吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物用于治疗肾小球肾炎药物的应用
吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物用于治疗肾小球肾炎药物的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药技术领域，更具体地说涉及吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其 衍生物用于治疗肾小球肾炎药物的应用。
【背景技术】
[0002] 肾小球肾炎是我国最常见的肾小球疾病，约占原发性肾小球疾病的50%，其病理 改变为系膜细胞增生，继发系膜区细胞外基质聚积和扩增，特别是增生性肾小球肾炎常有 系膜细胞的增殖，系膜基质的增多，而系膜细胞多为分子量6~60KD的多肽或糖蛋白，具有 高度生物活性，在病理状态下这些细胞因子刺激系膜细胞增殖和蛋白质的合成，导致炎症 加剧。同时尿蛋白，对于肾小球系膜细胞，肾小管细胞等具有直接毒性作用，可以引起局部 脂质代谢紊乱，免疫系统激动，生长因子及其他细胞因子表达增高，促进细胞外基质聚集， 加重肾小球硬化，同时还间接引起肾小球间质内单核巨噬细胞浸润，产生大量趋化因子，促 进细胞间黏附因子的表达及单细胞向系膜区迀移，引起迟发型超敏反应，导致肾小球系膜 细胞及基质增殖，促进肾病发生。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种能够有效治疗肾小球肾炎动物模型的发病症状，可作 为治疗肾小球肾炎的候选药物分子即吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物在治疗肾小球 肾炎的药物的应用。
[0004] 本发明的具有结构式（I)的吲哚-3-甲醇及其衍生物在制备治疗肾小球肾炎药物 中的应用，结构式（I)中，虹、1?2、1?4、1?5、1?6、1?7各自为11或卤素取代基或硝基或(：1-(：10烷 基或Cl-ClO烷氧基。
[0005]
[0006] 优选的，所述结构式（I)中，当1?1、1?2、1?4、1?5、1?6、1?7均为氢时，该结构式所示的化 合物即为吲哚-3-甲醇；
[0007] 当R5为卤素取代基或硝基或Cl-ClO烷基或Cl-ClO烷氧基，Rl、R2、R4、R6、R7均 为氢，此时，该结构式⑴所示的化合物包括：5_氯-吲哚-3-甲醇，5-溴-吲哚-3-甲 醇、5-氟-吲哚-3-甲醇；5-硝基-吲哚-3-甲醇；5-甲基-吲哚-3-甲醇，5-乙基-吲 哚-3-甲醇，5-丙基-吲哚-3-甲醇，5- 丁基-吲哚-3-甲醇，5-戊基-吲哚-3-甲醇、 5-甲氧基-吲哚-3-甲醇、5-乙氧基-吲哚-3-甲醇、5-丙氧基-吲哚-3-甲醇、5- 丁氧 基-吲哚-3-甲醇、5-戊氧基-吲哚-3-甲醇等；
[0008] 当Rl为Cl-ClO烷基或Cl-ClO烷氧基，R2、R4、R5、R6、R7均为氢，此时，该结构 式⑴所示的化合物包括：N-甲基-吲哚-3-甲醇、N-乙基-吲哚-3-甲醇、N-丙基-吲 哚-3-甲醇、N- 丁基-吲哚-3-甲醇、N-戊基-吲哚-3-甲醇、N-甲氧基-吲哚-3-甲醇、 N-乙氧基-吲噪-3-甲醇、N-丙氧基-吲噪-3-甲醇、N- 丁氧基-吲噪-3-甲醇、N-戊氧 基-吲哚-3-甲醇等；
[0009] 当R2为Cl-ClO烷基或Cl-ClO烷氧基，RUR4、R5、R6、R7均为氢，此时，该结构 式（I)所示的化合物包括：2_甲基-吲哚-3-甲醇、2-乙基-吲哚-3-甲醇、2-丙基-吲 哚-3-甲醇、2- 丁基-吲哚-3-甲醇、2-戊基-吲哚-3-甲醇、2-甲氧基-吲哚-3-甲醇、 2-乙氧基-吲哚-3-甲醇、2-丙氧基-吲哚-3-甲醇、2- 丁氧基-吲哚-3-甲醇、2-戊氧 基-吲哚-3-甲醇等；
[0010] 本发明的具有结构式（II)的二吲哚甲烷及其衍生物在制备治疗肾小球肾炎药物 中的应用，
[0011]
[0012] 其中，R1、R2、R4、R5、R6、R7、R1'、R2'、R4'、R5'、R6'、R7' 各自为氢或卤素取代基 或硝基或Cl-ClO烷基或Cl-ClO烷氧基。
[0013]优选的，所述结构式（II)中，当R1、R2、R4、R5、R6、R7、R1'、R2'、R4'、R5'、R6'、R7' 均为氢时，此时该结构式所示的化合物即为二吲哚甲烷；
[0014] 当R5和R5'同时为卤素取代基或硝基或Cl-ClO烷基或Cl-ClO烷氧基，RUR2、 R4、R6、R7、R1'、R2'、R4'、R6'、R7'均为氢，此时，结构式（II)所示化合物包括：5,5' -二 氯-二吲哚甲烷、5, 5'-二溴-二吲哚甲烷或5, 5'-二氟-二吲哚甲烷；5, 5'-二硝基-二 吲哚甲烷；5, 5' -二甲基-二吲哚甲烷、5, 5' -二乙基-二吲哚甲烷、5, 5' -二丙基-二吲 哚甲烷、5, 5'-二丁基-二吲哚甲烷、5, 5'-二戊基-二吲哚甲烷、5, 5'-二甲氧基-二吲哚 甲烷、5, 5' -二乙氧基-二吲哚甲烷、5, 5' -二丙氧基-二吲哚甲烷、5, 5' -二丁氧基-二 吲哚甲烷或5, 5' -二戊氧基-二吲哚甲烷等。
[0015]当Rl和R1' 同时为Cl-ClO烷基或Cl-ClO烷氧基，R2、R4、R5、R6、R7、R2'、R4'、 R5'、R6'、R7'均为氢，此时，结构式（II)所示化合物包括：N，N' -二甲基-二吲哚甲烷、N， N' -二乙基-二吲哚甲烷、N，N' -二丙基-二吲哚甲烷、N，N' -二丁基-二吲哚甲烷、N，N' -二戊基-二吲哚甲烷。N，N' -二甲氧基-二吲哚甲烷、N，N' -二乙氧基-二吲哚甲烷、 N，N' -二丙氧基-二吲哚甲烷、N，N' -二丁氧基-二吲哚甲烷或N，N' -二戊氧基-二吲哚 甲烧等。
[0016] 当R2 和R2' 同时为Cl-ClO烷基或Cl-ClO烷氧基，R1、R4、R5、R6、R7、R1'、R4'、 R5'、R6'、R7'均为氢，此时，结构式（II)所示化合物包括：2,2'_二甲基-二吲哚甲烷、 2, 2' -二乙基-二吲哚甲烷、2, 2' -二丙基-二吲哚甲烷、2, 2' -二丁基-二吲哚甲烷、2， 2' _二戊基_二吲哚甲烷、2, 2' -二甲氧基-二吲哚甲烷、2, 2' -二乙氧基-二吲哚甲烷、 2, 2' -二丙氧基-二吲哚甲烷、2, 2' -二丁氧基-二吲哚甲烷或2, 2' -二戊氧基-二吲哚 甲烧等。
[0017] 本发明的吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物在治疗肾小球肾炎药物的应用， 单一的化合物吲哚-3-甲醇或二吲哚甲烷或其衍生物的一种的使用能够治疗肾小球肾炎， 那么显然，上述化合物的各种形式的混配亦能够达到一定的治疗效果。
[0018] 使用商业上可得的吲哚取代物来合成I3C的取代衍生物可能是获得这些化合物 最便捷的方法。DIM的衍生物同样可以通过甲醛缩合吲哚取代物的方法制备。然而，后者的 劣势在于副产物的形成使得分离纯化所需要的DIM衍生物更为复杂。
[0019] 本发明所提供的化合物是通过使用二甲基甲酰胺缩合吲哚取代物来合成制备取 代的吲哚-3-乙醛，被取代的吲哚-3-乙醛产物通过使用甲醇以及硼氢化钠处理还原其醛 基从而得到I3C的取代衍生物。吲哚-3-甲醇（I3C)在体内胃酸环境中很不稳定，可发生 缩合反应形成低聚物3,3'_二吲哚甲烷。本发明的二吲哚甲烷（DIM)的取代衍生物是通过 缩合吲哚-3-甲醇（I3C)的取代产物加以合成，这可以通过采取例如PH值5. 5左右的磷酸 盐缓冲液处理等方法实现（I3C及DM的衍生物制备参考美国专利US5948808)。
[0020] 采用本发明的吲哚-3-甲醇（I3C)、二吲哚甲烷（DM)及其衍生物，与多种药学上 可以接受的载体相结合，通过如口腔、静脉、鼻腔、直肠或其他任何可以输送有效剂量的活 性物质的给药方式，可以制备成各种液体制剂如注射剂、口服液制剂等，也可以制备成各种 有效且易于给药的固体制剂如胶囊剂、栓剂等。其中，用于注射或口服用的液体制剂，其所 需的载体可以为无菌水、无菌盐水或者水溶性有机载体如环糊精、玉米油、橄榄油、油酸乙 酯、二醇类等医学上可接受的载体；固体给药制剂在制备中可加入固体制剂常用的辅料如 赋形剂葡萄糖、乳糖、纤维素等，还可加入润滑剂聚乙二醇、硬脂酸镁等，以及粘结剂、矫味 剂等固体制剂所需的辅料成分，再通过混合、制粒等工序成型。上述这些制剂中的活性物质 的有效量是能使肾小球肾炎症状明显降低的量，具有常规技术的研宄人员将能够确定本项 发明所提供的试剂的最有效的给药剂量和时间考虑给药方式，药物代谢，以及其他一些药 代动力学参数例如药物分布，清除率等。
[0021] 本发明通过肾小球肾炎模型进行例证。此处的动物包括但是不限于：小鼠，大鼠， 驯养动物包括但是不限于猫，狗，以及其它一些动物例如但是不限于牛，羊，猪，马，灵长类 动物例如但是不限于猴子和人。
[0022] 本发明提出了 吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物在治疗肾小球肾炎药物的应 用。
[0023] 在动物试验中发现，吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物可以保护大鼠的肾功 能，改善肾脏的病理学损害，可以降低尿蛋白，调节脂代谢，抑制系膜细胞增殖和系膜基质 集聚，从而达到治疗肾小球肾炎的目的。
[0024] 同时，本发明所使用的小分子药物易于获取，价格低廉，性质稳定，便于保存和运 输，具有广阔的应用前景。
【具体实施方式】
[0025] 下面将结合本发明实施例对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述， 显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的 实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都 属于本发明保护的范围。
[0026] 【化合物制备】
[0027] 实施例1
[0028] (5-氯吲哚-3-甲醇及5, 5' -二氯二吲哚甲烷的制备）
[0029] 将0.86ml磷酰氯缓慢加入到2.9ml预先冷却至0°C的二甲基甲酰胺中。将 8. 6mmol5-氯吲哚（购于南京锐马精细化工有限公司）溶解于LOml的二甲基甲酰胺中， 然后缓慢加入前述预冷的磷酰氯溶液中，所形成的悬浮液在37°C加热60分钟，直至澄清的 黄色溶液变成淡黄色的糊状物质。然后向此糊状物质中加入Iml的冰水，再缓慢加入IOml 含有3. 75克KOH的水溶液。将此混合物加热至煮沸后冷却，过滤，水洗，空气中干燥即可获 得5-氯吲哚-3-乙醛。
[0030] 将1.0克5-氯吲哚-3-乙醛溶于5.Oml甲醇，持续加入固体硼氢化钠，直至过量。 然后向反应物中加入50ml水，冷却至0°C，过滤，避光真空干燥获得5-氯吲哚-3-甲醇，得 率约90 %。
[0031] 将I. 0克5-氯吲哚-3-甲醇加入到pH为5. 5的磷酸缓冲液中，室温搅拌6小时， 反应过程通过薄层层析（TLC)加以监测。反应产物过滤，避光真空干燥即获得5,5' -二氯 二吲哚甲烷，得率约85%。
[0032] 实施例2
[0033] (5-硝基吲哚-3-甲醇及5, 5' -二硝基二吲哚甲烷的制备）
[0034] 5-硝基吲哚可以通过商业购买获得（南京锐马精细化工有限公司）。将0. 92ml 磷酰氯缓慢加入到2. 9ml预先冷却至0°C的二甲基甲酰胺中。将8. 2mm〇15-硝基吲哚溶解 于LOml的二甲基甲酰胺中，然后缓慢加入前述预冷的磷酰氯溶液中，所形成的悬浮液在 42°C加热90分钟，直至澄清的黄色溶液变成淡黄色的糊状物质。然后向此糊状物质中加入 Iml的冰水，再缓慢加入IOml含有3. 75克KOH的水溶液。将此混合物加热至煮沸后冷却， 过滤，水洗，空气中干燥即可获得5-硝基吲哚-3-乙醛。
[0035] 将I. 0克5-硝基吲哚-3-乙醛溶于5.Oml甲醇，持续加入固体硼氢化钠，直至过 量。然后向反应物中加入50ml水，冷却至(TC，过滤，避光真空干燥获得5-硝基吲哚-3-甲 醇，得率约87%。
[0036] 将I. 0克5-硝基吲哚-3-甲醇加入到pH为5. 5的磷酸缓冲液中，室温搅拌6小 时，反应过程通过薄层层析（TLC)加以监测。反应产物过滤，避光真空干燥即获得5,5'_二 硝基双吲哚甲烷，得率约80%。
[0037] 实施例3
[0038] (5-戊基吲哚-3-甲醇及5, 5' -二戊基-二吲哚甲烷的制备）
[0039] 5-戊基吲哚可以通过商业购买获得（南京锐马精细化工有限公司）。将0. 82ml 磷酰氯缓慢加入到2. 9ml预先冷却至0°C的二甲基甲酰胺中。将9. 2mm〇15-戊基吲哚溶解 于LOml的二甲基甲酰胺中，然后缓慢加入前述预冷的磷酰氯溶液中，所形成的悬浮液在 37°C加热40-60分钟，直至澄清的黄色溶液变成淡黄色的糊状物质。然后向此糊状物质中 加入Iml的冰水，再缓慢加入IOml含有3. 75克KOH的水溶液。将此混合物加热至煮沸后 冷却，过滤，水洗，空气中干燥即可获得5-戊基吲哚-3-乙醛。
[0040] 将I. 0克5-戊基吲哚-3-乙醛溶于5.Oml甲醇，持续加入固体硼氢化钠，直至过 量。然后向反应物中加入50ml水，冷却至(TC，过滤，避光真空干燥获得5-戊基吲哚-3-甲 醇，得率约85%。
[0041] 将I.0克5-戊基吲哚-3-甲醇加入到pH为5. 5的磷酸缓冲液中，室温搅拌10小 时，反应过程通过薄层层析（TLC)加以监测。反应产物过滤，避光真空干燥即获得5,5'_二 戊基双吲哚甲烷，得率约70%。
[0042] 实施例4
[0043] (N-甲氧基吲哚-3-甲醇及N，N' -二甲氧基-二吲哚甲烷的制备）
[0044] N-甲氧基吲哚可以通过商业购买获得（南京锐马精细化工有限公司）。将0. 86ml 磷酰氯缓慢加入到2. 9ml预先冷却至(TC的二甲基甲酰胺中。将8. 9mmolN-甲氧基吲哚溶 解于LOml的二甲基甲酰胺中，然后缓慢加入前述预冷的磷酰氯溶液中，所形成的悬浮液 在40°C加热60-90分钟，直至澄清的黄色溶液变成淡黄色的糊状物质。然后向此糊状物质 中加入Iml的冰水，再缓慢加入IOml含有3. 75克KOH的水溶液。将此混合物加热至煮沸 后冷却，过滤，水洗，空气中干燥即可获得N-甲氧基吲哚-3-乙醛。
[0045] 将1.0克N-甲氧基吲哚-3-乙醛溶于5.Oml甲醇，持续加入固体硼氢化钠，直 至过量。然后向反应物中加入50ml水，冷却至0°C，过滤，避光真空干燥获得N-甲氧基吲 哚-3-甲醇，得率约80%。
[0046] 将I.0克N-甲氧基吲哚-3-甲醇加入到pH为5. 5的磷酸缓冲液中，室温搅拌12小 时，反应过程通过薄层层析（TLC)加以监测。反应产物过滤，避光真空干燥即获得N，N'_二 甲氧基双吲哚甲烷，得率约70%。
[0047] 实施例5
[0048] (1-丁基-2-甲基吲哚-3-甲醇及1，1' -二丁基-2, 2' -二甲基二吲哚甲烷的制 备）
[0049] 1-丁基-2-甲基吲哚可以通过商业购买获得（南京锐马精细化工有限公司）。 将0.82ml磷酰氯缓慢加入到2.9ml预先冷却至0°C的二甲基甲酰胺中。将8. 2mmol1-丁 基-2-甲基吲哚溶解于I.Oml的二甲基甲酰胺中，然后缓慢加入前述预冷的磷酰氯溶液中， 所形成的悬浮液在42 °C加热90分钟，直至澄清的黄色溶液变成淡黄色的糊状物质。然后向 此糊状物质中加入Iml的冰水，再缓慢加入IOml含有3. 8克KOH的水溶液。将此混合物加 热至煮沸后冷却，过滤，水洗，空气中干燥即可获得1-丁基-2-甲基吲哚-3-乙醛。
[0050] 将I. 0克1- 丁基-2-甲基吲哚-3-乙醛溶于5.Oml甲醇，持续加入固体硼氢化 钠，直至过量。然后向反应物中加入50ml水，冷却至0°C，过滤，避光真空干燥获得1- 丁 基-2-甲基吲哚-3-甲醇，得率约85%。
[0051] 将I. 0克1- 丁基-2-甲基吲哚-3-甲醇加入到pH为5. 5的磷酸缓冲液中，室温 搅拌6小时，反应过程通过薄层层析（TLC)加以监测。反应产物过滤，避光真空干燥即获得 1，1' -二丁基-2, 2' -二甲基双吲哚甲烷，得率约80%。
[0052] 实施例6
[0053] (4-溴吲哚-3-甲醇及4,4' -二溴二吲哚甲烷的制备）
[0054] 将0.86ml磷酰氯缓慢加入到2.9ml预先冷却至0°C的二甲基甲酰胺中。将 8. 6mmol4-溴吲哚（购于南京锐马精细化工有限公司）溶解于I.Oml的二甲基甲酰胺中， 然后缓慢加入前述预冷的磷酰氯溶液中，所形成的悬浮液在37°C加热60分钟，直至澄清的 黄色溶液变成淡黄色的糊状物质。然后向此糊状物质中加入Iml的冰水，再缓慢加入IOml 含有3. 75克KOH的水溶液。将此混合物加热至煮沸后冷却，过滤，水洗，空气中干燥即可获 得4-溴吲哚-3-乙醛。
[0055] 将I. 0克4-溴吲哚-3-乙醛溶于5.Oml甲醇，持续加入固体硼氢化钠，直至过量。 然后向反应物中加入50ml水，冷却至0°C，过滤，避光真空干燥获得4-溴吲哚-3-甲醇，得 率约90 %。
[0056] 将I.0克4-溴吲哚-3-甲醇加入到pH为5. 5的磷酸缓冲液中，室温搅拌6小时， 反应过程通过薄层层析（TLC)加以监测。反应产物过滤，避光真空干燥即获得4,4' -二溴 二吲哚甲烷，得率约85%。
[0057]【动物实验】
[00 58] 材料
[0059]分别将I3C、DM、5-氯-吲哚-3-甲醇（5-C1-I3C)、5, 5' -二氯-二吲哚甲 烷（5, 5' -C1-DM)、5_戊基-吲哚-3-甲醇（5-C5-I3C)、5, 5' -二戊基-二吲哚甲烷 (5, 5' -C5-DIM)、5_ 甲氧基-吲哚-3-甲醇（5-MOE-I3C)、5, 5' -二甲氧基-二吲哚甲 烷（5, 5' -MOE-DM)、5_ 硝基-吲哚-3-甲醇（5-NO-I3C)、5, 5' -二硝基-二吲哚甲 烷（5, 5' -NO-DM)、N-甲基-吲哚-3-甲醇（N-Me-I3C)、N，N' -二甲基-二吲哚甲烷 (N,N' -Me-DM)、N-甲氧基-吲哚-3-甲醇（N-MOE-I3C)、N,N' -二甲氧基-二吲哚甲 烷（N,N' -MOE-DM)、2_戊基-吲哚-3-甲醇（2-C5-I3C)、2, 2' -二戊基-二吲哚甲烷 (2,2' -C5-DM)、2-甲氧基-吲哚-3-甲醇（2-MOE-I3C)、2,2' -二甲氧基-二吲哚甲烷 (2, 2'-MOE-DM)、1_ 丁基-2-甲基-吲哚-3-甲醇（lBu-2Me-I3C)、1，1' -二丁基-2, 2' -二 甲基-二吲哚甲烷（1，1'Bu-2, 2'Me-DM)、4_ 溴-吲哚-3-甲醇（4-Br-I3C)及 4, 4' -二 溴-二吲哚甲烷（4, 4' -Br-DM)用玉米油溶解配成3.Omg/ml口服储液备用。
[0060] 实验方法
[0061] 将大鼠适应性喂养1周，检测尿蛋白尿检结果为阴性的大鼠240只，分成24组 每组10只，随机分为正常对照组、模型对照组及分别用I3C、DM、5-氯-吲哚-3-甲醇 (5-C1-I3C)、5, 5 ' -二氯-二吲哚甲烷（5, 5 ' -C1-DM)、5-戊基-吲哚-3-甲醇（5-C5-I3C)、 5, 5' -二戊基-二吲哚甲烷（5, 5' -C5-DM)、5_甲氧基-吲哚-3-甲醇（5-MOE-I3C)、 5, 5' -二甲氧基-二吲哚甲烷（5, 5' -MOE-DM)、5_硝基-吲哚-3-甲醇（5-NO-I3C)、 5, 5'-二硝基-二吲哚甲烷（5, 5'-N0-DM)、N-甲基-吲哚-3-甲醇（N-Me-I3C)、N,N'-二 甲基-二吲哚甲烷（N,N' -Me-DM)、N-甲氧基-吲哚-3-甲醇（N-MOE-I3C)、N,N' -二甲氧 基-二吲哚甲烷（N，N'-MOE-DM)、2_戊基-吲哚-3-甲醇（2-C5-I3C)、2, 2' -二戊基-二吲哚甲烷（2,2' -C5-DM)、2-甲氧基-吲哚-3-甲醇（2-M0E-I3C)、2,2' -二甲氧基-二 吲哚甲烷（2,2' -M0E-DM)、1-丁基-2-甲基-吲哚-3-甲醇（lBu-2Me-I3C)、l, 1' -二丁 基-2, 2'-二甲基-二吲哚甲烷（1, 1'Bu-2, 2'Me-DM)、4_ 溴-吲哚-3-甲醇（4-Br-I3C) 及4, 4' -二溴-二吲哚甲烷（4, 4'-Br-DM)治疗的治疗组。
[0062] 除正常组外，其他组大鼠采用10%水合氯醛麻醉后，经背部切除左侧肾脏，修养一 周后，进行预免疫。在每只大鼠背部皮下分点注射完全弗氏佐剂0.Iml加BSA3mg，于1周 末、2周末背部皮下注射不完全弗氏佐剂0.Iml加BSA3mg，3周后，腹腔注射BSA连续4次， 每次间隔lh，注射剂量每只分别0. 5、1、1. 5、3mg,次日每只腹腔注射BSA2mg。正式免疫完 成后第一天起，尾静脉腹腔注射隔日进行，每只大鼠静脉注射BSA剂量从0. 5mg开始，每次 增加0. 5mg，至2. 5mg为止，继续每周加量0. 5mg，至每日用量5mg为止，腹腔注射量是尾静 脉注射量的1倍，至每日用量IOmg为止，免疫2周后尾静脉注射大肠杆菌内霉素100yg/ 只，正常组麻醉后切开背部暴露左肾并缝合，之后用与造模大鼠相同，从尾静脉、腹腔、皮下 分点注射相应量的生理盐水，并给与生理盐水灌胃对照，全部大鼠于正视免疫8周后处死 取肾组织。其中于治疗组于第6周开始灌胃给药，每日1此，服用量为30mg/Kg.d，其余组 灌等量自来水，各组灌胃7周。
[0063] 检测方法
[0064] 1、于第2、4、6、8、12周末将大鼠置于清洁代谢笼中，取24n尿液，用三氯乙酸法进 行24h尿蛋白定量测定，取其均值如下表1 ;
[0065]表 1 :
[0066]
[0067] 从实验中观察大鼠尿蛋白变化，实验第2、4周末各组均未出现明显尿蛋白，第6、 8、12周末除正常组外，其余组均出现尿蛋白增长，与正常组均有显著的差异。模型组尿蛋白 均出现上涨，而治疗组中虽然有上涨，但是明显低于模型对照组。因此可见模型组肾小球肾 炎病症明显加重，而治疗组虽然有炎症，但是在吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物的作 用下，抑制了尿蛋白的产生，而且量明显比模型组低，可以有效的缓解治愈的效果。
[0068] 2、取肾组织，用10%中兴福尔马林溶液固定，石蜡包埋切片，以3ym的石蜡切片， 进行HE、Masson、PAS染色，在光学显微镜下观察拍片；取右上极皮质Imm3经3%戊二醛和 1 %锇酸磷酸钠缓冲液双固定，丙酮梯度脱水，切片，醋酸双氧铀和柠檬酸铅双重染色投射 电镜观察拍片，两组观察结果如表2 :
[0069] 表 2 :
[0070]
[0071] 光镜和电镜结果均显示，模型对照组大鼠多数肾小球系膜区明显增宽，系膜细胞 增多，毛细血管受压变窄或比赛，甚至个别肾小球萎缩，而治疗组中病理改变明显减轻，提 示吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物可以有效地抑制大鼠肾小球系膜细胞的增生和系 膜基质增多，改善或修复肾组织的病理损害。
【主权项】
1. 具有下述结构式（I)的用于吲哚-3-甲醇在治疗肾小球肾炎药物的应用，其中，R1为氢或C1-C10烷基或C1-C10烷氧基；R2为氢或C1-C10烷基或C1-C10烷氧 基；R5为氢或卤素取代基或硝基；R4、R6、R7均为氢。2. 根据权利要求1所述的吲哚-3-甲醇在治疗肾小球肾炎药物的应用，其特征在于： 所述结构式（I)中，R5为卤素取代基或硝基，虹、1?2、1?4、1?6、1?7均为氢。3. 根据权利要求1所述的吲哚-3-甲醇在治疗肾小球肾炎药物的应用，其特征在于： 所述结构式（I)中，R1为C1-C10烷基或C1-C10烷氧基，1?2、1?4、1?5、1?6、1?7均为氢。4. 根据权利要求1所述的吲哚-3-甲醇在治疗肾小球肾炎药物的应用，其特征在于： 所述结构式（I)中，R2为C1-C10烷基或C1-C10烷氧基，虹、1?4、1?5、1?6、1?7均为氢。5. 具有下述结构式（II)的二吲哚甲烷在治疗肾小球肾炎药物的应用，其中，R1和R1'为氢或C1-C10烷基或C1-C10烷氧基；R2和R2'为氢或C1-C10烷基或C1-C10烷氧基；R5和R5'为氢或卤素取代基或硝基；R4、R6、R7、R4'、R6'、R7'均为氢。6. 根据权利要求5所述的二吲哚甲烷在治疗肾小球肾炎药物的应用，其特征在于：所 述结构式（II)中，R5和R5'同时为卤素取代基或硝基，R1、R2、R4、R6、R7、R1'、R2'、R4'、 R6'、R7'均为氢。7. 根据权利要求5所述的二吲哚甲烷在治疗肾小球肾炎药物的应用，其特征在于：所 述结构式（II)中，R1和R1'同时为C1-C10烷基或C1-C10烷氧基，R2、R4、R5、R6、R7、R2'、 R4'、R5'、R6'、R7' 均为氢。8. 根据权利要求5所述的二吲哚甲烷在治疗肾小球肾炎药物的应用，其特征在于：所 述结构式（II)中，R2和R2'同时为C1-C10烷基或C1-C10烷氧基，R1、R4、R5、R6、R7、R1'、 R4'、R5'、R6'、R7' 均为氢。
【专利摘要】本发明提出了吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物用于治疗肾小球肾炎药物的应用，吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生化合物通过抑制基底细胞有丝分裂，可以用于肾小球肾炎的治疗。DIM和I3C及其衍生化合物可有效降低肾小球肾炎的发病症状并逐渐治愈，可以成为治疗肾小球肾炎的候选药物分子。同时，本发明所使用的小分子药物易于获取，价格低廉，性质稳定，便于保存和运输，具有广阔的应用前景。
【IPC分类】A61K31/404, A61P13/12
【公开号】CN104906086
【申请号】CN201510353309
【发明人】张勇
【申请人】安徽四正医药科技有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年6月24日
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药技术领域，更具体地说涉及吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其 衍生物用于治疗肾小球肾炎药物的应用。
【背景技术】
[0002] 肾小球肾炎是我国最常见的肾小球疾病，约占原发性肾小球疾病的50%，其病理 改变为系膜细胞增生，继发系膜区细胞外基质聚积和扩增，特别是增生性肾小球肾炎常有 系膜细胞的增殖，系膜基质的增多，而系膜细胞多为分子量6~60KD的多肽或糖蛋白，具有 高度生物活性，在病理状态下这些细胞因子刺激系膜细胞增殖和蛋白质的合成，导致炎症 加剧。同时尿蛋白，对于肾小球系膜细胞，肾小管细胞等具有直接毒性作用，可以引起局部 脂质代谢紊乱，免疫系统激动，生长因子及其他细胞因子表达增高，促进细胞外基质聚集， 加重肾小球硬化，同时还间接引起肾小球间质内单核巨噬细胞浸润，产生大量趋化因子，促 进细胞间黏附因子的表达及单细胞向系膜区迀移，引起迟发型超敏反应，导致肾小球系膜 细胞及基质增殖，促进肾病发生。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种能够有效治疗肾小球肾炎动物模型的发病症状，可作 为治疗肾小球肾炎的候选药物分子即吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物在治疗肾小球 肾炎的药物的应用。
[0004] 本发明的具有结构式（I)的吲哚-3-甲醇及其衍生物在制备治疗肾小球肾炎药物 中的应用，结构式（I)中，虹、1?2、1?4、1?5、1?6、1?7各自为11或卤素取代基或硝基或(：1-(：10烷 基或Cl-ClO烷氧基。
[0005]
[0006] 优选的，所述结构式（I)中，当1?1、1?2、1?4、1?5、1?6、1?7均为氢时，该结构式所示的化 合物即为吲哚-3-甲醇；
[0007] 当R5为卤素取代基或硝基或Cl-ClO烷基或Cl-ClO烷氧基，Rl、R2、R4、R6、R7均 为氢，此时，该结构式⑴所示的化合物包括：5_氯-吲哚-3-甲醇，5-溴-吲哚-3-甲 醇、5-氟-吲哚-3-甲醇；5-硝基-吲哚-3-甲醇；5-甲基-吲哚-3-甲醇，5-乙基-吲 哚-3-甲醇，5-丙基-吲哚-3-甲醇，5- 丁基-吲哚-3-甲醇，5-戊基-吲哚-3-甲醇、 5-甲氧基-吲哚-3-甲醇、5-乙氧基-吲哚-3-甲醇、5-丙氧基-吲哚-3-甲醇、5- 丁氧 基-吲哚-3-甲醇、5-戊氧基-吲哚-3-甲醇等；
[0008] 当Rl为Cl-ClO烷基或Cl-ClO烷氧基，R2、R4、R5、R6、R7均为氢，此时，该结构 式⑴所示的化合物包括：N-甲基-吲哚-3-甲醇、N-乙基-吲哚-3-甲醇、N-丙基-吲 哚-3-甲醇、N- 丁基-吲哚-3-甲醇、N-戊基-吲哚-3-甲醇、N-甲氧基-吲哚-3-甲醇、 N-乙氧基-吲噪-3-甲醇、N-丙氧基-吲噪-3-甲醇、N- 丁氧基-吲噪-3-甲醇、N-戊氧 基-吲哚-3-甲醇等；
[0009] 当R2为Cl-ClO烷基或Cl-ClO烷氧基，RUR4、R5、R6、R7均为氢，此时，该结构 式（I)所示的化合物包括：2_甲基-吲哚-3-甲醇、2-乙基-吲哚-3-甲醇、2-丙基-吲 哚-3-甲醇、2- 丁基-吲哚-3-甲醇、2-戊基-吲哚-3-甲醇、2-甲氧基-吲哚-3-甲醇、 2-乙氧基-吲哚-3-甲醇、2-丙氧基-吲哚-3-甲醇、2- 丁氧基-吲哚-3-甲醇、2-戊氧 基-吲哚-3-甲醇等；
[0010] 本发明的具有结构式（II)的二吲哚甲烷及其衍生物在制备治疗肾小球肾炎药物 中的应用，
[0011]
[0012] 其中，R1、R2、R4、R5、R6、R7、R1'、R2'、R4'、R5'、R6'、R7' 各自为氢或卤素取代基 或硝基或Cl-ClO烷基或Cl-ClO烷氧基。
[0013]优选的，所述结构式（II)中，当R1、R2、R4、R5、R6、R7、R1'、R2'、R4'、R5'、R6'、R7' 均为氢时，此时该结构式所示的化合物即为二吲哚甲烷；
[0014] 当R5和R5'同时为卤素取代基或硝基或Cl-ClO烷基或Cl-ClO烷氧基，RUR2、 R4、R6、R7、R1'、R2'、R4'、R6'、R7'均为氢，此时，结构式（II)所示化合物包括：5,5' -二 氯-二吲哚甲烷、5, 5'-二溴-二吲哚甲烷或5, 5'-二氟-二吲哚甲烷；5, 5'-二硝基-二 吲哚甲烷；5, 5' -二甲基-二吲哚甲烷、5, 5' -二乙基-二吲哚甲烷、5, 5' -二丙基-二吲 哚甲烷、5, 5'-二丁基-二吲哚甲烷、5, 5'-二戊基-二吲哚甲烷、5, 5'-二甲氧基-二吲哚 甲烷、5, 5' -二乙氧基-二吲哚甲烷、5, 5' -二丙氧基-二吲哚甲烷、5, 5' -二丁氧基-二 吲哚甲烷或5, 5' -二戊氧基-二吲哚甲烷等。
[0015]当Rl和R1' 同时为Cl-ClO烷基或Cl-ClO烷氧基，R2、R4、R5、R6、R7、R2'、R4'、 R5'、R6'、R7'均为氢，此时，结构式（II)所示化合物包括：N，N' -二甲基-二吲哚甲烷、N， N' -二乙基-二吲哚甲烷、N，N' -二丙基-二吲哚甲烷、N，N' -二丁基-二吲哚甲烷、N，N' -二戊基-二吲哚甲烷。N，N' -二甲氧基-二吲哚甲烷、N，N' -二乙氧基-二吲哚甲烷、 N，N' -二丙氧基-二吲哚甲烷、N，N' -二丁氧基-二吲哚甲烷或N，N' -二戊氧基-二吲哚 甲烧等。
[0016] 当R2 和R2' 同时为Cl-ClO烷基或Cl-ClO烷氧基，R1、R4、R5、R6、R7、R1'、R4'、 R5'、R6'、R7'均为氢，此时，结构式（II)所示化合物包括：2,2'_二甲基-二吲哚甲烷、 2, 2' -二乙基-二吲哚甲烷、2, 2' -二丙基-二吲哚甲烷、2, 2' -二丁基-二吲哚甲烷、2， 2' _二戊基_二吲哚甲烷、2, 2' -二甲氧基-二吲哚甲烷、2, 2' -二乙氧基-二吲哚甲烷、 2, 2' -二丙氧基-二吲哚甲烷、2, 2' -二丁氧基-二吲哚甲烷或2, 2' -二戊氧基-二吲哚 甲烧等。
[0017] 本发明的吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物在治疗肾小球肾炎药物的应用， 单一的化合物吲哚-3-甲醇或二吲哚甲烷或其衍生物的一种的使用能够治疗肾小球肾炎， 那么显然，上述化合物的各种形式的混配亦能够达到一定的治疗效果。
[0018] 使用商业上可得的吲哚取代物来合成I3C的取代衍生物可能是获得这些化合物 最便捷的方法。DIM的衍生物同样可以通过甲醛缩合吲哚取代物的方法制备。然而，后者的 劣势在于副产物的形成使得分离纯化所需要的DIM衍生物更为复杂。
[0019] 本发明所提供的化合物是通过使用二甲基甲酰胺缩合吲哚取代物来合成制备取 代的吲哚-3-乙醛，被取代的吲哚-3-乙醛产物通过使用甲醇以及硼氢化钠处理还原其醛 基从而得到I3C的取代衍生物。吲哚-3-甲醇（I3C)在体内胃酸环境中很不稳定，可发生 缩合反应形成低聚物3,3'_二吲哚甲烷。本发明的二吲哚甲烷（DIM)的取代衍生物是通过 缩合吲哚-3-甲醇（I3C)的取代产物加以合成，这可以通过采取例如PH值5. 5左右的磷酸 盐缓冲液处理等方法实现（I3C及DM的衍生物制备参考美国专利US5948808)。
[0020] 采用本发明的吲哚-3-甲醇（I3C)、二吲哚甲烷（DM)及其衍生物，与多种药学上 可以接受的载体相结合，通过如口腔、静脉、鼻腔、直肠或其他任何可以输送有效剂量的活 性物质的给药方式，可以制备成各种液体制剂如注射剂、口服液制剂等，也可以制备成各种 有效且易于给药的固体制剂如胶囊剂、栓剂等。其中，用于注射或口服用的液体制剂，其所 需的载体可以为无菌水、无菌盐水或者水溶性有机载体如环糊精、玉米油、橄榄油、油酸乙 酯、二醇类等医学上可接受的载体；固体给药制剂在制备中可加入固体制剂常用的辅料如 赋形剂葡萄糖、乳糖、纤维素等，还可加入润滑剂聚乙二醇、硬脂酸镁等，以及粘结剂、矫味 剂等固体制剂所需的辅料成分，再通过混合、制粒等工序成型。上述这些制剂中的活性物质 的有效量是能使肾小球肾炎症状明显降低的量，具有常规技术的研宄人员将能够确定本项 发明所提供的试剂的最有效的给药剂量和时间考虑给药方式，药物代谢，以及其他一些药 代动力学参数例如药物分布，清除率等。
[0021] 本发明通过肾小球肾炎模型进行例证。此处的动物包括但是不限于：小鼠，大鼠， 驯养动物包括但是不限于猫，狗，以及其它一些动物例如但是不限于牛，羊，猪，马，灵长类 动物例如但是不限于猴子和人。
[0022] 本发明提出了 吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物在治疗肾小球肾炎药物的应 用。
[0023] 在动物试验中发现，吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物可以保护大鼠的肾功 能，改善肾脏的病理学损害，可以降低尿蛋白，调节脂代谢，抑制系膜细胞增殖和系膜基质 集聚，从而达到治疗肾小球肾炎的目的。
[0024] 同时，本发明所使用的小分子药物易于获取，价格低廉，性质稳定，便于保存和运 输，具有广阔的应用前景。
【具体实施方式】
[0025] 下面将结合本发明实施例对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述， 显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的 实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都 属于本发明保护的范围。
[0026] 【化合物制备】
[0027] 实施例1
[0028] (5-氯吲哚-3-甲醇及5, 5' -二氯二吲哚甲烷的制备）
[0029] 将0.86ml磷酰氯缓慢加入到2.9ml预先冷却至0°C的二甲基甲酰胺中。将 8. 6mmol5-氯吲哚（购于南京锐马精细化工有限公司）溶解于LOml的二甲基甲酰胺中， 然后缓慢加入前述预冷的磷酰氯溶液中，所形成的悬浮液在37°C加热60分钟，直至澄清的 黄色溶液变成淡黄色的糊状物质。然后向此糊状物质中加入Iml的冰水，再缓慢加入IOml 含有3. 75克KOH的水溶液。将此混合物加热至煮沸后冷却，过滤，水洗，空气中干燥即可获 得5-氯吲哚-3-乙醛。
[0030] 将1.0克5-氯吲哚-3-乙醛溶于5.Oml甲醇，持续加入固体硼氢化钠，直至过量。 然后向反应物中加入50ml水，冷却至0°C，过滤，避光真空干燥获得5-氯吲哚-3-甲醇，得 率约90 %。
[0031] 将I. 0克5-氯吲哚-3-甲醇加入到pH为5. 5的磷酸缓冲液中，室温搅拌6小时， 反应过程通过薄层层析（TLC)加以监测。反应产物过滤，避光真空干燥即获得5,5' -二氯 二吲哚甲烷，得率约85%。
[0032] 实施例2
[0033] (5-硝基吲哚-3-甲醇及5, 5' -二硝基二吲哚甲烷的制备）
[0034] 5-硝基吲哚可以通过商业购买获得（南京锐马精细化工有限公司）。将0. 92ml 磷酰氯缓慢加入到2. 9ml预先冷却至0°C的二甲基甲酰胺中。将8. 2mm〇15-硝基吲哚溶解 于LOml的二甲基甲酰胺中，然后缓慢加入前述预冷的磷酰氯溶液中，所形成的悬浮液在 42°C加热90分钟，直至澄清的黄色溶液变成淡黄色的糊状物质。然后向此糊状物质中加入 Iml的冰水，再缓慢加入IOml含有3. 75克KOH的水溶液。将此混合物加热至煮沸后冷却， 过滤，水洗，空气中干燥即可获得5-硝基吲哚-3-乙醛。
[0035] 将I. 0克5-硝基吲哚-3-乙醛溶于5.Oml甲醇，持续加入固体硼氢化钠，直至过 量。然后向反应物中加入50ml水，冷却至(TC，过滤，避光真空干燥获得5-硝基吲哚-3-甲 醇，得率约87%。
[0036] 将I. 0克5-硝基吲哚-3-甲醇加入到pH为5. 5的磷酸缓冲液中，室温搅拌6小 时，反应过程通过薄层层析（TLC)加以监测。反应产物过滤，避光真空干燥即获得5,5'_二 硝基双吲哚甲烷，得率约80%。
[0037] 实施例3
[0038] (5-戊基吲哚-3-甲醇及5, 5' -二戊基-二吲哚甲烷的制备）
[0039] 5-戊基吲哚可以通过商业购买获得（南京锐马精细化工有限公司）。将0. 82ml 磷酰氯缓慢加入到2. 9ml预先冷却至0°C的二甲基甲酰胺中。将9. 2mm〇15-戊基吲哚溶解 于LOml的二甲基甲酰胺中，然后缓慢加入前述预冷的磷酰氯溶液中，所形成的悬浮液在 37°C加热40-60分钟，直至澄清的黄色溶液变成淡黄色的糊状物质。然后向此糊状物质中 加入Iml的冰水，再缓慢加入IOml含有3. 75克KOH的水溶液。将此混合物加热至煮沸后 冷却，过滤，水洗，空气中干燥即可获得5-戊基吲哚-3-乙醛。
[0040] 将I. 0克5-戊基吲哚-3-乙醛溶于5.Oml甲醇，持续加入固体硼氢化钠，直至过 量。然后向反应物中加入50ml水，冷却至(TC，过滤，避光真空干燥获得5-戊基吲哚-3-甲 醇，得率约85%。
[0041] 将I.0克5-戊基吲哚-3-甲醇加入到pH为5. 5的磷酸缓冲液中，室温搅拌10小 时，反应过程通过薄层层析（TLC)加以监测。反应产物过滤，避光真空干燥即获得5,5'_二 戊基双吲哚甲烷，得率约70%。
[0042] 实施例4
[0043] (N-甲氧基吲哚-3-甲醇及N，N' -二甲氧基-二吲哚甲烷的制备）
[0044] N-甲氧基吲哚可以通过商业购买获得（南京锐马精细化工有限公司）。将0. 86ml 磷酰氯缓慢加入到2. 9ml预先冷却至(TC的二甲基甲酰胺中。将8. 9mmolN-甲氧基吲哚溶 解于LOml的二甲基甲酰胺中，然后缓慢加入前述预冷的磷酰氯溶液中，所形成的悬浮液 在40°C加热60-90分钟，直至澄清的黄色溶液变成淡黄色的糊状物质。然后向此糊状物质 中加入Iml的冰水，再缓慢加入IOml含有3. 75克KOH的水溶液。将此混合物加热至煮沸 后冷却，过滤，水洗，空气中干燥即可获得N-甲氧基吲哚-3-乙醛。
[0045] 将1.0克N-甲氧基吲哚-3-乙醛溶于5.Oml甲醇，持续加入固体硼氢化钠，直 至过量。然后向反应物中加入50ml水，冷却至0°C，过滤，避光真空干燥获得N-甲氧基吲 哚-3-甲醇，得率约80%。
[0046] 将I.0克N-甲氧基吲哚-3-甲醇加入到pH为5. 5的磷酸缓冲液中，室温搅拌12小 时，反应过程通过薄层层析（TLC)加以监测。反应产物过滤，避光真空干燥即获得N，N'_二 甲氧基双吲哚甲烷，得率约70%。
[0047] 实施例5
[0048] (1-丁基-2-甲基吲哚-3-甲醇及1，1' -二丁基-2, 2' -二甲基二吲哚甲烷的制 备）
[0049] 1-丁基-2-甲基吲哚可以通过商业购买获得（南京锐马精细化工有限公司）。 将0.82ml磷酰氯缓慢加入到2.9ml预先冷却至0°C的二甲基甲酰胺中。将8. 2mmol1-丁 基-2-甲基吲哚溶解于I.Oml的二甲基甲酰胺中，然后缓慢加入前述预冷的磷酰氯溶液中， 所形成的悬浮液在42 °C加热90分钟，直至澄清的黄色溶液变成淡黄色的糊状物质。然后向 此糊状物质中加入Iml的冰水，再缓慢加入IOml含有3. 8克KOH的水溶液。将此混合物加 热至煮沸后冷却，过滤，水洗，空气中干燥即可获得1-丁基-2-甲基吲哚-3-乙醛。
[0050] 将I. 0克1- 丁基-2-甲基吲哚-3-乙醛溶于5.Oml甲醇，持续加入固体硼氢化 钠，直至过量。然后向反应物中加入50ml水，冷却至0°C，过滤，避光真空干燥获得1- 丁 基-2-甲基吲哚-3-甲醇，得率约85%。
[0051] 将I. 0克1- 丁基-2-甲基吲哚-3-甲醇加入到pH为5. 5的磷酸缓冲液中，室温 搅拌6小时，反应过程通过薄层层析（TLC)加以监测。反应产物过滤，避光真空干燥即获得 1，1' -二丁基-2, 2' -二甲基双吲哚甲烷，得率约80%。
[0052] 实施例6
[0053] (4-溴吲哚-3-甲醇及4,4' -二溴二吲哚甲烷的制备）
[0054] 将0.86ml磷酰氯缓慢加入到2.9ml预先冷却至0°C的二甲基甲酰胺中。将 8. 6mmol4-溴吲哚（购于南京锐马精细化工有限公司）溶解于I.Oml的二甲基甲酰胺中， 然后缓慢加入前述预冷的磷酰氯溶液中，所形成的悬浮液在37°C加热60分钟，直至澄清的 黄色溶液变成淡黄色的糊状物质。然后向此糊状物质中加入Iml的冰水，再缓慢加入IOml 含有3. 75克KOH的水溶液。将此混合物加热至煮沸后冷却，过滤，水洗，空气中干燥即可获 得4-溴吲哚-3-乙醛。
[0055] 将I. 0克4-溴吲哚-3-乙醛溶于5.Oml甲醇，持续加入固体硼氢化钠，直至过量。 然后向反应物中加入50ml水，冷却至0°C，过滤，避光真空干燥获得4-溴吲哚-3-甲醇，得 率约90 %。
[0056] 将I.0克4-溴吲哚-3-甲醇加入到pH为5. 5的磷酸缓冲液中，室温搅拌6小时， 反应过程通过薄层层析（TLC)加以监测。反应产物过滤，避光真空干燥即获得4,4' -二溴 二吲哚甲烷，得率约85%。
[0057]【动物实验】
[00 58] 材料
[0059]分别将I3C、DM、5-氯-吲哚-3-甲醇（5-C1-I3C)、5, 5' -二氯-二吲哚甲 烷（5, 5' -C1-DM)、5_戊基-吲哚-3-甲醇（5-C5-I3C)、5, 5' -二戊基-二吲哚甲烷 (5, 5' -C5-DIM)、5_ 甲氧基-吲哚-3-甲醇（5-MOE-I3C)、5, 5' -二甲氧基-二吲哚甲 烷（5, 5' -MOE-DM)、5_ 硝基-吲哚-3-甲醇（5-NO-I3C)、5, 5' -二硝基-二吲哚甲 烷（5, 5' -NO-DM)、N-甲基-吲哚-3-甲醇（N-Me-I3C)、N，N' -二甲基-二吲哚甲烷 (N,N' -Me-DM)、N-甲氧基-吲哚-3-甲醇（N-MOE-I3C)、N,N' -二甲氧基-二吲哚甲 烷（N,N' -MOE-DM)、2_戊基-吲哚-3-甲醇（2-C5-I3C)、2, 2' -二戊基-二吲哚甲烷 (2,2' -C5-DM)、2-甲氧基-吲哚-3-甲醇（2-MOE-I3C)、2,2' -二甲氧基-二吲哚甲烷 (2, 2'-MOE-DM)、1_ 丁基-2-甲基-吲哚-3-甲醇（lBu-2Me-I3C)、1，1' -二丁基-2, 2' -二 甲基-二吲哚甲烷（1，1'Bu-2, 2'Me-DM)、4_ 溴-吲哚-3-甲醇（4-Br-I3C)及 4, 4' -二 溴-二吲哚甲烷（4, 4' -Br-DM)用玉米油溶解配成3.Omg/ml口服储液备用。
[0060] 实验方法
[0061] 将大鼠适应性喂养1周，检测尿蛋白尿检结果为阴性的大鼠240只，分成24组 每组10只，随机分为正常对照组、模型对照组及分别用I3C、DM、5-氯-吲哚-3-甲醇 (5-C1-I3C)、5, 5 ' -二氯-二吲哚甲烷（5, 5 ' -C1-DM)、5-戊基-吲哚-3-甲醇（5-C5-I3C)、 5, 5' -二戊基-二吲哚甲烷（5, 5' -C5-DM)、5_甲氧基-吲哚-3-甲醇（5-MOE-I3C)、 5, 5' -二甲氧基-二吲哚甲烷（5, 5' -MOE-DM)、5_硝基-吲哚-3-甲醇（5-NO-I3C)、 5, 5'-二硝基-二吲哚甲烷（5, 5'-N0-DM)、N-甲基-吲哚-3-甲醇（N-Me-I3C)、N,N'-二 甲基-二吲哚甲烷（N,N' -Me-DM)、N-甲氧基-吲哚-3-甲醇（N-MOE-I3C)、N,N' -二甲氧 基-二吲哚甲烷（N，N'-MOE-DM)、2_戊基-吲哚-3-甲醇（2-C5-I3C)、2, 2' -二戊基-二吲哚甲烷（2,2' -C5-DM)、2-甲氧基-吲哚-3-甲醇（2-M0E-I3C)、2,2' -二甲氧基-二 吲哚甲烷（2,2' -M0E-DM)、1-丁基-2-甲基-吲哚-3-甲醇（lBu-2Me-I3C)、l, 1' -二丁 基-2, 2'-二甲基-二吲哚甲烷（1, 1'Bu-2, 2'Me-DM)、4_ 溴-吲哚-3-甲醇（4-Br-I3C) 及4, 4' -二溴-二吲哚甲烷（4, 4'-Br-DM)治疗的治疗组。
[0062] 除正常组外，其他组大鼠采用10%水合氯醛麻醉后，经背部切除左侧肾脏，修养一 周后，进行预免疫。在每只大鼠背部皮下分点注射完全弗氏佐剂0.Iml加BSA3mg，于1周 末、2周末背部皮下注射不完全弗氏佐剂0.Iml加BSA3mg，3周后，腹腔注射BSA连续4次， 每次间隔lh，注射剂量每只分别0. 5、1、1. 5、3mg,次日每只腹腔注射BSA2mg。正式免疫完 成后第一天起，尾静脉腹腔注射隔日进行，每只大鼠静脉注射BSA剂量从0. 5mg开始，每次 增加0. 5mg，至2. 5mg为止，继续每周加量0. 5mg，至每日用量5mg为止，腹腔注射量是尾静 脉注射量的1倍，至每日用量IOmg为止，免疫2周后尾静脉注射大肠杆菌内霉素100yg/ 只，正常组麻醉后切开背部暴露左肾并缝合，之后用与造模大鼠相同，从尾静脉、腹腔、皮下 分点注射相应量的生理盐水，并给与生理盐水灌胃对照，全部大鼠于正视免疫8周后处死 取肾组织。其中于治疗组于第6周开始灌胃给药，每日1此，服用量为30mg/Kg.d，其余组 灌等量自来水，各组灌胃7周。
[0063] 检测方法
[0064] 1、于第2、4、6、8、12周末将大鼠置于清洁代谢笼中，取24n尿液，用三氯乙酸法进 行24h尿蛋白定量测定，取其均值如下表1 ;
[0065]表 1 :
[0066]
[0067] 从实验中观察大鼠尿蛋白变化，实验第2、4周末各组均未出现明显尿蛋白，第6、 8、12周末除正常组外，其余组均出现尿蛋白增长，与正常组均有显著的差异。模型组尿蛋白 均出现上涨，而治疗组中虽然有上涨，但是明显低于模型对照组。因此可见模型组肾小球肾 炎病症明显加重，而治疗组虽然有炎症，但是在吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物的作 用下，抑制了尿蛋白的产生，而且量明显比模型组低，可以有效的缓解治愈的效果。
[0068] 2、取肾组织，用10%中兴福尔马林溶液固定，石蜡包埋切片，以3ym的石蜡切片， 进行HE、Masson、PAS染色，在光学显微镜下观察拍片；取右上极皮质Imm3经3%戊二醛和 1 %锇酸磷酸钠缓冲液双固定，丙酮梯度脱水，切片，醋酸双氧铀和柠檬酸铅双重染色投射 电镜观察拍片，两组观察结果如表2 :
[0069] 表 2 :
[0070]
[0071] 光镜和电镜结果均显示，模型对照组大鼠多数肾小球系膜区明显增宽，系膜细胞 增多，毛细血管受压变窄或比赛，甚至个别肾小球萎缩，而治疗组中病理改变明显减轻，提 示吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物可以有效地抑制大鼠肾小球系膜细胞的增生和系 膜基质增多，改善或修复肾组织的病理损害。
【主权项】
1. 具有下述结构式（I)的用于吲哚-3-甲醇在治疗肾小球肾炎药物的应用，其中，R1为氢或C1-C10烷基或C1-C10烷氧基；R2为氢或C1-C10烷基或C1-C10烷氧 基；R5为氢或卤素取代基或硝基；R4、R6、R7均为氢。2. 根据权利要求1所述的吲哚-3-甲醇在治疗肾小球肾炎药物的应用，其特征在于： 所述结构式（I)中，R5为卤素取代基或硝基，虹、1?2、1?4、1?6、1?7均为氢。3. 根据权利要求1所述的吲哚-3-甲醇在治疗肾小球肾炎药物的应用，其特征在于： 所述结构式（I)中，R1为C1-C10烷基或C1-C10烷氧基，1?2、1?4、1?5、1?6、1?7均为氢。4. 根据权利要求1所述的吲哚-3-甲醇在治疗肾小球肾炎药物的应用，其特征在于： 所述结构式（I)中，R2为C1-C10烷基或C1-C10烷氧基，虹、1?4、1?5、1?6、1?7均为氢。5. 具有下述结构式（II)的二吲哚甲烷在治疗肾小球肾炎药物的应用，其中，R1和R1'为氢或C1-C10烷基或C1-C10烷氧基；R2和R2'为氢或C1-C10烷基或C1-C10烷氧基；R5和R5'为氢或卤素取代基或硝基；R4、R6、R7、R4'、R6'、R7'均为氢。6. 根据权利要求5所述的二吲哚甲烷在治疗肾小球肾炎药物的应用，其特征在于：所 述结构式（II)中，R5和R5'同时为卤素取代基或硝基，R1、R2、R4、R6、R7、R1'、R2'、R4'、 R6'、R7'均为氢。7. 根据权利要求5所述的二吲哚甲烷在治疗肾小球肾炎药物的应用，其特征在于：所 述结构式（II)中，R1和R1'同时为C1-C10烷基或C1-C10烷氧基，R2、R4、R5、R6、R7、R2'、 R4'、R5'、R6'、R7' 均为氢。8. 根据权利要求5所述的二吲哚甲烷在治疗肾小球肾炎药物的应用，其特征在于：所 述结构式（II)中，R2和R2'同时为C1-C10烷基或C1-C10烷氧基，R1、R4、R5、R6、R7、R1'、 R4'、R5'、R6'、R7' 均为氢。
【专利摘要】本发明提出了吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物用于治疗肾小球肾炎药物的应用，吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生化合物通过抑制基底细胞有丝分裂，可以用于肾小球肾炎的治疗。DIM和I3C及其衍生化合物可有效降低肾小球肾炎的发病症状并逐渐治愈，可以成为治疗肾小球肾炎的候选药物分子。同时，本发明所使用的小分子药物易于获取，价格低廉，性质稳定，便于保存和运输，具有广阔的应用前景。
【IPC分类】A61K31/404, A61P13/12
【公开号】CN104906086
【申请号】CN201510353309
【发明人】张勇
【申请人】安徽四正医药科技有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年6月24日
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