一种饲料添加剂及其制备
一种饲料添加剂及其制备
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及一种饲料添加剂，属于饲料添加剂领域。
【背景技术】：
[0002] 目前，中草药饲料添加剂作为新兴研究的热点，具有天然、营养、副作用小等优点。 大力开发中草药饲料添加剂对解决抗生素残留问题，提高生产率，发展绿色畜牧业，满足人 们的食品安全需求，缩小我国畜牧业与发达国家差距，增强我国畜产品在国际市场的竞争 力，具有重要的经济意义和社会效益。研究表明，许多中草药本身就具有良好的体外抑菌能 力，与西药不同的是，中草药饲料抗菌保健剂无残留、无耐药性，其作用机理不仅仅在于对 病原微生物的抑杀作用，更重要的是对机体抗病修复能力的调整，即提高机体的抗应激能 力、提高机体免疫功能和抗病防御机能，从而达到提高动物生产性能和饲料利用效率的目 的。
[0003]中草药是具有特定功效的一些植物，这些植物各有功效，例如部分植物的效用如 下：天门冬：其药用部位主要是块根，具有养阴清热、润燥生津的功效，现代药理学研究表 明其对肺结核、支气管炎、白喉、百日咳、口干咽燥等症状具有良好的疗效，同时还具有抗 菌免疫和抗氧化功能；蒲黄：为香蒲科植物水烛香蒲、东方香蒲的干燥花粉，中医理论认 为该药性味甘平，归肝、心、脾经，具镇痛化瘀的功效；目前，已经将这些具有特定功效的中 药材添加在动物饲料添加剂中来使用，比如，公开号为CN102793058A的发明专利《中草 药饲料添加剂》，公开了一种由红心果、金龙胆草、板蓝根、金银花、首乌藤合成的中草药添 加剂，主要是利用红心果中VC含量较高，能增强动物的免疫力，因此，只能起到起到一定 的预防疾病、保健的作用，只有长时间连续不断的喂食，才能起到一定起效；而公开号为 CN102763765A的发明专利《一种中草药饲料添加剂》，公开了一种由山楂、神曲、党参、刺五 加、板蓝根、肉桂、艾叶等十多种中草药制得的饲料添加剂，能够促进动物生长、提高动物成 活率；但其组成复杂，涉及的中药材种类繁多，成本较高，取得的效果相对较弱，长期使用易 造成饲料浪费，不适合大规模养殖场使用。
[0004] 因此，如何有效利用现有中草药原料制备可以有效提_动物免疫力和词料利用率 的饲料添加剂，实现饲料的高价值利用，是一个有利于饲料产业健康发展的项目。
【发明内容】
：
[0005] 本发明的目的是开发一种饲料添加剂。
[0006] 本发明的技术方案如下：所述饲料添加剂由以下重量份数的原料组成：天门冬粉 5-8份；蒲黄粉3-6份；灵芝子实体粉1-3份；枯草芽孢杆菌菌剂2-6份；当归粉2-6份；黑 曲霉培养物2-4份；甘草粉1-2份。
[0007] 所述天门冬粉制备方法如下：将天门冬经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0008] 所述蒲黄粉制备方法如下：将蒲黄经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0009]所述甘草粉制备方法如下：将甘草经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0010] 所述当归粉制备方法如下：将当归经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0011] 灵芝子实体粉制备方法，将其经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0012] 所述黑曲霉培养物的制备方法如下：
[0013] 斜面菌种活化培养转接到斜面培养基上逐级培养获得种子后，将种子加入装 有灭菌培养基的发酵池或托盘中混合均匀后培养，曲料培养温度控制在18-26°C，湿度 80-85%，每隔6-10小时翻料一次，培养时间5-8天；固体曲料的培养采用常用曲料培养技 术；待培养料长满菌丝即可结束培养，培养基预先经高温蒸煮灭菌处理，灭菌条件控制温度 121°C，时间1小时。
[0014] 干燥粉碎：发酵结束培养料在流化床或其他干燥设备上进行干燥，干燥温度控制 在60°C，干燥到水分含量在10 %以下，然后将固体培养料进行粉碎，物料粉碎粒径在60目 以上。
[0015] 培养基组成：麸皮70份，豆饼粉6份，天门冬粉5-8份，山茱萸粉2-5份，玉米淀粉 5-8份；添加与固体物质等量的自来水；初始pH自然。
[0016] 本发明提供的黑曲霉（Aspergillusniger)Li-2013-03是由天津工业大学实验室 保藏的一株产纤维素酶的黑曲霉（Aspergillusniger)Li-2010经亚硝基胍多轮诱变筛选， 然后对优良菌株经发酵性能测试，筛选得到产高活力纤维素酶的黑曲霉菌株（Aspergillus niger)Li-2013_03。该菌株已于2013年7月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员 会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编 100101)，保藏号为CGMCCN0. 7927。
[0017] 所述枯草芽孢杆菌为市售商业菌剂，保藏编号为CICC10153。
[0018] 本发明饲料添加剂的制备方法如下：
[0019]按照原料组成将天门冬粉、蒲黄粉、灵芝子实体粉、枯燥芽孢杆菌菌剂、当归粉、黑 曲霉培养物、甘草粉混合均匀制粒即可。
[0020] 本发明产品在生猪日粮中的添加量为500-1000克/吨。
[0021] 有益效果：
[0022] 本发明产品安全、无毒，具有抗菌、抗病毒的功效；通过将中药材、芽孢杆菌制剂的 科学复配，实现了有机组合，可以有效提高动物的免疫力和改善肠道健康，减少动物疾病的 发生，促进动物生长发育，提高饲料利用率，同时可以防止饲料的霉变和营养物质的氧化损 失。使用本发明产品的猪，使免疫力有较大提高，抗生素用量减少了 60%以上，猪肉制品的 口味和肉质有明显提升，感官实验评价表明评价分提高67 %以上。
【具体实施方式】
[0023] 下面通过具体的实施方案叙述本发明产品组成及工艺。除非特别说明，本发明中 所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而 非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员 而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中分离提取条件进行的各种 改变或改动也属于本发明的保护范围。
[0024] 实施例1
[0025]枯草芽孢杆菌菌剂的制备：
[0026] 将枯草芽孢杆菌斜面菌种接入摇瓶中，逐级培养获得种子液体，将种子液体以 10 %接种量接入总容积为1. 5吨二级种子罐，发酵培养基装量1吨，培养条件培养温度 24°C，搅拌速度100转/分，通风量（V/V) 1 : 0. 5,罐压0. 05MPa，培养时间30小时，培养结 束菌体浓度在5. 0X108个/ml。离心分离：采用离心机分离发酵液获得菌体。在获得的菌 体里添加保护剂后，采用真空冷冻干燥工艺处理获得干粉菌剂；保护剂组成为8%脱脂奶、 3%乳糖、2%甘油、1. 5%海藻糖，其余为水。
[0027] 发酵培养基组成：葡萄糖6%，酵母提取物1%，蛋白胨0.2%，CaC03l%，其余为纯 净水，pH6. 8。
[0028] 所述枯草芽孢杆菌冻干菌粉中活菌数量为（2-8)X108个/g。
[0029]所述枯草芽抱杆菌（Bacillussubtilis)，菌株编号为CICC10153。
[0030]本发明提供的产高活力纤维素酶的菌株具体为黑曲霉（Aspergillusniger)Li-2013-03。该菌株已于2013年7月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微 生物中心（简称CGMCC，地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编100101)，保 减号为CGMCCN0. 7927。
[0031]本发明黑曲霉菌株（Aspergillusniger)Li-2013-03(CGMCCNo. 7927)具有以下 微生物学特征：
[0032] 1、形态学特征：
[0033] 黑曲霉菌株CGMCCNo. 7927,生物学形态为包括分生孢子、胞梗、顶囊、产胞结构 等几部分。分生孢子头球形至辐射形，直径150-450ym，分生孢子梗发生于基质。胞梗茎 1000-3000 (长度）X12-20 (直径）ym，黄色或黄褐色，壁平滑；顶囊球形或近似球形，直径 45-75ym，表面全面可育；产胞结构双层，梗基10-20 (长度）X4. 5-7. 0 (直径）ym，瓶梗 6-10 (长度）X2. 5-3. 5 (直径）ym，分生孢子球形或近球形，直径3-4. 5ym，褐色，壁粗糙。
[0034] 2、培养学特征：
[0035] 菌株在麦芽汁琼脂培养基上生长迅速，28°C发酵4天孢子可铺满斜面；质地丝绒 状或稍带絮状；分生孢子结构大量，褐黑色，无渗出液；菌落反面略带黄色。
[0036]3、生理生化特征：
[0037] 黑曲霉菌株CGMCCNo. 7927可在玉米秸杆、稻草、木屑、马铃薯、玉米粉、可溶性淀 粉、糖蜜等碳源上生长，最适pH范围5-6,最适生长温度范围28-33°C，最适产酶温度范围 28-30。。。
[0038] 本发明黑曲霉菌株CGMCCNo. 7927的筛选技术路线为：出发菌株一斜面培养一孢 子悬液的制备一诱变处理一平板分离一初筛一复筛一遗传稳定性测定一扩大实验（发酵 性能测定）。
[0039] 按诱变筛选方案，对突变株逐级筛选淘汰，最后对优良菌株经发酵性能测试筛选， 得到一株高产酶性能菌株黑曲霉菌（Aspergillusniger)Li-2013-03,发酵96小时后纤 维素酶的外切葡聚糖酶、内切葡聚糖酶、葡萄糖苷酶和滤纸酶活力分别达到 620U/mL、1289U/mL、456U/mL和 732U/mL。
[0040] 28°C发酵4天直径75mm，发酵液纤维素酶的的外切葡聚糖酶、内切葡聚糖 酶、0 -葡萄糖苷酶和滤纸酶活力分别达到620U/mL、1289U/mL、456U/mL和732U/mL，分别比 出发菌株提高了 9. 21倍、7. 43倍、8. 15倍和10. 31倍。
[0041] 产高活力纤维素酶菌株的筛选方法，包括以下步骤：
[0042] 1)斜面培养：将原始黑曲霉菌株（Aspergillusniger)Li-2010划线接种斜面 培养基，30°C培养2~3d，直至菌丝体成熟、产大量黑色孢子。所述斜面培养基组成如下： 120Brix麦芽汁 1000mL，pH值自然，121°C灭菌 20min;
[0043] 2)孢子悬液制备（以下步骤均在无菌条件下操作）：向试管斜面加入15mL无菌 水，把孢子刮下，用滤纸过滤，将滤过液倒入已灭菌、并加有5-10粒无菌玻 璃珠的150mL三 角瓶中，将三角瓶放入摇床振荡l〇_15min，使孢子分散。
[0044] 3)亚硝基胍（NTG)诱变
[0045] ①用无菌水将孢子悬浮液调节为稀释成106_10 7个/mL。
[0046] ②取10mL菌悬液转移至100mL三角瓶中，加入10mg的NTG，配制成终浓度为10mg/ mL的NTG溶液，并加入4-5滴丙酮，以利于NTG溶解。
[0047] ③在30°C下200rpm振荡反应30min，5000rpm离心lOmin收集菌体，用无菌生理盐 水洗涤数次，中止反应。
[0048] ④适当稀释将孢子浓度调节为103个/mL，取最后稀释度的菌液0. 2mL，稀释涂布 于纤维素-刚果红平板筛选培养基上。在30°C培养2~3天后挑取透明圈/菌落直径较 大的菌株200支。（所述纤维素-刚果红平板筛选培养基组成如下：纤维素粉10g、刚果红 〇. 2g、硫酸铵5g、硫酸镁0. 25g、磷酸二氢钾lg、氯化钠0.lg、明胶2g、琼脂20g、自来水定容 lOOOmL，pH值 5-6,121°C灭菌 20min)。
[0049] ⑤复筛：将获得的200株菌分别用无菌牙签接种于斜面培养基，3(/e培养至孢子铺 满斜面。分别将孢子以无菌水洗下接种于装有50mL复筛培养基的250mL三角瓶中进行发 酵，接种量10% (v/v)，30°C、lOOr/min培养96h，分别测定各菌株的纤维素酶活性。（所述复 筛培养基组成如下：纤维素粉50g、硫酸铵5g、硫酸镁0. 25g、磷酸二氢钾lg、氯化钠0.lg、 自来水定容1000mL，pH值5-6,121°C灭菌20min)。选取纤维素酶酶活力最高的菌株进行放 大实验。
[0050] 4)遗传稳定性试验
[0051] 将Li-2013-03菌株在斜面上连续十次传代，并用摇瓶复筛的方法检测每次传代 后的发酵情况。实验发现，在斜面上连续十次传代，该菌种性状没有明显变化，各项性能指 标都正常，由此说明该菌种的遗传稳定性较强。
[0052] 5)放大试验
[0053] ①种子培养：将纤维素酶酶活力最高的菌株（Aspergillusniger)Li-2013-03接 入500mL三角瓶中，种子培养基装量100毫升，30°C、150rpm摇床培养72-96h。
[0054] ②种子罐培养：将种子液以10% (v/v)接种量接入装有7. 5L发酵液的10L发 酵罐中，控制pH值恒定为6. 0±0. 2,培养温度30±0. 1 °C，搅拌速度300rpm，通风量（v/ v)l: 0.8-1. 2,培养时间96h，溶解氧20-30%。所述发酵培养基组成为：纤维素粉100g、硫 酸铵5g、硫酸镁0. 25g、磷酸二氢钾lg、氯化钠0.lg、自来水定容lOOOmL，pH值5-6,121°C 灭菌20min。
[0055] 发酵结束后，取发酵上清液（粗酶液）进行酶活力检测，经测定，菌株 (Aspergillusniger)Li-2013-03的外切葡聚糖酶、内切葡聚糖酶、葡萄糖 苷酶和滤纸酶活力分别达到620U/mL、1289U/mL、456U/mL和732U/mL，分别比出发菌株 (Aspergillusniger)Li-2010 提高了 9. 21 倍、7. 43 倍、8. 15 倍和 10. 31 倍。
[0056] 实施例2
[0057] 所述饲料添加剂由以下重量份数的原料优选组成：天门冬粉6份；蒲黄粉5份；灵 芝子实体粉2份；枯草芽孢杆菌菌剂4份；当归粉4份；黑曲霉培养物3份；甘草粉2份；
[0058] 所述天门冬粉制备方法如下：将天门冬经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0059] 所述蒲黄粉制备方法如下：将蒲黄经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0060] 所述甘草粉制备方法如下：将甘草经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0061] 所述当归粉制备方法如下：将当归经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0062] 灵芝子实体粉制备方法，将其经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0063] 所述黑曲霉培养物的制备方法如下：
[0064] 斜面菌种活化培养转接到斜面培养基上逐级培养获得种子后，将种子加入装 有灭菌培养基的发酵池或托盘中混合均匀后培养，曲料培养温度控制在24-26°C，湿度 83-85%，每隔8-9小时翻料一次，培养时间6-7天；固体曲料的培养采用常用曲料培养技 术；待培养料长满菌丝即可结束培养，培养基预先经高温蒸煮灭菌处理，灭菌条件控制温度 121°C，时间1小时。
[0065] 干燥粉碎：发酵结束培养料在流化床或其他干燥设备上进行干燥，干燥温度控制 在60°C，干燥到水分含量在10 %以下，然后将固体培养料进行粉碎，物料粉碎粒径在60目 以上。
[0066] 培养基组成：麸皮70份，豆饼粉6份，天门冬粉6份，山茱萸粉4份，玉米淀粉6份； 添加与固体物质等量的自来水；初始pH自然。
[0067] 本发明饲料添加剂的制备方法如下：
[0068]按照原料组成将天门冬粉、蒲黄粉、灵芝子实体粉、枯燥芽孢杆菌菌剂、当归粉、黑 曲霉培养物、甘草粉混合均匀制粒即可。
[0069] 本产品在生猪日粮中的添加量为800克/吨。
[0070] 实施例3
[0071] 所述饲料添加剂由以下重量份数的原料优选组成：天门冬粉8份；蒲黄粉3份；灵 芝子实体粉2份；枯草芽孢杆菌菌剂6份；当归粉2份；黑曲霉培养物4份；甘草粉1份。
[0072]按照原料组成将天门冬粉、蒲黄粉、灵芝子实体粉、枯燥芽孢杆菌菌剂、当归粉、黑 曲霉培养物、甘草粉混合均匀制粒即可。
[0073] 本产品在生猪日粮中的添加量为600克/吨。
[0074]使用效果实验
[0075] 应用本发明实施例2饲料添加剂在断奶仔猪中的使用效果试验：
[0076]试验动物选择养殖场平均体重为（11. 5 ±0. 45)kg的健康乳猪120头，经统计分析 体重差异不显著。采用单因子随机化设计，将120头健康乳猪，按公母各半，分成2组（对 照组和试验组），每组6个重复，每个重复10头猪。试验组添加实施例2制得的本发明产品 800克/吨，对照组添加同类其他产品。连续饲喂25天，与对照组相比，使用发明饲料添加 剂可获得如下效果：
[0077]
[0078] 试验结果表明:乳猪在日采食量相同的情况下/食用添加本发明产品的饲料，可以 有效提高乳猪的日增重，降低料肉比，同时大大降低了乳猪的腹泻率，也证明了本发明饲料 添加剂可以有效提尚词料的在动物体内的利用率，同时提尚乳猪的免疫力；对实验猪的毛 色进行感官评分，实验组评分达到8.9分，对照组为6.7分。
【主权项】
1. 一种饲料添加剂，由以下重量份数的原料组成：天门冬粉5-8份；蒲黄粉3-6份；灵 芝子实体粉1-3份；枯草芽孢杆菌菌剂2-6份；当归粉2-6份；黑曲霉培养物2-4份；甘草 粉1-2份；所述黑曲霉保藏号为CGMCCNO. 7927。2. 根据权利要求1所述的饲料添加剂，其特征在于，黑曲霉培养物的制备方法如下： 斜面菌种活化培养转接到斜面培养基上逐级培养获得种子后,将种子加入装有灭菌培 养基的发酵池或托盘中混合均匀后培养，曲料培养温度控制在18-26°C，湿度80-85%，每 隔6-10小时翻料一次，培养时间5-8天；固体曲料的培养采用常用曲料培养技术；待培养 料长满菌丝即可结束培养，培养基预先经高温蒸煮灭菌处理，灭菌条件控制温度121°C，时 间1小时； 干燥粉碎：发酵结束培养料在流化床或其他干燥设备上进行干燥，干燥温度控制在 60°C，干燥到水分含量在10 %以下，然后将固体培养料进行粉碎，物料粉碎粒径在60目以 上。3. 根据权利要求1所述的饲料添加剂，其特征在于，重量份数的原料组成为：天门冬粉 6份；蒲黄粉5份；灵芝子实体粉2份；枯草芽孢杆菌菌剂4份；当归粉4份；黑曲霉培养物 3份；甘草粉2份。4. 根据权利要求1所述的饲料添加剂，其特征在于，重量份数的原料组成为：天门冬粉 8份；蒲黄粉3份；灵芝子实体粉2份；枯草芽孢杆菌菌剂6份；当归粉2份；黑曲霉培养物 4份；甘草粉1份。5. -种制备如权利要求1-4所述的饲料添加剂的方法，包括如下步骤：按照原料组成 将天门冬粉、蒲黄粉、灵芝子实体粉、枯燥芽孢杆菌菌剂、当归粉、黑曲霉培养物、甘草粉混 合均匀制粒。6. 根据权利要求5所述的一种饲料添加剂的制备方法，其特征在于，分别将天门冬、蒲 黄、灵芝子、当归、甘草经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下。7. 根据权利要求5所述的一种饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述黑曲霉培养 物的制备方法如下： 斜面菌种活化培养转接到斜面培养基上逐级培养获得种子后,将种子加入装有灭菌培 养基的发酵池或托盘中混合均匀后培养，曲料培养温度控制在18-26°C，湿度80-85%，每 隔6-10小时翻料一次，培养时间5-8天；固体曲料的培养采用常用曲料培养技术；待培养 料长满菌丝即可结束培养，培养基预先经高温蒸煮灭菌处理，灭菌条件控制温度121°C，时 间1小时； 干燥粉碎：发酵结束培养料在流化床或其他干燥设备上进行干燥，干燥温度控制在 60°C，干燥到水分含量在10 %以下，然后将固体培养料进行粉碎，物料粉碎粒径在60目以 上。
【专利摘要】本发明公开了一种饲料添加剂及其制备方法，属于饲料添加剂领域。所述饲料添加剂由以下重量份数的原料组成：天门冬粉5-8份；蒲黄粉3-6份；灵芝子实体粉1-3份；枯草芽孢杆菌菌剂2-6份；当归粉2-6份；黑曲霉培养物2-4份；甘草粉1-2份。本发明产品安全、无毒，具有抗菌、抗病毒的功效；通过将中药材、芽孢杆菌制剂的科学复配，实现了有机组合，可以有效提高动物的免疫力和改善肠道健康，减少动物疾病的发生，保证健康，促进动物生长发育，提高饲料利用率，同时可以防止饲料的霉变和营养物质的氧化损失。使用本发明产品的猪，使免疫力有较大提高，抗生素用量减少了60％以上，猪肉制品的口味和肉质有明显提升，感官实验评价表明评价分提高67％以上。CGMCC No792720130715
【IPC分类】A23K1/14, A23K1/00, A23K1/16
【公开号】CN104905016
【申请号】CN201410092639
【发明人】李政, 王玉, 张健飞, 巩继贤, 汪丽粉
【申请人】天津工业大学
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2014年3月10日
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及一种饲料添加剂，属于饲料添加剂领域。
【背景技术】：
[0002] 目前，中草药饲料添加剂作为新兴研究的热点，具有天然、营养、副作用小等优点。 大力开发中草药饲料添加剂对解决抗生素残留问题，提高生产率，发展绿色畜牧业，满足人 们的食品安全需求，缩小我国畜牧业与发达国家差距，增强我国畜产品在国际市场的竞争 力，具有重要的经济意义和社会效益。研究表明，许多中草药本身就具有良好的体外抑菌能 力，与西药不同的是，中草药饲料抗菌保健剂无残留、无耐药性，其作用机理不仅仅在于对 病原微生物的抑杀作用，更重要的是对机体抗病修复能力的调整，即提高机体的抗应激能 力、提高机体免疫功能和抗病防御机能，从而达到提高动物生产性能和饲料利用效率的目 的。
[0003]中草药是具有特定功效的一些植物，这些植物各有功效，例如部分植物的效用如 下：天门冬：其药用部位主要是块根，具有养阴清热、润燥生津的功效，现代药理学研究表 明其对肺结核、支气管炎、白喉、百日咳、口干咽燥等症状具有良好的疗效，同时还具有抗 菌免疫和抗氧化功能；蒲黄：为香蒲科植物水烛香蒲、东方香蒲的干燥花粉，中医理论认 为该药性味甘平，归肝、心、脾经，具镇痛化瘀的功效；目前，已经将这些具有特定功效的中 药材添加在动物饲料添加剂中来使用，比如，公开号为CN102793058A的发明专利《中草 药饲料添加剂》，公开了一种由红心果、金龙胆草、板蓝根、金银花、首乌藤合成的中草药添 加剂，主要是利用红心果中VC含量较高，能增强动物的免疫力，因此，只能起到起到一定 的预防疾病、保健的作用，只有长时间连续不断的喂食，才能起到一定起效；而公开号为 CN102763765A的发明专利《一种中草药饲料添加剂》，公开了一种由山楂、神曲、党参、刺五 加、板蓝根、肉桂、艾叶等十多种中草药制得的饲料添加剂，能够促进动物生长、提高动物成 活率；但其组成复杂，涉及的中药材种类繁多，成本较高，取得的效果相对较弱，长期使用易 造成饲料浪费，不适合大规模养殖场使用。
[0004] 因此，如何有效利用现有中草药原料制备可以有效提_动物免疫力和词料利用率 的饲料添加剂，实现饲料的高价值利用，是一个有利于饲料产业健康发展的项目。
【发明内容】
：
[0005] 本发明的目的是开发一种饲料添加剂。
[0006] 本发明的技术方案如下：所述饲料添加剂由以下重量份数的原料组成：天门冬粉 5-8份；蒲黄粉3-6份；灵芝子实体粉1-3份；枯草芽孢杆菌菌剂2-6份；当归粉2-6份；黑 曲霉培养物2-4份；甘草粉1-2份。
[0007] 所述天门冬粉制备方法如下：将天门冬经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0008] 所述蒲黄粉制备方法如下：将蒲黄经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0009]所述甘草粉制备方法如下：将甘草经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0010] 所述当归粉制备方法如下：将当归经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0011] 灵芝子实体粉制备方法，将其经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0012] 所述黑曲霉培养物的制备方法如下：
[0013] 斜面菌种活化培养转接到斜面培养基上逐级培养获得种子后，将种子加入装 有灭菌培养基的发酵池或托盘中混合均匀后培养，曲料培养温度控制在18-26°C，湿度 80-85%，每隔6-10小时翻料一次，培养时间5-8天；固体曲料的培养采用常用曲料培养技 术；待培养料长满菌丝即可结束培养，培养基预先经高温蒸煮灭菌处理，灭菌条件控制温度 121°C，时间1小时。
[0014] 干燥粉碎：发酵结束培养料在流化床或其他干燥设备上进行干燥，干燥温度控制 在60°C，干燥到水分含量在10 %以下，然后将固体培养料进行粉碎，物料粉碎粒径在60目 以上。
[0015] 培养基组成：麸皮70份，豆饼粉6份，天门冬粉5-8份，山茱萸粉2-5份，玉米淀粉 5-8份；添加与固体物质等量的自来水；初始pH自然。
[0016] 本发明提供的黑曲霉（Aspergillusniger)Li-2013-03是由天津工业大学实验室 保藏的一株产纤维素酶的黑曲霉（Aspergillusniger)Li-2010经亚硝基胍多轮诱变筛选， 然后对优良菌株经发酵性能测试，筛选得到产高活力纤维素酶的黑曲霉菌株（Aspergillus niger)Li-2013_03。该菌株已于2013年7月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员 会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编 100101)，保藏号为CGMCCN0. 7927。
[0017] 所述枯草芽孢杆菌为市售商业菌剂，保藏编号为CICC10153。
[0018] 本发明饲料添加剂的制备方法如下：
[0019]按照原料组成将天门冬粉、蒲黄粉、灵芝子实体粉、枯燥芽孢杆菌菌剂、当归粉、黑 曲霉培养物、甘草粉混合均匀制粒即可。
[0020] 本发明产品在生猪日粮中的添加量为500-1000克/吨。
[0021] 有益效果：
[0022] 本发明产品安全、无毒，具有抗菌、抗病毒的功效；通过将中药材、芽孢杆菌制剂的 科学复配，实现了有机组合，可以有效提高动物的免疫力和改善肠道健康，减少动物疾病的 发生，促进动物生长发育，提高饲料利用率，同时可以防止饲料的霉变和营养物质的氧化损 失。使用本发明产品的猪，使免疫力有较大提高，抗生素用量减少了 60%以上，猪肉制品的 口味和肉质有明显提升，感官实验评价表明评价分提高67 %以上。
【具体实施方式】
[0023] 下面通过具体的实施方案叙述本发明产品组成及工艺。除非特别说明，本发明中 所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而 非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员 而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中分离提取条件进行的各种 改变或改动也属于本发明的保护范围。
[0024] 实施例1
[0025]枯草芽孢杆菌菌剂的制备：
[0026] 将枯草芽孢杆菌斜面菌种接入摇瓶中，逐级培养获得种子液体，将种子液体以 10 %接种量接入总容积为1. 5吨二级种子罐，发酵培养基装量1吨，培养条件培养温度 24°C，搅拌速度100转/分，通风量（V/V) 1 : 0. 5,罐压0. 05MPa，培养时间30小时，培养结 束菌体浓度在5. 0X108个/ml。离心分离：采用离心机分离发酵液获得菌体。在获得的菌 体里添加保护剂后，采用真空冷冻干燥工艺处理获得干粉菌剂；保护剂组成为8%脱脂奶、 3%乳糖、2%甘油、1. 5%海藻糖，其余为水。
[0027] 发酵培养基组成：葡萄糖6%，酵母提取物1%，蛋白胨0.2%，CaC03l%，其余为纯 净水，pH6. 8。
[0028] 所述枯草芽孢杆菌冻干菌粉中活菌数量为（2-8)X108个/g。
[0029]所述枯草芽抱杆菌（Bacillussubtilis)，菌株编号为CICC10153。
[0030]本发明提供的产高活力纤维素酶的菌株具体为黑曲霉（Aspergillusniger)Li-2013-03。该菌株已于2013年7月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微 生物中心（简称CGMCC，地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编100101)，保 减号为CGMCCN0. 7927。
[0031]本发明黑曲霉菌株（Aspergillusniger)Li-2013-03(CGMCCNo. 7927)具有以下 微生物学特征：
[0032] 1、形态学特征：
[0033] 黑曲霉菌株CGMCCNo. 7927,生物学形态为包括分生孢子、胞梗、顶囊、产胞结构 等几部分。分生孢子头球形至辐射形，直径150-450ym，分生孢子梗发生于基质。胞梗茎 1000-3000 (长度）X12-20 (直径）ym，黄色或黄褐色，壁平滑；顶囊球形或近似球形，直径 45-75ym，表面全面可育；产胞结构双层，梗基10-20 (长度）X4. 5-7. 0 (直径）ym，瓶梗 6-10 (长度）X2. 5-3. 5 (直径）ym，分生孢子球形或近球形，直径3-4. 5ym，褐色，壁粗糙。
[0034] 2、培养学特征：
[0035] 菌株在麦芽汁琼脂培养基上生长迅速，28°C发酵4天孢子可铺满斜面；质地丝绒 状或稍带絮状；分生孢子结构大量，褐黑色，无渗出液；菌落反面略带黄色。
[0036]3、生理生化特征：
[0037] 黑曲霉菌株CGMCCNo. 7927可在玉米秸杆、稻草、木屑、马铃薯、玉米粉、可溶性淀 粉、糖蜜等碳源上生长，最适pH范围5-6,最适生长温度范围28-33°C，最适产酶温度范围 28-30。。。
[0038] 本发明黑曲霉菌株CGMCCNo. 7927的筛选技术路线为：出发菌株一斜面培养一孢 子悬液的制备一诱变处理一平板分离一初筛一复筛一遗传稳定性测定一扩大实验（发酵 性能测定）。
[0039] 按诱变筛选方案，对突变株逐级筛选淘汰，最后对优良菌株经发酵性能测试筛选， 得到一株高产酶性能菌株黑曲霉菌（Aspergillusniger)Li-2013-03,发酵96小时后纤 维素酶的外切葡聚糖酶、内切葡聚糖酶、葡萄糖苷酶和滤纸酶活力分别达到 620U/mL、1289U/mL、456U/mL和 732U/mL。
[0040] 28°C发酵4天直径75mm，发酵液纤维素酶的的外切葡聚糖酶、内切葡聚糖 酶、0 -葡萄糖苷酶和滤纸酶活力分别达到620U/mL、1289U/mL、456U/mL和732U/mL，分别比 出发菌株提高了 9. 21倍、7. 43倍、8. 15倍和10. 31倍。
[0041] 产高活力纤维素酶菌株的筛选方法，包括以下步骤：
[0042] 1)斜面培养：将原始黑曲霉菌株（Aspergillusniger)Li-2010划线接种斜面 培养基，30°C培养2~3d，直至菌丝体成熟、产大量黑色孢子。所述斜面培养基组成如下： 120Brix麦芽汁 1000mL，pH值自然，121°C灭菌 20min;
[0043] 2)孢子悬液制备（以下步骤均在无菌条件下操作）：向试管斜面加入15mL无菌 水，把孢子刮下，用滤纸过滤，将滤过液倒入已灭菌、并加有5-10粒无菌玻 璃珠的150mL三 角瓶中，将三角瓶放入摇床振荡l〇_15min，使孢子分散。
[0044] 3)亚硝基胍（NTG)诱变
[0045] ①用无菌水将孢子悬浮液调节为稀释成106_10 7个/mL。
[0046] ②取10mL菌悬液转移至100mL三角瓶中，加入10mg的NTG，配制成终浓度为10mg/ mL的NTG溶液，并加入4-5滴丙酮，以利于NTG溶解。
[0047] ③在30°C下200rpm振荡反应30min，5000rpm离心lOmin收集菌体，用无菌生理盐 水洗涤数次，中止反应。
[0048] ④适当稀释将孢子浓度调节为103个/mL，取最后稀释度的菌液0. 2mL，稀释涂布 于纤维素-刚果红平板筛选培养基上。在30°C培养2~3天后挑取透明圈/菌落直径较 大的菌株200支。（所述纤维素-刚果红平板筛选培养基组成如下：纤维素粉10g、刚果红 〇. 2g、硫酸铵5g、硫酸镁0. 25g、磷酸二氢钾lg、氯化钠0.lg、明胶2g、琼脂20g、自来水定容 lOOOmL，pH值 5-6,121°C灭菌 20min)。
[0049] ⑤复筛：将获得的200株菌分别用无菌牙签接种于斜面培养基，3(/e培养至孢子铺 满斜面。分别将孢子以无菌水洗下接种于装有50mL复筛培养基的250mL三角瓶中进行发 酵，接种量10% (v/v)，30°C、lOOr/min培养96h，分别测定各菌株的纤维素酶活性。（所述复 筛培养基组成如下：纤维素粉50g、硫酸铵5g、硫酸镁0. 25g、磷酸二氢钾lg、氯化钠0.lg、 自来水定容1000mL，pH值5-6,121°C灭菌20min)。选取纤维素酶酶活力最高的菌株进行放 大实验。
[0050] 4)遗传稳定性试验
[0051] 将Li-2013-03菌株在斜面上连续十次传代，并用摇瓶复筛的方法检测每次传代 后的发酵情况。实验发现，在斜面上连续十次传代，该菌种性状没有明显变化，各项性能指 标都正常，由此说明该菌种的遗传稳定性较强。
[0052] 5)放大试验
[0053] ①种子培养：将纤维素酶酶活力最高的菌株（Aspergillusniger)Li-2013-03接 入500mL三角瓶中，种子培养基装量100毫升，30°C、150rpm摇床培养72-96h。
[0054] ②种子罐培养：将种子液以10% (v/v)接种量接入装有7. 5L发酵液的10L发 酵罐中，控制pH值恒定为6. 0±0. 2,培养温度30±0. 1 °C，搅拌速度300rpm，通风量（v/ v)l: 0.8-1. 2,培养时间96h，溶解氧20-30%。所述发酵培养基组成为：纤维素粉100g、硫 酸铵5g、硫酸镁0. 25g、磷酸二氢钾lg、氯化钠0.lg、自来水定容lOOOmL，pH值5-6,121°C 灭菌20min。
[0055] 发酵结束后，取发酵上清液（粗酶液）进行酶活力检测，经测定，菌株 (Aspergillusniger)Li-2013-03的外切葡聚糖酶、内切葡聚糖酶、葡萄糖 苷酶和滤纸酶活力分别达到620U/mL、1289U/mL、456U/mL和732U/mL，分别比出发菌株 (Aspergillusniger)Li-2010 提高了 9. 21 倍、7. 43 倍、8. 15 倍和 10. 31 倍。
[0056] 实施例2
[0057] 所述饲料添加剂由以下重量份数的原料优选组成：天门冬粉6份；蒲黄粉5份；灵 芝子实体粉2份；枯草芽孢杆菌菌剂4份；当归粉4份；黑曲霉培养物3份；甘草粉2份；
[0058] 所述天门冬粉制备方法如下：将天门冬经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0059] 所述蒲黄粉制备方法如下：将蒲黄经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0060] 所述甘草粉制备方法如下：将甘草经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0061] 所述当归粉制备方法如下：将当归经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0062] 灵芝子实体粉制备方法，将其经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；
[0063] 所述黑曲霉培养物的制备方法如下：
[0064] 斜面菌种活化培养转接到斜面培养基上逐级培养获得种子后，将种子加入装 有灭菌培养基的发酵池或托盘中混合均匀后培养，曲料培养温度控制在24-26°C，湿度 83-85%，每隔8-9小时翻料一次，培养时间6-7天；固体曲料的培养采用常用曲料培养技 术；待培养料长满菌丝即可结束培养，培养基预先经高温蒸煮灭菌处理，灭菌条件控制温度 121°C，时间1小时。
[0065] 干燥粉碎：发酵结束培养料在流化床或其他干燥设备上进行干燥，干燥温度控制 在60°C，干燥到水分含量在10 %以下，然后将固体培养料进行粉碎，物料粉碎粒径在60目 以上。
[0066] 培养基组成：麸皮70份，豆饼粉6份，天门冬粉6份，山茱萸粉4份，玉米淀粉6份； 添加与固体物质等量的自来水；初始pH自然。
[0067] 本发明饲料添加剂的制备方法如下：
[0068]按照原料组成将天门冬粉、蒲黄粉、灵芝子实体粉、枯燥芽孢杆菌菌剂、当归粉、黑 曲霉培养物、甘草粉混合均匀制粒即可。
[0069] 本产品在生猪日粮中的添加量为800克/吨。
[0070] 实施例3
[0071] 所述饲料添加剂由以下重量份数的原料优选组成：天门冬粉8份；蒲黄粉3份；灵 芝子实体粉2份；枯草芽孢杆菌菌剂6份；当归粉2份；黑曲霉培养物4份；甘草粉1份。
[0072]按照原料组成将天门冬粉、蒲黄粉、灵芝子实体粉、枯燥芽孢杆菌菌剂、当归粉、黑 曲霉培养物、甘草粉混合均匀制粒即可。
[0073] 本产品在生猪日粮中的添加量为600克/吨。
[0074]使用效果实验
[0075] 应用本发明实施例2饲料添加剂在断奶仔猪中的使用效果试验：
[0076]试验动物选择养殖场平均体重为（11. 5 ±0. 45)kg的健康乳猪120头，经统计分析 体重差异不显著。采用单因子随机化设计，将120头健康乳猪，按公母各半，分成2组（对 照组和试验组），每组6个重复，每个重复10头猪。试验组添加实施例2制得的本发明产品 800克/吨，对照组添加同类其他产品。连续饲喂25天，与对照组相比，使用发明饲料添加 剂可获得如下效果：
[0077]
[0078] 试验结果表明:乳猪在日采食量相同的情况下/食用添加本发明产品的饲料，可以 有效提高乳猪的日增重，降低料肉比，同时大大降低了乳猪的腹泻率，也证明了本发明饲料 添加剂可以有效提尚词料的在动物体内的利用率，同时提尚乳猪的免疫力；对实验猪的毛 色进行感官评分，实验组评分达到8.9分，对照组为6.7分。
【主权项】
1. 一种饲料添加剂，由以下重量份数的原料组成：天门冬粉5-8份；蒲黄粉3-6份；灵 芝子实体粉1-3份；枯草芽孢杆菌菌剂2-6份；当归粉2-6份；黑曲霉培养物2-4份；甘草 粉1-2份；所述黑曲霉保藏号为CGMCCNO. 7927。2. 根据权利要求1所述的饲料添加剂，其特征在于，黑曲霉培养物的制备方法如下： 斜面菌种活化培养转接到斜面培养基上逐级培养获得种子后,将种子加入装有灭菌培 养基的发酵池或托盘中混合均匀后培养，曲料培养温度控制在18-26°C，湿度80-85%，每 隔6-10小时翻料一次，培养时间5-8天；固体曲料的培养采用常用曲料培养技术；待培养 料长满菌丝即可结束培养，培养基预先经高温蒸煮灭菌处理，灭菌条件控制温度121°C，时 间1小时； 干燥粉碎：发酵结束培养料在流化床或其他干燥设备上进行干燥，干燥温度控制在 60°C，干燥到水分含量在10 %以下，然后将固体培养料进行粉碎，物料粉碎粒径在60目以 上。3. 根据权利要求1所述的饲料添加剂，其特征在于，重量份数的原料组成为：天门冬粉 6份；蒲黄粉5份；灵芝子实体粉2份；枯草芽孢杆菌菌剂4份；当归粉4份；黑曲霉培养物 3份；甘草粉2份。4. 根据权利要求1所述的饲料添加剂，其特征在于，重量份数的原料组成为：天门冬粉 8份；蒲黄粉3份；灵芝子实体粉2份；枯草芽孢杆菌菌剂6份；当归粉2份；黑曲霉培养物 4份；甘草粉1份。5. -种制备如权利要求1-4所述的饲料添加剂的方法，包括如下步骤：按照原料组成 将天门冬粉、蒲黄粉、灵芝子实体粉、枯燥芽孢杆菌菌剂、当归粉、黑曲霉培养物、甘草粉混 合均匀制粒。6. 根据权利要求5所述的一种饲料添加剂的制备方法，其特征在于，分别将天门冬、蒲 黄、灵芝子、当归、甘草经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下。7. 根据权利要求5所述的一种饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述黑曲霉培养 物的制备方法如下： 斜面菌种活化培养转接到斜面培养基上逐级培养获得种子后,将种子加入装有灭菌培 养基的发酵池或托盘中混合均匀后培养，曲料培养温度控制在18-26°C，湿度80-85%，每 隔6-10小时翻料一次，培养时间5-8天；固体曲料的培养采用常用曲料培养技术；待培养 料长满菌丝即可结束培养，培养基预先经高温蒸煮灭菌处理，灭菌条件控制温度121°C，时 间1小时； 干燥粉碎：发酵结束培养料在流化床或其他干燥设备上进行干燥，干燥温度控制在 60°C，干燥到水分含量在10 %以下，然后将固体培养料进行粉碎，物料粉碎粒径在60目以 上。
【专利摘要】本发明公开了一种饲料添加剂及其制备方法，属于饲料添加剂领域。所述饲料添加剂由以下重量份数的原料组成：天门冬粉5-8份；蒲黄粉3-6份；灵芝子实体粉1-3份；枯草芽孢杆菌菌剂2-6份；当归粉2-6份；黑曲霉培养物2-4份；甘草粉1-2份。本发明产品安全、无毒，具有抗菌、抗病毒的功效；通过将中药材、芽孢杆菌制剂的科学复配，实现了有机组合，可以有效提高动物的免疫力和改善肠道健康，减少动物疾病的发生，保证健康，促进动物生长发育，提高饲料利用率，同时可以防止饲料的霉变和营养物质的氧化损失。使用本发明产品的猪，使免疫力有较大提高，抗生素用量减少了60％以上，猪肉制品的口味和肉质有明显提升，感官实验评价表明评价分提高67％以上。CGMCC No792720130715
【IPC分类】A23K1/14, A23K1/00, A23K1/16
【公开号】CN104905016
【申请号】CN201410092639
【发明人】李政, 王玉, 张健飞, 巩继贤, 汪丽粉
【申请人】天津工业大学
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2014年3月10日
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