一种尿激酶冻干剂的制备方法
一种尿激酶冻干剂的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药技术领域，特别是涉及一种尿激酶冻干剂的制备方法。
【背景技术】
[0002] 尿激酶临床主要用于血栓栓塞性疾病的溶栓治疗。包括急性广泛性肺栓塞、胸痛 6~12小时内的冠状动脉栓塞和心肌梗死、症状短于3~6小时的急性期脑血管栓塞、视网 膜动脉栓塞和其他外周动脉栓塞症状严重的骼股静脉血栓形成者。也用于人工心瓣手术后 预防血栓形成，保持血管插管和胸腔及心包腔引流管的通畅等。溶栓的疗效均需后继的肝 素抗凝加以维持。
[0003] 尿激酶是由新鲜的人尿中分离精制而得的一种蛋白质酶，一般为白色或类白色的 冻干块状物或粉末。主要制成酶类溶血栓药。它能激活体内纤溶酶原转为纤溶酶，从而水 解纤维蛋白使新形成的血栓溶解。
[0004] 尿激酶冻干制剂的生产，目前存在的问题在于成品效价下降和收率较低。尿激酶 原料稳定性差，其对温度敏感，常温（10°c~30°C)或高温（30°C以上）下配料，成品效价显 著降低，即使在低温下，其效价也会缓慢下降。人血白蛋白作为保护剂，能有效降低成品效 价下降的速度，但生产过程中会因搅拌引起药液起泡，造成药液损失，从而导致收率下降。 尿激酶原料为冻干获得的粉末，该粉末在低温溶液中溶解速度较慢，且加入后会形成块状 沉在配料罐底部。目前工业上常用的搅拌形式有机械搅拌和磁力搅拌，如通过机械搅拌需 耗费较长时间原料才得以溶解，长时间的搅拌会增加原料效价的损失，且增加药液的起泡 量影响收率。
【发明内容】
[0005] 为了解决上述技术问题，本发明提供了一种尿激酶冻干剂的制备方法。
[0006] 本发明提供的尿激酶冻干剂的制备方法，制剂配方包括尿激酶、人血白蛋白、氯化 钠、甘露醇和注射用水，制备步骤如下：
[0007] (1)制备辅料溶液：配料容器中加入注射用水，搅拌状态下加入氯化钠、甘露醇， 搅拌至溶解；再加入体积比〇. 1%~〇. 3%的经注射用水润湿的767型针剂用活性炭，80°C 以上搅拌，保温静置吸附10~30min，脱炭；所得料液通过压缩空气进入低温配料系统中， 设定低温配料系统温度使溶液降温至l〇°C以下；
[0008] 所述低温配料系统包括一冷藏箱，冷藏箱内放置一设有进料口和出料口的配料 罐，配料罐底部配有磁力搅拌装置，料液由配料罐的出料口经空气压缩泵送入除菌过滤系 统，除菌过滤系统连接低温锥形周转罐，周转罐中的溶液通过蠕动泵进行灌装；
[0009] (2)制备主药溶液：待料液温度在KTC以下，开启低温配料系统的磁力搅拌装置， 搅拌状态下加入人血白蛋白，继续搅拌至溶解完全；所得产品取出部分用于饱和滤膜，剩余 部分加入尿激酶搅拌至溶解完全后补足溶剂，溶有尿激酶的溶液用上述饱和滤膜过滤；
[0010] (3)过滤后的溶液依次进行灌装入瓶和半加塞后，冻干；
[0011] 冻干条件：-40°C以下预冻3~4小时；然后在-10°c~0°C升华干燥16. 5~17. 5 小时；再升温至20°C，解析干燥5~6小时；
[0012] (4)冻干完毕后压紧瓶塞，缓慢放掉真空，出柜，压盖，目检，包装，全检。
[0013] 其中，除菌过滤系统为平板过滤器。
[0014] 本发明的上述方法将配料过程分为制备辅料溶液和制备主药溶液两个步骤，其中 高温下制备辅料溶液，低温下在特制的低温配料系统中制备主药溶液。
[0015] 制备主药溶液通过在特制的低温配料系统中进行，缩短药液搅拌时间，减少了药 液的起泡量以及降低了原料效价的损失，从而达到提高收率和提高成品效价的目的。
[0016] 通过将搅拌方式由机械搅拌变为磁力搅拌，可以更好的促使尿激酶原料粉末的溶 解，减少搅拌时间，从而降低原料效价的损失并减少药液的起泡量，达到提高成品效价和提 高收率的目的。
[0017] 优选地，所述制剂配方中，尿激酶1~150万单位/mL;人血白蛋白4~8mg/mL;氯 化纳 5 ~10mg/mL;甘露醇 0? 05 ~0? 15g/mL。
[0018] 优选地，步骤（4)所述的全检包括气泡上升法测定尿激酶效价，测定所需溶液的 配制时间先后排序如下：
[0019] (I)PH 7. 8的巴比妥-氯化钠缓冲液，配制后静置10小时以上；
[0020] (2)pH9.O的三羟甲基氨基甲烷缓冲液；
[0021] (3)牛纤维蛋白原溶液；
[0022] (4)牛纤维蛋白溶酶原溶液；
[0023] (5)牛凝血酶溶液；
[0024] 其中，pH7. 8的巴比妥-氯化钠缓冲液使用过程中不能用力振摇混勾，而是缓慢 反复倒置2~3次即可。
[0025] 在效价测定过程中，涉及到五种溶液的配制，分别为（1)巴比妥_氯化钠缓冲液 (PH7. 8)、（2)三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH9.0)、（3)牛纤维蛋白原溶液、（4)牛纤维蛋白 溶酶原溶液、（5)牛凝血酶溶液。其中，巴比妥溶液粘稠度较大，容易起泡影响结果判定，配 置后需要静置10小时以上，使用过程中不能用力振摇混匀，而是缓慢反复倒置2~3次即 可；牛凝血酶溶液随着时间延长，其凝血效果明显下降，会导致成品效价出现较大偏差，必 须用前现配。因此，上述溶液必须按照顺序进行配置，顺序为（1) (2) (3) (4) (5)，将溶解速度 慢、稳定性相对较好的溶液先行配置，牛凝血酶溶液必须最后配制，以保证其在有限时间内 的凝血效果，从而保证测定结果的准确，不会因为个别溶液的配制导致产品效价出现偏差。
[0026]因尿激酶的不稳定性以及反应的特殊性，尿激酶冻干制剂效价测定过程中，我们 对测试装置及检测方法进行了优化，能够保证尿激酶的活性以及测定结果的准确性。
[0027] 优选地，气泡上升法进行终点判断时，在效价测试系统中装入一倾斜放置的白炽 灯，加入所有溶液后，反应系统中的溶液在30~40秒内凝结成块，通过白炽灯的灯光照射 待检溶液时产生的反射光将气泡照亮放大来观察到小气泡出现的时间，当凝块内小气泡上 升到反应系统体积一半时作为反应终点，立即计时。
[0028]目前尿激酶冻干制剂效价的测定，没有通用的检测设备，采用气泡上升法进行终 点判断。反应原理为，加入所有溶液后，反应系统在30~40秒内凝结，当凝块内小气泡上 升到反应系统体积一半时作为反应终点，立即计时。但由于气泡很小，出现气泡的时间点很 难掌控，导致实验结果出现很大偏差。
[0029] 为了解决上述问题，实验过程中做了如下改进：在该特定的测试系统中，装入一倾 斜放置的白炽灯，通过白炽灯的灯光反射，反射光可以将气泡照亮放大，能清晰的观察到小 气泡出现的时间，便于立即计时，使得实验结果的精确度大大提高。
[0030] 本发明具有以下有益效果：
[0031] 本发明提供的制备方法，创新点主要体现在以下四点：（1)通过低温配料能够提 高效价；将药液配制过程分为制备辅料溶液和制备主药溶液两个步骤，高温下制备辅料溶 液，低温下在特制的低温配料系统中制备主药溶液，减少搅拌时间，有效的降低蛋白质变 性，提高成品的收率和效价。（2)特制的低温配料装置；(3)人血白蛋白的加入会引起溶液 起泡，降低成品的收率，通过磁力搅拌能够减少起泡提高收率；(4)效价测定过程中装置及 方法的优化。
【附图说明】
[0032] 图1为本发明低温配料系统的一种结构示意图。
【具体实施方式】
[0033] 下面结合实施例，对本发明的【具体实施方式】作进一步详细描述，以使本领域的技 术人员可以更好地理解本发明并能予以实施。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制 本发明的范围。
[0034] 实施例1 :
[0035] 1000个制剂单位尿激酶冻干制剂的成分及用量：
[0036]
[0037] 制备过程：
[0038] 1、药液配制
[0039] I. 1制备辅料溶液：于配料桶中加入750mL的新鲜注射用水，搅拌状态下依次加入 5. Og氯化钠、50g甘露醇，搅拌至溶解。
[0040] 1. 2活性炭吸附及脱炭：加入I.Og767型针剂用活性炭（用注射用水润湿），80°C 以上保温、搅拌10分钟，静置吸附10分钟，脱炭。脱炭后的料液通过压缩空气进入特制的 低温配料系统中（系统结构示意见图1)，设定低温配料系统温度2°C，使料液降温至KTC以 下。
[0041] 所述低温配料系统包括一冷藏箱，冷藏箱内放置一设有进料口和出料口的配料 罐，配料罐底部配有磁力搅拌装置，料液由配料罐的出料口经空气压缩泵送入除菌过滤系 统，除菌过滤系统连接低温锥形周转罐，周转罐中的溶液通过蠕动泵进行灌装。
[0042] 1. 3制备主药溶液：待料液温度在KTC以下，开启低温配料系统的磁力搅拌，加入 4.Og人血白蛋白，搅拌至溶解均匀。以一定体积上述溶液饱和滤膜，加入I. 0亿单位的尿激 酶，搅拌至溶解。补足注射用水（l〇°C以下），用饱和过的滤膜过滤。
[0043] 2、测定中间体溶液、灌装，分装成1000瓶。
[0044] 3、冻干：将灌装好的产品放入冻干机，于-40 °C以下，预冻3~4小时；然后 在-KTC~0°C，升华干燥17小时左右；再升温至20 °C，解析干燥5~6小时。
[0045] 4、压塞及轧盖：冻干结束，压塞，乳盖，目检，包装，全检。
[0046] 本实施例的产品具有如下优点：一、低温下配制主药溶液，有效降低了蛋白质的变 性，提高成品效价。二、搅拌方式为磁力搅拌，减少搅拌时间，从而减少药液的起泡量并降低 原料效价的损失，提尚收率和提尚了成品的效价。
[0047] 实施例2 :
[0048] 1000个制剂单位尿激酶冻干制剂的成分及用量：
[0049]
[0050] 制备过程：
[0051] 1、药液配制
[0052] I. 1制备辅料溶液：于配料桶中加入850mL的新鲜注射用水，搅拌状态下依次加入 7.Og氯化钠、100g甘露醇，搅拌至溶解。
[0053] 1. 2活性炭吸附及脱炭：加入2.Og767型针剂用活性炭（用注射用水润湿），80°C 以上保温，搅拌20分钟，静置吸附20分钟，脱炭。脱炭后的料液通过压缩空气进入特制的 低温配料系统中（系统结构示意见图1)，设定低温配料系统温度2°C，使料液降温至KTC以 下。
[0054] 1. 3制备主药溶液：待料液温度在KTC以下，开启低温配料系统的磁力搅拌，加入 6.Og人血白蛋白，搅拌至溶解均匀。以一定体积上述溶液饱和滤膜，加入I. 1亿单位的尿激 酶，搅拌至溶解。补足注射用水（l〇°C以下），用饱和过的滤膜过滤。
[0055] 2、测定中间体溶液、灌装，分装成1000瓶。
[0056] 3、冻干：将灌装好的产品放入冻干机，于-40 °C以下，预冻3~4小时；然后 在-KTC~0°C，升华干燥17小时左右；再升温至20°C，解析干燥5~6小时。
[0057] 4、压塞及轧盖：冻干结束，压塞，乳盖，目检，包装，全检。
[0058]本实施例的产品具有如下优点：一、低温下配制主药溶液，有效的降低了蛋白质的 变性，提高成品效价。二、搅拌方式为磁力搅拌，减少搅拌时间，从而减少药液的起泡量并降 低原料效价的损失，提尚收率和提尚了成品的效价。
[0059] 实施例3 :
[0060] 1000个制剂单位尿激酶冻干制剂的成分及用量：
[0061]
[0062] 制备过程：
[0063] 1、药液配制
[0064] I. 1制备辅料溶液：于配料桶中加入950mL的新鲜注射用水，搅拌状态下依次加入 10.0 g氯化钠、150g甘露醇，搅拌至溶解。
[0065] 1. 2活性炭吸附及脱炭：加入3. Og 767型针剂用活性炭（用注射用水润湿），80°C 以上保温，搅拌40分钟，静置吸附30分钟，脱炭。脱炭后的料液通过压缩空气进入特制的 低温配料系统中（系统结构示意见图1)，设定低温配料系统温度2°C，使料液降温至KTC以 下。
[0066] 1. 3制备主药溶液：待料液温度在KTC以下，开启低温配料系统的磁力搅拌，加入 8. Og人血白蛋白，搅拌至溶解均匀。以一定体积上述溶液饱和滤膜，加入1. 3亿单位的尿激 酶，搅拌至溶解。补足注射用水（l〇°C以下），用饱和过的滤膜过滤。
[0067] 2、测定中间体溶液、灌装，分装成1000瓶。
[0068] 3、冻干：将灌装好的产品放入冻干机，于-40 °C以下，预冻3~4小时；然后 在-KTC~0°C，升华干燥17小时左右；再升温至20°C，解析干燥5~6小时。
[0069] 4、压塞及轧盖：冻干结束，压塞，乳盖，目检，包装，全检。
[0070] 本实施例的产品具有如下优点：一、低温下配制主药溶液，有效的降低了蛋白质的 变性，提高成品效价。二、搅拌方式为磁力搅拌，减少搅拌时间，从而减少药液的起泡量并降 低原料效价的损失，提尚收率和提尚了成品的效价。
[0071] 实施例4:
[0072] 1000个制剂单位尿激酶冻干制剂的成分及用量：
[0073]
[0074] 制备过程：
[0075] 1、药液配制
[0076] I. 1制备辅料溶液：于配料桶中加入850mL的新鲜注射用水，搅拌状态下依次加入 8. Og氯化钠、100g甘露醇，搅拌至溶解。
[0077] 1.2活性炭吸附及脱炭：加入2. Og 767型针剂用活性炭（用注射用水润湿），80°C 以上保温，搅拌20分钟，静置吸附20分钟，脱炭。脱炭后的料液通过压缩空气进入特制的 低温配料系统中（系统结构示意见图1)，设定低温配料系统温度2°C，使料液降温至KTC以 下。
[0078] 1. 3制备主药溶液：待料液温度在KTC以下，开启低温配料系统的磁力搅拌，加入 6. Og人血白蛋白，搅拌至溶解均匀。以一定体积上述溶液饱和滤膜，加入6亿单位的尿激 酶，搅拌至溶解。补足注射用水（l〇°C以下），用饱和过的滤膜过滤。
[0079] 2、测定中间体溶液、灌装，分装成1000瓶。
[0080] 3、冻干：将灌装好的产品放入冻干机，于-40 °C以下，预冻3~4小时；然后 在-KTC~0°C，升华干燥17小时左右；再升温至20°C，解析干燥5~6小时。
[0081] 4、压塞及轧盖：冻干结束，压塞，乳盖，目检，包装，全检。
[0082] 本实施例的产品具有如下优点：一、低温下配制主药溶液，有效的降低了蛋白质的 变性，提高成品效价。二、搅拌方式为磁力搅拌，减少搅拌时间，从而减少药液的起泡量并降 低原料效价的损失，提尚收率和提尚了成品的效价。
[0083] 实施例5 :
[0084] 1000个制剂单位尿激酶冻干制剂的成分及用量：
[0085]
[0086] 制备过程：
[0087] 1、药液配制
[0088] I. 1制备辅料溶液：于配料桶中加入850mL的新鲜注射用水，搅拌状态下依次加入 7. Og氯化钠、100g甘露醇，搅拌至溶解。
[0089] 1. 2活性炭吸附及脱炭：加入2. Og 767型针剂用活性炭（用注射用水润湿），80°C 以上保温，搅拌20分钟，静置吸附20分钟，脱炭。
[0090] 1. 3制备主药溶液：脱炭后的料液降温至常温（KTC~30°C)，随后加入6. Og人血 白蛋白，搅拌至溶解均匀。以一定体积上述溶液饱和滤膜，加入I. 1亿单位的尿激酶，搅拌 至溶解。补足降至常温（10°c~30°C)的注射用水，用饱和过的滤膜过滤。
[0091] 2、测定中间体溶液、灌装，分装成1000瓶。
[0092]3、冻干：将灌装好的产品放入冻干机，于-40 °C以下，预冻3~4小时；然后 在-KTC~O°C，升华干燥17小时左右；再升温至20°C，解析干燥5~6小时。
[0093] 4、压塞及轧盖：冻干结束，压塞，乳盖，目检，包装，全检。
[0094] 实施例6 :
[0095] 1000个制剂单位尿激酶冻干制剂的成分及用量：
[0096]
[0097] 制备过程：
[0098] 1、药液配制
[0099]I. 1制备辅料溶液：于配料桶中加入950mL的新鲜注射用水，搅拌状态下依次加入 10.Og氯化钠、150g甘露醇，搅拌至溶解。
[0100] 1.2活性炭吸附及脱炭：加入3.Og767型针剂用活性炭（用注射用水润湿），80°C 以上保温，搅拌40分钟，静置吸附30分钟，脱炭。
[0101] 1.3制备主药溶液：脱炭后的料液降温至30°C以上，随后加入8.Og人血白蛋白，搅 拌至溶解均匀。以一定体积上述溶液饱和滤膜，加入1.3亿单位的尿激酶，搅拌至溶解。补 足30°C以上的注射用水，用饱和过的滤膜过滤。
[0102] 2、测定中间体溶液、灌装，分装成1000瓶。
[0103] 3、冻干：将灌装好的产品放入冻干机，于-40°C以下，预冻3~4小时；然后 在-KTC~0°C，升华干燥17小时左右；再升温至20°C，解析干燥5~6小时。
[0104] 4、压塞及轧盖：冻干结束，压塞，乳盖，目检，包装，全检。
[0105] 实施例7 :
[0106] 1000个制剂单位尿激酶冻干制剂的成分及用量：
[0107]
[0108] 制备过程：
[0109] 1、药液配制
[0110] I. 1制备辅料溶液：于配料桶中加入850mL的新鲜注射用水，搅拌状态下依次加入 7.Og氯化钠、80g甘露醇，搅拌至溶解。
[0111] 1.2活性炭吸附及脱炭：加入2.Og767型针剂用活性炭（用注射用水润湿），80°C 以上保温，搅拌20分钟，静置吸附20分钟，脱炭。脱炭后的料液通过压缩空气进入低温配 料系统中，设定低温配料系统温度2°C，使料液降温至KTC以下。
[0112] 1. 3制备主药溶液：待料液温度在KTC以下，开启低温配料系统的转浆搅拌，加入 7.Og人血白蛋白，搅拌至溶解均匀。以一定体积上述溶液饱和滤膜，加入1. 3亿单位的尿激 酶，搅拌至溶解。补足注射用水（l〇°C以下），用饱和过的滤膜过滤。
[0113] 2、测定中间体溶液、灌装，分装成1000瓶。
[0114] 3、冻干：将灌装好的产品放入冻干机，于-4 0°C以下，预冻3~4小时；然后 在-KTC~0°C，升华干燥17小时左右；再升温至20°C，解析干燥5~6小时。
[0115] 4、压塞及轧盖：冻干结束，压塞，乳盖，目检，包装，全检。
[0116] 全检中包括效价检测，使用的检测装置是恒温水浴箱（透明材质），检测步骤如 下：（1)配制试剂溶液备用；（2)配制标准品溶液；（3)配制供试品溶液；⑷测试样品；（5) 结果处理。具体检测过程如下：
[0117] (1)配制试剂溶液：
[0118] 巴比妥-氯化钠缓冲液（pH7. 8):取巴比妥钠5. 05g，加氯化钠3. 7g及水适量使溶 解，另取明胶0. 5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中，然后用0. 2mol/L盐酸溶液调节 pH值至7. 8,再用水稀释至500mL，即得。
[0119] 三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH9.0):取三羟甲基氨基甲烷6. 06g，加盐酸赖氨酸 3. 65g、氯化钠5. 8g、乙二胺四醋酸二钠0. 37g，再加水溶解使成lOOOmL，调节pH值至9. 0， 即得。
[0120] 牛纤维蛋白原溶液：取牛纤维蛋白原，加巴比妥-氯化钠缓冲液（pH7. 8)制成每 ImL中含6. 67mg可凝结蛋白的溶液。
[0121] 牛纤维蛋白溶酶原溶液：取牛纤维蛋白溶酶原，加三烃甲基氨基甲烷缓冲液 (pH9. 0)制成每ImL中含1~1. 4酪蛋白单位的溶液（如溶液浑浊，离心，取上清液备用）。
[0122] 牛凝血酶溶液：取牛凝血酶，加巴比妥-氯化钠缓冲液（pH7. 8)制成每ImL中含 6. 0单位的溶液。
[0123] 混合溶液：临用前取等体积的牛凝血酶溶液和牛纤维蛋白溶酶原溶液，混匀。
[0124] (2)配制标准品溶液：取尿激酶标准品，加巴比妥-氯化钠缓冲液（pH7.8)溶解并 定量稀释制成每ImL中含60单位的溶液。
[0125] (3)配制供试品溶液：取供试品（注射用尿激酶）适量，加巴比妥-氯化钠缓冲液 (pH7. 8)溶解，混匀，并定量稀释制成每ImL中含60单位的溶液。
[0126] ⑷测试样品：
[0127] 取8支试管，各加牛纤维蛋白原溶液0. 3mL，至37°C±0. 5°C水浴中，按下表分别加 入巴比妥-氯化钠缓冲液（PH7. 8)，并依次加入样品，再分别加混合溶液0. 4mL，立即摇匀， 分别计时。反应系统应在30~40秒内凝结，当凝块内小气泡上升到反应系统体积一半时 作为反应终点，立即计时。
[0128]
[0129] 备注：8支试管分别标记为对照①、对照②、对照③、对照④以及供试①、供试②、 供试③、供试④；对照①-④涉及的样品为标准品溶液；供试①-④涉及的样品为供试品溶 液（即实施例1~4的产品）。
[0130] (5)结果处理：
[0131] 以尿激酶浓度的对数为横坐标，以反应终点时间与入水浴的时间的差值的对数为 纵坐标，进行线性回归。供试品按上法测定，用线性回归方程求得效价，计算每Img中供试 品的效价（单位）。
[0132] 实施例1至实施例7,成品的收率见表1。结果表明，实施例1至实施例4的收率 明显高于实施例7,且相对于实施例5和实施例6也有所提高。即采取本发明的方法能有效 的提尚成品的收率。
[0133]表1
[0134]
[0135] 取实施例1至实施例4制备的尿激酶冻干制剂，对装置及测定方法进行比较，结果 见表2。结果表明，在特定的效价测定装置中，相对标准偏差（RSD)数值远小于非特定装置， 效价检测结果更加准确且测定值更稳定。
[0136]表 2
[0139] 备注：特定装置为添加了白炽灯的效价测试系统，非特定装置为未添加白炽灯的 效价测试系统。
[0140] 按照检验标准，对实施例1至实施例7的产品进行全检，全检结果见表3。上述全 检结果表明，实施例1至实施例4的产品效价明显高于实施例5和实施例6,且相对实施例 7也有$父大提尚。即米取本发明的方法能有效的提尚成品的效价。
[0141]表 3
[0142]
[0143] 同时对上述实施例1至实施例4的产品进行加速考察，置温度25°C±2 °C，相对湿 度65% ±5%的恒温恒湿培养箱里放置6个月，于放置1、2、3、6个月末各取一次样，对产品 的各项指标进行考察，产品的加速试验结果见表4。上述加速试验考察表明，本发明所提供 的广品稳定性好，能有效提尚广品的临床用药安全。
[0144]表 4
[0145]
[0147] 总结：采用本发明的方法制备尿激酶冻干剂，具有提高收率和产品效价的优势。具 体对比数据见下表5.
[0148] 表 5
[0149]
[0150] 备注：实施例1~4,是上述采用本发明方法的制备实施例；实施例5~6,分别是 常温和高温，不是使用的低温配料系统；实施例7,涉及到了低温配料系统，但是，系统中不 设磁力搅拌方式，而是以机械（搅拌桨）搅拌方式。
[0151] 也就是实施例1~4采用低温配料系统（磁力搅拌），具有提高收率和效价优势， 而实施例5~7不完全是本系统。可以看出本发明的制备方法具备创造性。
[0152] 以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范 围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明 的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。
【主权项】
1. 一种尿激酶冻干剂的制备方法，其特征在于，制剂配方包括尿激酶、人血白蛋白、氯 化钠、甘露醇和注射用水，制备步骤如下： (1) 制备辅料溶液：配料容器中加入注射用水，搅拌状态下加入氯化钠、甘露醇，搅拌 至溶解；再加入体积比0. 1 %~0. 3%的经注射用水润湿的767型针剂用活性炭，80°C以上 搅拌，保温静置吸附10~30min，脱炭；所得料液通过压缩空气进入低温配料系统中，设定 低温配料系统温度使溶液降温至KTC以下； 所述低温配料系统包括一冷藏箱，冷藏箱内放置一设有进料口和出料口的配料罐，配 料罐底部配有磁力搅拌装置，料液由配料罐的出料口经空气压缩泵送入除菌过滤系统，除 菌过滤系统连接低温锥形周转罐，周转罐中的溶液通过蠕动泵进行灌装； (2) 制备主药溶液：待料液温度在KTC以下，开启低温配料系统的磁力搅拌装置，搅拌 状态下加入人血白蛋白，持续搅拌至溶解完全；所得产品取出部分用于饱和滤膜，剩余部分 加入尿激酶搅拌至溶解完全后补足溶剂，溶有尿激酶的溶液用上述饱和滤膜过滤； (3) 过滤后的溶液依次进行灌装入瓶和半加塞后，冻干； 冻干条件：_40°C以下预冻3~4小时；然后在-KTC~0°C升华干燥16. 5~17. 5小 时；再升温至20°C，解析干燥5~6小时； (4) 冻干完毕后压紧瓶塞，缓慢放掉真空，出柜，压盖，目检，包装，全检。2. 根据权利要求1所述的尿激酶冻干剂的制备方法，其特征在于，所述制剂配方中，尿 激酶1~150万单位/mL;人血白蛋白4~8mg/mL;氯化钠5~lOmg/mL;甘露醇0. 05~ 0?15g/mL〇3. 根据权利要求1或2所述的尿激酶冻干剂的制备方法，其特征在于，步骤（4)所述的 全检包括气泡上升法测定尿激酶效价，测定所需溶液的配制时间先后排序如下： (1)PH7. 8的巴比妥-氯化钠缓冲液，配制后静置10小时以上； (2)pH9. 0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液； (3) 牛纤维蛋白原溶液； (4) 牛纤维蛋白溶酶原溶液； (5) 牛凝血酶溶液； 其中，pH7.8的巴比妥-氯化钠缓冲液使用过程中不能用力振摇混匀，而是缓慢反复 倒置2~3次即可。4. 根据权利要求3所述的尿激酶冻干剂的制备方法，其特征在于，气泡上升法进行终 点判断时，在效价测试系统中装入一倾斜放置的白炽灯，加入所有溶液后，反应系统中的溶 液在30~40秒内凝结成块，通过白炽灯的灯光照射待检溶液时产生的反射光将气泡照亮 放大来观察到小气泡出现的时间，当凝块内小气泡上升到反应系统体积一半时作为反应终 点，立即计时。
【专利摘要】本发明公开了一种尿激酶冻干剂的制备方法，制剂配方包括尿激酶、人血白蛋白、氯化钠、甘露醇和注射用水，制备步骤包括：制备辅料溶液：注射用水搅拌状态下加入氯化钠、甘露醇至溶解；加入活性炭吸附，脱炭后降温至10℃以下；搅拌加入人血白蛋白溶解，加入尿激酶，溶有尿激酶的溶液用滤膜过滤，进行灌装入瓶和半加塞后，冻干，冻干完毕后压紧瓶塞，缓慢放掉真空，出柜，压盖，目检，包装，全检。本发明的制备方法通过低温配料提高效价，制备过程使用特制的低温配料装置；人血白蛋白的加入会引起溶液起泡，降低成品的收率，通过磁力搅拌能够减少起泡提高收率；另外对效价测定过程中的装置及方法进行了优化。
【IPC分类】A61J3/02, A61K47/42, A61K9/19, A61P9/10, A61P7/02, A61K38/49
【公开号】CN104906054
【申请号】CN201510326053
【发明人】刘艳红, 唐维, 刘红华, 方智
【申请人】武汉人福药业有限责任公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年6月15日
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药技术领域，特别是涉及一种尿激酶冻干剂的制备方法。
【背景技术】
[0002] 尿激酶临床主要用于血栓栓塞性疾病的溶栓治疗。包括急性广泛性肺栓塞、胸痛 6~12小时内的冠状动脉栓塞和心肌梗死、症状短于3~6小时的急性期脑血管栓塞、视网 膜动脉栓塞和其他外周动脉栓塞症状严重的骼股静脉血栓形成者。也用于人工心瓣手术后 预防血栓形成，保持血管插管和胸腔及心包腔引流管的通畅等。溶栓的疗效均需后继的肝 素抗凝加以维持。
[0003] 尿激酶是由新鲜的人尿中分离精制而得的一种蛋白质酶，一般为白色或类白色的 冻干块状物或粉末。主要制成酶类溶血栓药。它能激活体内纤溶酶原转为纤溶酶，从而水 解纤维蛋白使新形成的血栓溶解。
[0004] 尿激酶冻干制剂的生产，目前存在的问题在于成品效价下降和收率较低。尿激酶 原料稳定性差，其对温度敏感，常温（10°c~30°C)或高温（30°C以上）下配料，成品效价显 著降低，即使在低温下，其效价也会缓慢下降。人血白蛋白作为保护剂，能有效降低成品效 价下降的速度，但生产过程中会因搅拌引起药液起泡，造成药液损失，从而导致收率下降。 尿激酶原料为冻干获得的粉末，该粉末在低温溶液中溶解速度较慢，且加入后会形成块状 沉在配料罐底部。目前工业上常用的搅拌形式有机械搅拌和磁力搅拌，如通过机械搅拌需 耗费较长时间原料才得以溶解，长时间的搅拌会增加原料效价的损失，且增加药液的起泡 量影响收率。
【发明内容】
[0005] 为了解决上述技术问题，本发明提供了一种尿激酶冻干剂的制备方法。
[0006] 本发明提供的尿激酶冻干剂的制备方法，制剂配方包括尿激酶、人血白蛋白、氯化 钠、甘露醇和注射用水，制备步骤如下：
[0007] (1)制备辅料溶液：配料容器中加入注射用水，搅拌状态下加入氯化钠、甘露醇， 搅拌至溶解；再加入体积比〇. 1%~〇. 3%的经注射用水润湿的767型针剂用活性炭，80°C 以上搅拌，保温静置吸附10~30min，脱炭；所得料液通过压缩空气进入低温配料系统中， 设定低温配料系统温度使溶液降温至l〇°C以下；
[0008] 所述低温配料系统包括一冷藏箱，冷藏箱内放置一设有进料口和出料口的配料 罐，配料罐底部配有磁力搅拌装置，料液由配料罐的出料口经空气压缩泵送入除菌过滤系 统，除菌过滤系统连接低温锥形周转罐，周转罐中的溶液通过蠕动泵进行灌装；
[0009] (2)制备主药溶液：待料液温度在KTC以下，开启低温配料系统的磁力搅拌装置， 搅拌状态下加入人血白蛋白，继续搅拌至溶解完全；所得产品取出部分用于饱和滤膜，剩余 部分加入尿激酶搅拌至溶解完全后补足溶剂，溶有尿激酶的溶液用上述饱和滤膜过滤；
[0010] (3)过滤后的溶液依次进行灌装入瓶和半加塞后，冻干；
[0011] 冻干条件：-40°C以下预冻3~4小时；然后在-10°c~0°C升华干燥16. 5~17. 5 小时；再升温至20°C，解析干燥5~6小时；
[0012] (4)冻干完毕后压紧瓶塞，缓慢放掉真空，出柜，压盖，目检，包装，全检。
[0013] 其中，除菌过滤系统为平板过滤器。
[0014] 本发明的上述方法将配料过程分为制备辅料溶液和制备主药溶液两个步骤，其中 高温下制备辅料溶液，低温下在特制的低温配料系统中制备主药溶液。
[0015] 制备主药溶液通过在特制的低温配料系统中进行，缩短药液搅拌时间，减少了药 液的起泡量以及降低了原料效价的损失，从而达到提高收率和提高成品效价的目的。
[0016] 通过将搅拌方式由机械搅拌变为磁力搅拌，可以更好的促使尿激酶原料粉末的溶 解，减少搅拌时间，从而降低原料效价的损失并减少药液的起泡量，达到提高成品效价和提 高收率的目的。
[0017] 优选地，所述制剂配方中，尿激酶1~150万单位/mL;人血白蛋白4~8mg/mL;氯 化纳 5 ~10mg/mL;甘露醇 0? 05 ~0? 15g/mL。
[0018] 优选地，步骤（4)所述的全检包括气泡上升法测定尿激酶效价，测定所需溶液的 配制时间先后排序如下：
[0019] (I)PH 7. 8的巴比妥-氯化钠缓冲液，配制后静置10小时以上；
[0020] (2)pH9.O的三羟甲基氨基甲烷缓冲液；
[0021] (3)牛纤维蛋白原溶液；
[0022] (4)牛纤维蛋白溶酶原溶液；
[0023] (5)牛凝血酶溶液；
[0024] 其中，pH7. 8的巴比妥-氯化钠缓冲液使用过程中不能用力振摇混勾，而是缓慢 反复倒置2~3次即可。
[0025] 在效价测定过程中，涉及到五种溶液的配制，分别为（1)巴比妥_氯化钠缓冲液 (PH7. 8)、（2)三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH9.0)、（3)牛纤维蛋白原溶液、（4)牛纤维蛋白 溶酶原溶液、（5)牛凝血酶溶液。其中，巴比妥溶液粘稠度较大，容易起泡影响结果判定，配 置后需要静置10小时以上，使用过程中不能用力振摇混匀，而是缓慢反复倒置2~3次即 可；牛凝血酶溶液随着时间延长，其凝血效果明显下降，会导致成品效价出现较大偏差，必 须用前现配。因此，上述溶液必须按照顺序进行配置，顺序为（1) (2) (3) (4) (5)，将溶解速度 慢、稳定性相对较好的溶液先行配置，牛凝血酶溶液必须最后配制，以保证其在有限时间内 的凝血效果，从而保证测定结果的准确，不会因为个别溶液的配制导致产品效价出现偏差。
[0026]因尿激酶的不稳定性以及反应的特殊性，尿激酶冻干制剂效价测定过程中，我们 对测试装置及检测方法进行了优化，能够保证尿激酶的活性以及测定结果的准确性。
[0027] 优选地，气泡上升法进行终点判断时，在效价测试系统中装入一倾斜放置的白炽 灯，加入所有溶液后，反应系统中的溶液在30~40秒内凝结成块，通过白炽灯的灯光照射 待检溶液时产生的反射光将气泡照亮放大来观察到小气泡出现的时间，当凝块内小气泡上 升到反应系统体积一半时作为反应终点，立即计时。
[0028]目前尿激酶冻干制剂效价的测定，没有通用的检测设备，采用气泡上升法进行终 点判断。反应原理为，加入所有溶液后，反应系统在30~40秒内凝结，当凝块内小气泡上 升到反应系统体积一半时作为反应终点，立即计时。但由于气泡很小，出现气泡的时间点很 难掌控，导致实验结果出现很大偏差。
[0029] 为了解决上述问题，实验过程中做了如下改进：在该特定的测试系统中，装入一倾 斜放置的白炽灯，通过白炽灯的灯光反射，反射光可以将气泡照亮放大，能清晰的观察到小 气泡出现的时间，便于立即计时，使得实验结果的精确度大大提高。
[0030] 本发明具有以下有益效果：
[0031] 本发明提供的制备方法，创新点主要体现在以下四点：（1)通过低温配料能够提 高效价；将药液配制过程分为制备辅料溶液和制备主药溶液两个步骤，高温下制备辅料溶 液，低温下在特制的低温配料系统中制备主药溶液，减少搅拌时间，有效的降低蛋白质变 性，提高成品的收率和效价。（2)特制的低温配料装置；(3)人血白蛋白的加入会引起溶液 起泡，降低成品的收率，通过磁力搅拌能够减少起泡提高收率；(4)效价测定过程中装置及 方法的优化。
【附图说明】
[0032] 图1为本发明低温配料系统的一种结构示意图。
【具体实施方式】
[0033] 下面结合实施例，对本发明的【具体实施方式】作进一步详细描述，以使本领域的技 术人员可以更好地理解本发明并能予以实施。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制 本发明的范围。
[0034] 实施例1 :
[0035] 1000个制剂单位尿激酶冻干制剂的成分及用量：
[0036]
[0037] 制备过程：
[0038] 1、药液配制
[0039] I. 1制备辅料溶液：于配料桶中加入750mL的新鲜注射用水，搅拌状态下依次加入 5. Og氯化钠、50g甘露醇，搅拌至溶解。
[0040] 1. 2活性炭吸附及脱炭：加入I.Og767型针剂用活性炭（用注射用水润湿），80°C 以上保温、搅拌10分钟，静置吸附10分钟，脱炭。脱炭后的料液通过压缩空气进入特制的 低温配料系统中（系统结构示意见图1)，设定低温配料系统温度2°C，使料液降温至KTC以 下。
[0041] 所述低温配料系统包括一冷藏箱，冷藏箱内放置一设有进料口和出料口的配料 罐，配料罐底部配有磁力搅拌装置，料液由配料罐的出料口经空气压缩泵送入除菌过滤系 统，除菌过滤系统连接低温锥形周转罐，周转罐中的溶液通过蠕动泵进行灌装。
[0042] 1. 3制备主药溶液：待料液温度在KTC以下，开启低温配料系统的磁力搅拌，加入 4.Og人血白蛋白，搅拌至溶解均匀。以一定体积上述溶液饱和滤膜，加入I. 0亿单位的尿激 酶，搅拌至溶解。补足注射用水（l〇°C以下），用饱和过的滤膜过滤。
[0043] 2、测定中间体溶液、灌装，分装成1000瓶。
[0044] 3、冻干：将灌装好的产品放入冻干机，于-40 °C以下，预冻3~4小时；然后 在-KTC~0°C，升华干燥17小时左右；再升温至20 °C，解析干燥5~6小时。
[0045] 4、压塞及轧盖：冻干结束，压塞，乳盖，目检，包装，全检。
[0046] 本实施例的产品具有如下优点：一、低温下配制主药溶液，有效降低了蛋白质的变 性，提高成品效价。二、搅拌方式为磁力搅拌，减少搅拌时间，从而减少药液的起泡量并降低 原料效价的损失，提尚收率和提尚了成品的效价。
[0047] 实施例2 :
[0048] 1000个制剂单位尿激酶冻干制剂的成分及用量：
[0049]
[0050] 制备过程：
[0051] 1、药液配制
[0052] I. 1制备辅料溶液：于配料桶中加入850mL的新鲜注射用水，搅拌状态下依次加入 7.Og氯化钠、100g甘露醇，搅拌至溶解。
[0053] 1. 2活性炭吸附及脱炭：加入2.Og767型针剂用活性炭（用注射用水润湿），80°C 以上保温，搅拌20分钟，静置吸附20分钟，脱炭。脱炭后的料液通过压缩空气进入特制的 低温配料系统中（系统结构示意见图1)，设定低温配料系统温度2°C，使料液降温至KTC以 下。
[0054] 1. 3制备主药溶液：待料液温度在KTC以下，开启低温配料系统的磁力搅拌，加入 6.Og人血白蛋白，搅拌至溶解均匀。以一定体积上述溶液饱和滤膜，加入I. 1亿单位的尿激 酶，搅拌至溶解。补足注射用水（l〇°C以下），用饱和过的滤膜过滤。
[0055] 2、测定中间体溶液、灌装，分装成1000瓶。
[0056] 3、冻干：将灌装好的产品放入冻干机，于-40 °C以下，预冻3~4小时；然后 在-KTC~0°C，升华干燥17小时左右；再升温至20°C，解析干燥5~6小时。
[0057] 4、压塞及轧盖：冻干结束，压塞，乳盖，目检，包装，全检。
[0058]本实施例的产品具有如下优点：一、低温下配制主药溶液，有效的降低了蛋白质的 变性，提高成品效价。二、搅拌方式为磁力搅拌，减少搅拌时间，从而减少药液的起泡量并降 低原料效价的损失，提尚收率和提尚了成品的效价。
[0059] 实施例3 :
[0060] 1000个制剂单位尿激酶冻干制剂的成分及用量：
[0061]
[0062] 制备过程：
[0063] 1、药液配制
[0064] I. 1制备辅料溶液：于配料桶中加入950mL的新鲜注射用水，搅拌状态下依次加入 10.0 g氯化钠、150g甘露醇，搅拌至溶解。
[0065] 1. 2活性炭吸附及脱炭：加入3. Og 767型针剂用活性炭（用注射用水润湿），80°C 以上保温，搅拌40分钟，静置吸附30分钟，脱炭。脱炭后的料液通过压缩空气进入特制的 低温配料系统中（系统结构示意见图1)，设定低温配料系统温度2°C，使料液降温至KTC以 下。
[0066] 1. 3制备主药溶液：待料液温度在KTC以下，开启低温配料系统的磁力搅拌，加入 8. Og人血白蛋白，搅拌至溶解均匀。以一定体积上述溶液饱和滤膜，加入1. 3亿单位的尿激 酶，搅拌至溶解。补足注射用水（l〇°C以下），用饱和过的滤膜过滤。
[0067] 2、测定中间体溶液、灌装，分装成1000瓶。
[0068] 3、冻干：将灌装好的产品放入冻干机，于-40 °C以下，预冻3~4小时；然后 在-KTC~0°C，升华干燥17小时左右；再升温至20°C，解析干燥5~6小时。
[0069] 4、压塞及轧盖：冻干结束，压塞，乳盖，目检，包装，全检。
[0070] 本实施例的产品具有如下优点：一、低温下配制主药溶液，有效的降低了蛋白质的 变性，提高成品效价。二、搅拌方式为磁力搅拌，减少搅拌时间，从而减少药液的起泡量并降 低原料效价的损失，提尚收率和提尚了成品的效价。
[0071] 实施例4:
[0072] 1000个制剂单位尿激酶冻干制剂的成分及用量：
[0073]
[0074] 制备过程：
[0075] 1、药液配制
[0076] I. 1制备辅料溶液：于配料桶中加入850mL的新鲜注射用水，搅拌状态下依次加入 8. Og氯化钠、100g甘露醇，搅拌至溶解。
[0077] 1.2活性炭吸附及脱炭：加入2. Og 767型针剂用活性炭（用注射用水润湿），80°C 以上保温，搅拌20分钟，静置吸附20分钟，脱炭。脱炭后的料液通过压缩空气进入特制的 低温配料系统中（系统结构示意见图1)，设定低温配料系统温度2°C，使料液降温至KTC以 下。
[0078] 1. 3制备主药溶液：待料液温度在KTC以下，开启低温配料系统的磁力搅拌，加入 6. Og人血白蛋白，搅拌至溶解均匀。以一定体积上述溶液饱和滤膜，加入6亿单位的尿激 酶，搅拌至溶解。补足注射用水（l〇°C以下），用饱和过的滤膜过滤。
[0079] 2、测定中间体溶液、灌装，分装成1000瓶。
[0080] 3、冻干：将灌装好的产品放入冻干机，于-40 °C以下，预冻3~4小时；然后 在-KTC~0°C，升华干燥17小时左右；再升温至20°C，解析干燥5~6小时。
[0081] 4、压塞及轧盖：冻干结束，压塞，乳盖，目检，包装，全检。
[0082] 本实施例的产品具有如下优点：一、低温下配制主药溶液，有效的降低了蛋白质的 变性，提高成品效价。二、搅拌方式为磁力搅拌，减少搅拌时间，从而减少药液的起泡量并降 低原料效价的损失，提尚收率和提尚了成品的效价。
[0083] 实施例5 :
[0084] 1000个制剂单位尿激酶冻干制剂的成分及用量：
[0085]
[0086] 制备过程：
[0087] 1、药液配制
[0088] I. 1制备辅料溶液：于配料桶中加入850mL的新鲜注射用水，搅拌状态下依次加入 7. Og氯化钠、100g甘露醇，搅拌至溶解。
[0089] 1. 2活性炭吸附及脱炭：加入2. Og 767型针剂用活性炭（用注射用水润湿），80°C 以上保温，搅拌20分钟，静置吸附20分钟，脱炭。
[0090] 1. 3制备主药溶液：脱炭后的料液降温至常温（KTC~30°C)，随后加入6. Og人血 白蛋白，搅拌至溶解均匀。以一定体积上述溶液饱和滤膜，加入I. 1亿单位的尿激酶，搅拌 至溶解。补足降至常温（10°c~30°C)的注射用水，用饱和过的滤膜过滤。
[0091] 2、测定中间体溶液、灌装，分装成1000瓶。
[0092]3、冻干：将灌装好的产品放入冻干机，于-40 °C以下，预冻3~4小时；然后 在-KTC~O°C，升华干燥17小时左右；再升温至20°C，解析干燥5~6小时。
[0093] 4、压塞及轧盖：冻干结束，压塞，乳盖，目检，包装，全检。
[0094] 实施例6 :
[0095] 1000个制剂单位尿激酶冻干制剂的成分及用量：
[0096]
[0097] 制备过程：
[0098] 1、药液配制
[0099]I. 1制备辅料溶液：于配料桶中加入950mL的新鲜注射用水，搅拌状态下依次加入 10.Og氯化钠、150g甘露醇，搅拌至溶解。
[0100] 1.2活性炭吸附及脱炭：加入3.Og767型针剂用活性炭（用注射用水润湿），80°C 以上保温，搅拌40分钟，静置吸附30分钟，脱炭。
[0101] 1.3制备主药溶液：脱炭后的料液降温至30°C以上，随后加入8.Og人血白蛋白，搅 拌至溶解均匀。以一定体积上述溶液饱和滤膜，加入1.3亿单位的尿激酶，搅拌至溶解。补 足30°C以上的注射用水，用饱和过的滤膜过滤。
[0102] 2、测定中间体溶液、灌装，分装成1000瓶。
[0103] 3、冻干：将灌装好的产品放入冻干机，于-40°C以下，预冻3~4小时；然后 在-KTC~0°C，升华干燥17小时左右；再升温至20°C，解析干燥5~6小时。
[0104] 4、压塞及轧盖：冻干结束，压塞，乳盖，目检，包装，全检。
[0105] 实施例7 :
[0106] 1000个制剂单位尿激酶冻干制剂的成分及用量：
[0107]
[0108] 制备过程：
[0109] 1、药液配制
[0110] I. 1制备辅料溶液：于配料桶中加入850mL的新鲜注射用水，搅拌状态下依次加入 7.Og氯化钠、80g甘露醇，搅拌至溶解。
[0111] 1.2活性炭吸附及脱炭：加入2.Og767型针剂用活性炭（用注射用水润湿），80°C 以上保温，搅拌20分钟，静置吸附20分钟，脱炭。脱炭后的料液通过压缩空气进入低温配 料系统中，设定低温配料系统温度2°C，使料液降温至KTC以下。
[0112] 1. 3制备主药溶液：待料液温度在KTC以下，开启低温配料系统的转浆搅拌，加入 7.Og人血白蛋白，搅拌至溶解均匀。以一定体积上述溶液饱和滤膜，加入1. 3亿单位的尿激 酶，搅拌至溶解。补足注射用水（l〇°C以下），用饱和过的滤膜过滤。
[0113] 2、测定中间体溶液、灌装，分装成1000瓶。
[0114] 3、冻干：将灌装好的产品放入冻干机，于-4 0°C以下，预冻3~4小时；然后 在-KTC~0°C，升华干燥17小时左右；再升温至20°C，解析干燥5~6小时。
[0115] 4、压塞及轧盖：冻干结束，压塞，乳盖，目检，包装，全检。
[0116] 全检中包括效价检测，使用的检测装置是恒温水浴箱（透明材质），检测步骤如 下：（1)配制试剂溶液备用；（2)配制标准品溶液；（3)配制供试品溶液；⑷测试样品；（5) 结果处理。具体检测过程如下：
[0117] (1)配制试剂溶液：
[0118] 巴比妥-氯化钠缓冲液（pH7. 8):取巴比妥钠5. 05g，加氯化钠3. 7g及水适量使溶 解，另取明胶0. 5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中，然后用0. 2mol/L盐酸溶液调节 pH值至7. 8,再用水稀释至500mL，即得。
[0119] 三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH9.0):取三羟甲基氨基甲烷6. 06g，加盐酸赖氨酸 3. 65g、氯化钠5. 8g、乙二胺四醋酸二钠0. 37g，再加水溶解使成lOOOmL，调节pH值至9. 0， 即得。
[0120] 牛纤维蛋白原溶液：取牛纤维蛋白原，加巴比妥-氯化钠缓冲液（pH7. 8)制成每 ImL中含6. 67mg可凝结蛋白的溶液。
[0121] 牛纤维蛋白溶酶原溶液：取牛纤维蛋白溶酶原，加三烃甲基氨基甲烷缓冲液 (pH9. 0)制成每ImL中含1~1. 4酪蛋白单位的溶液（如溶液浑浊，离心，取上清液备用）。
[0122] 牛凝血酶溶液：取牛凝血酶，加巴比妥-氯化钠缓冲液（pH7. 8)制成每ImL中含 6. 0单位的溶液。
[0123] 混合溶液：临用前取等体积的牛凝血酶溶液和牛纤维蛋白溶酶原溶液，混匀。
[0124] (2)配制标准品溶液：取尿激酶标准品，加巴比妥-氯化钠缓冲液（pH7.8)溶解并 定量稀释制成每ImL中含60单位的溶液。
[0125] (3)配制供试品溶液：取供试品（注射用尿激酶）适量，加巴比妥-氯化钠缓冲液 (pH7. 8)溶解，混匀，并定量稀释制成每ImL中含60单位的溶液。
[0126] ⑷测试样品：
[0127] 取8支试管，各加牛纤维蛋白原溶液0. 3mL，至37°C±0. 5°C水浴中，按下表分别加 入巴比妥-氯化钠缓冲液（PH7. 8)，并依次加入样品，再分别加混合溶液0. 4mL，立即摇匀， 分别计时。反应系统应在30~40秒内凝结，当凝块内小气泡上升到反应系统体积一半时 作为反应终点，立即计时。
[0128]
[0129] 备注：8支试管分别标记为对照①、对照②、对照③、对照④以及供试①、供试②、 供试③、供试④；对照①-④涉及的样品为标准品溶液；供试①-④涉及的样品为供试品溶 液（即实施例1~4的产品）。
[0130] (5)结果处理：
[0131] 以尿激酶浓度的对数为横坐标，以反应终点时间与入水浴的时间的差值的对数为 纵坐标，进行线性回归。供试品按上法测定，用线性回归方程求得效价，计算每Img中供试 品的效价（单位）。
[0132] 实施例1至实施例7,成品的收率见表1。结果表明，实施例1至实施例4的收率 明显高于实施例7,且相对于实施例5和实施例6也有所提高。即采取本发明的方法能有效 的提尚成品的收率。
[0133]表1
[0134]
[0135] 取实施例1至实施例4制备的尿激酶冻干制剂，对装置及测定方法进行比较，结果 见表2。结果表明，在特定的效价测定装置中，相对标准偏差（RSD)数值远小于非特定装置， 效价检测结果更加准确且测定值更稳定。
[0136]表 2
[0139] 备注：特定装置为添加了白炽灯的效价测试系统，非特定装置为未添加白炽灯的 效价测试系统。
[0140] 按照检验标准，对实施例1至实施例7的产品进行全检，全检结果见表3。上述全 检结果表明，实施例1至实施例4的产品效价明显高于实施例5和实施例6,且相对实施例 7也有$父大提尚。即米取本发明的方法能有效的提尚成品的效价。
[0141]表 3
[0142]
[0143] 同时对上述实施例1至实施例4的产品进行加速考察，置温度25°C±2 °C，相对湿 度65% ±5%的恒温恒湿培养箱里放置6个月，于放置1、2、3、6个月末各取一次样，对产品 的各项指标进行考察，产品的加速试验结果见表4。上述加速试验考察表明，本发明所提供 的广品稳定性好，能有效提尚广品的临床用药安全。
[0144]表 4
[0145]
[0147] 总结：采用本发明的方法制备尿激酶冻干剂，具有提高收率和产品效价的优势。具 体对比数据见下表5.
[0148] 表 5
[0149]
[0150] 备注：实施例1~4,是上述采用本发明方法的制备实施例；实施例5~6,分别是 常温和高温，不是使用的低温配料系统；实施例7,涉及到了低温配料系统，但是，系统中不 设磁力搅拌方式，而是以机械（搅拌桨）搅拌方式。
[0151] 也就是实施例1~4采用低温配料系统（磁力搅拌），具有提高收率和效价优势， 而实施例5~7不完全是本系统。可以看出本发明的制备方法具备创造性。
[0152] 以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范 围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明 的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。
【主权项】
1. 一种尿激酶冻干剂的制备方法，其特征在于，制剂配方包括尿激酶、人血白蛋白、氯 化钠、甘露醇和注射用水，制备步骤如下： (1) 制备辅料溶液：配料容器中加入注射用水，搅拌状态下加入氯化钠、甘露醇，搅拌 至溶解；再加入体积比0. 1 %~0. 3%的经注射用水润湿的767型针剂用活性炭，80°C以上 搅拌，保温静置吸附10~30min，脱炭；所得料液通过压缩空气进入低温配料系统中，设定 低温配料系统温度使溶液降温至KTC以下； 所述低温配料系统包括一冷藏箱，冷藏箱内放置一设有进料口和出料口的配料罐，配 料罐底部配有磁力搅拌装置，料液由配料罐的出料口经空气压缩泵送入除菌过滤系统，除 菌过滤系统连接低温锥形周转罐，周转罐中的溶液通过蠕动泵进行灌装； (2) 制备主药溶液：待料液温度在KTC以下，开启低温配料系统的磁力搅拌装置，搅拌 状态下加入人血白蛋白，持续搅拌至溶解完全；所得产品取出部分用于饱和滤膜，剩余部分 加入尿激酶搅拌至溶解完全后补足溶剂，溶有尿激酶的溶液用上述饱和滤膜过滤； (3) 过滤后的溶液依次进行灌装入瓶和半加塞后，冻干； 冻干条件：_40°C以下预冻3~4小时；然后在-KTC~0°C升华干燥16. 5~17. 5小 时；再升温至20°C，解析干燥5~6小时； (4) 冻干完毕后压紧瓶塞，缓慢放掉真空，出柜，压盖，目检，包装，全检。2. 根据权利要求1所述的尿激酶冻干剂的制备方法，其特征在于，所述制剂配方中，尿 激酶1~150万单位/mL;人血白蛋白4~8mg/mL;氯化钠5~lOmg/mL;甘露醇0. 05~ 0?15g/mL〇3. 根据权利要求1或2所述的尿激酶冻干剂的制备方法，其特征在于，步骤（4)所述的 全检包括气泡上升法测定尿激酶效价，测定所需溶液的配制时间先后排序如下： (1)PH7. 8的巴比妥-氯化钠缓冲液，配制后静置10小时以上； (2)pH9. 0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液； (3) 牛纤维蛋白原溶液； (4) 牛纤维蛋白溶酶原溶液； (5) 牛凝血酶溶液； 其中，pH7.8的巴比妥-氯化钠缓冲液使用过程中不能用力振摇混匀，而是缓慢反复 倒置2~3次即可。4. 根据权利要求3所述的尿激酶冻干剂的制备方法，其特征在于，气泡上升法进行终 点判断时，在效价测试系统中装入一倾斜放置的白炽灯，加入所有溶液后，反应系统中的溶 液在30~40秒内凝结成块，通过白炽灯的灯光照射待检溶液时产生的反射光将气泡照亮 放大来观察到小气泡出现的时间，当凝块内小气泡上升到反应系统体积一半时作为反应终 点，立即计时。
【专利摘要】本发明公开了一种尿激酶冻干剂的制备方法，制剂配方包括尿激酶、人血白蛋白、氯化钠、甘露醇和注射用水，制备步骤包括：制备辅料溶液：注射用水搅拌状态下加入氯化钠、甘露醇至溶解；加入活性炭吸附，脱炭后降温至10℃以下；搅拌加入人血白蛋白溶解，加入尿激酶，溶有尿激酶的溶液用滤膜过滤，进行灌装入瓶和半加塞后，冻干，冻干完毕后压紧瓶塞，缓慢放掉真空，出柜，压盖，目检，包装，全检。本发明的制备方法通过低温配料提高效价，制备过程使用特制的低温配料装置；人血白蛋白的加入会引起溶液起泡，降低成品的收率，通过磁力搅拌能够减少起泡提高收率；另外对效价测定过程中的装置及方法进行了优化。
【IPC分类】A61J3/02, A61K47/42, A61K9/19, A61P9/10, A61P7/02, A61K38/49
【公开号】CN104906054
【申请号】CN201510326053
【发明人】刘艳红, 唐维, 刘红华, 方智
【申请人】武汉人福药业有限责任公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年6月15日
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