大环内酯化合物及它们的使用方法
大环内酯化合物及它们的使用方法
【专利说明】大环内酯化合物及它们的使用方法
[0001] 本申请是2007年9月12日提交的发明名称为"大环内酯化合物及它们的使用方 法"的第200780033959. 3号中国专利申请的分案申请。
[0002] 相关申请的交叉引用
[0003] 本申请要求2006年9月13日提交的美国临时申请第60/825, 531号的优先权，该 申请的公开通过引用结合于此。
[0004] 关于在联邦政府资助的研宄或开发中作出本发明的权利声明
[0005]无。
[0006] 以光盘形式提交的"序列表"、表格或计算机程序清单附件的参考。
[0007]无。 发明领域
[0008] 本发明涉及去甲基、羟基、去甲基羟基和环氧大环内酯的结构，它们的合成、药物 组合物和用于全身性和定位治疗应用的应用。
【背景技术】
[0009] 雷帕霉素（西罗莫司）是用吸湿链霉菌（Streptomyceshygroscopicus)生产的 31元天然大环内酯[C51H79N1013;MWt= 914. 2]并且发现于二十世纪七十年代（美国专 利第3, 929, 992、3, 993, 749号）。雷帕霉素（结构如下所示）于1999年被食品药物管理局 (FDA)批准用于预防肾移植排斥反应。
[0010]
[0011] 雷帕霉素类似他克莫司（与相同的细胞内结合蛋白或称为FKBP-12的亲免素结 合）但是其作用机理不同。然而，他克莫司和环孢霉素通过阻断淋巴因子（比如IL2)基因 转录来抑制T细胞激活，西罗莫司通过结合到哺乳动物雷帕霉素靶点（mTOR)来抑制T细胞 激活和T淋巴细胞增殖。雷帕霉素能与环孢霉素或他克莫司协同作用来抑制免疫系统。 [0012] 雷帕霉素还用于预防或治疗全身性红斑狼疮[美国专利第5, 078, 999]、肺炎[美 国专利第5, 080, 899]、胰岛素依赖型糖尿病[美国专利第5, 321，009]、皮肤病，例如银肩病 [美国专利第5, 286, 730]、肠病[美国专利第5, 286, 731]、血管损伤后平滑肌细胞增殖和内 膜增厚[美国专利第5, 288, 711和5, 516, 781]、成人T细胞性白血病/淋巴瘤[欧洲专利 申请525, 960A1]、眼部炎症[美国专利第5, 387, 589]、恶性癌[美国专利第5, 206, 018]、心 脏炎性疾病[美国专利第5, 496, 832]、贫血症[美国专利第5, 561，138]和神经突加速生长 [Parker,E.M?等，Neuropharmacology39, 1913-1919, 2000] 〇
[0013] 尽管雷帕霉素能用于治疗各种疾病症状，但是该化合物作为医药药物的用途受到 其极低和易变的生物利用度及其高免疫抑制效力和潜在的高毒性的限制。而且，雷帕霉素 仅微溶于水。为了克服这些问题，已经合成该化合物的前药和类似物。已经记载过通过衍 生雷帕霉素结构的31和42位（原来的28和40位）以形成甘氨酸盐、丙酸盐和吡咯烷基 丁酸盐前药来制备的水溶性前药（美国专利第4, 650, 803号）。本领域中所述的一些雷帕 霉素的类似物包括单酰基和二酰基类似物（美国专利第4, 316, 885号）、缩醛类似物（美 国专利第5, 151，4133号）、甲硅烷基醚（美国专利第5, 120, 842号）、羟基酯（美国专利第 5, 362, 781号）、以及烷基、芳基、烯基和炔基类似物（美国专利第5, 665, 772、5, 258, 389、 6, 384, 046 号；WO97/35575)。
[0014] 雷帕霉素的前药和类似物通过化学合成来合成，其中需要另外的合成步骤对某些 位置进行保护和去保护。类似物还能以生物学方式合成，其中链霉菌属菌株经遗传改造以 产生这些雷帕霉素的类似物。类似物需要保持蛋白质结合或其它细胞相互作用所需的位置 并且不产生空间位阻，以便保持其活性。这些类似物的安全性需要用一系列临床前和临床 实验进行广泛地试验。
[0015] 本发明包含新型大环内酯类和大环内酯类的新应用，其中所述组合物能以化学方 法和生物方法合成并且保存至少一部分免疫抑制、抗增殖、抗真菌和抗肿瘤性质，用于全身 应用和定位应用。
【发明内容】
[0016] 在一个实施方式中，本发明提供包含药学上可接受的赋形剂和下式化合物的药物 组合物及其盐、水合物、异构体、代谢物和前药：
[0017]
[0018] 其中R1、R2、R3、R5、R6和R8各自独立地选自H、CK烷基或OH ;R4、R7和R9各自独立地
[0022] 在第二个实施方式中，本发明提供用于体内使用的装置，该装置包括植入体和至 少一个本发明化合物的来源。
[0023] 在第三个实施方式中，本发明提供通过给予需要的对象治疗有效量的本发明化合 物来抑制细胞增殖的方法。
[0024] 在第四个实施方式中，本发明提供下式大环内酯化合物及其盐、水合物、异构体、 代谢物和前药：
[0025]
[0031] 在第五个实施方式中，本发明提供制备本发明化合物的方法，该方法包括使大环 内酯与酸接触以便用亲核试剂取代烷氧基，由此制备本发明化合物。
[0032] 在第六个实施方式中，本发明提供制备本发明化合物的方法，该方法包括使大环 内酯与环氧化试剂接触以便将烯基修饰成环氧基团，由此制备本发明化合物。
[0033]附图简要说明
[0034]图1显示大环内酯类化合物的结构，其中一些潜在位点经化学修饰后能提供本发 明化合物。用方块标记的区域是脱甲基位点，而用圆圈标记的区域是羟基化位点，并且C= C位点（C17 =C18、C19 =C20 =、C21 =C22、C29 =C30)是环氧化位点。
[0035] 图2A-2ZA显示本发明化合物。
[0036] 图3显示具有可扩张结构的支架结构的例子。
[0037] 图4显示化合物AR的制备型HPLC层析图。
[0038] 图5显示化合物AR的质子-NMR谱图。
[0039] 图6显示化合物AR的液相色谱和质谱的结果。
[0040] 图7 (a)显示化合物AR的分析型HPLC层析图。
[0041] 图7 (b)显示具有异构体的化合物AR的分析型HPLC层析图。
[0042] 图8显示接触不同浓度的雷帕霉素和化合物AR后人平滑肌细胞的增殖百分率。
[0043] 图9显示经冠状动脉血管造影（QCA)分析，猪冠状动脉模型中植入28天后，与释 放雷帕霉素的Cypher支架相比，释放化合物AR的支架发生狭窄的定量结果。
[0044] 图10显示猪冠状动脉模型中不同时间点化合物AR的组织浓度。
[0045] 图11显示猪冠状动脉模型中从支架释放化合物AR的百分率。
[0046] 图12(a)显示通过接触IOnM浓度的大环内酯化合物AR和西罗莫司来抑制活化巨 噬细胞释放IL-6、MMP-9和MCP-I。
[0047] 图12(b)显示通过接触IOnM浓度的大环内酯化合物AR和西罗莫司来抑制活化巨 噬细胞释放IL-10。
[0048] 图13显示接触不同浓度的17, 18-29, 30-双环氧大环内酯和化合物AR后人平滑 肌细胞的增殖百分率。
[0049] 图14显示本发明的16-0-脱甲基大环内酯的合成。
[0050] 图15显示19, 20-双-羟基大环内酯的合成。
[0051] 图16显示17, 18-29, 30-双环氧大环内酯的合成。
[0052] 发明详述
[0053]I?定义
[0054] 如本文使用的，术语"酸"指任何当溶解在水中时提供pH小于7. 0的溶液的化合 物。酸通常被描述为贡献氢离子（H+) (Bronsted-Lowry)的化合物或电子对受体（路易斯 酸）。用于本发明的酸包括但不局限于，HC1、H2S04、HN03和乙酸。本领域的技术人员将认识 到，其它酸能用于本发明。
[0055] 如本文使用的，"给药"指全身和局部给药或它们的组合，例如口服、作为栓剂给 药、局部接触给药、胃肠道外给药、血管内给药、静脉内给药、腹腔内给药、肌内给药、病损内 给药、鼻内给药、肺给药、粘膜给药、经皮给药、皮下给药、鞘内给药、经临时装置，例如导管 和多孔气球递送、经植入体（例如渗透泵）或假体（例如药物释放支架）或其它装置递送 给个体。本领域的技术人员将认识到，其它给予本发明化合物的模式和方法可用于本发明 中。
[0056] 如本文使用的，术语"烷氧基"指包含氧原子的烷基，例如甲氧基、乙氧基等。"卤 代烷氧基"如对于烷氧基定义的，其中部分或全部氢原子用卤素原子取代。例如，卤代烷氧 基包括三氟甲氧基等。本领域的技术人员将认识到，其它烷氧基能用于本发明。
[0057]如本文使用的，术语"烷基"指具有所示碳原子数的直链或分支的、饱和的脂肪族 原子团。例如,C1-C6烷基包括但不局限于，甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁 基、仲丁基、叔丁基等。本领域的技术人员将认识到，其它烷基能用于本发明。
[0058] 如部位使用的，术语"体腔"指动脉、静脉或器官的内衬或空腔。
[0059] 如本文使用的，术语"接触"指引起至少两种不同的物质接触以便它们能发生反应 的过程。然而，应该认识到，所得反应产物可以由加入试剂间直接反应产生，或由一种或多 种加入试剂的中间体（其能够在反应混合物中产生）产生。
[0060] 如本文使用的，术语"水合物"指与至少一个水分子络合的化合物。本发明化合物 能与1-100个水分子络合。
[0061] 如本文使用的，术语"植入物"指为了治疗病症而插入身体的医疗用具。植入物包 括但不局限于药物释放装置。
[0062] 如本文使用的，术语"抑制作用"、"抑制"和"抑制剂"指阻止、减小、削弱或减少的 化合物，或指阻止、减小、削弱或减少特定作用或功能的方法。
[0063] 如本文使用的，术语"体内的"指哺乳动物身体。
[0064] 如本文使用的，术语"异构体"指具有不对称碳原子（光学中心）或双键的本发明 化合物，外消旋物、非对映体、对映体、几何异构体、结构异构体和个别异构体都应包括在本 发明范围内。
[0065]如本文使用的，术语"器官"指哺乳动物的任何器官，例如但不局限于，心脏、肺、 脑、眼、胃、脾、骨豁、胰腺、肾、肝、肠、子宫、结肠、卵巢、血液、皮肤、肌肉、组织、前列腺、乳房 和膀胱。本领域的技术人员应认识到，其它器官能用于本发明。
[0066] 如本文使用的，术语"过酸"指酸的-OH基被-OOH基取代的酸。过酸可以是式R-C(O)-OOH的过氧羧酸，其中R基可以是例如H、烷基、烯基或芳基等基团。过酸包括但不 局限于，过氧乙酸和间氯-过氧苯甲酸（MCPBA)。本领域的技术人员将认识到，其它过酸能 用于本发明。
[0067]如本文使用的，术语"过氧化物"指含有氧-氧单键的化合物。过氧化物的例子包 括但不局限于，过氧化氢。本领域的技术人员将认识到，其它过氧化物能用于本发明。
[0068] 如本文使用的，术语"药学上可接受的赋形剂"指有助于给予对象活性药剂和对象 吸收的物质。用于本发明的药物赋形剂包括但不局限于，聚合物、溶剂、抗氧化剂、粘合剂、 填充剂、崩解剂、润滑剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、稳定剂、着色剂、金属、陶瓷及半金属。下 文中对药学上可接受的赋形剂进行了进一步讨论。本领域的技术人员将认识到，其它药物 赋形剂能用于本发明。
[0069] 如本文使用的，术语"聚合物"指由共价化学键连接的重复结构单元或单体组成的 分子。下文叙述了用于本发明的聚合物。本领域的技术人员将认识到，其它聚合物能用于 本发明。
[0070] 如本文使用的，术语"前药"指当该前药给予哺乳动物对象时能够释放本发明方法 的活性药剂的化合物。活性成分的释放发生在体内。前药可以用本领域的技术人员已知的 技术来制备。这些技术通常修饰给定化合物中的合适官能团。然而，这些修饰的官能团通 过常规操作或在体内再生原先的官能团。本发明活性药剂的前药包括羟基、脒基、胍基、氨 基、羧基或类似基团修饰的活性药剂。
[0071] 如本文使用的，术语"盐"指用于本发明方法的化合物的酸式盐或碱式盐。药学 上可接受的盐的说明性例子是无机酸（盐酸、氢溴酸、磷酸等）盐、有机酸（乙酸、丙酸、 谷氨酸、柠檬酸）盐。合适的药学上可接受的盐的其它信息可以参见《雷明顿药物科学》 (Remington'sPharmaceuticalSciences)，第17版，宾夕法尼亚州伊斯顿的马克出版公司 (MackPublishingCompany,Easton,Pa.)，1985,该文献通过引用结合于此。
[0072] 本发明酸 性化合物的药学上可接受的盐是用碱形成的盐，即阳离子盐，例如碱金 属和碱土金属盐，例如钠、锂、钾、钙、镁以及铵盐，例如铵、三甲基铵、二乙基铵、和三-(羟 甲基）-甲基-铵盐。
[0073] 类似的酸加成盐，例如无机酸、有机羧酸和有机磺酸，例如盐酸、甲磺酸、马来酸的 盐也是可能的，只要碱性基团，例如吡啶基构成部分结构。
[0074] 可以通过使碱或酸与该盐接触并且以常规方法分离母化合物来再生化合物的中 性形式。化合物的母体形式与各种盐形式在某些物理性质方面，例如在极性溶剂中的溶解 性方面不同，然而在别的方面，这些盐等同于本发明目的的化合物的母体形式。
[0075] 如本文使用的，术语"来源"指提供本发明化合物供给和治疗剂供给的本发明装置 上的位置。该本发明装置可以具有一个以上来源，例如第一和第二来源。每一个来源可以 具有不同的化合物和组合物并且可用于治疗不同的适应症。
[0076] 如本文使用的，术语"对象"指动物，例如哺乳动物，包括但不限于，灵长类（例如 人）、牛、绵羊、山羊、马、猪、狗、猫、兔、大鼠、小鼠等。在某些实施方式中，对象是人。
[0077] 如本文使用的，术语"治疗剂"指对给予该治疗剂的病人具有疗效的药剂、化合物 或生物分子。
[0078] 如本文使用的，术语"治疗有效量或剂量"或"治疗足够量或剂量"或"有效或足 够量或剂量"指对给药的对象产生疗效的剂量。确切的剂量将取决于治疗的目的并且可 由本领域的技术人员使用已知的技术（见例如Lieberman，《药物剂型》（Pharmaceutical DosageForms)(第1-3卷，1992) ;Lloyd，《药物组合的方式、科学和技术》（TheArt， ScienceandTechnologyofPharmaceuticalCompounding) (1999) ;Pickar，〈〈剂量计算〉〉 (DosageCalculations) (1999);和《雷明顿：药学科学和实践》（Remington:TheScience andPracticeofPharmacy)，第 20 版，2003，Gennaro编辑，Lffff公司（Lippincott， Williams&Wilkins))确定。在敏化细胞中，治疗有效剂量常常低于非敏化细胞常用的治疗 有效剂量。
[0079] 如本文使用的，术语"人造血管"指用于哺乳动物的循环系统的假体。
[0080] II.本发明化合物
[0081] 大环内酯、它们的盐、前药和异构体在本发明中将共同称为"大环内酯"。
[0082] 本发明化合物是下式大环内酯化合物及其盐、水合物、异构体、代谢物和前药：
[0094] 在另一个实施方式中，化合物是图2的化合物。在其它实施方式中，R1、!?2、!?3、!?4、 R5、R6、R7、R8和R9中至少一个是0H。在另一些实施方式中，R4是0H。
[0095] 本发明提供式IA、IB和IC具体描述的大环内酯化合物。
[0096] 在一个实施方式，组合物含有大环内酯类，包括羟基、脱甲基、羟基脱甲基和环氧 大环内酯。
[0097] 具有一些可能进行化学修饰以便提供本发明化合物的位点的某些大环内酯类的 结构如下所示。
[0098]
基，例如-(CH2) 2至（CH2) 7和-RbOR。，其中Rb是C2_6亚烷基并且R。是Ci_5烷基，例如，40-0-(乙 氧基乙基）雷帕霉素。
[0100] 在一些实施方式中，本发明化合物包括某些脱甲基大环内酯类，例如单独的或 相互组合的16-0-脱甲基大环内酯、39-0-脱甲基大环内酯、27-0-脱甲基大环内酯、 16, 27-双-0-脱甲基大环内酯、27, 39-双-0-脱甲基大环内酯、16, 39-双-0-脱甲基大环 内酯，如式IA中所示。
[0101] 式IA
[0102]
[0103] 其中
[0104] R4、R7和R9各自独立地选自-OCH3或-OH。
[0105] R4和R7都独立地选自-OH或-OCH3。
[0106] R7和R9都独立地选自-OH或-OCH3。
[0107] R4和R9都独立地选自-OH或-OCH3。
[0108] R4、R7和R9各自独立地选自-OH或-OCH3。
[0109] 并且Rltl的定义如上所述。
[0110] 在另一个实施方式中，本发明化合物包括单独的或相互组合的羟基大环内酯，例 如11-羟基大环内酯、12-羟基大环内酯、14-羟基大环内酯、24-羟基大环内酯、25-羟基大 环内酯、35-羟基大环内酯，如式IB中所示。
[0111] 式IB
[0112]
[0113] 其中
[0114] R1、R6和R8各自选自-CH3或-OH。
[0115] R2、R3和R5各自选自-H或-OH。
[0116] 并且Rltl的定义如上所述。
[0117] 在另一个实施方式中，本发明化合物包括如式IC所示的环氧大环内酯，例如 19, 20-21，22-29, 30 三环氧大环内酯、17, 18-19, 20-21，22 三环氧大环内酯和 17, 18-29, 30 双环氧大环内酯的组合物。
[0118] 式IC
[0119]
[0121] 其中Rltl的定义如上所述。
[0122] 在另一个实施方式中，本发明化合物是式IA和IB的组合，包括单独的或相互 组合的脱甲基羟基大环内酯，例如14-羟基-39-0-脱甲基大环内酯、16, 39-双-0-脱 甲基-24-羟基大环内酯、16, 27-双-0-脱甲基-24-羟基大环内酯、27, 39-双-0-脱甲 基-24-羟基大环内酯的组合物。
[0123] 在另一个实施方式中，本发明化合物是式IA和IC的组合，包括单独的或相 互组合的环氧脱甲基大环内酯，例如17, 18-19, 20-双环氧-16-0-脱甲基大环内酯、 17, 18-29, 30-双环氧-16-0-脱甲基大环内酯的组合物。
[0124] 在另一个实施方式中，本发明化合物是式IA、IB和IC的组合，包括单独的或相互 组合的环氧脱甲基羟基大环内酯，例如17, 18-19, 20-双环氧-16-0-脱甲基-24-羟基-大 环内酯、17, 18-29, 30-双环氧-16-0-脱甲基-24-羟基-大环内酯的组合物。
[0125] 本发明还包括式IA、IB和IC的本发明化合物的水合物、盐、异构体、前药、代谢物 和衍生物的组合。
[0126] 式IA、IB和IC的本发明化合物及其组合的优选实施方式（A、B、C、...AA、AB、 AC、...AX、AY、AZ)的结构见表1，其中一些显示在图2A-2AZ中。（A/W包括立体中心 (sterocenter)：―,和 ) 0
[0127] 表1.优选化合物表
[0128]
立体异构体和该化合物的所有其它异构体。
[0136] 本发明包括具有不同多晶型的化合物。这包括具有不同多晶型的16-0-脱 甲基大环内酯。例如，16-0-脱甲基大环内酯的不同多晶型通过使用二氯甲烷 (dichloromethylene)和使用甲醇和水的混合物来获得。
[0137]大环内酯类存在不同的编号方案。为了避免混淆，当本文命名特定的大环内酯时， 参考使用以上化学式的编号方案对大环内酯命名。本发明还涉及所有由于不同编号方案而 具有不同名字的大环内酯，如果化学结构内相同位置上存在相同官能团。例如，39-0-脱甲 基大环内酯是与41-0-脱甲基大环内酯相同的化合物，16-0-脱甲基大环内酯是与7-0-脱 甲基大环内酯相同的化合物。
[0138] 本发明化合物能用各种方法来制备。在一些实施方式中，通过对有机物菌株进行 基因改造以便产生本发明化合物或通过其它方法以生物方式合成本发明化合物。
[0139] 在另一个实施方式中，本发明化合物使用化学合成来制备。本发明化合物的化学 合成能利用大环内酯的17-18、19-20、21-22三烯结构，这便于C16甲氧基发生酸催化亲核 取代，并允许引入数个不同的取代基并对大环内酯效应结构域进行选择性操纵。用酸性试 剂操纵大环内酯中的C16甲氧基以产生本发明化合物。例如，可用不同亲核试剂，例如醇、 硫醇和富电子芳基取代C16甲氧基。该合成方法可能不包括保护和脱保护步骤。
[0140] 使用酸性试剂与具有三烯官能团的化合物的合成方法可应用于其它具有三烯官 能团的化合物，以便合成相应的化合物类似物，提供不包括保护和脱保护步骤的合成方法。
[0141] 在一些实施方式中，本发明提供制备本发明化合物的方法，该方法包含使大环内 酯与酸接触以便用亲核试剂取代烷氧基，由此制备本发明化合物。在一些实施方式中，大环 内酯是雷帕霉素。在其它实施方式中，亲核试剂选自-〇H、-SH或富电子芳基。本领域的技 术人员将认识到，其它方法可用于制备本发明化合物。
[0142] 图14中用16-0-脱甲基大环内酯作为例子提供脱甲基大环内酯的合成方法。图 15中用19,20_双羟基-大环内酯作为例子提供羟基大环内酯的合成方法。图16中用 17, 18-29, 30-双环氧大环内酯作为例子提供环氧大环内酯的合成方法。
[0143] 在另一个实施方式中，本发明提供制备本发明化合物的方法，该方法包括使大环 内酯与合适的试剂，例如过酸或过氧化物接触以便使烯烃基修饰成环氧基，由此制备本发 明化合物。用于本发明方法中的过酸包括但不局限于式R-C(O)-OOH的过氧羧酸，其中R 基可以是例如H、烷基、烯基或芳基等基团。在一些实施方式中，过酸可以是过氧乙酸或 间-氯-过氧苯甲酸（MCPBA)。用于本发明方法中的过氧化物包括但不局限于，过氧化氢。 本领域的技术人员将认识到，其它环氧化试剂可用于本发明。
[0144] 本发明化合物是任选地氘化的。
[0145] 在一些实施方式中，本发明提供与相应母体大环内酯功效类似的本发明化合物。 在另一个实施方式中。本发明提供效力小于相应母体大环内酯以便改善化合物安全性的本 发明化合物。
[0146]III.本发明化合物的递送
[0147] 本发明化合物可以以任何合适的方法给药。在一些实施方式中，这些化合物可通 过口服、肌内、腹膜内、皮下、经肺、粘膜、经皮、血管内和其它方式给药。在其它实施方式中， 化合物经临时或永久的递送装置定位给药，或用全身和定位方式的组合给药。例子包括但 不局限于导管、支架、血管包裹物（vascularwrap)、泵、分流器（shunt)或其它临时或永久 的递送装置。
[0148]A.装置
[0149] 在一些实施方式中，本发明提供用于体内使用的装置，所述装置包括人造血管和 至少一个本发明化合物的来源。
[0150] 在其它实施方式中，本发明提供设计成向体内的体腔或器官释放化合物以便抑制 细胞增殖或细胞迀移的装置。在另一个实施方式中，该装置设计成向体内的体腔或器官释 放化合物以便抑制平滑肌细胞增殖的装置。
[0151] 在本发明的另一个实施方式中，递送装置是诸如移植物的装置，包括移植植入物、 血管植入物、非血管植入物、可植入内腔假体、伤口闭合植入物、药物递送植入物、缝线、生 物递送植入物、尿路植入物、子宫内植入物、器官移植物、眼科植入物、骨植入体，包括骨板、 接骨螺钉、牙植入体、脊椎垫片等等。
[0152] 植入物通常能够进行以下一项或多项内容：向体腔、器官、脉管、导管、肌肉、组织 块或骨提供、包含、结合、固定、插入、闭合、维持、输送药物、输送生物制品，以便预防或治疗 疾病，例如过度增生性疾病、再狭窄、心血管疾病、炎症、伤口愈合、癌症、动脉瘤、糖尿病、腹 主动脉瘤、高钙血症或其它疾病。
[0153] 本发明的植入物可以由金属、金属合金、聚合物、陶瓷、半金属、纳米复合材料或它 们的组合形成。例如，植入物可以由金属，例如钽、铁、镁、钼等制成；由可降解的或不可降解 的金属合金，例如316L不锈钢、碳钢、镁合金、NI-Ti、Co-Cr，例如L605、MP35等制成；由可 降解或不可降解的聚合物，例如聚乳酸、聚乙醇酸、聚酯、聚酰胺、共聚物等或聚合物的混合 物制成；由金属和金属或金属合金的组合，例如由不锈钢层和钛层等组合制成；由纳米复 合材料，例如纳米碳纤维或纳米碳管等制成。
[0154] 在另一个实施方式中，本发明提供其中植入物是人造血管的装置。在一些实施方 式中，人造血管包含可扩张结构。在其它实施方式中，人造血管包括至少部分由开放网络形 成的支架、移植物或构架。在其它实施方式中，人造血管是支架。
[0155] 在另一个实施方式中，本发明化合物可以施用于植入物表面附近。例如，本发明化 合物可以与植入物结合，包 含在包衣中或承载在植入物上。
[0156] 在一些实施方式中，本发明提供包含人造血管的装置，其中人造血管具有内腔表 面和面对组织的表面，化合物与内腔表面和面对组织的表面中至少一个相结合。
[0157] 在另一个实施方式中，本发明化合物施加在所有植入物的表面上。在另一个实施 方式中，本发明化合物仅施加于近腔室或腔内的表面。在又一个实施方式中，本发明化合物 仅施加于高应力区或低应力区。
[0158] 在另一个实施方式中，本发明化合物包含在临近植入物的可腐蚀或不可腐蚀的纤 丝中。
[0159]用于承载本发明化合物的支架结构的例子如图3中所示，其处于压缩状态。该支 架主体由多个环110构成。该环由具有通常可扩张的波状结构，例如之字型、锯齿形、正玄 波形或其它形状的冠120和支柱130构成。该主体通过联接件或连接件140连接。可理解， 连接件可以是任何长度或形状，或者如果冠直接相互连接则不需要该连接件。支架的典型 压缩态直径为0. 25-4mm、或更优地0. 7-1. 5mm，长度为5-100mm。在其张开状态，支架直径通 常是其压缩态直径的至少两倍，甚至10倍或更多。因此，压缩态直径为0. 7-1. 5mm的支架 可放射状地扩张至2-10_或更大。
[0160]在约4至12个月的血管造影随访中，具有有效的大环内酯化合物，例如雷帕霉素 的药物释放支架（Cypher?)的晚期管腔损失约0.Olmm-0. 2mm。对于相同的时期，裸金属支 架的晚期管腔损失约〇.70mm-l. 2mm。晚期管腔损失较少通常能降低狭窄百分率。然而，在 一些病例中，药物释放支架的晚期管腔损失比裸金属支架低很多，造成支架表面的组织覆 盖度不够，这可能增加晚期支架血栓的发生率。
[0161] 在一个优选的实施方式中，移植后约4-12个月后，承载本发明化合物的支架 的晚期管腔损失比承载相应母体大环内酯的支架的晚期管腔损失多0.05-0. 6mm、较优 地0? 1-0. 4臟、更优地0? 15-0. 3mm。例如，移植后晚期管腔损失是0? 01-0. 6mm、较优地 0. 1-0. 5mm和最优地0. 2-0. 4mm。在另一个实施方式中，本发明提供承载本发明化合物的支 架的晚期管腔损失与承载相应母体大环内酯的支架相似。在另一个实施方式中，本发明提 供承载本发明化合物的支架的晚期管腔损失高于承载相应母体大环内酯的支架。更大的晚 期管腔能增加支架的组织覆盖度，这能改善支架的安全性。
[0162] 在另一个优选的实施方式中，移植后4-12个月承载本发明化合物的支架的狭窄 百分率比承载相应母体大环内酯的支架的狭窄百分率大1-30%、较优地3-20%、更优地 5-15%。在另一个优选的实施方式中，本发明提供承载本发明化合物的支架的狭窄百分率 与承载相应母体大环内酯的支架相似。在另一个优选的实施方式中，本发明提供承载本发 明化合物的支架的狭窄百分率高于承载相应母体大环内酯的支架。在另一个优选的实施方 式中，承载本发明化合物的支架的狭窄百分率高于承载相应母体大环内酯的支架但是低于 裸金属支架。更高的狭窄率能增加支架的组织覆盖度，这能改善支架的安全性。
[0163] 在一些实施方式中，本发明提供植入物上本发明化合物的含量小于约1克/厘米 2的装置。在其它实施方式中，植入物上化合物的含量是约1纳克/厘米 2-约1000微克/ 厘米2、较优地约1微克/厘米2_约500微克/厘米2、更优地约10微克/厘米2_约400微 克/厘米2。
[0164] 在另一个实施方式中，本发明提供使植入物临近组织中本发明化合物的浓度达到 约0? 001ng/gm组织-约1000 y g/gm组织、较优地约lng/gm组织-约500 y g/gm组织、更 优地约l〇〇ng/gm组织-约100 y g/gm组织的装置。
[0165] 在另一个实施方式中，本发明化合物能在1天_2年、较优地3天-6个月、更优地1 周-3个月的时期内从植入物释放。在其它实施方式中，本发明化合物能在大于1天、较优 地大于2周、更优地大于1个月的时期内从植入物释放。在另一个实施方式中，本发明化合 物需要大于两年从支架完全释放。在一些实施方式中，在给定时间期限内释放的化合物的 量是至少25%。在其它实施方式中，释放的化合物的量是至少50%。在另外其它实施方式 中，释放的化合物的量是至少75%。在再另外其它实施方式中，释放的化合物的量可以是至 少 80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98 或 99%。
[0166] 在另一个实施方式中，本发明提供在约1天至约2年的时期内从装置释放至少 75 %化合物的装置。在另一个实施方式中，在约3天至约6个月的时期内至少90 %化合物 从装置释放。在另一个实施方式中，在约1周至约3个月的时期内至少90%化合物从装置 释放。
[0167] 在一些实施方式中，本发明提供还包括如下所述的治疗剂的装置。在以下其它的 实施方式中，治疗剂在化合物释放之前、同时或之后释放。在其它实施方式中，化合物从第 一来源释放并且治疗剂从第二来源释放。在另外的其它实施方式中，化合物和治疗剂从单 一来源释放。
[0168] B?给药
[0169] 本发明化合物能够以每日、间歇性或一次性剂量全身给药。每日全身剂量可以是 0.lmg-20mg、较优地0. 5mg-10mg、最优地lmg-5mg。本领域的技术人员间认识到，其它剂量 也可用于本发明。
[0170] 本发明化合物可以以约1纳克/厘米2/天-约1000微克/厘米2/天、较优地约 1微克/厘米V天-约200微克/厘米2/天、更优地约5微克/厘米2/天-约100微克/ 厘米 2/天的速率从植入物释放。
[0171]C.药物制剂
[0172] 在一些实施方式中，本发明提供包含药学上可接受的赋形剂和下式化合物的药物 组合物及其盐、水合物、异构体、代谢物和前药：
[0178] 在一些实施方式中，本发明提供药物组合物，其中药学上可接受的赋形剂选自聚 合物、溶剂、抗氧化剂、粘合剂、填料、崩解剂、润滑剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、稳定剂、着色 剂、金属、陶瓷或半金属。在其它实施方式中，药学上可接受的赋形剂是聚合物。
[0179] 根据给药模式和剂型的性质，本发明的活性成分可以与药学上可接受的载体、稀 释剂、佐剂、赋形剂或运载体，例如防腐剂、填料、聚合物、崩解剂、助流剂、湿润剂、乳化剂、 悬浮剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、润滑剂、酸化剂和分散剂混合。这些成分、包括可用于配制 口服剂型的药学上可接受的载体和赋形剂在《药物赋形剂手册，美国制药协会》（Handbook ofPharmaceuticalExcipients，AmericanPharmaceuticalAssociation) (1986)中有描 述，该手册以其全部通过引用结合于此。药学上可接受的载体的例子包括水、乙醇、多元醇、 植物油、脂肪、蜡聚合物、包括形成凝胶的和不形成凝胶的聚合物、和它们的合适的组合物。 赋形剂的例子包括淀粉、预胶凝淀粉、微晶纤维素、乳糖、牛奶糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢 钙、色淀（lake)混合物。崩解剂的例子包括淀粉、藻酸和某些复合硅酸盐。润滑剂的例子 包括硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、以及高分子量聚乙二醇。本领域的技术人员将认 识到，其它不同的赋形剂也可用于本发明制剂，本文提供的列表是不完全的。
[0180] 合适的不可降解的或缓慢降解的聚合物涂层包含但不局限于：聚氨酯、聚乙烯亚 胺、乙稀乙稀醇共聚物、娃酮、C-flex、尼龙、聚酰胺、聚酰亚胺、聚四氟乙稀（PTFE)、聚对二 甲苯（parylene)、帕里拉（parylast)、聚（甲基丙烯酸甲酯）、聚（甲基丙烯酸正丁酯）、聚 (甲基丙烯酸丁酯）与聚（乙烯乙酸乙烯酯）的共聚物或共混物、聚（甲基丙烯酸甲酯）、 聚（甲基丙烯酸2-羟基乙酯）、聚（乙二醇甲基丙烯酸酯）、聚（氯乙烯）、聚（二甲基硅氧 烷）、聚（乙烯乙酸乙烯酯）、聚碳酸酯、聚丙烯酰胺凝胶等，包括其它合成或天然的聚合物； 它们的混合物、共聚物或组合。
[0181] 合适的生物可降解聚合物涂层包含但不局限于，聚（乳酸）、聚乳酸酯、聚（乙 醇酸）、聚乙醇酸醋以及它们的共聚物和异构体、聚对二氧环己酮（polydioxanone)、聚 (谷氨酸乙酯）、聚（羟基丁酸酯）、聚羟基戊酸酯和共聚物、聚己内酯、聚酸酐、聚（原 酸酯）、聚（醚酯）、聚乙二醇、聚（环氧乙烷）、聚（碳酸三甲酯）、聚碳酸亚乙基酯、聚 碳酸亚乙基酯和聚（碳酸三甲酯）的共聚物、聚（碳酸亚丙基酯）、聚（碳酸亚氨基酯） (poly(iminocarbonate))、淀粉基聚合物、醋酸丁酸纤维素、聚醋酰胺、聚醋胺、聚氰基丙稀 酸酯、聚磷腈、N-乙烯基-2-吡咯烷酮、聚马来酸酐、季铵化合物包括硬脂酰氯化铵和苄基 氯化铵、共聚物和其它脂肪族聚酯、或它们的合适的共聚物，包括聚（L-乳酸）和聚（e-己 内酯）的共聚物；它们的混合物、共聚物或组合。
[0182] 合适的天然涂层包括：纤维蛋白、白蛋白、胶原、明胶、糖胺聚糖、寡糖和多糖、软骨 素、硫酸软骨素、羟基磷灰石（hypoxyapatite)、磷脂、磷酸胆碱、糖脂、脂肪酸、蛋白质、纤维 素、和它们的混合物、共聚物、或组合。
[0183] 合适的非聚合涂层包括金属涂层，例如钨、镁、钴、锌、铁、铋、钽、金、钼、不锈钢、例 如316U304、钛合金；陶瓷涂层，例如氧化硅；半金属，例如碳、纳米多孔涂层；或它们的组 合。
[0184] 在一些实施方式中，药学上可接受的赋形剂是选自下组的聚合物：聚氨酯、聚乙烯 亚胺、乙烯乙烯醇共聚物、硅酮、C-flex、尼龙、聚酰胺、聚酰亚胺、聚四氟乙烯（PTFE烯）、聚 对二甲苯、帕里拉、聚（甲基丙烯酸酯）、聚（氯乙烯）、聚（二甲基硅氧烷）、聚（乙烯乙酸 乙烯酯）、聚碳酸酯、聚丙烯酰胺凝胶、聚（甲基丙烯酸甲酯）、聚（甲基丙烯酸正丁酯）、聚 (甲基丙烯酸丁酯）与聚（乙烯乙酸乙烯酯）的共聚物或共混物、聚（甲基丙烯酸甲酯）、 聚（甲基丙烯酸2-羟基乙酯）、聚（乙二醇甲基丙烯酸酯）、聚（碳酸乙烯酯）、聚L丙交 酯-乙交酯共聚物、聚L丙交酯-碳酸三亚甲基酯共聚物和聚L-丙交酯（polyL-Iactide)。 在另一个实施方式中，聚合物是聚（甲基丙烯酸正丁酯）。
[0185] 在另一个实施方式中，本发明提供组合物，其中化合物含量为化合物与聚合物混 合物的至少25% (w/w)。在另一个实施方式中，化合物以含量为至少50% (w/w)。在另一 个实施方式中，化合物含量为至少75% (w/w)。本领域的技术人员将认识到，其它组合物能 用于本发明。
[0186] 在另一个实施方式中，本发明化合物能施加到没有涂层的支架上。在另一个实施 方式中，本发明化合物能与聚合物涂层如本发明化合物-聚合物基质组合施加到支架上。 本发明化合物是完全或部分结晶的或是无定形的。聚合物可以是不可降解的、部分可降解 的或完全可降解的。涂层也可以是非聚合涂层，例如金属涂层。在另一个实施方式中，本 发明化合物能单独施加到支架上，或包含在具有聚合物或非聚合物外涂层的涂层中。在另 一个实施方式中，支架包括布置在支架表面和本发明化合物或本发明化合物-聚合物基 质之间的底涂层。合适的底涂层可以是聚合物涂层，例如二氯对二甲苯二聚体（paralyne C)、对二甲苯二聚体（paralyneN)、乙稀乙稀醇（EV0H)、聚己内醋、羟基化乙酸乙基乙稀醋 (ethylvinylhydroxylatedacetate，EVA)等或它们的组合；或是非聚合涂层，例如金属或 陶瓷等。
[0187] 这些涂层可以通过任何不同的方法，包括但不局限于喷雾、超声波沉积、浸渍、喷 墨分配、等离子体沉积、离子注入、溅射、蒸发、气相沉积、热解、电镀、辉光放电涂布等或它 们的组合来施涂。
[0188] 涂层厚度可以是1纳米-100微米、较优地100纳米-50微米、更优地1微米-20 微米。
[0189] 本发明化合物可以与抗氧化剂或稳定剂混合以便防止由于氧化或其它方式而降 解。抗氧化剂包括但不局限于丁基化羟基甲苯（BHT)、硫酸亚铁、乙二胺四乙酸（EDTA)或 其它。稳定剂包括但不局限于，戊烯（amglene)、氢醌、奎宁、焦亚硫酸钠或其它。抗氧化 剂和稳定剂可以与化合物直接混合或与化合物制剂，例如化合物-聚合物基质共混以便减 少生产过程中的构型变化或降解，并且延长化合物或含化合物的植入物的保存期或保藏 期限。化合物中抗氧化剂，例如BHT的含量可以是0. 01-10%、较优地0. 05-5%、最优地 0. 1-1%。化合物中稳定剂，例如戊烯的含量可以是0.001-0. 1 %、较优地0.005-0. 05%、最 优地0. 01-0. 02%。本领域的技术人员将认识到，其它抗氧化剂和稳定剂能用于本发明。
[0190] 本发明化合物能与治疗剂，例如抗血小板药、抗血栓药、消炎药、抗增殖药、免疫抑 制剂、抗肿瘤药、或其它药剂或它们的组合联合使用。本领 域的技术人员将认识到，其它治 疗药能用于本发明。
[0191] 治疗剂可以与本发明化合物一起和/或独立于本发明化合物结合在支架上。至少 部分治疗剂可以在本发明化合物从支架释放之前、同时或之后从支架释放。治疗剂还可以 在递送本发明化合物之前、期间或之后经全身性或定位给药单独地给予。
[0192] 例如，本发明化合物与抗血小板药或抗血栓药，例如肝素、氯吡格雷、华法林、阿司 匹林、力抗栓等一起给予。在另一个实施例中，本发明化合物与消炎药，例如阿斯匹林、双氯 芬酸、消炎痛、舒林酸、酮洛芬、氟比洛芬、布洛芬、萘普生、吡罗昔康、替诺昔康、托美丁、酮 咯酸、奥沙普嗪、甲芬那酸、非诺洛芬、萘丁美酮片（瑞力芬）、对乙酰氨基酚和它们的混合 物；C0X-2抑制剂，例如尼美舒利、NS-398、氟舒胺（flosulid)、L-745337、塞来昔布、罗非昔 布、SC-57666、Dup-697、帕瑞昔布钠、JTE-522、伐地昔布、SC-58125、依托昔布、RS-57067、 1-748780、1-761066、4?批、依托度酸、美洛昔康、5-2474、他克莫司和它们的混合物；糖皮质 激素，例如氢化可的松、可的松、泼尼松、泼尼松龙、甲泼尼龙、甲泼尼松、曲安西龙、帕拉米 松、氟泼尼龙、倍他米松、地塞米松、氟氢可的松、去氧皮质酮等或其类似物或它们的组合一 起给予。
[0193] 在一些实施方式中，本发明提供组合物，其中小于约5%的化合物代谢为雷帕霉 素。在一些其它的实施方式中，小于约1 %的化合物代谢为雷帕霉素。在另一些其它的实施 方式中，小于约0. 1 %的化合物代谢为雷帕霉素。
[0194] 在其它实施方式中，本发明提供每日全身剂量为约0.lmg_20mg化合物的剂型的 组合物。在一些其它实施方式中，化合物的每日全身剂量是约0.5mg-10mg。在另一个实施 方式中，化合物的每日全身剂量是约lmg-5mg。
[0195] IV.治疗
[0196] 本发明化合物可以用于治疗对称为大环三烯或大环内酯的化合物类型有反应的 疾病。
[0197] 本发明化合物可以单用或与其它药剂联用，以治疗哺乳动物疾病，包括以下情况， 例如：
[0198] a)治疗和预防急性或慢性器官或组织移植排斥，例如治疗心、肺、心肺联合、肝脏、 肾脏、胰腺、皮肤或角膜移植的接受者。它们还能用于预防移植物抗宿主病，例如骨髓移植 后的疾病。
[0199] b)治疗和预防移植物血管病，例如动脉粥样硬化。
[0200]c)治疗和预防导致血管内膜增厚、血管阻塞、阻塞血管性动脉粥样硬化、再狭窄的 细胞增殖和迀移。
[0201] d)治疗和预防自身免疫疾病和炎性疾病，例如病因包括自身免疫组件的炎性疾 病，例如关节炎（例如类风湿关节炎、慢性进行性关节炎和变形性关节炎）和风湿性疾病。
[0202] e)治疗和预防哮喘。
[0203] f)治疗多药耐药疾病，例如多药耐药性癌症或多药耐药性AIDS。
[0204] g)治疗增生症，例如肿瘤、癌症、过度增生性皮肤病等。
[0205] h)治疗感染，例如真菌、细菌和病毒感染。
[0206] i)治疗或预防血管分流物中的细胞增殖。
[0207] i)治疗或预防眼科病症和疾病。
[0208] 在体外模型中说明化合物AR和雷帕霉素（西罗莫司）抑制人细胞增殖的效力。该 试验在实施例2中叙述并且结果显示在图8中。如图8中所示，化合物AR在一定浓度范围 内抑制平滑肌细胞的生长。
[0209] 在一些实施方式中，本发明提供通过给予需要的对象治疗有效量的本发明化合物 来抑制细胞增殖或迀移的方法。
[0210] 在其它实施方式中，本发明提供通过全身、局部或其组合方式给予本发明化合物 的方法。
[0211] 在一些其它的实施方式中，本发明化合物的给药途径是口服给药、作为栓剂给药， 经局部接触、胃肠道外、血管内、静脉内、腹腔内、肌内、病损内、鼻内、肺、粘膜、经皮、眼部、 皮下给药或鞘内给药。
[0212] 在另外的其它实施方式中，本发明化合物通过经临时装置或植入物递送给药。在 另一个实施方式中，临时装置选自导管或多孔气球。在另一个实施方式中，植入物是人造血 管。在另一些实施方式中，人造血管包含可扩张结构。在另一个实施方式中，人造血管包含 至少部分由开放网络形成的支架、移植物或构架。
[0213] 在一个实施方式中，本发明化合物的抑制浓度（IC5tl)约等于其相应母体大环内酯 (图1中修饰前）的IC5tl。在另一个实施方式中，IC5tl高于其相应母体大环内酯的IC5tl。在 另一个实施方式中，IC5tl低于其相应母体大环内酯的IC5tl。例如，IC5tl是其相应母体大环内 酯的IC5tl的 1/2 至 1/2000。
[0214] 在一个优选的实施方式中，本发明化合物的IC5tl是其相应母体大环内酯的IC5tl 的1. 5-1000倍、较优地是其相应母体大环内酯的2-100倍、更优地是其相应母体大环内 酯的5-50倍。在另一个实施方式中，本发明化合物的IC5tl是约0.InM-IyM、较优地约 InM-O. 5yM、更优地约 5nM-100nM。
[0215] 测量本发明化合物效果的其它方法包括测量有效浓度（EC5tl)。在一个实施方式中， EC5tl约等于相应母体大环内醋的EC5(|。在另一个实施方式中，EC5tl高于其相应母体大环内醋 的EC5tl。在另一个实施方式中，EC5tl低于其相应母体大环内酯的IC5(|。
[0216] 在一些实施方式中，本发明提供化合物的有效剂量约是0.lmg_20mg的方法。在一 些其它实施方式中，化合物的有效剂量约是0. 5mg-10mg。在另一些实施方式中，化合物的有 效剂量是约lmg-5mg。
[0217] 本发明化合物、组合物和装置用于抑制细胞因子。促炎细胞因子IL-6在应答不同 种炎症刺激时合成并且用作炎症级联反应中的重要调节蛋白。IL-6在刺激损伤后急性期反 应中起关键作用，包括释放血纤蛋白原和C-反应蛋白。
[0218] IL-6还可以直接参与再狭窄，因为已证明它能促进将白细胞征集到血管壁上和血 管平滑肌细胞增殖，这些是过度增殖疾病，例如再狭窄的发病机理的必要因素。
[0219] 基质金属蛋白酶（MMP-9)在细胞迀移和增殖，例如支架移植后新生内膜生长和血 管重构的情况中起关键作用。MMP的释放造成富含蛋白聚糖的细胞外基质增加，这会增加血 管损伤后平滑肌细胞迀移。
[0220] 血浆活性MMP-9的水平可以是裸金属支架ISR的有用独立预测指标。（血浆活性 基质金属蛋白酶9水平提高与冠状动脉支架内再狭窄相关联（ElevatedPlasmaActive MatrixMetalloproteinase_9LevelIsAssociatedWithCoronaryArteryIn-Stent Restenosis)?ArteriosclerThrombVaseBiol. 2006 ；26:el21-el25.)
[0221] 单核细胞化学引诱蛋白l(MCP-l)是由许多细胞，包括血管平滑肌细胞和内皮细 胞在体外分泌的有效的单核细胞引诱物。据显示，剔除MCP-I基因或阻断MCP-I信号能减 少高胆固醇血症小鼠中的动脉粥样硬化。据显示，MCP-I在猴新生内膜增生发病机理中起关 键作用。（小鼠和猴发生动脉外周损伤后单核细胞化学引诱蛋白-1通路在新生内膜增生中 的重要性（ImportanceofMonocyteChemoattractantProtein-IPathwayinNeointimal HyperplasiaAfterPeriarterialInjuryinMiceandMonkeys)，CircRes. 2002 ； 90:1167-1172)。MCP-I在人和家兔动脉粥样硬化病变的巨噬细胞富集区域的小簇细胞中 强烈表达（单核细胞化学引诱蛋白-1在人和家兔动脉粥样硬化病变的巨噬细胞富集区域 中的表达（ExpressionofMonocyteChemoattractantProteinIinMacrophage-Rich AreasofHumanandRabbitAtheroscleroticLesions)，PNAS，第 88 卷，5252-5256) 〇 抑 制MCP-I对治疗和预防上述炎性、增殖性和其它病情具有治疗作用。
[0222] 白细胞介素-IO(IL-IO)是对单核细胞具有强烈抑制作用的抗炎细胞因子。据 显示，IL-IO减少损伤后内膜增生（在高胆固醇血症家兔中进行血管成形术或植入 支架后白介素 _1〇 抑制内膜增生（Interleukin-lOInhibitsIntimalHyperplasia AfterAngioplastyorStentImplantationinHypercholesterolemicRabbits) Circulation. 2000 ;101:908-916)。在应答LDL刺激中由人单核细胞内源性地产生IL-IO 抑制IL-12产生，这说明IL-IO的交叉调节作用可以抗衡促炎反应。
[0223] 本申请还涉及以下实施方案：
[0224] 1. -种药物组合物，其包含药学上可接受的赋形剂和下式化合物或其盐、水合物、 异构体、代谢物或前药：
[0225]
[0226] 2.如实施方案1所述的组合物，其特征在于，所述药学上可接受的赋形剂选自聚 合物、溶剂、抗氧化剂、粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、稳定剂、着 色剂、金属、陶瓷或半金属。
[0227] 3.如实施方案2所述的组合物，其特征在于，所述药学上可接受的赋形剂是聚合 物。
[0228] 4.如实施方案3所述的组合物，其特征在于，所述聚合物选自下组：聚氨酯、聚乙 烯亚胺、乙烯乙烯醇共聚物、硅酮、C-flex、尼龙、聚酰胺、聚酰亚胺、聚四氟乙烯（PTFE)、聚 对二甲苯、帕里拉、聚（甲基丙烯酸酯）、聚（氯乙烯）、聚（二甲基硅氧烷）、聚（乙烯乙酸 乙烯酯）、聚碳酸酯、聚丙烯酰胺凝胶、聚（甲基丙烯酸甲酯）、聚（甲基丙烯酸正丁酯）、聚 (甲基丙烯酸丁酯）与聚（乙烯乙酸乙烯酯）的共聚物或共混物、聚（甲基丙烯酸甲酯）、 聚（甲基丙烯酸2-羟基乙酯）、聚（乙二醇甲基丙烯酸酯）、聚（碳酸乙烯酯）、聚L丙交 酯-乙交酯共聚物、聚L丙交酯-碳酸三亚甲基酯共聚物和聚L-丙交酯。
[0229] 5.如实施方案4所述的组合物，其特征在于，所述聚合物是聚（甲基丙烯酸正丁 酯）。
[0230] 6.如实施方案4所述的组合物，其特征在于，在所述化合物和所述聚合物的混合 物中所述化合物的含量为至少25% (w/w)。
[0231] 7.如实施方案6所述的组合物，其特征在于，所述化合物的含量为至少50% (w/ w) 〇
[0232] 8.如实施方案6所述的组合物，其特征在于，所述化合物的含量为至少75% (w/ w) 〇
[0233] 9.如实施方案1所述的组合物，所述组合物的剂型是所述化合物的每日全身剂量 是约 0?lmg_20mg。
[0234] 10.如实施方案9所述的组合物，其特征在于，所述化合物的每日全身剂量是约 0? 5mg_10mg〇
[0235] 11.如实施方案9所述的组合物，其特征在于，所述化合物的每日全身剂量是约 lmg_5mg〇
[0236] 12. -种用于体内应用的装置，所述装置包括：
[0237] 植入物；和
[0238] 至少一个实施方案1所述化合物的来源。
[0239] 13.如实施方案12所述的装置，其特征在于，所述装置设计成向体内的体腔或器 官释放所述化合物以便抑制细胞增殖。
[0240] 14.如实施方案13所述的装置，其特征在于，所述装置设计成向体内的体腔或器 官释放所述化合物以便抑制平滑肌细胞增殖和发炎。
[0241] 15.如实施方案12所述的装置，其特征在于，所述植入物是人造血管。
[0242] 16.如实施方案15所述的装置，其特征在于，所述人造血管包含可扩张结构。
[0243]17.如实施方案15所述的装置，其特征在于，所述人造血管包括至少部分由开放 网络形成的支架、移植物或构架。
[0244] 18.如实施方案17所述的装置，其特征在于，所述人造血管是支架。
[0245]19.如实施方案16所述的装置，其特征在于，所述人造血管具有内腔表面和面对 组织的表面，所述化合物与内腔表面和面对组织的表面中至少一个相结合。
[0246] 20.如实施方案12所述的装置，其特征在于，所述装置上所述化合物的含量约是1 纳克/厘米 2_1〇〇〇微克/厘米2。
[0247] 21.如实施方案20所述的装置，其特征在于，所述装置上所述化合物的含量约是1 微克/厘米 2 _500微克/厘米2。
[0248] 22.如实施方案20所述的装置，其特征在于，所述装置上所述化合物的含量约是 10微克/厘米 2_400微克/厘米2。
[0249] 23.如实施方案12所述的装置，其特征在于，临近组织中所述化合物的浓度约是 0?OOlng/gm组织-1000yg/gm组织。
[0250] 24.如实施方案23所述的装置，其特征在于，临近组织中所述化合物的浓度约是 lng/gm组织-500yg/gm组织。
[0251] 25.如实施方案23所述的装置，其特征在于，临近组织中所述化合物的浓度约是 100ng/gm组织-100yg/gm组织。
[0252] 26.如实施方案12所述的装置，其特征在于，在约1天至2年的时期内至少75% 所述化合物从所述装置释放。
[0253] 27.如实施方案12所述的装置，其特征在于，在约3天至6个月的时期内至少90 % 所述化合物从所述装置释放。
[0254] 28.如实施方案12所述的装置，其特征在于，在约1周至3个月的时期内至少90% 所述化合物从所述装置释放。
[0255] 29.如实施方案12所述的装置，其特征在于，所述装置还包括治疗剂。
[0256] 30.如实施方案29所述的装置，其特征在于，所述治疗剂选自下组：抗血小板药、 抗血栓药、消炎药、抗增殖药、免疫抑制剂、抗癌药。
[0257] 31.如实施方案29所述的装置，其特征在于，所述治疗剂在所述化合物释放之前、 同时或之后释放。
[0258] 32.如实施方案31所述的装置，其特征在于，所述化合物从第一来源释放并且所 述治疗剂从第二来源释放。
[0259] 33.如实施方案31所述的装置，其特征在于，所述化合物和所述治疗剂从单一来 源释放。
[0260] 34.实施方案1所述的化合物在制备抑制细胞增殖的药物中的用途。
[0261] 35.如实施方案34所述的用途，其特征在于，实施方案1所述的化合物通过全身、 局部或其组合途径给药。
[0262] 36.如实施方案34所述的用途，其特征在于，实施方案1所述的化合物的给药途径 是口服给药、作为栓剂给药，经局部接触、胃肠道外、血管内、静脉内、腹腔内、肌内、病损内、 鼻内、肺、粘膜、经皮、眼部、皮下给药或鞘内给药。
[0263] 37.如实施方案34所述的用途，其特征在于，实施方案1所述的化合物经临时装置 或植入物递送给药。
[0264] 38.如实施方案37所述的用途，其特征在于，所述临时装置选自导管或多孔气球。
[0265] 39.如实施方案37所述的用途，其特征在于，所述植入物是人造血管。
[0266] 40.如实施方案39所述的用途，其特征在于，所述人造血管包含可扩张结构。
[0267] 41.如实施方案39所述的用途，其特征在于，所述人造血管包含至少部分由开放 网络形成的支架、移植物、或构架。
[0268] 42.如实施方案34所述的用途，其特征在于，所述化合物的IC5tl是约0.InM-IyM。
[0269] 43.如实施方案42所述的用途，其特征在于，所述化合物的IC5tl是约InM-O. 5yM。
[0270] 44.如实施方案42所述的用途，其特征在于，所述化合物的IC5tl是约5nM-100nM。
[0271] 45.如实施方案34所述的用途，其特征在于，所述化合物的有效剂量是约 0.lmg_20mgD
[0272] 46.如实施方案45所述的用途，其特征在于，所述化合物的有效剂量是约 0? 5mg_10mg〇
[0273] 47.如实施方案45所述的用途，其特征在于，所述化合物的有效剂量是约 lmg_5mg〇
[0274] 48. -种用于体内应用的装置，所述装置包括：
[0275] 植入物；和
[0276] 以下通式化合物或其盐、异构体的至少一个来源
[0277]
[0278] 49.以下通式化合物或其盐、或异构体在制备抑制细胞增殖的药物中的用途
[0279]
[0280] 人们能够认识到，本发明中公开的所有实施方式能单独使用或与本发明的其它实 施方式或实施例结合使用。 V.实施例
[0281] 实施例I:16-0-脱甲基大环内酯（化合物AR)的制备
[0282] 用500ml0.IN盐酸处理500ml乙腈中的大环内酯雷帕霉素（1000mg、10. 75mmol)。 所得溶液在室温下搅拌约28小时。然后在分液漏斗中用二氯甲烷萃取反应混合物。有机 层用水和盐水洗涤，然后用0.IM磷酸钠缓冲液（pH= 7. 4)洗涤两次或直到pH= 7,然后用 蒸馏（DI)水洗涤三次。最后，有机层用Na2SO4干燥并放置在冰箱中过夜。真空浓缩得到米 色的化合物AR粉末（约820mg)。
[0283] 化合物AR用制备型HPLC在购自SUPECO公司的AscentisC18 (21. 2x250_， IOym)柱上纯化，在0-12分钟内使用甲醇：水（80:20)作为流动相，然后在12. 01-20分钟 变为100%甲醇，流速为15毫升/分钟。装载浓度是350mg/ml并且进样量是IOOy1。用 254nm的UV吸光度监测化合物。在这些条件下，化合物AR在9. 0-11. 5分钟流出，而原料和 副产物在17. 0-20. 0分钟流出。
[0284] 制备型HPLC也能使用乙腈：水梯度（从70:30开始）作为流动相来实施并用 278nm的UV吸光度监测。使用该分离方法的制备型HPLC谱图显示在图4中。
[0285] 收集含有化合物AR的组分并合并，然后使用旋转蒸发器和冷冻干燥机使溶剂蒸 发以便得到米色的化合物AR粉末。
[0286] 1HNMR(CDC13,400MHz，反式：顺式酰胺旋转异构体的混合物，括号中的化学位移指 主要的旋转异构体）见图 5。8,ppm 0.532 (q，J= 12Hz，lH)，0.890 (d，J= 6.8Hz，3H)， 0.921(d，J= 6.8Hz，3H)，0.931(d，J= 6.4Hz，3H)，0.971(d，J= 6.8Hz，3H)，0.991(d，J= 6. 6Hz，3H)，I. 005 (d，J= 6. 4Hz，3H)，I. 686 (s，3H)，I. 772 (s，3H)，I. 773 (s，3H)，I. 823 (s， 3H)，3.330(s，3H)，3.380(s，3H)，3.859(d，J= 5.2Hz，lH)，4.001(d，J= 3.6Hz，lH)， 4.03-4.07(m，lH)，4.22(br，lH)，5.21-5.28(m，3H)，5.336(d，J= 11.6Hz，lH)，5.384(dd， J= 14. 8,9. 6Hz，1H)，6. 117(dd，J= 14. 4,10. 8Hz，1H)，6. 243(dd，J= 14. 4,10. 4Hz，1H)， 6. 376(dd，J= 14. 8,11. 2Hz，1H).
[0287] 与母体化合物的质子NMR相比，3. 14ppm处峰的消失说明仅在C16位发生脱甲基 作用并且完成了反应。（见JournalofAntibiotics1991，44 (6)，688,以确定雷帕霉素的 NMR谱图。）
[0288] 化合物AR的化学结构进一步用质谱实验证实。片段化模式表明存在m/z900,而在 相同的条件下雷帕霉素提供m/z914。图6中提供液相色谱和质谱实验的结果，它显示用 m/z900确认化合物AR。
[0289] 通过反向HPLC使用购自西格玛奥德里奇公司（SigmaAldrich)的Supelco C18 (4. 6x150mm，5ym)柱测定化合物AR的总含量，其中使用甲醇：水（90:10)作为流动 相，流速为1毫升/分钟。用254nm的UV吸光度监测化合物AR。化合物AR的保留时间是 7. 97分钟。图7显示总含量大于98 %的化合物AR的分析型HPLC色谱图。化合物AR的纯度 用反向HPLC使用购自沃顿斯公司（WatersCorporation)的YMCODS-ALC18(4.6x250mm， 5ym)柱进行测定，其中使用乙腈：水梯度为流动相，流速为1.0毫升/分钟。图7b显示经 278nm的UV吸光度监测，化合物AR主要异构体纯度大于98 %。
[0290] 最大程度减少化合物AR的氧化的方法是在制备型HPLC后加入0. 1 %w/w丁基化 羟基甲苯（BHT)。
[0291] 实施例2 :化合物AR的生物活性
[0292] 化合物AR的效力通过体外人平滑肌细胞培养实验来说明。在接触不同浓度 (0? 005、0. 01、0. 05、0. 1，0. 5 和IyM)的化合物AR和不同浓度（0? 0005、0. 001、0. 01 和 0.IyM)的雷帕霉素1、3和8小时后，测定样品的胸苷掺入量。使平滑肌细胞与化合物AR 和雷帕霉素接触1和3小时的较短时间后，化合物AR和雷帕霉素的IC5tl分别是约0. 05和 0. 01yM(如表1和图8中所示）。使平滑肌细胞与化合物AR和雷帕霉素接触8小时后，化 合物AR和雷帕霉素的IC5tl分别是约0. 005和0. 001yM。化合物AR的IC5(|约为雷帕霉素 的IC5tl的五倍。
[0293] 表1 :接触不同浓度的雷帕霉素和化合物AR后人平滑肌细胞的增殖百分率数据
[0294] 化合物AR
[0295]
[0297] 实施例3 :含有化合物AR的支架的制备
[0298] 在室温下将15mg聚（甲基丙烯酸正丁基酯）（PBMA)溶解在3mL二氯甲烷中。将 IOmg化合物AR放置在小瓶中并溶解在2mL含有或不含0.1 % (w/w)BHT的二氯甲烷中。合 并溶液并进一步用IOmL二氯甲烷稀释。
[0299] 使用微处理器控制的超声波喷雾器将450 yg含PBMA的药物溶液施涂到18mm金 属支架（可从加州桑尼维尔的万能医药公司（ElixirMedicalCorp，Sunnyvale，Calif.) 购得）的全部表面。涂布后，将支架放置在真空室中。然后将支架安装在3. 0X20_PTCA 输送导管的气球上。然后将该导管插入线圈并包装在特卫强(Tyvek)?袋中。该小袋用环 氧乙烷消毒。再将特卫强⑧袋包装在箔袋中，用氧清除剂和氮气吹扫，真空密封。
[0300] 实施例4 :释放化合物AR的支架的体内试验
[0301] 通过比较28 ±2天猪冠状动脉中得自实施例3的化合物AR释放支架装置（如上 所述制备）的血管造影结果和非患病猪冠状动脉模型中雷帕霉素释放支架装置Cypher?冠 状动脉支架（考迪斯（Cordis)公司）的血管造影结果，评估得自实施例3的化合物AR释 放支架装置（如上所述制备）的效力。
[0302] 选择非动脉粥样硬化猪模型，因为该模型已经广泛用于支架和血管成形 术研宄，产生大量关于血管应答性质及其与人血管应答的相关性的数据（Schwartz 等，Circulation. 2002 ;106:1867-1873)。根据美国国家研宄委员会制定的实验动物护理 和使用指南饲养和照顾这些动物。
[0303] 所有动物在实验前至少三天开始并且在研宄期间持续用每口服剂量阿司匹林 (325mg)和氯吡格雷（75mg)进行预治疗。在麻醉诱导后，使用标准技术进入左或右股动脉， 引入动脉套管并且使其前进到动脉中。
[0304] 在荧光镜导向下进行血管造影，经套管插入7号引导导管并且使其前进到适当的 位置，在冠状动脉内给予硝酸甘油。选择2. 25-4. Omm平均管腔直径的冠状动脉段并且插入 0.014〃的导丝。进行定量冠状动脉造影（QCA)以便记录参考血管直径。
[0305] 使合适大小的支架前进到展开（deployment)位置。以稳定速率对气球充气至足 够压力，以便达到气球与动脉比率为1. 30:1. 0。使压力维持约10秒。进行血管造影以便记 录术后血管通畅状态和直径。
[0306] 在指定终点为各个动物进行随访血管造影。定性评估各血管造影照片，用于证明 支架迀移、管腔缩小、支架贴合（apposition)、剥离（dissection)或动脉瘤的存在、和流动 特性。完成随访血管造影后，对动物施以安乐死。
[0307] 收获各动物的心脏并且用10%缓冲福尔马林以100_120mmHg灌注冠状动脉。心 脏浸没在10%缓冲福尔马林中。记录任何心肌损伤或异常的观测数据。
[0308] 测定或计算的血管造影参数包括：
[0309] 边缘血管（近端和远端）平均管腔直径（仅植入支架后和最终）
[0310] 靶区的平均管腔直径（所有血管造影照片）
[0311] 靶区的最小管腔直径（MLD)(仅植入支架后和最终）
[0312] 直径狭窄[1-(MLD/RVD)]X100%，其中RVD是阻塞位置的参考直径的计算值 (通过基于软件的迭代线性回归技术产生无损伤血管投影的内插获得测量值）（仅最终的 血管造影照片）
[0313] 气球与动脉的比值[气球/植入支架前平均管腔直径]
[0314] 支架与动脉的比值[植入支架后/植入支架前平均管腔直径]
[0315] 晚期损失比值[MLD最终-MLD植入支架后]
[0316] 所有动物都存活至指定的终点。没有文件记录支架迀移、支架贴合不良、持续剥离 或动脉瘤的迹象。Cypher支架的三个远离中心的数据点（完全闭塞或接近完全闭塞）被排 除。与实验方案类似的此次和以前研宄的Cypher支架提供的数据，即Cypher支架的平均 狭窄百分率是20. 21±11. 45(n= 22)相比，化合物AR支架（约10微克/毫米长度药物剂 量）的平均狭窄百分率是25. 7± 17.8(n= 15)(图9)。
[0317] 本实施例中的化合物AR释放支架植入猪模型中28天时，产生比Cypher支架更高 的狭窄百分率。
[0318] 实施例5 :支架释放化合物AR的体内药物代谢动力学
[0319] 在猪冠状动脉模型中，在6小时、3天、7天和28天对得自实施例3的化合物AR支 架系统的药物代谢动力学进行评估。所用的干预手术类似于实施例4中所述的直到支架移 植的体内血管造影研宄。
[0320] 使合适大小的支架前进到展开位置。以稳定的速率向气球充气至足够压力以便达 到气球与动脉比率为1:1。使压力维持约10秒。进行血管造影以便记录术后血管通畅状态 和直径。植入总共9个支架（每个时间点3个）。
[0321] 在合适的时间点使动物安乐死并且切除心脏。切除装支架的部分，包括约IOmm临 近装支架部分的血管和IOmm远离装支架部分的血管。将近端和远端部分分离并且储存在 独立的小瓶中。小心地除去支架周围的组织并且将每一个支架放置在单独的小瓶中。然后， 在利用液相色谱质谱（LCMS)分析前，全都冷冻至-70°C。
[0322] 所有动物都存活至指定的终点。化合物AR的平均组织浓度和支架释放速率显示 在图10和11中。本实施例中的化合物AR释放支架证明化合物AR从支架释放，在7天时 释放大于40 %的药物。
[0323] 实施例6 :17, 18-29, 30-双-环氧大环内酯（AS)的制备
[0324] 将0. 8mL5%NaOH-MeOH和2ml30%H2O2加入1克雷帕霉素于40ml甲醇中的溶 液。反应混合物在室温下时搅拌24小时。如果TLC指示一些雷帕霉素仍然未反应，那么将 额外的〇.8!1^5%似011，6〇11和2111130%11 202的混合物加入反应溶液中。继续在室温下搅 拌直到TCL指示反应完成。用二氯甲烷和盐水萃取溶液三次。合并有机层并且用盐水和水 洗涤，经无水MgSO4干燥、滤除MgSO4，溶液蒸发至留下粗产物。该粗产物进一步用TCL板纯 化，得到0.40g(40%得率）淡黄色粉末。1HNMR(⑶Cl3)(~4:1构象异构体的混合物，仅列 出主要构象异构体的信号）与雷帕霉素相比的主要变化S(ppm) 1.75 (s，lH)，1.98 (s，lH)， 6. 71(ddd，5H，Jl= 16Hz，J2 = 8Hz，J3 = 2. 8Hz)。13CDEPT135NMR(CDC13)(~4:1 构象 异构体的混合物，仅列出主要构象异构体的信号）S(ppm) 152,140,133,128,127,126,84， 83, 76, 74,67, 59, 56,44,43,41，40, 36, 35, 34, 33, 31，29, 28, 22, 21，20,17,16,15,13。质谱 m/z= 962,雷帕霉素m/z= 930。
[0325] 实施例7 :17, 18-29, 30-双-环氧大环内酯（AS)的生物活性
[0326] 17, 18-29, 30-双-环氧化物大环内酯的效力用体外人平滑肌细胞培养实验来 说明。在接触不同浓度（0.005、0.01、0.05、0. 1、0.5和lyM) 17, 18-29,30-双-环氧大 环内酯和不同浓度（0. 0005、0. 001、0. 01和0.IyM)化合物AR8小时后，测定样品的胸 苷掺入量。在平滑肌细胞接触17, 18-29, 30-双-环氧大环内酯和化合物AR8小时后， 17, 18-29, 30-双-环氧化物大环内酯和化合物AR的IC5tl分别是约0. 1和0. 005yM(图 13)。17, 18-29, 30-双-环氧大环内酯的IC5tl约为化合物AR的20倍。
[0327] 实施例8 :17, 18-19, 20-21，22-三-环氧大环内酯（AY)的制备
[0328] 在室温下将间氯过氧苯甲酸0. 93g(3. 22mmol)加入0. 50g(0. 5371mmol)雷帕霉素 于IOml01(：13的溶液中。混合物在室温下时搅拌24小时。如果TLC指示一些雷帕霉素仍 然未反应，那么加入额外的间氯过氧苯甲酸0. 50g和5mlCHCl3。继续在室温下搅拌直到TCL 指示没有雷帕霉素为止。反应完成后，溶液用二氯甲烷稀释，用亚硫酸钠水溶液处理直到洗 液用淀粉-碘化物试纸得到负结果。这确保所有过量的过酸已经被破坏，用若干份CH2Cl2 萃取水层。然后有机层用两份20ml的5%碳酸氢钠洗涤以便除去苯甲酸。合并的有机萃取 物用水洗涤，经无水MgSO4干燥，滤除并且蒸发至留下粗制白色固体0. 46g。用TCL板进一 步纯化该粗产物。MSm/z978,雷帕霉素m/z930。
[0329] 实施例9 :大环内酯的细胞因子抑制作用
[0330] 在细胞培养研宄中，用大肠杆菌脂多糖（LPS)处理巨噬细胞，以便激活它分泌细 胞因子，例如IL-6、MMP-9、MCP-I和IL-10。使用酶联免疫吸附法（ELISA)测试用IOnM浓 度的化合物AR和雷帕霉素处理激活的巨噬细胞对这些细胞因子的抑制作用。接触大环内 酯对促炎细胞因子以及诱导细胞增殖和迀移的细胞因子的抑制作用显示在图12(a)中。接 触大环内酯化合物AR和西罗莫司对抗炎性细胞因子IL-10的抑制作用显示在图12(b)中。
[0331] 植入支架后第一、第三和第七天的MMP-9水平与植入支架6个月后的晚期损失 指数正相关（植入支架后基质金属蛋白酶的表达升高与在狭窄有关联（Elevatedmatrix metalloproteinaseexpressionafterstentimplantationisassociatedwith restenosis).IntJCardiol. 2006 ;112 (1):85_90)。
[0332] 化合物AR和西罗莫司不明显抑制IL-6的释放。与提高MMP-9产量并且不影响 MCP-I产量的西罗莫司相比，化合物AR显著减少细胞因子MMP-9和MCP-I的产量。
[0333] 化合物AR和西罗莫司在抑制IL-6的释放方面未显示任何差异。另一方面，化合 物AR减少细胞因子MMP-9的产量，而西罗莫司提高MMP-9的产量。与不影响MCP-I产量的 西罗莫司相比，化合物AR减少细胞因子MCP-I的产量。化合物AR和西罗莫司都抑制抗炎 性细胞因子IL-IO的产生。
[0334] 本发明中要求保护的化合物，例如化合物AR能提供更佳的治疗反应，伴随更高水 平的抗炎效果（例如对促炎性细胞因子MCP-I的抑制更强）以及更高水平的抗细胞增殖和 抗细胞迀移效果（例如对促进增殖性和迀移的细胞因子MMP-9的抑制更强）。
[0335] 实施例10 :在人临床试验中检测化合物AR释放支架
[0336] 对15位人对象进行化合物AR涂层支架的临床试验。在临床上通过评价主要不 良心脏事件来评估化合物AR涂层支架的安全性，所述主要不良心脏事件定义为死亡、心肌 梗死（Q波和非Q波）和靶病损区域的血管重建。通过4个月时的血管造影和血管内超声 (IVUS)结果来评估功效。研宄的第一终点是血管造影的支架内晚期管腔损失。第二终点是 主要不良心脏事件（MACE)和其它血管造影和IVUS评估。临床研宄得到地方伦理委员会的 同意并且所有病人在参加临床研宄之前签署了伦理委员会批准的知情同意书。
[0337] 所有病人在标准手术（indexprocedure)那天或之前至少一天开始口服阿司匹林 和噻氯匹定（500mg)进行预治疗。继续服用阿司匹林（>100毫克/天）和氯吡格雷（75毫 克/天）至少6个月。根据医院标准经皮实施手术，使用标准技术进入左或右股动脉并且 引入动脉套管并使其前进至动脉中。
[0338] 在荧光镜导向下进行标准手术血管造影，经套管插入6或7号引导导管并且使其 前进到适当的位置，在冠状动脉内给予硝酸甘油。选择3. 0-3. 5_平均管腔直径的冠状动 脉段并且插入0.014〃的导丝。进行定量冠状动脉造影（QCA)以便记录参考血管直径。在 使用标准技术植入支架之前进行病损预扩张。
[0339] 预扩张后，使大约按规定尺寸制作的支架（3.OX18mm或3. 5X18mm)前进至展开 位置。以稳定速率对气球充气至一定压力以便完全展开支架。使压力维持约30秒。如果 需要可以进行支架的后扩张以便确保支架与血管壁贴合良好。实施并记录血管造影和血管 内超声成像（IVUS)。
[0340] 在指定的4个月终点时，对各病人进行随访血管造影和IVUS。定性评估各血管造 影照片以显示管腔缩小、支架贴合（apposition)和流动特性。
[0341] 测定或计算的血管造影和IVUS参数包括：
[0342] 边缘血管（近端和远端）平均管腔直径（仅植入支架后和最终）
[0343] 靶区的平均管腔直径（所有血管造影照片）
[0344] 靶区的最小管腔直径（MLD)(仅植入支架后和最终）
[0345] 直径狭窄[1-(MLD/RVD) ]X100% ]，其中RVD是阻塞位置的参考直径的计算值 (通过基于软件的迭代线性回归技术无损伤血管投影的内插获得测量值）（仅最终血管造 影照片）
[0346] 支架内晚期管腔损失[MLD最终-MLD植入支架后]
[0347] 用IVUS评定支架内新生内膜体积百分率
[0348] 所有病人经历4个月临床和血管造影随访。在随访期没有病人发生任何主要不 良心脏事件。血管造影的结果显示血管造影测定的支架内晚期管腔损失的主要终点是 0. 16±0. 32mm。对15位病人中的13位实施IVUS分析，结果显示支架内新生内膜体积百分 率为 3. 7±2. 7%。
[0349] 作为比较，在预试验中测试Cypher支架，其显示类似的临床安全性，无临床事 件，4个月时缓释组（目前可从市场购买的制剂）血管造影测定的支架内晚期管腔损失 是0.09±0.3mm，IVUS得到的支架内新生内膜体积百分率是0.3±0.6% (Sousa，JE， Circulation2001 ；103 ；192-195)〇
[0350] 虽然为了透彻理解的目的，以上发明已经通过举例说明和实施例的方式略为详细 地叙述，但是本领域的技术人员将认识到，在所附权利要求的范围内可以实施某些改变和 修改。而且，本文提供的各参考文献以其全部通过引用结合于此，其程度如同各参考文献单 独地通过引用结合于此。
【主权项】
1. 下式的化合物或其盐、水合物、异构体、代谢物或前药在制备用于预防或治疗再狭窄 的药物中的用途：2. 下式的化合物或其盐、水合物、异构体、代谢物或前药在制备用于抑制细胞因子 MCP-1和/或MMP-9的药物中的用途：
【专利摘要】本发明涉及大环内酯化合物及它们的使用方法，具体而言，本发明提供一种大环内酯化合物及其盐、水合物、异构体、代谢物和前药在制备用于预防和/或治疗再狭窄或用于抑制细胞因子MCP-1和/或MMP-9的药物中的用途。
【IPC分类】A61K31/436, A61P9/00, A61P9/10
【公开号】CN104906087
【申请号】CN201510178065
【发明人】J·颜, 郑小霞, V·D·巴特
【申请人】万能医药公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2007年9月12日
【公告号】CN101557814A, CN101557814B, EP2083834A2, EP2083834A4, EP2431036A1, EP2702993A1, US7867988, US8367081, US8404641, US20080138375, US20110097364, US20120093891, US20120094932, WO2008033956A2, WO2008033956A3, WO2008033956A9
【专利说明】大环内酯化合物及它们的使用方法
[0001] 本申请是2007年9月12日提交的发明名称为"大环内酯化合物及它们的使用方 法"的第200780033959. 3号中国专利申请的分案申请。
[0002] 相关申请的交叉引用
[0003] 本申请要求2006年9月13日提交的美国临时申请第60/825, 531号的优先权，该 申请的公开通过引用结合于此。
[0004] 关于在联邦政府资助的研宄或开发中作出本发明的权利声明
[0005]无。
[0006] 以光盘形式提交的"序列表"、表格或计算机程序清单附件的参考。
[0007]无。 发明领域
[0008] 本发明涉及去甲基、羟基、去甲基羟基和环氧大环内酯的结构，它们的合成、药物 组合物和用于全身性和定位治疗应用的应用。
【背景技术】
[0009] 雷帕霉素（西罗莫司）是用吸湿链霉菌（Streptomyceshygroscopicus)生产的 31元天然大环内酯[C51H79N1013;MWt= 914. 2]并且发现于二十世纪七十年代（美国专 利第3, 929, 992、3, 993, 749号）。雷帕霉素（结构如下所示）于1999年被食品药物管理局 (FDA)批准用于预防肾移植排斥反应。
[0010]
[0011] 雷帕霉素类似他克莫司（与相同的细胞内结合蛋白或称为FKBP-12的亲免素结 合）但是其作用机理不同。然而，他克莫司和环孢霉素通过阻断淋巴因子（比如IL2)基因 转录来抑制T细胞激活，西罗莫司通过结合到哺乳动物雷帕霉素靶点（mTOR)来抑制T细胞 激活和T淋巴细胞增殖。雷帕霉素能与环孢霉素或他克莫司协同作用来抑制免疫系统。 [0012] 雷帕霉素还用于预防或治疗全身性红斑狼疮[美国专利第5, 078, 999]、肺炎[美 国专利第5, 080, 899]、胰岛素依赖型糖尿病[美国专利第5, 321，009]、皮肤病，例如银肩病 [美国专利第5, 286, 730]、肠病[美国专利第5, 286, 731]、血管损伤后平滑肌细胞增殖和内 膜增厚[美国专利第5, 288, 711和5, 516, 781]、成人T细胞性白血病/淋巴瘤[欧洲专利 申请525, 960A1]、眼部炎症[美国专利第5, 387, 589]、恶性癌[美国专利第5, 206, 018]、心 脏炎性疾病[美国专利第5, 496, 832]、贫血症[美国专利第5, 561，138]和神经突加速生长 [Parker,E.M?等，Neuropharmacology39, 1913-1919, 2000] 〇
[0013] 尽管雷帕霉素能用于治疗各种疾病症状，但是该化合物作为医药药物的用途受到 其极低和易变的生物利用度及其高免疫抑制效力和潜在的高毒性的限制。而且，雷帕霉素 仅微溶于水。为了克服这些问题，已经合成该化合物的前药和类似物。已经记载过通过衍 生雷帕霉素结构的31和42位（原来的28和40位）以形成甘氨酸盐、丙酸盐和吡咯烷基 丁酸盐前药来制备的水溶性前药（美国专利第4, 650, 803号）。本领域中所述的一些雷帕 霉素的类似物包括单酰基和二酰基类似物（美国专利第4, 316, 885号）、缩醛类似物（美 国专利第5, 151，4133号）、甲硅烷基醚（美国专利第5, 120, 842号）、羟基酯（美国专利第 5, 362, 781号）、以及烷基、芳基、烯基和炔基类似物（美国专利第5, 665, 772、5, 258, 389、 6, 384, 046 号；WO97/35575)。
[0014] 雷帕霉素的前药和类似物通过化学合成来合成，其中需要另外的合成步骤对某些 位置进行保护和去保护。类似物还能以生物学方式合成，其中链霉菌属菌株经遗传改造以 产生这些雷帕霉素的类似物。类似物需要保持蛋白质结合或其它细胞相互作用所需的位置 并且不产生空间位阻，以便保持其活性。这些类似物的安全性需要用一系列临床前和临床 实验进行广泛地试验。
[0015] 本发明包含新型大环内酯类和大环内酯类的新应用，其中所述组合物能以化学方 法和生物方法合成并且保存至少一部分免疫抑制、抗增殖、抗真菌和抗肿瘤性质，用于全身 应用和定位应用。
【发明内容】
[0016] 在一个实施方式中，本发明提供包含药学上可接受的赋形剂和下式化合物的药物 组合物及其盐、水合物、异构体、代谢物和前药：
[0017]
[0018] 其中R1、R2、R3、R5、R6和R8各自独立地选自H、CK烷基或OH ;R4、R7和R9各自独立地
[0022] 在第二个实施方式中，本发明提供用于体内使用的装置，该装置包括植入体和至 少一个本发明化合物的来源。
[0023] 在第三个实施方式中，本发明提供通过给予需要的对象治疗有效量的本发明化合 物来抑制细胞增殖的方法。
[0024] 在第四个实施方式中，本发明提供下式大环内酯化合物及其盐、水合物、异构体、 代谢物和前药：
[0025]
[0031] 在第五个实施方式中，本发明提供制备本发明化合物的方法，该方法包括使大环 内酯与酸接触以便用亲核试剂取代烷氧基，由此制备本发明化合物。
[0032] 在第六个实施方式中，本发明提供制备本发明化合物的方法，该方法包括使大环 内酯与环氧化试剂接触以便将烯基修饰成环氧基团，由此制备本发明化合物。
[0033]附图简要说明
[0034]图1显示大环内酯类化合物的结构，其中一些潜在位点经化学修饰后能提供本发 明化合物。用方块标记的区域是脱甲基位点，而用圆圈标记的区域是羟基化位点，并且C= C位点（C17 =C18、C19 =C20 =、C21 =C22、C29 =C30)是环氧化位点。
[0035] 图2A-2ZA显示本发明化合物。
[0036] 图3显示具有可扩张结构的支架结构的例子。
[0037] 图4显示化合物AR的制备型HPLC层析图。
[0038] 图5显示化合物AR的质子-NMR谱图。
[0039] 图6显示化合物AR的液相色谱和质谱的结果。
[0040] 图7 (a)显示化合物AR的分析型HPLC层析图。
[0041] 图7 (b)显示具有异构体的化合物AR的分析型HPLC层析图。
[0042] 图8显示接触不同浓度的雷帕霉素和化合物AR后人平滑肌细胞的增殖百分率。
[0043] 图9显示经冠状动脉血管造影（QCA)分析，猪冠状动脉模型中植入28天后，与释 放雷帕霉素的Cypher支架相比，释放化合物AR的支架发生狭窄的定量结果。
[0044] 图10显示猪冠状动脉模型中不同时间点化合物AR的组织浓度。
[0045] 图11显示猪冠状动脉模型中从支架释放化合物AR的百分率。
[0046] 图12(a)显示通过接触IOnM浓度的大环内酯化合物AR和西罗莫司来抑制活化巨 噬细胞释放IL-6、MMP-9和MCP-I。
[0047] 图12(b)显示通过接触IOnM浓度的大环内酯化合物AR和西罗莫司来抑制活化巨 噬细胞释放IL-10。
[0048] 图13显示接触不同浓度的17, 18-29, 30-双环氧大环内酯和化合物AR后人平滑 肌细胞的增殖百分率。
[0049] 图14显示本发明的16-0-脱甲基大环内酯的合成。
[0050] 图15显示19, 20-双-羟基大环内酯的合成。
[0051] 图16显示17, 18-29, 30-双环氧大环内酯的合成。
[0052] 发明详述
[0053]I?定义
[0054] 如本文使用的，术语"酸"指任何当溶解在水中时提供pH小于7. 0的溶液的化合 物。酸通常被描述为贡献氢离子（H+) (Bronsted-Lowry)的化合物或电子对受体（路易斯 酸）。用于本发明的酸包括但不局限于，HC1、H2S04、HN03和乙酸。本领域的技术人员将认识 到，其它酸能用于本发明。
[0055] 如本文使用的，"给药"指全身和局部给药或它们的组合，例如口服、作为栓剂给 药、局部接触给药、胃肠道外给药、血管内给药、静脉内给药、腹腔内给药、肌内给药、病损内 给药、鼻内给药、肺给药、粘膜给药、经皮给药、皮下给药、鞘内给药、经临时装置，例如导管 和多孔气球递送、经植入体（例如渗透泵）或假体（例如药物释放支架）或其它装置递送 给个体。本领域的技术人员将认识到，其它给予本发明化合物的模式和方法可用于本发明 中。
[0056] 如本文使用的，术语"烷氧基"指包含氧原子的烷基，例如甲氧基、乙氧基等。"卤 代烷氧基"如对于烷氧基定义的，其中部分或全部氢原子用卤素原子取代。例如，卤代烷氧 基包括三氟甲氧基等。本领域的技术人员将认识到，其它烷氧基能用于本发明。
[0057]如本文使用的，术语"烷基"指具有所示碳原子数的直链或分支的、饱和的脂肪族 原子团。例如,C1-C6烷基包括但不局限于，甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁 基、仲丁基、叔丁基等。本领域的技术人员将认识到，其它烷基能用于本发明。
[0058] 如部位使用的，术语"体腔"指动脉、静脉或器官的内衬或空腔。
[0059] 如本文使用的，术语"接触"指引起至少两种不同的物质接触以便它们能发生反应 的过程。然而，应该认识到，所得反应产物可以由加入试剂间直接反应产生，或由一种或多 种加入试剂的中间体（其能够在反应混合物中产生）产生。
[0060] 如本文使用的，术语"水合物"指与至少一个水分子络合的化合物。本发明化合物 能与1-100个水分子络合。
[0061] 如本文使用的，术语"植入物"指为了治疗病症而插入身体的医疗用具。植入物包 括但不局限于药物释放装置。
[0062] 如本文使用的，术语"抑制作用"、"抑制"和"抑制剂"指阻止、减小、削弱或减少的 化合物，或指阻止、减小、削弱或减少特定作用或功能的方法。
[0063] 如本文使用的，术语"体内的"指哺乳动物身体。
[0064] 如本文使用的，术语"异构体"指具有不对称碳原子（光学中心）或双键的本发明 化合物，外消旋物、非对映体、对映体、几何异构体、结构异构体和个别异构体都应包括在本 发明范围内。
[0065]如本文使用的，术语"器官"指哺乳动物的任何器官，例如但不局限于，心脏、肺、 脑、眼、胃、脾、骨豁、胰腺、肾、肝、肠、子宫、结肠、卵巢、血液、皮肤、肌肉、组织、前列腺、乳房 和膀胱。本领域的技术人员应认识到，其它器官能用于本发明。
[0066] 如本文使用的，术语"过酸"指酸的-OH基被-OOH基取代的酸。过酸可以是式R-C(O)-OOH的过氧羧酸，其中R基可以是例如H、烷基、烯基或芳基等基团。过酸包括但不 局限于，过氧乙酸和间氯-过氧苯甲酸（MCPBA)。本领域的技术人员将认识到，其它过酸能 用于本发明。
[0067]如本文使用的，术语"过氧化物"指含有氧-氧单键的化合物。过氧化物的例子包 括但不局限于，过氧化氢。本领域的技术人员将认识到，其它过氧化物能用于本发明。
[0068] 如本文使用的，术语"药学上可接受的赋形剂"指有助于给予对象活性药剂和对象 吸收的物质。用于本发明的药物赋形剂包括但不局限于，聚合物、溶剂、抗氧化剂、粘合剂、 填充剂、崩解剂、润滑剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、稳定剂、着色剂、金属、陶瓷及半金属。下 文中对药学上可接受的赋形剂进行了进一步讨论。本领域的技术人员将认识到，其它药物 赋形剂能用于本发明。
[0069] 如本文使用的，术语"聚合物"指由共价化学键连接的重复结构单元或单体组成的 分子。下文叙述了用于本发明的聚合物。本领域的技术人员将认识到，其它聚合物能用于 本发明。
[0070] 如本文使用的，术语"前药"指当该前药给予哺乳动物对象时能够释放本发明方法 的活性药剂的化合物。活性成分的释放发生在体内。前药可以用本领域的技术人员已知的 技术来制备。这些技术通常修饰给定化合物中的合适官能团。然而，这些修饰的官能团通 过常规操作或在体内再生原先的官能团。本发明活性药剂的前药包括羟基、脒基、胍基、氨 基、羧基或类似基团修饰的活性药剂。
[0071] 如本文使用的，术语"盐"指用于本发明方法的化合物的酸式盐或碱式盐。药学 上可接受的盐的说明性例子是无机酸（盐酸、氢溴酸、磷酸等）盐、有机酸（乙酸、丙酸、 谷氨酸、柠檬酸）盐。合适的药学上可接受的盐的其它信息可以参见《雷明顿药物科学》 (Remington'sPharmaceuticalSciences)，第17版，宾夕法尼亚州伊斯顿的马克出版公司 (MackPublishingCompany,Easton,Pa.)，1985,该文献通过引用结合于此。
[0072] 本发明酸 性化合物的药学上可接受的盐是用碱形成的盐，即阳离子盐，例如碱金 属和碱土金属盐，例如钠、锂、钾、钙、镁以及铵盐，例如铵、三甲基铵、二乙基铵、和三-(羟 甲基）-甲基-铵盐。
[0073] 类似的酸加成盐，例如无机酸、有机羧酸和有机磺酸，例如盐酸、甲磺酸、马来酸的 盐也是可能的，只要碱性基团，例如吡啶基构成部分结构。
[0074] 可以通过使碱或酸与该盐接触并且以常规方法分离母化合物来再生化合物的中 性形式。化合物的母体形式与各种盐形式在某些物理性质方面，例如在极性溶剂中的溶解 性方面不同，然而在别的方面，这些盐等同于本发明目的的化合物的母体形式。
[0075] 如本文使用的，术语"来源"指提供本发明化合物供给和治疗剂供给的本发明装置 上的位置。该本发明装置可以具有一个以上来源，例如第一和第二来源。每一个来源可以 具有不同的化合物和组合物并且可用于治疗不同的适应症。
[0076] 如本文使用的，术语"对象"指动物，例如哺乳动物，包括但不限于，灵长类（例如 人）、牛、绵羊、山羊、马、猪、狗、猫、兔、大鼠、小鼠等。在某些实施方式中，对象是人。
[0077] 如本文使用的，术语"治疗剂"指对给予该治疗剂的病人具有疗效的药剂、化合物 或生物分子。
[0078] 如本文使用的，术语"治疗有效量或剂量"或"治疗足够量或剂量"或"有效或足 够量或剂量"指对给药的对象产生疗效的剂量。确切的剂量将取决于治疗的目的并且可 由本领域的技术人员使用已知的技术（见例如Lieberman，《药物剂型》（Pharmaceutical DosageForms)(第1-3卷，1992) ;Lloyd，《药物组合的方式、科学和技术》（TheArt， ScienceandTechnologyofPharmaceuticalCompounding) (1999) ;Pickar，〈〈剂量计算〉〉 (DosageCalculations) (1999);和《雷明顿：药学科学和实践》（Remington:TheScience andPracticeofPharmacy)，第 20 版，2003，Gennaro编辑，Lffff公司（Lippincott， Williams&Wilkins))确定。在敏化细胞中，治疗有效剂量常常低于非敏化细胞常用的治疗 有效剂量。
[0079] 如本文使用的，术语"人造血管"指用于哺乳动物的循环系统的假体。
[0080] II.本发明化合物
[0081] 大环内酯、它们的盐、前药和异构体在本发明中将共同称为"大环内酯"。
[0082] 本发明化合物是下式大环内酯化合物及其盐、水合物、异构体、代谢物和前药：
[0094] 在另一个实施方式中，化合物是图2的化合物。在其它实施方式中，R1、!?2、!?3、!?4、 R5、R6、R7、R8和R9中至少一个是0H。在另一些实施方式中，R4是0H。
[0095] 本发明提供式IA、IB和IC具体描述的大环内酯化合物。
[0096] 在一个实施方式，组合物含有大环内酯类，包括羟基、脱甲基、羟基脱甲基和环氧 大环内酯。
[0097] 具有一些可能进行化学修饰以便提供本发明化合物的位点的某些大环内酯类的 结构如下所示。
[0098]
基，例如-(CH2) 2至（CH2) 7和-RbOR。，其中Rb是C2_6亚烷基并且R。是Ci_5烷基，例如，40-0-(乙 氧基乙基）雷帕霉素。
[0100] 在一些实施方式中，本发明化合物包括某些脱甲基大环内酯类，例如单独的或 相互组合的16-0-脱甲基大环内酯、39-0-脱甲基大环内酯、27-0-脱甲基大环内酯、 16, 27-双-0-脱甲基大环内酯、27, 39-双-0-脱甲基大环内酯、16, 39-双-0-脱甲基大环 内酯，如式IA中所示。
[0101] 式IA
[0102]
[0103] 其中
[0104] R4、R7和R9各自独立地选自-OCH3或-OH。
[0105] R4和R7都独立地选自-OH或-OCH3。
[0106] R7和R9都独立地选自-OH或-OCH3。
[0107] R4和R9都独立地选自-OH或-OCH3。
[0108] R4、R7和R9各自独立地选自-OH或-OCH3。
[0109] 并且Rltl的定义如上所述。
[0110] 在另一个实施方式中，本发明化合物包括单独的或相互组合的羟基大环内酯，例 如11-羟基大环内酯、12-羟基大环内酯、14-羟基大环内酯、24-羟基大环内酯、25-羟基大 环内酯、35-羟基大环内酯，如式IB中所示。
[0111] 式IB
[0112]
[0113] 其中
[0114] R1、R6和R8各自选自-CH3或-OH。
[0115] R2、R3和R5各自选自-H或-OH。
[0116] 并且Rltl的定义如上所述。
[0117] 在另一个实施方式中，本发明化合物包括如式IC所示的环氧大环内酯，例如 19, 20-21，22-29, 30 三环氧大环内酯、17, 18-19, 20-21，22 三环氧大环内酯和 17, 18-29, 30 双环氧大环内酯的组合物。
[0118] 式IC
[0119]
[0121] 其中Rltl的定义如上所述。
[0122] 在另一个实施方式中，本发明化合物是式IA和IB的组合，包括单独的或相互 组合的脱甲基羟基大环内酯，例如14-羟基-39-0-脱甲基大环内酯、16, 39-双-0-脱 甲基-24-羟基大环内酯、16, 27-双-0-脱甲基-24-羟基大环内酯、27, 39-双-0-脱甲 基-24-羟基大环内酯的组合物。
[0123] 在另一个实施方式中，本发明化合物是式IA和IC的组合，包括单独的或相 互组合的环氧脱甲基大环内酯，例如17, 18-19, 20-双环氧-16-0-脱甲基大环内酯、 17, 18-29, 30-双环氧-16-0-脱甲基大环内酯的组合物。
[0124] 在另一个实施方式中，本发明化合物是式IA、IB和IC的组合，包括单独的或相互 组合的环氧脱甲基羟基大环内酯，例如17, 18-19, 20-双环氧-16-0-脱甲基-24-羟基-大 环内酯、17, 18-29, 30-双环氧-16-0-脱甲基-24-羟基-大环内酯的组合物。
[0125] 本发明还包括式IA、IB和IC的本发明化合物的水合物、盐、异构体、前药、代谢物 和衍生物的组合。
[0126] 式IA、IB和IC的本发明化合物及其组合的优选实施方式（A、B、C、...AA、AB、 AC、...AX、AY、AZ)的结构见表1，其中一些显示在图2A-2AZ中。（A/W包括立体中心 (sterocenter)：―,和 ) 0
[0127] 表1.优选化合物表
[0128]
立体异构体和该化合物的所有其它异构体。
[0136] 本发明包括具有不同多晶型的化合物。这包括具有不同多晶型的16-0-脱 甲基大环内酯。例如，16-0-脱甲基大环内酯的不同多晶型通过使用二氯甲烷 (dichloromethylene)和使用甲醇和水的混合物来获得。
[0137]大环内酯类存在不同的编号方案。为了避免混淆，当本文命名特定的大环内酯时， 参考使用以上化学式的编号方案对大环内酯命名。本发明还涉及所有由于不同编号方案而 具有不同名字的大环内酯，如果化学结构内相同位置上存在相同官能团。例如，39-0-脱甲 基大环内酯是与41-0-脱甲基大环内酯相同的化合物，16-0-脱甲基大环内酯是与7-0-脱 甲基大环内酯相同的化合物。
[0138] 本发明化合物能用各种方法来制备。在一些实施方式中，通过对有机物菌株进行 基因改造以便产生本发明化合物或通过其它方法以生物方式合成本发明化合物。
[0139] 在另一个实施方式中，本发明化合物使用化学合成来制备。本发明化合物的化学 合成能利用大环内酯的17-18、19-20、21-22三烯结构，这便于C16甲氧基发生酸催化亲核 取代，并允许引入数个不同的取代基并对大环内酯效应结构域进行选择性操纵。用酸性试 剂操纵大环内酯中的C16甲氧基以产生本发明化合物。例如，可用不同亲核试剂，例如醇、 硫醇和富电子芳基取代C16甲氧基。该合成方法可能不包括保护和脱保护步骤。
[0140] 使用酸性试剂与具有三烯官能团的化合物的合成方法可应用于其它具有三烯官 能团的化合物，以便合成相应的化合物类似物，提供不包括保护和脱保护步骤的合成方法。
[0141] 在一些实施方式中，本发明提供制备本发明化合物的方法，该方法包含使大环内 酯与酸接触以便用亲核试剂取代烷氧基，由此制备本发明化合物。在一些实施方式中，大环 内酯是雷帕霉素。在其它实施方式中，亲核试剂选自-〇H、-SH或富电子芳基。本领域的技 术人员将认识到，其它方法可用于制备本发明化合物。
[0142] 图14中用16-0-脱甲基大环内酯作为例子提供脱甲基大环内酯的合成方法。图 15中用19,20_双羟基-大环内酯作为例子提供羟基大环内酯的合成方法。图16中用 17, 18-29, 30-双环氧大环内酯作为例子提供环氧大环内酯的合成方法。
[0143] 在另一个实施方式中，本发明提供制备本发明化合物的方法，该方法包括使大环 内酯与合适的试剂，例如过酸或过氧化物接触以便使烯烃基修饰成环氧基，由此制备本发 明化合物。用于本发明方法中的过酸包括但不局限于式R-C(O)-OOH的过氧羧酸，其中R 基可以是例如H、烷基、烯基或芳基等基团。在一些实施方式中，过酸可以是过氧乙酸或 间-氯-过氧苯甲酸（MCPBA)。用于本发明方法中的过氧化物包括但不局限于，过氧化氢。 本领域的技术人员将认识到，其它环氧化试剂可用于本发明。
[0144] 本发明化合物是任选地氘化的。
[0145] 在一些实施方式中，本发明提供与相应母体大环内酯功效类似的本发明化合物。 在另一个实施方式中。本发明提供效力小于相应母体大环内酯以便改善化合物安全性的本 发明化合物。
[0146]III.本发明化合物的递送
[0147] 本发明化合物可以以任何合适的方法给药。在一些实施方式中，这些化合物可通 过口服、肌内、腹膜内、皮下、经肺、粘膜、经皮、血管内和其它方式给药。在其它实施方式中， 化合物经临时或永久的递送装置定位给药，或用全身和定位方式的组合给药。例子包括但 不局限于导管、支架、血管包裹物（vascularwrap)、泵、分流器（shunt)或其它临时或永久 的递送装置。
[0148]A.装置
[0149] 在一些实施方式中，本发明提供用于体内使用的装置，所述装置包括人造血管和 至少一个本发明化合物的来源。
[0150] 在其它实施方式中，本发明提供设计成向体内的体腔或器官释放化合物以便抑制 细胞增殖或细胞迀移的装置。在另一个实施方式中，该装置设计成向体内的体腔或器官释 放化合物以便抑制平滑肌细胞增殖的装置。
[0151] 在本发明的另一个实施方式中，递送装置是诸如移植物的装置，包括移植植入物、 血管植入物、非血管植入物、可植入内腔假体、伤口闭合植入物、药物递送植入物、缝线、生 物递送植入物、尿路植入物、子宫内植入物、器官移植物、眼科植入物、骨植入体，包括骨板、 接骨螺钉、牙植入体、脊椎垫片等等。
[0152] 植入物通常能够进行以下一项或多项内容：向体腔、器官、脉管、导管、肌肉、组织 块或骨提供、包含、结合、固定、插入、闭合、维持、输送药物、输送生物制品，以便预防或治疗 疾病，例如过度增生性疾病、再狭窄、心血管疾病、炎症、伤口愈合、癌症、动脉瘤、糖尿病、腹 主动脉瘤、高钙血症或其它疾病。
[0153] 本发明的植入物可以由金属、金属合金、聚合物、陶瓷、半金属、纳米复合材料或它 们的组合形成。例如，植入物可以由金属，例如钽、铁、镁、钼等制成；由可降解的或不可降解 的金属合金，例如316L不锈钢、碳钢、镁合金、NI-Ti、Co-Cr，例如L605、MP35等制成；由可 降解或不可降解的聚合物，例如聚乳酸、聚乙醇酸、聚酯、聚酰胺、共聚物等或聚合物的混合 物制成；由金属和金属或金属合金的组合，例如由不锈钢层和钛层等组合制成；由纳米复 合材料，例如纳米碳纤维或纳米碳管等制成。
[0154] 在另一个实施方式中，本发明提供其中植入物是人造血管的装置。在一些实施方 式中，人造血管包含可扩张结构。在其它实施方式中，人造血管包括至少部分由开放网络形 成的支架、移植物或构架。在其它实施方式中，人造血管是支架。
[0155] 在另一个实施方式中，本发明化合物可以施用于植入物表面附近。例如，本发明化 合物可以与植入物结合，包 含在包衣中或承载在植入物上。
[0156] 在一些实施方式中，本发明提供包含人造血管的装置，其中人造血管具有内腔表 面和面对组织的表面，化合物与内腔表面和面对组织的表面中至少一个相结合。
[0157] 在另一个实施方式中，本发明化合物施加在所有植入物的表面上。在另一个实施 方式中，本发明化合物仅施加于近腔室或腔内的表面。在又一个实施方式中，本发明化合物 仅施加于高应力区或低应力区。
[0158] 在另一个实施方式中，本发明化合物包含在临近植入物的可腐蚀或不可腐蚀的纤 丝中。
[0159]用于承载本发明化合物的支架结构的例子如图3中所示，其处于压缩状态。该支 架主体由多个环110构成。该环由具有通常可扩张的波状结构，例如之字型、锯齿形、正玄 波形或其它形状的冠120和支柱130构成。该主体通过联接件或连接件140连接。可理解， 连接件可以是任何长度或形状，或者如果冠直接相互连接则不需要该连接件。支架的典型 压缩态直径为0. 25-4mm、或更优地0. 7-1. 5mm，长度为5-100mm。在其张开状态，支架直径通 常是其压缩态直径的至少两倍，甚至10倍或更多。因此，压缩态直径为0. 7-1. 5mm的支架 可放射状地扩张至2-10_或更大。
[0160]在约4至12个月的血管造影随访中，具有有效的大环内酯化合物，例如雷帕霉素 的药物释放支架（Cypher?)的晚期管腔损失约0.Olmm-0. 2mm。对于相同的时期，裸金属支 架的晚期管腔损失约〇.70mm-l. 2mm。晚期管腔损失较少通常能降低狭窄百分率。然而，在 一些病例中，药物释放支架的晚期管腔损失比裸金属支架低很多，造成支架表面的组织覆 盖度不够，这可能增加晚期支架血栓的发生率。
[0161] 在一个优选的实施方式中，移植后约4-12个月后，承载本发明化合物的支架 的晚期管腔损失比承载相应母体大环内酯的支架的晚期管腔损失多0.05-0. 6mm、较优 地0? 1-0. 4臟、更优地0? 15-0. 3mm。例如，移植后晚期管腔损失是0? 01-0. 6mm、较优地 0. 1-0. 5mm和最优地0. 2-0. 4mm。在另一个实施方式中，本发明提供承载本发明化合物的支 架的晚期管腔损失与承载相应母体大环内酯的支架相似。在另一个实施方式中，本发明提 供承载本发明化合物的支架的晚期管腔损失高于承载相应母体大环内酯的支架。更大的晚 期管腔能增加支架的组织覆盖度，这能改善支架的安全性。
[0162] 在另一个优选的实施方式中，移植后4-12个月承载本发明化合物的支架的狭窄 百分率比承载相应母体大环内酯的支架的狭窄百分率大1-30%、较优地3-20%、更优地 5-15%。在另一个优选的实施方式中，本发明提供承载本发明化合物的支架的狭窄百分率 与承载相应母体大环内酯的支架相似。在另一个优选的实施方式中，本发明提供承载本发 明化合物的支架的狭窄百分率高于承载相应母体大环内酯的支架。在另一个优选的实施方 式中，承载本发明化合物的支架的狭窄百分率高于承载相应母体大环内酯的支架但是低于 裸金属支架。更高的狭窄率能增加支架的组织覆盖度，这能改善支架的安全性。
[0163] 在一些实施方式中，本发明提供植入物上本发明化合物的含量小于约1克/厘米 2的装置。在其它实施方式中，植入物上化合物的含量是约1纳克/厘米 2-约1000微克/ 厘米2、较优地约1微克/厘米2_约500微克/厘米2、更优地约10微克/厘米2_约400微 克/厘米2。
[0164] 在另一个实施方式中，本发明提供使植入物临近组织中本发明化合物的浓度达到 约0? 001ng/gm组织-约1000 y g/gm组织、较优地约lng/gm组织-约500 y g/gm组织、更 优地约l〇〇ng/gm组织-约100 y g/gm组织的装置。
[0165] 在另一个实施方式中，本发明化合物能在1天_2年、较优地3天-6个月、更优地1 周-3个月的时期内从植入物释放。在其它实施方式中，本发明化合物能在大于1天、较优 地大于2周、更优地大于1个月的时期内从植入物释放。在另一个实施方式中，本发明化合 物需要大于两年从支架完全释放。在一些实施方式中，在给定时间期限内释放的化合物的 量是至少25%。在其它实施方式中，释放的化合物的量是至少50%。在另外其它实施方式 中，释放的化合物的量是至少75%。在再另外其它实施方式中，释放的化合物的量可以是至 少 80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98 或 99%。
[0166] 在另一个实施方式中，本发明提供在约1天至约2年的时期内从装置释放至少 75 %化合物的装置。在另一个实施方式中，在约3天至约6个月的时期内至少90 %化合物 从装置释放。在另一个实施方式中，在约1周至约3个月的时期内至少90%化合物从装置 释放。
[0167] 在一些实施方式中，本发明提供还包括如下所述的治疗剂的装置。在以下其它的 实施方式中，治疗剂在化合物释放之前、同时或之后释放。在其它实施方式中，化合物从第 一来源释放并且治疗剂从第二来源释放。在另外的其它实施方式中，化合物和治疗剂从单 一来源释放。
[0168] B?给药
[0169] 本发明化合物能够以每日、间歇性或一次性剂量全身给药。每日全身剂量可以是 0.lmg-20mg、较优地0. 5mg-10mg、最优地lmg-5mg。本领域的技术人员间认识到，其它剂量 也可用于本发明。
[0170] 本发明化合物可以以约1纳克/厘米2/天-约1000微克/厘米2/天、较优地约 1微克/厘米V天-约200微克/厘米2/天、更优地约5微克/厘米2/天-约100微克/ 厘米 2/天的速率从植入物释放。
[0171]C.药物制剂
[0172] 在一些实施方式中，本发明提供包含药学上可接受的赋形剂和下式化合物的药物 组合物及其盐、水合物、异构体、代谢物和前药：
[0178] 在一些实施方式中，本发明提供药物组合物，其中药学上可接受的赋形剂选自聚 合物、溶剂、抗氧化剂、粘合剂、填料、崩解剂、润滑剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、稳定剂、着色 剂、金属、陶瓷或半金属。在其它实施方式中，药学上可接受的赋形剂是聚合物。
[0179] 根据给药模式和剂型的性质，本发明的活性成分可以与药学上可接受的载体、稀 释剂、佐剂、赋形剂或运载体，例如防腐剂、填料、聚合物、崩解剂、助流剂、湿润剂、乳化剂、 悬浮剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、润滑剂、酸化剂和分散剂混合。这些成分、包括可用于配制 口服剂型的药学上可接受的载体和赋形剂在《药物赋形剂手册，美国制药协会》（Handbook ofPharmaceuticalExcipients，AmericanPharmaceuticalAssociation) (1986)中有描 述，该手册以其全部通过引用结合于此。药学上可接受的载体的例子包括水、乙醇、多元醇、 植物油、脂肪、蜡聚合物、包括形成凝胶的和不形成凝胶的聚合物、和它们的合适的组合物。 赋形剂的例子包括淀粉、预胶凝淀粉、微晶纤维素、乳糖、牛奶糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢 钙、色淀（lake)混合物。崩解剂的例子包括淀粉、藻酸和某些复合硅酸盐。润滑剂的例子 包括硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、以及高分子量聚乙二醇。本领域的技术人员将认 识到，其它不同的赋形剂也可用于本发明制剂，本文提供的列表是不完全的。
[0180] 合适的不可降解的或缓慢降解的聚合物涂层包含但不局限于：聚氨酯、聚乙烯亚 胺、乙稀乙稀醇共聚物、娃酮、C-flex、尼龙、聚酰胺、聚酰亚胺、聚四氟乙稀（PTFE)、聚对二 甲苯（parylene)、帕里拉（parylast)、聚（甲基丙烯酸甲酯）、聚（甲基丙烯酸正丁酯）、聚 (甲基丙烯酸丁酯）与聚（乙烯乙酸乙烯酯）的共聚物或共混物、聚（甲基丙烯酸甲酯）、 聚（甲基丙烯酸2-羟基乙酯）、聚（乙二醇甲基丙烯酸酯）、聚（氯乙烯）、聚（二甲基硅氧 烷）、聚（乙烯乙酸乙烯酯）、聚碳酸酯、聚丙烯酰胺凝胶等，包括其它合成或天然的聚合物； 它们的混合物、共聚物或组合。
[0181] 合适的生物可降解聚合物涂层包含但不局限于，聚（乳酸）、聚乳酸酯、聚（乙 醇酸）、聚乙醇酸醋以及它们的共聚物和异构体、聚对二氧环己酮（polydioxanone)、聚 (谷氨酸乙酯）、聚（羟基丁酸酯）、聚羟基戊酸酯和共聚物、聚己内酯、聚酸酐、聚（原 酸酯）、聚（醚酯）、聚乙二醇、聚（环氧乙烷）、聚（碳酸三甲酯）、聚碳酸亚乙基酯、聚 碳酸亚乙基酯和聚（碳酸三甲酯）的共聚物、聚（碳酸亚丙基酯）、聚（碳酸亚氨基酯） (poly(iminocarbonate))、淀粉基聚合物、醋酸丁酸纤维素、聚醋酰胺、聚醋胺、聚氰基丙稀 酸酯、聚磷腈、N-乙烯基-2-吡咯烷酮、聚马来酸酐、季铵化合物包括硬脂酰氯化铵和苄基 氯化铵、共聚物和其它脂肪族聚酯、或它们的合适的共聚物，包括聚（L-乳酸）和聚（e-己 内酯）的共聚物；它们的混合物、共聚物或组合。
[0182] 合适的天然涂层包括：纤维蛋白、白蛋白、胶原、明胶、糖胺聚糖、寡糖和多糖、软骨 素、硫酸软骨素、羟基磷灰石（hypoxyapatite)、磷脂、磷酸胆碱、糖脂、脂肪酸、蛋白质、纤维 素、和它们的混合物、共聚物、或组合。
[0183] 合适的非聚合涂层包括金属涂层，例如钨、镁、钴、锌、铁、铋、钽、金、钼、不锈钢、例 如316U304、钛合金；陶瓷涂层，例如氧化硅；半金属，例如碳、纳米多孔涂层；或它们的组 合。
[0184] 在一些实施方式中，药学上可接受的赋形剂是选自下组的聚合物：聚氨酯、聚乙烯 亚胺、乙烯乙烯醇共聚物、硅酮、C-flex、尼龙、聚酰胺、聚酰亚胺、聚四氟乙烯（PTFE烯）、聚 对二甲苯、帕里拉、聚（甲基丙烯酸酯）、聚（氯乙烯）、聚（二甲基硅氧烷）、聚（乙烯乙酸 乙烯酯）、聚碳酸酯、聚丙烯酰胺凝胶、聚（甲基丙烯酸甲酯）、聚（甲基丙烯酸正丁酯）、聚 (甲基丙烯酸丁酯）与聚（乙烯乙酸乙烯酯）的共聚物或共混物、聚（甲基丙烯酸甲酯）、 聚（甲基丙烯酸2-羟基乙酯）、聚（乙二醇甲基丙烯酸酯）、聚（碳酸乙烯酯）、聚L丙交 酯-乙交酯共聚物、聚L丙交酯-碳酸三亚甲基酯共聚物和聚L-丙交酯（polyL-Iactide)。 在另一个实施方式中，聚合物是聚（甲基丙烯酸正丁酯）。
[0185] 在另一个实施方式中，本发明提供组合物，其中化合物含量为化合物与聚合物混 合物的至少25% (w/w)。在另一个实施方式中，化合物以含量为至少50% (w/w)。在另一 个实施方式中，化合物含量为至少75% (w/w)。本领域的技术人员将认识到，其它组合物能 用于本发明。
[0186] 在另一个实施方式中，本发明化合物能施加到没有涂层的支架上。在另一个实施 方式中，本发明化合物能与聚合物涂层如本发明化合物-聚合物基质组合施加到支架上。 本发明化合物是完全或部分结晶的或是无定形的。聚合物可以是不可降解的、部分可降解 的或完全可降解的。涂层也可以是非聚合涂层，例如金属涂层。在另一个实施方式中，本 发明化合物能单独施加到支架上，或包含在具有聚合物或非聚合物外涂层的涂层中。在另 一个实施方式中，支架包括布置在支架表面和本发明化合物或本发明化合物-聚合物基 质之间的底涂层。合适的底涂层可以是聚合物涂层，例如二氯对二甲苯二聚体（paralyne C)、对二甲苯二聚体（paralyneN)、乙稀乙稀醇（EV0H)、聚己内醋、羟基化乙酸乙基乙稀醋 (ethylvinylhydroxylatedacetate，EVA)等或它们的组合；或是非聚合涂层，例如金属或 陶瓷等。
[0187] 这些涂层可以通过任何不同的方法，包括但不局限于喷雾、超声波沉积、浸渍、喷 墨分配、等离子体沉积、离子注入、溅射、蒸发、气相沉积、热解、电镀、辉光放电涂布等或它 们的组合来施涂。
[0188] 涂层厚度可以是1纳米-100微米、较优地100纳米-50微米、更优地1微米-20 微米。
[0189] 本发明化合物可以与抗氧化剂或稳定剂混合以便防止由于氧化或其它方式而降 解。抗氧化剂包括但不局限于丁基化羟基甲苯（BHT)、硫酸亚铁、乙二胺四乙酸（EDTA)或 其它。稳定剂包括但不局限于，戊烯（amglene)、氢醌、奎宁、焦亚硫酸钠或其它。抗氧化 剂和稳定剂可以与化合物直接混合或与化合物制剂，例如化合物-聚合物基质共混以便减 少生产过程中的构型变化或降解，并且延长化合物或含化合物的植入物的保存期或保藏 期限。化合物中抗氧化剂，例如BHT的含量可以是0. 01-10%、较优地0. 05-5%、最优地 0. 1-1%。化合物中稳定剂，例如戊烯的含量可以是0.001-0. 1 %、较优地0.005-0. 05%、最 优地0. 01-0. 02%。本领域的技术人员将认识到，其它抗氧化剂和稳定剂能用于本发明。
[0190] 本发明化合物能与治疗剂，例如抗血小板药、抗血栓药、消炎药、抗增殖药、免疫抑 制剂、抗肿瘤药、或其它药剂或它们的组合联合使用。本领 域的技术人员将认识到，其它治 疗药能用于本发明。
[0191] 治疗剂可以与本发明化合物一起和/或独立于本发明化合物结合在支架上。至少 部分治疗剂可以在本发明化合物从支架释放之前、同时或之后从支架释放。治疗剂还可以 在递送本发明化合物之前、期间或之后经全身性或定位给药单独地给予。
[0192] 例如，本发明化合物与抗血小板药或抗血栓药，例如肝素、氯吡格雷、华法林、阿司 匹林、力抗栓等一起给予。在另一个实施例中，本发明化合物与消炎药，例如阿斯匹林、双氯 芬酸、消炎痛、舒林酸、酮洛芬、氟比洛芬、布洛芬、萘普生、吡罗昔康、替诺昔康、托美丁、酮 咯酸、奥沙普嗪、甲芬那酸、非诺洛芬、萘丁美酮片（瑞力芬）、对乙酰氨基酚和它们的混合 物；C0X-2抑制剂，例如尼美舒利、NS-398、氟舒胺（flosulid)、L-745337、塞来昔布、罗非昔 布、SC-57666、Dup-697、帕瑞昔布钠、JTE-522、伐地昔布、SC-58125、依托昔布、RS-57067、 1-748780、1-761066、4?批、依托度酸、美洛昔康、5-2474、他克莫司和它们的混合物；糖皮质 激素，例如氢化可的松、可的松、泼尼松、泼尼松龙、甲泼尼龙、甲泼尼松、曲安西龙、帕拉米 松、氟泼尼龙、倍他米松、地塞米松、氟氢可的松、去氧皮质酮等或其类似物或它们的组合一 起给予。
[0193] 在一些实施方式中，本发明提供组合物，其中小于约5%的化合物代谢为雷帕霉 素。在一些其它的实施方式中，小于约1 %的化合物代谢为雷帕霉素。在另一些其它的实施 方式中，小于约0. 1 %的化合物代谢为雷帕霉素。
[0194] 在其它实施方式中，本发明提供每日全身剂量为约0.lmg_20mg化合物的剂型的 组合物。在一些其它实施方式中，化合物的每日全身剂量是约0.5mg-10mg。在另一个实施 方式中，化合物的每日全身剂量是约lmg-5mg。
[0195] IV.治疗
[0196] 本发明化合物可以用于治疗对称为大环三烯或大环内酯的化合物类型有反应的 疾病。
[0197] 本发明化合物可以单用或与其它药剂联用，以治疗哺乳动物疾病，包括以下情况， 例如：
[0198] a)治疗和预防急性或慢性器官或组织移植排斥，例如治疗心、肺、心肺联合、肝脏、 肾脏、胰腺、皮肤或角膜移植的接受者。它们还能用于预防移植物抗宿主病，例如骨髓移植 后的疾病。
[0199] b)治疗和预防移植物血管病，例如动脉粥样硬化。
[0200]c)治疗和预防导致血管内膜增厚、血管阻塞、阻塞血管性动脉粥样硬化、再狭窄的 细胞增殖和迀移。
[0201] d)治疗和预防自身免疫疾病和炎性疾病，例如病因包括自身免疫组件的炎性疾 病，例如关节炎（例如类风湿关节炎、慢性进行性关节炎和变形性关节炎）和风湿性疾病。
[0202] e)治疗和预防哮喘。
[0203] f)治疗多药耐药疾病，例如多药耐药性癌症或多药耐药性AIDS。
[0204] g)治疗增生症，例如肿瘤、癌症、过度增生性皮肤病等。
[0205] h)治疗感染，例如真菌、细菌和病毒感染。
[0206] i)治疗或预防血管分流物中的细胞增殖。
[0207] i)治疗或预防眼科病症和疾病。
[0208] 在体外模型中说明化合物AR和雷帕霉素（西罗莫司）抑制人细胞增殖的效力。该 试验在实施例2中叙述并且结果显示在图8中。如图8中所示，化合物AR在一定浓度范围 内抑制平滑肌细胞的生长。
[0209] 在一些实施方式中，本发明提供通过给予需要的对象治疗有效量的本发明化合物 来抑制细胞增殖或迀移的方法。
[0210] 在其它实施方式中，本发明提供通过全身、局部或其组合方式给予本发明化合物 的方法。
[0211] 在一些其它的实施方式中，本发明化合物的给药途径是口服给药、作为栓剂给药， 经局部接触、胃肠道外、血管内、静脉内、腹腔内、肌内、病损内、鼻内、肺、粘膜、经皮、眼部、 皮下给药或鞘内给药。
[0212] 在另外的其它实施方式中，本发明化合物通过经临时装置或植入物递送给药。在 另一个实施方式中，临时装置选自导管或多孔气球。在另一个实施方式中，植入物是人造血 管。在另一些实施方式中，人造血管包含可扩张结构。在另一个实施方式中，人造血管包含 至少部分由开放网络形成的支架、移植物或构架。
[0213] 在一个实施方式中，本发明化合物的抑制浓度（IC5tl)约等于其相应母体大环内酯 (图1中修饰前）的IC5tl。在另一个实施方式中，IC5tl高于其相应母体大环内酯的IC5tl。在 另一个实施方式中，IC5tl低于其相应母体大环内酯的IC5tl。例如，IC5tl是其相应母体大环内 酯的IC5tl的 1/2 至 1/2000。
[0214] 在一个优选的实施方式中，本发明化合物的IC5tl是其相应母体大环内酯的IC5tl 的1. 5-1000倍、较优地是其相应母体大环内酯的2-100倍、更优地是其相应母体大环内 酯的5-50倍。在另一个实施方式中，本发明化合物的IC5tl是约0.InM-IyM、较优地约 InM-O. 5yM、更优地约 5nM-100nM。
[0215] 测量本发明化合物效果的其它方法包括测量有效浓度（EC5tl)。在一个实施方式中， EC5tl约等于相应母体大环内醋的EC5(|。在另一个实施方式中，EC5tl高于其相应母体大环内醋 的EC5tl。在另一个实施方式中，EC5tl低于其相应母体大环内酯的IC5(|。
[0216] 在一些实施方式中，本发明提供化合物的有效剂量约是0.lmg_20mg的方法。在一 些其它实施方式中，化合物的有效剂量约是0. 5mg-10mg。在另一些实施方式中，化合物的有 效剂量是约lmg-5mg。
[0217] 本发明化合物、组合物和装置用于抑制细胞因子。促炎细胞因子IL-6在应答不同 种炎症刺激时合成并且用作炎症级联反应中的重要调节蛋白。IL-6在刺激损伤后急性期反 应中起关键作用，包括释放血纤蛋白原和C-反应蛋白。
[0218] IL-6还可以直接参与再狭窄，因为已证明它能促进将白细胞征集到血管壁上和血 管平滑肌细胞增殖，这些是过度增殖疾病，例如再狭窄的发病机理的必要因素。
[0219] 基质金属蛋白酶（MMP-9)在细胞迀移和增殖，例如支架移植后新生内膜生长和血 管重构的情况中起关键作用。MMP的释放造成富含蛋白聚糖的细胞外基质增加，这会增加血 管损伤后平滑肌细胞迀移。
[0220] 血浆活性MMP-9的水平可以是裸金属支架ISR的有用独立预测指标。（血浆活性 基质金属蛋白酶9水平提高与冠状动脉支架内再狭窄相关联（ElevatedPlasmaActive MatrixMetalloproteinase_9LevelIsAssociatedWithCoronaryArteryIn-Stent Restenosis)?ArteriosclerThrombVaseBiol. 2006 ；26:el21-el25.)
[0221] 单核细胞化学引诱蛋白l(MCP-l)是由许多细胞，包括血管平滑肌细胞和内皮细 胞在体外分泌的有效的单核细胞引诱物。据显示，剔除MCP-I基因或阻断MCP-I信号能减 少高胆固醇血症小鼠中的动脉粥样硬化。据显示，MCP-I在猴新生内膜增生发病机理中起关 键作用。（小鼠和猴发生动脉外周损伤后单核细胞化学引诱蛋白-1通路在新生内膜增生中 的重要性（ImportanceofMonocyteChemoattractantProtein-IPathwayinNeointimal HyperplasiaAfterPeriarterialInjuryinMiceandMonkeys)，CircRes. 2002 ； 90:1167-1172)。MCP-I在人和家兔动脉粥样硬化病变的巨噬细胞富集区域的小簇细胞中 强烈表达（单核细胞化学引诱蛋白-1在人和家兔动脉粥样硬化病变的巨噬细胞富集区域 中的表达（ExpressionofMonocyteChemoattractantProteinIinMacrophage-Rich AreasofHumanandRabbitAtheroscleroticLesions)，PNAS，第 88 卷，5252-5256) 〇 抑 制MCP-I对治疗和预防上述炎性、增殖性和其它病情具有治疗作用。
[0222] 白细胞介素-IO(IL-IO)是对单核细胞具有强烈抑制作用的抗炎细胞因子。据 显示，IL-IO减少损伤后内膜增生（在高胆固醇血症家兔中进行血管成形术或植入 支架后白介素 _1〇 抑制内膜增生（Interleukin-lOInhibitsIntimalHyperplasia AfterAngioplastyorStentImplantationinHypercholesterolemicRabbits) Circulation. 2000 ;101:908-916)。在应答LDL刺激中由人单核细胞内源性地产生IL-IO 抑制IL-12产生，这说明IL-IO的交叉调节作用可以抗衡促炎反应。
[0223] 本申请还涉及以下实施方案：
[0224] 1. -种药物组合物，其包含药学上可接受的赋形剂和下式化合物或其盐、水合物、 异构体、代谢物或前药：
[0225]
[0226] 2.如实施方案1所述的组合物，其特征在于，所述药学上可接受的赋形剂选自聚 合物、溶剂、抗氧化剂、粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、稳定剂、着 色剂、金属、陶瓷或半金属。
[0227] 3.如实施方案2所述的组合物，其特征在于，所述药学上可接受的赋形剂是聚合 物。
[0228] 4.如实施方案3所述的组合物，其特征在于，所述聚合物选自下组：聚氨酯、聚乙 烯亚胺、乙烯乙烯醇共聚物、硅酮、C-flex、尼龙、聚酰胺、聚酰亚胺、聚四氟乙烯（PTFE)、聚 对二甲苯、帕里拉、聚（甲基丙烯酸酯）、聚（氯乙烯）、聚（二甲基硅氧烷）、聚（乙烯乙酸 乙烯酯）、聚碳酸酯、聚丙烯酰胺凝胶、聚（甲基丙烯酸甲酯）、聚（甲基丙烯酸正丁酯）、聚 (甲基丙烯酸丁酯）与聚（乙烯乙酸乙烯酯）的共聚物或共混物、聚（甲基丙烯酸甲酯）、 聚（甲基丙烯酸2-羟基乙酯）、聚（乙二醇甲基丙烯酸酯）、聚（碳酸乙烯酯）、聚L丙交 酯-乙交酯共聚物、聚L丙交酯-碳酸三亚甲基酯共聚物和聚L-丙交酯。
[0229] 5.如实施方案4所述的组合物，其特征在于，所述聚合物是聚（甲基丙烯酸正丁 酯）。
[0230] 6.如实施方案4所述的组合物，其特征在于，在所述化合物和所述聚合物的混合 物中所述化合物的含量为至少25% (w/w)。
[0231] 7.如实施方案6所述的组合物，其特征在于，所述化合物的含量为至少50% (w/ w) 〇
[0232] 8.如实施方案6所述的组合物，其特征在于，所述化合物的含量为至少75% (w/ w) 〇
[0233] 9.如实施方案1所述的组合物，所述组合物的剂型是所述化合物的每日全身剂量 是约 0?lmg_20mg。
[0234] 10.如实施方案9所述的组合物，其特征在于，所述化合物的每日全身剂量是约 0? 5mg_10mg〇
[0235] 11.如实施方案9所述的组合物，其特征在于，所述化合物的每日全身剂量是约 lmg_5mg〇
[0236] 12. -种用于体内应用的装置，所述装置包括：
[0237] 植入物；和
[0238] 至少一个实施方案1所述化合物的来源。
[0239] 13.如实施方案12所述的装置，其特征在于，所述装置设计成向体内的体腔或器 官释放所述化合物以便抑制细胞增殖。
[0240] 14.如实施方案13所述的装置，其特征在于，所述装置设计成向体内的体腔或器 官释放所述化合物以便抑制平滑肌细胞增殖和发炎。
[0241] 15.如实施方案12所述的装置，其特征在于，所述植入物是人造血管。
[0242] 16.如实施方案15所述的装置，其特征在于，所述人造血管包含可扩张结构。
[0243]17.如实施方案15所述的装置，其特征在于，所述人造血管包括至少部分由开放 网络形成的支架、移植物或构架。
[0244] 18.如实施方案17所述的装置，其特征在于，所述人造血管是支架。
[0245]19.如实施方案16所述的装置，其特征在于，所述人造血管具有内腔表面和面对 组织的表面，所述化合物与内腔表面和面对组织的表面中至少一个相结合。
[0246] 20.如实施方案12所述的装置，其特征在于，所述装置上所述化合物的含量约是1 纳克/厘米 2_1〇〇〇微克/厘米2。
[0247] 21.如实施方案20所述的装置，其特征在于，所述装置上所述化合物的含量约是1 微克/厘米 2 _500微克/厘米2。
[0248] 22.如实施方案20所述的装置，其特征在于，所述装置上所述化合物的含量约是 10微克/厘米 2_400微克/厘米2。
[0249] 23.如实施方案12所述的装置，其特征在于，临近组织中所述化合物的浓度约是 0?OOlng/gm组织-1000yg/gm组织。
[0250] 24.如实施方案23所述的装置，其特征在于，临近组织中所述化合物的浓度约是 lng/gm组织-500yg/gm组织。
[0251] 25.如实施方案23所述的装置，其特征在于，临近组织中所述化合物的浓度约是 100ng/gm组织-100yg/gm组织。
[0252] 26.如实施方案12所述的装置，其特征在于，在约1天至2年的时期内至少75% 所述化合物从所述装置释放。
[0253] 27.如实施方案12所述的装置，其特征在于，在约3天至6个月的时期内至少90 % 所述化合物从所述装置释放。
[0254] 28.如实施方案12所述的装置，其特征在于，在约1周至3个月的时期内至少90% 所述化合物从所述装置释放。
[0255] 29.如实施方案12所述的装置，其特征在于，所述装置还包括治疗剂。
[0256] 30.如实施方案29所述的装置，其特征在于，所述治疗剂选自下组：抗血小板药、 抗血栓药、消炎药、抗增殖药、免疫抑制剂、抗癌药。
[0257] 31.如实施方案29所述的装置，其特征在于，所述治疗剂在所述化合物释放之前、 同时或之后释放。
[0258] 32.如实施方案31所述的装置，其特征在于，所述化合物从第一来源释放并且所 述治疗剂从第二来源释放。
[0259] 33.如实施方案31所述的装置，其特征在于，所述化合物和所述治疗剂从单一来 源释放。
[0260] 34.实施方案1所述的化合物在制备抑制细胞增殖的药物中的用途。
[0261] 35.如实施方案34所述的用途，其特征在于，实施方案1所述的化合物通过全身、 局部或其组合途径给药。
[0262] 36.如实施方案34所述的用途，其特征在于，实施方案1所述的化合物的给药途径 是口服给药、作为栓剂给药，经局部接触、胃肠道外、血管内、静脉内、腹腔内、肌内、病损内、 鼻内、肺、粘膜、经皮、眼部、皮下给药或鞘内给药。
[0263] 37.如实施方案34所述的用途，其特征在于，实施方案1所述的化合物经临时装置 或植入物递送给药。
[0264] 38.如实施方案37所述的用途，其特征在于，所述临时装置选自导管或多孔气球。
[0265] 39.如实施方案37所述的用途，其特征在于，所述植入物是人造血管。
[0266] 40.如实施方案39所述的用途，其特征在于，所述人造血管包含可扩张结构。
[0267] 41.如实施方案39所述的用途，其特征在于，所述人造血管包含至少部分由开放 网络形成的支架、移植物、或构架。
[0268] 42.如实施方案34所述的用途，其特征在于，所述化合物的IC5tl是约0.InM-IyM。
[0269] 43.如实施方案42所述的用途，其特征在于，所述化合物的IC5tl是约InM-O. 5yM。
[0270] 44.如实施方案42所述的用途，其特征在于，所述化合物的IC5tl是约5nM-100nM。
[0271] 45.如实施方案34所述的用途，其特征在于，所述化合物的有效剂量是约 0.lmg_20mgD
[0272] 46.如实施方案45所述的用途，其特征在于，所述化合物的有效剂量是约 0? 5mg_10mg〇
[0273] 47.如实施方案45所述的用途，其特征在于，所述化合物的有效剂量是约 lmg_5mg〇
[0274] 48. -种用于体内应用的装置，所述装置包括：
[0275] 植入物；和
[0276] 以下通式化合物或其盐、异构体的至少一个来源
[0277]
[0278] 49.以下通式化合物或其盐、或异构体在制备抑制细胞增殖的药物中的用途
[0279]
[0280] 人们能够认识到，本发明中公开的所有实施方式能单独使用或与本发明的其它实 施方式或实施例结合使用。 V.实施例
[0281] 实施例I:16-0-脱甲基大环内酯（化合物AR)的制备
[0282] 用500ml0.IN盐酸处理500ml乙腈中的大环内酯雷帕霉素（1000mg、10. 75mmol)。 所得溶液在室温下搅拌约28小时。然后在分液漏斗中用二氯甲烷萃取反应混合物。有机 层用水和盐水洗涤，然后用0.IM磷酸钠缓冲液（pH= 7. 4)洗涤两次或直到pH= 7,然后用 蒸馏（DI)水洗涤三次。最后，有机层用Na2SO4干燥并放置在冰箱中过夜。真空浓缩得到米 色的化合物AR粉末（约820mg)。
[0283] 化合物AR用制备型HPLC在购自SUPECO公司的AscentisC18 (21. 2x250_， IOym)柱上纯化，在0-12分钟内使用甲醇：水（80:20)作为流动相，然后在12. 01-20分钟 变为100%甲醇，流速为15毫升/分钟。装载浓度是350mg/ml并且进样量是IOOy1。用 254nm的UV吸光度监测化合物。在这些条件下，化合物AR在9. 0-11. 5分钟流出，而原料和 副产物在17. 0-20. 0分钟流出。
[0284] 制备型HPLC也能使用乙腈：水梯度（从70:30开始）作为流动相来实施并用 278nm的UV吸光度监测。使用该分离方法的制备型HPLC谱图显示在图4中。
[0285] 收集含有化合物AR的组分并合并，然后使用旋转蒸发器和冷冻干燥机使溶剂蒸 发以便得到米色的化合物AR粉末。
[0286] 1HNMR(CDC13,400MHz，反式：顺式酰胺旋转异构体的混合物，括号中的化学位移指 主要的旋转异构体）见图 5。8,ppm 0.532 (q，J= 12Hz，lH)，0.890 (d，J= 6.8Hz，3H)， 0.921(d，J= 6.8Hz，3H)，0.931(d，J= 6.4Hz，3H)，0.971(d，J= 6.8Hz，3H)，0.991(d，J= 6. 6Hz，3H)，I. 005 (d，J= 6. 4Hz，3H)，I. 686 (s，3H)，I. 772 (s，3H)，I. 773 (s，3H)，I. 823 (s， 3H)，3.330(s，3H)，3.380(s，3H)，3.859(d，J= 5.2Hz，lH)，4.001(d，J= 3.6Hz，lH)， 4.03-4.07(m，lH)，4.22(br，lH)，5.21-5.28(m，3H)，5.336(d，J= 11.6Hz，lH)，5.384(dd， J= 14. 8,9. 6Hz，1H)，6. 117(dd，J= 14. 4,10. 8Hz，1H)，6. 243(dd，J= 14. 4,10. 4Hz，1H)， 6. 376(dd，J= 14. 8,11. 2Hz，1H).
[0287] 与母体化合物的质子NMR相比，3. 14ppm处峰的消失说明仅在C16位发生脱甲基 作用并且完成了反应。（见JournalofAntibiotics1991，44 (6)，688,以确定雷帕霉素的 NMR谱图。）
[0288] 化合物AR的化学结构进一步用质谱实验证实。片段化模式表明存在m/z900,而在 相同的条件下雷帕霉素提供m/z914。图6中提供液相色谱和质谱实验的结果，它显示用 m/z900确认化合物AR。
[0289] 通过反向HPLC使用购自西格玛奥德里奇公司（SigmaAldrich)的Supelco C18 (4. 6x150mm，5ym)柱测定化合物AR的总含量，其中使用甲醇：水（90:10)作为流动 相，流速为1毫升/分钟。用254nm的UV吸光度监测化合物AR。化合物AR的保留时间是 7. 97分钟。图7显示总含量大于98 %的化合物AR的分析型HPLC色谱图。化合物AR的纯度 用反向HPLC使用购自沃顿斯公司（WatersCorporation)的YMCODS-ALC18(4.6x250mm， 5ym)柱进行测定，其中使用乙腈：水梯度为流动相，流速为1.0毫升/分钟。图7b显示经 278nm的UV吸光度监测，化合物AR主要异构体纯度大于98 %。
[0290] 最大程度减少化合物AR的氧化的方法是在制备型HPLC后加入0. 1 %w/w丁基化 羟基甲苯（BHT)。
[0291] 实施例2 :化合物AR的生物活性
[0292] 化合物AR的效力通过体外人平滑肌细胞培养实验来说明。在接触不同浓度 (0? 005、0. 01、0. 05、0. 1，0. 5 和IyM)的化合物AR和不同浓度（0? 0005、0. 001、0. 01 和 0.IyM)的雷帕霉素1、3和8小时后，测定样品的胸苷掺入量。使平滑肌细胞与化合物AR 和雷帕霉素接触1和3小时的较短时间后，化合物AR和雷帕霉素的IC5tl分别是约0. 05和 0. 01yM(如表1和图8中所示）。使平滑肌细胞与化合物AR和雷帕霉素接触8小时后，化 合物AR和雷帕霉素的IC5tl分别是约0. 005和0. 001yM。化合物AR的IC5(|约为雷帕霉素 的IC5tl的五倍。
[0293] 表1 :接触不同浓度的雷帕霉素和化合物AR后人平滑肌细胞的增殖百分率数据
[0294] 化合物AR
[0295]
[0297] 实施例3 :含有化合物AR的支架的制备
[0298] 在室温下将15mg聚（甲基丙烯酸正丁基酯）（PBMA)溶解在3mL二氯甲烷中。将 IOmg化合物AR放置在小瓶中并溶解在2mL含有或不含0.1 % (w/w)BHT的二氯甲烷中。合 并溶液并进一步用IOmL二氯甲烷稀释。
[0299] 使用微处理器控制的超声波喷雾器将450 yg含PBMA的药物溶液施涂到18mm金 属支架（可从加州桑尼维尔的万能医药公司（ElixirMedicalCorp，Sunnyvale，Calif.) 购得）的全部表面。涂布后，将支架放置在真空室中。然后将支架安装在3. 0X20_PTCA 输送导管的气球上。然后将该导管插入线圈并包装在特卫强(Tyvek)?袋中。该小袋用环 氧乙烷消毒。再将特卫强⑧袋包装在箔袋中，用氧清除剂和氮气吹扫，真空密封。
[0300] 实施例4 :释放化合物AR的支架的体内试验
[0301] 通过比较28 ±2天猪冠状动脉中得自实施例3的化合物AR释放支架装置（如上 所述制备）的血管造影结果和非患病猪冠状动脉模型中雷帕霉素释放支架装置Cypher?冠 状动脉支架（考迪斯（Cordis)公司）的血管造影结果，评估得自实施例3的化合物AR释 放支架装置（如上所述制备）的效力。
[0302] 选择非动脉粥样硬化猪模型，因为该模型已经广泛用于支架和血管成形 术研宄，产生大量关于血管应答性质及其与人血管应答的相关性的数据（Schwartz 等，Circulation. 2002 ;106:1867-1873)。根据美国国家研宄委员会制定的实验动物护理 和使用指南饲养和照顾这些动物。
[0303] 所有动物在实验前至少三天开始并且在研宄期间持续用每口服剂量阿司匹林 (325mg)和氯吡格雷（75mg)进行预治疗。在麻醉诱导后，使用标准技术进入左或右股动脉， 引入动脉套管并且使其前进到动脉中。
[0304] 在荧光镜导向下进行血管造影，经套管插入7号引导导管并且使其前进到适当的 位置，在冠状动脉内给予硝酸甘油。选择2. 25-4. Omm平均管腔直径的冠状动脉段并且插入 0.014〃的导丝。进行定量冠状动脉造影（QCA)以便记录参考血管直径。
[0305] 使合适大小的支架前进到展开（deployment)位置。以稳定速率对气球充气至足 够压力，以便达到气球与动脉比率为1. 30:1. 0。使压力维持约10秒。进行血管造影以便记 录术后血管通畅状态和直径。
[0306] 在指定终点为各个动物进行随访血管造影。定性评估各血管造影照片，用于证明 支架迀移、管腔缩小、支架贴合（apposition)、剥离（dissection)或动脉瘤的存在、和流动 特性。完成随访血管造影后，对动物施以安乐死。
[0307] 收获各动物的心脏并且用10%缓冲福尔马林以100_120mmHg灌注冠状动脉。心 脏浸没在10%缓冲福尔马林中。记录任何心肌损伤或异常的观测数据。
[0308] 测定或计算的血管造影参数包括：
[0309] 边缘血管（近端和远端）平均管腔直径（仅植入支架后和最终）
[0310] 靶区的平均管腔直径（所有血管造影照片）
[0311] 靶区的最小管腔直径（MLD)(仅植入支架后和最终）
[0312] 直径狭窄[1-(MLD/RVD)]X100%，其中RVD是阻塞位置的参考直径的计算值 (通过基于软件的迭代线性回归技术产生无损伤血管投影的内插获得测量值）（仅最终的 血管造影照片）
[0313] 气球与动脉的比值[气球/植入支架前平均管腔直径]
[0314] 支架与动脉的比值[植入支架后/植入支架前平均管腔直径]
[0315] 晚期损失比值[MLD最终-MLD植入支架后]
[0316] 所有动物都存活至指定的终点。没有文件记录支架迀移、支架贴合不良、持续剥离 或动脉瘤的迹象。Cypher支架的三个远离中心的数据点（完全闭塞或接近完全闭塞）被排 除。与实验方案类似的此次和以前研宄的Cypher支架提供的数据，即Cypher支架的平均 狭窄百分率是20. 21±11. 45(n= 22)相比，化合物AR支架（约10微克/毫米长度药物剂 量）的平均狭窄百分率是25. 7± 17.8(n= 15)(图9)。
[0317] 本实施例中的化合物AR释放支架植入猪模型中28天时，产生比Cypher支架更高 的狭窄百分率。
[0318] 实施例5 :支架释放化合物AR的体内药物代谢动力学
[0319] 在猪冠状动脉模型中，在6小时、3天、7天和28天对得自实施例3的化合物AR支 架系统的药物代谢动力学进行评估。所用的干预手术类似于实施例4中所述的直到支架移 植的体内血管造影研宄。
[0320] 使合适大小的支架前进到展开位置。以稳定的速率向气球充气至足够压力以便达 到气球与动脉比率为1:1。使压力维持约10秒。进行血管造影以便记录术后血管通畅状态 和直径。植入总共9个支架（每个时间点3个）。
[0321] 在合适的时间点使动物安乐死并且切除心脏。切除装支架的部分，包括约IOmm临 近装支架部分的血管和IOmm远离装支架部分的血管。将近端和远端部分分离并且储存在 独立的小瓶中。小心地除去支架周围的组织并且将每一个支架放置在单独的小瓶中。然后， 在利用液相色谱质谱（LCMS)分析前，全都冷冻至-70°C。
[0322] 所有动物都存活至指定的终点。化合物AR的平均组织浓度和支架释放速率显示 在图10和11中。本实施例中的化合物AR释放支架证明化合物AR从支架释放，在7天时 释放大于40 %的药物。
[0323] 实施例6 :17, 18-29, 30-双-环氧大环内酯（AS)的制备
[0324] 将0. 8mL5%NaOH-MeOH和2ml30%H2O2加入1克雷帕霉素于40ml甲醇中的溶 液。反应混合物在室温下时搅拌24小时。如果TLC指示一些雷帕霉素仍然未反应，那么将 额外的〇.8!1^5%似011，6〇11和2111130%11 202的混合物加入反应溶液中。继续在室温下搅 拌直到TCL指示反应完成。用二氯甲烷和盐水萃取溶液三次。合并有机层并且用盐水和水 洗涤，经无水MgSO4干燥、滤除MgSO4，溶液蒸发至留下粗产物。该粗产物进一步用TCL板纯 化，得到0.40g(40%得率）淡黄色粉末。1HNMR(⑶Cl3)(~4:1构象异构体的混合物，仅列 出主要构象异构体的信号）与雷帕霉素相比的主要变化S(ppm) 1.75 (s，lH)，1.98 (s，lH)， 6. 71(ddd，5H，Jl= 16Hz，J2 = 8Hz，J3 = 2. 8Hz)。13CDEPT135NMR(CDC13)(~4:1 构象 异构体的混合物，仅列出主要构象异构体的信号）S(ppm) 152,140,133,128,127,126,84， 83, 76, 74,67, 59, 56,44,43,41，40, 36, 35, 34, 33, 31，29, 28, 22, 21，20,17,16,15,13。质谱 m/z= 962,雷帕霉素m/z= 930。
[0325] 实施例7 :17, 18-29, 30-双-环氧大环内酯（AS)的生物活性
[0326] 17, 18-29, 30-双-环氧化物大环内酯的效力用体外人平滑肌细胞培养实验来 说明。在接触不同浓度（0.005、0.01、0.05、0. 1、0.5和lyM) 17, 18-29,30-双-环氧大 环内酯和不同浓度（0. 0005、0. 001、0. 01和0.IyM)化合物AR8小时后，测定样品的胸 苷掺入量。在平滑肌细胞接触17, 18-29, 30-双-环氧大环内酯和化合物AR8小时后， 17, 18-29, 30-双-环氧化物大环内酯和化合物AR的IC5tl分别是约0. 1和0. 005yM(图 13)。17, 18-29, 30-双-环氧大环内酯的IC5tl约为化合物AR的20倍。
[0327] 实施例8 :17, 18-19, 20-21，22-三-环氧大环内酯（AY)的制备
[0328] 在室温下将间氯过氧苯甲酸0. 93g(3. 22mmol)加入0. 50g(0. 5371mmol)雷帕霉素 于IOml01(：13的溶液中。混合物在室温下时搅拌24小时。如果TLC指示一些雷帕霉素仍 然未反应，那么加入额外的间氯过氧苯甲酸0. 50g和5mlCHCl3。继续在室温下搅拌直到TCL 指示没有雷帕霉素为止。反应完成后，溶液用二氯甲烷稀释，用亚硫酸钠水溶液处理直到洗 液用淀粉-碘化物试纸得到负结果。这确保所有过量的过酸已经被破坏，用若干份CH2Cl2 萃取水层。然后有机层用两份20ml的5%碳酸氢钠洗涤以便除去苯甲酸。合并的有机萃取 物用水洗涤，经无水MgSO4干燥，滤除并且蒸发至留下粗制白色固体0. 46g。用TCL板进一 步纯化该粗产物。MSm/z978,雷帕霉素m/z930。
[0329] 实施例9 :大环内酯的细胞因子抑制作用
[0330] 在细胞培养研宄中，用大肠杆菌脂多糖（LPS)处理巨噬细胞，以便激活它分泌细 胞因子，例如IL-6、MMP-9、MCP-I和IL-10。使用酶联免疫吸附法（ELISA)测试用IOnM浓 度的化合物AR和雷帕霉素处理激活的巨噬细胞对这些细胞因子的抑制作用。接触大环内 酯对促炎细胞因子以及诱导细胞增殖和迀移的细胞因子的抑制作用显示在图12(a)中。接 触大环内酯化合物AR和西罗莫司对抗炎性细胞因子IL-10的抑制作用显示在图12(b)中。
[0331] 植入支架后第一、第三和第七天的MMP-9水平与植入支架6个月后的晚期损失 指数正相关（植入支架后基质金属蛋白酶的表达升高与在狭窄有关联（Elevatedmatrix metalloproteinaseexpressionafterstentimplantationisassociatedwith restenosis).IntJCardiol. 2006 ;112 (1):85_90)。
[0332] 化合物AR和西罗莫司不明显抑制IL-6的释放。与提高MMP-9产量并且不影响 MCP-I产量的西罗莫司相比，化合物AR显著减少细胞因子MMP-9和MCP-I的产量。
[0333] 化合物AR和西罗莫司在抑制IL-6的释放方面未显示任何差异。另一方面，化合 物AR减少细胞因子MMP-9的产量，而西罗莫司提高MMP-9的产量。与不影响MCP-I产量的 西罗莫司相比，化合物AR减少细胞因子MCP-I的产量。化合物AR和西罗莫司都抑制抗炎 性细胞因子IL-IO的产生。
[0334] 本发明中要求保护的化合物，例如化合物AR能提供更佳的治疗反应，伴随更高水 平的抗炎效果（例如对促炎性细胞因子MCP-I的抑制更强）以及更高水平的抗细胞增殖和 抗细胞迀移效果（例如对促进增殖性和迀移的细胞因子MMP-9的抑制更强）。
[0335] 实施例10 :在人临床试验中检测化合物AR释放支架
[0336] 对15位人对象进行化合物AR涂层支架的临床试验。在临床上通过评价主要不 良心脏事件来评估化合物AR涂层支架的安全性，所述主要不良心脏事件定义为死亡、心肌 梗死（Q波和非Q波）和靶病损区域的血管重建。通过4个月时的血管造影和血管内超声 (IVUS)结果来评估功效。研宄的第一终点是血管造影的支架内晚期管腔损失。第二终点是 主要不良心脏事件（MACE)和其它血管造影和IVUS评估。临床研宄得到地方伦理委员会的 同意并且所有病人在参加临床研宄之前签署了伦理委员会批准的知情同意书。
[0337] 所有病人在标准手术（indexprocedure)那天或之前至少一天开始口服阿司匹林 和噻氯匹定（500mg)进行预治疗。继续服用阿司匹林（>100毫克/天）和氯吡格雷（75毫 克/天）至少6个月。根据医院标准经皮实施手术，使用标准技术进入左或右股动脉并且 引入动脉套管并使其前进至动脉中。
[0338] 在荧光镜导向下进行标准手术血管造影，经套管插入6或7号引导导管并且使其 前进到适当的位置，在冠状动脉内给予硝酸甘油。选择3. 0-3. 5_平均管腔直径的冠状动 脉段并且插入0.014〃的导丝。进行定量冠状动脉造影（QCA)以便记录参考血管直径。在 使用标准技术植入支架之前进行病损预扩张。
[0339] 预扩张后，使大约按规定尺寸制作的支架（3.OX18mm或3. 5X18mm)前进至展开 位置。以稳定速率对气球充气至一定压力以便完全展开支架。使压力维持约30秒。如果 需要可以进行支架的后扩张以便确保支架与血管壁贴合良好。实施并记录血管造影和血管 内超声成像（IVUS)。
[0340] 在指定的4个月终点时，对各病人进行随访血管造影和IVUS。定性评估各血管造 影照片以显示管腔缩小、支架贴合（apposition)和流动特性。
[0341] 测定或计算的血管造影和IVUS参数包括：
[0342] 边缘血管（近端和远端）平均管腔直径（仅植入支架后和最终）
[0343] 靶区的平均管腔直径（所有血管造影照片）
[0344] 靶区的最小管腔直径（MLD)(仅植入支架后和最终）
[0345] 直径狭窄[1-(MLD/RVD) ]X100% ]，其中RVD是阻塞位置的参考直径的计算值 (通过基于软件的迭代线性回归技术无损伤血管投影的内插获得测量值）（仅最终血管造 影照片）
[0346] 支架内晚期管腔损失[MLD最终-MLD植入支架后]
[0347] 用IVUS评定支架内新生内膜体积百分率
[0348] 所有病人经历4个月临床和血管造影随访。在随访期没有病人发生任何主要不 良心脏事件。血管造影的结果显示血管造影测定的支架内晚期管腔损失的主要终点是 0. 16±0. 32mm。对15位病人中的13位实施IVUS分析，结果显示支架内新生内膜体积百分 率为 3. 7±2. 7%。
[0349] 作为比较，在预试验中测试Cypher支架，其显示类似的临床安全性，无临床事 件，4个月时缓释组（目前可从市场购买的制剂）血管造影测定的支架内晚期管腔损失 是0.09±0.3mm，IVUS得到的支架内新生内膜体积百分率是0.3±0.6% (Sousa，JE， Circulation2001 ；103 ；192-195)〇
[0350] 虽然为了透彻理解的目的，以上发明已经通过举例说明和实施例的方式略为详细 地叙述，但是本领域的技术人员将认识到，在所附权利要求的范围内可以实施某些改变和 修改。而且，本文提供的各参考文献以其全部通过引用结合于此，其程度如同各参考文献单 独地通过引用结合于此。
【主权项】
1. 下式的化合物或其盐、水合物、异构体、代谢物或前药在制备用于预防或治疗再狭窄 的药物中的用途：2. 下式的化合物或其盐、水合物、异构体、代谢物或前药在制备用于抑制细胞因子 MCP-1和/或MMP-9的药物中的用途：
【专利摘要】本发明涉及大环内酯化合物及它们的使用方法，具体而言，本发明提供一种大环内酯化合物及其盐、水合物、异构体、代谢物和前药在制备用于预防和/或治疗再狭窄或用于抑制细胞因子MCP-1和/或MMP-9的药物中的用途。
【IPC分类】A61K31/436, A61P9/00, A61P9/10
【公开号】CN104906087
【申请号】CN201510178065
【发明人】J·颜, 郑小霞, V·D·巴特
【申请人】万能医药公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2007年9月12日
【公告号】CN101557814A, CN101557814B, EP2083834A2, EP2083834A4, EP2431036A1, EP2702993A1, US7867988, US8367081, US8404641, US20080138375, US20110097364, US20120093891, US20120094932, WO2008033956A2, WO2008033956A3, WO2008033956A9
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