一种木霉菌孢子水悬浮剂及其制备方法
一种木霉菌孢子水悬浮剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种生物农药和生物化学技术领域，尤其涉及一种微生物活体杀菌 剂，具体涉及一种木霉菌孢子水悬浮剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 木霉菌属真菌门，半知菌亚门，丝孢纲，丝孢目，丛梗孢科，木霉属，广泛存在于不 同环境条件下的土壤中。自19世纪中叶，人类对木霉菌已有了初步的认识，但直到上世纪 60年代木霉菌的分类地位才得以确定。大多数木霉菌可产生多种对植物病原真菌、细菌及 昆虫具有拮抗作用的生物活性物质，比如细胞壁降解酶类和次级代谢产物，并能提高农作 物的抗逆性，促进植物生长和提高农产品产量，因此被广泛用于生物防治、生物肥料及土壤 改良剂。
[0003]由于化学农药对环境的负面影响较为严重，所以对环境较为友好的生物农药木霉 菌受到了广泛的关注。然而，目前市场上的木霉菌活孢子制剂，保质期一般只有3个月左 右，从而导致田间防效稳定性得不到保证，在植物病害防治中尚不能完全发挥作用。可见， 木霉生物农药制剂的货架期短，是目前生物农药生产和应用的瓶颈。另外，常见的木霉分生 孢子制剂主要为可湿性粉剂，在使用过程中，存在粉尘飞扬的缺点，例如CN101926325A公 开了一种木霉菌可湿性粉剂，由木霉菌、分散剂、湿润剂和填料混配而成，可用于防治蔬菜、 花丼的土传病害；又如CN102919280A公开了一种棘孢木霉菌可湿性粉剂，由棘孢木霉菌、 湿润剂、分散剂、紫外保护剂和载体组成，可用于防治农林致病性真菌和细菌病害。
[0004]目前，在我国，乳油、可湿性粉剂、粉剂等传统剂型仍占绝对优势。随着农药的大量 使用，大量的有机溶剂污染空气、水源、土壤，造成整个环境全方位的恶化，严重地威胁着人 类的健康和社会的发展；同时随着农药的施用，大量的有机溶剂也不得不因此而浪费掉。在 能源日渐枯竭和人们环保意识逐渐增强的今天，减少这种污染和浪费的呼声愈来愈强烈。 随着人们对于安全、环境、生态可持续发展意识不断增强的情况下，美国、英国等发达国家 对农药安全性和环境保护制定更加严格的法规，这使农药的生产和使用面临越来越多的困 难。
[0005] 水基化是农药剂型开发的主要方向，悬浮剂是其中重要的剂型之一，其具有使用 便利，无粉尘，易分散，以水为基质，适合生物功效发挥，无闪点问题等优点。水悬浮剂是一 种热力学不稳定体系，随着时间的推移，最终不可避免会发生状态的变化，出现分层、结底 等质量问题。木霉菌孢子为直径3-6微米的亲水性活体微生物，孢子容易被各种化学助剂 的毒性以及加工工艺中产生的热量和剪切力影响，导致存活率大幅度降低。所以木霉菌孢 子水悬浮剂需采用生物相容性好的剂型。同时为了延长孢子的货架期，水悬浮剂中需要加 入一定的稳定剂，降低活孢子的呼吸作用，使孢子最大限度的处于休眠状态，延长其货架 期。为了在使用活孢子悬浮剂制剂时获得满意的性能和生物作用，需要使悬浮剂中的加入 合适的助剂，既保证水悬浮剂的各项理化指标，同时保证活孢子的货架期以及水悬浮剂不 被其他微生物所污染。所以活体微生物的水悬浮剂是生物农药制剂中比较难课题，目前市 场上没有相关的产品与专利技术。
【发明内容】
[0006] 在上述大背景的前提下，本发明提供了一种木霉菌孢子水悬浮剂及其制备方法。 本发明的技术方案对我国活体生物农药剂型的发展将起到一定的推动作用，本发明的应用 将解决活体生物农药货架期不稳定的问题，给企业带来很好的经济效益；另外，本发明提供 的木霉菌孢子水悬浮剂具有残留低、污染小、易分散等特点。
[0007] 本发明的第一方面的主题是一种木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，各组分及其 重量配比包括：
[0008] 木霉菌孢子 10-25%; 増稠剂 0.5-3%; 润湿剂 2-5%; 稳定剂 0.0025%-0.006%; 防冻剂 5-10%； 分散剂 1-3%;
[0009] 保护剂 5%， 消泡剂 0.1%; PH调节剂 调节pH3-7; 水 余量。
[0010] 在本发明的优选实施例中，所述木霉菌孢子选自棘孢木霉、绿色木霉、哈茨木霉、 长枝木霉、康宁木霉菌、拟康宁木霉菌、绿木霉中的任意一种或多种，进一步地，所述木霉菌 孢子来源于固体发酵或液体发酵收获得到的木霉菌。
[0011] 进一步地，所述木霉菌孢子通过CN102648714A公开的方法进行木霉菌孢子的培 养，或使用固体发酵的方法进行木霉菌孢子的培养。
[0012] 所述增稠剂选用水溶性树脂、黄原胶、硅酸铝镁、羧甲基纤维素钠、羧乙基纤维素、 甲基纤维素、膨润土、聚乙烯醇、聚乙烯醇、藻酸丙二醇酯（PGA)中的任意一种或几种的混 合，更优选为一种或两种的混合。
[0013] 所述润湿剂选用NP- 10、烷基酚聚氧乙烯基醚壬基酚聚氧乙烯基醚、乳化剂2000 系列、润湿渗透剂快T中的任意一种或几种的混合。
[0014] 所述稳定剂为微量的金属离子，优选为硫酸铜，氯化铜，硝酸铜，硫酸锌，硝酸铅中 的一种。
[0015] 所述防冻剂选用乙二醇、丙二醇、丙三醇、山梨醇中的一种。
[0016] 所述分散剂选用木质素磺酸钠、木质素磺酸钙、聚羧酸盐类、月桂醇聚氧乙烯基醚 硫酸钠、烷基萘甲醛缩合物磺酸盐、油酸盐类，烷基聚氧乙烯醚磺酸盐、烷基酚聚氧乙烯基 醚甲醛缩合物、聚氧乙烯聚氧丙烯基醚嵌段共聚物、十二烷基聚氧乙烯醚磷酸酯或烷基萘 甲醛缩合物磺酸盐中的一种或几种的混合。
[0017] 所述保护剂为蔗糖，麦芽糊精，海藻糖中的一种或几种混合。
[0018] 所述消泡剂选用硅油、有机硅酮、C10-C20饱和脂肪酸类化合物、C8-C10的脂肪醇 类化合物中的一种或几种的混合。
[0019] 所述pH调节剂选用氢氧化钠、氨水、醋酸、柠檬酸或磷酸中的一种。
[0020] 上述所述各种助剂材料均可以从市场上购买。
[0021] 在本发明的另一类优选实施例中，所述木霉菌孢子水悬浮剂还可以进一步包括化 学成分或生物活性成分，其中，优选为生物活性成分，具体地，所述生物活性成分指的是能 够对害虫、病菌、杂草、线虫、鼠类等有害生物进行防治的生物活体或其代谢产物，其含义对 本领域技术人员来讲是已知的，更加优选为，所述生物活性成分为菌丝体、分生孢子或厚垣 孢子，最优选为厚垣孢子。
[0022] 本发明的第二方面的主题是一种上述所述木霉菌孢子水悬浮剂的制备方法，包 括：
[0023] 步骤1 :按所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，称量分散剂、润湿 剂、防冻剂、增稠剂和水，进行剪切混合均匀并砂磨，至合格粒径后，得到混合液A;
[0024] 步骤2:按所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，称量木霉菌孢子，加 入保护剂和水进行混合，得到孢子悬液；
[0025] 步骤3:将混合液A、孢子悬液、稳定剂、pH调节剂和消泡剂剪切混合均勾，得到所 述木霉菌孢子水悬浮剂。
[0026] 在本发明的一个实施例中，所述孢子悬液的制备方法为将培养液或水洗孢子液， 经过沉降式离心机3000g连续离心，收获孢子糊状物，即木霉菌孢子，然后在木霉菌孢子中 加入少量质量百分数为〇. 8%的吐温溶液和一种保护剂，在混匀机中调节为10亿/毫升，得 到所述孢子悬液。
[0027] 进一步地，对所述木霉菌孢子水悬浮剂进行质检和包装，得到最终产品。
[0028] 在本发明的另一个实施例中，所述制备方法，包括：
[0029] 步骤1 :按上述所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，称量分散剂、润 湿剂、防冻剂、增稠剂和水，投入搅拌釜中进行剪切混合均匀并通入砂磨机进行砂磨，至合 格粒径后，得到混合液A;
[0030] 步骤2:按上述所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，将培养液或水 洗孢子液，经过卧螺式离心机离心，收获木霉菌孢子，称量木霉菌孢子，加入保护剂和水，在 混匀机中进行混合，得到孢子悬液；
[0031] 步骤3:将混合液A、孢子悬液、稳定剂、pH调节剂和消泡剂剪切混合均匀，以水补 充并用pH调节剂调节PH至3-5,得到所述木霉菌孢子水悬浮剂。
[0032] 通过所述制备方法制备得到的木霉菌孢子水悬浮剂，其活孢子含量大于2亿孢 子/毫升，采用筛析法检测，多90%过75ym筛；贮存期内，悬浮率不低于90% ;-般黏度 300-1000Cp，易于倾倒；离心稳定性良好；使用时不产生粉尘，无有机溶剂，安全性好。 [0033] 本发明的第三方面的主题是一种上述所述木霉菌孢子水悬浮剂的应用，包括每亩 土地每次喷施所述木霉菌孢子水悬浮剂的用量为300-500ml，每隔7-14天喷施一次。
[0034] 本发明的核心技术之一是通过低剪切力孢子富集方法收获木霉菌孢子，采用先将 助剂与介质高剪切力混匀，再低剪切力的工艺条件下与孢子悬液混合，避免了活体微生物 在加工过程中受到损伤。同时通过加入活体微生物保护剂、与稳定剂使活体微生物处于休 眠的稳定状态。因为大多数的防腐剂对活体微生物都容易产生影响，本发明选用通过pH调 节剂调节合适的pH值，在不影响木霉菌存活的前提下，避免被外源微生物污染。同时保证 活体木霉菌贮藏性能得到了提高，可以在常温下长时间贮藏。
[0035] 与现有技术相比，本发明生物农药水悬浮剂，孢子含量可达到2亿个/ml，尤其保 存期可达半年以上；本发明解决了木霉菌生物农药的稳定性问题，使木霉菌生物农药可以 长期贮藏，稳定发挥功效。
【附图说明】
[0036] 图1为本发明的一个实施例的制备方法示意图。
【具体实施方式】
[0037] 本发明提供了一种木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，各组分及其重量配比包 括：
[0038] 木霉菌孢子 10-25%; 增稠剂 0.5-3%; 润湿剂 2-5%; 稳定剂 0.0025%-0.006%; 防冻剂 5-10%; 分散剂 1-3%; 保护剂 5%; 消泡剂 0.1%: PH调节剂 调ipH3-7;
[0039] 水 余量。
[0040] 在本发明的优选实施例中，所述木霉菌孢子选自棘孢木霉、绿色木霉、哈茨木霉、 长枝木霉、康宁木霉菌、拟康宁木霉菌、绿木霉中的任意一种或多种，进一步地，所述木霉菌 孢子来源于固体发酵或液体发酵收获得到的木霉菌。
[0041] 进一步地，所述木霉菌孢子通过CN102648714A公开的方法进行木霉菌孢子的培 养，或使用固体发酵的方法进行木霉菌孢子的培养。
[0042] 所述增稠剂选用水溶性树脂、黄原胶、硅酸铝镁、羧甲基纤维素钠、羧乙基纤维素、 甲基纤维素、膨润土、聚乙烯醇、聚乙烯醇、藻酸丙二醇酯（PGA)中的任意一种或几种的混 合，更优选为一种或两种的混合。
[0043] 所述润湿剂选用NP-10、烷基酚聚氧乙烯基醚壬基酚聚氧乙烯基醚、乳化剂2000 系列、润湿渗透剂快T中的任意一种或几种的混合。
[0044] 所述稳定剂为微量的金属离子，优选为硫酸铜，氯化铜，硝酸铜，硫酸锌，硝酸铅中 的一种。
[0045] 所述防冻剂选用乙二醇、丙二醇、丙三醇、山梨醇中的一种。
[0046] 所述分散剂选用木质素磺酸钠、木质素磺酸钙、聚羧酸盐类、月桂醇聚氧乙烯基醚 硫酸钠、烷基萘甲醛缩合物磺酸盐、油酸盐类，烷基聚氧乙烯醚磺酸盐、烷基酚聚氧乙烯基 醚甲醛缩合物、聚氧乙烯聚氧丙烯基醚嵌段共聚物、十二烷基聚氧乙烯醚磷酸酯或烷基萘 甲醛缩合物磺酸盐中的一种或几种的混合。
[0047] 所述保护剂为蔗糖，麦芽糊精，海藻糖中的一种或几种混合。
[0048] 所述消泡剂选用硅油、有机硅酮、C10-C20饱和脂肪酸类化合物、C8-C10的脂肪醇 类化合物中的一种或几种的混合。
[0049] 所述pH调节剂选用氢氧化钠、氨水、醋酸、柠檬酸或磷酸中的一种。
[0050] 上述所述各种助剂材料均可以从市场上购买。
[0051] 在本发明的另一类优选实施例中，所述木霉菌孢子水悬浮剂还可以进一步包括化 学成分或生物活性成分，其中，优选为生物活性成分，具体地，所述生物活性成分指的是能 够对害虫、病菌、杂草、线虫、鼠类等有害生物进行防治的生物活体或其代谢产物，其含义对 本领域技术人员来讲是已知的，更加优选为，所述生物活性成分为菌丝体、分生孢子或厚垣 孢子，最优选为厚垣孢子。
[0052] 本发明还提供了一种上述所述木霉菌孢子水悬浮剂的制备方法，包括：
[0053] 步骤1 :按所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，称量分散剂、润湿 剂、防冻剂、增稠剂和水，进行剪切混合均匀并砂磨，至合格粒径后，得到混合液A;
[0054] 步骤2:按所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，称量木霉菌孢子，加 入保护剂和水进行混合，得到孢子悬液；
[0055] 步骤3:将混合液A、孢子悬液、稳定剂、pH调节剂和消泡剂剪切混合均勾，得到所 述木霉菌孢子水悬浮剂。
[0056] 在本发明的一个实施例中，所述孢子悬液的制备方法为将培养液或水洗孢子液， 经过沉降式离心机3000g连续离心，收获孢子糊状物，即木霉菌孢子，然后在木霉菌孢子中 加入少量质量百分数为〇. 8%的吐温溶液和一种保护剂，在混匀机中调节为10亿/毫升，得 到所述孢子悬液。
[0057] 进一步地，对所述木霉菌孢子水悬浮剂进行质检和包装，得到最终产品。
[0058] 在本发明的另一个实施例中，所述制备方法，包括：
[0059] 步骤1 :按上述所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，称量分散剂、润 湿剂、防冻剂、增稠剂和水，投入搅拌釜中进行剪切混合均匀并通入砂磨机进行砂磨，至合 格粒径后，得到混合液A;
[0060] 步骤2:按上述所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，将培养液或水 洗孢子液，经过卧螺式离心机离心，收获木霉菌孢子，称量木霉菌孢子，加入保护剂和水，在 混匀机中进行混合，得到孢子悬液；
[0061] 步骤3:将混合液A、孢子悬液、稳定剂、pH调节剂和消泡剂剪切混合均匀，以水补 充并用pH调节剂调节PH至3-5,得到所述木霉菌孢子水悬浮剂。
[0062] 通过所述制备方法制备得到的木霉菌孢子水悬浮剂，其活孢子含量大于2亿孢 子/毫升，采用筛析法检测，多90%过75ym筛；贮存期内，悬浮率不低于90% ;-般黏度 300-1000Cp，易于倾倒；离心稳定性良好；使用时不产生粉尘，无有机溶剂，安全性好。
[0063] 本发明还提供了一种上述所述木霉菌孢子水悬浮剂的应用，包括每亩土地每次喷 施所述木霉菌孢子水悬浮剂的用量为300-500ml，每隔7-14天喷施一次。
[0064] 下面结合实施例，对本发明进行详细说明，但本领域技术人员应该理解，本发明并 不仅仅限于下述有限的实施例。
[0065] 实施例1--一种木霉菌孢子水悬浮剂
[0066] 1、其组分及其重量配比如表1所示。
[0067] 2、制备总量100kg的所述木霉菌孢子水悬浮剂的制备方法，包括：
[0068] 步骤1 :按表1所示，称量分散剂、润湿剂、防冻剂、增稠剂和水，在高速混合机中 进行剪切混合50分钟，然后以定量隔膜泵将混合好的浆料泵入磨砂机并砂磨，至合格粒径 后，得到混合液A;
[0069] 步骤2 :将培养液或水洗孢子液，经过沉降式离心机3000g连续离心，收获孢子糊 状物，即木霉菌孢子，加入少量0. 8%吐温溶液及保护剂在混匀机中调节为10亿孢子/毫升 的孢子悬液；
[0070] 步骤3 :将混合液A、孢子悬液、稳定剂、pH调节剂和消泡剂剪切混合，以水补齐重 量至l〇〇kg，用PH调节剂调节PH至3-5,混合均匀即得100kg所述木霉菌孢子水悬浮剂。
[0071] 3、经检测，本实施例制备的木霉菌孢子水悬浮剂为2亿孢子/毫升，且达到规格要 求，详见表1。
[0072] 实施例2
[0073] 1、其组分及其重量配比如表1所示。
[0074] 2、制备总量100kg的所述木霉菌孢子水悬浮剂的制备方法，同实施例1。
[0075] 3、经检测，本实施例制备的木霉菌孢子水悬浮剂为2亿孢子/毫升，且达到规格要 求，详见表1。
[0076] 实施例3
[0077] 1、其组分及其重量配比如表1所示。
[0078] 2、制备总量100kg的所述木霉菌孢子水悬浮剂的制备方法，同实施例1。
[0079] 3、经检测，本实施例制备的木霉菌孢子水悬浮剂为2亿孢子/毫升，且达到规格要 求，详见表1。
[0080] 实施例4
[0081] 1、其组分及其重量配比如表1所示。
[0082] 2、制备总量100kg的所述木霉菌孢子水悬浮剂的制备方法，同实施例1。
[0083] 3、经检测，本实施例制备的木霉菌孢子水悬浮剂为2亿 孢子/毫升，且达到规格要 求，详见表1。
[0084] 实施例5
[0085] 1、其组分及其重量配比如表1所示。
[0086] 2、制备总量100kg的所述木霉菌孢子水悬浮剂的制备方法，同实施例1。
[0087] 3、经检测，本实施例制备的木霉菌孢子水悬浮剂为2亿孢子/毫升，且达到规格要 求，详见表1。
[0088] 表1:实施例1-5的组分配比及质量检测指标
[0089]
[0090] 应用实施例6
[0091]用实例5制得的2亿木霉菌孢子水悬浮剂进行草莓苗期炭疽病防治的田间试验， 时间为2012年4月至2012年9月，试验地点位于上海市金山区廊下镇草莓专业合作社。该 试验田为连续3年的草莓育苗地，畦宽1. 2m，畦间沟宽30cm，沟深20cm，灌溉方式为沟灌，草 莓母苗定植时间为4月12日。
[0092] 1、实验设计
[0093] 试验设置所述木霉菌孢子水悬浮剂3个剂量处理，并设置化学药物对照和空白对 照，共5个处理。每个处理小区面积为20m2,重复三次，采用随机区组排列。
[0094] 按照表2所设计处理用药量，草莓育苗期间共进行7次施药：其中前3次（第一 次喷雾在苗床苗定植一个月后）为每隔30天喷雾一次，之后为每隔7天喷雾一次。试验期 间，全部试验小区均进行正常的水、肥、除草及防虫管理。
[0095] 试验期间（2012年上海地区4月-9月）天气情况见表3。
[0096] 2、育苗期发病情况调查
[0097] 两次调查时间分别为7月中旬和8月上旬。分别在陆地和大棚的每个试验小区内， 随机5点取样，每个点调查10株草莓苗叶片、叶柄以及匍匐茎的发病情况，记载病害级数， 然后计算病情指数和防效。病情分级标准和计算公式如下：病情分级标准：〇级一一无病 斑；1级--病斑占总面积的（叶、叶柄、莖）5%以下；3级--病斑占6%~10% ;5级-- 病斑占11 %~25% ;7级--病斑占26%~50% ;9级--病斑占50%以上。
[0098] 病情指数=[5：(各级病叶（茎）数X该级代表值）+ (调查总叶（茎）数X最 高级代表值）]X100。
[0099] 防效（％ ) = [(对照区病指一防治区病指）+对照区病指]X100。
[0100] 实验结果表明：2亿木霉菌孢子水悬浮剂250倍喷雾处理对于化药，空白，及其他 处理有显著差异性。对草莓苗期炭疽病防效可达80%以上，详见表4。
[0101] 表2:实验设计
[0104] 表3:试验期间天气情况[0105]
[0102]
[0103]
[0106] 注：*"日最高气温彡35. 0°C
[0107] 表4 :不同处理对草莓苗期炭疽病病情指数和防治效果的影响
[0108]
[0109] 注：处理开始前病情指数为;根据邓肯氏新复极差法，相同字母表示不同处理 间在（P兰0. 05,n= 3)水平上无显著性差异。
[0110] 以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限 制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和 替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和 修改，都应涵盖在本发明的范围内。
【主权项】
1. 一种木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，各组分及其重量配比包括： 木霉菌孢子 10-25%; 增稠剂 0.5-3%; 润湿剂 2-5%: 稳定剂 0.0025%-0.006%; 防冻剂 5-10%: 分散剂 1-3%; 保护剂 5%; 消泡剂 0.1%; PH调节剂 调节pH3-7; 水 余量。2. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述木霉菌孢子选自棘 孢木霉、绿色木霉、哈茨木霉、长枝木霉、康宁木霉菌、拟康宁木霉菌、绿木霉中的任意一种 或多种。3. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述增稠剂选用水溶性 树脂、黄原胶、硅酸铝镁、羧甲基纤维素钠、羧乙基纤维素、甲基纤维素、膨润土、聚乙烯醇、 聚乙烯醇、藻酸丙二醇酯（PGA)中的任意一种或几种的混合，更优选为一种或两种的混合。4. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述润湿剂选用NP- 10、烷基酚聚氧乙烯基醚壬基酚聚氧乙烯基醚、乳化剂2000系列、润湿渗透剂快T中的任意 一种或几种的混合。5. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述稳定剂为微量的金 属离子，优选为硫酸铜，氯化铜，硝酸铜，硫酸锌，硝酸铅中的一种。6. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述防冻剂选用乙二醇、 丙二醇、丙三醇、山梨醇中的一种。7. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述分散剂选用木质素 磺酸钠、木质素磺酸钙、聚羧酸盐类、月桂醇聚氧乙烯基醚硫酸钠、烷基萘甲醛缩合物磺酸 盐、油酸盐类，烷基聚氧乙烯醚磺酸盐、烷基酚聚氧乙烯基醚甲醛缩合物、聚氧乙烯聚氧丙 烯基醚嵌段共聚物、十二烷基聚氧乙烯醚磷酸酯或烷基萘甲醛缩合物磺酸盐中的一种或几 种的混合。8. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述保护剂为蔗糖，麦芽 糊精，海藻糖中的一种或几种混合。9. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述消泡剂选用硅油、有 机硅酮、C10-C20饱和脂肪酸类化合物、C8-C10的脂肪醇类化合物中的一种或几种的混合。10. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述pH调节剂选用氢氧 化钠、氨水、醋酸、柠檬酸或磷酸中的一种。11. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述木霉菌孢子水悬浮 剂还进一步包括化学成分或生物活性成分，其中，所述生物活性成分指的是能够对害虫、病 菌、杂草、线虫、鼠类等有害生物进行防治的生物活体或其代谢产物。12. -种如权利要求1-11任意一项所述木霉菌孢子水悬浮剂的制备方法，其特征在 于，包括： 步骤1 :按所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，称量分散剂、润湿剂、防 冻剂、增稠剂和水，进行剪切混合均匀并砂磨，至合格粒径后，得到混合液A; 步骤2 :按所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，称量木霉菌孢子，加入保 护剂和水进行混合，得到孢子悬液； 步骤3 :将混合液A、孢子悬液、稳定剂、pH调节剂和消泡剂剪切混合均匀，得到所述木 霉菌孢子水悬浮剂。13. 根据权利要求12所述的制备方法，其特征在于，所述孢子悬液的制备方法为将培 养液或水洗孢子液，经过沉降式离心机3000g连续离心，收获孢子糊状物，即木霉菌孢子， 然后在木霉菌孢子中加入少量质量百分数为0. 8%的吐温溶液和一种保护剂，在混匀机中 调节为10亿/毫升，得到所述孢子悬液。14. 根据权利要求12所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法制备得到的木霉菌 孢子水悬浮剂，其活孢子含量大于2亿孢子/毫升，采用筛析法检测，多90 %过75ym筛； 1C存期内，悬浮率不低于90% ;-般黏度300-1000cp，易于倾倒；离心稳定性良好；使用时 不产生粉尘，无有机溶剂，安全性好。15. -种如权利要求1-11任意一项所述木霉菌孢子水悬浮剂的应用，包括每亩土地每 次喷施所述木霉菌孢子水悬浮剂的用量为300-500ml，每隔7-14天喷施一次。
【专利摘要】本发明提供了一种木霉菌孢子水悬浮剂及其制备方法，包括：(1)称量分散剂、润湿剂、防冻剂、消泡剂、pH调节剂调节和水，进行剪切混合均匀并砂磨，至合格粒径后，得到混合液A；(2)称量木霉菌孢子、保护剂、稳定剂，进行混合，得到孢子悬液；(3)将混合液A、孢子悬液和增稠剂剪切混合均匀，得到所述木霉菌孢子水悬浮剂。本发明作为微生物活体杀菌剂，对棉花、水稻、果树、蔬菜等作物上的土传及气传真菌性病害具有比较突出的防治效果。本发明将解决活体生物农药货架期不稳定的问题，给企业带来很好的经济效益；另外，本发明提供的木霉菌孢子水悬浮剂具有残留低、污染小、易分散等特点。
【IPC分类】A01P3/00, A01N63/04, A01N25/04
【公开号】CN104904752
【申请号】CN201510405612
【发明人】旷文丰, 谢俊, 毛伟力
【申请人】上海万力华生物科技有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年7月10日
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种生物农药和生物化学技术领域，尤其涉及一种微生物活体杀菌 剂，具体涉及一种木霉菌孢子水悬浮剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 木霉菌属真菌门，半知菌亚门，丝孢纲，丝孢目，丛梗孢科，木霉属，广泛存在于不 同环境条件下的土壤中。自19世纪中叶，人类对木霉菌已有了初步的认识，但直到上世纪 60年代木霉菌的分类地位才得以确定。大多数木霉菌可产生多种对植物病原真菌、细菌及 昆虫具有拮抗作用的生物活性物质，比如细胞壁降解酶类和次级代谢产物，并能提高农作 物的抗逆性，促进植物生长和提高农产品产量，因此被广泛用于生物防治、生物肥料及土壤 改良剂。
[0003]由于化学农药对环境的负面影响较为严重，所以对环境较为友好的生物农药木霉 菌受到了广泛的关注。然而，目前市场上的木霉菌活孢子制剂，保质期一般只有3个月左 右，从而导致田间防效稳定性得不到保证，在植物病害防治中尚不能完全发挥作用。可见， 木霉生物农药制剂的货架期短，是目前生物农药生产和应用的瓶颈。另外，常见的木霉分生 孢子制剂主要为可湿性粉剂，在使用过程中，存在粉尘飞扬的缺点，例如CN101926325A公 开了一种木霉菌可湿性粉剂，由木霉菌、分散剂、湿润剂和填料混配而成，可用于防治蔬菜、 花丼的土传病害；又如CN102919280A公开了一种棘孢木霉菌可湿性粉剂，由棘孢木霉菌、 湿润剂、分散剂、紫外保护剂和载体组成，可用于防治农林致病性真菌和细菌病害。
[0004]目前，在我国，乳油、可湿性粉剂、粉剂等传统剂型仍占绝对优势。随着农药的大量 使用，大量的有机溶剂污染空气、水源、土壤，造成整个环境全方位的恶化，严重地威胁着人 类的健康和社会的发展；同时随着农药的施用，大量的有机溶剂也不得不因此而浪费掉。在 能源日渐枯竭和人们环保意识逐渐增强的今天，减少这种污染和浪费的呼声愈来愈强烈。 随着人们对于安全、环境、生态可持续发展意识不断增强的情况下，美国、英国等发达国家 对农药安全性和环境保护制定更加严格的法规，这使农药的生产和使用面临越来越多的困 难。
[0005] 水基化是农药剂型开发的主要方向，悬浮剂是其中重要的剂型之一，其具有使用 便利，无粉尘，易分散，以水为基质，适合生物功效发挥，无闪点问题等优点。水悬浮剂是一 种热力学不稳定体系，随着时间的推移，最终不可避免会发生状态的变化，出现分层、结底 等质量问题。木霉菌孢子为直径3-6微米的亲水性活体微生物，孢子容易被各种化学助剂 的毒性以及加工工艺中产生的热量和剪切力影响，导致存活率大幅度降低。所以木霉菌孢 子水悬浮剂需采用生物相容性好的剂型。同时为了延长孢子的货架期，水悬浮剂中需要加 入一定的稳定剂，降低活孢子的呼吸作用，使孢子最大限度的处于休眠状态，延长其货架 期。为了在使用活孢子悬浮剂制剂时获得满意的性能和生物作用，需要使悬浮剂中的加入 合适的助剂，既保证水悬浮剂的各项理化指标，同时保证活孢子的货架期以及水悬浮剂不 被其他微生物所污染。所以活体微生物的水悬浮剂是生物农药制剂中比较难课题，目前市 场上没有相关的产品与专利技术。
【发明内容】
[0006] 在上述大背景的前提下，本发明提供了一种木霉菌孢子水悬浮剂及其制备方法。 本发明的技术方案对我国活体生物农药剂型的发展将起到一定的推动作用，本发明的应用 将解决活体生物农药货架期不稳定的问题，给企业带来很好的经济效益；另外，本发明提供 的木霉菌孢子水悬浮剂具有残留低、污染小、易分散等特点。
[0007] 本发明的第一方面的主题是一种木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，各组分及其 重量配比包括：
[0008] 木霉菌孢子 10-25%; 増稠剂 0.5-3%; 润湿剂 2-5%; 稳定剂 0.0025%-0.006%; 防冻剂 5-10%； 分散剂 1-3%;
[0009] 保护剂 5%， 消泡剂 0.1%; PH调节剂 调节pH3-7; 水 余量。
[0010] 在本发明的优选实施例中，所述木霉菌孢子选自棘孢木霉、绿色木霉、哈茨木霉、 长枝木霉、康宁木霉菌、拟康宁木霉菌、绿木霉中的任意一种或多种，进一步地，所述木霉菌 孢子来源于固体发酵或液体发酵收获得到的木霉菌。
[0011] 进一步地，所述木霉菌孢子通过CN102648714A公开的方法进行木霉菌孢子的培 养，或使用固体发酵的方法进行木霉菌孢子的培养。
[0012] 所述增稠剂选用水溶性树脂、黄原胶、硅酸铝镁、羧甲基纤维素钠、羧乙基纤维素、 甲基纤维素、膨润土、聚乙烯醇、聚乙烯醇、藻酸丙二醇酯（PGA)中的任意一种或几种的混 合，更优选为一种或两种的混合。
[0013] 所述润湿剂选用NP- 10、烷基酚聚氧乙烯基醚壬基酚聚氧乙烯基醚、乳化剂2000 系列、润湿渗透剂快T中的任意一种或几种的混合。
[0014] 所述稳定剂为微量的金属离子，优选为硫酸铜，氯化铜，硝酸铜，硫酸锌，硝酸铅中 的一种。
[0015] 所述防冻剂选用乙二醇、丙二醇、丙三醇、山梨醇中的一种。
[0016] 所述分散剂选用木质素磺酸钠、木质素磺酸钙、聚羧酸盐类、月桂醇聚氧乙烯基醚 硫酸钠、烷基萘甲醛缩合物磺酸盐、油酸盐类，烷基聚氧乙烯醚磺酸盐、烷基酚聚氧乙烯基 醚甲醛缩合物、聚氧乙烯聚氧丙烯基醚嵌段共聚物、十二烷基聚氧乙烯醚磷酸酯或烷基萘 甲醛缩合物磺酸盐中的一种或几种的混合。
[0017] 所述保护剂为蔗糖，麦芽糊精，海藻糖中的一种或几种混合。
[0018] 所述消泡剂选用硅油、有机硅酮、C10-C20饱和脂肪酸类化合物、C8-C10的脂肪醇 类化合物中的一种或几种的混合。
[0019] 所述pH调节剂选用氢氧化钠、氨水、醋酸、柠檬酸或磷酸中的一种。
[0020] 上述所述各种助剂材料均可以从市场上购买。
[0021] 在本发明的另一类优选实施例中，所述木霉菌孢子水悬浮剂还可以进一步包括化 学成分或生物活性成分，其中，优选为生物活性成分，具体地，所述生物活性成分指的是能 够对害虫、病菌、杂草、线虫、鼠类等有害生物进行防治的生物活体或其代谢产物，其含义对 本领域技术人员来讲是已知的，更加优选为，所述生物活性成分为菌丝体、分生孢子或厚垣 孢子，最优选为厚垣孢子。
[0022] 本发明的第二方面的主题是一种上述所述木霉菌孢子水悬浮剂的制备方法，包 括：
[0023] 步骤1 :按所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，称量分散剂、润湿 剂、防冻剂、增稠剂和水，进行剪切混合均匀并砂磨，至合格粒径后，得到混合液A;
[0024] 步骤2:按所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，称量木霉菌孢子，加 入保护剂和水进行混合，得到孢子悬液；
[0025] 步骤3:将混合液A、孢子悬液、稳定剂、pH调节剂和消泡剂剪切混合均勾，得到所 述木霉菌孢子水悬浮剂。
[0026] 在本发明的一个实施例中，所述孢子悬液的制备方法为将培养液或水洗孢子液， 经过沉降式离心机3000g连续离心，收获孢子糊状物，即木霉菌孢子，然后在木霉菌孢子中 加入少量质量百分数为〇. 8%的吐温溶液和一种保护剂，在混匀机中调节为10亿/毫升，得 到所述孢子悬液。
[0027] 进一步地，对所述木霉菌孢子水悬浮剂进行质检和包装，得到最终产品。
[0028] 在本发明的另一个实施例中，所述制备方法，包括：
[0029] 步骤1 :按上述所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，称量分散剂、润 湿剂、防冻剂、增稠剂和水，投入搅拌釜中进行剪切混合均匀并通入砂磨机进行砂磨，至合 格粒径后，得到混合液A;
[0030] 步骤2:按上述所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，将培养液或水 洗孢子液，经过卧螺式离心机离心，收获木霉菌孢子，称量木霉菌孢子，加入保护剂和水，在 混匀机中进行混合，得到孢子悬液；
[0031] 步骤3:将混合液A、孢子悬液、稳定剂、pH调节剂和消泡剂剪切混合均匀，以水补 充并用pH调节剂调节PH至3-5,得到所述木霉菌孢子水悬浮剂。
[0032] 通过所述制备方法制备得到的木霉菌孢子水悬浮剂，其活孢子含量大于2亿孢 子/毫升，采用筛析法检测，多90%过75ym筛；贮存期内，悬浮率不低于90% ;-般黏度 300-1000Cp，易于倾倒；离心稳定性良好；使用时不产生粉尘，无有机溶剂，安全性好。 [0033] 本发明的第三方面的主题是一种上述所述木霉菌孢子水悬浮剂的应用，包括每亩 土地每次喷施所述木霉菌孢子水悬浮剂的用量为300-500ml，每隔7-14天喷施一次。
[0034] 本发明的核心技术之一是通过低剪切力孢子富集方法收获木霉菌孢子，采用先将 助剂与介质高剪切力混匀，再低剪切力的工艺条件下与孢子悬液混合，避免了活体微生物 在加工过程中受到损伤。同时通过加入活体微生物保护剂、与稳定剂使活体微生物处于休 眠的稳定状态。因为大多数的防腐剂对活体微生物都容易产生影响，本发明选用通过pH调 节剂调节合适的pH值，在不影响木霉菌存活的前提下，避免被外源微生物污染。同时保证 活体木霉菌贮藏性能得到了提高，可以在常温下长时间贮藏。
[0035] 与现有技术相比，本发明生物农药水悬浮剂，孢子含量可达到2亿个/ml，尤其保 存期可达半年以上；本发明解决了木霉菌生物农药的稳定性问题，使木霉菌生物农药可以 长期贮藏，稳定发挥功效。
【附图说明】
[0036] 图1为本发明的一个实施例的制备方法示意图。
【具体实施方式】
[0037] 本发明提供了一种木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，各组分及其重量配比包 括：
[0038] 木霉菌孢子 10-25%; 增稠剂 0.5-3%; 润湿剂 2-5%; 稳定剂 0.0025%-0.006%; 防冻剂 5-10%; 分散剂 1-3%; 保护剂 5%; 消泡剂 0.1%: PH调节剂 调ipH3-7;
[0039] 水 余量。
[0040] 在本发明的优选实施例中，所述木霉菌孢子选自棘孢木霉、绿色木霉、哈茨木霉、 长枝木霉、康宁木霉菌、拟康宁木霉菌、绿木霉中的任意一种或多种，进一步地，所述木霉菌 孢子来源于固体发酵或液体发酵收获得到的木霉菌。
[0041] 进一步地，所述木霉菌孢子通过CN102648714A公开的方法进行木霉菌孢子的培 养，或使用固体发酵的方法进行木霉菌孢子的培养。
[0042] 所述增稠剂选用水溶性树脂、黄原胶、硅酸铝镁、羧甲基纤维素钠、羧乙基纤维素、 甲基纤维素、膨润土、聚乙烯醇、聚乙烯醇、藻酸丙二醇酯（PGA)中的任意一种或几种的混 合，更优选为一种或两种的混合。
[0043] 所述润湿剂选用NP-10、烷基酚聚氧乙烯基醚壬基酚聚氧乙烯基醚、乳化剂2000 系列、润湿渗透剂快T中的任意一种或几种的混合。
[0044] 所述稳定剂为微量的金属离子，优选为硫酸铜，氯化铜，硝酸铜，硫酸锌，硝酸铅中 的一种。
[0045] 所述防冻剂选用乙二醇、丙二醇、丙三醇、山梨醇中的一种。
[0046] 所述分散剂选用木质素磺酸钠、木质素磺酸钙、聚羧酸盐类、月桂醇聚氧乙烯基醚 硫酸钠、烷基萘甲醛缩合物磺酸盐、油酸盐类，烷基聚氧乙烯醚磺酸盐、烷基酚聚氧乙烯基 醚甲醛缩合物、聚氧乙烯聚氧丙烯基醚嵌段共聚物、十二烷基聚氧乙烯醚磷酸酯或烷基萘 甲醛缩合物磺酸盐中的一种或几种的混合。
[0047] 所述保护剂为蔗糖，麦芽糊精，海藻糖中的一种或几种混合。
[0048] 所述消泡剂选用硅油、有机硅酮、C10-C20饱和脂肪酸类化合物、C8-C10的脂肪醇 类化合物中的一种或几种的混合。
[0049] 所述pH调节剂选用氢氧化钠、氨水、醋酸、柠檬酸或磷酸中的一种。
[0050] 上述所述各种助剂材料均可以从市场上购买。
[0051] 在本发明的另一类优选实施例中，所述木霉菌孢子水悬浮剂还可以进一步包括化 学成分或生物活性成分，其中，优选为生物活性成分，具体地，所述生物活性成分指的是能 够对害虫、病菌、杂草、线虫、鼠类等有害生物进行防治的生物活体或其代谢产物，其含义对 本领域技术人员来讲是已知的，更加优选为，所述生物活性成分为菌丝体、分生孢子或厚垣 孢子，最优选为厚垣孢子。
[0052] 本发明还提供了一种上述所述木霉菌孢子水悬浮剂的制备方法，包括：
[0053] 步骤1 :按所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，称量分散剂、润湿 剂、防冻剂、增稠剂和水，进行剪切混合均匀并砂磨，至合格粒径后，得到混合液A;
[0054] 步骤2:按所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，称量木霉菌孢子，加 入保护剂和水进行混合，得到孢子悬液；
[0055] 步骤3:将混合液A、孢子悬液、稳定剂、pH调节剂和消泡剂剪切混合均勾，得到所 述木霉菌孢子水悬浮剂。
[0056] 在本发明的一个实施例中，所述孢子悬液的制备方法为将培养液或水洗孢子液， 经过沉降式离心机3000g连续离心，收获孢子糊状物，即木霉菌孢子，然后在木霉菌孢子中 加入少量质量百分数为〇. 8%的吐温溶液和一种保护剂，在混匀机中调节为10亿/毫升，得 到所述孢子悬液。
[0057] 进一步地，对所述木霉菌孢子水悬浮剂进行质检和包装，得到最终产品。
[0058] 在本发明的另一个实施例中，所述制备方法，包括：
[0059] 步骤1 :按上述所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，称量分散剂、润 湿剂、防冻剂、增稠剂和水，投入搅拌釜中进行剪切混合均匀并通入砂磨机进行砂磨，至合 格粒径后，得到混合液A;
[0060] 步骤2:按上述所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，将培养液或水 洗孢子液，经过卧螺式离心机离心，收获木霉菌孢子，称量木霉菌孢子，加入保护剂和水，在 混匀机中进行混合，得到孢子悬液；
[0061] 步骤3:将混合液A、孢子悬液、稳定剂、pH调节剂和消泡剂剪切混合均匀，以水补 充并用pH调节剂调节PH至3-5,得到所述木霉菌孢子水悬浮剂。
[0062] 通过所述制备方法制备得到的木霉菌孢子水悬浮剂，其活孢子含量大于2亿孢 子/毫升，采用筛析法检测，多90%过75ym筛；贮存期内，悬浮率不低于90% ;-般黏度 300-1000Cp，易于倾倒；离心稳定性良好；使用时不产生粉尘，无有机溶剂，安全性好。
[0063] 本发明还提供了一种上述所述木霉菌孢子水悬浮剂的应用，包括每亩土地每次喷 施所述木霉菌孢子水悬浮剂的用量为300-500ml，每隔7-14天喷施一次。
[0064] 下面结合实施例，对本发明进行详细说明，但本领域技术人员应该理解，本发明并 不仅仅限于下述有限的实施例。
[0065] 实施例1--一种木霉菌孢子水悬浮剂
[0066] 1、其组分及其重量配比如表1所示。
[0067] 2、制备总量100kg的所述木霉菌孢子水悬浮剂的制备方法，包括：
[0068] 步骤1 :按表1所示，称量分散剂、润湿剂、防冻剂、增稠剂和水，在高速混合机中 进行剪切混合50分钟，然后以定量隔膜泵将混合好的浆料泵入磨砂机并砂磨，至合格粒径 后，得到混合液A;
[0069] 步骤2 :将培养液或水洗孢子液，经过沉降式离心机3000g连续离心，收获孢子糊 状物，即木霉菌孢子，加入少量0. 8%吐温溶液及保护剂在混匀机中调节为10亿孢子/毫升 的孢子悬液；
[0070] 步骤3 :将混合液A、孢子悬液、稳定剂、pH调节剂和消泡剂剪切混合，以水补齐重 量至l〇〇kg，用PH调节剂调节PH至3-5,混合均匀即得100kg所述木霉菌孢子水悬浮剂。
[0071] 3、经检测，本实施例制备的木霉菌孢子水悬浮剂为2亿孢子/毫升，且达到规格要 求，详见表1。
[0072] 实施例2
[0073] 1、其组分及其重量配比如表1所示。
[0074] 2、制备总量100kg的所述木霉菌孢子水悬浮剂的制备方法，同实施例1。
[0075] 3、经检测，本实施例制备的木霉菌孢子水悬浮剂为2亿孢子/毫升，且达到规格要 求，详见表1。
[0076] 实施例3
[0077] 1、其组分及其重量配比如表1所示。
[0078] 2、制备总量100kg的所述木霉菌孢子水悬浮剂的制备方法，同实施例1。
[0079] 3、经检测，本实施例制备的木霉菌孢子水悬浮剂为2亿孢子/毫升，且达到规格要 求，详见表1。
[0080] 实施例4
[0081] 1、其组分及其重量配比如表1所示。
[0082] 2、制备总量100kg的所述木霉菌孢子水悬浮剂的制备方法，同实施例1。
[0083] 3、经检测，本实施例制备的木霉菌孢子水悬浮剂为2亿 孢子/毫升，且达到规格要 求，详见表1。
[0084] 实施例5
[0085] 1、其组分及其重量配比如表1所示。
[0086] 2、制备总量100kg的所述木霉菌孢子水悬浮剂的制备方法，同实施例1。
[0087] 3、经检测，本实施例制备的木霉菌孢子水悬浮剂为2亿孢子/毫升，且达到规格要 求，详见表1。
[0088] 表1:实施例1-5的组分配比及质量检测指标
[0089]
[0090] 应用实施例6
[0091]用实例5制得的2亿木霉菌孢子水悬浮剂进行草莓苗期炭疽病防治的田间试验， 时间为2012年4月至2012年9月，试验地点位于上海市金山区廊下镇草莓专业合作社。该 试验田为连续3年的草莓育苗地，畦宽1. 2m，畦间沟宽30cm，沟深20cm，灌溉方式为沟灌，草 莓母苗定植时间为4月12日。
[0092] 1、实验设计
[0093] 试验设置所述木霉菌孢子水悬浮剂3个剂量处理，并设置化学药物对照和空白对 照，共5个处理。每个处理小区面积为20m2,重复三次，采用随机区组排列。
[0094] 按照表2所设计处理用药量，草莓育苗期间共进行7次施药：其中前3次（第一 次喷雾在苗床苗定植一个月后）为每隔30天喷雾一次，之后为每隔7天喷雾一次。试验期 间，全部试验小区均进行正常的水、肥、除草及防虫管理。
[0095] 试验期间（2012年上海地区4月-9月）天气情况见表3。
[0096] 2、育苗期发病情况调查
[0097] 两次调查时间分别为7月中旬和8月上旬。分别在陆地和大棚的每个试验小区内， 随机5点取样，每个点调查10株草莓苗叶片、叶柄以及匍匐茎的发病情况，记载病害级数， 然后计算病情指数和防效。病情分级标准和计算公式如下：病情分级标准：〇级一一无病 斑；1级--病斑占总面积的（叶、叶柄、莖）5%以下；3级--病斑占6%~10% ;5级-- 病斑占11 %~25% ;7级--病斑占26%~50% ;9级--病斑占50%以上。
[0098] 病情指数=[5：(各级病叶（茎）数X该级代表值）+ (调查总叶（茎）数X最 高级代表值）]X100。
[0099] 防效（％ ) = [(对照区病指一防治区病指）+对照区病指]X100。
[0100] 实验结果表明：2亿木霉菌孢子水悬浮剂250倍喷雾处理对于化药，空白，及其他 处理有显著差异性。对草莓苗期炭疽病防效可达80%以上，详见表4。
[0101] 表2:实验设计
[0104] 表3:试验期间天气情况[0105]
[0102]
[0103]
[0106] 注：*"日最高气温彡35. 0°C
[0107] 表4 :不同处理对草莓苗期炭疽病病情指数和防治效果的影响
[0108]
[0109] 注：处理开始前病情指数为;根据邓肯氏新复极差法，相同字母表示不同处理 间在（P兰0. 05,n= 3)水平上无显著性差异。
[0110] 以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限 制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和 替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和 修改，都应涵盖在本发明的范围内。
【主权项】
1. 一种木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，各组分及其重量配比包括： 木霉菌孢子 10-25%; 增稠剂 0.5-3%; 润湿剂 2-5%: 稳定剂 0.0025%-0.006%; 防冻剂 5-10%: 分散剂 1-3%; 保护剂 5%; 消泡剂 0.1%; PH调节剂 调节pH3-7; 水 余量。2. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述木霉菌孢子选自棘 孢木霉、绿色木霉、哈茨木霉、长枝木霉、康宁木霉菌、拟康宁木霉菌、绿木霉中的任意一种 或多种。3. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述增稠剂选用水溶性 树脂、黄原胶、硅酸铝镁、羧甲基纤维素钠、羧乙基纤维素、甲基纤维素、膨润土、聚乙烯醇、 聚乙烯醇、藻酸丙二醇酯（PGA)中的任意一种或几种的混合，更优选为一种或两种的混合。4. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述润湿剂选用NP- 10、烷基酚聚氧乙烯基醚壬基酚聚氧乙烯基醚、乳化剂2000系列、润湿渗透剂快T中的任意 一种或几种的混合。5. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述稳定剂为微量的金 属离子，优选为硫酸铜，氯化铜，硝酸铜，硫酸锌，硝酸铅中的一种。6. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述防冻剂选用乙二醇、 丙二醇、丙三醇、山梨醇中的一种。7. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述分散剂选用木质素 磺酸钠、木质素磺酸钙、聚羧酸盐类、月桂醇聚氧乙烯基醚硫酸钠、烷基萘甲醛缩合物磺酸 盐、油酸盐类，烷基聚氧乙烯醚磺酸盐、烷基酚聚氧乙烯基醚甲醛缩合物、聚氧乙烯聚氧丙 烯基醚嵌段共聚物、十二烷基聚氧乙烯醚磷酸酯或烷基萘甲醛缩合物磺酸盐中的一种或几 种的混合。8. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述保护剂为蔗糖，麦芽 糊精，海藻糖中的一种或几种混合。9. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述消泡剂选用硅油、有 机硅酮、C10-C20饱和脂肪酸类化合物、C8-C10的脂肪醇类化合物中的一种或几种的混合。10. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述pH调节剂选用氢氧 化钠、氨水、醋酸、柠檬酸或磷酸中的一种。11. 根据权利要求1所述的木霉菌孢子水悬浮剂，其特征在于，所述木霉菌孢子水悬浮 剂还进一步包括化学成分或生物活性成分，其中，所述生物活性成分指的是能够对害虫、病 菌、杂草、线虫、鼠类等有害生物进行防治的生物活体或其代谢产物。12. -种如权利要求1-11任意一项所述木霉菌孢子水悬浮剂的制备方法，其特征在 于，包括： 步骤1 :按所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，称量分散剂、润湿剂、防 冻剂、增稠剂和水，进行剪切混合均匀并砂磨，至合格粒径后，得到混合液A; 步骤2 :按所述的木霉菌孢子水悬浮剂的组分及其重量配比，称量木霉菌孢子，加入保 护剂和水进行混合，得到孢子悬液； 步骤3 :将混合液A、孢子悬液、稳定剂、pH调节剂和消泡剂剪切混合均匀，得到所述木 霉菌孢子水悬浮剂。13. 根据权利要求12所述的制备方法，其特征在于，所述孢子悬液的制备方法为将培 养液或水洗孢子液，经过沉降式离心机3000g连续离心，收获孢子糊状物，即木霉菌孢子， 然后在木霉菌孢子中加入少量质量百分数为0. 8%的吐温溶液和一种保护剂，在混匀机中 调节为10亿/毫升，得到所述孢子悬液。14. 根据权利要求12所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法制备得到的木霉菌 孢子水悬浮剂，其活孢子含量大于2亿孢子/毫升，采用筛析法检测，多90 %过75ym筛； 1C存期内，悬浮率不低于90% ;-般黏度300-1000cp，易于倾倒；离心稳定性良好；使用时 不产生粉尘，无有机溶剂，安全性好。15. -种如权利要求1-11任意一项所述木霉菌孢子水悬浮剂的应用，包括每亩土地每 次喷施所述木霉菌孢子水悬浮剂的用量为300-500ml，每隔7-14天喷施一次。
【专利摘要】本发明提供了一种木霉菌孢子水悬浮剂及其制备方法，包括：(1)称量分散剂、润湿剂、防冻剂、消泡剂、pH调节剂调节和水，进行剪切混合均匀并砂磨，至合格粒径后，得到混合液A；(2)称量木霉菌孢子、保护剂、稳定剂，进行混合，得到孢子悬液；(3)将混合液A、孢子悬液和增稠剂剪切混合均匀，得到所述木霉菌孢子水悬浮剂。本发明作为微生物活体杀菌剂，对棉花、水稻、果树、蔬菜等作物上的土传及气传真菌性病害具有比较突出的防治效果。本发明将解决活体生物农药货架期不稳定的问题，给企业带来很好的经济效益；另外，本发明提供的木霉菌孢子水悬浮剂具有残留低、污染小、易分散等特点。
【IPC分类】A01P3/00, A01N63/04, A01N25/04
【公开号】CN104904752
【申请号】CN201510405612
【发明人】旷文丰, 谢俊, 毛伟力
【申请人】上海万力华生物科技有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年7月10日
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