发明的式（Id)化合物，和式（lie)和（Ve)中间体化合 物用于制备根据本发明的式（Ie)化合物。
[0157] 根据途径（E)，将羧酸衍生物置于极性非质子溶剂比如二氯甲烷中。然后，在摩尔 比范围1至3的偶联剂比如EDCI. HCl存在下，在摩尔比范围1至3的有机碱比如N，N-二 异丙基乙胺或三乙胺存在下和在摩尔比范围〇. 1至1的亲核催化剂比如二甲基氨基吡啶存 在下，加入相对羧酸部分的摩尔比范围1至1. 5的氨基衍生物。然后反应混合物能够在室 温下在惰性气体和例如氩下搅拌5至20小时例如18小时的时间。所得沉淀能够过滤，用 水和二氯甲烷洗涤。有机滤液能够用水洗涤，倾析，在硫酸镁上干燥。最终，能够收集固体， 减压干燥过夜，提供产物（Va)，（Vc)，（Vd)或（Ve)。
[0158] 类似地，为了获得式（Ib)化合物，能够使用方案2或方案3。
[0159] 本发明的式（I)化合物中某些的化学结构和光谱数据分别列于下表1和表1I。
[0160] 表1
[0161]
[0162]
[0163」
[0164]
[0165」
[0166]
[0167]
[0168]
[0169」
[0170] 表1I
[0171]
[0172]
[0173]
[0174]
[0175]
[0176]
[0177]在所述式⑴化合物中，化合物（1)，（3)，（4)，（5)，（6)，（7)，（9)，（10)，（12)， (20)， （25)， （28)， （29)， （30)， （31)， （34)， （35)， （40)， （41)， （42)， （44)， （45)， （48)， （49)， 和（51)，或其药学上可接受的盐之一特别有意义。
[0178] 下述实施例详细举例说明根据本发明的化合物（I)，（4)，（5)，（6) (7)，（20)，（25)， (31)，（35)，（39)，（41)，（44)，（47)和（51)的制备。所得产物的结构已至少通过NMR谱图 得以确认。 实施例
[0179] 实施例1:表1化合物（1)
[0180] 根据途径（B)，将4-氨基吡啶（4. 2g，44毫摩尔，I. 1当量）置于3N NaOH水溶液 (56mL)，将二氯甲烷（24mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至(TC，滴加3-硝基苯甲酰 氯（7. 4g，40毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（40mL)溶液。然后反应混合物在室温下在氩惰性 气氛下搅拌18小时。过滤所得沉淀，用水和二氯甲烷洗涤，提供3-硝基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（2. 5g，26% )。
[0181] 1H NMR (300MHz，d6-DMS0) δ 10.91 (s，lH)，8.80 (s，lH)，8.52 (d，J = 5·5Ηζ，2H)， 8.47(d，J = 7.9Hz，lH)，8.41(d，J = 7.9Hz，lH)，7.86(t，J = 7.9Hz，lH)，7.79(d，J = 5. 3Hz，2H) 〇
[0182] 根据途径（C)，将3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（I. 5g，6. 2毫摩尔，I当量。） 和10% Pd/C(250mg)置于Et0H(50mL)。反应混合物在室温下在H2气氛下搅拌16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（1.24g，94% )。
[0183] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 10. 44(s，1H)，8. 44(d，J = 6. 3Hz，2H)，7. 77(d，J = 6· 3Hz，2H)，7· 18(t，J = 7. 9Hz，1H)，7· 12-7. 03(m，2H)，6· 78(d，J = 7. 9Hz，1H)，5· 38(s， 2H) 〇
[0184] 将N，N-二乙基丙二胺（8. 7mL，55毫摩尔，I. I当量）置于3N NaOH水溶液（71mL)， 将二氯甲烷（30mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加3-溴苯甲酰氯 (6. 6mL，50毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（50mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩，提供 3-溴-N-(3-二乙基氨基-丙基）苯甲酰胺（15. 6g，100% )。
[0185] 1H 匪R(300MHz，CDCl3) δ9· 15(br s，lH)，7.91(s，lH)，7.75(d，J = 7·9Ηζ， lH)，7.58(d，J = 7.9Hz，lH)，7.29(t，J = 7.9Hz，lH)，3.56(dd，J = 10·3,5·8Ηζ，2Η)， 2. 67-2. 53(m，6H)，I. 74(五重峰，J = 5. 7Hz，2H)，I. 04(t，J = 7· 1Ηz，6Η)。
[0186] 根据途径（A)，将3-溴-N_(3-二乙基氨基-丙基）苯甲酰胺（291mg，0.9毫摩尔，I 当量），3_氨基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（300mg，L 4毫摩尔，L 5当量），Pd2(dba)3(42mg， 0· 046 晕摩尔，5mol % )，XPhos (44mg，0· 09 晕摩尔，IOmol % )和 K2CO3 (514mg，3. 72 晕摩尔， 4当量）在叔-BuOH(4mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性气氛下搅拌20小时。然 后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用水洗涤，在MgSO 4I干燥， 过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供N-(3-(二乙基氨基）丙 基） _3_((3-(吡啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰胺（I) (230mg，57% )。
[0187] 实施例2 :表1化合物（4)
[0188] 根据途径（B)，将4-氨基吡啶（4. 2g，44毫摩尔，I. 1当量）置于3N NaOH水溶液 (56mL)，将二氯甲烷（24mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至(TC，滴加3-硝基苯甲酰 氯（7. 4g，40毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（40mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。过滤所得沉淀，用水和二氯甲烷洗涤，提供3-硝基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（2. 5g，26% )。
[0189] 1H NMR (300MHz，d6-DMS0) δ 10.91 (s，lH)，8.80 (s，lH)，8.52 (d，J = 5·5Ηζ，2H)， 8.47(d，J = 7.9Hz，lH)，8.41(d，J = 7.9Hz，lH)，7.86(t，J = 7.9Hz，lH)，7.79(d，J = 5. 3Hz，2H) 〇
[0190] 根据途径（C)，将3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（994mg，4. I毫摩尔，I当量） 和10% Pd/C(218mg)置于Et0H(20. 5mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。 然后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（900mg，100% )。
[0191] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 10. 42(s，1H)，8. 44(d，J = 6. 3Hz，2H)，7. 75(d，J = 6·3Ηζ，2Η)，7· 16(t，J = 7·9Ηζ，1Η)，7· 10-7.01(m，2H)，6.76(d，J = 7.9Hz，lH)，5.36(s， 2H) 〇
[0192] 将3-(吡咯烷-I-基）丙胺（I. 4mL，11毫摩尔，I. I当量）置于3N NaOH水溶液 (HmL)，将二氯甲烷（6mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至(TC，滴加3-溴苯甲酰氯 (1.3mL，10毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（IOmL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩，提供 3-溴-N-(3-吡咯烷-1-基-丙基）苯甲酰胺（2. 9g，94% )。
[0193] 4匪1?(30(^泡，〇)(：13)3 9.19(8，1!1)，7.82(8，1!1)，7.77((1，】=7.9泡，1!1)， 7. 58(d，J = 7. 9Hz，1H)，7. 29(t，J = 7. 9Hz，1H)，3. 57(dd，J = 9· 4,4· 8Hz，2H)，2. 72(t，J =4· 8Hz，2H)，2· 58(s，4H)，I. 86(s，4H)，I. 78(t，J = 4· 8Hz，2H)。
[0194] 根据途径（A)，将3-溴-N_(3-二乙基氨基-丙基）苯甲酰胺（611mg，1.97 毫摩尔，1当量），3-氨基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺^30mg，2. 96毫摩尔，L 5当 量），Pd2 (dba) 3 (90mg，0· 095 毫摩尔，5mol % )，XPhos (94mg，0· 19 毫摩尔，IOmol % )和 K2CO3 (I. lg，7. 88毫摩尔，4当量）在叔-BuOH(8mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性 气氛下搅拌20小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用 水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供 N-(吡啶-4-基）-3-((3-((3-(吡咯烷-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰 胺（4) (427mg，49% )。
[0195] 实施例3 :表1化合物（5)
[0196] 根据途径（B)，将4-氨基吡啶（4. 2g，44毫摩尔，I. 1当量）置于3N NaOH水溶液 (56mL)，将二氯甲烷（24mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至(TC，滴加3-硝基苯甲酰 氯（7. 4g，40毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（40mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。过滤所得沉淀，用水和二氯甲烷洗涤，提供3-硝基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（994mg，20% )。
[0197] 1H NMR (300MHz，d6-DMS0) δ 10.91 (s，lH)，8.80 (s，lH)，8.52 (d，J = 5·5Ηζ，2H)， 8.47(d，J = 7.9Hz，lH)，8.41(d，J = 7.9Hz，lH)，7.86(t，J = 7.9Hz，lH)，7.79(d，J = 5. 3Hz，2H) 〇
[0198] 根据途径（C)，将3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（994mg，4. I毫摩尔，I当量） 和10% Pd/C(218mg)置于Et0H(20. 5mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。 然后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（900mg，100% )。
[0199] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 10. 42(s，1H)，8. 44(d，J = 6. 3Hz，2H)，7. 75(d，J = 6·3Ηζ，2Η)，7· 16(t，J = 7·9Ηζ，1Η)，7· 10-7.01(m，2H)，6.76(d，J = 7.9Hz，lH)，5.36(s， 2H) 〇
[0200] 将3-溴苯磺酰氯（0. 56mL，3. 9毫摩尔，I当量）和N，N-二异丙基乙胺（I. 02mL， 5. 9毫摩尔，1. 5当量）置于无水的二氯甲烷（20mL)。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴 加 N，N-二乙基丙二胺（1.23mL，7. 8毫摩尔，2当量）。然后在(TC在氩惰性气氛下搅拌反应 混合物2小时。混合物用饱和NH4Cl水溶液、然后NaCl洗涤。水相用二氯甲烷萃取。收集 有机相，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩，提供3-溴-N-(3-二乙基氨基丙基）苯磺酰胺 (524mg,38% ) 〇
[0201] 1H NMR(300MHz，CDC13) S7.98(s，lH)，7.78(d，J = 7.9Hz，lH)，7.66(d，J = 8.0Hz， lH)，7.37(t，J = 7.9Hz，lH)，3.05(t，J = 5.4Hz，2H)，2.63-2.47(m，6H)，1.68(t，J = 5. 4Hz，2H)，I. 06(t，J = 7. lHz，6H)。
[0202] 根据途径（A)，将3_溴-N- (3-二乙基氨基丙基）苯横酰胺（153mg，0· 44晕 摩尔，1当量），3_氨基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（103mg，0.48毫摩尔，Ll当量）， Pd2(dba)3(20mg，0.022 晕摩尔，5mol % )，XPhos(21mg，0.044 晕摩尔，IOmol % )和 K2CO3 (243mg，L 76毫摩尔，4当量）在叔-BuOH(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰 性气氛下搅拌20小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用 水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供 3-((3-(N-(3-(二乙基氨基）丙基）氨横酰基）苯基）氨基）-N-( R比啶_4_基）苯甲酰胺 (5) (97mg,46% ) 〇
[0203] 实施例4 :表1化合物（6)
[0204] 根据途径（B)，将4-氨基吡啶（2. lg，22毫摩尔，I. 1当量）置于3N NaOH水溶液 (28mL)，将二氯甲烷（12mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加3-硝基苯甲酰 氯（3. 7g，20毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（20mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。过滤所得沉淀，用水和二氯甲烷洗涤，提供3-硝基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（2. 4g，50% )。
[0205] 1H NMR (300MHz，d6-DMS0) δ 10.98 (s，lH)，8.80 (s，lH)，8.51 (d，J = 6·2Ηζ，2H)， 8.47(d，J = 7.9Hz，lH)，8.42(d，J = 7.9Hz，lH)，7.86(t，J = 7.9Hz，lH)，7.80(d，J = 6. 2Hz，2H) 〇
[0206] 根据途径（C)，将3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（lg，4.1毫摩尔，I当量） 和10% Pd/C(150mg)置于Et0H(30mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（660mg，75% )。
[0207] 1H NMR(300MHz，DMS0) δ 10. 46(s，1H)，8. 45(dd，J = 5. 0,1. 3Hz，2H)，7. 77(dd，J = 5· 0,1. 3Hz，2H)，7· 17(t，J = 7. 9Hz，1H)，7· 12-7. 03(m，2H)，6· 77(dd，J = 7· 9,1. 2Hz，1H)， 5. 38(s，2H) 〇
[0208] 将3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙胺（I. 9mL，11毫摩尔，I. 1当量）置于3N NaOH水溶 液（HmL)，将二氯甲烷（6mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加3-溴苯甲 酰氯（I. 3mL，10毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（IOmL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下 搅拌反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩， 提供3-溴-N-(4-甲基哌嗪-1-基-丙基）苯甲酰胺（2. 7g，80% )。
[0209] 1H NMR (300MHz，CDCl3) δ 8.61 (br s，1H)，7.92 (s，lH)，7.82 (d，J = 7·9Ηζ，1H)， 7. 62 (d，J = 7. 9Hz，1H)，7. 32 (t，J = 7. 9Hz，1H)，3. 57 (q，J = 5. 2Hz，2H)，2. 79-2. 35 (m， 10H)，2. 33 (s，3H)，I. 78 (五重峰，J = 5. 2Hz，2H)。
[0210] 根据途径（A)，将3-溴-N- (4-甲基哌嗪-I-基-丙基）苯甲酰胺（170mg， 0.5毫摩尔，1当量），3_氨基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（117mg，0.55毫摩尔，I. 1当 量），Pd2 (dba) 3 (23mg，0· 025 晕摩尔，5mol % )，XPhos (24mg，0· 05 晕摩尔，IOmol % )和 K2C03(276mg，2毫摩尔，4当量）在叔-Bu0H(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性 气氛下搅拌20小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用 水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供 N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-3-((3-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰 胺（6) (52mg，22% )。
[0211] 实施例5 :表1化合物（7)
[0212] 根据途径（B)，将4-氨基吡啶（4. 2g，44毫摩尔，I. 1当量）置于3N NaOH水溶液 (56mL)，将二氯甲烷（24mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至(TC，滴加3-硝基苯甲酰 氯（7. 4g，40毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（40mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。过滤所得沉淀，用水和二氯甲烷洗涤，提供3-硝基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（2. 5g，26% )。
[0213] 1H NMR (300MHz，d6-DMS0) δ 10.91 (s，lH)，8.80 (s，lH)，8.52 (d，J = 5·5Ηζ，2H)， 8.47(d，J = 7.9Hz，lH)，8.41(d，J = 7.9Hz，lH)，7.86(t，J = 7.9Hz，lH)，7.79(d，J = 5. 3Hz，2H) 〇
[0214] 根据途径（C)，将3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（I. 5g，6.2毫摩尔，I当量） 和10% Pd/C(250mg)置于Et0H(50mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（1.24g，94% )。
[0215] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 10. 44(s，1H)，8. 44(d，J = 6. 3Hz，2H)，7. 77(d，J = 6· 3Hz，2H)，7· 18(t，J = 7. 9Hz，1H)，7· 12-7. 03(m，2H)，6· 78(d，J = 7. 9Hz，1H)，5· 38(s， 2H) 〇
[0216] 将3-(哌啶-I-基）丙胺（I. 7mL，11毫摩尔，I. I当量）置于3N NaOH水溶液 (HmL)，将二氯甲烷（6mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至(TC，滴加3-溴苯甲酰氯 (1.3mL，10毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（IOmL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩，提供 3-溴-N-(哌啶-1-基-丙基）苯甲酰胺（3. 24g，100% )。
[0217] 4匪1?(30(^泡，〇)(：13)3 9.02(8，1!1)，7.97(8，1!1)，7.83((1，】=7.9泡，1!1)， 7. 60(d，J = 7. 9Hz，1H)，7. 31(t，J = 7. 9Hz，1H)，3. 56(dd，J = 9· 8,4· 8Hz，2H)，2. 53(t，J =4. 8Hz，，2Η)，2· 44(s，4H)，I. 76(t，J = 4· 8Hz，2H)，I. 62(t，J = 4· 8Hz，4H)，I. 50(s，2H)。
[0218] 根据途径（A)，将3-溴-N-(哌啶-I-基-丙基）苯甲酰胺（162mg，0. 5毫摩尔，I当 量），3-氨基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（I 17mg，0· 55毫摩尔，I. 1当量），Pd2 (dba) 3 (23mg， 0· 025 晕摩尔，5mol % )，XPhos (24mg，0· 05 晕摩尔，IOmol % )和 K2CO3 (276mg，2 晕摩尔，4 当量）在叔_Bu0H(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性气氛下搅拌20小时。然 后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用水洗涤，在MgSO 4I干燥， 过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供N-(3-(哌啶-1-基）丙 基） _3_((3-(吡啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰胺（7) (115mg，50% )。
[0219] 实施例6 :表1化合物（20)
[0220] 根据途径（D)，将4_(甲基氨基）吡啶（1.25g，11.6毫摩尔，1.0当量），3_硝基苯 甲酰氯（2. 57g，13. 9毫摩尔，1. 2当量），N，N-二异丙基乙胺（3. 02mL，17. 3毫摩尔，1. 5当 量）和二甲基氨基吡啶（103mg，1. 41毫摩尔，1当量）在二氯甲烷（25mL)中的反应混合物 在室温下在氩惰性气氛下搅拌18小时。有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓 缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供N-甲基-3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯 甲酰胺（2.96g，100% )。
[0221] 1H NMR(300MHz，CDC13) S8.50(dd，J = 4.6，1.6Hz，2H)，8.25(s，lH)，8.21(d，J = 7. 9Hz，1H)，7· 62(d，J = 7. 9Hz，1H)，7· 45(t，J = 7. 9Hz，1H)，6· 98(dd，J = 4· 6,1. 6Hz，2H)， 3· 56(s，3H) 〇
[0222] 根据途径（〇,将N-甲基-3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（2. 96g，ll. 5毫摩 尔，1当量）和10% Pd/C(450mg)置于EtOH(IOOmL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物 16小时。然后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-甲 基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（2. 5g，96% )。
[0223] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 8. 40(dd，J = 4. 6,1. 6Hz，2H)，7. 14(dd，J = 4. 6， 1.6Hz，2H)，6.89(t，J = 7.9Hz，lH)，6.59(s，lH)，6.53(d，J = 7.9Hz，lH)，6.34(d，J = 7. 9Hz，1H)，5. 22 (s，2H)，3. 37 (s，3H)。
[0224] 将3-(4-甲基哌嗪-I-基）丙胺（I. 9mL，11毫摩尔，I. I当量）置于3N NaOH水溶 液（HmL)，将二氯甲烷（6mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加3-溴苯甲 酰氯（I. 3mL，10毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（IOmL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下 搅拌反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩， 提供3-溴-N-(4-甲基哌嗪-1-基-丙基）苯甲酰胺（2. 7g，80% )。
[0225] 1H NMR (300MHz，CDCl3) δ 8.61 (br s，1H)，7.92 (s，lH)，7.82 (d，J = 7·9Ηζ，1H)， 7. 62 (d，J = 7. 9Hz，1H)，7. 32 (t，J = 7. 9Hz，1H)，3. 57 (q，J = 5. 2Hz，2H)，2. 79-2. 35 (m， 10H)，2. 33 (s，3H)，I. 78 (五重峰，J = 5. 2Hz，2H)。
[0226] 根据途径（A)，将3-溴-N_(4-甲基哌嗪-I-基-丙基）苯甲酰胺（170mg，0.5 毫摩尔，1当量），3_氨基-N-甲基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（125mg，0. 55毫摩尔，I. 1 当量），Pd2 (dba) 3 (23mg，0· 025 晕摩尔，5mol % )，XPhos (24mg，0· 05 晕摩尔，IOmol % )和 K2CO3 (276mg，2毫摩尔，4当量）在叔-BuOH(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性气 氛下搅拌20小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用水洗 涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供N-甲 基-3-((3-((3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（20) (34mg，14% )。
[0227] 实施例7 :表1化合物（25)
[0228] 根据途径（E)，将4-氨基嘧啶（885mg，9.3毫摩尔，I. 1当量），3_硝基苯甲酸 (l·4g，8·4毫摩尔，l当量），EDCLHCl(2·4g，12·6毫摩尔，L5当量），三乙胺（L3mL，9·3 毫摩尔，I. 1当量）和二甲基氨基吡啶（103mg，0.8毫摩尔，0· 1当量）在二氯甲烷（IOmL) 中的反应混合物在室温下在氩惰性气氛下搅拌18小时。过滤所得沉淀，用水和二氯甲烷洗 涤。减压浓缩有机滤液，所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化。合并先前的沉淀和纯化 的化合物，提供3-硝基-N-(嘧啶-4-基）苯甲酰胺（I. 35g，66% )。
[0229] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 11. 69(s，1H)，8. 99(s，1H)，8. 83(s，1H)，8. 76(d，J = 5. 6Hz，1H)，8· 50-8. 40(m，2H)，8· 22(dt，J = 5· 6,1. 2Hz，1H)，7· 83(t，J = 7. 9Hz，1H)。
[0230] 根据途径（C)，将3-硝基-N-(嘧啶-4-基）苯甲酰胺（I. 35g，5.5毫摩尔，1当量） 和10% Pd/C(303mg)置于Et0H(30mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-(嘧啶-4-基） 苯甲酰胺（1.2g，100% )。
[0231] 1H NMR(300MHz, (I6-DMSO) δ 10. 93 (br s, 1H), 8. 92 (dd, J = I. 3,0. 5Hz, 1H), 8. 69(dd，J = 5· 8,0· 5Hz，1H)，8· 18(dd，J = 5· 8,1. 3Hz，1H)，7· 20-7. 12(m，3H)，6· 78(dt，J =4· 1，2· 3Hz，1Η)，5· 35(s，2H)。
[0232] 将Ν，Ν-二乙基丙二胺（8· 7mL，55毫摩尔，I. 1当量）置于3Ν NaOH水溶液（71mL)， 将二氯甲烷（30mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加3-溴苯甲酰氯 (6. 6mL，50毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（50mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩，提供 3-溴-N-(3-二乙基氨基-丙基）苯甲酰胺（15. 6g，100% )。
[0233] 1H 匪R(300MHz，CDCl3) δ9· 15(br s，lH)，7.91(s，lH)，7.75(d，J = 7·9Ηζ， lH)，7.58(d，J = 7.9Hz，lH)，7.29(t，J = 7.9Hz，lH)，3.56(dd，J = 10·3,5·8Ηζ，2Η)， 2. 67-2. 53(m，6H)，I. 74(五重峰，J = 5. 7Hz，2H)，I. 04(t，J = 7· 1Ηz，6Η)。
[0234] 根据途径（A)，将3_溴-N- (3-二乙基氨基-丙基）苯甲酰胺（156mg，0· 5 毫摩尔，1当量），3_氨基-N-(嘧啶-4-基）苯甲酰胺（118mg，0.55毫摩尔，LI当 量），Pd 2 (dba) 3 (23mg，0· 025 晕摩尔，5mol % )，XPhos (24mg，0· 05 晕摩尔，IOmol % )和 K2CO3 (276mg，2毫摩尔，4当量）在叔-BuOH(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性气 氛下搅拌20小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用水洗 涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供N-甲 基-3-((3-((3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（25) (16mg，7% )。
[0235] 实施例8 :表1化合物（31)
[0236] 根据途径（E)，将4-氨基嘧啶（1.0g，10. 5毫摩尔，1当量），3_硝基苯甲酸（1.76g， 10. 5 晕摩尔，1 当量），EDCI. HCl (3. 0g，15. 8 晕摩尔，L 5 当量），二乙胺（I. 6mL，11. 6 晕摩 尔，I. 1当量）和二甲基氨基吡啶（129mg，1.05毫摩尔，0· 1当量）在二氯甲烷（12mL)中的 反应混合物在室温下在氩惰性气氛下搅拌18小时。过滤所得沉淀，用水和二氯甲烷洗涤。 减压浓缩有机滤液，所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化。合并先前的沉淀和纯化的化 合物，提供3-硝基-N-(嘧啶-4-基）苯甲酰胺（2. 5g，97% )。
[0237] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 11. 69(s，1H)，9. 00(s，1H)，8. 83(t，J = 2. 0Hz，1H)， 8.77(d，J = 5.7Hz，lH)，8.51-8.41(m，2H)，8.22(dd，J = 5.7，l.lHz，lH)，7.84(t，J = 8. 0Hz，1H)。
[0238] 根据途径（C)，将3-硝基-N-(嘧啶-4-基）苯甲酰胺（3. 3g，13. 5毫摩尔，I当量） 和10% Pd/C(719mg)置于Et0H(50mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-(嘧啶-4-基） 苯甲酰胺（1.6g，55% )。
[0239] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 10. 94(s，1H)，8. 92(dd，J = 1. 3,0· 5Hz，1H)，8. 69(dd， J = 5· 8,0· 5Hz，1H)，8· 18(dd，J = 5· 8,1. 3Hz，1H)，7· 20-7. 10(m，3H)，6· 78(dt，J = 4· 1， 2· 3Hz，1Η)，5· 35(s，2H)。
[0240] 将3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙胺（I. 9mL，11毫摩尔，I. 1当量）置于3Ν NaOH水溶 液（HmL)，将二氯甲烷（6mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加3-溴苯甲 酰氯（I. 3mL，10毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（IOmL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下 搅拌反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩， 提供3-溴-N-(4-甲基哌嗪-1-基-丙基）苯甲酰胺（2. 7g，80% )。
[0241] 1H NMR (300MHz，CDCl3) δ 8.61 (br s，1H)，7.92 (s，lH)，7.82 (d，J = 7·9Ηζ，1H)， 7. 62 (d，J = 7. 9Hz，1H)，7. 32 (t，J = 7. 9Hz，1H)，3. 57 (q，J = 5. 2Hz，2H)，2. 79-2. 35 (m， 10H)，2. 33 (s，3H)，I. 78 (五重峰，J = 5. 2Hz，2H)。
[0242] 根据途径（A)，将3-溴-N- (4-甲基哌嗪-I-基-丙基）苯甲酰胺（576mg， 1.7毫摩尔，1当量），3_氨基-N-(嘧啶-4-基）苯甲酰胺（400mg，1.87毫摩尔，I. 1当 量），Pd2 (dba) 3 (78mg，0· 085 晕摩尔，5mol % )，XPhos (81mg，0· 17 晕摩尔，IOmol % )和 K2CO3 (940mg，6. 8毫摩尔，4当量）在叔-BuOH(7mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性 气氛下搅拌20小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用 水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供 N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-3-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰 胺（31) (54mg，7% )。
[0243] 实施例9 :表1化合物（35)
[0244] 根据途径（B)，将4-氨基吡啶（2. lg，22毫摩尔，I. 1当量）置于3N NaOH水溶液 (28mL)，将二氯甲烷（12mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加3-硝基苯甲酰 氯（3. 7g，20毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（20mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。过滤所得沉淀，用水和二氯甲烷洗涤，提供3-硝基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（2. 4g，50% )。
[0245] 1H NMR (300MHz，d6-DMS0) δ 10.98 (s，lH)，8.80 (s，lH)，8.51 (d，J = 6·2Ηζ，2H)， 8.47(d，J = 7.9Hz，lH)，8.42(d，J = 7.9Hz，lH)，7.86(t，J = 7.9Hz，lH)，7.80(d，J = 6. 2Hz，2H) 〇
[0246] 根据途径（C)，将3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（lg，4.1毫摩尔，I当量） 和10% Pd/C(150mg)置于Et0H(30mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（660mg，75% )。
[0247] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 10. 46(s，1H)，8. 45(dd，J = 5. 0,1. 3Hz，2H)，7. 77(dd， J = 5· 0,1. 3Hz，2H)，7· 17(t，J = 7. 9Hz，1H)，7· 12-7. 03(m，2H)，6· 77(dd，J = 7· 9,1. 2Hz， 1H)，5· 38(s，2H) 〇
[0248] 将6-氯-吡啶-2-羧酸（4. 4g，27. 9毫摩尔，I当量）置于氩惰性气氛下。缓慢加 入亚硫酰氯（8. lmL，111. 6毫摩尔，4当量）。在回流加热反应混合物和搅拌48小时。在冷 却至室温后，减压浓缩反应混合物。将N，N-二乙基丙二胺（2. 5mL，15. 7毫摩尔，I. 1当量） 置于3N NaOH水溶液（20mL)，将二氯甲烷（IOmL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至 〇°C，滴加6-氯-吡啶-2-碳酰氯残余物（2. 5g，14. 3毫摩尔，1当量）in二氯甲烷（13mL) 溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗 绦，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩，提供6-氯-吡啶-2-羧酸（3-二乙基氨基-丙基） 酰胺（2.7g，70% )。
[0249] 4匪1?(30010^，0)(：13)3 9.22(8，1!1)，8.10((1，】=7.9泡，1!1)，7.77(扒】= 7.9Hz，lH)，7.40(d，J = 7·9Ηζ，1H)，3.53 (dd，J = 12.1，5·8Ηζ，2H)，2. 65-2. 49 (m，6H)， I. 82-1. 68(m，2H)，I. 06(t，J = 7. lHz，6H)。
[0250] 根据途径（A)，将6_氯-吡啶_2_羧酸（3-二乙基氨基-丙基）酰胺（135mg， 0.5毫摩尔，1当量），3_氨基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（117mg，0.55毫摩尔，I. 1当 量），Pd2 (dba) 3 (23mg，0· 025 晕摩尔，5mol % )，XPhos (24mg，0· 05 晕摩尔，IOmol % )和 K2C03(276mg，2毫摩尔，4当量）在叔-Bu0H(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性 气氛下搅拌20小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀 释。有机相用 水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供 N-(3-(二乙基氨基）丙基）_6_( (3-(吡啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）吡啶酰胺（35) (79mg，35% )。
[0251] 实施例10 :表1化合物（39)
[0252] 根据途径（D)，将4_(甲基氨基）吡啶（1.25g，11.6毫摩尔，1.0当量），3_硝基苯 甲酰氯（2. 57g，13. 9毫摩尔，1. 2当量），N，N-二异丙基乙胺（3. 02mL，17. 3毫摩尔，1. 5当 量）和二甲基氨基吡啶（103mg，1. 41毫摩尔，1当量）在二氯甲烷（25mL)中的反应混合物 在室温下在氩惰性气氛下搅拌18小时。有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓 缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供N-甲基-3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯 甲酰胺（2.96g，100% )。
[0253] 1H NMR(300MHz，CDC13) S8.50(dd，J = 4.6，1.6Hz，2H)，8.25(s，lH)，8.21(d，J = 7. 9Hz，1H)，7· 62(d，J = 7. 9Hz，1H)，7· 45(t，J = 7. 9Hz，1H)，6· 98(dd，J = 4· 6,1. 6Hz，2H)， 3· 56(s，3H) 〇
[0254] 根据途径（〇,将N-甲基-3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（2. 96g，ll. 5毫摩 尔，1当量）和10% Pd/c(450mg)置于EtOH(IOOmL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物 16小时。然后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-甲 基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（2. 5g，96% )。
[0255] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 8. 40(dd，J = 4. 6,1. 6Hz，2H)，7. 14(dd，J = 4. 6， 1.6Hz，2H)，6.89(t，J = 7.9Hz，lH)，6.59(s，lH)，6.53(d，J = 7.9Hz，lH)，6.34(d，J = 7. 9Hz，1H)，5. 22 (s，2H)，3. 37 (s，3H)。
[0256] 在氩惰性气氛下将2-氯-异烟酸（2. 0g，12. 7毫摩尔，I当量）置于乙腈（25. 4mL) 中。缓慢加入亚硫酰氯（1.2mL，16. 5毫摩尔，1.3当量）和DMF (100 μ L，1.27毫摩尔，0. 1当 量）。反应混合物在回流下加热和搅拌1小时。在冷却至室温后，减压浓缩反应混合物。将 3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙胺（2. 7mL，15. 7毫摩尔，L 2当量）置于3Ν NaOH水溶液（20mL)， 将二氯甲烷（IOmL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加2-氯-异烟酰氯残 余物（12. 7毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（13mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩，提供 2-氯-N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基）-丙基]-异烟酰胺（1.8g，43% )。
[0257] 1H NMR(300MHz，CDC13) S9.03(s，lH)，8.51(d，J = 4.9Hz，lH)，7.71-7.64(m，2H)， 3· 58 (dd，J = 10. 8, 5. 0Hz，2H)，2· 66-2. 40 (m，10H)，2· 32 (s，3H)，I. 84-1. 73 (m，2H)。
[0258] 根据途径（A)，将2-氯-N-[3-(4-甲基-哌嗪-I-基）-丙基]-异烟酰胺（148mg， 0. 5毫摩尔，1当量），3_氨基-N-甲基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（125mg，0. 55毫摩尔， 1. 1 当量），Pd2 (dba) 3 (23mg，0· 025 晕摩尔，5mol % )，XPhos (24mg，0· 05 晕摩尔，IOmol % ) 和K2CO3 (276mg，2毫摩尔，4当量）在叔-BuOH(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰 性气氛下搅拌20小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用 水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供 2-((3-(甲基（吡啶-4-基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙 基）异烟酰胺（39) (43mg，18% )。
[0259] 实施例11 :表1化合物（41)
[0260] 根据途径（E)，将4-氨基嘧啶（885mg，9.3毫摩尔，I. 1当量），3_硝基苯甲酸 (l·4g，8·4毫摩尔，l当量），EDCLHCl(2·4g，12·6毫摩尔，L5当量），三乙胺（L3mL，9·3 毫摩尔，I. 1当量）和二甲基氨基吡啶（103mg，0.8毫摩尔，0· 1当量）在二氯甲烷（IOmL) 中的反应混合物在室温下在氩惰性气氛下搅拌18小时。过滤所得沉淀，用水和二氯甲烷洗 涤。减压浓缩有机滤液，所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化。合并先前的沉淀和纯化 的化合物，提供3-硝基-N-(嘧啶-4-基）苯甲酰胺（I. 35g，66% )。
[0261] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 11. 69(s，1H)，8. 99(s，1H)，8. 83(s，1H)，8. 76(d，J = 5. 6Hz，1H)，8· 50-8. 40(m，2H)，8· 22(dt，J = 5· 6,1. 2Hz，1H)，7· 83(t，J = 7. 9Hz，1H)。
[0262] 根据途径（C)，将3-硝基-N-(嘧啶-4-基）苯甲酰胺（I. 35g，5.5毫摩尔，1当量） 和10% Pd/C(303mg)置于Et0H(30mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-(嘧啶-4-基） 苯甲酰胺（1.2g，100% )。
[0263] 1H NMR(300MHz, (I6-DMSO) δ 10. 93 (br s, 1H), 8. 92 (dd, J = I. 3,0. 5Hz, 1H), 8. 69(dd，J = 5· 8,0· 5Hz，1H)，8· 18(dd，J = 5· 8,1. 3Hz，1H)，7· 20-7. 12(m，3H)，6· 78(dt，J =4· 1，2· 3Hz，1Η)，5· 35(s，2H)。
[0264] 在氩惰性气氛下将2-氯-异烟酸（2. 0g，12.7毫摩尔，1当量）置于乙腈 (25. 4mL)。缓慢加入亚硫酰氯（I. 2mL，16. 5毫摩尔，1. 3当量）和DMF (100 μ L，1. 27毫摩尔， 0.1当量）。反应混合物在回流下加热和搅拌1小时。在冷却至室温后，减压浓缩反应混合 物。将N，N-二乙基丙二胺（2. 5mL，15. 7毫摩尔，I. 2当量）置于3N NaOH水溶液（20mL)， 将二氯甲烷（IOmL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加2-氯-异烟酰氯残 余物（12. 7毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（13mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩，提供 2-氯-N-(3-二乙基氨基-丙基）异烟酰胺（I. 8g，47% )。
[0265] $匪1?(30(^泡，0)(：13)3 9.62(8，1!1)，8.49((1，了 = 5.0取，1!〇,7.66(8，1!1)， 7. 58(d，J = 5. 1Hz，1H)，3. 59(dd，J = 10. 4,5· 0Ηζ，2Η)，2· 70-2. 55(m，6H)，1. 81-1. 72(m， 2H)，I. 06(t，J = 7· 1Ηz，6Η)。
[0266] 根据途径（A)，将2-氯-N- (3-二乙基氨基-丙基）异烟酰胺（135mg，0· 5 毫摩尔，1当量），3_氨基-N-(嘧啶-4-基）苯甲酰胺（118mg，0.55毫摩尔，LI当 量），Pd 2 (dba) 3 (23mg，0· 025 晕摩尔，5mol % )，XPhos (24mg，0· 05 晕摩尔，IOmol % )和 K2C03(276mg，2毫摩尔，4当量）在叔-Bu0H(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性 气氛下搅拌20小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用 水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供 N-(3-(二乙基氨基）丙基）_2_( (3-(喃啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）异烟酰胺（41) (79mg，35% )。
[0267] 实施例12 :表1化合物（44)
[0268] 根据途径（E)，将4-氨基吡啶（837mg，8. 9毫摩尔，1.3当量），2-硝基-异烟酸 (I. 15g，6. 8毫摩尔，1当量），EDCI. HC1(1. 7g，8. 9毫摩尔，1.3当量），N，N-二异丙基乙胺 (3. OmL，17. 1毫摩尔，2. 5当量）和二甲基氨基吡啶（272mg，2. 2毫摩尔，0.25当量）在二 氯甲烷（7mL)中的反应混合物在室温下在氩惰性气氛下搅拌18小时。有机相用水洗涤， 在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供2-硝 基-N-吡啶-4-基-异烟酰胺（835mg，50 % )。
[0269] 屮匪1?(30(^取，]\^00)3 8.86-8.80(111，2!〇,8.50((1(1，了 = 5.0，1.6取，2!〇， 8. 31 (dd，J = 4. 8,1. 5Hz，1H)，7. 88 (dd，J = 5. 0,1. 6Hz，2H)。
[0270] 根据途径（C)，将2-硝基-N-吡啶-4-基-异烟酰胺（835mg，3· 4毫摩尔，I当量） 和10% Pd/C(150mg)置于Et0H(50mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗漆，减压浓缩滤液，提供2_氛基-N-吡啶 _4_基-异 烟酰胺（727mg，99% )。
[0271] 1H NMR (300MHz，d6-DMS0) δ 10.61 (s，lH)，8.48 (dd，J = 4. 8,1·5Ηζ，2H)，8.07 (d，J =5.3Hz，lH)，7.75(dd，J = 4.8，1.5Hz，2H)，6.91(d，J = 5.3Hz，lH)，6.86(s，lH)，6.28(s， 2H) 〇
[0272] 在氩惰性气氛下，将2-氯-异烟酸（2. 0g，12. 7毫摩尔，I当量）置于乙腈 (25. 4mL)中。缓慢加入亚硫酰氯（I. 2mL，16. 5毫摩尔，1. 3当量）和DMF(K)O μ L，1. 27毫 摩尔，〇. 1当量）。反应混合物在回流下加热和搅拌1小时。在冷却至室温后，减压浓缩反 应混合物。将Ν，N-二乙基丙二胺（2. 5mL，15. 7毫摩尔，1. 2当量）置于3Ν NaOH水溶液 (20mL)，将二氯甲烷（IOmL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加2-氯-异烟 酰氯残余物（12. 7毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（13mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛 下搅拌反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩， 提供2-氯-N-(3-二乙基氨基-丙基）异烟酰胺（I. 8g，47% )。
[0273] $匪1?(30(^泡，0)(：13)3 9.62(8，1!1)，8.49((1，了 = 5.0取，1!〇,7.66(8，1!1)， 7. 58(d，J = 5. 1Hz，1H)，3. 59(dd，J = 10. 4,5· 0Ηζ，2Η)，2· 70-2. 55(m，6H)，1. 81-1. 72(m， 2H)，I. 06(t，J = 7· 1Ηz，6Η)。
[0274] 根据途径（A)，将2-氯-N-(3-二乙基氨基-丙基）异烟酰胺（135mg，0· 5晕摩尔，I 当量），2-氨基-N-吡啶-4-基-异烟酰胺（I 18mg，0· 55毫摩尔，I. 1当量），Pd2 (dba) 3 (23mg， 0· 025 晕摩尔，5mol % )，XPhos (24mg，0· 05 晕摩尔，IOmol % )和 K2CO3 (276mg，2 晕摩尔，4 当量）在叔_Bu0H(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性气氛下搅拌20小时。然 后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用水洗涤，在MgSO 4I干燥， 过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供N-(3-(二乙基氨基）丙 基）-2-((4-( P比啶_4_基氨基甲酰基）P比啶_2_基）氨基）异烟酰胺（44) (70mg，31 % )。
[0275] 实施例13 :表1化合物（47)
[0276] 根据途径（E)，将4-氨基吡啶（837mg，8. 9毫摩尔，1.3当量），2-硝基-异烟酸 (I. 15g，6. 8毫摩尔，1当量），EDCI. HC1(1. 7g，8. 9毫摩尔，1.3当量），N，N-二异丙基乙胺 (3. OmL，17. 1毫摩尔，2. 5当量）和二甲基氨基吡啶（272mg，2. 2毫摩尔，0.25当量）在二 氯甲烷（7mL)中的反应混合物在室温下在氩惰性气氛下搅拌18小时。有机相用水洗涤， 在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供2-硝 基-N-吡啶-4-基-异烟酰胺（835mg，50 % )。
[0277] 屮匪1?(30(^取，]\^00)3 8.86-8.80(111，2!〇,8.50((1(1，了 = 5.0，1.6取，2!〇， 8. 31 (dd，J = 4. 8,1. 5Hz，1H)，7. 88 (dd，J = 5. 0,1. 6Hz，2H)。
[0278] 根据途径（C)，将2-硝基-N-吡啶-4-基-异烟酰胺（835mg，3. 4毫摩尔，I当量） 和10 % Pd/C (150mg)置于EtOH (50mL)中。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗漆，减压浓缩滤液，提供2_氛基-N-吡啶 _4_基-异 烟酰胺（727mg，99% )。
[0279] 1H NMR (300MHz，d6-DMS0) δ 10.61 (s，lH)，8.48 (dd，J = 4. 8,1·5Ηζ，2H)，8.07 (d，J =5.3Hz，lH)，7.75(dd，J = 4.8，1.5Hz，2H)，6.91(d，J = 5.3Hz，lH)，6.86(s，lH)，6.28(s， 2H) 〇
[0280] 将N，N-二乙基丙二胺（8. 7mL，55毫摩尔，L I当量）置于3N NaOH水溶液（71mL)， 将二氯甲烷（30mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加3-溴苯甲酰氯 (6. 6mL，50毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（50mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩，提供 3-溴-N-(3-二乙基氨基-丙基）苯甲酰胺（14. 6g，94% )。
[0281] 1H NMR(300MHz，CDCl3) δ9· 16(br s，lH)，7.91(t，J = 1.8Hz，lH)，7.75(d，J = 7. 9Hz，1H)，7· 58(d，J = 7. 9Hz，1H)，7· 29(t，J = 7. 9Hz，1H)，3· 56(dd，J = 10. 1，5· 7Hz， 2H)，2. 72-2. 50(m，6H)，I. 75(五重峰，J = 5. 7Hz，2H)，I. 05(t，J = 7. lHz，6H)
[0282] 根据途径（A)，将3-溴-N-(3-二乙基氨基-丙基）苯甲酰胺（156mg，0.5毫摩尔，I 当量），2-氨基-N-吡啶-4-基-异烟酰胺（I 18mg，0· 55毫摩尔，I. 1当量），Pd2 (dba) 3 (23mg， 0· 025 晕摩尔，5mol % )，XPhos (24mg，0· 05 晕摩尔，IOmol % )和 K2CO3 (276mg，2 晕摩尔，4 当 量）在叔-BuOH(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性气氛下搅拌20小时。然后减 压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用水洗涤，在MgSO4上干燥，过滤 和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供2-((3-((3-(二乙基氨基）丙 基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基）异烟酰胺（47) (52mg，23% )。
[0283] 实施例14 :表1化合物（51)
[0284] 根据途径（E)，将4-氨基吡啶（1.57g，16. 7毫摩尔，1.3当量），2-硝基-异烟酸 (2. 16g，12. 9 毫摩尔，1 当量），EDCI. HCl (3. 69g，19. 3 毫摩尔，L 5 当量），N，N-二异丙基乙 胺（5. 3mL，32. 1毫摩尔，2. 5当量）和二甲基氨基吡啶（392mg，3. 2毫摩尔，0· 25当量）在 二氯甲烷（15mL)中的反应混合物在室温下在氩惰性气氛下搅拌18小时。有机相用水洗 涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供2-硝 基-N-吡啶-4-基-异烟酰胺（I. 68g，54% )。
[0285] 屮匪1?(30(^取，]\^00)3 8.86-8.80(111，2!〇,8.50((1(1，了 = 5.0，1.6取，2!〇， 8. 31 (dd，J = 4. 8,1. 5Hz，1H)，7. 88 (dd，J = 5. 0,1. 6Hz，2H)。
[0286] 根据途径（C)，将2-硝基-N-吡啶-4-基-异烟酰胺（I. lg，4. 5毫摩尔，I当量） 和10% Pd/C(240mg)置于Et0H(50mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗漆，减压浓缩滤液，提供2_氛基-N-吡啶 _4_基-异 烟酰胺（898mg，93% )。
[0287] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 10. 68(s，1H)，8. 48(d，J = 5. 9Hz，2H)，8. 07(d，J = 5. 2Hz，1H)，7· 77(d，J = 5· 9Hz，2H)，6· 93(d，J = 5. 2Hz，1H)，6· 87(s，1H)，6· 27(s，2H)。
[0288] 将3-(4-甲基哌嗪-I-基）丙胺（I. 9mL，11毫摩尔，I. I当量）置于3N NaOH水溶 液（HmL)，将二氯甲烷（6mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加3-溴苯甲 酰氯（I. 3mL，10毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（IOmL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下 搅拌反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩， 提供3-溴-N-(4-甲基哌嗪-1-基-丙基）苯甲酰胺（2. 7g，80% )。
[0289] 1H NMR (300MHz，CDCl3) δ 8.61 (br s，1H)，7.92 (s，lH)，7.82 (d，J = 7·9Ηζ，1H)， 7. 62 (d，J = 7. 9Hz，1H)，7. 32 (t，J = 7. 9Hz，1H)，3. 57 (q，J = 5. 2Hz，2H)，2. 79-2. 35 (m， 10H)，2. 33 (s，3H)，I. 78 (五重峰，J = 5. 2Hz，2H)。
[0290] 根据途径（A)，将3-溴-N- (4-甲基哌嗪-I-基-丙基）苯甲酰胺（123mg， 0. 36毫摩尔，1当量），2_氨基-N-吡啶-4-基-异烟酰胺（96mg，0. 45毫摩尔，I. 1当 量），Pd2 (dba) 3 (17mg，0· 018 晕摩尔，5mol % )，XPhos (17mg，0· 036 晕摩尔，IOmol % )和 K2CO3(200mg，L 44毫摩尔，4当量）在叔-BuOH(l. 4mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩 惰性气氛下搅拌48小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相 用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提 供2-((3-((3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基） 异烟酰胺（51) (34mg，20% )。
[0291] 实施例15 :药理学数据
[0292] 标准操作程序：
[0293] 药物化合物对MDA-MB231-D3H2LN细胞侵入胶原的效果
[0294] 背景：
[0295] 产生肿瘤转移的关键步骤是肿瘤细胞侵入细胞外基质，其主要组分是胶原。因此， 肿瘤细胞侵入体外胶原可以是体内产生转移的指征。例如，MDA-MB231-luc-D3H2LN小鼠乳 腺癌细胞与MDA-MB231细胞（它们由此衍生）相比确实显示较高的体外胶原侵入和较高的 体内转移能力。用这些MDA-MB231-luc-D3H2LN细胞作为模型，本文所述实验的目标是鉴定 抑制肿瘤细胞在体外侵入胶原，因此也潜在抑制体内产生肿瘤转移的药物化合物。
[0296] 测试原则：
[0297] 步骤1 :制备胶原凝胶底部的细胞：将细胞悬浮于液体胶原溶液（4°C )，分布入 BSA-包覆的孔，然后通过离心在孔底部收集。然后，通过在37°C温育固化胶原。BSA包衣改 善胶原凝胶的粘着。
[0298] 步骤2 :用待测试化合物进行预处理：然后，将浓缩的药物溶液加至胶原顶部，用 药物在低血清条件（0. 025% FBS)预温育细胞48小时。
[0299] 步骤3 :刺激侵入：然后，加入含5% FBS的培养基以刺激细胞侵入胶原凝胶。
[0300] 步骤4 :存活率测试、固定和染色：在额外24小时的温育之后，对胶原中的细胞直 接进行MTS测试。然后，固定细胞，染色细胞核。
[0301] 步骤5 :分析：最终，用自动化的显微镜分析板。已将荧光珠包括在BSA包衣中以 检测孔底部。染色细胞核的图片在相同水平（Oym)以及25 μπι和50 μπι以上取得。
[0302] Note ：
[0303] 为了检测可能毒性效果，在存活测定中平行地测试全部化合物。对血清饥饿细胞 (如侵入测定中）vs在普通培养条件（10% FBS)下的细胞平行地进行存活测定。
[0304] 物质：
[0305] 一般设备：冷冻器（_20°C)，冷藏器（4°C)，制冰机，水浴（37°C)，温育器 (37 °C /5 % CO2)，细胞培养罩，涡旋器，真空泵，显微镜，移液辅助器，微量吸管（移取 1-1000 μ 1)，多通道吸管（移取20-200 μ 1)，标准细胞培养离心机，用于96孔板的冷冻离心 机。
[0306] 一般消费品：无菌管（I. 5/15/50ml)，无菌吸管（5/10/25ml)，无菌微量吸管头（移 取1-1000 μ 1)，无菌巴斯德吸管，无菌试剂储库。
[0307] 一般产品：无菌PBS，无菌Milli-Q水，DMS0,去补体的FBS (冷冻的等分试样）， 0.1 N NaOH，IM H印es，不含血清的ΜΕΜ(不超过1个月），2. 5χ不含血清的ΜΕΜ(不超过1个 月），含10% FBS的ΜΕΜ(不超过1个月），0. 25%胰蛋白酶/ImM EDTA溶液，37%甲醛溶液。
[0308] 特定设备：
[0309] 读板器：Tecan Infinite F200
[0310] 自动化显微镜：Cellomics ArrayScan Vti HCS Reader
[0311] 特定消费品：
[0312] 无菌96孔黑板（用于侵入测定）：Perkin Elmer ViewPlate_96F TC，ref. 6005225
[0313] 特定产品：
[0314] 大鼠尾部胶原，类型I :BD Biosciences，ref. 354236 (注意：各新批次必须经确 证）
[0315] 红色焚光珠 （1 μ m 直径）：Invitrogen，ref. F13083
[0316] Y-27632(5mM 水溶液）：Calbiochem，ref. 688001 (溶液中）或 688000(无水粉末）
[0317] 不含脂肪酸的BSA (无菌过滤的4%水溶液）：Sigma，ref. A8806 (无水粉末）
[0318] Hoechst 33342 核染色（lOmg/ml) :Invitrogen，ref. H3570
[0319] MTS 试剂：Promega CellTiter CellTiter 96* AQueous 〇ηθ Solution Reagent， ref. G3581
[0320] 待测试的药物化合物：一般为50mM的100% DMSO溶液（等分试样储存于_20°C， 然后在4°C储存最长3个月）
[0321] MDA-MB231-luc-D3H2LN 细胞：
[0322] 待用于测定中的细胞培养物的限制：
[0323] 总传代数：最多30
[0324] 最后传代：之前2至4天，比例1:3至1:20
[0325] 细胞密度：50至90% (最优为70% ) (1至2x 106细胞每IOOmm碟）
[0326] 实验程序：
[0327] 一般考虑：对照和板图样：
[0328] 阴性对照：无药物（仅等价浓度的DMS0)。阳性对照：10 μ M Y-27632。为了避免 边缘效果，仅将细胞加至60个中央孔B2-G11 ;行A和H仅接受不含细胞的胶原（用于MTS 测试的空白），列1和12保持空置。各药物测试至少重复三次。阳性对照和阴性对照应在 各板上不同位置进行数批重复三次的测试。典型板图（_=阴性对照，+=阳性对照，1-12 =12种不同试验条件，即不同的药物化合物或浓度）：
[0329]
[0330] 下文指出的体积或其它量是根据上文板图的四个96孔板所需要的。根据测试化 合物的个数，应调整体积和其它量。
[0331] 第1天：细胞的制备和处理（在细胞培养箱中进行全部步骤）：
[0332] 制备 ΜΕΜ+0. 1 % FBS+2 % Lutrol Ε-400+0. 8 % DMSO 中的 4χ 浓缩的药物溶液：将各 620 μ I ΜΕΜ+0. 1 % FBS+2 % Lutrol Ε-400 与各 4 μ I DMSO+ 各 1 μ 1 的 50mM化合物储备溶液 混合（产生20 μ M化合物和0. 8% DMS0)。如果所希望的最终的化合物浓度〈5 μ M，则进一步 在 ΜΕΜ+0. 1% FBS+0. 8% DMSO 中稀释。阴性对照：ΜΕΜ+0. 1% FBS+2% Lutrol Ε-400+0. 8% DMS0,不含任何药物。制备阳性对照：将4.5ml ΜΕΜ+0. l%FBS+2%Lutrol E-400+0.8%FBS 与36 μ I 5mM Y-27632 (新鲜解冻的等分试样）（产生40 μ Μ)。
[0333] 将板包衣用于侵入测定：
[0334] 混合381111不含血清的1^1+211114%不含脂肪酸的834+4以1涡流搅拌荧光珠（也 即稀释1:10000)，涡旋器，分布100 μ 1/孔至用于侵入测定的板中
[0335] 在 4°C用 1800x g 离心 30'（例如 3000rpm，Jouan GR412 离心机）
[0336] 通过吸取除去上清液
[0337] 制备IOx IO6细胞/ml细胞悬浮液（在板离心期间）：
[0338] 除去培养基，用~IOml/碟PBS洗涤细胞，加入1ml/碟0.25%胰蛋白酶/ImM EDTA
[0339] 在 37°C温育 30-60s
[0340] 加入 5-10ml/ 碟预温热的 MEM+10% FBS
[0341] 用IOml移液管通过上下移取进行匀化，全部混合
[0342] 计数细胞
[0343] 在RT用150x g离心3x 106(或更多）细胞5'，（850rpm，std细胞培养物离心机 中）
[0344] 除去上清液，将细胞粒再悬浮于0. 3ml (或更多，分别）不含血清的MEM中，产生 IOx IO6细胞/ml
[0345] 侵入测定的准备（在冰上；在离心细胞期间开始）：
[0346] 在预冷却的管中在冰上混合：例如4. 01mg/ml胶原储备溶液；根据各胶原批次的 储备浓度调节胶原和水的体积：
[0347] 16ml 2. 5x MEM
[0348] 5. 452ml 水
[0349] 0. 8ml IM Hepes
[0350] 0. 39ml IN NaOH
[0351] 16. 958ml 4. Olmg/ml 胶原储备溶液
[0352] 通过温和上下移取来匀化（保持在冰上）。
[0353] 向29. 7ml上述混合物加入300 μ 1的IOx IO6细胞/ml的细胞悬浮液，通过温和上 下移取来匀化（产生O.lx IO6细胞/ml，在1.7mg/ml胶原中，在30ml 1χΜΕΜ+20μΜΗ印es 中）（保持在冰上）。向剩余的9. 9ml加入不含血清的100 μ I MEM，通过温和上下移取来匀 化（产生I. 7mg/ml胶原，在IOml Ix ΜΕΜ+20 μ M H印es中，不含细胞）（保持在冰上）。
[0354] 将100 μ 1/孔分布入包覆的孔中（全部在冰上），根据上文的板图（行A和H :不 含细胞的胶原，线B-G :含细胞的胶原：10000细胞/孔）
[0355] 在 4°C用 200x g 离心 5'（例如 lOOOrpm，Jouan GR412 离心机）
[0356] 将200 μ 1/孔PBS加至全部空置的孔（列1和12)
[0357] 在37°C /5% CO2温育30'（固化胶原）
[0358] 用药物处理：
[0359] 将各 33 μ 1/孔的 ΜΕΜ+0. 1% FBS+2% Lutrol E-400+0. 8% DMSO 中的 4x 浓缩的药 物溶液加至相应的孔中（最终产生ΜΕΜ+0. 025% FBS+0. 5% Lutrol E-400+0. 2% DMSO中的 Ix浓缩的药物）
[0360] 在 37°C /5% CO2温育 48 小时
[0361] 第3天：加入FBS以刺激侵入：
[0362] 制备MEM+5 % FBS : 19ml不含血清的MEM+lml FBS (新鲜解冻等分试样）
[0363] 将33 μ 1/孔加至全部孔
[0364] 在 37°C /5% CO2温育 24 小时
[0365] 第4天：存活率测试，固定和染色：
[0366] 存活率测试：MTS测试：
[0367] 将各33 μ 1/孔的MTS试剂，在37°C /5% CO2温育3-4小时
[0368] 于490nm读取吸光度（与存活率成比例）
[0369] 通过将不存在细胞的背景信号的平均值自在细胞存在下的相应信号减去来计算 经背景校正的信号
[0370] 相对阴性对照（无药物）的平均信号将经背景校正的信号归一化（从而存活率以 〃％对照〃表达）
[0371] 固定和染色（甲醛必须在通风橱中操作）：
[0372] 新鲜制备 18. 5 % 甲酸中的 1 μ g/ml Hoechst 33342 : IOml PBS (不一定无 菌）+10ml 37% 甲酸+2μ1 10mg/ml Hoechst 33342
[0373] 将50 μ 1/孔加至全部含细胞的孔（最终产生3· 7%甲醛）
[0374] 用黑膜封口（随板提供）
[0375] 在RT温育至少7小时
[0376] 第5天（一般）：（在固定和染色之后最短7小时/最长2周）：分析侵入测试：
[0377] 用 Cellomics ArrayScan Vn HCS Reader 不范：
[0378] BioApplication ：SpotDetector. V3
[0379] 板型：Perkin Elmer 96 孔
[0380] 测试方案的参数：
[0381] 目镜：10χ(ΝΑ· 45)
[0382] apotome :是（所得光学切片：11. 7 μΜ)
[0383] 场每孔：6-8
[0384] 在各场中自动聚焦
[0385] 自动聚焦通道：1
[0386] 通道1(开启自动聚焦，和拍摄孔底部的荧光珠）：滤光器：XF93_TRITC;暴露时 间：通常0. 002至0.0 ls
[0387] 通道2 (拍摄与荧光珠相同水平的染色细胞）：滤光器：XF93-H〇eChst ;暴露时间： 通常0· 02至0· Is ;z偏移：0 μ M
[0388] 通道3(在荧光珠以上25以11的染色细胞的照片）：滤光器4?93-!1〇6(*81暴露时 间：通常0· 02至0· Is ;ζ偏移：-25 μ M
[0389] 通道4(在荧光珠以上50以11的荧光细胞的照片）：滤光器4?93-!1〇6(*81暴露时 间：通常0· 02至0· Is ;ζ偏移：-50 μ M
[0390] 目标鉴定：方法：固定阈值：100-32767
[0391] 目标选择参数： 最小 最大 SpotArea: 20 1000000000000 SpotShapeBFR: 0.2 1000 SpotShapeBAR: 0 1000 SpotAvg Iuten: 200 32767 SpotTotalInten: $4000 (从而无限制）1000000000000 TargetAvgInten: 0 32767 TargetTotalInten: 0 1000000000000
[0392] 用vHCS Viewer分析扫描结果：
[0393] 导出结果：各孔：
[0394] 有效场的数量
[0395] 各通道2、3和4("场细节"）中的各有效场中的目标数量
[0396] 在各通道2、3和4中，各孔的目标平均数量/有效场
[0397] 进一步分析中排除每孔小于6个有效场的孔
[0398] 视觉检查全部照片的任意明显问题，比如对焦不准或明显不均匀的胶原结构（〃 气泡/鼓泡"等）等；在有明显问题：文件的情况下，然后从进一步分析中排除相应孔。
[0399] 进一步分析侵入测定的结果（用例如Excel):
[0400] 对于各孔，计算计数细胞的平均侵入距离：（25 μ m X于25 μ m的细胞数+50 μ m X 于50 μ m的细胞数）/于0、25和50 μ m的细胞总数
[0401] 对于全部四个参数（于0 μπι的细胞数，于25 μπι的细胞数，于50 μπι的细胞数，计 数细胞的平均侵入距离），计算各次重复的平均值、SD和CV
[0402] 将CV多50 %的任意重复无效化（如果对于未处理阴性对照或用化合物 Υ-27632-处理的阳性对照CV多50%，则待重新测试的化合物，或者待重复测定）。Υ27632 是下式的Rho-相关蛋白质激酶P160R0CK的选择性抑制剂
[0403]
[0404] 仅在用10 μ M Υ_27632(阳性对照）处理的细胞的平均侵入距离与未处理阴性对 照相比减少彡40 %的情况下，测试得以确证。
[0405] 最终分析：确定给定化合物具有阳性对照（10 μ M Υ-27632)的50%的抗侵入性效 果的浓度。确定化合物在这些条件下的毒性（=存活率损失）。
[0406] 毒性测试（在普通细胞培养条件下）：
[0407] 如侵入测试地制备化合物，然后加至在标准96-孔组织培养板中的在普通培养条 件下（MEM+10%FBS)的 MDA-MB231-luc-D3H2LN 细胞（2000/孔），或人类 PBMC(75000/孔， 在RPMI+10% FBS+IL-2中）。在72小时温育之后，根据生产商的指导（Promega Ref. G3581) 进行标准MTS测试。在各种浓度测试化合物（浓度-应答曲线）以便确定获得50%毒性的 浓度。
[0408] hERG通道抑制：
[0409] 由 Porsolt&Partners (Z. A. de Glatign6, 53940Le Genest-Saint-Isle，法国）进 行。简言之，各3个hERG-转染的HEK293细胞与于1和10 μM的化合物超融合，并且通过 电生理学测量hERG通道电流，如Crumb等人在J. Pharmacol. Exp. Ther. 2000中的描述。
[0410] 结果
[0411] 下表指出对MDA-MB231，对PBMC的毒性，抗侵入性效果，和hERG通道的抑制。
[0412]
[Oh j」
[0414] 实施例16:比较数据
[0415] 将本发明的三种化合物（化合物1、3和4)分别与已经具体或上位公开于 W02009087238的三种化合物进行比较（MDA毒性，PBMC毒性，侵入性抑制和hERG抑制）。
[0416] 更确切地：
[0417] -根据本发明的化合物1与W02009087238中的化合物编号C88(第66页）相比：
[0418]
[0419] (W02009087238的化合物C88,此后编号为112)
[0420] -根据本发明的化合物3与此后编号为583的化合物相比，其相应于下式：
[0421]
[0422] -根据本发明化合物4与此后编号为585的化合物相比，其相应于下式：
[0423]
[0424] 下表指出对MDA-MB231的毒性，对PBMC的毒性，抗侵入性效果，和hERG通道的抑 制。
[0425]
[0426] 该表显示所要求保护的化合物（I)与预先已知的化合物相比具有改善的特性。
[0427] 更特别，根据本发明的化合物1对MDA-MB231和对PBMC的毒性更低，具有更有效 的侵入性抑制，和显示比化合物C88 (112)更低的hERG抑制。
[0428] 更特别，根据本发明的化合物3对MDA-MB231和对PBMC的毒性更低，和显示比化 合物583更低的hERG抑制。
[0429] 更特别，根据本发明的化合物4对MDA-MB231和对PBMC毒性更低，具有更有效的 侵入性抑制，和显示比化合物585更低的hERG抑制。
[0430] 实施例17:比较数据
[0431] 对具体公开于W02009/087238的一种比较化合物和一种本发明所要求保护的化 合物进行2组实验，使用W02009/087238所公开的和如实施例16中所述的参比化合物 〃C88〃。
[0432] 所述化合物C88用作参比来比较这两个系列化合物的侵入性抑制效率。
[0433] 首先，将化合物C88与公开于W02009/087238 (第95页）的FMMB46. 1比较，其具
有下式
[0434]
[0435] 用程序1，化合物C88被视为具有抗侵入性特性。
[0436] 其次，将化合物C88与本发明化合物1相比，采用程序2。
[0437] 应注意程序1和2都是测试药物化合物对侵入的效果的侵入性测试。除了与药物 的温育时间，它们完全相同。
[0438] 在第一组实验中，在用化合物C88处理细胞时检测抗侵入 性活性，但是未观察到 FMMB46. 1的效果（表1)。
[0439] 在第二组实验中，在用化合物C88和化合物1处理细胞时检测抗侵入性活性。
[0440] 第一组实验-结果：
[0441] 表 1
[0442]
[0443] av.意指平均值
[0444] SD意指标准偏差
[0445] η是样本数
[0446] 此处，侵入（进入胶原）是在与10 μ M Υ-27632相比50 μ m倍抑制性效果的细胞 数每有效场。
[0447] 标准操作程序1 :
[0448] 所述程序描述于实施例15,除了（i)在第一天期间的最后一步〃制备侵入测试〃 和〃用药物处理〃和第2天和第3天，此后有详述，和（ii)最终并未确定浓度或毒性。
[0449] 不同的步骤如下：
[0450] 侵入测定的准备（在冰上；在离心细胞期间开始）：
[0451] 在预冷却的管中在冰上混合：例如3. 4mg/ml胶原储备溶液；根据各胶原批次的储 备浓度调节胶原和水的体积：
[0452] 2. 8ml 2. 5x MEM
[0453] 441 μ 1 水
[0454] 140 μ I IM Hepes
[0455] 49 μ I IN NaOH
[0456] 3· 5ml 3· 4mg/ml 胶原储备溶液（产生 I. 7mg/ml 胶原 7ml)
[0457] 通过温和上下移取来匀化（保持在冰上）
[0458] 加入70 μ 1的IOx IO6细胞/ml细胞悬浮液，通过温和上下移取来匀化（产生0· Ix IO6细胞/ml，在I. 7mg/ml胶原中，在7ml Ix ΜΕΜ+20 μ M H印es中）（保持在冰上）
[0459] 将100 μ 1/孔（也即10000细胞/孔）分布入用于侵入测定的板的包覆孔中（全 部在冰上）
[0460] 在 4°C用 200x g 离心 5'（例如 lOOOrpm，Jouan GR412 离心机）
[0461] 将200 μ 1/孔PBS加至全部空置孔
[0462] 在37°C /5% CO2温育30'（固化胶原）
[0463] 用药物处理：
[0464] 根据上述板图样，将各33 μ 1/孔的4x MEM+0. 1 % FBS中的浓缩药物溶液加至全部 三个板的相应孔中
[0465] 在 37°C /5% CO2温育 24 小时
[0466] 第2天：加入FBS以刺激侵入：
[0467] 在处理24小时之后进行显微镜观察：
[0468] 检查存活测定的细胞
[0469] 加入FBS (在细胞培养箱中）：
[0470] 制备MEM+5 % FBS :7. 2ml不含血清的ΜΕΜ+0. 8ml FBS (新鲜解冻等分试样或（如 果保持在4°C )前一天解冻的等分试样的剩余部分）
[0471] 将33 μ 1/孔加至侵入和存活率测试的全部孔
[0472] 在 37°C /5% CO2温育 24 小时 [0473] 第3天：停止：
[0474] 在处理48小时之后进行显微镜观察：
[0475] 检查存活测定的细胞
[0476] 侵入测定：固定和染色（甲醛必须在通风橱下操作）：
[0477] 新鲜制备1 μ g/ml的Hoechst 33342的18. 5%甲醛溶液：5ml PBS (并非必须无 菌）+5ml 37%甲醛+1 μ I 10mg/ml Hoechst 33342(注意：对于1个板，较小体积就足够， 但是最低移取体积不应低于I U 1)
[0478] 将50 μ 1/孔加至侵入测试的全部孔中（最终产生4. 3%甲醛）
[0479] 用黑膜封口（随板提供）
[0480] 在RT温育至少7小时。
[0481] 在相同条件下在第3天以程序1的框架准确地进行在实施例15中第5天进行的 分析。
[0482] 第二组实验-结果：
[0483] 表 2
[0484]
[0485] av.意指平均值
[0486] SD意指标准偏差
[0487] η是样本数
[0488] 此处，侵入（进入胶原）是与10 μΜ Υ-27632相比达到50%的抑制效果所必需的 化合物浓度。
[0489] 标准操作程序2与实施例15描述的程序完全相同。
[0490] 结论：鉴于化合物1显示比化合物C88更佳的侵入结果，而化合物C88本身显示比 化合物FMMB46. 1更佳的侵入结果，结论是发明人已发现出人意料的特性，W02009/087238 的公开中对此并无任何启示。
[0491] 根据本发明的化合物展示预期对癌有活性的抗侵入性效果。
[0492] 因此，对本发明公开的化合物所进行的测试的结果显示所述化合物可以用来抑制 和/或预防和/或治疗癌症。更特别地，下述类型的癌可以通过根据本发明的化合物来治 疗：结直肠癌，胰癌，肺癌包括非小细胞肺癌，乳腺癌，膀胱癌，胆囊癌，甲状腺癌，黑色素瘤， 肝癌，子宫/子宫颈癌，食道癌，肾癌，卵巢癌，前列腺癌，头颈癌，和胃癌，等。
[0493] 出于该意图，可将有效量的所述化合物给予罹患癌症的患者。
[0494] 本发明也涉及至少选自如前文所定义的式（I)、（I'）、（Ia)、（Ib)、（Ic)、（Id)和 (Ie)化合物的化合物，和如前文所定义的化合物（1)至（51)，或者根据本发明的其药学上 可接受的盐中任一种用于制备药物组合物的用途，期望用于治疗癌症。
[0495] 本发明也涵盖药物组合物，包含至少选自如前文所定义的式（I)、（I'）、（Ia)、 (Ib)、（Ic)、（Id)和（Ie)化合物的化合物和如前文所定义的化合物（1)至（51)或其任何 药学上可接受的盐。
[0496] 从而，这些药物组合物包含有效量的所述化合物和一种或多种药物赋形剂。
[0497] 前述的赋形剂根据剂型和所希望的给药模式来选择。
[0498] 在该上下文中，它们能够以适于肠或肠胃外给药的任意药物形式存在，该药物形 式含适当赋形剂，例如是简单或包覆片剂，硬明胶，软壳胶囊和其它胶囊，栓剂，或者可饮用 形式比如悬浮液、糖浆剂，或者可注射溶液或悬浮液形式，其剂量使得可以每日给药0. 1至 1000 mg活性物质。
[0499] 本发明也涉及如前文所定义的式（I)，（I'）、（Ia)、（Ib)、（Ic)、（Id)和（Ie)中任 一种的化合物，和如前文所定义的化合物（1)至（51)，或根据本发明的其药学上可接受的 盐之一用于制备药物组合物的用途，所述药物组合物期望用于抑制和/或预防和/或治疗 癌症。
[0500] 本发明还涉及治疗患癌的患者的方法，其包括至少向患者给药有效量的如前文所 定义的式（I)、（I'）、（Ia)、（Ib)、（Ic)、（Id)、和（Ie)和⑴至（51)中任一种的化合物或 其药学上可接受的盐之一的步骤。
【主权项】
1. 式⑴化合物：其中 A和A'独立地代表亚苯基基团或亚吡啶基基团； R2是氢原子或（C ^C4)烷基； 馬是2-吡啶基基团，3-吡啶基基团，4-吡啶基基团，2-嘧啶基基团，4-嘧啶基基团或 5-嘧啶基基团； R4是羰基基团或磺酰基基团；和 1?5是-NH- (CH 2) a-NR6R7基团或4-甲基哌嗪基基团，其中a是1至4的整数，R 6和R 7独 立地代表（C1-C4)烷基，或RjPR7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其选自4-甲 基哌嗪基基团，吗啉代基团，吡咯烷基基团和哌啶子基基团； 或其药学上可接受的盐中任一种。2. 根据权利要求1的式（I)化合物 其中 A和A'独立地代表亚苯基基团或亚吡啶基基团； 馬是氢原子或甲基基团； 馬是2-吡啶基基团，4-吡啶基基团或4-嘧啶基基团； R4是羰基基团或磺酰基基团；和 1?5是-NH-(CH2)a-NR6R 7基团或4-甲基哌嗪基基团，其中a是2至3的整数，1?6和1?7代 表乙基基团，或RjPR7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其选自4-甲基哌嗪基基 团，吗啉代基团，吡咯烷基基团和哌啶子基基团； 或其药学上可接受的盐中任一种。3. 根据权利要求1或2的式⑴化合物，其中在A与A'之间的基团-NH-和基团-R4-R5 相对A'相互位于间位。4. 根据权利要求1至3中任一项的式（I'）化合物 其中X和X'独立地是CH或N ; 馬是氢原子或甲基基团； 馬是2-吡啶基基团，4-吡啶基基团或4-嘧啶基基团； R4是羰基基团或磺酰基基团；和 1?5是-NH-(CH2)a-NR6R 7基团或4-甲基哌嗪基基团，其中a是2至3的整数，1?6和1?7代 表乙基基团，或RjPR7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其选自4-甲基哌嗪基基 团，吗啉代基团，吡咯烷基基团和哌啶子基基团； 或其药学上可接受的盐中任一种。5. 根据权利要求1至4中任一项的式（Ia)化合物其中R2, R3, &和R 5如权利要求1，2和4中任一项所定义； 或其药学上可接受的盐中任一种。6. 根据权利要求1至5中任一项的式（Ia)化合物，其中R 4是羰基基团和R 2,馬和R 5 如权利要求1，2和4中任一项所定义， 或其药学上可接受的盐中任一种。7. 根据权利要求1至4中任一项的式（Ic)化合物其中R2, R3, &和R 5如权利要求1，2和4中任一项所定义； 或其药学上可接受的盐中任一种。8. 根据权利要求1，2,4和7的式（Ic)化合物，其中1?2是氢原子或甲基基团；1?3是4_吡 啶基基团或4-嘧啶基基团；R4是羰基基团；和R 5是-NH-(CH2)a-NR6R7基团，a是整数3, R6和R7代表乙基基团，或R 6和R 7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其是4-甲基哌 嘆基基团； 或其药学上可接受的盐中任一种。9. 根据权利要求1至4中任一项的式（Id)化合物其中R2, R3, &和R 5如权利要求1至3中任一项所定义； 或其药学上可接受的盐中任一种。10. 根据权利要求1，2,3,4和8的式（Id)化合物，其中R2是氢原子；1?3是4_吡啶基基 团；R4是羰基基团；和R 5是-NH-(CH 2) a-NR6R7基团，a是整数3，R 6和R 7代表乙基基团，或R 6 和R7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其是4-甲基哌嗪基基团； 或其药学上可接受的盐中任一种。11. 根据权利要求1至4中任一项的式（Ie)化合物其中R2, R3, &和R 5如权利要求1，2和4中任一项所定义； 或其药学上可接受的盐中任一种。12. 根据权利要求1，2, 3,4和10的式（Ie)化合物，其中R2是氢原子；R 3是4-吡啶基 基团；R4是羰基基团或磺酰基基团；和 1?5是-NH-(CH 2) a-NR6R7基团，a是整数3，R 6和R 7代表乙基基团，或R 6和R 7与它们联接 至的氮原子一起形成杂环基团，其选自4-甲基哌嗪基基团，吗啉代基团，吡咯烷基基团和 哌啶子基基团； 或其药学上可接受的盐中任一种。13. 根据权利要求1的式（I)化合物，选自 -(I)N-(3-(二乙基氨基）丙基）-3-( (3-( R比啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲 酰胺 -(2) 3-((4-((3_(二乙基氨基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-( R比啶_4_基） 苯甲酰胺 -(3)N-(3-吗啉代丙基）-3-((3-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰胺 -(4) N-(吡啶-4-基）-3-((3-((3-(吡咯烷-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基） 苯甲酰胺 -(5) 3-((3-(N-(3-(二乙基氨基）丙基）氨横酰基）苯基）氨基）-N-(啦啶_4_基） 苯甲酰胺 -(6) N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-3-((3-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨 基）苯甲酰胺 -(7)N-(3-(哌啶-1-基）丙基）-3-((3-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲 酰胺 -(8)3-((3-(4-甲基哌嗪-1-羰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺 -(9) 3- ((3- (N- (3-(哌啶-1-基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺 -(10) 3- ((3- (N- (2-(哌啶-1-基）乙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺 -(11) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-3-((3-( R比啶_2_基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯 甲酰胺 -(12) 3-((3-(N-(3-吗啉代丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基）苯甲酰 胺 -(13) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-3-((4-( R比啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯 甲酰胺 -(14)N-(3-吗啉代丙基）-3-((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰胺 -(15) 4-((3-(N-(3-吗啉代丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基）苯甲酰 胺 -(16) N-(吡啶-4-基）-4-((3-(N-(2-(吡咯烷-1-基）乙基）氨磺酰基）苯基）氨 基）苯甲酰胺 -(17) 3- ((3- ((3-(二乙基氨基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-甲基-N- ( P比 啶-4-基）苯甲酰胺 -(18) N-甲基-N-(吡啶-4-基）-3-((3-((3-(吡咯烷-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯 基）氨基）苯甲酰胺 -(19) 3-((3-(N-(3-(二乙基氨基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-甲基-N-(吡 啶-4-基）苯甲酰胺 -(20)N-甲基-3-((3-((3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨 基）-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺 -(21)N-甲基-3-((3-((3-(哌啶-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡 啶-4-基）苯甲酰胺 -(22) N-甲基-3-((3-((3-吗啉代丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺 -(23) N-甲基-3- ((3- (N- (3-吗啉代丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺 -(24) N-甲基-3-( (3-(N-(3-(哌啶-1-基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡 啶-4-基）苯甲酰胺 -(25) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-3-((3-(喃啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯 甲酰胺 -(26) 3-((3-(N-(3-(二乙基氨基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(嘧啶-4-基） 苯甲酰胺 -(27) 3- ((3- (N- (3-(哌啶-1-基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(嘧啶-4-基） 苯甲酰胺 -(28)N-(嘧啶-4-基）-3-((3-((3-(吡咯烷-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨 基）苯甲酰胺 -(29)N-(3-(哌啶-1-基）丙基）-3-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯 甲酰胺 -(30)N-(3-吗啉代丙基）-3-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰胺 -(31)N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-3-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨 基）苯甲酰胺 -(32) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-5-((3-( R比啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）烟 酰胺 -(33) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-2-((3-( R比啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）异 烟酰胺 -(34) N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-2-((3-(吡啶-4-基）氨基甲酰基）-苯基） 氨基）异烟酰胺 -(35) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-6-((3-(吡啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）P比 啶酰胺 -(36) N- (3-(二乙基氨基）丙基）-6- ((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）吡 啶酰胺 -(37)N-(3-(二乙基氨基）丙基）-6-((3-(甲基（吡啶-4-基）氨基甲酰基）苯基） 氨基）吡啶酰胺 -(38)N-(3_(二乙基氨基）丙基）-2-((3-(甲基（R比啶_4_基）氨基甲酰基）苯基） 氨基）异烟酰胺 -(39)2-((3-(甲基（吡啶-4-基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(3-(4-甲基哌 嗪-1-基）丙基）异烟酰胺 -(40) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-6-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）吡 啶酰胺 -(41) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-2-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）异 烟酰胺 -(42) N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-2-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨 基）异烟酰胺 -(43) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-6-((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）吡啶-2-基）氨 基）吡啶酰胺 -(44) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-2-((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）吡啶-2-基）氨 基）异烟酰胺 -(45)N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-2-((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）吡 啶_2_基）氨基）异烟酰胺 -(46) 2- ((3- (N- (3-(二乙基氨基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基） 异烟酰胺 -(47) 2- ((3- ((3-(二乙基氨基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶_4_基） 异烟酰胺 -(48) 2-((3-((3-吗啉代丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基）异烟酰 胺 -(49) N-(3-(哌啶-1-基）丙基）-3-((3-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯 甲酰胺 -(50) N-(吡啶-4-基）-2-((3-((3-(吡咯烷-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨 基）异烟酰胺 -(51)2-((3-((3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡 啶-4-基）异烟酰胺 -及其药学上可接受的盐。14.制备根据权利要求1的式⑴化合物的方法，包括将式（II)化合物其中R2，馬和A如权利要求1中所定义， 与式（III)化合物反应其中X是氯原子，碘原子或溴原子，和R4, RjP A'如权利要求1中所定义。15. 根据权利要求1至13的式（I)化合物，用作药物。16. 根据权利要求1至13的式（I)化合物，用于预防和/或抑制和/或治疗癌症。17. 药物组合物，包含至少一种如权利要求1至13中所定义的式（I)化合物和药学上 可接受的赋形剂。
【专利摘要】本发明涉及式(I)化合物：其中A和A’独立地代表亚苯基基团或亚吡啶基基团；R2是氢原子或(C1-C4)烷基；R3是2-吡啶基基团，3-吡啶基基团，4-吡啶基基团，2-嘧啶基基团，4-嘧啶基基团或5-嘧啶基基团；R4是羰基基团或磺酰基基团；和R5是-NH-(CH2)a-NR6R7基团或4-甲基哌嗪基基团，其中a是1至4的整数，R6和R7独立地代表(C1-C4)烷基，或R6和R7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其选自4-甲基哌嗪基基团，吗啉代基团，吡咯烷基基团和哌啶子基基团；或其药学上可接受的盐中任一种。本发明还涉及药物组合物，含有式(I)化合物或其药学上可接受的盐中任一种，和用于获得其的制备方法。所述化合物(I)可用于治疗癌。
【IPC分类】C07D401/12, A61P35/00, A61K31/44, C07D213/75, C07D239/42
【公开号】CN104903293
【申请号】CN201380060496
【发明人】P·鲁, F·马于托, R·纳日曼, G·加多, J·塔泽, D·谢雷, C·布罗克, N·卡于扎克
【申请人】Abivax公司, 国家科研中心, 居里研究所, 蒙彼利埃大学
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2013年9月30日
【公告号】CA2886804A1, EP2712862A1, EP2900635A1, US20150315173, WO2014049578A1
【专利说明】新的抗侵入性化合物
[0001] 本发明一般地涉及化合物用于制备用来治疗癌的组合物的用途。
[0002] 在绝大多数癌中，死亡并非由于原发肿瘤而是因为由此衍生转移。导致肿瘤侵入 且临床通过出现转移定义的这种恶性进展是一起使得侵入性细胞离开原发肿瘤位点并移 居至各种靶标组织的原发细胞粘着损失和细胞运动性增加的最终结果。
[0003] 转移被认为是癌不受控的恶性进展的复发特征。在该过程期间，肿瘤细胞通过增 加其迀徙能力而完成其恶性转化。然后，癌细胞能够散布并在远离的位点确立肿瘤病灶。癌 细胞在机体中的扩散是一系列称为《转移级联》的事件的结果：侵入肿瘤周围组织，静脉或 淋巴内渗，在远处的逃离机体的全部防御机制的新群落位置移行和确立。
[0004] 目前对其不存在有效治疗选项的转移性侵入是非常主要的死因。由于在转移阶段 诊断出的癌的频率以及它们所代表的治疗难题，从而开发特别靶向转移性侵入的分子是癌 症治疗的主要突破的关键要求。
[0005] 文献W02009/087238描述可以用来治疗癌症的化合物。如下文实施例17提供的 比较数据所示，在侵入试验中公开于所述文献的相似化合物令人惊讶地比本申请所要求保 护的化合物活性更低。
[0006] 目前发现如下文所定义的式（I)衍生物能够预防（如下文的实验数据所示）转移 癌的侵入性进展；并且基于这种活性，该化合物用于治疗癌症。
[0007] 因此本发明涉及下文定义的式（I)化合物及其药学上可接受的盐本身。
[0008] 此外，本发明涉及下文定义的式（I)化合物用作药物和更特别地用于预防和/或 抑制和/或治疗癌症。
[0009] 此外，本发明涉及预防、抑制或治疗癌的方法，其包括至少一个步骤，该步骤包括 向罹患所述疾病的患者给予有效量的如下文式（I)定义的化合物或其药学上可接受的盐 之一。
[0010] 本发明还涉及制备所述式（I)化合物的方法。
[0011] 本发明也提供药物组合物，包含至少一种所述式（I)化合物。
[0012] 根据一个方面，本发明的主题涉及式（I)化合物
[0013]
[0014] 其中
[0015] A和A'独立地代表亚苯基基团或亚吡啶基基团；
[0016] R2是氢原子或（C rC4)烷基；
[0017] 馬是2-吡啶基基团，3-吡啶基基团，4-吡啶基基团，2-嘧啶基基团，4-嘧啶基基 团或5-嘧啶基基团；
[0018] R4是幾基基团或横醜基基团；和
[0019] R^-NH-(CH2)a-NR6R7基团或4-甲基哌嗪基基团，其中a是1至4的整数，R 6和 R7独立地代表（C1-C4)烷基，或RjPR7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其选自 4-甲基哌嗪基基团，吗啉代基团，吡咯烷基基团和哌啶子基基团；
[0020] 或其药学上可接受的盐中任一种。
[0021] 根据优选实施方式，本发明涉及式（I)化合物，其中在A与A'之间的基团-NH-和 基团-R4-R5相对A'相互位于间位。
[0022] 根据优选实施方式，本发明涉及式（Al)化合物
[0023]
[0024] 其中A，A'，R2, R3, &和R 5如前文所定义。
[0025] 本发明涵盖下文描述的实施方式，其中在A和A'上的取代基团的位置与上文描述 的式（Al)结构一致，也即A上的间位和A'上的间位。
[0026] 根据又一优选的方面，本发明涉及如前文所定义的式（I)化合物，其中
[0027] A和A'独立地代表亚苯基基团或亚吡啶基基团；
[0028] 馬是氢原子或甲基基团；
[0029] 馬是2-吡啶基基团，4-吡啶基基团或4-嘧啶基基团；
[0030] R4是幾基基团或横醜基基团；和
[0031] R^-NH-(CH2)a-NR6R7基团或4-甲基哌嗪基基团，其中a是2至3的整数，R 6和 R7代表乙基基团，或RjPR7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其选自4-甲基哌嗪 基基团，吗啉代基团，吡咯烷基基团和哌啶子基基团；
[0032] 或其药学上可接受的盐中任一种。
[0033] 根据更优选的方面，本发明涉及式（I'）化合物
[0034]
[0035] 其中
[0036] X和X'独立地是CH或N ;
[0037] 1?2是氢原子或甲基基团；
[0038] &是2-吡啶基基团，4-吡啶基基团或4-嘧啶基基团；
[0039] R4是幾基基团或横醜基基团；和
[0040] 馬是-NH- (CH 2) a-NR6R7基团或4-甲基哌嗪基基团，其中a是2至3的整数，R 6和 R7代表乙基基团，或RjPR7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其选自4-甲基哌嗪 基基团，吗啉代基团，吡咯烷基基团和哌啶子基基团；
[0041] 或其药学上可接受的盐中任一种。
[0042] 根据【具体实施方式】，本发明的额外主题是式（Ia)化合物
[0043]
[0044] 其中R2, R3, R4和R 5如前文所定义；
[0045] 或其药学上可接受的盐中任一种。
[0046] 根据优选实施方式，本发明涉及式（Ia)化合物，其中基团-R4-R5相对两个苯基基 团之间的基团-NH-位于间位。
[0047] 根据更优选实施方式，本发明涉及如前文所定义的式（Ia)化合物，其中R4是羰基 基团和R2,馬和R 5如前文所定义，
[0048] 或其药学上可接受的盐中任一种。
[0049] 本文还公开式（Ib)化合物
[0050]
[0051] 其中R2, R3, R4和R 5如前文所定义；
[0052] 或其药学上可接受的盐中任一种。
[0053] 根据优选实施方式，本发明涉及式（Ib)化合物，其中基团-R4-R5相对在苯基基团 与吡啶基团之间的基团-NH-位于间位。
[0054] 更优选，在式（Ib)中，R2是氢原子；R3是4-吡啶基基团；R4是羰基基团；和R5 是-NH-(CH2) a-NR6R7基团，其中a是整数3，和R6和R7代表乙基基团；或其药学上可接受 的盐中任一种。
[0055] 根据又一【具体实施方式】，本发明的额外主题是式（Ic)化合物
[0056]
[0057] 其中R2, R3, R4和R 5如前文所定义；
[0058] 或其药学上可接受的盐中任一种。
[0059] 根据优选实施方式，本发明涉及式（Ic)化合物，其中基团-R4-R5相对在苯基基团 与吡啶基团之间的基团-NH-位于间位。
[0060] 根据更优选实施方式，本发明涉及如前文所定义式（Ic)化合物，其中馬是氢原子 或甲基基团；馬是4-吡啶基基团或4-嘧啶基基团；R 4是羰基基团；和R 5是-NH-(CH2)a-NR6R7 基团，a是整数3, &和R 7代表乙基基团，或R6和R 7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基 团，其是4-甲基哌嗪基基团；或其药学上可接受的盐中任一种。
[0061] 根据又一【具体实施方式】，本发明的额外主题是式（Id)化合物
[0062]
[0063] 其中R2, R3, &和R 5如前文所定义；
[0064] 或其药学上可接受的盐中任一种。
[0065] 根据优选实施方式，本发明涉及式（Id)化合物，其中基团-R4-R5相对两个吡啶基 团之间的基团-NH-位于间位。
[0066] 根据更优选实施方式，本发明涉及如前文所定义式（Id)化合物，其中R2是氢原 子；馬是4-吡啶基基团；R4是羰基基团；和R 5是-NH-(CH2)a-NR6R7基团，a是整数3, RjPR7 代表乙基基团，或RjPR7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其是4-甲基哌嗪基基 团；或其药学上可接受的盐中任一种。
[0067] 根据又一【具体实施方式】，本发明的额外主题是式（Ie)化合物
[0068]
[0069] 其中R2, R3, R4和R 5如前文所定义；
[0070] 或其药学上可接受的盐中任一种。
[0071] 根据优选实施方式，本发明涉及式（Ib)化合物，其中基团-R4-R5相对在苯基基团 与吡啶基团之间的基团-NH-位于间位。
[0072] 根据更优选实施方式，本发明涉及如前文所定义的式（Ie)化合物，其中R2是氢原 子；心是4-吡啶基基团；R 4是羰基基团或磺酰基基团；和1?5是-NH-(CH2)a-NR 6R7基团，a是 整数3, &和R 7代表乙基基团，或R 6和R 7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其选 自4-甲基哌嗪基基团，吗啉代基团，吡咯烷基基团和哌啶子基基团；或其药学上可接受的 盐中任一种。
[0073] 根据本发明的优选实施方式，式（I)化合物选自：
[0074] - (I) N-(3_ (二乙基氨基）丙基）_3_ ((3_ (吡啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基） 苯甲酰胺
[0075]-⑵3- ((4- ((3-(二乙基氨基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N- ( P比 啶-4-基）苯甲酰胺
[0076] -(3)N-(3-吗啉代丙基）-3-((3-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰 胺
[0077] -(4) N-(吡啶-4-基）-3-((3-((3-(吡咯烷-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基） 氨基）苯甲酰胺
[0078] - (5) 3_ ((3_ (N- (3_ (二乙基氨基）丙基）氨横酰基）苯基）氨基）-N- ( P比 啶-4-基）苯甲酰胺
[0079] -(6) N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-3-((3-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基） 氨基）苯甲酰胺
[0080] -(7) N-(3-(哌啶-1-基）丙基）-3-((3-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基） 苯甲酰胺
[0081] -(8)3-((3-(4-甲基哌嗪-1-羰基）苯基）氨基）-N_(吡啶-4-基）苯甲酰胺
[0082] - (9) 3- ((3- (N- (3-(哌啶-1-基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺
[0083] -(10)3-((3-(N-(2-(哌啶-1-基）乙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N_(吡 啶-4-基）苯甲酰胺
[0084] - (11) N-(3_ (二乙基氨基）丙基）_3_ ((3_ (吡啶_2_基氨基甲酰基）苯基）氨基） 苯甲酰胺
[0085] - (12) 3- ((3- (N- (3-吗啉代丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基）苯 甲酰胺
[0086] - (13) N-(3_ (二乙基氨基）丙基）_3_ ((4_ (吡啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基） 苯甲酰胺
[0087] -(14)N_(3-吗啉代丙基）-3-((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰 胺
[0088] - (15) 4- ((3- (N- (3-吗啉代丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基）苯 甲酰胺
[0089] - (16) N-(吡啶-4-基）-4- ((3- (N- (2-(吡咯烷-1-基）乙基）氨磺酰基）苯基） 氨基）苯甲酰胺
[0090] - (17) 3_ ((3_ ((3_ (二乙基氨基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-甲基-N- (P比 啶-4-基）苯甲酰胺
[0091] -(18)N-甲基-N-(吡啶-4-基）-3-((3-((3-(吡咯烷-1-基）丙基）氨基甲酰 基）苯基）氨基）苯甲酰胺
[0092] -(19)3-((3-(N-(3_(二乙基氨基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N_甲基-N-(吡 啶-4-基）苯甲酰胺
[0093] -(20) N-甲基-3-((3-((3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨 基）-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺
[0094] -(21)N-甲基-3-((3-((3-(哌啶-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡 啶-4-基）苯甲酰胺
[0095] -(22)N_甲基-3-((3-((3-吗啉代丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N_(吡 啶-4-基）苯甲酰胺
[0096] -(23)N_甲基-3-((3-(N_(3-吗啉代丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N_(吡 啶-4-基）苯甲酰胺
[0097] -(24) N-甲基-3-( (3-(N-(3-(哌啶-1-基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡 啶-4-基）苯甲酰胺
[0098] - (25) N-(3_ (二乙基氨基）丙基）_3_ ((3_ (喃啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基） 苯甲酰胺
[0099] _(26)3-((3-(N-(3-(二乙基氨基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N_(嘧 啶-4-基）苯甲酰胺
[0100] -(27)3-((3-(N-(3-(哌啶-1-基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(嘧 啶-4-基）苯甲酰胺
[0101] -(28) N-(嘧啶-4-基）-3-((3-((3-(吡咯烷-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基） 氨基）苯甲酰胺
[0102] -(29) N-(3-(哌啶-1-基）丙基）-3-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基） 苯甲酰胺
[0103] -(30)N_(3-吗啉代丙基）-3-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰 胺
[0104] -(31)N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-3-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基） 氨基）苯甲酰胺
[0105] _ (32) N-(3-(二乙基氨基）丙基）_5_ ((3-(吡啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基） 烟酰胺
[0106] _ (33) N-(3_ (二乙基氨基）丙基）_2_ ((3_ (吡啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基） 异烟酰胺
[0107] -(34)N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-2-((3-(吡啶-4-基）氨基甲酰基）_苯 基）氨基）异烟酰胺
[0108] _ (35) N-(3_ (二乙基氨基）丙基）_6_ ((3_ (吡啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基） 吡啶酰胺
[0109] - (36) N- (3-(二乙基氨基）丙基）-6- ((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基） 吡啶酰胺
[0110] -(37)N-(3-(二乙基氨基）丙基）-6-((3-(甲基（吡啶-4-基）氨基甲酰基）苯 基）氨基）吡啶酰胺
[0111] _ (38) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-2-((3-(甲基（P比啶-4-基）氨基甲酰基）苯 基）氨基）异烟酰胺
[0112] -(39)2-((3-(甲基（吡啶-4-基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(3-(4-甲基哌 嗪-1-基）丙基）异烟酰胺
[0113] -(40) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-6-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基） 吡啶酰胺
[0114] -(41) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-2-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基） 异烟酰胺
[0115] -(42) N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-2-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基） 氨基）异烟酰胺
[0116] - (43) N- (3-(二乙基氨基）丙基）-6- ((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）吡啶-2-基） 氨基）吡啶酰胺
[0117] - (44) N- (3-(二乙基氨基）丙基）-2- ((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）吡啶-2-基） 氨基）异烟酰胺
[0118] -(45)N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-2-((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）吡 啶 _2_基）氨基）异烟酰胺
[0119] - (46) 2_ ((3_ (N- (3_ (二乙基氨基）丙基）氨横酰基）苯基）氨基）-N- ( P比 啶-4-基）异烟酰胺
[0120] - (47) 2_ ((3_ ((3_ (二乙基氨基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N- ( P比 啶-4-基）异烟酰胺
[0121] -(48) 2-((3-((3-吗啉代丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基）异 烟酰胺
[0122] -(49) N-(3-(哌啶-1-基）丙基）-3-((3-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基） 苯甲酰胺
[0123] -(50) N-(吡啶-4-基）-2-((3-((3-(吡咯烷-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基） 氨基）异烟酰胺
[0124] -(51)2-((3-((3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N_(吡 啶 _4_基）异烟酰胺
[0125] 本发明的化合物可以以游离碱或与药学上可接受的酸的加成盐形式存在。
[0126] 式（I)化合物的适宜的生理学上可接受的酸加成盐包括氢溴酸盐，酒石酸盐，柠 檬酸盐，三氟乙酸盐，抗坏血酸盐，盐酸盐，酒石酸盐，三氟甲磺酸盐，马来酸盐，甲磺酸盐， 甲酸盐，乙酸盐和富马酸盐。
[0127] 式（I)，（I'），（Ia)，（Ib)，（Ic)，（Id)和（Ie)化合物和/或其盐可以形成溶剂化 物（例如水合物），并且本发明包括全部这样的溶剂化物。
[0128] 因此，本发明扩展至化合物（1)至（51)，其药学上可接受的盐，其溶剂化物及其水 合物本身。
[0129] 在本发明的上下文中，术语：
[0130] (CrC4)烷基〃如本文所用分别是指CrC4伯、仲或叔饱和的烃。实例是但不限 于甲基，乙基，1-丙基，2-丙基，丁基，异丁基，叔丁基，
[0131] 和
[0132] _〃患者〃可以包括人类或哺乳动物，比如猫或狗。
[0133] 式（I)，（I'），（Ia)，（Ib)，（Ic)，（Id)和（Ie)化合物能够包含一个或多个不对称 碳原子。从而，它们能够以对映体或非对映异构体形式存在。这些对映体，非对映异构体及 其混合物（包括外消旋混合物）属于本发明的范围。
[0134] 根据又一方面，本发明涉及式（I)，（I'），（Ia)，（Ib)，（Ic)，（Id)和（Ie)化合物 用作药物。
[0135] 根据又一方面，本发明涉及式（I)，（I'），（Ia)，（Ib)，（Ic)，（Id)和（Ie)化合物 用于预防和/或抑制和/或治疗癌症。
[0136] 根据本发明，术语〃预防〃或〃防止〃意指降低给定现象即癌症的发作风险或延 缓给定现象即癌症的发生。
[0137] 本发明的化合物能够通过本领域技术人员使用的有机合成常规方法来制备。下述 一般反应程序代表用于制备本发明化合物的一般方法，且并非意在限制其范围或效用。
[0138] 通式（I)化合物能够根据下述方案1制备。 LUliHJJ 刀采丄
[0141] 合成基于偶联反应，起始自式（III)卤代芳族化合物，其中1?4和R5如前文所定义 和X是氯原子、碘原子或溴原子。
[0142] 根据途径（A)，将式（III)化合物置于质子溶剂比如叔丁醇中。然后，在摩尔浓 度比为1至2的无机碱比如& 20)3或K2CO3存在下，在相对式（III)化合物总量的量为 2mol %至IOmol %的二膦比如Xantphos(4, 5-二（二苯基膦基）_9, 9-二甲基咕吨）或 X-Phos (2-二环己基膦基-2'，4'，6' -三异丙基联苯）存在下，且在相对式（III)化合物 总量的量为2mol %至IOmo l %的有机金属催化剂比如Pd (OAc) 2或Pd2dba3存在下，加入相对 式（V)化合物摩尔浓度比为1至1. 5的式（II)化合物，其中R2,馬和A如上文所定义。然 后，可以在惰性气体例如氩下将反应混合物在80至120°C例如在90°C加热，并搅拌15至25 小时例如在20小时。可将反应混合物减压浓缩，残余物可用有机溶剂比如乙酸乙酯稀释。 有机相能够用水洗涤，倾析，在硫酸镁上干燥。最终，固体能够减压干燥过夜，获得产物（I)。
[0143] 式（II)和（III)的起始化合物是可获得的，或者能够根据本领域技术人员已知的 方法制备。
[0144] 更特别地，式（II)化合物（也即分别（IIa)和（IIc))在用于制备式（Ia)和（Ic) 化合物的情况下能够根据下述方案2制备。
[0145] 制备式（Ia)和（Ic)化合物的式（II)中间体化合物，其中X2之一 N，且 X2中另一个是CH(R3是吡啶基基团）。
[0146]
[0147] 方案 2
[0148] 如方案2中所示，式（IIa)和（IVa)中间体化合物用于制备根据本发明的式（Ia) 化合物，而式（IIc)和（IVc)中间体化合物用于制备根据本发明的式（Ic)化合物。
[0149] 根据途径（B)，以相对硝基苯甲酰氯摩尔比范围1至1. 5加入氨基吡啶，将其置于 摩尔浓度范围2M至5M的无机碱比如氢氧化钠的水溶液。将极性非质子溶剂比如二氯甲烷 加至溶液，反应混合物能够用冰浴冷却至〇°C，能够滴加硝基苯甲酰氯的极性非质子溶剂比 如二氯甲烷溶液。然后反应混合物能够在室温下在惰性气体例如氩下搅拌15至24小时 例如18小时的时间。所得沉淀能够过滤，用水和二氯甲烷洗涤，减压干燥过夜，提供产物 (IVa)或（IVc)。
[0150] 根据途径（C)，将式（IVa)或（IVc)化合物和相对苯甲酰胺量比率范围2%至10% 的10% Pd/C置于质子溶剂比如乙醇中。然后反应混合物能够在室温下在H2气氛下搅拌 5至20小时例如16小时的时间。然后反应混合物能够过滤，滤液能够减压浓缩，提供产物 (IIa)或（IIc)。
[0151] 根据途径（D)，将4_(甲基氨基）吡啶置于极性非质子溶剂比如二氯甲烷中。然 后，在摩尔比范围1至2的有机碱比如N，N-二异丙基乙胺或三乙胺存在下，在摩尔比范围 0. 1至1的亲核催化剂比如二甲基氨基吡啶存在下，以相对4-(甲基氨基）吡啶的摩尔比 范围1至1. 5加入硝基苯甲酰氯。然后反应混合物能够在室温下在惰性气体和例如氩下搅 拌5至20小时例如18小时的时间。有机相能够用水洗涤，倾析，在硫酸镁上干燥。最终， 固体能够减压干燥过夜，提供产物（IVa)或（IVc)。
[0152] 更特别，式（II)化合物，在用来制备一种情况的式（Ia)和（Ic)化合物或者另一 种情况的式（Id)和（Ie)化合物的情况下，能够根据下述方案3制备。
[0153] 制备式（Ia)和（Ic)化合物的式（II)中间体化合物，其中CH和X^N(R3 是嘧啶基基团），以及式（Id)和（Ie)化合物的式（II)中间体化合物，其中乂1是N和X 2是 CH(R3是吡啶基基团）。
[0154]
[0155] 方案 3
[0156] 如方案3中所示，式（IIa)和（Va)中间体化合物用于制备根据本发明的式（Ia) 化合物，式（IIc)和（Vc)中间体化合物用于制备根据本发明的式（Ic)化合物，式（IId)和 (Vd)中间体化合物用于制备根据本发明的式（Id)化合物，和式（lie)和（Ve)中间体化合 物用于制备根据本发明的式（Ie)化合物。
[0157] 根据途径（E)，将羧酸衍生物置于极性非质子溶剂比如二氯甲烷中。然后，在摩尔 比范围1至3的偶联剂比如EDCI. HCl存在下，在摩尔比范围1至3的有机碱比如N，N-二 异丙基乙胺或三乙胺存在下和在摩尔比范围〇. 1至1的亲核催化剂比如二甲基氨基吡啶存 在下，加入相对羧酸部分的摩尔比范围1至1. 5的氨基衍生物。然后反应混合物能够在室 温下在惰性气体和例如氩下搅拌5至20小时例如18小时的时间。所得沉淀能够过滤，用 水和二氯甲烷洗涤。有机滤液能够用水洗涤，倾析，在硫酸镁上干燥。最终，能够收集固体， 减压干燥过夜，提供产物（Va)，（Vc)，（Vd)或（Ve)。
[0158] 类似地，为了获得式（Ib)化合物，能够使用方案2或方案3。
[0159] 本发明的式（I)化合物中某些的化学结构和光谱数据分别列于下表1和表1I。
[0160] 表1
[0161]
[0162]
[0163」
[0164]
[0165」
[0166]
[0167]
[0168]
[0169」
[0170] 表1I
[0171]
[0172]
[0173]
[0174]
[0175]
[0176]
[0177]在所述式⑴化合物中，化合物（1)，（3)，（4)，（5)，（6)，（7)，（9)，（10)，（12)， (20)， （25)， （28)， （29)， （30)， （31)， （34)， （35)， （40)， （41)， （42)， （44)， （45)， （48)， （49)， 和（51)，或其药学上可接受的盐之一特别有意义。
[0178] 下述实施例详细举例说明根据本发明的化合物（I)，（4)，（5)，（6) (7)，（20)，（25)， (31)，（35)，（39)，（41)，（44)，（47)和（51)的制备。所得产物的结构已至少通过NMR谱图 得以确认。 实施例
[0179] 实施例1:表1化合物（1)
[0180] 根据途径（B)，将4-氨基吡啶（4. 2g，44毫摩尔，I. 1当量）置于3N NaOH水溶液 (56mL)，将二氯甲烷（24mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至(TC，滴加3-硝基苯甲酰 氯（7. 4g，40毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（40mL)溶液。然后反应混合物在室温下在氩惰性 气氛下搅拌18小时。过滤所得沉淀，用水和二氯甲烷洗涤，提供3-硝基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（2. 5g，26% )。
[0181] 1H NMR (300MHz，d6-DMS0) δ 10.91 (s，lH)，8.80 (s，lH)，8.52 (d，J = 5·5Ηζ，2H)， 8.47(d，J = 7.9Hz，lH)，8.41(d，J = 7.9Hz，lH)，7.86(t，J = 7.9Hz，lH)，7.79(d，J = 5. 3Hz，2H) 〇
[0182] 根据途径（C)，将3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（I. 5g，6. 2毫摩尔，I当量。） 和10% Pd/C(250mg)置于Et0H(50mL)。反应混合物在室温下在H2气氛下搅拌16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（1.24g，94% )。
[0183] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 10. 44(s，1H)，8. 44(d，J = 6. 3Hz，2H)，7. 77(d，J = 6· 3Hz，2H)，7· 18(t，J = 7. 9Hz，1H)，7· 12-7. 03(m，2H)，6· 78(d，J = 7. 9Hz，1H)，5· 38(s， 2H) 〇
[0184] 将N，N-二乙基丙二胺（8. 7mL，55毫摩尔，I. I当量）置于3N NaOH水溶液（71mL)， 将二氯甲烷（30mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加3-溴苯甲酰氯 (6. 6mL，50毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（50mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩，提供 3-溴-N-(3-二乙基氨基-丙基）苯甲酰胺（15. 6g，100% )。
[0185] 1H 匪R(300MHz，CDCl3) δ9· 15(br s，lH)，7.91(s，lH)，7.75(d，J = 7·9Ηζ， lH)，7.58(d，J = 7.9Hz，lH)，7.29(t，J = 7.9Hz，lH)，3.56(dd，J = 10·3,5·8Ηζ，2Η)， 2. 67-2. 53(m，6H)，I. 74(五重峰，J = 5. 7Hz，2H)，I. 04(t，J = 7· 1Ηz，6Η)。
[0186] 根据途径（A)，将3-溴-N_(3-二乙基氨基-丙基）苯甲酰胺（291mg，0.9毫摩尔，I 当量），3_氨基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（300mg，L 4毫摩尔，L 5当量），Pd2(dba)3(42mg， 0· 046 晕摩尔，5mol % )，XPhos (44mg，0· 09 晕摩尔，IOmol % )和 K2CO3 (514mg，3. 72 晕摩尔， 4当量）在叔-BuOH(4mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性气氛下搅拌20小时。然 后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用水洗涤，在MgSO 4I干燥， 过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供N-(3-(二乙基氨基）丙 基） _3_((3-(吡啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰胺（I) (230mg，57% )。
[0187] 实施例2 :表1化合物（4)
[0188] 根据途径（B)，将4-氨基吡啶（4. 2g，44毫摩尔，I. 1当量）置于3N NaOH水溶液 (56mL)，将二氯甲烷（24mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至(TC，滴加3-硝基苯甲酰 氯（7. 4g，40毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（40mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。过滤所得沉淀，用水和二氯甲烷洗涤，提供3-硝基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（2. 5g，26% )。
[0189] 1H NMR (300MHz，d6-DMS0) δ 10.91 (s，lH)，8.80 (s，lH)，8.52 (d，J = 5·5Ηζ，2H)， 8.47(d，J = 7.9Hz，lH)，8.41(d，J = 7.9Hz，lH)，7.86(t，J = 7.9Hz，lH)，7.79(d，J = 5. 3Hz，2H) 〇
[0190] 根据途径（C)，将3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（994mg，4. I毫摩尔，I当量） 和10% Pd/C(218mg)置于Et0H(20. 5mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。 然后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（900mg，100% )。
[0191] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 10. 42(s，1H)，8. 44(d，J = 6. 3Hz，2H)，7. 75(d，J = 6·3Ηζ，2Η)，7· 16(t，J = 7·9Ηζ，1Η)，7· 10-7.01(m，2H)，6.76(d，J = 7.9Hz，lH)，5.36(s， 2H) 〇
[0192] 将3-(吡咯烷-I-基）丙胺（I. 4mL，11毫摩尔，I. I当量）置于3N NaOH水溶液 (HmL)，将二氯甲烷（6mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至(TC，滴加3-溴苯甲酰氯 (1.3mL，10毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（IOmL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩，提供 3-溴-N-(3-吡咯烷-1-基-丙基）苯甲酰胺（2. 9g，94% )。
[0193] 4匪1?(30(^泡，〇)(：13)3 9.19(8，1!1)，7.82(8，1!1)，7.77((1，】=7.9泡，1!1)， 7. 58(d，J = 7. 9Hz，1H)，7. 29(t，J = 7. 9Hz，1H)，3. 57(dd，J = 9· 4,4· 8Hz，2H)，2. 72(t，J =4· 8Hz，2H)，2· 58(s，4H)，I. 86(s，4H)，I. 78(t，J = 4· 8Hz，2H)。
[0194] 根据途径（A)，将3-溴-N_(3-二乙基氨基-丙基）苯甲酰胺（611mg，1.97 毫摩尔，1当量），3-氨基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺^30mg，2. 96毫摩尔，L 5当 量），Pd2 (dba) 3 (90mg，0· 095 毫摩尔，5mol % )，XPhos (94mg，0· 19 毫摩尔，IOmol % )和 K2CO3 (I. lg，7. 88毫摩尔，4当量）在叔-BuOH(8mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性 气氛下搅拌20小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用 水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供 N-(吡啶-4-基）-3-((3-((3-(吡咯烷-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰 胺（4) (427mg，49% )。
[0195] 实施例3 :表1化合物（5)
[0196] 根据途径（B)，将4-氨基吡啶（4. 2g，44毫摩尔，I. 1当量）置于3N NaOH水溶液 (56mL)，将二氯甲烷（24mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至(TC，滴加3-硝基苯甲酰 氯（7. 4g，40毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（40mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。过滤所得沉淀，用水和二氯甲烷洗涤，提供3-硝基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（994mg，20% )。
[0197] 1H NMR (300MHz，d6-DMS0) δ 10.91 (s，lH)，8.80 (s，lH)，8.52 (d，J = 5·5Ηζ，2H)， 8.47(d，J = 7.9Hz，lH)，8.41(d，J = 7.9Hz，lH)，7.86(t，J = 7.9Hz，lH)，7.79(d，J = 5. 3Hz，2H) 〇
[0198] 根据途径（C)，将3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（994mg，4. I毫摩尔，I当量） 和10% Pd/C(218mg)置于Et0H(20. 5mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。 然后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（900mg，100% )。
[0199] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 10. 42(s，1H)，8. 44(d，J = 6. 3Hz，2H)，7. 75(d，J = 6·3Ηζ，2Η)，7· 16(t，J = 7·9Ηζ，1Η)，7· 10-7.01(m，2H)，6.76(d，J = 7.9Hz，lH)，5.36(s， 2H) 〇
[0200] 将3-溴苯磺酰氯（0. 56mL，3. 9毫摩尔，I当量）和N，N-二异丙基乙胺（I. 02mL， 5. 9毫摩尔，1. 5当量）置于无水的二氯甲烷（20mL)。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴 加 N，N-二乙基丙二胺（1.23mL，7. 8毫摩尔，2当量）。然后在(TC在氩惰性气氛下搅拌反应 混合物2小时。混合物用饱和NH4Cl水溶液、然后NaCl洗涤。水相用二氯甲烷萃取。收集 有机相，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩，提供3-溴-N-(3-二乙基氨基丙基）苯磺酰胺 (524mg,38% ) 〇
[0201] 1H NMR(300MHz，CDC13) S7.98(s，lH)，7.78(d，J = 7.9Hz，lH)，7.66(d，J = 8.0Hz， lH)，7.37(t，J = 7.9Hz，lH)，3.05(t，J = 5.4Hz，2H)，2.63-2.47(m，6H)，1.68(t，J = 5. 4Hz，2H)，I. 06(t，J = 7. lHz，6H)。
[0202] 根据途径（A)，将3_溴-N- (3-二乙基氨基丙基）苯横酰胺（153mg，0· 44晕 摩尔，1当量），3_氨基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（103mg，0.48毫摩尔，Ll当量）， Pd2(dba)3(20mg，0.022 晕摩尔，5mol % )，XPhos(21mg，0.044 晕摩尔，IOmol % )和 K2CO3 (243mg，L 76毫摩尔，4当量）在叔-BuOH(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰 性气氛下搅拌20小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用 水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供 3-((3-(N-(3-(二乙基氨基）丙基）氨横酰基）苯基）氨基）-N-( R比啶_4_基）苯甲酰胺 (5) (97mg,46% ) 〇
[0203] 实施例4 :表1化合物（6)
[0204] 根据途径（B)，将4-氨基吡啶（2. lg，22毫摩尔，I. 1当量）置于3N NaOH水溶液 (28mL)，将二氯甲烷（12mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加3-硝基苯甲酰 氯（3. 7g，20毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（20mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。过滤所得沉淀，用水和二氯甲烷洗涤，提供3-硝基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（2. 4g，50% )。
[0205] 1H NMR (300MHz，d6-DMS0) δ 10.98 (s，lH)，8.80 (s，lH)，8.51 (d，J = 6·2Ηζ，2H)， 8.47(d，J = 7.9Hz，lH)，8.42(d，J = 7.9Hz，lH)，7.86(t，J = 7.9Hz，lH)，7.80(d，J = 6. 2Hz，2H) 〇
[0206] 根据途径（C)，将3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（lg，4.1毫摩尔，I当量） 和10% Pd/C(150mg)置于Et0H(30mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（660mg，75% )。
[0207] 1H NMR(300MHz，DMS0) δ 10. 46(s，1H)，8. 45(dd，J = 5. 0,1. 3Hz，2H)，7. 77(dd，J = 5· 0,1. 3Hz，2H)，7· 17(t，J = 7. 9Hz，1H)，7· 12-7. 03(m，2H)，6· 77(dd，J = 7· 9,1. 2Hz，1H)， 5. 38(s，2H) 〇
[0208] 将3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙胺（I. 9mL，11毫摩尔，I. 1当量）置于3N NaOH水溶 液（HmL)，将二氯甲烷（6mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加3-溴苯甲 酰氯（I. 3mL，10毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（IOmL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下 搅拌反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩， 提供3-溴-N-(4-甲基哌嗪-1-基-丙基）苯甲酰胺（2. 7g，80% )。
[0209] 1H NMR (300MHz，CDCl3) δ 8.61 (br s，1H)，7.92 (s，lH)，7.82 (d，J = 7·9Ηζ，1H)， 7. 62 (d，J = 7. 9Hz，1H)，7. 32 (t，J = 7. 9Hz，1H)，3. 57 (q，J = 5. 2Hz，2H)，2. 79-2. 35 (m， 10H)，2. 33 (s，3H)，I. 78 (五重峰，J = 5. 2Hz，2H)。
[0210] 根据途径（A)，将3-溴-N- (4-甲基哌嗪-I-基-丙基）苯甲酰胺（170mg， 0.5毫摩尔，1当量），3_氨基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（117mg，0.55毫摩尔，I. 1当 量），Pd2 (dba) 3 (23mg，0· 025 晕摩尔，5mol % )，XPhos (24mg，0· 05 晕摩尔，IOmol % )和 K2C03(276mg，2毫摩尔，4当量）在叔-Bu0H(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性 气氛下搅拌20小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用 水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供 N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-3-((3-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰 胺（6) (52mg，22% )。
[0211] 实施例5 :表1化合物（7)
[0212] 根据途径（B)，将4-氨基吡啶（4. 2g，44毫摩尔，I. 1当量）置于3N NaOH水溶液 (56mL)，将二氯甲烷（24mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至(TC，滴加3-硝基苯甲酰 氯（7. 4g，40毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（40mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。过滤所得沉淀，用水和二氯甲烷洗涤，提供3-硝基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（2. 5g，26% )。
[0213] 1H NMR (300MHz，d6-DMS0) δ 10.91 (s，lH)，8.80 (s，lH)，8.52 (d，J = 5·5Ηζ，2H)， 8.47(d，J = 7.9Hz，lH)，8.41(d，J = 7.9Hz，lH)，7.86(t，J = 7.9Hz，lH)，7.79(d，J = 5. 3Hz，2H) 〇
[0214] 根据途径（C)，将3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（I. 5g，6.2毫摩尔，I当量） 和10% Pd/C(250mg)置于Et0H(50mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（1.24g，94% )。
[0215] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 10. 44(s，1H)，8. 44(d，J = 6. 3Hz，2H)，7. 77(d，J = 6· 3Hz，2H)，7· 18(t，J = 7. 9Hz，1H)，7· 12-7. 03(m，2H)，6· 78(d，J = 7. 9Hz，1H)，5· 38(s， 2H) 〇
[0216] 将3-(哌啶-I-基）丙胺（I. 7mL，11毫摩尔，I. I当量）置于3N NaOH水溶液 (HmL)，将二氯甲烷（6mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至(TC，滴加3-溴苯甲酰氯 (1.3mL，10毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（IOmL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩，提供 3-溴-N-(哌啶-1-基-丙基）苯甲酰胺（3. 24g，100% )。
[0217] 4匪1?(30(^泡，〇)(：13)3 9.02(8，1!1)，7.97(8，1!1)，7.83((1，】=7.9泡，1!1)， 7. 60(d，J = 7. 9Hz，1H)，7. 31(t，J = 7. 9Hz，1H)，3. 56(dd，J = 9· 8,4· 8Hz，2H)，2. 53(t，J =4. 8Hz，，2Η)，2· 44(s，4H)，I. 76(t，J = 4· 8Hz，2H)，I. 62(t，J = 4· 8Hz，4H)，I. 50(s，2H)。
[0218] 根据途径（A)，将3-溴-N-(哌啶-I-基-丙基）苯甲酰胺（162mg，0. 5毫摩尔，I当 量），3-氨基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（I 17mg，0· 55毫摩尔，I. 1当量），Pd2 (dba) 3 (23mg， 0· 025 晕摩尔，5mol % )，XPhos (24mg，0· 05 晕摩尔，IOmol % )和 K2CO3 (276mg，2 晕摩尔，4 当量）在叔_Bu0H(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性气氛下搅拌20小时。然 后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用水洗涤，在MgSO 4I干燥， 过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供N-(3-(哌啶-1-基）丙 基） _3_((3-(吡啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰胺（7) (115mg，50% )。
[0219] 实施例6 :表1化合物（20)
[0220] 根据途径（D)，将4_(甲基氨基）吡啶（1.25g，11.6毫摩尔，1.0当量），3_硝基苯 甲酰氯（2. 57g，13. 9毫摩尔，1. 2当量），N，N-二异丙基乙胺（3. 02mL，17. 3毫摩尔，1. 5当 量）和二甲基氨基吡啶（103mg，1. 41毫摩尔，1当量）在二氯甲烷（25mL)中的反应混合物 在室温下在氩惰性气氛下搅拌18小时。有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓 缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供N-甲基-3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯 甲酰胺（2.96g，100% )。
[0221] 1H NMR(300MHz，CDC13) S8.50(dd，J = 4.6，1.6Hz，2H)，8.25(s，lH)，8.21(d，J = 7. 9Hz，1H)，7· 62(d，J = 7. 9Hz，1H)，7· 45(t，J = 7. 9Hz，1H)，6· 98(dd，J = 4· 6,1. 6Hz，2H)， 3· 56(s，3H) 〇
[0222] 根据途径（〇,将N-甲基-3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（2. 96g，ll. 5毫摩 尔，1当量）和10% Pd/C(450mg)置于EtOH(IOOmL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物 16小时。然后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-甲 基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（2. 5g，96% )。
[0223] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 8. 40(dd，J = 4. 6,1. 6Hz，2H)，7. 14(dd，J = 4. 6， 1.6Hz，2H)，6.89(t，J = 7.9Hz，lH)，6.59(s，lH)，6.53(d，J = 7.9Hz，lH)，6.34(d，J = 7. 9Hz，1H)，5. 22 (s，2H)，3. 37 (s，3H)。
[0224] 将3-(4-甲基哌嗪-I-基）丙胺（I. 9mL，11毫摩尔，I. I当量）置于3N NaOH水溶 液（HmL)，将二氯甲烷（6mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加3-溴苯甲 酰氯（I. 3mL，10毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（IOmL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下 搅拌反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩， 提供3-溴-N-(4-甲基哌嗪-1-基-丙基）苯甲酰胺（2. 7g，80% )。
[0225] 1H NMR (300MHz，CDCl3) δ 8.61 (br s，1H)，7.92 (s，lH)，7.82 (d，J = 7·9Ηζ，1H)， 7. 62 (d，J = 7. 9Hz，1H)，7. 32 (t，J = 7. 9Hz，1H)，3. 57 (q，J = 5. 2Hz，2H)，2. 79-2. 35 (m， 10H)，2. 33 (s，3H)，I. 78 (五重峰，J = 5. 2Hz，2H)。
[0226] 根据途径（A)，将3-溴-N_(4-甲基哌嗪-I-基-丙基）苯甲酰胺（170mg，0.5 毫摩尔，1当量），3_氨基-N-甲基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（125mg，0. 55毫摩尔，I. 1 当量），Pd2 (dba) 3 (23mg，0· 025 晕摩尔，5mol % )，XPhos (24mg，0· 05 晕摩尔，IOmol % )和 K2CO3 (276mg，2毫摩尔，4当量）在叔-BuOH(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性气 氛下搅拌20小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用水洗 涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供N-甲 基-3-((3-((3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（20) (34mg，14% )。
[0227] 实施例7 :表1化合物（25)
[0228] 根据途径（E)，将4-氨基嘧啶（885mg，9.3毫摩尔，I. 1当量），3_硝基苯甲酸 (l·4g，8·4毫摩尔，l当量），EDCLHCl(2·4g，12·6毫摩尔，L5当量），三乙胺（L3mL，9·3 毫摩尔，I. 1当量）和二甲基氨基吡啶（103mg，0.8毫摩尔，0· 1当量）在二氯甲烷（IOmL) 中的反应混合物在室温下在氩惰性气氛下搅拌18小时。过滤所得沉淀，用水和二氯甲烷洗 涤。减压浓缩有机滤液，所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化。合并先前的沉淀和纯化 的化合物，提供3-硝基-N-(嘧啶-4-基）苯甲酰胺（I. 35g，66% )。
[0229] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 11. 69(s，1H)，8. 99(s，1H)，8. 83(s，1H)，8. 76(d，J = 5. 6Hz，1H)，8· 50-8. 40(m，2H)，8· 22(dt，J = 5· 6,1. 2Hz，1H)，7· 83(t，J = 7. 9Hz，1H)。
[0230] 根据途径（C)，将3-硝基-N-(嘧啶-4-基）苯甲酰胺（I. 35g，5.5毫摩尔，1当量） 和10% Pd/C(303mg)置于Et0H(30mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-(嘧啶-4-基） 苯甲酰胺（1.2g，100% )。
[0231] 1H NMR(300MHz, (I6-DMSO) δ 10. 93 (br s, 1H), 8. 92 (dd, J = I. 3,0. 5Hz, 1H), 8. 69(dd，J = 5· 8,0· 5Hz，1H)，8· 18(dd，J = 5· 8,1. 3Hz，1H)，7· 20-7. 12(m，3H)，6· 78(dt，J =4· 1，2· 3Hz，1Η)，5· 35(s，2H)。
[0232] 将Ν，Ν-二乙基丙二胺（8· 7mL，55毫摩尔，I. 1当量）置于3Ν NaOH水溶液（71mL)， 将二氯甲烷（30mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加3-溴苯甲酰氯 (6. 6mL，50毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（50mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩，提供 3-溴-N-(3-二乙基氨基-丙基）苯甲酰胺（15. 6g，100% )。
[0233] 1H 匪R(300MHz，CDCl3) δ9· 15(br s，lH)，7.91(s，lH)，7.75(d，J = 7·9Ηζ， lH)，7.58(d，J = 7.9Hz，lH)，7.29(t，J = 7.9Hz，lH)，3.56(dd，J = 10·3,5·8Ηζ，2Η)， 2. 67-2. 53(m，6H)，I. 74(五重峰，J = 5. 7Hz，2H)，I. 04(t，J = 7· 1Ηz，6Η)。
[0234] 根据途径（A)，将3_溴-N- (3-二乙基氨基-丙基）苯甲酰胺（156mg，0· 5 毫摩尔，1当量），3_氨基-N-(嘧啶-4-基）苯甲酰胺（118mg，0.55毫摩尔，LI当 量），Pd 2 (dba) 3 (23mg，0· 025 晕摩尔，5mol % )，XPhos (24mg，0· 05 晕摩尔，IOmol % )和 K2CO3 (276mg，2毫摩尔，4当量）在叔-BuOH(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性气 氛下搅拌20小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用水洗 涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供N-甲 基-3-((3-((3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（25) (16mg，7% )。
[0235] 实施例8 :表1化合物（31)
[0236] 根据途径（E)，将4-氨基嘧啶（1.0g，10. 5毫摩尔，1当量），3_硝基苯甲酸（1.76g， 10. 5 晕摩尔，1 当量），EDCI. HCl (3. 0g，15. 8 晕摩尔，L 5 当量），二乙胺（I. 6mL，11. 6 晕摩 尔，I. 1当量）和二甲基氨基吡啶（129mg，1.05毫摩尔，0· 1当量）在二氯甲烷（12mL)中的 反应混合物在室温下在氩惰性气氛下搅拌18小时。过滤所得沉淀，用水和二氯甲烷洗涤。 减压浓缩有机滤液，所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化。合并先前的沉淀和纯化的化 合物，提供3-硝基-N-(嘧啶-4-基）苯甲酰胺（2. 5g，97% )。
[0237] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 11. 69(s，1H)，9. 00(s，1H)，8. 83(t，J = 2. 0Hz，1H)， 8.77(d，J = 5.7Hz，lH)，8.51-8.41(m，2H)，8.22(dd，J = 5.7，l.lHz，lH)，7.84(t，J = 8. 0Hz，1H)。
[0238] 根据途径（C)，将3-硝基-N-(嘧啶-4-基）苯甲酰胺（3. 3g，13. 5毫摩尔，I当量） 和10% Pd/C(719mg)置于Et0H(50mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-(嘧啶-4-基） 苯甲酰胺（1.6g，55% )。
[0239] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 10. 94(s，1H)，8. 92(dd，J = 1. 3,0· 5Hz，1H)，8. 69(dd， J = 5· 8,0· 5Hz，1H)，8· 18(dd，J = 5· 8,1. 3Hz，1H)，7· 20-7. 10(m，3H)，6· 78(dt，J = 4· 1， 2· 3Hz，1Η)，5· 35(s，2H)。
[0240] 将3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙胺（I. 9mL，11毫摩尔，I. 1当量）置于3Ν NaOH水溶 液（HmL)，将二氯甲烷（6mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加3-溴苯甲 酰氯（I. 3mL，10毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（IOmL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下 搅拌反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩， 提供3-溴-N-(4-甲基哌嗪-1-基-丙基）苯甲酰胺（2. 7g，80% )。
[0241] 1H NMR (300MHz，CDCl3) δ 8.61 (br s，1H)，7.92 (s，lH)，7.82 (d，J = 7·9Ηζ，1H)， 7. 62 (d，J = 7. 9Hz，1H)，7. 32 (t，J = 7. 9Hz，1H)，3. 57 (q，J = 5. 2Hz，2H)，2. 79-2. 35 (m， 10H)，2. 33 (s，3H)，I. 78 (五重峰，J = 5. 2Hz，2H)。
[0242] 根据途径（A)，将3-溴-N- (4-甲基哌嗪-I-基-丙基）苯甲酰胺（576mg， 1.7毫摩尔，1当量），3_氨基-N-(嘧啶-4-基）苯甲酰胺（400mg，1.87毫摩尔，I. 1当 量），Pd2 (dba) 3 (78mg，0· 085 晕摩尔，5mol % )，XPhos (81mg，0· 17 晕摩尔，IOmol % )和 K2CO3 (940mg，6. 8毫摩尔，4当量）在叔-BuOH(7mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性 气氛下搅拌20小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用 水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供 N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-3-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰 胺（31) (54mg，7% )。
[0243] 实施例9 :表1化合物（35)
[0244] 根据途径（B)，将4-氨基吡啶（2. lg，22毫摩尔，I. 1当量）置于3N NaOH水溶液 (28mL)，将二氯甲烷（12mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加3-硝基苯甲酰 氯（3. 7g，20毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（20mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。过滤所得沉淀，用水和二氯甲烷洗涤，提供3-硝基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（2. 4g，50% )。
[0245] 1H NMR (300MHz，d6-DMS0) δ 10.98 (s，lH)，8.80 (s，lH)，8.51 (d，J = 6·2Ηζ，2H)， 8.47(d，J = 7.9Hz，lH)，8.42(d，J = 7.9Hz，lH)，7.86(t，J = 7.9Hz，lH)，7.80(d，J = 6. 2Hz，2H) 〇
[0246] 根据途径（C)，将3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（lg，4.1毫摩尔，I当量） 和10% Pd/C(150mg)置于Et0H(30mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺（660mg，75% )。
[0247] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 10. 46(s，1H)，8. 45(dd，J = 5. 0,1. 3Hz，2H)，7. 77(dd， J = 5· 0,1. 3Hz，2H)，7· 17(t，J = 7. 9Hz，1H)，7· 12-7. 03(m，2H)，6· 77(dd，J = 7· 9,1. 2Hz， 1H)，5· 38(s，2H) 〇
[0248] 将6-氯-吡啶-2-羧酸（4. 4g，27. 9毫摩尔，I当量）置于氩惰性气氛下。缓慢加 入亚硫酰氯（8. lmL，111. 6毫摩尔，4当量）。在回流加热反应混合物和搅拌48小时。在冷 却至室温后，减压浓缩反应混合物。将N，N-二乙基丙二胺（2. 5mL，15. 7毫摩尔，I. 1当量） 置于3N NaOH水溶液（20mL)，将二氯甲烷（IOmL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至 〇°C，滴加6-氯-吡啶-2-碳酰氯残余物（2. 5g，14. 3毫摩尔，1当量）in二氯甲烷（13mL) 溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗 绦，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩，提供6-氯-吡啶-2-羧酸（3-二乙基氨基-丙基） 酰胺（2.7g，70% )。
[0249] 4匪1?(30010^，0)(：13)3 9.22(8，1!1)，8.10((1，】=7.9泡，1!1)，7.77(扒】= 7.9Hz，lH)，7.40(d，J = 7·9Ηζ，1H)，3.53 (dd，J = 12.1，5·8Ηζ，2H)，2. 65-2. 49 (m，6H)， I. 82-1. 68(m，2H)，I. 06(t，J = 7. lHz，6H)。
[0250] 根据途径（A)，将6_氯-吡啶_2_羧酸（3-二乙基氨基-丙基）酰胺（135mg， 0.5毫摩尔，1当量），3_氨基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（117mg，0.55毫摩尔，I. 1当 量），Pd2 (dba) 3 (23mg，0· 025 晕摩尔，5mol % )，XPhos (24mg，0· 05 晕摩尔，IOmol % )和 K2C03(276mg，2毫摩尔，4当量）在叔-Bu0H(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性 气氛下搅拌20小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀 释。有机相用 水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供 N-(3-(二乙基氨基）丙基）_6_( (3-(吡啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）吡啶酰胺（35) (79mg，35% )。
[0251] 实施例10 :表1化合物（39)
[0252] 根据途径（D)，将4_(甲基氨基）吡啶（1.25g，11.6毫摩尔，1.0当量），3_硝基苯 甲酰氯（2. 57g，13. 9毫摩尔，1. 2当量），N，N-二异丙基乙胺（3. 02mL，17. 3毫摩尔，1. 5当 量）和二甲基氨基吡啶（103mg，1. 41毫摩尔，1当量）在二氯甲烷（25mL)中的反应混合物 在室温下在氩惰性气氛下搅拌18小时。有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓 缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供N-甲基-3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯 甲酰胺（2.96g，100% )。
[0253] 1H NMR(300MHz，CDC13) S8.50(dd，J = 4.6，1.6Hz，2H)，8.25(s，lH)，8.21(d，J = 7. 9Hz，1H)，7· 62(d，J = 7. 9Hz，1H)，7· 45(t，J = 7. 9Hz，1H)，6· 98(dd，J = 4· 6,1. 6Hz，2H)， 3· 56(s，3H) 〇
[0254] 根据途径（〇,将N-甲基-3-硝基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（2. 96g，ll. 5毫摩 尔，1当量）和10% Pd/c(450mg)置于EtOH(IOOmL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物 16小时。然后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-甲 基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（2. 5g，96% )。
[0255] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 8. 40(dd，J = 4. 6,1. 6Hz，2H)，7. 14(dd，J = 4. 6， 1.6Hz，2H)，6.89(t，J = 7.9Hz，lH)，6.59(s，lH)，6.53(d，J = 7.9Hz，lH)，6.34(d，J = 7. 9Hz，1H)，5. 22 (s，2H)，3. 37 (s，3H)。
[0256] 在氩惰性气氛下将2-氯-异烟酸（2. 0g，12. 7毫摩尔，I当量）置于乙腈（25. 4mL) 中。缓慢加入亚硫酰氯（1.2mL，16. 5毫摩尔，1.3当量）和DMF (100 μ L，1.27毫摩尔，0. 1当 量）。反应混合物在回流下加热和搅拌1小时。在冷却至室温后，减压浓缩反应混合物。将 3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙胺（2. 7mL，15. 7毫摩尔，L 2当量）置于3Ν NaOH水溶液（20mL)， 将二氯甲烷（IOmL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加2-氯-异烟酰氯残 余物（12. 7毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（13mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩，提供 2-氯-N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基）-丙基]-异烟酰胺（1.8g，43% )。
[0257] 1H NMR(300MHz，CDC13) S9.03(s，lH)，8.51(d，J = 4.9Hz，lH)，7.71-7.64(m，2H)， 3· 58 (dd，J = 10. 8, 5. 0Hz，2H)，2· 66-2. 40 (m，10H)，2· 32 (s，3H)，I. 84-1. 73 (m，2H)。
[0258] 根据途径（A)，将2-氯-N-[3-(4-甲基-哌嗪-I-基）-丙基]-异烟酰胺（148mg， 0. 5毫摩尔，1当量），3_氨基-N-甲基-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺（125mg，0. 55毫摩尔， 1. 1 当量），Pd2 (dba) 3 (23mg，0· 025 晕摩尔，5mol % )，XPhos (24mg，0· 05 晕摩尔，IOmol % ) 和K2CO3 (276mg，2毫摩尔，4当量）在叔-BuOH(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰 性气氛下搅拌20小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用 水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供 2-((3-(甲基（吡啶-4-基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙 基）异烟酰胺（39) (43mg，18% )。
[0259] 实施例11 :表1化合物（41)
[0260] 根据途径（E)，将4-氨基嘧啶（885mg，9.3毫摩尔，I. 1当量），3_硝基苯甲酸 (l·4g，8·4毫摩尔，l当量），EDCLHCl(2·4g，12·6毫摩尔，L5当量），三乙胺（L3mL，9·3 毫摩尔，I. 1当量）和二甲基氨基吡啶（103mg，0.8毫摩尔，0· 1当量）在二氯甲烷（IOmL) 中的反应混合物在室温下在氩惰性气氛下搅拌18小时。过滤所得沉淀，用水和二氯甲烷洗 涤。减压浓缩有机滤液，所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化。合并先前的沉淀和纯化 的化合物，提供3-硝基-N-(嘧啶-4-基）苯甲酰胺（I. 35g，66% )。
[0261] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 11. 69(s，1H)，8. 99(s，1H)，8. 83(s，1H)，8. 76(d，J = 5. 6Hz，1H)，8· 50-8. 40(m，2H)，8· 22(dt，J = 5· 6,1. 2Hz，1H)，7· 83(t，J = 7. 9Hz，1H)。
[0262] 根据途径（C)，将3-硝基-N-(嘧啶-4-基）苯甲酰胺（I. 35g，5.5毫摩尔，1当量） 和10% Pd/C(303mg)置于Et0H(30mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗涤，减压浓缩滤液，提供3-氨基-N-(嘧啶-4-基） 苯甲酰胺（1.2g，100% )。
[0263] 1H NMR(300MHz, (I6-DMSO) δ 10. 93 (br s, 1H), 8. 92 (dd, J = I. 3,0. 5Hz, 1H), 8. 69(dd，J = 5· 8,0· 5Hz，1H)，8· 18(dd，J = 5· 8,1. 3Hz，1H)，7· 20-7. 12(m，3H)，6· 78(dt，J =4· 1，2· 3Hz，1Η)，5· 35(s，2H)。
[0264] 在氩惰性气氛下将2-氯-异烟酸（2. 0g，12.7毫摩尔，1当量）置于乙腈 (25. 4mL)。缓慢加入亚硫酰氯（I. 2mL，16. 5毫摩尔，1. 3当量）和DMF (100 μ L，1. 27毫摩尔， 0.1当量）。反应混合物在回流下加热和搅拌1小时。在冷却至室温后，减压浓缩反应混合 物。将N，N-二乙基丙二胺（2. 5mL，15. 7毫摩尔，I. 2当量）置于3N NaOH水溶液（20mL)， 将二氯甲烷（IOmL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加2-氯-异烟酰氯残 余物（12. 7毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（13mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩，提供 2-氯-N-(3-二乙基氨基-丙基）异烟酰胺（I. 8g，47% )。
[0265] $匪1?(30(^泡，0)(：13)3 9.62(8，1!1)，8.49((1，了 = 5.0取，1!〇,7.66(8，1!1)， 7. 58(d，J = 5. 1Hz，1H)，3. 59(dd，J = 10. 4,5· 0Ηζ，2Η)，2· 70-2. 55(m，6H)，1. 81-1. 72(m， 2H)，I. 06(t，J = 7· 1Ηz，6Η)。
[0266] 根据途径（A)，将2-氯-N- (3-二乙基氨基-丙基）异烟酰胺（135mg，0· 5 毫摩尔，1当量），3_氨基-N-(嘧啶-4-基）苯甲酰胺（118mg，0.55毫摩尔，LI当 量），Pd 2 (dba) 3 (23mg，0· 025 晕摩尔，5mol % )，XPhos (24mg，0· 05 晕摩尔，IOmol % )和 K2C03(276mg，2毫摩尔，4当量）在叔-Bu0H(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性 气氛下搅拌20小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用 水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供 N-(3-(二乙基氨基）丙基）_2_( (3-(喃啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）异烟酰胺（41) (79mg，35% )。
[0267] 实施例12 :表1化合物（44)
[0268] 根据途径（E)，将4-氨基吡啶（837mg，8. 9毫摩尔，1.3当量），2-硝基-异烟酸 (I. 15g，6. 8毫摩尔，1当量），EDCI. HC1(1. 7g，8. 9毫摩尔，1.3当量），N，N-二异丙基乙胺 (3. OmL，17. 1毫摩尔，2. 5当量）和二甲基氨基吡啶（272mg，2. 2毫摩尔，0.25当量）在二 氯甲烷（7mL)中的反应混合物在室温下在氩惰性气氛下搅拌18小时。有机相用水洗涤， 在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供2-硝 基-N-吡啶-4-基-异烟酰胺（835mg，50 % )。
[0269] 屮匪1?(30(^取，]\^00)3 8.86-8.80(111，2!〇,8.50((1(1，了 = 5.0，1.6取，2!〇， 8. 31 (dd，J = 4. 8,1. 5Hz，1H)，7. 88 (dd，J = 5. 0,1. 6Hz，2H)。
[0270] 根据途径（C)，将2-硝基-N-吡啶-4-基-异烟酰胺（835mg，3· 4毫摩尔，I当量） 和10% Pd/C(150mg)置于Et0H(50mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗漆，减压浓缩滤液，提供2_氛基-N-吡啶 _4_基-异 烟酰胺（727mg，99% )。
[0271] 1H NMR (300MHz，d6-DMS0) δ 10.61 (s，lH)，8.48 (dd，J = 4. 8,1·5Ηζ，2H)，8.07 (d，J =5.3Hz，lH)，7.75(dd，J = 4.8，1.5Hz，2H)，6.91(d，J = 5.3Hz，lH)，6.86(s，lH)，6.28(s， 2H) 〇
[0272] 在氩惰性气氛下，将2-氯-异烟酸（2. 0g，12. 7毫摩尔，I当量）置于乙腈 (25. 4mL)中。缓慢加入亚硫酰氯（I. 2mL，16. 5毫摩尔，1. 3当量）和DMF(K)O μ L，1. 27毫 摩尔，〇. 1当量）。反应混合物在回流下加热和搅拌1小时。在冷却至室温后，减压浓缩反 应混合物。将Ν，N-二乙基丙二胺（2. 5mL，15. 7毫摩尔，1. 2当量）置于3Ν NaOH水溶液 (20mL)，将二氯甲烷（IOmL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加2-氯-异烟 酰氯残余物（12. 7毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（13mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛 下搅拌反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩， 提供2-氯-N-(3-二乙基氨基-丙基）异烟酰胺（I. 8g，47% )。
[0273] $匪1?(30(^泡，0)(：13)3 9.62(8，1!1)，8.49((1，了 = 5.0取，1!〇,7.66(8，1!1)， 7. 58(d，J = 5. 1Hz，1H)，3. 59(dd，J = 10. 4,5· 0Ηζ，2Η)，2· 70-2. 55(m，6H)，1. 81-1. 72(m， 2H)，I. 06(t，J = 7· 1Ηz，6Η)。
[0274] 根据途径（A)，将2-氯-N-(3-二乙基氨基-丙基）异烟酰胺（135mg，0· 5晕摩尔，I 当量），2-氨基-N-吡啶-4-基-异烟酰胺（I 18mg，0· 55毫摩尔，I. 1当量），Pd2 (dba) 3 (23mg， 0· 025 晕摩尔，5mol % )，XPhos (24mg，0· 05 晕摩尔，IOmol % )和 K2CO3 (276mg，2 晕摩尔，4 当量）在叔_Bu0H(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性气氛下搅拌20小时。然 后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用水洗涤，在MgSO 4I干燥， 过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供N-(3-(二乙基氨基）丙 基）-2-((4-( P比啶_4_基氨基甲酰基）P比啶_2_基）氨基）异烟酰胺（44) (70mg，31 % )。
[0275] 实施例13 :表1化合物（47)
[0276] 根据途径（E)，将4-氨基吡啶（837mg，8. 9毫摩尔，1.3当量），2-硝基-异烟酸 (I. 15g，6. 8毫摩尔，1当量），EDCI. HC1(1. 7g，8. 9毫摩尔，1.3当量），N，N-二异丙基乙胺 (3. OmL，17. 1毫摩尔，2. 5当量）和二甲基氨基吡啶（272mg，2. 2毫摩尔，0.25当量）在二 氯甲烷（7mL)中的反应混合物在室温下在氩惰性气氛下搅拌18小时。有机相用水洗涤， 在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供2-硝 基-N-吡啶-4-基-异烟酰胺（835mg，50 % )。
[0277] 屮匪1?(30(^取，]\^00)3 8.86-8.80(111，2!〇,8.50((1(1，了 = 5.0，1.6取，2!〇， 8. 31 (dd，J = 4. 8,1. 5Hz，1H)，7. 88 (dd，J = 5. 0,1. 6Hz，2H)。
[0278] 根据途径（C)，将2-硝基-N-吡啶-4-基-异烟酰胺（835mg，3. 4毫摩尔，I当量） 和10 % Pd/C (150mg)置于EtOH (50mL)中。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗漆，减压浓缩滤液，提供2_氛基-N-吡啶 _4_基-异 烟酰胺（727mg，99% )。
[0279] 1H NMR (300MHz，d6-DMS0) δ 10.61 (s，lH)，8.48 (dd，J = 4. 8,1·5Ηζ，2H)，8.07 (d，J =5.3Hz，lH)，7.75(dd，J = 4.8，1.5Hz，2H)，6.91(d，J = 5.3Hz，lH)，6.86(s，lH)，6.28(s， 2H) 〇
[0280] 将N，N-二乙基丙二胺（8. 7mL，55毫摩尔，L I当量）置于3N NaOH水溶液（71mL)， 将二氯甲烷（30mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加3-溴苯甲酰氯 (6. 6mL，50毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（50mL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下搅拌 反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩，提供 3-溴-N-(3-二乙基氨基-丙基）苯甲酰胺（14. 6g，94% )。
[0281] 1H NMR(300MHz，CDCl3) δ9· 16(br s，lH)，7.91(t，J = 1.8Hz，lH)，7.75(d，J = 7. 9Hz，1H)，7· 58(d，J = 7. 9Hz，1H)，7· 29(t，J = 7. 9Hz，1H)，3· 56(dd，J = 10. 1，5· 7Hz， 2H)，2. 72-2. 50(m，6H)，I. 75(五重峰，J = 5. 7Hz，2H)，I. 05(t，J = 7. lHz，6H)
[0282] 根据途径（A)，将3-溴-N-(3-二乙基氨基-丙基）苯甲酰胺（156mg，0.5毫摩尔，I 当量），2-氨基-N-吡啶-4-基-异烟酰胺（I 18mg，0· 55毫摩尔，I. 1当量），Pd2 (dba) 3 (23mg， 0· 025 晕摩尔，5mol % )，XPhos (24mg，0· 05 晕摩尔，IOmol % )和 K2CO3 (276mg，2 晕摩尔，4 当 量）在叔-BuOH(2mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩惰性气氛下搅拌20小时。然后减 压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相用水洗涤，在MgSO4上干燥，过滤 和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供2-((3-((3-(二乙基氨基）丙 基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基）异烟酰胺（47) (52mg，23% )。
[0283] 实施例14 :表1化合物（51)
[0284] 根据途径（E)，将4-氨基吡啶（1.57g，16. 7毫摩尔，1.3当量），2-硝基-异烟酸 (2. 16g，12. 9 毫摩尔，1 当量），EDCI. HCl (3. 69g，19. 3 毫摩尔，L 5 当量），N，N-二异丙基乙 胺（5. 3mL，32. 1毫摩尔，2. 5当量）和二甲基氨基吡啶（392mg，3. 2毫摩尔，0· 25当量）在 二氯甲烷（15mL)中的反应混合物在室温下在氩惰性气氛下搅拌18小时。有机相用水洗 涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提供2-硝 基-N-吡啶-4-基-异烟酰胺（I. 68g，54% )。
[0285] 屮匪1?(30(^取，]\^00)3 8.86-8.80(111，2!〇,8.50((1(1，了 = 5.0，1.6取，2!〇， 8. 31 (dd，J = 4. 8,1. 5Hz，1H)，7. 88 (dd，J = 5. 0,1. 6Hz，2H)。
[0286] 根据途径（C)，将2-硝基-N-吡啶-4-基-异烟酰胺（I. lg，4. 5毫摩尔，I当量） 和10% Pd/C(240mg)置于Et0H(50mL)。在室温下在4气氛下搅拌反应混合物16小时。然 后在C盐上过滤反应混合物，用EtOH洗漆，减压浓缩滤液，提供2_氛基-N-吡啶 _4_基-异 烟酰胺（898mg，93% )。
[0287] 1H NMR(300MHz，d6-DMS0) δ 10. 68(s，1H)，8. 48(d，J = 5. 9Hz，2H)，8. 07(d，J = 5. 2Hz，1H)，7· 77(d，J = 5· 9Hz，2H)，6· 93(d，J = 5. 2Hz，1H)，6· 87(s，1H)，6· 27(s，2H)。
[0288] 将3-(4-甲基哌嗪-I-基）丙胺（I. 9mL，11毫摩尔，I. I当量）置于3N NaOH水溶 液（HmL)，将二氯甲烷（6mL)加至溶液。用冰浴将反应混合物冷却至0°C，滴加3-溴苯甲 酰氯（I. 3mL，10毫摩尔，1当量）的二氯甲烷（IOmL)溶液。然后在室温下在氩惰性气氛下 搅拌反应混合物18小时。倾析之后，有机相用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩， 提供3-溴-N-(4-甲基哌嗪-1-基-丙基）苯甲酰胺（2. 7g，80% )。
[0289] 1H NMR (300MHz，CDCl3) δ 8.61 (br s，1H)，7.92 (s，lH)，7.82 (d，J = 7·9Ηζ，1H)， 7. 62 (d，J = 7. 9Hz，1H)，7. 32 (t，J = 7. 9Hz，1H)，3. 57 (q，J = 5. 2Hz，2H)，2. 79-2. 35 (m， 10H)，2. 33 (s，3H)，I. 78 (五重峰，J = 5. 2Hz，2H)。
[0290] 根据途径（A)，将3-溴-N- (4-甲基哌嗪-I-基-丙基）苯甲酰胺（123mg， 0. 36毫摩尔，1当量），2_氨基-N-吡啶-4-基-异烟酰胺（96mg，0. 45毫摩尔，I. 1当 量），Pd2 (dba) 3 (17mg，0· 018 晕摩尔，5mol % )，XPhos (17mg，0· 036 晕摩尔，IOmol % )和 K2CO3(200mg，L 44毫摩尔，4当量）在叔-BuOH(l. 4mL)中的反应混合物在90°C加热，在氩 惰性气氛下搅拌48小时。然后减压浓缩反应混合物，所得残余物用乙酸乙酯稀释。有机相 用水洗涤，在MgSO 4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化，提 供2-((3-((3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基） 异烟酰胺（51) (34mg，20% )。
[0291] 实施例15 :药理学数据
[0292] 标准操作程序：
[0293] 药物化合物对MDA-MB231-D3H2LN细胞侵入胶原的效果
[0294] 背景：
[0295] 产生肿瘤转移的关键步骤是肿瘤细胞侵入细胞外基质，其主要组分是胶原。因此， 肿瘤细胞侵入体外胶原可以是体内产生转移的指征。例如，MDA-MB231-luc-D3H2LN小鼠乳 腺癌细胞与MDA-MB231细胞（它们由此衍生）相比确实显示较高的体外胶原侵入和较高的 体内转移能力。用这些MDA-MB231-luc-D3H2LN细胞作为模型，本文所述实验的目标是鉴定 抑制肿瘤细胞在体外侵入胶原，因此也潜在抑制体内产生肿瘤转移的药物化合物。
[0296] 测试原则：
[0297] 步骤1 :制备胶原凝胶底部的细胞：将细胞悬浮于液体胶原溶液（4°C )，分布入 BSA-包覆的孔，然后通过离心在孔底部收集。然后，通过在37°C温育固化胶原。BSA包衣改 善胶原凝胶的粘着。
[0298] 步骤2 :用待测试化合物进行预处理：然后，将浓缩的药物溶液加至胶原顶部，用 药物在低血清条件（0. 025% FBS)预温育细胞48小时。
[0299] 步骤3 :刺激侵入：然后，加入含5% FBS的培养基以刺激细胞侵入胶原凝胶。
[0300] 步骤4 :存活率测试、固定和染色：在额外24小时的温育之后，对胶原中的细胞直 接进行MTS测试。然后，固定细胞，染色细胞核。
[0301] 步骤5 :分析：最终，用自动化的显微镜分析板。已将荧光珠包括在BSA包衣中以 检测孔底部。染色细胞核的图片在相同水平（Oym)以及25 μπι和50 μπι以上取得。
[0302] Note ：
[0303] 为了检测可能毒性效果，在存活测定中平行地测试全部化合物。对血清饥饿细胞 (如侵入测定中）vs在普通培养条件（10% FBS)下的细胞平行地进行存活测定。
[0304] 物质：
[0305] 一般设备：冷冻器（_20°C)，冷藏器（4°C)，制冰机，水浴（37°C)，温育器 (37 °C /5 % CO2)，细胞培养罩，涡旋器，真空泵，显微镜，移液辅助器，微量吸管（移取 1-1000 μ 1)，多通道吸管（移取20-200 μ 1)，标准细胞培养离心机，用于96孔板的冷冻离心 机。
[0306] 一般消费品：无菌管（I. 5/15/50ml)，无菌吸管（5/10/25ml)，无菌微量吸管头（移 取1-1000 μ 1)，无菌巴斯德吸管，无菌试剂储库。
[0307] 一般产品：无菌PBS，无菌Milli-Q水，DMS0,去补体的FBS (冷冻的等分试样）， 0.1 N NaOH，IM H印es，不含血清的ΜΕΜ(不超过1个月），2. 5χ不含血清的ΜΕΜ(不超过1个 月），含10% FBS的ΜΕΜ(不超过1个月），0. 25%胰蛋白酶/ImM EDTA溶液，37%甲醛溶液。
[0308] 特定设备：
[0309] 读板器：Tecan Infinite F200
[0310] 自动化显微镜：Cellomics ArrayScan Vti HCS Reader
[0311] 特定消费品：
[0312] 无菌96孔黑板（用于侵入测定）：Perkin Elmer ViewPlate_96F TC，ref. 6005225
[0313] 特定产品：
[0314] 大鼠尾部胶原，类型I :BD Biosciences，ref. 354236 (注意：各新批次必须经确 证）
[0315] 红色焚光珠 （1 μ m 直径）：Invitrogen，ref. F13083
[0316] Y-27632(5mM 水溶液）：Calbiochem，ref. 688001 (溶液中）或 688000(无水粉末）
[0317] 不含脂肪酸的BSA (无菌过滤的4%水溶液）：Sigma，ref. A8806 (无水粉末）
[0318] Hoechst 33342 核染色（lOmg/ml) :Invitrogen，ref. H3570
[0319] MTS 试剂：Promega CellTiter CellTiter 96* AQueous 〇ηθ Solution Reagent， ref. G3581
[0320] 待测试的药物化合物：一般为50mM的100% DMSO溶液（等分试样储存于_20°C， 然后在4°C储存最长3个月）
[0321] MDA-MB231-luc-D3H2LN 细胞：
[0322] 待用于测定中的细胞培养物的限制：
[0323] 总传代数：最多30
[0324] 最后传代：之前2至4天，比例1:3至1:20
[0325] 细胞密度：50至90% (最优为70% ) (1至2x 106细胞每IOOmm碟）
[0326] 实验程序：
[0327] 一般考虑：对照和板图样：
[0328] 阴性对照：无药物（仅等价浓度的DMS0)。阳性对照：10 μ M Y-27632。为了避免 边缘效果，仅将细胞加至60个中央孔B2-G11 ;行A和H仅接受不含细胞的胶原（用于MTS 测试的空白），列1和12保持空置。各药物测试至少重复三次。阳性对照和阴性对照应在 各板上不同位置进行数批重复三次的测试。典型板图（_=阴性对照，+=阳性对照，1-12 =12种不同试验条件，即不同的药物化合物或浓度）：
[0329]
[0330] 下文指出的体积或其它量是根据上文板图的四个96孔板所需要的。根据测试化 合物的个数，应调整体积和其它量。
[0331] 第1天：细胞的制备和处理（在细胞培养箱中进行全部步骤）：
[0332] 制备 ΜΕΜ+0. 1 % FBS+2 % Lutrol Ε-400+0. 8 % DMSO 中的 4χ 浓缩的药物溶液：将各 620 μ I ΜΕΜ+0. 1 % FBS+2 % Lutrol Ε-400 与各 4 μ I DMSO+ 各 1 μ 1 的 50mM化合物储备溶液 混合（产生20 μ M化合物和0. 8% DMS0)。如果所希望的最终的化合物浓度〈5 μ M，则进一步 在 ΜΕΜ+0. 1% FBS+0. 8% DMSO 中稀释。阴性对照：ΜΕΜ+0. 1% FBS+2% Lutrol Ε-400+0. 8% DMS0,不含任何药物。制备阳性对照：将4.5ml ΜΕΜ+0. l%FBS+2%Lutrol E-400+0.8%FBS 与36 μ I 5mM Y-27632 (新鲜解冻的等分试样）（产生40 μ Μ)。
[0333] 将板包衣用于侵入测定：
[0334] 混合381111不含血清的1^1+211114%不含脂肪酸的834+4以1涡流搅拌荧光珠（也 即稀释1:10000)，涡旋器，分布100 μ 1/孔至用于侵入测定的板中
[0335] 在 4°C用 1800x g 离心 30'（例如 3000rpm，Jouan GR412 离心机）
[0336] 通过吸取除去上清液
[0337] 制备IOx IO6细胞/ml细胞悬浮液（在板离心期间）：
[0338] 除去培养基，用~IOml/碟PBS洗涤细胞，加入1ml/碟0.25%胰蛋白酶/ImM EDTA
[0339] 在 37°C温育 30-60s
[0340] 加入 5-10ml/ 碟预温热的 MEM+10% FBS
[0341] 用IOml移液管通过上下移取进行匀化，全部混合
[0342] 计数细胞
[0343] 在RT用150x g离心3x 106(或更多）细胞5'，（850rpm，std细胞培养物离心机 中）
[0344] 除去上清液，将细胞粒再悬浮于0. 3ml (或更多，分别）不含血清的MEM中，产生 IOx IO6细胞/ml
[0345] 侵入测定的准备（在冰上；在离心细胞期间开始）：
[0346] 在预冷却的管中在冰上混合：例如4. 01mg/ml胶原储备溶液；根据各胶原批次的 储备浓度调节胶原和水的体积：
[0347] 16ml 2. 5x MEM
[0348] 5. 452ml 水
[0349] 0. 8ml IM Hepes
[0350] 0. 39ml IN NaOH
[0351] 16. 958ml 4. Olmg/ml 胶原储备溶液
[0352] 通过温和上下移取来匀化（保持在冰上）。
[0353] 向29. 7ml上述混合物加入300 μ 1的IOx IO6细胞/ml的细胞悬浮液，通过温和上 下移取来匀化（产生O.lx IO6细胞/ml，在1.7mg/ml胶原中，在30ml 1χΜΕΜ+20μΜΗ印es 中）（保持在冰上）。向剩余的9. 9ml加入不含血清的100 μ I MEM，通过温和上下移取来匀 化（产生I. 7mg/ml胶原，在IOml Ix ΜΕΜ+20 μ M H印es中，不含细胞）（保持在冰上）。
[0354] 将100 μ 1/孔分布入包覆的孔中（全部在冰上），根据上文的板图（行A和H :不 含细胞的胶原，线B-G :含细胞的胶原：10000细胞/孔）
[0355] 在 4°C用 200x g 离心 5'（例如 lOOOrpm，Jouan GR412 离心机）
[0356] 将200 μ 1/孔PBS加至全部空置的孔（列1和12)
[0357] 在37°C /5% CO2温育30'（固化胶原）
[0358] 用药物处理：
[0359] 将各 33 μ 1/孔的 ΜΕΜ+0. 1% FBS+2% Lutrol E-400+0. 8% DMSO 中的 4x 浓缩的药 物溶液加至相应的孔中（最终产生ΜΕΜ+0. 025% FBS+0. 5% Lutrol E-400+0. 2% DMSO中的 Ix浓缩的药物）
[0360] 在 37°C /5% CO2温育 48 小时
[0361] 第3天：加入FBS以刺激侵入：
[0362] 制备MEM+5 % FBS : 19ml不含血清的MEM+lml FBS (新鲜解冻等分试样）
[0363] 将33 μ 1/孔加至全部孔
[0364] 在 37°C /5% CO2温育 24 小时
[0365] 第4天：存活率测试，固定和染色：
[0366] 存活率测试：MTS测试：
[0367] 将各33 μ 1/孔的MTS试剂，在37°C /5% CO2温育3-4小时
[0368] 于490nm读取吸光度（与存活率成比例）
[0369] 通过将不存在细胞的背景信号的平均值自在细胞存在下的相应信号减去来计算 经背景校正的信号
[0370] 相对阴性对照（无药物）的平均信号将经背景校正的信号归一化（从而存活率以 〃％对照〃表达）
[0371] 固定和染色（甲醛必须在通风橱中操作）：
[0372] 新鲜制备 18. 5 % 甲酸中的 1 μ g/ml Hoechst 33342 : IOml PBS (不一定无 菌）+10ml 37% 甲酸+2μ1 10mg/ml Hoechst 33342
[0373] 将50 μ 1/孔加至全部含细胞的孔（最终产生3· 7%甲醛）
[0374] 用黑膜封口（随板提供）
[0375] 在RT温育至少7小时
[0376] 第5天（一般）：（在固定和染色之后最短7小时/最长2周）：分析侵入测试：
[0377] 用 Cellomics ArrayScan Vn HCS Reader 不范：
[0378] BioApplication ：SpotDetector. V3
[0379] 板型：Perkin Elmer 96 孔
[0380] 测试方案的参数：
[0381] 目镜：10χ(ΝΑ· 45)
[0382] apotome :是（所得光学切片：11. 7 μΜ)
[0383] 场每孔：6-8
[0384] 在各场中自动聚焦
[0385] 自动聚焦通道：1
[0386] 通道1(开启自动聚焦，和拍摄孔底部的荧光珠）：滤光器：XF93_TRITC;暴露时 间：通常0. 002至0.0 ls
[0387] 通道2 (拍摄与荧光珠相同水平的染色细胞）：滤光器：XF93-H〇eChst ;暴露时间： 通常0· 02至0· Is ;z偏移：0 μ M
[0388] 通道3(在荧光珠以上25以11的染色细胞的照片）：滤光器4?93-!1〇6(*81暴露时 间：通常0· 02至0· Is ;ζ偏移：-25 μ M
[0389] 通道4(在荧光珠以上50以11的荧光细胞的照片）：滤光器4?93-!1〇6(*81暴露时 间：通常0· 02至0· Is ;ζ偏移：-50 μ M
[0390] 目标鉴定：方法：固定阈值：100-32767
[0391] 目标选择参数： 最小 最大 SpotArea: 20 1000000000000 SpotShapeBFR: 0.2 1000 SpotShapeBAR: 0 1000 SpotAvg Iuten: 200 32767 SpotTotalInten: $4000 (从而无限制）1000000000000 TargetAvgInten: 0 32767 TargetTotalInten: 0 1000000000000
[0392] 用vHCS Viewer分析扫描结果：
[0393] 导出结果：各孔：
[0394] 有效场的数量
[0395] 各通道2、3和4("场细节"）中的各有效场中的目标数量
[0396] 在各通道2、3和4中，各孔的目标平均数量/有效场
[0397] 进一步分析中排除每孔小于6个有效场的孔
[0398] 视觉检查全部照片的任意明显问题，比如对焦不准或明显不均匀的胶原结构（〃 气泡/鼓泡"等）等；在有明显问题：文件的情况下，然后从进一步分析中排除相应孔。
[0399] 进一步分析侵入测定的结果（用例如Excel):
[0400] 对于各孔，计算计数细胞的平均侵入距离：（25 μ m X于25 μ m的细胞数+50 μ m X 于50 μ m的细胞数）/于0、25和50 μ m的细胞总数
[0401] 对于全部四个参数（于0 μπι的细胞数，于25 μπι的细胞数，于50 μπι的细胞数，计 数细胞的平均侵入距离），计算各次重复的平均值、SD和CV
[0402] 将CV多50 %的任意重复无效化（如果对于未处理阴性对照或用化合物 Υ-27632-处理的阳性对照CV多50%，则待重新测试的化合物，或者待重复测定）。Υ27632 是下式的Rho-相关蛋白质激酶P160R0CK的选择性抑制剂
[0403]
[0404] 仅在用10 μ M Υ_27632(阳性对照）处理的细胞的平均侵入距离与未处理阴性对 照相比减少彡40 %的情况下，测试得以确证。
[0405] 最终分析：确定给定化合物具有阳性对照（10 μ M Υ-27632)的50%的抗侵入性效 果的浓度。确定化合物在这些条件下的毒性（=存活率损失）。
[0406] 毒性测试（在普通细胞培养条件下）：
[0407] 如侵入测试地制备化合物，然后加至在标准96-孔组织培养板中的在普通培养条 件下（MEM+10%FBS)的 MDA-MB231-luc-D3H2LN 细胞（2000/孔），或人类 PBMC(75000/孔， 在RPMI+10% FBS+IL-2中）。在72小时温育之后，根据生产商的指导（Promega Ref. G3581) 进行标准MTS测试。在各种浓度测试化合物（浓度-应答曲线）以便确定获得50%毒性的 浓度。
[0408] hERG通道抑制：
[0409] 由 Porsolt&Partners (Z. A. de Glatign6, 53940Le Genest-Saint-Isle，法国）进 行。简言之，各3个hERG-转染的HEK293细胞与于1和10 μM的化合物超融合，并且通过 电生理学测量hERG通道电流，如Crumb等人在J. Pharmacol. Exp. Ther. 2000中的描述。
[0410] 结果
[0411] 下表指出对MDA-MB231，对PBMC的毒性，抗侵入性效果，和hERG通道的抑制。
[0412]
[Oh j」
[0414] 实施例16:比较数据
[0415] 将本发明的三种化合物（化合物1、3和4)分别与已经具体或上位公开于 W02009087238的三种化合物进行比较（MDA毒性，PBMC毒性，侵入性抑制和hERG抑制）。
[0416] 更确切地：
[0417] -根据本发明的化合物1与W02009087238中的化合物编号C88(第66页）相比：
[0418]
[0419] (W02009087238的化合物C88,此后编号为112)
[0420] -根据本发明的化合物3与此后编号为583的化合物相比，其相应于下式：
[0421]
[0422] -根据本发明化合物4与此后编号为585的化合物相比，其相应于下式：
[0423]
[0424] 下表指出对MDA-MB231的毒性，对PBMC的毒性，抗侵入性效果，和hERG通道的抑 制。
[0425]
[0426] 该表显示所要求保护的化合物（I)与预先已知的化合物相比具有改善的特性。
[0427] 更特别，根据本发明的化合物1对MDA-MB231和对PBMC的毒性更低，具有更有效 的侵入性抑制，和显示比化合物C88 (112)更低的hERG抑制。
[0428] 更特别，根据本发明的化合物3对MDA-MB231和对PBMC的毒性更低，和显示比化 合物583更低的hERG抑制。
[0429] 更特别，根据本发明的化合物4对MDA-MB231和对PBMC毒性更低，具有更有效的 侵入性抑制，和显示比化合物585更低的hERG抑制。
[0430] 实施例17:比较数据
[0431] 对具体公开于W02009/087238的一种比较化合物和一种本发明所要求保护的化 合物进行2组实验，使用W02009/087238所公开的和如实施例16中所述的参比化合物 〃C88〃。
[0432] 所述化合物C88用作参比来比较这两个系列化合物的侵入性抑制效率。
[0433] 首先，将化合物C88与公开于W02009/087238 (第95页）的FMMB46. 1比较，其具
有下式
[0434]
[0435] 用程序1，化合物C88被视为具有抗侵入性特性。
[0436] 其次，将化合物C88与本发明化合物1相比，采用程序2。
[0437] 应注意程序1和2都是测试药物化合物对侵入的效果的侵入性测试。除了与药物 的温育时间，它们完全相同。
[0438] 在第一组实验中，在用化合物C88处理细胞时检测抗侵入 性活性，但是未观察到 FMMB46. 1的效果（表1)。
[0439] 在第二组实验中，在用化合物C88和化合物1处理细胞时检测抗侵入性活性。
[0440] 第一组实验-结果：
[0441] 表 1
[0442]
[0443] av.意指平均值
[0444] SD意指标准偏差
[0445] η是样本数
[0446] 此处，侵入（进入胶原）是在与10 μ M Υ-27632相比50 μ m倍抑制性效果的细胞 数每有效场。
[0447] 标准操作程序1 :
[0448] 所述程序描述于实施例15,除了（i)在第一天期间的最后一步〃制备侵入测试〃 和〃用药物处理〃和第2天和第3天，此后有详述，和（ii)最终并未确定浓度或毒性。
[0449] 不同的步骤如下：
[0450] 侵入测定的准备（在冰上；在离心细胞期间开始）：
[0451] 在预冷却的管中在冰上混合：例如3. 4mg/ml胶原储备溶液；根据各胶原批次的储 备浓度调节胶原和水的体积：
[0452] 2. 8ml 2. 5x MEM
[0453] 441 μ 1 水
[0454] 140 μ I IM Hepes
[0455] 49 μ I IN NaOH
[0456] 3· 5ml 3· 4mg/ml 胶原储备溶液（产生 I. 7mg/ml 胶原 7ml)
[0457] 通过温和上下移取来匀化（保持在冰上）
[0458] 加入70 μ 1的IOx IO6细胞/ml细胞悬浮液，通过温和上下移取来匀化（产生0· Ix IO6细胞/ml，在I. 7mg/ml胶原中，在7ml Ix ΜΕΜ+20 μ M H印es中）（保持在冰上）
[0459] 将100 μ 1/孔（也即10000细胞/孔）分布入用于侵入测定的板的包覆孔中（全 部在冰上）
[0460] 在 4°C用 200x g 离心 5'（例如 lOOOrpm，Jouan GR412 离心机）
[0461] 将200 μ 1/孔PBS加至全部空置孔
[0462] 在37°C /5% CO2温育30'（固化胶原）
[0463] 用药物处理：
[0464] 根据上述板图样，将各33 μ 1/孔的4x MEM+0. 1 % FBS中的浓缩药物溶液加至全部 三个板的相应孔中
[0465] 在 37°C /5% CO2温育 24 小时
[0466] 第2天：加入FBS以刺激侵入：
[0467] 在处理24小时之后进行显微镜观察：
[0468] 检查存活测定的细胞
[0469] 加入FBS (在细胞培养箱中）：
[0470] 制备MEM+5 % FBS :7. 2ml不含血清的ΜΕΜ+0. 8ml FBS (新鲜解冻等分试样或（如 果保持在4°C )前一天解冻的等分试样的剩余部分）
[0471] 将33 μ 1/孔加至侵入和存活率测试的全部孔
[0472] 在 37°C /5% CO2温育 24 小时 [0473] 第3天：停止：
[0474] 在处理48小时之后进行显微镜观察：
[0475] 检查存活测定的细胞
[0476] 侵入测定：固定和染色（甲醛必须在通风橱下操作）：
[0477] 新鲜制备1 μ g/ml的Hoechst 33342的18. 5%甲醛溶液：5ml PBS (并非必须无 菌）+5ml 37%甲醛+1 μ I 10mg/ml Hoechst 33342(注意：对于1个板，较小体积就足够， 但是最低移取体积不应低于I U 1)
[0478] 将50 μ 1/孔加至侵入测试的全部孔中（最终产生4. 3%甲醛）
[0479] 用黑膜封口（随板提供）
[0480] 在RT温育至少7小时。
[0481] 在相同条件下在第3天以程序1的框架准确地进行在实施例15中第5天进行的 分析。
[0482] 第二组实验-结果：
[0483] 表 2
[0484]
[0485] av.意指平均值
[0486] SD意指标准偏差
[0487] η是样本数
[0488] 此处，侵入（进入胶原）是与10 μΜ Υ-27632相比达到50%的抑制效果所必需的 化合物浓度。
[0489] 标准操作程序2与实施例15描述的程序完全相同。
[0490] 结论：鉴于化合物1显示比化合物C88更佳的侵入结果，而化合物C88本身显示比 化合物FMMB46. 1更佳的侵入结果，结论是发明人已发现出人意料的特性，W02009/087238 的公开中对此并无任何启示。
[0491] 根据本发明的化合物展示预期对癌有活性的抗侵入性效果。
[0492] 因此，对本发明公开的化合物所进行的测试的结果显示所述化合物可以用来抑制 和/或预防和/或治疗癌症。更特别地，下述类型的癌可以通过根据本发明的化合物来治 疗：结直肠癌，胰癌，肺癌包括非小细胞肺癌，乳腺癌，膀胱癌，胆囊癌，甲状腺癌，黑色素瘤， 肝癌，子宫/子宫颈癌，食道癌，肾癌，卵巢癌，前列腺癌，头颈癌，和胃癌，等。
[0493] 出于该意图，可将有效量的所述化合物给予罹患癌症的患者。
[0494] 本发明也涉及至少选自如前文所定义的式（I)、（I'）、（Ia)、（Ib)、（Ic)、（Id)和 (Ie)化合物的化合物，和如前文所定义的化合物（1)至（51)，或者根据本发明的其药学上 可接受的盐中任一种用于制备药物组合物的用途，期望用于治疗癌症。
[0495] 本发明也涵盖药物组合物，包含至少选自如前文所定义的式（I)、（I'）、（Ia)、 (Ib)、（Ic)、（Id)和（Ie)化合物的化合物和如前文所定义的化合物（1)至（51)或其任何 药学上可接受的盐。
[0496] 从而，这些药物组合物包含有效量的所述化合物和一种或多种药物赋形剂。
[0497] 前述的赋形剂根据剂型和所希望的给药模式来选择。
[0498] 在该上下文中，它们能够以适于肠或肠胃外给药的任意药物形式存在，该药物形 式含适当赋形剂，例如是简单或包覆片剂，硬明胶，软壳胶囊和其它胶囊，栓剂，或者可饮用 形式比如悬浮液、糖浆剂，或者可注射溶液或悬浮液形式，其剂量使得可以每日给药0. 1至 1000 mg活性物质。
[0499] 本发明也涉及如前文所定义的式（I)，（I'）、（Ia)、（Ib)、（Ic)、（Id)和（Ie)中任 一种的化合物，和如前文所定义的化合物（1)至（51)，或根据本发明的其药学上可接受的 盐之一用于制备药物组合物的用途，所述药物组合物期望用于抑制和/或预防和/或治疗 癌症。
[0500] 本发明还涉及治疗患癌的患者的方法，其包括至少向患者给药有效量的如前文所 定义的式（I)、（I'）、（Ia)、（Ib)、（Ic)、（Id)、和（Ie)和⑴至（51)中任一种的化合物或 其药学上可接受的盐之一的步骤。
【主权项】
1. 式⑴化合物：其中 A和A'独立地代表亚苯基基团或亚吡啶基基团； R2是氢原子或（C ^C4)烷基； 馬是2-吡啶基基团，3-吡啶基基团，4-吡啶基基团，2-嘧啶基基团，4-嘧啶基基团或 5-嘧啶基基团； R4是羰基基团或磺酰基基团；和 1?5是-NH- (CH 2) a-NR6R7基团或4-甲基哌嗪基基团，其中a是1至4的整数，R 6和R 7独 立地代表（C1-C4)烷基，或RjPR7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其选自4-甲 基哌嗪基基团，吗啉代基团，吡咯烷基基团和哌啶子基基团； 或其药学上可接受的盐中任一种。2. 根据权利要求1的式（I)化合物 其中 A和A'独立地代表亚苯基基团或亚吡啶基基团； 馬是氢原子或甲基基团； 馬是2-吡啶基基团，4-吡啶基基团或4-嘧啶基基团； R4是羰基基团或磺酰基基团；和 1?5是-NH-(CH2)a-NR6R 7基团或4-甲基哌嗪基基团，其中a是2至3的整数，1?6和1?7代 表乙基基团，或RjPR7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其选自4-甲基哌嗪基基 团，吗啉代基团，吡咯烷基基团和哌啶子基基团； 或其药学上可接受的盐中任一种。3. 根据权利要求1或2的式⑴化合物，其中在A与A'之间的基团-NH-和基团-R4-R5 相对A'相互位于间位。4. 根据权利要求1至3中任一项的式（I'）化合物 其中X和X'独立地是CH或N ; 馬是氢原子或甲基基团； 馬是2-吡啶基基团，4-吡啶基基团或4-嘧啶基基团； R4是羰基基团或磺酰基基团；和 1?5是-NH-(CH2)a-NR6R 7基团或4-甲基哌嗪基基团，其中a是2至3的整数，1?6和1?7代 表乙基基团，或RjPR7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其选自4-甲基哌嗪基基 团，吗啉代基团，吡咯烷基基团和哌啶子基基团； 或其药学上可接受的盐中任一种。5. 根据权利要求1至4中任一项的式（Ia)化合物其中R2, R3, &和R 5如权利要求1，2和4中任一项所定义； 或其药学上可接受的盐中任一种。6. 根据权利要求1至5中任一项的式（Ia)化合物，其中R 4是羰基基团和R 2,馬和R 5 如权利要求1，2和4中任一项所定义， 或其药学上可接受的盐中任一种。7. 根据权利要求1至4中任一项的式（Ic)化合物其中R2, R3, &和R 5如权利要求1，2和4中任一项所定义； 或其药学上可接受的盐中任一种。8. 根据权利要求1，2,4和7的式（Ic)化合物，其中1?2是氢原子或甲基基团；1?3是4_吡 啶基基团或4-嘧啶基基团；R4是羰基基团；和R 5是-NH-(CH2)a-NR6R7基团，a是整数3, R6和R7代表乙基基团，或R 6和R 7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其是4-甲基哌 嘆基基团； 或其药学上可接受的盐中任一种。9. 根据权利要求1至4中任一项的式（Id)化合物其中R2, R3, &和R 5如权利要求1至3中任一项所定义； 或其药学上可接受的盐中任一种。10. 根据权利要求1，2,3,4和8的式（Id)化合物，其中R2是氢原子；1?3是4_吡啶基基 团；R4是羰基基团；和R 5是-NH-(CH 2) a-NR6R7基团，a是整数3，R 6和R 7代表乙基基团，或R 6 和R7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其是4-甲基哌嗪基基团； 或其药学上可接受的盐中任一种。11. 根据权利要求1至4中任一项的式（Ie)化合物其中R2, R3, &和R 5如权利要求1，2和4中任一项所定义； 或其药学上可接受的盐中任一种。12. 根据权利要求1，2, 3,4和10的式（Ie)化合物，其中R2是氢原子；R 3是4-吡啶基 基团；R4是羰基基团或磺酰基基团；和 1?5是-NH-(CH 2) a-NR6R7基团，a是整数3，R 6和R 7代表乙基基团，或R 6和R 7与它们联接 至的氮原子一起形成杂环基团，其选自4-甲基哌嗪基基团，吗啉代基团，吡咯烷基基团和 哌啶子基基团； 或其药学上可接受的盐中任一种。13. 根据权利要求1的式（I)化合物，选自 -(I)N-(3-(二乙基氨基）丙基）-3-( (3-( R比啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲 酰胺 -(2) 3-((4-((3_(二乙基氨基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-( R比啶_4_基） 苯甲酰胺 -(3)N-(3-吗啉代丙基）-3-((3-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰胺 -(4) N-(吡啶-4-基）-3-((3-((3-(吡咯烷-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基） 苯甲酰胺 -(5) 3-((3-(N-(3-(二乙基氨基）丙基）氨横酰基）苯基）氨基）-N-(啦啶_4_基） 苯甲酰胺 -(6) N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-3-((3-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨 基）苯甲酰胺 -(7)N-(3-(哌啶-1-基）丙基）-3-((3-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲 酰胺 -(8)3-((3-(4-甲基哌嗪-1-羰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺 -(9) 3- ((3- (N- (3-(哌啶-1-基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺 -(10) 3- ((3- (N- (2-(哌啶-1-基）乙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺 -(11) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-3-((3-( R比啶_2_基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯 甲酰胺 -(12) 3-((3-(N-(3-吗啉代丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基）苯甲酰 胺 -(13) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-3-((4-( R比啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯 甲酰胺 -(14)N-(3-吗啉代丙基）-3-((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰胺 -(15) 4-((3-(N-(3-吗啉代丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基）苯甲酰 胺 -(16) N-(吡啶-4-基）-4-((3-(N-(2-(吡咯烷-1-基）乙基）氨磺酰基）苯基）氨 基）苯甲酰胺 -(17) 3- ((3- ((3-(二乙基氨基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-甲基-N- ( P比 啶-4-基）苯甲酰胺 -(18) N-甲基-N-(吡啶-4-基）-3-((3-((3-(吡咯烷-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯 基）氨基）苯甲酰胺 -(19) 3-((3-(N-(3-(二乙基氨基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-甲基-N-(吡 啶-4-基）苯甲酰胺 -(20)N-甲基-3-((3-((3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨 基）-N-(吡啶-4-基）苯甲酰胺 -(21)N-甲基-3-((3-((3-(哌啶-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡 啶-4-基）苯甲酰胺 -(22) N-甲基-3-((3-((3-吗啉代丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺 -(23) N-甲基-3- ((3- (N- (3-吗啉代丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基） 苯甲酰胺 -(24) N-甲基-3-( (3-(N-(3-(哌啶-1-基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡 啶-4-基）苯甲酰胺 -(25) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-3-((3-(喃啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯 甲酰胺 -(26) 3-((3-(N-(3-(二乙基氨基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(嘧啶-4-基） 苯甲酰胺 -(27) 3- ((3- (N- (3-(哌啶-1-基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(嘧啶-4-基） 苯甲酰胺 -(28)N-(嘧啶-4-基）-3-((3-((3-(吡咯烷-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨 基）苯甲酰胺 -(29)N-(3-(哌啶-1-基）丙基）-3-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯 甲酰胺 -(30)N-(3-吗啉代丙基）-3-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯甲酰胺 -(31)N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-3-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨 基）苯甲酰胺 -(32) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-5-((3-( R比啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）烟 酰胺 -(33) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-2-((3-( R比啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）异 烟酰胺 -(34) N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-2-((3-(吡啶-4-基）氨基甲酰基）-苯基） 氨基）异烟酰胺 -(35) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-6-((3-(吡啶_4_基氨基甲酰基）苯基）氨基）P比 啶酰胺 -(36) N- (3-(二乙基氨基）丙基）-6- ((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）吡 啶酰胺 -(37)N-(3-(二乙基氨基）丙基）-6-((3-(甲基（吡啶-4-基）氨基甲酰基）苯基） 氨基）吡啶酰胺 -(38)N-(3_(二乙基氨基）丙基）-2-((3-(甲基（R比啶_4_基）氨基甲酰基）苯基） 氨基）异烟酰胺 -(39)2-((3-(甲基（吡啶-4-基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(3-(4-甲基哌 嗪-1-基）丙基）异烟酰胺 -(40) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-6-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）吡 啶酰胺 -(41) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-2-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）异 烟酰胺 -(42) N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-2-((3-(嘧啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨 基）异烟酰胺 -(43) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-6-((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）吡啶-2-基）氨 基）吡啶酰胺 -(44) N-(3-(二乙基氨基）丙基）-2-((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）吡啶-2-基）氨 基）异烟酰胺 -(45)N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）-2-((4-(吡啶-4-基氨基甲酰基）吡 啶_2_基）氨基）异烟酰胺 -(46) 2- ((3- (N- (3-(二乙基氨基）丙基）氨磺酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基） 异烟酰胺 -(47) 2- ((3- ((3-(二乙基氨基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶_4_基） 异烟酰胺 -(48) 2-((3-((3-吗啉代丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡啶-4-基）异烟酰 胺 -(49) N-(3-(哌啶-1-基）丙基）-3-((3-(吡啶-4-基氨基甲酰基）苯基）氨基）苯 甲酰胺 -(50) N-(吡啶-4-基）-2-((3-((3-(吡咯烷-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨 基）异烟酰胺 -(51)2-((3-((3-(4-甲基哌嗪-1-基）丙基）氨基甲酰基）苯基）氨基）-N-(吡 啶-4-基）异烟酰胺 -及其药学上可接受的盐。14.制备根据权利要求1的式⑴化合物的方法，包括将式（II)化合物其中R2，馬和A如权利要求1中所定义， 与式（III)化合物反应其中X是氯原子，碘原子或溴原子，和R4, RjP A'如权利要求1中所定义。15. 根据权利要求1至13的式（I)化合物，用作药物。16. 根据权利要求1至13的式（I)化合物，用于预防和/或抑制和/或治疗癌症。17. 药物组合物，包含至少一种如权利要求1至13中所定义的式（I)化合物和药学上 可接受的赋形剂。
【专利摘要】本发明涉及式(I)化合物：其中A和A’独立地代表亚苯基基团或亚吡啶基基团；R2是氢原子或(C1-C4)烷基；R3是2-吡啶基基团，3-吡啶基基团，4-吡啶基基团，2-嘧啶基基团，4-嘧啶基基团或5-嘧啶基基团；R4是羰基基团或磺酰基基团；和R5是-NH-(CH2)a-NR6R7基团或4-甲基哌嗪基基团，其中a是1至4的整数，R6和R7独立地代表(C1-C4)烷基，或R6和R7与它们联接至的氮原子一起形成杂环基团，其选自4-甲基哌嗪基基团，吗啉代基团，吡咯烷基基团和哌啶子基基团；或其药学上可接受的盐中任一种。本发明还涉及药物组合物，含有式(I)化合物或其药学上可接受的盐中任一种，和用于获得其的制备方法。所述化合物(I)可用于治疗癌。
【IPC分类】C07D401/12, A61P35/00, A61K31/44, C07D213/75, C07D239/42
【公开号】CN104903293
【申请号】CN201380060496
【发明人】P·鲁, F·马于托, R·纳日曼, G·加多, J·塔泽, D·谢雷, C·布罗克, N·卡于扎克
【申请人】Abivax公司, 国家科研中心, 居里研究所, 蒙彼利埃大学
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2013年9月30日
【公告号】CA2886804A1, EP2712862A1, EP2900635A1, US20150315173, WO2014049578A1
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