蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株ph40在治疗糖尿病中的医用用图
蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株ph40在治疗糖尿病中的医用用图
【技术领域】
[0002] 本发明公开了蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40在治疗糖尿病的医用用途，属于中药 和保健品技术领域。
【背景技术】
[0003] 糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病，长期存在的高血糖，导致患者各种 组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。国际糖病联盟统计，20世纪90 年代，全球糖尿病患者约1亿人，到2007年，该数字增长到2. 46亿，预计到2025年，全球将 有3. 8亿人受糖尿病的困扰。我国是仅次于印度的糖尿病第二大国，据国家卫生部调查显 示，我国每天约新增糖尿病患者3000例，每年约新增120万糖尿病患者，糖尿病直接医疗费 以年均19. 90%的比例迅速增长。糖尿病不断增长的患病率和经济负担已引起全社会的广 泛关注。
[0004]目前糖尿病治疗药物主要分为口服药物和注射胰岛素类，口服药物给药方便，但 伴随较大的副作用，同时目前市售的抗糖尿病药物对糖尿病并发症的预防作用弱，且不能 彻底治愈。注射胰岛素类药物难以控制，易引起胰岛素耐受，增加疾病的治疗难度。
[0005] 蝙蝠蛾拟青霉为天然冬虫夏草中分离到的内寄生菌，是天然冬虫夏草中普遍存在 的一种虫草的无性型，其菌丝体发酵物具有广泛的药理活性，可以作为天然冬虫夏草有效 成分和功效的原料，开发前景广阔。
【发明内容】
[0006] 本发明公开了蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40在糖尿病的医用用途，具有明显的医 疗效果。
[0007] 本发明所述的蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40是以蝙蝠蛾拟青霉菌株（RCEF1429)为 原始菌株，经诱变筛选获得，已于2014年12月26日保藏《中国典型培养物保藏中心》，命名 为 cAe/7PH40 ;蝙蝠蛾拟青霉菌株PH40,保藏号为：CCTCCNO:M 2014670。
[0008] 本发明所述的蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉是通过以下的技术方案实现的。
[0009] (a)液体深层发酵方法发酵生产蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40,收集发酵液，5000r/ min离心lOmin，收集沉淀，冻干，得蝙蝠蛾拟青霉高产菌株菌丝体。
[0010] (b)取蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌丝体，加入药用辅料，制备得到蝙蝠蛾拟青 霉诱变菌株PH40菌粉制剂。
[0011] (C)蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉及制剂具有抗糖尿病活性。
[0012] 本发明采用高糖高脂饲料喂养结合小剂量链脲霉素注射方法建立二型糖尿病大 鼠模型，采用该大鼠模型证明蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40抗糖尿病活性。该研宄属于菌类 药物在中药和保健品研发领域，为以蝙蝠蛾拟青霉高产诱变菌株PH4tl为主要原料的新产品 的开发提供依据。
[0013] 本发明的积极效果在于：提供了蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40制备治疗糖尿病药 物中的用途，对糖尿病晚期肾炎并发症具有很好的预防作用。
【具体实施方式】
[0014] 为了能够更好地了解本发明的技术内容，下面通过具体实施案例对本发明进行详 细描述。
[0015] 实施例1 利用液体深层发酵方法发酵生产蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40,取蝙蝠蛾拟青霉诱变菌 株PH40发酵液1L，5000r/min离心lOmin，收集沉淀，真空冷冻干燥，采用高速粉碎机粉碎， 过60目筛，收集菌粉，为蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉1 实施例2 利用液体深层发酵方法发酵生产蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40,取蝙蝠蛾拟青霉诱变菌 株PH40发酵液1L，喷雾干燥，收集菌粉，为蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉2。
[0016] 实施例3 利用液体深层发酵方法发酵生产蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40,取蝙蝠蛾拟青霉诱变菌 株PH40发酵液1L，5000r/min离心lOmin，收集沉淀，真空冷冻干燥，采用高速粉碎机粉碎， 过60目筛，收集菌粉，为蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉3。
[0017] 取菌粉3,加入碳酸氢钠、羧甲基纤维素钠等药用辅料，制备得到蝙蝠蛾拟青霉诱 变菌株PH40菌粉制剂3。
[0018] 实施例4 以实施例1~3制备的蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉为主要成分，加以多种药用辅 料，制备得到的片剂、粉剂、胶囊剂及口服制剂。
[0019] 以下试验表明本发明在抗糖尿病保健品中的应用： 1、材料和方法 I. 1受试物实施例1菌粉1、实施例2菌粉2、实施例3制剂3。
[0020] 1.2实验动物 由吉林大学实验动物中心提供健康SD雄性大鼠200只，体重180-220g。随机分为5 组，每组40只。
[0021] 1.3动物实验室环境 温度22 °C，湿度52%。
[0022] 1. 4剂量选择 该保健品制剂的推荐剂量为成人(按体重60kg计算）1.2g，按人体推荐量的12倍对大 鼠进行给药，三组受试物分别用生理盐水配置成浓度为〇.〇2g/ml的溶液，建模大鼠灌胃给 药4周后测定各项指标，灌胃给药体积为2.Oml/kg。同时设置一空白对照组，用生理盐水代 替受试物进行给药，灌胃体积与受试物相同。
[0023] 1.5实验方法 1. 5. 1二型糖尿病大鼠模型的建立 健康SD大鼠，适应性喂养2天后，尚糖尚脂伺料喂养2个月后，禁食不禁水12h，小剂 量连续一周尾静脉注射预冷的2%STZ(链脲霉素，现用现配)，注射剂量为25mg/kg/d。注 射后3h灌胃含25%葡萄糖0.8ml/200g;正常对照组注射等体积柠檬酸缓冲液（pH4.3)。 72h后尾静脉采血，测空腹血糖，以血糖值彡11.Immol/L者为造模成功。
[0024] 1.5. 2实验动物体重及血糖变化 大鼠给药期间，尾静脉取血，测其治疗前后血糖指标，同时记录大鼠治疗前后体重变 化。
[0025] 结果显示，蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉及制剂可以显著降低二型糖尿病 大鼠快速血糖值，与模型组相比具有显著差异性p〈〇. 01，同时可以显著提高大鼠体重 p〈0. 01，证明蝙蝠蛾拟青霉PH4tl具有很好的降血糖作用。
[0026] 对大鼠胰岛素水平的影响 胰岛素分泌缺陷是II型糖尿病的显著特征之一，低的胰岛素分泌导致体内葡萄糖和 脂质代谢的紊乱。在糖尿病大鼠给药前后，大鼠尾静脉取血，采用治疗前后大鼠血浆胰岛素 水平变化。
[0027] 结果显示，与模型组相比，蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉及制剂可以显著提高 大鼠治疗后血浆胰岛素水平，结果P〈〇.005,具有显著性差异。
[0028] 大鼠糖化血红蛋白水平变化 糖化血红蛋白是红细胞中血红蛋白与血糖结合的产物，糖化血红蛋白的生成是不可逆 的，而且其浓度与血糖浓度成相关，红细胞中糖化血红蛋白的浓度通常可以反映患者8-12 周内血糖浓度的变化，体现糖尿病患者对血糖的控制情况。大鼠给药结束后，心脏取血，测 定大鼠红细胞中糖化血红蛋白水平。
[0029] 结果显示，模型组大鼠糖化血红蛋白水平显著升高，p〈0. 01;与模型组相比，实验 组大鼠糖化血红蛋白水平均显著下降，P〈〇. 01。说明蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉及制 剂对糖尿病大鼠血糖水平控制较好。
[0030] 大鼠血清中丙酮酸激酶活性检测 丙酮酸激酶是葡萄糖体内分解的限速酶，其活性的变化直接影响机体葡萄糖分子的分 解利用。大鼠治疗结束后，心脏取血，测定大鼠血清丙酮酸激酶含量。
[0031] 结果显示，模型组大鼠血清丙酮酸激酶水平显著下降，p〈0. 01，葡萄糖利用率下 降；与模型组相比，实验组大鼠血清丙酮酸激酶水平均显著上升，P〈〇. 01。说明蝙蝠蛾拟青 霉诱变菌株PH40菌粉及制剂对糖尿病大鼠血清丙酮酸激酶水平具有较高的促进作用。
[0032] 蝙蝠蛾拟青霉高产菌株对大鼠肾炎因子的影响 大鼠治疗结束，心脏取血，测定大鼠血清尿酸、尿素氮、血清白蛋白、总蛋白水平。
[0033] 结果显示，与模型组相比，实验组大鼠血清尿酸、尿素氮、总蛋白水平显著下降 (p〈0. 01)，白蛋白水平显著上升（p〈0. 01)，说明蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉及制剂对 大鼠糖尿病肾病具有很好的预防和治疗作用。
[0034] 综上结果证明，蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉及制剂具有很高的抗糖尿病作 用，对糖尿病晚期肾炎并发症具有很好的预防作用。
【主权项】
1. 蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40在制备治疗糖尿病药物中的医用用途；所述的菌株已 于2014年12月26日保藏《中国典型培养物保藏中心》，命名为cAe/? PH40 ;蝙蝠蛾拟青霉菌株PH40,保藏号为：CCTCCNO:M2014670。2. -种蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉的制备方法，其特征于利用权利要求1所述 蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40的发酵液1L，5000r/min离心lOmin，收集沉淀，真空冷冻干燥， 采用高速粉碎机粉碎，过60目筛，收集菌粉即得。3. 以权利要求书2制备的蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉为主要成分，加以多种药 用辅料，制备得到的片剂、粉剂、胶囊剂及口服制剂。
【专利摘要】本发明公开了蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40在糖尿病的医用用途，具有明显的医疗效果。所述的蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40是以蝙蝠蛾拟青霉菌株（RCEF1429）为原始菌株，经诱变筛选获得，已于2014年12月26日保藏《中国典型培养物保藏中心》，保藏号为：CCTCC M2014670。CCTCC NO：M201467020141226
【IPC分类】A61P3/10, A61K36/068
【公开号】CN104906145
【申请号】CN201510280983
【发明人】孟庆繁, 刘艳, 孟令军, 王娟, 王迪, 李龙图, 滕利荣, 权宇彤, 逯家辉
【申请人】吉林大学
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月28日
【技术领域】
[0002] 本发明公开了蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40在治疗糖尿病的医用用途，属于中药 和保健品技术领域。
【背景技术】
[0003] 糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病，长期存在的高血糖，导致患者各种 组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。国际糖病联盟统计，20世纪90 年代，全球糖尿病患者约1亿人，到2007年，该数字增长到2. 46亿，预计到2025年，全球将 有3. 8亿人受糖尿病的困扰。我国是仅次于印度的糖尿病第二大国，据国家卫生部调查显 示，我国每天约新增糖尿病患者3000例，每年约新增120万糖尿病患者，糖尿病直接医疗费 以年均19. 90%的比例迅速增长。糖尿病不断增长的患病率和经济负担已引起全社会的广 泛关注。
[0004]目前糖尿病治疗药物主要分为口服药物和注射胰岛素类，口服药物给药方便，但 伴随较大的副作用，同时目前市售的抗糖尿病药物对糖尿病并发症的预防作用弱，且不能 彻底治愈。注射胰岛素类药物难以控制，易引起胰岛素耐受，增加疾病的治疗难度。
[0005] 蝙蝠蛾拟青霉为天然冬虫夏草中分离到的内寄生菌，是天然冬虫夏草中普遍存在 的一种虫草的无性型，其菌丝体发酵物具有广泛的药理活性，可以作为天然冬虫夏草有效 成分和功效的原料，开发前景广阔。
【发明内容】
[0006] 本发明公开了蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40在糖尿病的医用用途，具有明显的医 疗效果。
[0007] 本发明所述的蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40是以蝙蝠蛾拟青霉菌株（RCEF1429)为 原始菌株，经诱变筛选获得，已于2014年12月26日保藏《中国典型培养物保藏中心》，命名 为 cAe/7PH40 ;蝙蝠蛾拟青霉菌株PH40,保藏号为：CCTCCNO:M 2014670。
[0008] 本发明所述的蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉是通过以下的技术方案实现的。
[0009] (a)液体深层发酵方法发酵生产蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40,收集发酵液，5000r/ min离心lOmin，收集沉淀，冻干，得蝙蝠蛾拟青霉高产菌株菌丝体。
[0010] (b)取蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌丝体，加入药用辅料，制备得到蝙蝠蛾拟青 霉诱变菌株PH40菌粉制剂。
[0011] (C)蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉及制剂具有抗糖尿病活性。
[0012] 本发明采用高糖高脂饲料喂养结合小剂量链脲霉素注射方法建立二型糖尿病大 鼠模型，采用该大鼠模型证明蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40抗糖尿病活性。该研宄属于菌类 药物在中药和保健品研发领域，为以蝙蝠蛾拟青霉高产诱变菌株PH4tl为主要原料的新产品 的开发提供依据。
[0013] 本发明的积极效果在于：提供了蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40制备治疗糖尿病药 物中的用途，对糖尿病晚期肾炎并发症具有很好的预防作用。
【具体实施方式】
[0014] 为了能够更好地了解本发明的技术内容，下面通过具体实施案例对本发明进行详 细描述。
[0015] 实施例1 利用液体深层发酵方法发酵生产蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40,取蝙蝠蛾拟青霉诱变菌 株PH40发酵液1L，5000r/min离心lOmin，收集沉淀，真空冷冻干燥，采用高速粉碎机粉碎， 过60目筛，收集菌粉，为蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉1 实施例2 利用液体深层发酵方法发酵生产蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40,取蝙蝠蛾拟青霉诱变菌 株PH40发酵液1L，喷雾干燥，收集菌粉，为蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉2。
[0016] 实施例3 利用液体深层发酵方法发酵生产蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40,取蝙蝠蛾拟青霉诱变菌 株PH40发酵液1L，5000r/min离心lOmin，收集沉淀，真空冷冻干燥，采用高速粉碎机粉碎， 过60目筛，收集菌粉，为蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉3。
[0017] 取菌粉3,加入碳酸氢钠、羧甲基纤维素钠等药用辅料，制备得到蝙蝠蛾拟青霉诱 变菌株PH40菌粉制剂3。
[0018] 实施例4 以实施例1~3制备的蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉为主要成分，加以多种药用辅 料，制备得到的片剂、粉剂、胶囊剂及口服制剂。
[0019] 以下试验表明本发明在抗糖尿病保健品中的应用： 1、材料和方法 I. 1受试物实施例1菌粉1、实施例2菌粉2、实施例3制剂3。
[0020] 1.2实验动物 由吉林大学实验动物中心提供健康SD雄性大鼠200只，体重180-220g。随机分为5 组，每组40只。
[0021] 1.3动物实验室环境 温度22 °C，湿度52%。
[0022] 1. 4剂量选择 该保健品制剂的推荐剂量为成人(按体重60kg计算）1.2g，按人体推荐量的12倍对大 鼠进行给药，三组受试物分别用生理盐水配置成浓度为〇.〇2g/ml的溶液，建模大鼠灌胃给 药4周后测定各项指标，灌胃给药体积为2.Oml/kg。同时设置一空白对照组，用生理盐水代 替受试物进行给药，灌胃体积与受试物相同。
[0023] 1.5实验方法 1. 5. 1二型糖尿病大鼠模型的建立 健康SD大鼠，适应性喂养2天后，尚糖尚脂伺料喂养2个月后，禁食不禁水12h，小剂 量连续一周尾静脉注射预冷的2%STZ(链脲霉素，现用现配)，注射剂量为25mg/kg/d。注 射后3h灌胃含25%葡萄糖0.8ml/200g;正常对照组注射等体积柠檬酸缓冲液（pH4.3)。 72h后尾静脉采血，测空腹血糖，以血糖值彡11.Immol/L者为造模成功。
[0024] 1.5. 2实验动物体重及血糖变化 大鼠给药期间，尾静脉取血，测其治疗前后血糖指标，同时记录大鼠治疗前后体重变 化。
[0025] 结果显示，蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉及制剂可以显著降低二型糖尿病 大鼠快速血糖值，与模型组相比具有显著差异性p〈〇. 01，同时可以显著提高大鼠体重 p〈0. 01，证明蝙蝠蛾拟青霉PH4tl具有很好的降血糖作用。
[0026] 对大鼠胰岛素水平的影响 胰岛素分泌缺陷是II型糖尿病的显著特征之一，低的胰岛素分泌导致体内葡萄糖和 脂质代谢的紊乱。在糖尿病大鼠给药前后，大鼠尾静脉取血，采用治疗前后大鼠血浆胰岛素 水平变化。
[0027] 结果显示，与模型组相比，蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉及制剂可以显著提高 大鼠治疗后血浆胰岛素水平，结果P〈〇.005,具有显著性差异。
[0028] 大鼠糖化血红蛋白水平变化 糖化血红蛋白是红细胞中血红蛋白与血糖结合的产物，糖化血红蛋白的生成是不可逆 的，而且其浓度与血糖浓度成相关，红细胞中糖化血红蛋白的浓度通常可以反映患者8-12 周内血糖浓度的变化，体现糖尿病患者对血糖的控制情况。大鼠给药结束后，心脏取血，测 定大鼠红细胞中糖化血红蛋白水平。
[0029] 结果显示，模型组大鼠糖化血红蛋白水平显著升高，p〈0. 01;与模型组相比，实验 组大鼠糖化血红蛋白水平均显著下降，P〈〇. 01。说明蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉及制 剂对糖尿病大鼠血糖水平控制较好。
[0030] 大鼠血清中丙酮酸激酶活性检测 丙酮酸激酶是葡萄糖体内分解的限速酶，其活性的变化直接影响机体葡萄糖分子的分 解利用。大鼠治疗结束后，心脏取血，测定大鼠血清丙酮酸激酶含量。
[0031] 结果显示，模型组大鼠血清丙酮酸激酶水平显著下降，p〈0. 01，葡萄糖利用率下 降；与模型组相比，实验组大鼠血清丙酮酸激酶水平均显著上升，P〈〇. 01。说明蝙蝠蛾拟青 霉诱变菌株PH40菌粉及制剂对糖尿病大鼠血清丙酮酸激酶水平具有较高的促进作用。
[0032] 蝙蝠蛾拟青霉高产菌株对大鼠肾炎因子的影响 大鼠治疗结束，心脏取血，测定大鼠血清尿酸、尿素氮、血清白蛋白、总蛋白水平。
[0033] 结果显示，与模型组相比，实验组大鼠血清尿酸、尿素氮、总蛋白水平显著下降 (p〈0. 01)，白蛋白水平显著上升（p〈0. 01)，说明蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉及制剂对 大鼠糖尿病肾病具有很好的预防和治疗作用。
[0034] 综上结果证明，蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉及制剂具有很高的抗糖尿病作 用，对糖尿病晚期肾炎并发症具有很好的预防作用。
【主权项】
1. 蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40在制备治疗糖尿病药物中的医用用途；所述的菌株已 于2014年12月26日保藏《中国典型培养物保藏中心》，命名为cAe/? PH40 ;蝙蝠蛾拟青霉菌株PH40,保藏号为：CCTCCNO:M2014670。2. -种蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉的制备方法，其特征于利用权利要求1所述 蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40的发酵液1L，5000r/min离心lOmin，收集沉淀，真空冷冻干燥， 采用高速粉碎机粉碎，过60目筛，收集菌粉即得。3. 以权利要求书2制备的蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40菌粉为主要成分，加以多种药 用辅料，制备得到的片剂、粉剂、胶囊剂及口服制剂。
【专利摘要】本发明公开了蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40在糖尿病的医用用途，具有明显的医疗效果。所述的蝙蝠蛾拟青霉诱变菌株PH40是以蝙蝠蛾拟青霉菌株（RCEF1429）为原始菌株，经诱变筛选获得，已于2014年12月26日保藏《中国典型培养物保藏中心》，保藏号为：CCTCC M2014670。CCTCC NO：M201467020141226
【IPC分类】A61P3/10, A61K36/068
【公开号】CN104906145
【申请号】CN201510280983
【发明人】孟庆繁, 刘艳, 孟令军, 王娟, 王迪, 李龙图, 滕利荣, 权宇彤, 逯家辉
【申请人】吉林大学
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月28日
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