环烯醚萜类化合物的新用图
环烯醚萜类化合物的新用图
【专利说明】环烯醚萜类化合物的新用途 技术领域
[0001] 本发明涉及一种环烯醚萜类化合物的新用途。 【背景技术】
[0002] 蜘蛛香曾载于《本草纲目》，曰："蜘蛛香出蜀西茂松藩山中。草根也，黑色有粗 须，状如蜘蛛及藁本，芎穷，气味芳香"。为1977版中国药典（一部）和2010版中国药 典（一部）所收载，又名马蹄香、鬼见愁、雷公七、臭药等。中药蜘蛛香的基源为败酱科 (Valerianaceae)缴草属（ValerianaLinn)植物蜘蛛香（ValerianajatamansiJones)的 干燥根茎。2010版《中国药典（一部）》药典称其微苦，辛、温；功能理气止痛、消食止泻、 祛风除湿、镇静安神；用于脘腹胀痛，食积不化，腹泻痢疾，风湿痹痛，腰膝酸软，失眠。"蜘蛛 香在我国主要分布于湖北、湖南、陕西、河南、广西、四川、贵州、云南等省，一般生长于海拔 1900-2700m的高原地区。
[0003] 迄今国内外对蜘蛛香的研宄表明，该植物主要含有环烯醚萜类、挥发油类、黄酮 类、生物碱类、木脂素类等成分。其中生物碱类成分和黄酮类成分多存在于蜘蛛香地上部 分，而环烯醚萜和倍半萜等萜类成分多存在于根部，其中倍半萜和其它单萜在根部的挥发 油中含量较多。其药理作用现代研宄发现具有抗焦虑、镇静催眠、降压、解痉、心脏抑制、抗 肿瘤、抗菌抗病毒等作用。如专利【申请号】200810207746. 4,发明名称：母核共轭的环烯醚 猫类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，具体涉及母核共轭的环稀醚猫类化合物在制备抗 肿瘤药物中的应用。该专利从蜘蛛香中分离的环烯醚萜类化合物母核为C3-4，C5-6号位的 双键耦合，且Cll位为饱和碳原子连接取代基，与母核形成共轭。
【发明内容】
[0004] 发明人在针对蜘蛛香的系统化学成分研宄中，分离鉴定了一个结构式1的新环烯 醚萜类化合物。药理活性研宄结果表明，结构式1化合物具有良好的促脂质代谢作用。
[0005] 本发明提供了环烯醚萜类化合物在制备促脂质代谢的药物中的用途，环烯醚萜类 化合物的结构式如下：
[0006]
[0007] 其中，Rl为异戊酰基、乙酰基；R7为异戊酰氧基、乙酰氧基、羟基或氢；R8为乙酰 基、异戊酰基；RlO为羟基、氯原子。
[0008] 进一步优选地，所述的Rl为异戊酰基，R7为氢，R8为乙酰基，RlO为羟基。
[0009] 进一步优选地，所述的化合物如式1所示：
[0010]
[0011] 其中，所述的药物是治疗高脂血症、脂肪肝、肥胖或高脂血症所引发的动脉粥样硬 化、乳糜微粒血症、急性胰腺炎疾病的药物。
[0012] 其中，环烯醚萜类化合物的提取分离方法包括以下步骤：
[0013] (1)蜘蛛香干燥根茎粉末为原料，乙醇冷浸提取，回收溶剂，得浸膏；
[0014] (2)将浸膏用蒸馏水溶解，依次用石油醚、乙酸乙醋、正丁醇分别萃取，得乙酸乙酯 萃取物；
[0015] (3)将乙酸乙酯萃取物用硅胶柱层析，以氯仿-甲醇系统梯度洗脱（100:0,99:1， 98:2-90:10,8:1，7:1-1:1，0:1)，每个梯度约2倍柱体积；对各馏分利用薄层色谱检识，以 7%浓硫酸乙醇显色，其中，在氯仿-甲醇比例为93:7-90:10梯度的馏分化学成分相似，显 黑色点，合并得到馏分3;
[0016] (4)其中馏分3再用硅胶柱层析，以石油醚-丙酮系统梯度洗脱（30:1，20:1， 15:1，10:1，9:1-1:1)，每个梯度约2倍柱体积；对各馏分利用薄层色谱检识，以7%浓硫酸 乙醇显色，其中，石油醚-丙酮比例在8:1-7:1梯度的馏分化学成分相似，先显褐色后变黑， 合并得到馏分D;
[0017] (5)其中馏分D再经硅胶柱层析，用石油醚-丙酮系统梯度洗脱（20:1，15:1， 10:1，9:1，8:1-1:1)，每个梯度约3倍柱体积对各馏分利用薄层色谱检识，以7%浓硫酸乙 醇显色，其中，石油醚-丙酮比例在10:1-9:1梯度的馏分化学成分相似，先显褐色后变黑， 合并得到馏分D2;
[0018] (6)取D2馏分用葡聚糖凝胶LH-20柱层析，以氯仿-甲醇（1:1)洗脱；后对各馏 分利用薄层色谱检识，以7%浓硫酸乙醇显色，对先显褐色后变黑色的部分馏分进行合并， 得馏分D2-2;
[0019] (7)其中D2-2再经葡聚糖凝胶LH-20柱，纯甲醇洗脱；对各馏分利用薄层色谱检 识，以7%浓硫酸乙醇显色，将含先显褐色后变黑色的成分的部分馏分，且含其他杂质少的 若干馏分合并，得馏分D2-2-1;
[0020] (8)取D2-2-1再经硅胶柱层析，以石油醚-丙酮系统（5:1)等度洗脱，去除色素， 再将在薄层色谱上，以7%浓硫酸乙醇显色，将含先显褐色后变黑色的成分的馏分合并；过 夜自然挥干溶剂，得淡黄色结晶；
[0021] (9)将淡黄色结晶在石油醚-丙酮（15:1)中重结晶，得到白色结晶，即为结构式为 1的新化合物。
[0022] 其中，所述的药物制剂是片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、注射液、粉针 剂、滴丸剂。
[0023] 本发明化合物中环烯醚萜母核中C-Il号位为一醛基，并与母核上C4-5，C6_7形成 共轭，与其他报道的环烯醚萜化合物相比，在共轭体系及Cll为关键醛基上存在很大的差 异。本发明化合物具有促脂质代谢的作用，降低细胞内TG的作用最强。
[0024] 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0025] 以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围。 【具体实施方式】 【附图说明】：
[0026] 图1:结构式1化合物的高分辨质谱。
[0027] 图2:结构式1化合物的氢谱。
[0028] 图3:结构式1化合物的碳谱。
[0029] 图4:结构式1化合物的HSQC谱
[0030] 图5:结构式1化合物的HMBC谱。
[0031] 图6:结构式1化合物的ROESY谱。
[0032] 图7:结构式1化合物的UV谱。
[0033] 图8:结构式1化合物的IR谱。
[0034] 图9:结构式1化合物的结构。
[0035] 具体实施方案：
[0036] 实施例1本发明环烯醚萜类新化合物的制备
[0037] 结构式1化合物的制备
[0038] 以蜘蛛香（ValerianajatamansiJones)干燥根莖粉末（20kg)为原料，经用95% 工业乙醇冷浸提取4次，每次24h，提取液经减压浓缩得4. 2kg褐色粘稠状浸膏。浸膏用蒸 馏水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到石油醚部位浸膏约600g、乙酸乙酯 浸膏550g、正丁醇浸膏1000g。取乙酸乙酯萃取物550g。经硅胶（100-200目）柱层析， 以氯仿-甲醇系统梯度洗脱（100 :〇, 99:1，98:2, -90:10,8:1，7:1，-1:1，0:1))，每个梯度 2倍柱体积；对各馏分利用薄层色谱检识，以7%浓硫酸乙醇显色，其中，在氯仿-甲醇比例 为93:7-90:10梯度的馏分化学成分相似，显黑色点，合并得到馏分3,其中馏分3 (120g)再 次用硅胶（100-200目）柱层析，以石油醚-丙酮系统梯度洗脱（30:1，20:1，15:1，10:1， 9:1，-1:1)，每个梯度约2倍柱体积；对各馏分利用薄层色谱检识，以7%浓硫酸乙醇显色， 其中，石油醚-丙酮比例在8:1-7:1梯度的馏分化学成分相似，先显褐色后变黑，合并得到 馏分D。其中D馏分（25g)再经硅胶柱层析，用石油醚-丙酮系统（20:1，15:1，10:1，9:1， 8:1，-1:1)梯度洗脱，每个梯度约3倍柱体积对各馏分利用薄层色谱检识，以7%浓硫酸乙 醇显色，其中，石油醚-丙酮比例在10:1-9:1梯度的馏分化学成分相似，先显褐色后变黑， 合并得到馏分D2 ;取D2馏分（5. 9g)用葡聚糖凝胶LH-20柱层析，以氯仿-甲醇（I: 1)洗 脱，后对各馏分利用薄层色谱检识，以7%浓硫酸乙醇显色，对先显褐色后变黑色的部分馏 分进行合并，得馏分D2-2 ;其中D2-2再经葡聚糖凝胶LH-20柱，甲醇洗脱，对各馏分利用薄 层色谱检识，以7%浓硫酸乙醇显色，对主要含先显褐色后变黑色的成分的部分馏分，将含 其他杂质少的若干馏分合并，得馏分D2-2-1。取D2-2-1再经硅胶柱层析，以石油醚-丙酮 系统（5:1)等度洗脱，，去除色素，再将在薄层色谱上，以7%浓硫酸乙醇显色，将主要含先 显褐色后变黑色的成分的馏分合并；过夜自然挥干溶剂，得淡黄色结晶；将淡黄色结晶在 石油醚-丙酮（15:1)中重结晶，得到白色结晶，即结构式为1的新化合物（1.46g)。
[0039]实施例2结构式1化合物的鉴定
[0040] 结构式1化合物，白色针状结晶，高分辨质谱HR-ESI-MS(见图1)给出[M+Na]+为 361. 1264,确定其分子式C17H22O7，不饱和度为7。
[0041] 根据1HNMR(见图2)和13CNMR(见图3)可以判断为环烯醚萜类化合物骨架； HR-ESI-MS显示[M+Na]+为361. 1264,结合分子量，确定其分子式为C17H22O7。由SH(9. 953) 处为明显的单峰信号，结合Sc(190. 677)的可推测为一个醛基信号，邻位碳原子上无氢原 子。一维130匪1?波谱中的8。(172.849,43.108,25.730,22.322 &11(1 22.322)推测含有 异戊酰基取代，再结合1HNMR中SH(〇. 90)附近的积分曲线高度，推断有1个异戊酰基 。 Sc(170.932,20.878)结合碳信号数目及1HNMR中的SH(2.045)，可以推测还有一个为乙 酰基取代，Sc(163. 033,145. 155,134. 634,127. 636)可推测可能含两个双键。2DHSQC图 谱（见图4)显示，Sc(163. 033,134.634)显示无直接C-H键，说明C4,C5间存在双键。 Sc(145. 155,127.636)均显示有C-H键，说明了C6，C7均无其他取代，并由1HNMR说明的H 积分曲线高度说明含有1个氢，则说明C6，C7间为双键连接。S。95. 400的C信号无C，H相 关，说明C8被双取代。再根据2DHMBC谱（见图5)中C3的氢与S。190. 677的C相关，说 明的醛基为4号位取代。其他HMBC中的H-C相关信息符合本文中的结构。与文献中的NMR 数据进行对照，发现本化合物与蜘蛛香中得到的化合物JatamanvaltrateN的环稀醚猫母 核一致，只是Cll位被氧化为醛基，而C3位无甲氧基取代，得到1结构。再通过ROESY(见 图6)、IR(见图7)、UV(见图8)确认其结构（见图9)。经SciFinderScholar数据库查询， 本化合物为一新结构化合物，命名为蜘蛛香素E(ValjatrateE)。IHNMR和13CNMR数据 见表1。
[0042] 表1结构1化合物的1Hand13CNMRa
[0043]
[0044] 实施例3片剂的制备
[0045]
[0046] 取处方量结构式1化合物与处方量乳糖混合均匀，加3%聚维酮乙醇溶液制软材， 过18目筛制颗粒，50°C干燥30-45分钟，整粒，加入硬脂酸镁，混匀，压片。每片含化合物 20mg〇
[0047] 实施例4胶囊剂的制备
[0048]
[0049] 取处方量结构式1化合物与处方量乳糖混合均匀，加3%聚维酮乙醇溶液制软材， 过18目筛制颗粒，50°C干燥30-45分钟，整粒，加入硬脂酸镁，混勾，充于1号胶囊。每粒含 化合物20mg。
[0050] 以下通过药效学试验证明本发明的有益效果。
[0051] 试验例1本发明新环烯醚萜类化合物及其促脂质代谢作用试验
[0052] 1、主要试剂及药物
[0053] (1)主要试剂
[0054] 高糖DMEM(批号！NZD1137,美国HyClone公司），胎牛血清（批号：NWA0362,美 国HyClone公司），二甲基亚砜（批号：293K0068,美国Sigma公司），PBS缓冲液（批号： 08D16B30,博士德生物工程有限公司），胰蛋白酶（批号：J130056,美国HyClone公司）、油 酸（批号：SLBH8006V，美国sigma公司）、非诺贝特（批号：0427682-21，美国sigma公司）、 甘油三酯试剂盒（批号：20130115,北京北化康泰临床试剂有限公司），western及IP细胞 裂解液（合肥博美生物公司）
[0055] ⑵受试药物
[0056] 分别称取适量结构式1化合物，用移液器加取适量二甲亚砜（DMSO)溶解后，再加 入PBS缓冲液，配制为50mmol七1的母液，用0. 22ym的微孔过滤器过滤后，密封避光放置 于-20°C冰箱中备用。加药时取母液用高糖DMEM培养基稀释至所需浓度，即刻使用。
[0057] 2、实验方法
[0058] (1)细胞培养
[0059] 11印62细胞用含10%胎牛血清的01^11培养基，于371：、含5%〇) 2的二氧化碳培养 箱中培养。待培养基中的人肝癌H印G2肿瘤细胞生长密度达到约80%，用胰酶消化，制成浓 度均匀单细胞悬液，计数后接种于6孔板中，每孔2xl05个细胞，在培养箱中培养24小时。
[0060] (2)脂肪变性H印G2细胞模型的建立
[0061] 采取油酸诱导肝癌细胞脂肪变性的方法，将一定质量的油酸溶于一定为 Smmolwr1的油酸溶液加入到已经接种好的HepG2细胞中，在培养箱中培养24小时。
[0062] (3)实验分组
[0063]设对照组（加高糖DMEM培养基）、模型组（加终浓度为2mmol/L的油酸）、非诺贝 特组（加油酸和终浓度为160vg/ml的非诺贝特），及各用药剂量实验组（加油酸和各终浓 度为6、12. 5、25、36vg/ml的结构式1化合物）。给药完成后，放入细胞培养箱中培养24小 时。
[0064] (4)IfepG2细胞中甘油三酯含量检测
[0065] 弃去6孔板内培养液，用PBS清洗后，收集贴壁的HepG2细胞，并对收集好的细胞 计数，加入western及IP细胞裂解液充分裂解细胞，4°C条件下12000r/min离心5min，取上 清液，用TG试剂盒测定TG含量。
[0066] (5)统计分析
[0067] 采用SPSS19.0软件，数据以均数士标准误差（r士s)表示，多个样本均数的比较 采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t法，P〈0. 05为差异有统计学意义。
[0068] 3、结果
[0069] 表2结构式1化合物对TG含量的影响（r士s，n= 8)
[0070]
[0071] 注：AAAP〈〇. 001，与对照组比较；*P〈〇. 05,与模型组比较；*#P〈0. 001，与模型 组比较
[0072] 如表2所示，模型组与对照组相比，TG含量显著增加，具有极显著性差异 (P〈0. 001)，表明IfepG2细胞脂肪堆积模型成功建立。6vg/ml结构式1化合物与模型组相 比，TG含量具有显著性差异（P〈0. 05) ;12. 5、25、36vg/ml结构式1化合物与模型组相比，TG 含量具有极显著性差异（P〈〇. 001);并且在一定浓度范围内随结构式1化合物浓度的升高， 细胞内TG含量减少，表现出较明显的剂量依赖性。其中36vg/ml结构式1化合物降低细胞 内TG的作用最强。
【主权项】
1. 环烯醚萜类化合物在制备促脂质代谢的药物中的用途，环烯醚萜类化合物的结构式 如下：其中，R1为异戊酰基、乙酰基；R7为异戊酰氧基、乙酰氧基、羟基或氢；R8为乙酰基、异 戊酰基；R10为羟基、氯原子。2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的R1为异戊酰基，R7为氢，R8为乙 酰基，R10为羟基。3. 根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述的化合物如式1所示：4. 根据权利要求1-3任意一项所述的用途，其特征在于：所述的药物是治疗高脂血症、 脂肪肝、肥胖或高脂血症所引发的动脉粥样硬化、乳糜微粒血症、急性胰腺炎疾病的药物。5. 根据权利要求3所述的用途，其特征在于：环烯醚萜类化合物的提取分离方法包括 以下步骤： (1) 蜘蛛香干燥根茎粉末为原料，乙醇冷浸提取，回收溶剂，得浸膏； (2) 将浸膏用蒸馏水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取，得乙酸乙酯萃取 物； (3) 将乙酸乙酯萃取物用硅胶柱层析，以氯仿-甲醇系统梯度洗脱（100:0,99:1， 98:2-90:10,8:1，7:1-1:1，0:1)，每个梯度约2倍柱体积；对各馏分利用薄层色谱检识，以 7%浓硫酸乙醇显色，其中，在氯仿-甲醇比例为93:7-90:10梯度的馏分化学成分相似，显 黑色点，合并得到馏分3; (4) 其中馏分3再用硅胶柱层析，以石油醚-丙酮系统梯度洗脱（30:1，20:1，15:1， 10:1，9:1-1:1)，每个梯度约2倍柱体积；对各馏分利用薄层色谱检识，以7 %浓硫酸乙醇显 色，其中，石油醚-丙酮比例在8:1-7:1梯度的馏分化学成分相似，先显褐色后变黑，合并得 到馏分D; (5) 其中馏分D再经硅胶柱层析，用石油醚-丙酮系统梯度洗脱（20:1，15:1，10:1， 9:1，8:1-1:1)，每个梯度约3倍柱体积对各馏分利用薄层色谱检识，以7%浓硫酸乙醇显 色，其中，石油醚-丙酮比例在10:1-9:1梯度的馏分化学成分相似，先显褐色后变黑，合并 得到馏分D2 ; (6) 取D2馏分用葡聚糖凝胶LH-20柱层析，以氯仿-甲醇（1:1)洗脱；后对各馏分利 用薄层色谱检识，以7%浓硫酸乙醇显色，对先显褐色后变黑色的部分馏分进行合并，得馏 分D2-2 ; (7) 其中D2-2再经葡聚糖凝胶LH-20柱，纯甲醇洗脱；对各馏分利用薄层色谱检识，以 7%浓硫酸乙醇显色，将含先显褐色后变黑色的成分的部分馏分，且含其他杂质少的若干馏 分合并，得馏分D2-2-1 ; (8) 取D2-2-1再经硅胶柱层析，以石油醚-丙酮系统（5:1)等度洗脱，去除色素，再将 在薄层色谱上，以7%浓硫酸乙醇显色，将含先显褐色后变黑色的成分的馏分合并；过夜自 然挥干溶剂，得淡黄色结晶； (9) 将淡黄色结晶在石油醚-丙酮（15:1)中重结晶，得到白色结晶，即为结构式为1的 新化合物。6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物制剂是片剂、胶囊剂、口服液、 颗粒剂、丸剂、散剂、注射液、粉针剂、滴丸剂。
【专利摘要】本发明提供了环烯醚萜类化合物在制备促脂质代谢的药物中的用途。本发明化合物中环烯醚萜母核中C-11号位为一醛基，并与母核上C4-5，C6-7形成共轭，与其他报道的环烯醚萜化合物相比，在共轭体系及C11为关键醛基上存在很大的差异。本发明化合物具有促脂质代谢的作用，降低细胞内TG的作用最强。
【IPC分类】A61P3/04, A61K31/352, C07D311/94, A61P1/16, A61P1/18, A61P3/06, A61P9/10
【公开号】CN104906083
【申请号】CN201410433231
【发明人】闫智勇, 许科科, 陈朝勇, 林玉, 兰明, 张瑞桐, 张天娥
【申请人】西南交通大学
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2014年8月28日
【公告号】CN104086520A
【专利说明】环烯醚萜类化合物的新用途 技术领域
[0001] 本发明涉及一种环烯醚萜类化合物的新用途。 【背景技术】
[0002] 蜘蛛香曾载于《本草纲目》，曰："蜘蛛香出蜀西茂松藩山中。草根也，黑色有粗 须，状如蜘蛛及藁本，芎穷，气味芳香"。为1977版中国药典（一部）和2010版中国药 典（一部）所收载，又名马蹄香、鬼见愁、雷公七、臭药等。中药蜘蛛香的基源为败酱科 (Valerianaceae)缴草属（ValerianaLinn)植物蜘蛛香（ValerianajatamansiJones)的 干燥根茎。2010版《中国药典（一部）》药典称其微苦，辛、温；功能理气止痛、消食止泻、 祛风除湿、镇静安神；用于脘腹胀痛，食积不化，腹泻痢疾，风湿痹痛，腰膝酸软，失眠。"蜘蛛 香在我国主要分布于湖北、湖南、陕西、河南、广西、四川、贵州、云南等省，一般生长于海拔 1900-2700m的高原地区。
[0003] 迄今国内外对蜘蛛香的研宄表明，该植物主要含有环烯醚萜类、挥发油类、黄酮 类、生物碱类、木脂素类等成分。其中生物碱类成分和黄酮类成分多存在于蜘蛛香地上部 分，而环烯醚萜和倍半萜等萜类成分多存在于根部，其中倍半萜和其它单萜在根部的挥发 油中含量较多。其药理作用现代研宄发现具有抗焦虑、镇静催眠、降压、解痉、心脏抑制、抗 肿瘤、抗菌抗病毒等作用。如专利【申请号】200810207746. 4,发明名称：母核共轭的环烯醚 猫类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，具体涉及母核共轭的环稀醚猫类化合物在制备抗 肿瘤药物中的应用。该专利从蜘蛛香中分离的环烯醚萜类化合物母核为C3-4，C5-6号位的 双键耦合，且Cll位为饱和碳原子连接取代基，与母核形成共轭。
【发明内容】
[0004] 发明人在针对蜘蛛香的系统化学成分研宄中，分离鉴定了一个结构式1的新环烯 醚萜类化合物。药理活性研宄结果表明，结构式1化合物具有良好的促脂质代谢作用。
[0005] 本发明提供了环烯醚萜类化合物在制备促脂质代谢的药物中的用途，环烯醚萜类 化合物的结构式如下：
[0006]
[0007] 其中，Rl为异戊酰基、乙酰基；R7为异戊酰氧基、乙酰氧基、羟基或氢；R8为乙酰 基、异戊酰基；RlO为羟基、氯原子。
[0008] 进一步优选地，所述的Rl为异戊酰基，R7为氢，R8为乙酰基，RlO为羟基。
[0009] 进一步优选地，所述的化合物如式1所示：
[0010]
[0011] 其中，所述的药物是治疗高脂血症、脂肪肝、肥胖或高脂血症所引发的动脉粥样硬 化、乳糜微粒血症、急性胰腺炎疾病的药物。
[0012] 其中，环烯醚萜类化合物的提取分离方法包括以下步骤：
[0013] (1)蜘蛛香干燥根茎粉末为原料，乙醇冷浸提取，回收溶剂，得浸膏；
[0014] (2)将浸膏用蒸馏水溶解，依次用石油醚、乙酸乙醋、正丁醇分别萃取，得乙酸乙酯 萃取物；
[0015] (3)将乙酸乙酯萃取物用硅胶柱层析，以氯仿-甲醇系统梯度洗脱（100:0,99:1， 98:2-90:10,8:1，7:1-1:1，0:1)，每个梯度约2倍柱体积；对各馏分利用薄层色谱检识，以 7%浓硫酸乙醇显色，其中，在氯仿-甲醇比例为93:7-90:10梯度的馏分化学成分相似，显 黑色点，合并得到馏分3;
[0016] (4)其中馏分3再用硅胶柱层析，以石油醚-丙酮系统梯度洗脱（30:1，20:1， 15:1，10:1，9:1-1:1)，每个梯度约2倍柱体积；对各馏分利用薄层色谱检识，以7%浓硫酸 乙醇显色，其中，石油醚-丙酮比例在8:1-7:1梯度的馏分化学成分相似，先显褐色后变黑， 合并得到馏分D;
[0017] (5)其中馏分D再经硅胶柱层析，用石油醚-丙酮系统梯度洗脱（20:1，15:1， 10:1，9:1，8:1-1:1)，每个梯度约3倍柱体积对各馏分利用薄层色谱检识，以7%浓硫酸乙 醇显色，其中，石油醚-丙酮比例在10:1-9:1梯度的馏分化学成分相似，先显褐色后变黑， 合并得到馏分D2;
[0018] (6)取D2馏分用葡聚糖凝胶LH-20柱层析，以氯仿-甲醇（1:1)洗脱；后对各馏 分利用薄层色谱检识，以7%浓硫酸乙醇显色，对先显褐色后变黑色的部分馏分进行合并， 得馏分D2-2;
[0019] (7)其中D2-2再经葡聚糖凝胶LH-20柱，纯甲醇洗脱；对各馏分利用薄层色谱检 识，以7%浓硫酸乙醇显色，将含先显褐色后变黑色的成分的部分馏分，且含其他杂质少的 若干馏分合并，得馏分D2-2-1;
[0020] (8)取D2-2-1再经硅胶柱层析，以石油醚-丙酮系统（5:1)等度洗脱，去除色素， 再将在薄层色谱上，以7%浓硫酸乙醇显色，将含先显褐色后变黑色的成分的馏分合并；过 夜自然挥干溶剂，得淡黄色结晶；
[0021] (9)将淡黄色结晶在石油醚-丙酮（15:1)中重结晶，得到白色结晶，即为结构式为 1的新化合物。
[0022] 其中，所述的药物制剂是片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、注射液、粉针 剂、滴丸剂。
[0023] 本发明化合物中环烯醚萜母核中C-Il号位为一醛基，并与母核上C4-5，C6_7形成 共轭，与其他报道的环烯醚萜化合物相比，在共轭体系及Cll为关键醛基上存在很大的差 异。本发明化合物具有促脂质代谢的作用，降低细胞内TG的作用最强。
[0024] 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0025] 以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围。 【具体实施方式】 【附图说明】：
[0026] 图1:结构式1化合物的高分辨质谱。
[0027] 图2:结构式1化合物的氢谱。
[0028] 图3:结构式1化合物的碳谱。
[0029] 图4:结构式1化合物的HSQC谱
[0030] 图5:结构式1化合物的HMBC谱。
[0031] 图6:结构式1化合物的ROESY谱。
[0032] 图7:结构式1化合物的UV谱。
[0033] 图8:结构式1化合物的IR谱。
[0034] 图9:结构式1化合物的结构。
[0035] 具体实施方案：
[0036] 实施例1本发明环烯醚萜类新化合物的制备
[0037] 结构式1化合物的制备
[0038] 以蜘蛛香（ValerianajatamansiJones)干燥根莖粉末（20kg)为原料，经用95% 工业乙醇冷浸提取4次，每次24h，提取液经减压浓缩得4. 2kg褐色粘稠状浸膏。浸膏用蒸 馏水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到石油醚部位浸膏约600g、乙酸乙酯 浸膏550g、正丁醇浸膏1000g。取乙酸乙酯萃取物550g。经硅胶（100-200目）柱层析， 以氯仿-甲醇系统梯度洗脱（100 :〇, 99:1，98:2, -90:10,8:1，7:1，-1:1，0:1))，每个梯度 2倍柱体积；对各馏分利用薄层色谱检识，以7%浓硫酸乙醇显色，其中，在氯仿-甲醇比例 为93:7-90:10梯度的馏分化学成分相似，显黑色点，合并得到馏分3,其中馏分3 (120g)再 次用硅胶（100-200目）柱层析，以石油醚-丙酮系统梯度洗脱（30:1，20:1，15:1，10:1， 9:1，-1:1)，每个梯度约2倍柱体积；对各馏分利用薄层色谱检识，以7%浓硫酸乙醇显色， 其中，石油醚-丙酮比例在8:1-7:1梯度的馏分化学成分相似，先显褐色后变黑，合并得到 馏分D。其中D馏分（25g)再经硅胶柱层析，用石油醚-丙酮系统（20:1，15:1，10:1，9:1， 8:1，-1:1)梯度洗脱，每个梯度约3倍柱体积对各馏分利用薄层色谱检识，以7%浓硫酸乙 醇显色，其中，石油醚-丙酮比例在10:1-9:1梯度的馏分化学成分相似，先显褐色后变黑， 合并得到馏分D2 ;取D2馏分（5. 9g)用葡聚糖凝胶LH-20柱层析，以氯仿-甲醇（I: 1)洗 脱，后对各馏分利用薄层色谱检识，以7%浓硫酸乙醇显色，对先显褐色后变黑色的部分馏 分进行合并，得馏分D2-2 ;其中D2-2再经葡聚糖凝胶LH-20柱，甲醇洗脱，对各馏分利用薄 层色谱检识，以7%浓硫酸乙醇显色，对主要含先显褐色后变黑色的成分的部分馏分，将含 其他杂质少的若干馏分合并，得馏分D2-2-1。取D2-2-1再经硅胶柱层析，以石油醚-丙酮 系统（5:1)等度洗脱，，去除色素，再将在薄层色谱上，以7%浓硫酸乙醇显色，将主要含先 显褐色后变黑色的成分的馏分合并；过夜自然挥干溶剂，得淡黄色结晶；将淡黄色结晶在 石油醚-丙酮（15:1)中重结晶，得到白色结晶，即结构式为1的新化合物（1.46g)。
[0039]实施例2结构式1化合物的鉴定
[0040] 结构式1化合物，白色针状结晶，高分辨质谱HR-ESI-MS(见图1)给出[M+Na]+为 361. 1264,确定其分子式C17H22O7，不饱和度为7。
[0041] 根据1HNMR(见图2)和13CNMR(见图3)可以判断为环烯醚萜类化合物骨架； HR-ESI-MS显示[M+Na]+为361. 1264,结合分子量，确定其分子式为C17H22O7。由SH(9. 953) 处为明显的单峰信号，结合Sc(190. 677)的可推测为一个醛基信号，邻位碳原子上无氢原 子。一维130匪1?波谱中的8。(172.849,43.108,25.730,22.322 &11(1 22.322)推测含有 异戊酰基取代，再结合1HNMR中SH(〇. 90)附近的积分曲线高度，推断有1个异戊酰基 。 Sc(170.932,20.878)结合碳信号数目及1HNMR中的SH(2.045)，可以推测还有一个为乙 酰基取代，Sc(163. 033,145. 155,134. 634,127. 636)可推测可能含两个双键。2DHSQC图 谱（见图4)显示，Sc(163. 033,134.634)显示无直接C-H键，说明C4,C5间存在双键。 Sc(145. 155,127.636)均显示有C-H键，说明了C6，C7均无其他取代，并由1HNMR说明的H 积分曲线高度说明含有1个氢，则说明C6，C7间为双键连接。S。95. 400的C信号无C，H相 关，说明C8被双取代。再根据2DHMBC谱（见图5)中C3的氢与S。190. 677的C相关，说 明的醛基为4号位取代。其他HMBC中的H-C相关信息符合本文中的结构。与文献中的NMR 数据进行对照，发现本化合物与蜘蛛香中得到的化合物JatamanvaltrateN的环稀醚猫母 核一致，只是Cll位被氧化为醛基，而C3位无甲氧基取代，得到1结构。再通过ROESY(见 图6)、IR(见图7)、UV(见图8)确认其结构（见图9)。经SciFinderScholar数据库查询， 本化合物为一新结构化合物，命名为蜘蛛香素E(ValjatrateE)。IHNMR和13CNMR数据 见表1。
[0042] 表1结构1化合物的1Hand13CNMRa
[0043]
[0044] 实施例3片剂的制备
[0045]
[0046] 取处方量结构式1化合物与处方量乳糖混合均匀，加3%聚维酮乙醇溶液制软材， 过18目筛制颗粒，50°C干燥30-45分钟，整粒，加入硬脂酸镁，混匀，压片。每片含化合物 20mg〇
[0047] 实施例4胶囊剂的制备
[0048]
[0049] 取处方量结构式1化合物与处方量乳糖混合均匀，加3%聚维酮乙醇溶液制软材， 过18目筛制颗粒，50°C干燥30-45分钟，整粒，加入硬脂酸镁，混勾，充于1号胶囊。每粒含 化合物20mg。
[0050] 以下通过药效学试验证明本发明的有益效果。
[0051] 试验例1本发明新环烯醚萜类化合物及其促脂质代谢作用试验
[0052] 1、主要试剂及药物
[0053] (1)主要试剂
[0054] 高糖DMEM(批号！NZD1137,美国HyClone公司），胎牛血清（批号：NWA0362,美 国HyClone公司），二甲基亚砜（批号：293K0068,美国Sigma公司），PBS缓冲液（批号： 08D16B30,博士德生物工程有限公司），胰蛋白酶（批号：J130056,美国HyClone公司）、油 酸（批号：SLBH8006V，美国sigma公司）、非诺贝特（批号：0427682-21，美国sigma公司）、 甘油三酯试剂盒（批号：20130115,北京北化康泰临床试剂有限公司），western及IP细胞 裂解液（合肥博美生物公司）
[0055] ⑵受试药物
[0056] 分别称取适量结构式1化合物，用移液器加取适量二甲亚砜（DMSO)溶解后，再加 入PBS缓冲液，配制为50mmol七1的母液，用0. 22ym的微孔过滤器过滤后，密封避光放置 于-20°C冰箱中备用。加药时取母液用高糖DMEM培养基稀释至所需浓度，即刻使用。
[0057] 2、实验方法
[0058] (1)细胞培养
[0059] 11印62细胞用含10%胎牛血清的01^11培养基，于371：、含5%〇) 2的二氧化碳培养 箱中培养。待培养基中的人肝癌H印G2肿瘤细胞生长密度达到约80%，用胰酶消化，制成浓 度均匀单细胞悬液，计数后接种于6孔板中，每孔2xl05个细胞，在培养箱中培养24小时。
[0060] (2)脂肪变性H印G2细胞模型的建立
[0061] 采取油酸诱导肝癌细胞脂肪变性的方法，将一定质量的油酸溶于一定为 Smmolwr1的油酸溶液加入到已经接种好的HepG2细胞中，在培养箱中培养24小时。
[0062] (3)实验分组
[0063]设对照组（加高糖DMEM培养基）、模型组（加终浓度为2mmol/L的油酸）、非诺贝 特组（加油酸和终浓度为160vg/ml的非诺贝特），及各用药剂量实验组（加油酸和各终浓 度为6、12. 5、25、36vg/ml的结构式1化合物）。给药完成后，放入细胞培养箱中培养24小 时。
[0064] (4)IfepG2细胞中甘油三酯含量检测
[0065] 弃去6孔板内培养液，用PBS清洗后，收集贴壁的HepG2细胞，并对收集好的细胞 计数，加入western及IP细胞裂解液充分裂解细胞，4°C条件下12000r/min离心5min，取上 清液，用TG试剂盒测定TG含量。
[0066] (5)统计分析
[0067] 采用SPSS19.0软件，数据以均数士标准误差（r士s)表示，多个样本均数的比较 采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t法，P〈0. 05为差异有统计学意义。
[0068] 3、结果
[0069] 表2结构式1化合物对TG含量的影响（r士s，n= 8)
[0070]
[0071] 注：AAAP〈〇. 001，与对照组比较；*P〈〇. 05,与模型组比较；*#P〈0. 001，与模型 组比较
[0072] 如表2所示，模型组与对照组相比，TG含量显著增加，具有极显著性差异 (P〈0. 001)，表明IfepG2细胞脂肪堆积模型成功建立。6vg/ml结构式1化合物与模型组相 比，TG含量具有显著性差异（P〈0. 05) ;12. 5、25、36vg/ml结构式1化合物与模型组相比，TG 含量具有极显著性差异（P〈〇. 001);并且在一定浓度范围内随结构式1化合物浓度的升高， 细胞内TG含量减少，表现出较明显的剂量依赖性。其中36vg/ml结构式1化合物降低细胞 内TG的作用最强。
【主权项】
1. 环烯醚萜类化合物在制备促脂质代谢的药物中的用途，环烯醚萜类化合物的结构式 如下：其中，R1为异戊酰基、乙酰基；R7为异戊酰氧基、乙酰氧基、羟基或氢；R8为乙酰基、异 戊酰基；R10为羟基、氯原子。2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的R1为异戊酰基，R7为氢，R8为乙 酰基，R10为羟基。3. 根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述的化合物如式1所示：4. 根据权利要求1-3任意一项所述的用途，其特征在于：所述的药物是治疗高脂血症、 脂肪肝、肥胖或高脂血症所引发的动脉粥样硬化、乳糜微粒血症、急性胰腺炎疾病的药物。5. 根据权利要求3所述的用途，其特征在于：环烯醚萜类化合物的提取分离方法包括 以下步骤： (1) 蜘蛛香干燥根茎粉末为原料，乙醇冷浸提取，回收溶剂，得浸膏； (2) 将浸膏用蒸馏水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取，得乙酸乙酯萃取 物； (3) 将乙酸乙酯萃取物用硅胶柱层析，以氯仿-甲醇系统梯度洗脱（100:0,99:1， 98:2-90:10,8:1，7:1-1:1，0:1)，每个梯度约2倍柱体积；对各馏分利用薄层色谱检识，以 7%浓硫酸乙醇显色，其中，在氯仿-甲醇比例为93:7-90:10梯度的馏分化学成分相似，显 黑色点，合并得到馏分3; (4) 其中馏分3再用硅胶柱层析，以石油醚-丙酮系统梯度洗脱（30:1，20:1，15:1， 10:1，9:1-1:1)，每个梯度约2倍柱体积；对各馏分利用薄层色谱检识，以7 %浓硫酸乙醇显 色，其中，石油醚-丙酮比例在8:1-7:1梯度的馏分化学成分相似，先显褐色后变黑，合并得 到馏分D; (5) 其中馏分D再经硅胶柱层析，用石油醚-丙酮系统梯度洗脱（20:1，15:1，10:1， 9:1，8:1-1:1)，每个梯度约3倍柱体积对各馏分利用薄层色谱检识，以7%浓硫酸乙醇显 色，其中，石油醚-丙酮比例在10:1-9:1梯度的馏分化学成分相似，先显褐色后变黑，合并 得到馏分D2 ; (6) 取D2馏分用葡聚糖凝胶LH-20柱层析，以氯仿-甲醇（1:1)洗脱；后对各馏分利 用薄层色谱检识，以7%浓硫酸乙醇显色，对先显褐色后变黑色的部分馏分进行合并，得馏 分D2-2 ; (7) 其中D2-2再经葡聚糖凝胶LH-20柱，纯甲醇洗脱；对各馏分利用薄层色谱检识，以 7%浓硫酸乙醇显色，将含先显褐色后变黑色的成分的部分馏分，且含其他杂质少的若干馏 分合并，得馏分D2-2-1 ; (8) 取D2-2-1再经硅胶柱层析，以石油醚-丙酮系统（5:1)等度洗脱，去除色素，再将 在薄层色谱上，以7%浓硫酸乙醇显色，将含先显褐色后变黑色的成分的馏分合并；过夜自 然挥干溶剂，得淡黄色结晶； (9) 将淡黄色结晶在石油醚-丙酮（15:1)中重结晶，得到白色结晶，即为结构式为1的 新化合物。6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物制剂是片剂、胶囊剂、口服液、 颗粒剂、丸剂、散剂、注射液、粉针剂、滴丸剂。
【专利摘要】本发明提供了环烯醚萜类化合物在制备促脂质代谢的药物中的用途。本发明化合物中环烯醚萜母核中C-11号位为一醛基，并与母核上C4-5，C6-7形成共轭，与其他报道的环烯醚萜化合物相比，在共轭体系及C11为关键醛基上存在很大的差异。本发明化合物具有促脂质代谢的作用，降低细胞内TG的作用最强。
【IPC分类】A61P3/04, A61K31/352, C07D311/94, A61P1/16, A61P1/18, A61P3/06, A61P9/10
【公开号】CN104906083
【申请号】CN201410433231
【发明人】闫智勇, 许科科, 陈朝勇, 林玉, 兰明, 张瑞桐, 张天娥
【申请人】西南交通大学
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2014年8月28日
【公告号】CN104086520A
最新回复(0)