一种抗病增产的罗非鱼专用饲料添加剂的制作方法
一种抗病增产的罗非鱼专用饲料添加剂的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明属于水产鱼类饲料添加剂技术领域，具体而言，涉及一种抗病增产的罗非鱼专用饲料添加剂。
【背景技术】
[0002]罗非鱼是联合国粮农组织向全世界推广养殖的优良品种之一。2010年，我国罗非鱼的养殖产量已经占世界总产量的39.2%，成为我国淡水水产品出口的主导产品。然而，伴随着高密度集约化水产养殖的发展，各种鱼类病害频繁发生，造成了巨大的经济损失。防治鱼类病害主要有使用抗生素等药物进行治疗和预防免疫。虽然抗生素能有效控制多种鱼病的发生，但也导致了产生耐药菌株，存在药物残留和破坏水生动物微生态平衡等问题，由其产生的环境污染和食品安全问题已引起人们的广泛关注。因此，越来越多的人将目光转向预防免疫，即运用疫苗预防特定疾病和使用免疫增强剂提高鱼体免疫力，预防各种疾病的发生。目前可应用的疫苗种类有限，成本较高，且由于疫苗反应的特异性，一种疫苗只能预防相应的某种或某类疾病，实际作用有限。而免疫增强剂大多为天然来源的动植物、微生物提取物，成本较低，生物安全性较高，它通过激活和增强巨噬细胞、淋巴细胞功能，诱导抗体和补体产生，提高了鱼的整体免疫能力，减少了鱼病的发生。
[0003]乌饭树为常绿灌木或小乔木，高2-6(9)m。多分枝，幼枝被短柔毛，老枝紫褐色。叶柄长2-8mm，通常无毛或被微毛。叶片薄革质，椭圆形、菱状椭圆形、披针状椭圆形，长
4-9cm，宽2-4cm，先端锐尖，渐尖，基部楔形，宽楔形，边缘有细锯齿，表面平坦有光泽，侧脉
5-7对，斜伸至边缘以内网结。总状花序顶生或腋生，长4-6cm，有多数花，花序轴密被短柔毛；苞片叶状，披针形，边缘有锯齿，宿存或脱落，小苞片2，线形或卵形，密被微毛或无毛；萼筒密被短柔毛或茸毛，萼齿短小，三角形，长Imm左右；花冠白色，筒状，有时略呈坛状，长5-7mm，外面被短柔毛，内面有疏柔毛，口部裂片短小，三角形，外折；雄蕊内藏；花丝细长；花盘密被短柔毛，浆果直径5-8mm，熟时紫褐色。花期6_7月，果期8_10月。乌饭树生于丘陵地带或海拔400-1400m的山地，常见于山坡林内或灌木丛中，分布于华东、中南至西南以及台湾等地。
[0004]南烛子为杜醒花科植物乌饭树Vaccinium bracteatum Thunb的果实，8-10月间果实成熟后采摘，晒干。目前，尚没有南烛子作为原料制备鱼类饲料添加剂应用的文献报道。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于通过对天然产物进行深入研宄，从而提供一种抗病增产的罗非鱼专用饲料添加剂。
[0006]为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验研宄并不懈探索，最终获得了如下技术方案:
一种抗病增产的罗非鱼专用饲料添加剂，其为南烛子水提取物。需要说明的是，术语“南烛子”为杜醒花科植物乌饭树Vaccinium bracteatum Thunb的果实，可以为干品，也可以为鲜品。
[0007]优选地，如上所述的罗非鱼专用饲料添加剂，其中的南烛子水提取物按如下方法制备而得:将南烛子原料加水回流提取1-3次，所得提取液以石油醚萃取，弃掉有机相，将水相浓缩成稠膏，干燥，即得。进一步优选地，上述制备方法中每次的回流提取时间为4-6h ;干燥的温度小于70°C。
[0008]溶菌酶是鱼类血清中极为重要的非特异性免疫指标之一，其活性的高低直接反映出溶菌作用的强弱，溶菌酶活力的增大，可增加溶菌酶溶解细菌的能力。本发明人将南烛子水提取物作为饲料添加剂加入基础饲料中饲喂罗非鱼，通过分析罗非鱼的非特异性免疫指标，研宄了该植物提取物对提高罗非鱼免疫能力的效果，结果发现南烛子的水提取物可提高罗非鱼血清中溶菌酶活性和血清杀菌活性，具有一定的非特异性免疫效果。进一步地，发明人对南烛子水提取物的制备工艺进行了改进，即通过石油醚萃取步骤除去了石油醚提取部位，从而大幅度提高了该提取物的非特异性免疫效果，这可能是由于石油醚部位溶菌酶活性具有抑制作用。因此，本发明的第二个目的在于提供一种工业新用途，即上述的南烛子水提取物在制备提高罗非鱼血清溶菌酶活性的药物中的应用。
[0009]与现有技术相比，本发明的饲料添加剂能增强罗非鱼的免疫水平，提高其存活率和产量，同时该饲料添加剂的原料来源稳定，价廉高效，制备方法简单，且天然无毒无残留，可以减少抗生素和化学药物的使用。
[0010]
【附图说明】
[0011]图1为各组随饲喂提取物时间变化的血清杀菌活性曲线图(试验开始后第1d起，C组与A组、B组或对照组比较具有统计学差异，p〈0.05)。
[0012]图2为各组随饲喂提取物时间变化的血清中溶菌酶活性曲线图(试验开始后第1d起，C组与B组或对照组比较具有统计学差异，p<0.05 ;试验开始后第15d起，C组与A组比较具有统计学差异，P〈0.05)。
[0013]
【具体实施方式】
[0014]以下是本发明涉及的具体实施例和效果试验例，对本发明的技术方案和技术效果做进一步作描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。需要说明的是，本试验中，发明人将实施例I制备的罗非鱼专用饲料添加剂作为饲料添加剂加入饲料中饲喂罗非鱼，通过分析罗非鱼的非特异性免疫指标，研宄了本发明对提高罗非鱼免疫能力的效果，旨在为罗非鱼的病害防治和绿色添加剂的开发开辟一条新途径。
[0015]实施例1南烛子提取物的制备
称取南烛子干品1.2kg，研磨至末，置于带有圆底烧瓶的提取装置中，加15L纯水回流提取5h，过滤，得到水提液，重复2次，合并水提液，减压浓缩至相对密度为1.10-1.20时，放凉，加等体积的石油醚萃取3次，弃掉石油醚萃取液，将水相部分减压浓缩成稠膏，70°C以下烘干，粉碎成细粉，过100目筛，得到南烛子提取物。
[0016]实施例2不同南烛子提取物对罗非鱼非特异免疫力的影响
试验用罗非鱼Oreochromis niloticus，体重为(40.3±7.9) g。将罗非鱼饲养于玻璃水族箱(60cmX40cmX52cm)中，每箱随机放养12尾鱼。试验用水为经过曝气的自来水，以充气泵增氧，每天投喂适量。驯养18d后开始正式试验，试验期间水温为(27±1)°C。每天上午用虹吸法排污，加注新水。驯养期间投喂基础饲料。
[0017]试验用基础饲料的成分为:鱼粉20.0% (质量分数，下同)，豆柏20.0%，菜柏12.0%,次粉40.3%，麦麸6.0%，多种维生素0.2%，复合矿物质1.5%，配制成颗粒饲料。饲料中的营养成分为:粗蛋白32 % (质量分数，下同)，粗脂3.5 %，粗纤维4.1 %，粗灰分6.0%，可消化能为 12.142 MJ/kgo
[0018]提取物A的制备:称取南烛子干品1.2kg，研磨至末，置于带有圆底烧瓶的提取装置中，加15L纯水回流提取5h，过滤，得到水提液，重复2次，合并水提液，减压浓缩成稠膏，70°C以下烘干，粉碎成细粉，过100目筛，得到提取物A。
[0019]提取物B、C的制备:称取南烛子干品1.2kg，研磨至末，置于带有圆底烧瓶的提取装置中，加15L纯水回流提取5h，过滤，得到水提液，重复2次，合并水提液，减压浓缩至相对密度为1.10-1.20时，放凉，加等体积的石油醚萃取3次，合并3次石油醚萃取液，旋转蒸发浓缩并回收溶剂，然后70°C以下烘干，粉碎成细粉，过100目筛，得到提取物B。将水相部分减压浓缩成稠膏，70°C以下烘干，粉碎成细粉，过100目筛，得到提取物C。
[0020]将试验用鱼分为四组，分别投喂4种饲料。每组设4个重复，每个重复组放养12尾鱼。在基础饲料中分别添加质量分数为0.5%的提取物A (A组)、提取物B(B组)、提取物C (C组)，混合后用绞肉机制成颗粒饲料，60°C下烘干，冷藏备用。以不添加任何提取物作为对照组。试验期间，每日投喂，日投喂量均为体重的2%，分别于9:00,16:00各投喂一半。分别于试验后第5、10、15、20、25天各取样I次。每次每组随机取罗非鱼8尾(每箱2尾)，用注射器于尾静脉处采血。将每尾鱼的血液分为2份，I份加肝素抗凝，供测定红细胞比容；I份置于室温下，待凝血后分离血清，供测定血清杀菌、溶菌酶活性(测定方法参考文献:温周瑞，等:一种中草药复方制剂对罗非鱼非特异免疫力的影响，大连水产学院学报，2009年04月第24卷第2期。)各组血清杀菌、溶菌酶活性的试验统计结果见图1和图2。
【主权项】
1.一种抗病增产的罗非鱼专用饲料添加剂，其特征在于，其为南烛子水提取物。2.根据权利要求1所述的罗非鱼专用饲料添加剂，其特征在于，所述的南烛子水提取物按如下方法制备而得:将南烛子原料加水回流提取1-3次，所得提取液以石油醚萃取，弃掉有机相，将水相浓缩成稠膏，干燥，即得。3.根据权利要求2所述的罗非鱼专用饲料添加剂，其特征在于，每次的回流提取时间为 4-6ho4.根据权利要求2所述的罗非鱼专用饲料添加剂，其特征在于，干燥的温度小于70°C。5.南烛子水提取物在制备提高罗非鱼血清溶菌酶活性的药物中的应用。
【专利摘要】本发明提供了一种抗病增产的罗非鱼专用饲料添加剂，该饲料添加剂为南烛子水提取物，能增强罗非鱼的免疫水平，提高其存活率和产量，同时该饲料添加剂的原料来源稳定，价廉高效，制备方法简单，且天然无毒无残留，可以减少抗生素和化学药物的使用。
【IPC分类】A23K1/14, A23K1/18, A23K1/16
【公开号】CN104905052
【申请号】CN201510291197
【发明人】李静
【申请人】李静
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年6月1日
【技术领域】
[0001]本发明属于水产鱼类饲料添加剂技术领域，具体而言，涉及一种抗病增产的罗非鱼专用饲料添加剂。
【背景技术】
[0002]罗非鱼是联合国粮农组织向全世界推广养殖的优良品种之一。2010年，我国罗非鱼的养殖产量已经占世界总产量的39.2%，成为我国淡水水产品出口的主导产品。然而，伴随着高密度集约化水产养殖的发展，各种鱼类病害频繁发生，造成了巨大的经济损失。防治鱼类病害主要有使用抗生素等药物进行治疗和预防免疫。虽然抗生素能有效控制多种鱼病的发生，但也导致了产生耐药菌株，存在药物残留和破坏水生动物微生态平衡等问题，由其产生的环境污染和食品安全问题已引起人们的广泛关注。因此，越来越多的人将目光转向预防免疫，即运用疫苗预防特定疾病和使用免疫增强剂提高鱼体免疫力，预防各种疾病的发生。目前可应用的疫苗种类有限，成本较高，且由于疫苗反应的特异性，一种疫苗只能预防相应的某种或某类疾病，实际作用有限。而免疫增强剂大多为天然来源的动植物、微生物提取物，成本较低，生物安全性较高，它通过激活和增强巨噬细胞、淋巴细胞功能，诱导抗体和补体产生，提高了鱼的整体免疫能力，减少了鱼病的发生。
[0003]乌饭树为常绿灌木或小乔木，高2-6(9)m。多分枝，幼枝被短柔毛，老枝紫褐色。叶柄长2-8mm，通常无毛或被微毛。叶片薄革质，椭圆形、菱状椭圆形、披针状椭圆形，长
4-9cm，宽2-4cm，先端锐尖，渐尖，基部楔形，宽楔形，边缘有细锯齿，表面平坦有光泽，侧脉
5-7对，斜伸至边缘以内网结。总状花序顶生或腋生，长4-6cm，有多数花，花序轴密被短柔毛；苞片叶状，披针形，边缘有锯齿，宿存或脱落，小苞片2，线形或卵形，密被微毛或无毛；萼筒密被短柔毛或茸毛，萼齿短小，三角形，长Imm左右；花冠白色，筒状，有时略呈坛状，长5-7mm，外面被短柔毛，内面有疏柔毛，口部裂片短小，三角形，外折；雄蕊内藏；花丝细长；花盘密被短柔毛，浆果直径5-8mm，熟时紫褐色。花期6_7月，果期8_10月。乌饭树生于丘陵地带或海拔400-1400m的山地，常见于山坡林内或灌木丛中，分布于华东、中南至西南以及台湾等地。
[0004]南烛子为杜醒花科植物乌饭树Vaccinium bracteatum Thunb的果实，8-10月间果实成熟后采摘，晒干。目前，尚没有南烛子作为原料制备鱼类饲料添加剂应用的文献报道。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于通过对天然产物进行深入研宄，从而提供一种抗病增产的罗非鱼专用饲料添加剂。
[0006]为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验研宄并不懈探索，最终获得了如下技术方案:
一种抗病增产的罗非鱼专用饲料添加剂，其为南烛子水提取物。需要说明的是，术语“南烛子”为杜醒花科植物乌饭树Vaccinium bracteatum Thunb的果实，可以为干品，也可以为鲜品。
[0007]优选地，如上所述的罗非鱼专用饲料添加剂，其中的南烛子水提取物按如下方法制备而得:将南烛子原料加水回流提取1-3次，所得提取液以石油醚萃取，弃掉有机相，将水相浓缩成稠膏，干燥，即得。进一步优选地，上述制备方法中每次的回流提取时间为4-6h ;干燥的温度小于70°C。
[0008]溶菌酶是鱼类血清中极为重要的非特异性免疫指标之一，其活性的高低直接反映出溶菌作用的强弱，溶菌酶活力的增大，可增加溶菌酶溶解细菌的能力。本发明人将南烛子水提取物作为饲料添加剂加入基础饲料中饲喂罗非鱼，通过分析罗非鱼的非特异性免疫指标，研宄了该植物提取物对提高罗非鱼免疫能力的效果，结果发现南烛子的水提取物可提高罗非鱼血清中溶菌酶活性和血清杀菌活性，具有一定的非特异性免疫效果。进一步地，发明人对南烛子水提取物的制备工艺进行了改进，即通过石油醚萃取步骤除去了石油醚提取部位，从而大幅度提高了该提取物的非特异性免疫效果，这可能是由于石油醚部位溶菌酶活性具有抑制作用。因此，本发明的第二个目的在于提供一种工业新用途，即上述的南烛子水提取物在制备提高罗非鱼血清溶菌酶活性的药物中的应用。
[0009]与现有技术相比，本发明的饲料添加剂能增强罗非鱼的免疫水平，提高其存活率和产量，同时该饲料添加剂的原料来源稳定，价廉高效，制备方法简单，且天然无毒无残留，可以减少抗生素和化学药物的使用。
[0010]
【附图说明】
[0011]图1为各组随饲喂提取物时间变化的血清杀菌活性曲线图(试验开始后第1d起，C组与A组、B组或对照组比较具有统计学差异，p〈0.05)。
[0012]图2为各组随饲喂提取物时间变化的血清中溶菌酶活性曲线图(试验开始后第1d起，C组与B组或对照组比较具有统计学差异，p<0.05 ;试验开始后第15d起，C组与A组比较具有统计学差异，P〈0.05)。
[0013]
【具体实施方式】
[0014]以下是本发明涉及的具体实施例和效果试验例，对本发明的技术方案和技术效果做进一步作描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。需要说明的是，本试验中，发明人将实施例I制备的罗非鱼专用饲料添加剂作为饲料添加剂加入饲料中饲喂罗非鱼，通过分析罗非鱼的非特异性免疫指标，研宄了本发明对提高罗非鱼免疫能力的效果，旨在为罗非鱼的病害防治和绿色添加剂的开发开辟一条新途径。
[0015]实施例1南烛子提取物的制备
称取南烛子干品1.2kg，研磨至末，置于带有圆底烧瓶的提取装置中，加15L纯水回流提取5h，过滤，得到水提液，重复2次，合并水提液，减压浓缩至相对密度为1.10-1.20时，放凉，加等体积的石油醚萃取3次，弃掉石油醚萃取液，将水相部分减压浓缩成稠膏，70°C以下烘干，粉碎成细粉，过100目筛，得到南烛子提取物。
[0016]实施例2不同南烛子提取物对罗非鱼非特异免疫力的影响
试验用罗非鱼Oreochromis niloticus，体重为(40.3±7.9) g。将罗非鱼饲养于玻璃水族箱(60cmX40cmX52cm)中，每箱随机放养12尾鱼。试验用水为经过曝气的自来水，以充气泵增氧，每天投喂适量。驯养18d后开始正式试验，试验期间水温为(27±1)°C。每天上午用虹吸法排污，加注新水。驯养期间投喂基础饲料。
[0017]试验用基础饲料的成分为:鱼粉20.0% (质量分数，下同)，豆柏20.0%，菜柏12.0%,次粉40.3%，麦麸6.0%，多种维生素0.2%，复合矿物质1.5%，配制成颗粒饲料。饲料中的营养成分为:粗蛋白32 % (质量分数，下同)，粗脂3.5 %，粗纤维4.1 %，粗灰分6.0%，可消化能为 12.142 MJ/kgo
[0018]提取物A的制备:称取南烛子干品1.2kg，研磨至末，置于带有圆底烧瓶的提取装置中，加15L纯水回流提取5h，过滤，得到水提液，重复2次，合并水提液，减压浓缩成稠膏，70°C以下烘干，粉碎成细粉，过100目筛，得到提取物A。
[0019]提取物B、C的制备:称取南烛子干品1.2kg，研磨至末，置于带有圆底烧瓶的提取装置中，加15L纯水回流提取5h，过滤，得到水提液，重复2次，合并水提液，减压浓缩至相对密度为1.10-1.20时，放凉，加等体积的石油醚萃取3次，合并3次石油醚萃取液，旋转蒸发浓缩并回收溶剂，然后70°C以下烘干，粉碎成细粉，过100目筛，得到提取物B。将水相部分减压浓缩成稠膏，70°C以下烘干，粉碎成细粉，过100目筛，得到提取物C。
[0020]将试验用鱼分为四组，分别投喂4种饲料。每组设4个重复，每个重复组放养12尾鱼。在基础饲料中分别添加质量分数为0.5%的提取物A (A组)、提取物B(B组)、提取物C (C组)，混合后用绞肉机制成颗粒饲料，60°C下烘干，冷藏备用。以不添加任何提取物作为对照组。试验期间，每日投喂，日投喂量均为体重的2%，分别于9:00,16:00各投喂一半。分别于试验后第5、10、15、20、25天各取样I次。每次每组随机取罗非鱼8尾(每箱2尾)，用注射器于尾静脉处采血。将每尾鱼的血液分为2份，I份加肝素抗凝，供测定红细胞比容；I份置于室温下，待凝血后分离血清，供测定血清杀菌、溶菌酶活性(测定方法参考文献:温周瑞，等:一种中草药复方制剂对罗非鱼非特异免疫力的影响，大连水产学院学报，2009年04月第24卷第2期。)各组血清杀菌、溶菌酶活性的试验统计结果见图1和图2。
【主权项】
1.一种抗病增产的罗非鱼专用饲料添加剂，其特征在于，其为南烛子水提取物。2.根据权利要求1所述的罗非鱼专用饲料添加剂，其特征在于，所述的南烛子水提取物按如下方法制备而得:将南烛子原料加水回流提取1-3次，所得提取液以石油醚萃取，弃掉有机相，将水相浓缩成稠膏，干燥，即得。3.根据权利要求2所述的罗非鱼专用饲料添加剂，其特征在于，每次的回流提取时间为 4-6ho4.根据权利要求2所述的罗非鱼专用饲料添加剂，其特征在于，干燥的温度小于70°C。5.南烛子水提取物在制备提高罗非鱼血清溶菌酶活性的药物中的应用。
【专利摘要】本发明提供了一种抗病增产的罗非鱼专用饲料添加剂，该饲料添加剂为南烛子水提取物，能增强罗非鱼的免疫水平，提高其存活率和产量，同时该饲料添加剂的原料来源稳定，价廉高效，制备方法简单，且天然无毒无残留，可以减少抗生素和化学药物的使用。
【IPC分类】A23K1/14, A23K1/18, A23K1/16
【公开号】CN104905052
【申请号】CN201510291197
【发明人】李静
【申请人】李静
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年6月1日
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