注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂的制作方法
注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及重组人粒细胞刺激因子制备领域，特别是一种注射用重组人粒细胞刺 激因子冻干粉针剂。
【背景技术】
[0002] 重组人粒细胞刺激因子（rHuG-CSF)的稳定剂常采用人血蛋白，但由于人血白蛋 白为血液制品，不可避免的存在潜在的病毒及交叉感染风险，还有可能发生蛋白过敏。近来 来，众多研宄致力于开发替代人血蛋白的重组人促红素稳定剂。如市售药品格拉诺赛特中 采用L-精氨酸，L-苯丙氨酸和L-蛋氨酸的复合氨基酸组合物作为稳定剂，成本较高，增加 了配伍难度和工序。CN102028661A的专利文献中也公开了精氨酸、甘氨酸等作为重组人粒 细胞刺激因子中的冻干保护剂使用，以使其在不同温度下具备长期稳定性。但是现有的重 组人粒细胞刺激因子产品均未考虑在高湿和光照条件下的产品稳定性，其产品也无法在高 湿、光照条件下长期贮存。
[0003] 此外，在复杂的贮存环境中，贮存温度经常会出现变化或反复，因此重组人粒细胞 刺激因子制剂还应当可以在复杂多变的温度下进行贮存，目前还没有变温贮存的相关报 道。申请人惊奇地发现，在采用特定的配伍和配比后，得到重组人粒细胞刺激因子冻干粉针 剂，可以在反复骤变的环境下贮存，从而得到了本发明。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂，不含人血白 蛋白，不含有氨基酸类稳定剂，可常温、高温、高湿、光照条件下保存，特别是可以在温度反 复、多变的贮存环境下贮存。
[0005] 为了实现上述目的，本发明提供的一种注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针 剂，由以下组分组成：
[0006] 药用量的重组人粒细胞刺激因子；
[0007] 甘露醇；
[0008] 枸橼酸盐缓冲剂；以及
[0009] 吐温 80。
[0010] 优选地，各组分的配比为：每1000 ml的冻干粉针剂水溶液中含有100-500mg重组 人粒细胞刺激因子，40-45mg吐温80,45-55g甘露醇，适量的枸橼酸盐缓冲剂能够调节溶液 的pH值为 3. 5-4. 5。
[0011] 优选地，各组分的配比为：各组分的配比为：每1000 ml的冻干粉针剂水溶液中含 有250mg重组人粒细胞刺激因子，43. 2mg吐温80, 50g甘露醇，适量的枸橼酸盐缓冲剂能够 调节溶液的pH值为3. 9-4. 1。
[0012] 优选地，制备方法包括如下工序：准确称取的枸橼酸和枸橼酸钠用一定体积的注 射用水溶解，溶解完全后，取样检测pH值和内毒素；待枸橡酸盐缓冲液pH值和内毒素检测 合格后，再准确量取吐温-80、甘露醇、重组人粒细胞刺激因子原液加入到已检测合格的枸 橼酸盐缓冲液中，混合均匀即得配制好的半成品液；将配制好的半成品液用〇. 22ym滤膜 进行无菌过滤，对滤后的半成品液进行取样检测无菌、pH值、内毒素；待pH值、内毒素检测 结果合格后，进行无菌灌装，半加塞；将灌装好的半成品转移至冻干机箱体内，关闭冻干机 门，启动冻干机进行冻干；冻干结束后，压塞；将压好塞的半成品转移至轧盖间进行轧盖； 轧盖结束后包装。
[0013] 优选地，在冻干结束时，向冻干箱体内注入无菌高纯氮气再压塞。
[0014] 本发明提供注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂，配伍简单，不含复杂的稳 定剂成分，安全且节约成本。在常温、高温、高湿、光照等条件下均具备长期的稳定性，能够 适应多种贮存环境。
【具体实施方式】
[0015] 为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面结合【具体实施方式】对本发 明作进一步的详细说明。
[0016] 实施例1
[0017]
[0019] 制备方法：准确称取的枸橼酸和枸橼酸钠用一定体积的注射用水溶解，溶解完全 后，取样送质检检测pH值和内毒素。待枸橼酸盐缓冲液pH值和内毒素检测合格后，再准确 量取吐温-80溶液、甘露醇、重组人粒细胞刺激因子原液加入到已检测合格的枸橼酸盐缓 冲液中，混合均匀即得配制好的半成品液。将配制好的半成品液用0. 22ym滤膜进行无菌 过滤，对滤后的半成品液进行取样送质检测无菌、pH值、内毒素。待pH值、内毒素检测结果 合格后，进行无菌灌装，半加塞。将灌装好的半成品转移至冻干机箱体内，关闭冻干机门，启 动冻干机进行冻干。冻干过程为预冻、抽空、干燥。冻干结束后，向冻干箱内注入无菌高纯 氮气，压塞。将压好塞的半成品转移至轧盖间进行轧盖。轧盖结束后交接给包装间，包装人 员对半成品进行灯检、包装。
[0020] 上述制备方法中，各组分的称量或量取均按上表中的标准配伍（下同）。
[0021] 实施例2
[0022]
[0030] 制备方法同实施例I，其中pH调节剂枸缘酸和枸缘酸钠的用量可将产品的pH值维 持在 4. 0-4. 1。
[0031] 试验例1
[0032] 对实施例1中的重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂复溶于注射用水中进行稳定 性测试，结果记录在如下各表中。
[0033] 表1光照条件贮存试验结果
[0037] 表3高温加速试验结果
[0038]
[0042] 试验例2
[0043] 将实施例1产品与市售产品分别溶于等量注射用水中，定性分析溶解效果，见下 表：
[0044] 表5复溶性定性试验结果
[0045]
[0046] 试验例3
[0047] 临床及动物实验发现，本发明中提供的重组人促红制剂在刺激性、过敏性、溶血性 三方面均无给药局部毒性，安全可靠。
[0048] 试验例4
[0049] 变温贮存试验
[0050] 试验方法：取待测冻干粉针剂，以I. 4*107IU每支的标准复溶于注射用水中，在变 化的温度环境下贮存，温度变化的方式为：
[0051] 0~5天：32°C;
[0052] 6 ~10 天：45°C;
[0053] 11 ~15 天：25°C;
[0054] 16~20天：32 °C ;
[0055] 21 ~25 天 45°C;
[0056] 从第26天开始按照第0天的温度设置依次循环，直至200天结束。
[0057] 实施例1试验结果
[0058]
[0059] 对比例1试验结果
[0060]
[0061] 由上表结果可知，实施例1中的冻干粉针剂在温度跨度大且多次反复的变温条 件贮存下仍能保持较高的生物学活性，而对比例1中的冻干粉针剂在变温环境贮存能力 差，在90天时活性便降至5. 31*105,损失了两个数量级。
[0062] 以上对本发明所提供的注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂进行了详细介 绍。本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只 是用于帮助理解本发明的核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不 脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入 本发明权利要求的保护范围内。
【主权项】
1. 一种注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂，其特征在于，由以下组分组成： 药用量的重组人粒细胞刺激因子； 甘露醇； 枸橼酸盐缓冲剂以及 吐温80。2. 根据权利要求1所述的注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂，其特征在于，各 组分的配比为：每1000 ml的冻干粉针剂水溶液中含有100-500mg重组人粒细胞刺激因子， 40-45mg吐温80,45-55g甘露醇，适量的枸橼酸盐缓冲剂能够调节溶液的pH值为3. 5-4. 5。3. 根据权利要求2所述的注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂，其特征在于， 各组分的配比为：每1000 ml的冻干粉针剂水溶液中含有250mg重组人粒细胞刺激因子， 43. 2mg吐温80, 50g甘露醇，适量的枸橼酸盐缓冲剂能够调节溶液的pH值为3. 9-4. 1。4. 根据权利要求1-3任一所述的注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂，其特征在 于，制备方法包括如下工序：准确称取枸橼酸和枸橼酸钠用注射用水溶解，溶解完全后得到 枸橼酸盐缓冲液，取样检测其pH值和内毒素；待枸橼酸盐缓冲液pH值和内毒素检测合格 后，再准确量取吐温-80、甘露醇和重组人粒细胞刺激因子原液加入到已检测合格的枸橼酸 盐缓冲液中，混合均匀即得配制好的半成品液；将配制好的半成品液用〇. 22ym滤膜进行 无菌过滤，对滤后的半成品液取样进行无菌检测并检测pH值和内毒素；待pH值和内毒素 检测结果合格后，进行无菌灌装，半加塞；将灌装好的半成品转移至冻干机箱体内，关闭冻 干机门，启动冻干机进行冻干；冻干结束后，压塞；将压好塞的半成品转移至轧盖间进行轧 盖；乳盖结束后包装。5. 根据权利要求4所述的注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂，其特征在于，在 冻干结束时，向冻干箱体内注入无菌高纯氮气再压塞。
【专利摘要】本发明公开了一种注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂，由以下组分组成：药用量的重组人粒细胞刺激因子；甘露醇；枸橼酸盐缓冲剂；以及吐温80。本产品不含人血白蛋白，不含有氨基酸类稳定剂，可常温、高温、高湿、光照条件下保存，特别是可以在温度反复、多变的贮存环境下贮存。
【IPC分类】A61K47/10, A61K47/12, A61K38/19, A61K9/19, A61K47/34
【公开号】CN104906053
【申请号】CN201510324554
【发明人】程度胜, 桑建彬, 龙应国, 韩明娣, 薛霞, 郭峰
【申请人】北京四环生物制药有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年6月12日
【技术领域】
[0001] 本发明涉及重组人粒细胞刺激因子制备领域，特别是一种注射用重组人粒细胞刺 激因子冻干粉针剂。
【背景技术】
[0002] 重组人粒细胞刺激因子（rHuG-CSF)的稳定剂常采用人血蛋白，但由于人血白蛋 白为血液制品，不可避免的存在潜在的病毒及交叉感染风险，还有可能发生蛋白过敏。近来 来，众多研宄致力于开发替代人血蛋白的重组人促红素稳定剂。如市售药品格拉诺赛特中 采用L-精氨酸，L-苯丙氨酸和L-蛋氨酸的复合氨基酸组合物作为稳定剂，成本较高，增加 了配伍难度和工序。CN102028661A的专利文献中也公开了精氨酸、甘氨酸等作为重组人粒 细胞刺激因子中的冻干保护剂使用，以使其在不同温度下具备长期稳定性。但是现有的重 组人粒细胞刺激因子产品均未考虑在高湿和光照条件下的产品稳定性，其产品也无法在高 湿、光照条件下长期贮存。
[0003] 此外，在复杂的贮存环境中，贮存温度经常会出现变化或反复，因此重组人粒细胞 刺激因子制剂还应当可以在复杂多变的温度下进行贮存，目前还没有变温贮存的相关报 道。申请人惊奇地发现，在采用特定的配伍和配比后，得到重组人粒细胞刺激因子冻干粉针 剂，可以在反复骤变的环境下贮存，从而得到了本发明。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂，不含人血白 蛋白，不含有氨基酸类稳定剂，可常温、高温、高湿、光照条件下保存，特别是可以在温度反 复、多变的贮存环境下贮存。
[0005] 为了实现上述目的，本发明提供的一种注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针 剂，由以下组分组成：
[0006] 药用量的重组人粒细胞刺激因子；
[0007] 甘露醇；
[0008] 枸橼酸盐缓冲剂；以及
[0009] 吐温 80。
[0010] 优选地，各组分的配比为：每1000 ml的冻干粉针剂水溶液中含有100-500mg重组 人粒细胞刺激因子，40-45mg吐温80,45-55g甘露醇，适量的枸橼酸盐缓冲剂能够调节溶液 的pH值为 3. 5-4. 5。
[0011] 优选地，各组分的配比为：各组分的配比为：每1000 ml的冻干粉针剂水溶液中含 有250mg重组人粒细胞刺激因子，43. 2mg吐温80, 50g甘露醇，适量的枸橼酸盐缓冲剂能够 调节溶液的pH值为3. 9-4. 1。
[0012] 优选地，制备方法包括如下工序：准确称取的枸橼酸和枸橼酸钠用一定体积的注 射用水溶解，溶解完全后，取样检测pH值和内毒素；待枸橡酸盐缓冲液pH值和内毒素检测 合格后，再准确量取吐温-80、甘露醇、重组人粒细胞刺激因子原液加入到已检测合格的枸 橼酸盐缓冲液中，混合均匀即得配制好的半成品液；将配制好的半成品液用〇. 22ym滤膜 进行无菌过滤，对滤后的半成品液进行取样检测无菌、pH值、内毒素；待pH值、内毒素检测 结果合格后，进行无菌灌装，半加塞；将灌装好的半成品转移至冻干机箱体内，关闭冻干机 门，启动冻干机进行冻干；冻干结束后，压塞；将压好塞的半成品转移至轧盖间进行轧盖； 轧盖结束后包装。
[0013] 优选地，在冻干结束时，向冻干箱体内注入无菌高纯氮气再压塞。
[0014] 本发明提供注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂，配伍简单，不含复杂的稳 定剂成分，安全且节约成本。在常温、高温、高湿、光照等条件下均具备长期的稳定性，能够 适应多种贮存环境。
【具体实施方式】
[0015] 为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面结合【具体实施方式】对本发 明作进一步的详细说明。
[0016] 实施例1
[0017]
[0019] 制备方法：准确称取的枸橼酸和枸橼酸钠用一定体积的注射用水溶解，溶解完全 后，取样送质检检测pH值和内毒素。待枸橼酸盐缓冲液pH值和内毒素检测合格后，再准确 量取吐温-80溶液、甘露醇、重组人粒细胞刺激因子原液加入到已检测合格的枸橼酸盐缓 冲液中，混合均匀即得配制好的半成品液。将配制好的半成品液用0. 22ym滤膜进行无菌 过滤，对滤后的半成品液进行取样送质检测无菌、pH值、内毒素。待pH值、内毒素检测结果 合格后，进行无菌灌装，半加塞。将灌装好的半成品转移至冻干机箱体内，关闭冻干机门，启 动冻干机进行冻干。冻干过程为预冻、抽空、干燥。冻干结束后，向冻干箱内注入无菌高纯 氮气，压塞。将压好塞的半成品转移至轧盖间进行轧盖。轧盖结束后交接给包装间，包装人 员对半成品进行灯检、包装。
[0020] 上述制备方法中，各组分的称量或量取均按上表中的标准配伍（下同）。
[0021] 实施例2
[0022]
[0030] 制备方法同实施例I，其中pH调节剂枸缘酸和枸缘酸钠的用量可将产品的pH值维 持在 4. 0-4. 1。
[0031] 试验例1
[0032] 对实施例1中的重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂复溶于注射用水中进行稳定 性测试，结果记录在如下各表中。
[0033] 表1光照条件贮存试验结果
[0037] 表3高温加速试验结果
[0038]
[0042] 试验例2
[0043] 将实施例1产品与市售产品分别溶于等量注射用水中，定性分析溶解效果，见下 表：
[0044] 表5复溶性定性试验结果
[0045]
[0046] 试验例3
[0047] 临床及动物实验发现，本发明中提供的重组人促红制剂在刺激性、过敏性、溶血性 三方面均无给药局部毒性，安全可靠。
[0048] 试验例4
[0049] 变温贮存试验
[0050] 试验方法：取待测冻干粉针剂，以I. 4*107IU每支的标准复溶于注射用水中，在变 化的温度环境下贮存，温度变化的方式为：
[0051] 0~5天：32°C;
[0052] 6 ~10 天：45°C;
[0053] 11 ~15 天：25°C;
[0054] 16~20天：32 °C ;
[0055] 21 ~25 天 45°C;
[0056] 从第26天开始按照第0天的温度设置依次循环，直至200天结束。
[0057] 实施例1试验结果
[0058]
[0059] 对比例1试验结果
[0060]
[0061] 由上表结果可知，实施例1中的冻干粉针剂在温度跨度大且多次反复的变温条 件贮存下仍能保持较高的生物学活性，而对比例1中的冻干粉针剂在变温环境贮存能力 差，在90天时活性便降至5. 31*105,损失了两个数量级。
[0062] 以上对本发明所提供的注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂进行了详细介 绍。本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只 是用于帮助理解本发明的核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不 脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入 本发明权利要求的保护范围内。
【主权项】
1. 一种注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂，其特征在于，由以下组分组成： 药用量的重组人粒细胞刺激因子； 甘露醇； 枸橼酸盐缓冲剂以及 吐温80。2. 根据权利要求1所述的注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂，其特征在于，各 组分的配比为：每1000 ml的冻干粉针剂水溶液中含有100-500mg重组人粒细胞刺激因子， 40-45mg吐温80,45-55g甘露醇，适量的枸橼酸盐缓冲剂能够调节溶液的pH值为3. 5-4. 5。3. 根据权利要求2所述的注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂，其特征在于， 各组分的配比为：每1000 ml的冻干粉针剂水溶液中含有250mg重组人粒细胞刺激因子， 43. 2mg吐温80, 50g甘露醇，适量的枸橼酸盐缓冲剂能够调节溶液的pH值为3. 9-4. 1。4. 根据权利要求1-3任一所述的注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂，其特征在 于，制备方法包括如下工序：准确称取枸橼酸和枸橼酸钠用注射用水溶解，溶解完全后得到 枸橼酸盐缓冲液，取样检测其pH值和内毒素；待枸橼酸盐缓冲液pH值和内毒素检测合格 后，再准确量取吐温-80、甘露醇和重组人粒细胞刺激因子原液加入到已检测合格的枸橼酸 盐缓冲液中，混合均匀即得配制好的半成品液；将配制好的半成品液用〇. 22ym滤膜进行 无菌过滤，对滤后的半成品液取样进行无菌检测并检测pH值和内毒素；待pH值和内毒素 检测结果合格后，进行无菌灌装，半加塞；将灌装好的半成品转移至冻干机箱体内，关闭冻 干机门，启动冻干机进行冻干；冻干结束后，压塞；将压好塞的半成品转移至轧盖间进行轧 盖；乳盖结束后包装。5. 根据权利要求4所述的注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂，其特征在于，在 冻干结束时，向冻干箱体内注入无菌高纯氮气再压塞。
【专利摘要】本发明公开了一种注射用重组人粒细胞刺激因子冻干粉针剂，由以下组分组成：药用量的重组人粒细胞刺激因子；甘露醇；枸橼酸盐缓冲剂；以及吐温80。本产品不含人血白蛋白，不含有氨基酸类稳定剂，可常温、高温、高湿、光照条件下保存，特别是可以在温度反复、多变的贮存环境下贮存。
【IPC分类】A61K47/10, A61K47/12, A61K38/19, A61K9/19, A61K47/34
【公开号】CN104906053
【申请号】CN201510324554
【发明人】程度胜, 桑建彬, 龙应国, 韩明娣, 薛霞, 郭峰
【申请人】北京四环生物制药有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年6月12日
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