一种哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治方法
一种哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于水培蔬菜技术领域，尤其涉及一种哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响 和根腐病的防治方法。
【背景技术】
[0002] 自1932年，Weinding发现木素木霉建议将该菌用于土传植物病害的生物防治，木 霉菌生防研宄工作从此开始。生物技术的发展，木霉菌已由单一地从自然界分离筛选达到 有目的地利用生物技术进行改造以获得新型菌株的程度。在已有的研宄中，木霉菌在生物 防治中能有效控制病害，并减少了化学制剂带来的污染。同时，木霉菌除了治疗疾病外还对 植物生长有一定影响，李世贵等人发现施用霉菌后土壤过氧化氢酶活性得到了提高，植物 的抗病能力得到增强。赵阿娜等人的研宄说明木霉菌剂不仅能有效控制人参根部病害的发 生，而且将人参种苗成活率和人参种子出苗率分别提高30%和16%以上。
[0003] 水培蔬菜生产快速发展，为人们提供优质蔬菜，带来更高经济效益。但同时，由于 水培蔬菜自身生态系统的问题，根腐病一旦发生传染更快，植株致死概率更高，经济损失也 更大。哈茨木霉菌对陆地蔬菜根腐病的防治效果已有许多报道，但哈茨木霉菌对水培生菜 生长、对根腐病的防治效果以及生理生化机理目前还没见相关报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治 方法，旨在防治水培蔬菜的根腐病、促进水培蔬菜的生长。
[0005] 本发明是这样实现的，一种哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治方 法包括：
[0006] 步骤一、挑选健康生菜种子，在适宜条件下萌发生菜种子，一周以后，挑选长势良 好的生菜幼苗，先将其转移在定植篮上，然后再移栽到盛有生菜营养液的塑料水培盆中的 有孔泡沫塑料板中进行水培；
[0007] 步骤二、待移栽好的生菜幼苗在水培营养液中适应2天后，加入哈茨木霉菌，设置 5组哈茨木霉菌浓度，之后培育1个月的时间，控制水培条件适宜，同时定期向各盆中补充 营养液，1组为1盆，每盆有9株生菜幼苗；
[0008] 步骤三、取生长健壮的生菜幼苗移栽至水培营养液后，在适宜条件下进行培育一 周以后，选取其中2组加入哈茨木霉菌，使其浓度为0. 3g?I71，另选取其中2组加入腐霉菌 进行侵染，剩余1组作为对照组；
[0009] 步骤四、为被成功侵染的2组生菜重新配置营养液，加入哈茨木霉菌，使其浓度为 〇. 3g?I71，之后继续让各组水培生菜生长1个月时间，定期向各盆中补充营养液；
[0010] 步骤五、待各组水培生菜生长成熟后，测定株高、根长、鲜重以及生理生化指标。
[0011] 进一步，所述的5组哈茨木霉菌浓度分别为0.lg?L'O. 2g?L'O. 3g?I71， 0? 4g?L\0? 5g?L工。
[0012] 进一步，步骤五所述的测定株高、根长、鲜重以及生理生化指标的方法为：
[0013] 步骤一、测定用不同浓度哈茨木霉菌处理的水培生菜的生长指标和生理生化指 标，移栽营养液培育1个月以后，用米尺测定各组生菜的株高、根长；用电子天平称量各组 生菜的鲜重，用乙醇法提取各组生菜叶绿素体色素，用紫外分光光度法测定叶绿素含量、 CAT活性及P0D活性；
[0014]步骤二、测定用腐霉菌和最佳浓度哈茨木霉菌处理的水培生菜的生长指标和生理 生化指标；
[0015]步骤三、相隔一个月时间，待第二批生菜生长成熟，用电子天平称量各组生菜的鲜 重，用乙醇丙酮混合法提取各组生菜叶绿素体色素，用紫外分光光度法测定叶绿素含量、VC 含量、CAT活性、P0D活性及T-S0D活性，其中，VC含量、CAT活性、P0D活性及T-S0D活性的 测定均采用试剂盒法。
[0016]本次实验通过用一系列浓度梯度的含哈茨木霉菌的培养液处理生菜，探宄哈茨木 霉菌的最佳促水培生生菜生长浓度，及其生物防治效果。结果表明：不同浓度的哈茨木霉菌 对水培生菜均有一定的促生长作用，0. 3g?I71至0. 4g?L4左右用量的哈茨木霉菌能促进 生菜鲜重的增长率达110%以上。但是哈茨木霉菌浓度过高时促生作用反而不理想，很有可 能是因为其竞争作用的缘故，过多的木霉菌消耗了大量营养液中的养分，阻碍了植物生长。 同时，加入哈茨木霉菌的水培生菜在移至室外后，仍表现出较好的生长情况，并未出现染病 症状，说明了哈茨木霉菌对植物根腐病有一定预防效果。
【附图说明】
[0017]图1是本发明实施例提供的哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治 方法流程图。
【具体实施方式】
[0018]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明 进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于 限定本发明。
[0019]下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。
[0020] 请参阅图1:
[0021] 本发明是这样实现的，一种哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治方 法包括：
[0022]S101、挑选健康生菜种子，在适宜条件下萌发生菜种子，一周以后，挑选长势良好 的生菜幼苗，先将其转移在定植篮上，然后再移栽到盛有生菜营养液的塑料水培盆中的有 孔泡沫塑料板中进行水培；
[0023]S102、待移栽好的生菜幼苗在水培营养液中适应2天后，加入哈茨木霉菌，设置5 组哈茨木霉菌浓度，之后培育1个月的时间，控制水培条件适宜，同时定期向各盆中补充营 养液，1组为1盆，每盆有9株生菜幼苗；
[0024]S103、取生长健壮的生菜幼苗移栽至水培营养液后，在适宜条件下进行培育一周 以后，选取其中2组加入哈茨木霉菌，使其浓度为0. 3g?I71，另选取其中2组加入腐霉菌进 行侵染，剩余1组作为对照组；
[0025]S104、为被成功侵染的2组生菜重新配置营养液，加入哈茨木霉菌，使其浓度为 〇. 3g?L'之后继续让各组水培生菜生长1个月时间，定期向各盆中补充营养液；
[0026]S105、待各组水培生菜生长成熟后，测定株高、根长、鲜重以及生理生化指标。
[0027] 进一步，所述的5组哈茨木霉菌浓度分别为0.lg?L'O. 2g?L'O. 3g?I71， 0. 4g?L\0. 5g?L
[0028] 进一步，步骤S105所述的测定株高、根长、鲜重以及生理生化指标的方法为：
[0029] 步骤一、测定用不同浓度哈茨木霉菌处理的水培生菜的生长指标和生理生化指 标，移栽营养液培育1个月以后，用米尺测定各组生菜的株高、根长；用电子天平称量各组 生菜的鲜重，用乙醇法提取各组生菜叶绿素体色素，用紫外分光光度法测定叶绿素含量、 CAT活性及P0D活性；
[0030] 步骤二、测定用腐霉菌和最佳浓度哈茨木霉菌处理的水培生菜的生长指标和生理 生化指标；
[0031] 步骤三、相隔一个月时间，待第二批生菜生长成熟，用电子天平称量各组生菜的鲜 重，用乙醇丙酮混合法提取各组生菜叶绿素体色素，用紫外分光光度法测定叶绿素含量、VC 含量、CAT活性、P0D活性及T-S0D活性，其中，VC含量、CAT活性、P0D活性及T-S0D活性的 测定均采用试剂盒法。
[0032] 实施例一
[0033] 供试生防菌：哈茨木霉菌可湿性粉剂，有效成分含量为3亿CFU/克，由美国拜沃股 份有限公司生产。供试作物：美国大速生生菜种子，由青县青丰种业有限 公司生产，原种供 应商为美国皮托公司。供试培养液：水培营养液的配制参照华南农业大学叶菜类营养液配 方。其中A液，B液先配成100倍溶液，C液先配成1000倍溶液，用时稀释并按A液：B液： C液=1:1:1比例配成水培营养液。
[0034] 1、水培生菜的种植
[0035] 挑选颗粒饱满的美国大速生生菜种子，均匀地洒在铺有润湿滤纸的培养皿中。恒 温25，°C恒湿65%Rh，光照4000Lx的条件下萌发生菜种子。一周以后，挑选其中生长健 壮，大小一致且含有4片叶子的生菜幼苗，先将其转移在定植篮上，然后再移栽到盛有生菜 营养液的水培管道或水培槽中的有孔泡沫塑料板中进行水培，培养液配方根据华南农业大 学叶菜类配方的浓缩营养液配制。
[0036] 2.不同浓度对水培生菜的影响
[0037] 待移栽好的生菜幼苗在水培营养液中适应2天后，加入不同浓度的哈茨木霉菌， 哈茨木霉菌浓度分别为0.lg?L'0. 2g?L'0. 3g?L'0. 4g?L'0. 5g?L'培育1个月 以后，用米尺（分度值为1mm)测定各组生菜的株高、根长；丙酮法测定叶绿素含量；用电子 分析天平（型号BSA124S，台州市赛新科学仪器有限公司）称量各组生菜的鲜重；利用紫外 可见分光光度计（6800型双光束，英国bibby科技有限公司）测定CAT活性及P0D活性（使 用的试剂盒均为南京建成生物科技有限公司生产）。
[0038] 测定结果见表1和表2。
[0039] 从表1可以看出，相较于对照组，实验组水培生菜随着哈茨木霉菌浓度的增加，株 高加根长的总和及鲜重总体呈现先上升后下降的趋势，其中株高加长的总和尤以0. 4g?r1 的用量最大，其最大值为72.lcm，0. 3g?I71的哈茨木霉菌用量可使水培生菜鲜重的增长率 120%以上。
[0040] 表1不同浓度哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响
[0041]
[0042] 表2不同浓度哈茨木霉菌对水培生菜生理生化指标的影响
[0043]
[0044] 从表2可以看出，用不同浓度哈茨木霉菌处理的水培生菜，其叶绿素含量均低于 对照组（不加哈茨木霉菌的水培生菜）。但是CAT活力和P0D活力随着哈茨木霉菌浓度的 增加，总体呈现上升后下降的趋势，其中当哈茨木霉菌浓度为〇. 3g?L4时，CAT活力达到相 对最大值为7. 7459U/mgprot，当哈茨木霉菌浓度为0. 4g?I71时，P0D活力达到相对最大值 为 26. 4976U/mgprot〇
[0045] 3.哈茨木霉菌对生菜根腐病的防治效果
[0046] 根据先前实验的结果，可以确定促进水培生菜生长的最佳哈茨木霉菌浓度为 0? 3g?L1-0? 4g?L1左右。
[0047] 在本次实验中，预防组和治疗组的哈茨木霉菌浓度均为0.3g?L'
[0048] 表3适宜浓度哈茨木霉菌处理对水培生菜根腐病防治效果
[0049]
[0050] 从表3可以看出，第二批水培生菜的生长情况普遍没有第一批好，但是预防组水 培生菜的鲜重，VC含量均高于对照组，进一步说明哈茨木霉菌对水培生菜在逆境胁迫下的 促生长作用。在此条件下，治疗组的CAT活力、P0D活力、T-S0D活力均高于预防组，说明哈 茨木霉菌对根腐病的治疗效果较好。
[0051] 本次实验通过用一系列浓度梯度的含哈茨木霉菌的培养液处理生菜，探宄哈茨木 霉菌的最佳促水培生生菜生长浓度，及其生物防治效果。结果表明：不同浓度的哈茨木霉菌 对水培生菜均有一定的促生长作用，0. 3g?I71至0. 4g?L4左右用量的哈茨木霉菌能促进 生菜鲜重的增长率达110%以上。但是哈茨木霉菌浓度过高时促生作用反而不理想，很有可 能是因为其竞争作用的缘故，过多的木霉菌消耗了大量营养液中的养分，阻碍了植物生长。 同时，加入哈茨木霉菌的水培生菜在移至室外后，仍表现出较好的生长情况，并未出现染病 症状，说明了哈茨木霉菌对植物根腐病有一定预防效果。
[0052] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精 神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治方法，其特征在于，所述的 哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治方法包括： 步骤一、挑选健康生菜种子，在适宜条件下萌发生菜种子，一周以后，挑选长势良好的 生菜幼苗，先转移在定植篮上，然后再移栽到盛有生菜营养液的塑料水培盆中的有孔泡沫 塑料板中进行水培； 步骤二、待移栽好的生菜幼苗在水培营养液中适应2天后，加入哈茨木霉菌，设置5组 哈茨木霉菌浓度，之后培育1个月的时间，控制水培条件适宜，同时定期向各盆中补充营养 液，1组为1盆，每盆有9株生菜幼苗； 步骤三、取生长健壮的生菜幼苗移栽至水培营养液后，在适宜条件下进行培育一周以 后，选取其中2组加入哈茨木霉菌，使其浓度为0. 3g?L'另选取其中2组加入腐霉菌进行 侵染，剩余1组作为对照组； 步骤四、为被成功侵染的2组生菜重新配置营养液，加入哈茨木霉菌，使其浓度为 0. 3g?L'之后继续让各组水培生菜生长1个月时间，定期向各盆中补充营养液； 步骤五、待各组水培生菜生长成熟后，测定株高、根长、鲜重以及生理生化指标。2. 如权利要求1所述的哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治方法，其 特征在于，所述的5组哈茨木霉菌浓度分别为0.Ig?L'O. 2g?L'O. 3g?L'O. 4g?I71， 0. 5g?L1O3. 如权利要求I所述的哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治方法，其特 征在于，步骤五所述的测定株高、根长、鲜重以及生理生化指标的方法为： 步骤一、测定用不同浓度哈茨木霉菌处理的水培生菜的生长指标和生理生化指标，移 栽营养液培育1个月以后，用米尺测定各组生菜的株高、根长；用电子天平称量各组生菜的 鲜重，用乙醇法提取各组生菜叶绿素体色素，用紫外分光光度法测定叶绿素含量、CAT活性 及POD活性； 步骤二、测定用腐霉菌和最佳浓度哈茨木霉菌处理的水培生菜的生长指标和生理生化 指标； 步骤三、相隔一个月时间，待第二批生菜生长成熟，用电子天平称量各组生菜的鲜重， 用乙醇丙酮混合法提取各组生菜叶绿素体色素，用紫外分光光度法测定叶绿素含量、VC含 量、CAT活性、POD活性及T-SOD活性，其中，VC含量、CAT活性、POD活性及T-SOD活性的测 定均采用试剂盒法。
【专利摘要】本发明公开了一种哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治方法，该方法通过用一系列浓度梯度的含哈茨木霉菌的培养液处理生菜，探究哈茨木霉菌的最佳促水培生菜生长浓度，及其生物防治效果。结果表明：不同浓度的哈茨木霉菌对水培生菜均有一定的促生长作用，0.3g·L-1至0.4g·L-1左右用量的哈茨木霉菌能促进生菜鲜重的增长率达110％以上；但是哈茨木霉菌浓度过高时促生作用反而不理想；同时，加入哈茨木霉菌的水培生菜在移至室外后，仍表现出较好的生长情况，并未出现染病症状，说明了哈茨木霉菌对植物根腐病有一定预防效果。
【IPC分类】A01G31/00, A01G13/00
【公开号】CN104904580
【申请号】CN201510300450
【发明人】周静, 龚一富, 马颖瑞, 孙娇璐, 刘浩, 王何瑜
【申请人】宁波大学
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年6月3日
【技术领域】
[0001] 本发明属于水培蔬菜技术领域，尤其涉及一种哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响 和根腐病的防治方法。
【背景技术】
[0002] 自1932年，Weinding发现木素木霉建议将该菌用于土传植物病害的生物防治，木 霉菌生防研宄工作从此开始。生物技术的发展，木霉菌已由单一地从自然界分离筛选达到 有目的地利用生物技术进行改造以获得新型菌株的程度。在已有的研宄中，木霉菌在生物 防治中能有效控制病害，并减少了化学制剂带来的污染。同时，木霉菌除了治疗疾病外还对 植物生长有一定影响，李世贵等人发现施用霉菌后土壤过氧化氢酶活性得到了提高，植物 的抗病能力得到增强。赵阿娜等人的研宄说明木霉菌剂不仅能有效控制人参根部病害的发 生，而且将人参种苗成活率和人参种子出苗率分别提高30%和16%以上。
[0003] 水培蔬菜生产快速发展，为人们提供优质蔬菜，带来更高经济效益。但同时，由于 水培蔬菜自身生态系统的问题，根腐病一旦发生传染更快，植株致死概率更高，经济损失也 更大。哈茨木霉菌对陆地蔬菜根腐病的防治效果已有许多报道，但哈茨木霉菌对水培生菜 生长、对根腐病的防治效果以及生理生化机理目前还没见相关报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治 方法，旨在防治水培蔬菜的根腐病、促进水培蔬菜的生长。
[0005] 本发明是这样实现的，一种哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治方 法包括：
[0006] 步骤一、挑选健康生菜种子，在适宜条件下萌发生菜种子，一周以后，挑选长势良 好的生菜幼苗，先将其转移在定植篮上，然后再移栽到盛有生菜营养液的塑料水培盆中的 有孔泡沫塑料板中进行水培；
[0007] 步骤二、待移栽好的生菜幼苗在水培营养液中适应2天后，加入哈茨木霉菌，设置 5组哈茨木霉菌浓度，之后培育1个月的时间，控制水培条件适宜，同时定期向各盆中补充 营养液，1组为1盆，每盆有9株生菜幼苗；
[0008] 步骤三、取生长健壮的生菜幼苗移栽至水培营养液后，在适宜条件下进行培育一 周以后，选取其中2组加入哈茨木霉菌，使其浓度为0. 3g?I71，另选取其中2组加入腐霉菌 进行侵染，剩余1组作为对照组；
[0009] 步骤四、为被成功侵染的2组生菜重新配置营养液，加入哈茨木霉菌，使其浓度为 〇. 3g?I71，之后继续让各组水培生菜生长1个月时间，定期向各盆中补充营养液；
[0010] 步骤五、待各组水培生菜生长成熟后，测定株高、根长、鲜重以及生理生化指标。
[0011] 进一步，所述的5组哈茨木霉菌浓度分别为0.lg?L'O. 2g?L'O. 3g?I71， 0? 4g?L\0? 5g?L工。
[0012] 进一步，步骤五所述的测定株高、根长、鲜重以及生理生化指标的方法为：
[0013] 步骤一、测定用不同浓度哈茨木霉菌处理的水培生菜的生长指标和生理生化指 标，移栽营养液培育1个月以后，用米尺测定各组生菜的株高、根长；用电子天平称量各组 生菜的鲜重，用乙醇法提取各组生菜叶绿素体色素，用紫外分光光度法测定叶绿素含量、 CAT活性及P0D活性；
[0014]步骤二、测定用腐霉菌和最佳浓度哈茨木霉菌处理的水培生菜的生长指标和生理 生化指标；
[0015]步骤三、相隔一个月时间，待第二批生菜生长成熟，用电子天平称量各组生菜的鲜 重，用乙醇丙酮混合法提取各组生菜叶绿素体色素，用紫外分光光度法测定叶绿素含量、VC 含量、CAT活性、P0D活性及T-S0D活性，其中，VC含量、CAT活性、P0D活性及T-S0D活性的 测定均采用试剂盒法。
[0016]本次实验通过用一系列浓度梯度的含哈茨木霉菌的培养液处理生菜，探宄哈茨木 霉菌的最佳促水培生生菜生长浓度，及其生物防治效果。结果表明：不同浓度的哈茨木霉菌 对水培生菜均有一定的促生长作用，0. 3g?I71至0. 4g?L4左右用量的哈茨木霉菌能促进 生菜鲜重的增长率达110%以上。但是哈茨木霉菌浓度过高时促生作用反而不理想，很有可 能是因为其竞争作用的缘故，过多的木霉菌消耗了大量营养液中的养分，阻碍了植物生长。 同时，加入哈茨木霉菌的水培生菜在移至室外后，仍表现出较好的生长情况，并未出现染病 症状，说明了哈茨木霉菌对植物根腐病有一定预防效果。
【附图说明】
[0017]图1是本发明实施例提供的哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治 方法流程图。
【具体实施方式】
[0018]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明 进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于 限定本发明。
[0019]下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。
[0020] 请参阅图1:
[0021] 本发明是这样实现的，一种哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治方 法包括：
[0022]S101、挑选健康生菜种子，在适宜条件下萌发生菜种子，一周以后，挑选长势良好 的生菜幼苗，先将其转移在定植篮上，然后再移栽到盛有生菜营养液的塑料水培盆中的有 孔泡沫塑料板中进行水培；
[0023]S102、待移栽好的生菜幼苗在水培营养液中适应2天后，加入哈茨木霉菌，设置5 组哈茨木霉菌浓度，之后培育1个月的时间，控制水培条件适宜，同时定期向各盆中补充营 养液，1组为1盆，每盆有9株生菜幼苗；
[0024]S103、取生长健壮的生菜幼苗移栽至水培营养液后，在适宜条件下进行培育一周 以后，选取其中2组加入哈茨木霉菌，使其浓度为0. 3g?I71，另选取其中2组加入腐霉菌进 行侵染，剩余1组作为对照组；
[0025]S104、为被成功侵染的2组生菜重新配置营养液，加入哈茨木霉菌，使其浓度为 〇. 3g?L'之后继续让各组水培生菜生长1个月时间，定期向各盆中补充营养液；
[0026]S105、待各组水培生菜生长成熟后，测定株高、根长、鲜重以及生理生化指标。
[0027] 进一步，所述的5组哈茨木霉菌浓度分别为0.lg?L'O. 2g?L'O. 3g?I71， 0. 4g?L\0. 5g?L
[0028] 进一步，步骤S105所述的测定株高、根长、鲜重以及生理生化指标的方法为：
[0029] 步骤一、测定用不同浓度哈茨木霉菌处理的水培生菜的生长指标和生理生化指 标，移栽营养液培育1个月以后，用米尺测定各组生菜的株高、根长；用电子天平称量各组 生菜的鲜重，用乙醇法提取各组生菜叶绿素体色素，用紫外分光光度法测定叶绿素含量、 CAT活性及P0D活性；
[0030] 步骤二、测定用腐霉菌和最佳浓度哈茨木霉菌处理的水培生菜的生长指标和生理 生化指标；
[0031] 步骤三、相隔一个月时间，待第二批生菜生长成熟，用电子天平称量各组生菜的鲜 重，用乙醇丙酮混合法提取各组生菜叶绿素体色素，用紫外分光光度法测定叶绿素含量、VC 含量、CAT活性、P0D活性及T-S0D活性，其中，VC含量、CAT活性、P0D活性及T-S0D活性的 测定均采用试剂盒法。
[0032] 实施例一
[0033] 供试生防菌：哈茨木霉菌可湿性粉剂，有效成分含量为3亿CFU/克，由美国拜沃股 份有限公司生产。供试作物：美国大速生生菜种子，由青县青丰种业有限 公司生产，原种供 应商为美国皮托公司。供试培养液：水培营养液的配制参照华南农业大学叶菜类营养液配 方。其中A液，B液先配成100倍溶液，C液先配成1000倍溶液，用时稀释并按A液：B液： C液=1:1:1比例配成水培营养液。
[0034] 1、水培生菜的种植
[0035] 挑选颗粒饱满的美国大速生生菜种子，均匀地洒在铺有润湿滤纸的培养皿中。恒 温25，°C恒湿65%Rh，光照4000Lx的条件下萌发生菜种子。一周以后，挑选其中生长健 壮，大小一致且含有4片叶子的生菜幼苗，先将其转移在定植篮上，然后再移栽到盛有生菜 营养液的水培管道或水培槽中的有孔泡沫塑料板中进行水培，培养液配方根据华南农业大 学叶菜类配方的浓缩营养液配制。
[0036] 2.不同浓度对水培生菜的影响
[0037] 待移栽好的生菜幼苗在水培营养液中适应2天后，加入不同浓度的哈茨木霉菌， 哈茨木霉菌浓度分别为0.lg?L'0. 2g?L'0. 3g?L'0. 4g?L'0. 5g?L'培育1个月 以后，用米尺（分度值为1mm)测定各组生菜的株高、根长；丙酮法测定叶绿素含量；用电子 分析天平（型号BSA124S，台州市赛新科学仪器有限公司）称量各组生菜的鲜重；利用紫外 可见分光光度计（6800型双光束，英国bibby科技有限公司）测定CAT活性及P0D活性（使 用的试剂盒均为南京建成生物科技有限公司生产）。
[0038] 测定结果见表1和表2。
[0039] 从表1可以看出，相较于对照组，实验组水培生菜随着哈茨木霉菌浓度的增加，株 高加根长的总和及鲜重总体呈现先上升后下降的趋势，其中株高加长的总和尤以0. 4g?r1 的用量最大，其最大值为72.lcm，0. 3g?I71的哈茨木霉菌用量可使水培生菜鲜重的增长率 120%以上。
[0040] 表1不同浓度哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响
[0041]
[0042] 表2不同浓度哈茨木霉菌对水培生菜生理生化指标的影响
[0043]
[0044] 从表2可以看出，用不同浓度哈茨木霉菌处理的水培生菜，其叶绿素含量均低于 对照组（不加哈茨木霉菌的水培生菜）。但是CAT活力和P0D活力随着哈茨木霉菌浓度的 增加，总体呈现上升后下降的趋势，其中当哈茨木霉菌浓度为〇. 3g?L4时，CAT活力达到相 对最大值为7. 7459U/mgprot，当哈茨木霉菌浓度为0. 4g?I71时，P0D活力达到相对最大值 为 26. 4976U/mgprot〇
[0045] 3.哈茨木霉菌对生菜根腐病的防治效果
[0046] 根据先前实验的结果，可以确定促进水培生菜生长的最佳哈茨木霉菌浓度为 0? 3g?L1-0? 4g?L1左右。
[0047] 在本次实验中，预防组和治疗组的哈茨木霉菌浓度均为0.3g?L'
[0048] 表3适宜浓度哈茨木霉菌处理对水培生菜根腐病防治效果
[0049]
[0050] 从表3可以看出，第二批水培生菜的生长情况普遍没有第一批好，但是预防组水 培生菜的鲜重，VC含量均高于对照组，进一步说明哈茨木霉菌对水培生菜在逆境胁迫下的 促生长作用。在此条件下，治疗组的CAT活力、P0D活力、T-S0D活力均高于预防组，说明哈 茨木霉菌对根腐病的治疗效果较好。
[0051] 本次实验通过用一系列浓度梯度的含哈茨木霉菌的培养液处理生菜，探宄哈茨木 霉菌的最佳促水培生生菜生长浓度，及其生物防治效果。结果表明：不同浓度的哈茨木霉菌 对水培生菜均有一定的促生长作用，0. 3g?I71至0. 4g?L4左右用量的哈茨木霉菌能促进 生菜鲜重的增长率达110%以上。但是哈茨木霉菌浓度过高时促生作用反而不理想，很有可 能是因为其竞争作用的缘故，过多的木霉菌消耗了大量营养液中的养分，阻碍了植物生长。 同时，加入哈茨木霉菌的水培生菜在移至室外后，仍表现出较好的生长情况，并未出现染病 症状，说明了哈茨木霉菌对植物根腐病有一定预防效果。
[0052] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精 神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治方法，其特征在于，所述的 哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治方法包括： 步骤一、挑选健康生菜种子，在适宜条件下萌发生菜种子，一周以后，挑选长势良好的 生菜幼苗，先转移在定植篮上，然后再移栽到盛有生菜营养液的塑料水培盆中的有孔泡沫 塑料板中进行水培； 步骤二、待移栽好的生菜幼苗在水培营养液中适应2天后，加入哈茨木霉菌，设置5组 哈茨木霉菌浓度，之后培育1个月的时间，控制水培条件适宜，同时定期向各盆中补充营养 液，1组为1盆，每盆有9株生菜幼苗； 步骤三、取生长健壮的生菜幼苗移栽至水培营养液后，在适宜条件下进行培育一周以 后，选取其中2组加入哈茨木霉菌，使其浓度为0. 3g?L'另选取其中2组加入腐霉菌进行 侵染，剩余1组作为对照组； 步骤四、为被成功侵染的2组生菜重新配置营养液，加入哈茨木霉菌，使其浓度为 0. 3g?L'之后继续让各组水培生菜生长1个月时间，定期向各盆中补充营养液； 步骤五、待各组水培生菜生长成熟后，测定株高、根长、鲜重以及生理生化指标。2. 如权利要求1所述的哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治方法，其 特征在于，所述的5组哈茨木霉菌浓度分别为0.Ig?L'O. 2g?L'O. 3g?L'O. 4g?I71， 0. 5g?L1O3. 如权利要求I所述的哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治方法，其特 征在于，步骤五所述的测定株高、根长、鲜重以及生理生化指标的方法为： 步骤一、测定用不同浓度哈茨木霉菌处理的水培生菜的生长指标和生理生化指标，移 栽营养液培育1个月以后，用米尺测定各组生菜的株高、根长；用电子天平称量各组生菜的 鲜重，用乙醇法提取各组生菜叶绿素体色素，用紫外分光光度法测定叶绿素含量、CAT活性 及POD活性； 步骤二、测定用腐霉菌和最佳浓度哈茨木霉菌处理的水培生菜的生长指标和生理生化 指标； 步骤三、相隔一个月时间，待第二批生菜生长成熟，用电子天平称量各组生菜的鲜重， 用乙醇丙酮混合法提取各组生菜叶绿素体色素，用紫外分光光度法测定叶绿素含量、VC含 量、CAT活性、POD活性及T-SOD活性，其中，VC含量、CAT活性、POD活性及T-SOD活性的测 定均采用试剂盒法。
【专利摘要】本发明公开了一种哈茨木霉菌对水培生菜生长的影响和根腐病的防治方法，该方法通过用一系列浓度梯度的含哈茨木霉菌的培养液处理生菜，探究哈茨木霉菌的最佳促水培生菜生长浓度，及其生物防治效果。结果表明：不同浓度的哈茨木霉菌对水培生菜均有一定的促生长作用，0.3g·L-1至0.4g·L-1左右用量的哈茨木霉菌能促进生菜鲜重的增长率达110％以上；但是哈茨木霉菌浓度过高时促生作用反而不理想；同时，加入哈茨木霉菌的水培生菜在移至室外后，仍表现出较好的生长情况，并未出现染病症状，说明了哈茨木霉菌对植物根腐病有一定预防效果。
【IPC分类】A01G31/00, A01G13/00
【公开号】CN104904580
【申请号】CN201510300450
【发明人】周静, 龚一富, 马颖瑞, 孙娇璐, 刘浩, 王何瑜
【申请人】宁波大学
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年6月3日
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